JPH05506722A - 酵素結合抗体免疫吸着アッセイを改善するために変性した伝播体タンパク質 - Google Patents
酵素結合抗体免疫吸着アッセイを改善するために変性した伝播体タンパク質Info
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Abstract
Description
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- 1.結合相手の間の反応における反応物である分抗体を分抗するための酵素結合 抗体免疫吸着アッセイにおいて、前記相手は、結合可能な物質と結合物質とから なり、酵素結合抗体免疫吸着アッセイは:(a)組換え融合タンパク質として分 析体の結合相手である第一反応物を付与し、この融合タンパク質は、第一反応物 の免疫学的活性を有する第一タンパク質と、第一タンパク質に融合された伝播体 タンパク質である第二タンパク質とからなり、 (b)酵素標識付けされた反応物である第二反応物を付与し、この酵素標識付け された反応物は、酵素に連結された分析体と同じである反応物からなり、(c) 有効量の変性伝播体タンパク質と共に分析体の溶液を形成することにより、分析 体の希溶液を調製して組換え融合タンパク質中の伝播体タンパク質に対して分析 体の結合を制限し、 (d)工程(c)からの分析体の希溶液を、工程(a)からの組換え融合タンパ ク質反応物と工程(b)からの酵素−標識付けした反応物と反応させて反応混合 物を形成し、この酵素−標識付けした反応物は、既知量で存在し、かつ組換え融 合タンパク質は、分析体と酵素−標識付けした反応物との総量と反応するのに不 充分な既知量で存在し、次いで (e)反応混合物中に存在する分析体の量に直接的に比例する反応混合物の酵素 活性を分析する これら諸工程からなることを特徴とする酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 2.前記結合可能な物質が、肝炎Cウイルスとヒト免疫不全ウイルスからなる群 から選択される抗原である請求項1記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 3.工程(a)の伝播体タンパク質が、スーパーオキシドジスムターゼ、β−ガ ラクトシダーゼ、及びラクタマーゼからなる群から選択される請求項1記載の酵 素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 4.工程(a)の伝播体タンパク質が、スーパーオキシドジスムターゼである請 求項3記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 5.結合相手の間の反応における反応物である分析体を分析するための酵素結合 抗体免疫吸着アッセイにおいて、前記相手は、結合可能な物質と結合物質とから なり、酵素結合抗体免疫吸着アッセイは:(a)組換え融合タンパク質として分 析体の結合相手である第一反応物を付与し、この融合タンパク質は、第一反応物 の免疫学的活性を有する第一タンパク質と、第一タンパク質に融合された伝播体 タンパク質である第二タンパク質とからなり、 (b)固体相上の融合タンパク質を固定化するために、組換え融合タンパク質の 水溶液を固体相と接触させることにより、工程(a)からの組換え融合タンパク 質反応物を固定化し、 (c)工程(b)における固体相からの水溶液を分離して、固定化反応物を調製 し、 (d)酵素標識付けされた反応物である第二反応物を付与し、この酵素標識付け された反応物は、酵素に連結された分析体と同じである反応物からなり、(e) 有効量の変性伝播体タンパク質と共に分所体の溶液を形成することにより、分析 体の希溶液を調製して組換え融合タンパク質中の伝播体タンパク質に対して分析 体の結合を制限し、 (f)工程(e)からの分析体の希溶液を、工程(c)からの組換え融合タンパ ク質反応物と工程(d)からの酵素−標識付けした反応物と反応させて反応混合 物を形成し、この酵素−標識付けした反応物は、既知量で存在し、かつ組換え融 合タンパク質は、分所体と酵素−標識付けした反応物との総量と反応するのに不 充分な既知量で存在し、 (g)固定化相と液相を分離し、次いで(h)反応混合物中に存在する分析体の 量に逆比例する固定化相の酵素活性を分析する これら諸工程からなることを特徴とする酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 6.前記結合可能な物質が、肝炎Cウイルスとヒト免疫不全ウイルスからなる群 から選択される抗原である請求項5記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 7.工程(a)の伝播体タンパク質が、スーパーオキシドジスムターゼ、β−ガ ラクトシダーゼ、及びラクタマーゼからなる群から選択される請求項5記載の酵 素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 8.工程(b)の水溶液が、約0.05から約1.0までのイオン強度値を有す る請求項5記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 9.固体相が、ポリスチレン、スルホン化ポリスチレン、照射スルホン化ポリス チレン、及びラテックスからなる群から選択されるポリマーから作成される請求 項5記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 10.工程(i)工程(b)の固定化反応物を、固体相上の活性部位を被覆する 反応における未反応物であるタンパク質の水溶液と接触し、次いで(ii)固定 化反応物から前記水溶液を分離する、これら諸工程を更に含む請求項5記載の酵 素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 11.結合相手の間の反応における反応物である分析体を分析するための酵素結 合抗体免疫吸着アッセイにおいて、前記相手は、結合可能な物質と結合物質とか らなり、酵素結合抗体免疫吸着アッセイは:(a)組換え融合タンパク質として 分析体の結合相手である第一反応物を付帯し、この融合タンパク質は、第一反応 物の免疫学的活性を有する第一タンパク質と、第一タンパク質に融合された伝播 体タンパク質である第二タンパク質とからなり、 (b)固体相上の融合タンパク質を固定化するために、組換え融合タンパク質の 水溶液を固体相と接触させることにより、工程(a)からの組換え融合タンパク 質反応物を固定化し、 (c)工程(b)における固体相からの水溶液を分離して、固定化反応物を調製 し、 (d)有効量の変性伝播体タンパク質と共に分析体の溶液を形成することにより 、分所体の希溶液を調製して組換え融合タンパク質中の伝播体タンパク質に対し て分析体の結合を制限し、 (e)工程(d)からの分析体の希溶液を、工程(c)からの組換え融合タンパ ク質反応物と反応させて第一固定化相と第一液相とを有する第一反応混合物を形 成し、この固定化反応物は、総ての分析体と反応するのに充分な量で存在し、( f)第一固定化相と工程(e)における第一液相とを分離し、(g)酵素標識付 けされた反応物である第二反応物を付与し、この酵素標識付けされた反応物は、 酵素に連結された分所体に対する第二結合相手である反応物からなり、 (h)工程(f)からの第一固定化相と工程(g)からの酵素−標識付け反応物 を反応させて、第二固定化相と第二液相とを有する第二反応混合物を形成し、こ の酵素−標識付け反応物は、既知量で存在し、(i)工程(h)における第二固 定化相と第二液相を分離し、次いで(j)反応混合物中に存在する分析体の量に 直接的に比例する工程(i)における第二固定化生成相の酵素活性を分析するこ れら諸工程からなることを特徴とする酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 12.分析体が、抗体及び特定結合タンパク質からなる群から選択される結合物 質である請求項11記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 13.結合物質が、肝炎Cウイルス抗体とヒト免疫不全ウイルス抗体からなる群 から選択される抗体である請求項12記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 14.分析体が、抗原とハプテンからなる群から選択される結合可能物質である 請求項11記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 15.工程(a)の伝播体タンパク質が、スーバーオキシドジスムターゼ、β− ガラクトシダーゼ、及びラクタマーゼからなる群から選択される請求項11記載 の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 16.工程(b)の水溶液が、約0.05から約1までのイオン強度値を有する 請求項11記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 17.固体相が、ポリスチレン、スルホン化ポリスチレン、照射スルホン化ポリ スチレン、及びラテックスからなる群から選択されるポリマーから作成される請 求項11記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
- 18.工程(i)工程(b)の固定化反応物を、固体根上の活性部位を被覆する 反応における未反応物であるタンパク質の水溶液と接触し、次いで(ii)固定 化反応物から前記水溶液を分離する、これら諸工程を更に含む請求項11記載の 酵素結合抗体免疫吸着アツセイ。
- 19.工程(g)の分所体に対する第二結合相手が、工程(a)の反応物と異な る第三反応物であり、かつ抗種抗体である請求項11記載の酵素結合抗体免疫吸 着アッセイ。
- 20.工程(g)の分所体に対する第二結合相手が、工程(a)の反応物と同じ 物である請求項11記載の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ。
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