JPH05505626A - 過血糖症組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 過血糖症組成物 発明の分野 発明の分野は生物学及びより詳しくは糖尿病の生物学である。

発明は、アミリン又はアミリンアゴニスト及びグルカゴン化合物を含む組成物に 係り、それは急性低血糖及び他の低血糖条件の処理に用いられる、好ましくはポ リペプチドである。

背景 グルカゴンはインスリンの発見から２年後、１９２３年に発見された。インスリ ンと化学的に関連せず、グルカゴンは２９アミノ酸残基を含み約３５００の分子 量を有する単一鎖ポリペプチドホルモンである。インスリンと対照的に、グルカ ゴンはシスティンを含まず、従ってジスルフィド結合を含まない。ヒトグルカゴ ンの構造はブタ、ウシ及びラットグルカゴンと同一であり、多くの最近のグルカ ゴン製剤はウシ及びブタ膵臓から抽出される。

グルカゴン分泌は、インスリンのそれのように、消化器食物生成物、ホルモン、 及び他の因子の相互作用により調節される。グルカゴンは（ｉ）減少する血液グ ルコースレベル（ｉｉ）蛋白食物に従うアミノ酸での生理的増加（ｆｆｉ）精力 的な運動（Ｆｒ）飢餓及び（ｖ）低血糖を含む刺激に応じて膵臓α−細胞から分 泌される。それは膵臓抽出物に存在する肝臓グリコーゲン分解を刺激した過血糖 症因子（いわゆる「過血糖症グリコーゲン分解因子」として発見された。グルカ ゴンは、グリコーゲン分解の刺激を通じて直接的にグリコーゲン合成の阻害を通 じて間接的にグリコーゲンからグルコースを放出するのに影響を及ぼす、少くと もｃＡＭＰ・伝達作用を通じて肝臓グルコース生成を増加する肝臓グルコースメ タボリズムに大きな効果を及ぼすと報告されている。比較的低インスリン血糖症 の間、グルカゴン又、糖新生を刺激する。グルカゲンは筋肉内での炭水化物メタ ボリズムに生理的に有意効果を及ぼすとは考えられない。

グルコースはグルカゴンの生理的に最も重要な調整剤である。血漿グルコース濃 度での上昇はグルカゴン分泌の阻害及び逆にさせる。アンガー・アール・エッチ 、及びオーキ、エル、「グルカゴン・アンド・ジ・ニー・セル」二ニー・イング ランド・ジャーナル・オブ・メディシン、３０４．１５１８−１５２４及び１５ ７５−１５８０（１９８１）。インスリン及びソマトスタチンは共にグルカゴン の分泌を阻害する。

一般にグルカゴンの役割及びその作用はインスリンのそれらに拮抗的であると報 告される。インスリンは食物保存のホルモンとして役立ち、一方グルヵゴンは食 物可動化のホルモンとして役立つと報告される。炭水化物食物に続いて、膵臓が 細胞のインスリンを分泌し、グルカゴンの膵臓α−細胞分泌が抑制される。これ は細胞を食物、例えば肝臓、筋肉及び脂肪質組織におけるグルコースを蓄えさせ る。逆に飢餓の間、グルカゴン分泌の促進及びインスリン分泌直接分解の抑制及 び食物の能率的利用は、脳及び他の組織のエネルギー必要物に合わせるために細 胞内に、初めに肝臓グリコーゲンを及び実質的に脂肪質組織脂肪を蓄えた。傷害 及び外傷（異化の疾病）のホルモンとしてグルカゴンの調節された役割が提案さ れて来た。例えばそこなわれたグルコーストレランス及び感染で示される過血糖 症は血漿グルカゴンの増加濃度と関連する。同様の増加は心筋炎感染、やけど及 び主な外傷後の患者に見られる。これらの状況でグルカゴンは糖新生を促進し外 傷の条件下必要とされるグルコースを提供すると云われる。

従ってグルカゴンは一般に逆規則（抗−低血糖）ホルモン及び飢餓の間食物メタ ボリズムの主な規制剤として生理的役割を受けた。残存肝臓グリコーゲン貯蔵を 伴う個体中の血液グルコースレベルを増加する効果の理由から、グルカゴンはイ ンスリン−依存（型１）糖尿病蜜剤のインスリン置換療法を複雑にする厳密な低 血糖の急性処置に治療的に広く用いられる。グルカゴンは、デキストロース（グ ルコース）溶液が入手できないか、例えば患者がけいれんし又は手に負えないで 静脈内のグルコースが投与できないときインスリン誘発低血糖の処理に、特に有 用である。グルカゴンは、少量で有効であり、毒性の証拠はその使用で報告され ていない。

与えられる場合、グルカゴンは１ミリグラムの用量で静脈内に筋肉内に及び皮下 に投与しつる。インスリン又は経に低血糖剤により誘発された低血糖昏睡にグル カゴンが導入されると、意識の回復は２０分以内に観察されなければならない。

さもないと静脈グルコースができるだけ早く投与しなければならない。グツトマ ン・アンド・ギルマンズ・ザ・ファーマコロジック・ベインズ・オブ・テラビュ ーティック、１５１０−１５１２頁（７版、１９８５）。

低血糖反応は、インスリン又は経口低血糖剤で処置された糖血病患者に起こる。

反応はしばしば不安定な形の疾病にみられ、形はインスリン要求における予測で きない自然発生的減少により特徴づけられる。他の例では、突然生じさせる理由 は、例えば食べないこと、普通でない運動及び多すぎる量のインスリンの不注意 な投与が原因である。しかしながら、しばしば、識別できる理由はない。血液グ ルコースにける低下の速度が速いと、初期症状はエピネフリンの補償分泌により もたらされるものであり、それらは、発汗、虚弱、空腹、頻脈及び「内部震え」 を含む。グルコースの濃度がゆるやかに低下すると、症状及び徴候は一次的に脳 に関連し、頭痛、ぼんやりした視力、重視、精神錯乱、支離滅裂な言語、昏睡及 び痙彎を含む。血液グルコースにおける低下が速やかで完全で継続すると、全て のこれらの症状が表れつる。

インスリン低血糖の徴候及び症状の主なものは、低血糖が、はとんど完全に酸化 メタポリズムに依存する基質（グルコース）を脳から奪うので、中枢神経系の機 能的異常の結果である。インスリン昏睡の間、ヒト脳中の酸素消費はほとんど半 分まで減する。グルコース消費の減少が不つり合いに大きいので、それは脳が他 の基質を用いていることを示す。ヒトにおいて絶食を延ばした後、脳は適応し、 大部分の利用した食物はケトン体から成り立っている。長期間の低血糖は脳に逆 行できない傷害を起こす。グツドマン・アンド・ギルマンズ・ザ・ファーマコロ ジック・ベイシズ・オブ・テアビューティクス、１５０２−１５０３頁（７版、 １９８５）。

低血糖の症状は、低血糖が脳における有機変化を誘発するのに十分なだけ続かな かったなら、グルコースの静脈注射でほとんど直ちにおさまる。患者が可溶性炭 水化物又は糖含有溶液、例えば果汁を経口的に取ることができず、又、グルコー スが静脈注射用に入手可能でないとき、グルカゴンを与えつる。しがしながら、 低血糖処置においてグルカゴンの有用性は、枯渇した肝臓、グリコーゲン蓄積を 有する患者における不活動又は無効果により限られることが判るであろう。グル カゴンが肝臓（骨格筋ではなく）グリコーゲンにのみ、それがグルコースに変換 することにより作用するので、それは枯渇した肝臓グリコーゲンを有する患者に 治療的に有用な過血糖症効果、適合患者において決定できない条件を有しない。

即ち身もだえしている又は昏睡の患者において、グルカゴン処置は、磨者の結集 されるべき肝臓グリコーゲンを有しないか不十分に有するとき低血糖を軽減する 。

飢餓の状態に加えてグルカゴンは肝臓グリコーゲンが枯渇して例えば副腎不足又 は慢性低血糖である他の状態においてほんの少ししか役立たないが全（役に立た ないことも理解される。通常従って、静脈内グルコースは、患者がグルカゴンに 反応しないとき与えられなければならない。

発明の要約 本発明は、グルカゴン化合物及びアミリン又はアミリンアゴニストの共投与によ る動物におけるグルコース生成を調節する方法及び急性低血糖及び他の低血糖条 件の処置方法に向けられる。特にその方法は低血糖条件の処置のための混合グル カゴン及びアミリンの医薬組成物を含む好ましい組成物の投与を含む。これらの 組成物は、グルカゴン又はアミリンのみの効果では確かに予測できないこれらの 低血糖条件を処置するのに特に有用である。特に意識不明の又は昏睡の叡者又は 動物による厳しい低血糖の場合、栄養分地位への調査の必要性又は肝臓グリコー ゲン蓄積の存在又は不存在にかかわらず低血糖を確実に軽減するのに重要である 。

本発明は又、グルカゴン化合物及びアミリン又はアミリンアゴニストと共に製薬 的に許容しうる担体を治療有効量含有する医薬組成物を提供する。

図面の簡単な説明 本発明は添付図面を引用してさらに説明される。図において、図１は、アミリン への血圧反応を増殖した規制飼育における（ＢＰコントロール、中空の四角）ソ マトスタチン（３，４ｎモル／時）を注入した、そして６６１モル／ｋｇアミリ ン（中空の円）、ペプチドコントロール（黒ぬりの四角）又はフエントラミンを 注射したラットの血漿グルコース反応（平均上ＳＥＭ、ｎ＝６各曲線について） を示す。印の上の星印はアミリン処置とペプチドコントロールグループとの差を 示す。印の下の星印はアミリン処置とＢＰコントロー。ルグループとの差を示す 。

図２は図１に記載したグループについて血漿乳酸反応（平均上ＳＥＭ、ｎ＝５、 各曲線について）を示す。印及び星印は図１におけると同意義を有する。

図３は、アミリン（６６％モル／ｋｇ）、アミリン血圧反応を増殖するよう設計 した計画においてペプチドコントロール又はフェントールアミンを注射したラッ トについての平均動脈血圧反応（２秒平均±Ｓ、Ｅ、　、陰影を付けることによ り示す）を示す。亜急性血圧反応は平均動脈圧（３０秒平均±Ｓ、　Ｅ、　）と して図３Ｂに示す。印、エラーパー、星印は図１におけると同じ意味を有する。

加えて、急性血圧反応は注射の時にプロットした。

図４は、２５．５ｎモルアミリン（中空の円）、ペプチドコントロール（中空の 四角）又は上図にて記載したと同じフェントールアミン（黒ぬりの四角）で静脈 に注射したラットにおける同位体で決定された非固定状態内因性（肝臓）グルコ ース生成を示す。試料番号及び印の意味、バー及び星印は図１、及び２における と同じである。

図５は１８時時間量したラットのグルコース（５Ａ）及び乳酸（５Ｂ）の血漿動 脈レベルでの１００冨Ｖグルカゴンの静脈注射（０時間）続いて１００冨９アミ リンの静脈注射（６時間）の効果を示す。

図６は（・・・０・・・）飼を与えた及び（−０−）絶食した（２０±１時間） ラットでのグルコース及び乳酸の血漿動脈レベルでの１００ｕグルカゴンの静脈 注射（０時間）続いて１０（ｂｅアミリンの静脈注射（６時間）の効果を示す。

発明の詳細な説明 糖尿病は慢性的に上昇したレベルの血液グルコースの存在により定義される代謝 障害である（過血糖症）。食物炭水化物は主にグルコースの形で血液流に吸収さ れる。膵臓ホルモン・インスリンは、グルコース酸化、骨格筋肉におけるグルコ ースのグリコーゲンへの、及び肝臓及び脂肪組織でのトリアジルグリセロールへ の変化を促進することにより、又、肝臓グルコース生成の抑制により血液からグ ルコースの速やかなりリアランスを促進する。従ってインスリンは、血液グルコ ースレベルを生理的範囲に維持するのに基本的役割を演じる。

インスリン依存（型１）糖尿病ｆ「ｌＤＤＭＪ）はインスリン生成の損失の結果 、膵臓β−細胞の自己免疫仲介破壊から起こり、過血糖症となる。

型１糖尿病の人々は生存を確実にするためにインスリン置換治療が絶対に必要で ある。著しい対比で、非インスリン依存（型２）糖尿病（ｒＮＩＤＤＭＪ）は、 血漿インスリンの平常より高いレベルの存在での過血糖症によりしばしば特徴づ けられる（高インスリン血液）。即ち、型２糖尿病においては、炭水化物代謝を 調節する組織方法がインスリンへの減少感受性を有すると信じられる。型２糖尿 病状態の進行は血液グルコースの濃度が増加することと関連し、グルコース誘発 インスリン分泌の速度での比較的減少と結び付く。

両型の糖尿病における処置の一次目的は同一で、即ち、血液グルコースレベルの 可能な限り正常に近く減少することである。型１糖尿病の処置はインスリンの置 換用量の投与をどうしても含み、それは非経口的経路により投与される。これに 対し、型２糖尿病の処置はしばしばインスリンの投与を必要としない。例えば型 ２糖尿病の最初の治療は、ダイエツトと経に低血糖剤、例えばスルホニル尿素類 での治療により増加される生き方の変化に基づきうる。ダイエツト及び生き方修 正の適切な試みののち、絶食低血糖が型２糖尿病患者内で持続し、「−次ダイエ ット失敗」の診断がなされ、経口低血糖治療の試み又はインスリン治療の直接協 会が疾病の合併症を最小にする試みに低血糖のコントロールをなすことが要求さ れる。

経口低血糖剤、例えばスルホニル尿素類による処置は、食事後４時間又はそれ以 上、昏睡を含む低血糖反応に導きつる。これらの低血糖エピソードは、数日続き 、延長された又は繰り返されたグルコース投与が要求される。このような低血糖 反応は予測できず、１用量のような少しの後で、処置の数日後に、又は薬物投与 の数ケ月後に起こりつる。はとんどの低血糖反応は５０才以上の患者に観察され 、そこなった肝臓又は腎機能を有する患者に起きやすい。適用量又は不十分な又 は不規則な食物取入れはこのような低血糖反応を開始しつる。他の薬剤は、スル ホニル尿素類から低血糖のリスクを増すことができる。これらは他の低血糖剤、 スルホンアミド類、プロプラノロール、サリチル酸塩フェニルブタシン、プロペ ンシト、ジクマロール、クロラムフェニコール、モノアミンオキシダーゼ阻害剤 及びアルコールを含む。

処置の上記手段にもかかわらず、インスリン治療は、型２糖尿病を伴う多くの患 者、特に−次ダイエット失敗を受けて肥満していない者、又は−次ダイエ・ソト 失敗及び二次経口低血糖失敗を受けた者にとって、選択の処置を維持することは 注目すべきである。それにもかかわらず、インスリン治療は、食物コントロール 及びライフスタイル修正で、及びこれらに代るものとして方法は思いつかないで 、持続した効果と結びつけなければならない。最上の結果を得るために、インス リン治療は自己血液グルコースモニタリング及びグリコジル化血液蛋白の適当な 見積りと結びつけるべきである。

スルホニル尿素剤と共に、低血糖はインスリン治療の主な逆効果であり、型１糖 尿病のインスリン治療でのオイグリセミックコントロールの達成を阻止する一次 因子である。低血糖はインスリン投与にとって非常に最も重要なそして普通の逆 反応であり、実質的な病的状態そして死さえももたらす。即ち、オイグリセミア のためにインスリン処置の増大する生活規制と戦う場合の主な障壁はきびしい低 血糖の増大するリスクである。ジンマン、ピー、「ザ・フイジオロジック・レブ トースメント・オブ・インスリン、アン・エリュシブ・ゴール」ニューイングラ ンド・ジャーナル・オブ・メディシン、３２１：３６３−３７０（１９８９）。

インスリン・誘発低血糖は時々、実質的に全ての型１糖尿病を経験する。ある研 究では、きびしい低血糖（必然的に伴う入院又は他人からの援助）は１年以上に 、全糖尿病患者の２５％に観察された。加えて低血糖は、型１糖尿病の患者の約 ３−７％の死が報告される。シャツリア・イー、等、イン・フエリグ・ピー等、 「エンドクリノロシイ・アンド・メタボリズム、１０４３−１１７８頁（２版１ ９８７）。低血糖偶発の速度は個人により変るけれども、ありきたりのインスリ ン治療を受ける患者は週当り対症低血糖の約１エピソードの平均を被る。一方、 強いインスリン治療を行なう者は週当り２ないし３のそのようなエピソードを被 る。

即ち型１糖尿病の４０年の時間枠を越えて、平均患者は対症低血糖の２０００な いし４０００のエピソードを経験するのを見積ることができる。ありきたりのイ ンスリン治療を受けている患者の約１０％は、きびしい低血糖の少くとも１エピ ソードを受ける。即ち、与えられた年で低血糖処置、例えばグルコース又はグル カゴン投与及び発作又は意識の喪失を伴うエピソードを含む他人からの援助を必 要とする。きびしい低血糖エピソードの１年間の偶発は強い治療を受ける患者の 約２５％に起きる。クライア・ピー・イー・等、「ヒポグリセミア・イン・アイ ディディエム」ジイアベーテス３８：１１９３−１１９８（１９８３）。

脳はグリコーゲンの形で炭水化物を蓄える非常に限られた能力のみを有し、エネ ルギー源としてグルコースにほとんど完全に依存する。即ちそれは低血糖に非常 に感受性がある。低血糖は４０即／ｍｌ下方の血液グルコースレベルとして定義 される。脳機能障害の症状は脳動脈血液のグルコース含量がこのレベル以下に低 下するまでほとんど起きない。しかしながら低血糖の症状は、非常に高いレベル から速やかに落ちた場合、血液グルコースが正常であるか又はご（最小に減じた にもかかわらず、起こりうる。低血糖状態の者びしい或いは再発するエピソード は永久的脳障害となりつる。即ち、低血糖状態の処置は医学緊急事態を表わす。

アミリンは、型２糖尿病の患者に見られると報告される膵島アミロイドの主要蛋 白成分である。ヒトアミリンは、いくらか有用なアミノ酸組成をなし、それは酸 性残基を含まない。アミリンは２つの翻訳後修飾、Ｃｙｓ”−Ｃｙｓ’分子内ジ スルフィト結合、及びカルボキン−末端アミド基を有する、３７アミノ酸ペプチ ドである。合成分子のペプチド構造における２つのこれらの翻訳後修飾の存在は 骨格筋肉におけるグリコーゲン合成を阻害する最大生物活性を生じることが報告 された。クーパー、ジー、ジェイ、ニス１、ライリス・エイ・シー９、クラーク 、エイ１、ターナ−、アール、シー３、シン、アール、ビー、及びレイド、ケイ 、ビー、エム、プロシーディンゲス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サ イエンス、ニーニスエイ、８４：８６２８−８６３２（１９８７）、クーパー、 ジージェイ、ニス、ロバーツ、エイ、エフ１、トッド、ジェイ、エイ８、サラト ン。

アール１、デエイ、エイ、ジェイ１、クイリス。エイ、シー１、レッド、ケイビ ー、エム、及びレイトン、ビー、ディアベテス１９８８における、ラーキンス。

アール９、ジメット、ピー及びキソーム、ディ編（エルセヴイア、エムステルダ ム）４９３−４９６頁（１９８９）。

ヒトアミリンは、ヒトＣ０ＲＰ−１及びＣＧＲＰ−２（カルシトニン遺伝子関連 ペプチド１及び２）とそれぞれ４３−４６％配列同−性を有する。ヒトアミリン は又、カルシトニン、インスリン、レラキシン及びインスリン様成長因子（ＩＧ Ｆｓ）と弱い配列類似を有する。配列類似に関するこの観察は、カルシトニン、 ＣＧＲＰｓ、アミリン並びにレラキシン、インスリン及びＩＧＦｓのＡ−鎖関連 部分を含むペプチドホルモン超ファミリーが存在するという決定を支持する。ア ミリンはヒトにおいてクロモシーム１２上に存在する単一遺伝子の生成物である と報告される。この遺伝子は、ブレブロー及びプロアミリン配列、典型的５゛及 び３゛ジ塩基性プロセシングシグナル及びアミド化シグナルを構成するカルボキ シ末端Ｔｙｒについてのコドンに対するｇｌｙ残基３゛を含むポリペプチドホル モンをコード化する遺伝子の典型的特徴を有する。ロバーツ　エイ、エフ　等、 プロシーディンゲス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンス、ニー 、ニス。

エイ、８６：９６６２−９６６６（１９８６）。アミリンとＣＧＲＰｓとの間、 特にアミノ−及びカルボキシ−末端の部分に高程度の種間保存がある。強い保存 のこれらの部分は、それらの生理活性の少（とも幾かに必要な翻訳後ｌ飾を含む 分子間の構造部分に対応する。アミリン分子の中央部分の可変配列は、アミロイ ド形成に主として関係するといわれる部分を含む。

アミリンは膵島で合成され（レフアート、ジェイ、ディ９、ニューガード、シー 、ビー１、オカモト、エッチ８、ミルバーン、ジェイ、エル、及びラスキイ。

ケイ、エル、プロシーディンゲス・オブ・ナショナル・アヵデミイ・オブ・サイ エンス、ニーニスエイ、　、８６：３１２７−３１３０（１９８９）及びロバー ツ。

エイ、エフ１、レイトン、ビー９、ト４ツド、ジエイ、エイ４、コックバーン、 ディー１、サブトン。アール３、ボイド、ライ。ホルト、ニス９、ディ、エイ、 ジェイ、フット、イー、エイ３、クイリス。エイ、シー１、レイド、ケイ、ビー 、エム、及びクーパー　ジー、ジェイ、ニス１、プロシーディンゲス・オブ・ナ ショナル・アカデミイ・オブ・サイエンス、ニーニスエイ、８６：９６６２−９ ６６６（１９８９））。そこから栄養源分泌促進薬に応じてインスリンと共に分 泌される。オガワ、エイ１、ハリス、ヴイ、マツクコ−クル、ニス、ケイ１、ア ンガー。

アール、エッチ、及びラスキイ、ケイ、エル３、ジャーナル・オブ・クリニカル ・インベスティゲイション、８５．９７３−９７６（１９９０）。膵島アミロイ ドニおけるアミリンの沈澱は膵島β−細胞の損失及び型２糖尿病に見られる欠損 インスリン分泌とよ（相関する。ゲブッ、ダブリュ１、ジ・イスレッッ・オブ・ ランゲルハンス、編集、クーパースティン、ニス、ジェイ、及びワトキンス、デ ィ。

（アカデミツク、プレス、ニュー・ヨーク、エヌヮイ）、３２１−３５６頁（１ ９８０）、フェーマン、エッチ、シー１、ウニバー、ケイ１、ゴーク、アール９ 、ゴーク、ビー、及びアーノルド、アール、　、ＦＥＢｓレターズ、２６２：２ ７９−２８１（１９９０）及びクーパー、ジー、ジェイ、ニス　、デエイ、エイ 、ジェイ。

、クイリス。エイ、シー６、ロバーツ、エイ、エフ。レイド、ケイ、ビー、及び ライドン　ビー２、ビオキミ力・エト・ビオフィジ力・アクタ、１０１４．２４ ７−２５８（１９８９）。ヒト膵島アミロイドにおけるその存在と結びついた多 くのモデル案におけるインスリン耐性を起こすアミリンの能力は、非インスリン 依存糖尿病の病原論への中心であることの決定を支持する。クーパー　シイ−、 ジ工イ、ニス１、ティ、エイ　ジエイ　、ライリス　エイ、シー１、ロバーツ　 エイエッチ９、レイド　ケイ、ビー、及びレイトン　ビー、ビオキミカ・エト・ ビオフィジ力・アクタ１０１４・２４７−２５８（１９８９）及びレイトン、ビ ー　及びクーパー、シイ−ジエイ、ニス、ネイチャー（ロンド）３３５：６３２ −６３５（１９８８）。

骨格筋インビトロにおいて、アミリンは、グルコースのグリコーゲンへの取込み （レイトン、ビー８及びクーパー、シイ−、ジエイ、ニス、ネイチャー（ロンド ）３３５：６３２−６３５（１９８８）及びクーパー、シイ−、ジエイ、ニス０ 、レイトン、ビー　、シミトリアジス、ジー　ディ０、バリー−ビリンゲス、エ ム　、コワルチュク　ジエイ、エム０、ホウランド、ケイ、ロスバード、ジエイ 、ビー、クイリス。エイ　シー、及びレイド、ケイ　ビー　エム　プロシーディ ンゲス・オブ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンス・ニーニスエイ、８ ５ニア７６３−７７６６（１９８８）、糖原分解（レイトン、ビー１、フット、 イー、エイ。

及びクーパー、シイ−、ジエイ、ニス（１９８９）ディアベティック・メディシ ン６：補遺２、Ａ４（１９８９））及びグルコース取込みを含む炭水化物代謝の 幾つかの鍵通路を調節することが報告された。シアテルジ、ティ、ビー１、クー バーンイー、ジェイ、ニス、及びストルプ、エム、ディアベテス３９．１４９、 Ａ（１９９０）及びクリユーター、ディ６、オレナ、ニス、ジエイ、及びアント リニス、ジー　シー９、ディアベテス３９、（補遺１）：１２１Ａ（１９９０） 。骨格筋におけるアミリンの効果は線維型の分布に依存する。レイトン、ビー１ 、フット、イー、エイ、及びクーパー、シイ、ジェイ、ニス、（１９８９）ディ アベティック・メディシン、６．補遺２、Ａ４（１９８９）。アミリンは赤い（ ヒラメ筋）及び白い（伸筋ディジトラム（ｄｉｇｉｔｏｒｕａ＋）ロンゲス（ｌ ｏｎｇｕｓ）筋肉の両方でグリコーゲン合成を阻害することが報告されたが、一 方、白い筋肉においてのみ糖原分解（及び続いて起こる乳酸生成）を促進するこ とが報告された。ライドン、ビー９、フット。

イー、エイ　及びクーパー、シイ、ジエイ、ニス６、シイアベテイック・メデイ シン６、補遺２：４Ａ（１９８９）。白い（型ＩＩ）筋肉線維は調査されたほと んどの哺乳動物で大半の筋肉集積を与える。アリア人工ム、エイ０、アール　ビ ー。

アームストロング、及びブイ。アール、エドガートン、ジャーナル・オブ・ヒス トケミストシイ・アンド・シトケミストシイ、２１：５ｌ−５５（１９７３）。

分離された赤い筋肉（ヒラメ筋）におけるグリコーゲン合成へのアミリンの効果 は、純粋なβ−アドレナリン作動作用薬、イソプレナリンのそれらと効力が等し いと報告された。ライドン　ビー及びクーパー、シイ、ジエイ、ニス、ネイチャ ー（ロンド）３３５：６３２−６３５（１９８８）。Ｌ６筋細胞において、グル コース取込みの最大減少はＩＯＰＭと報告された。シアジルディ。ティ、ビー８ 、クーパー、シイ、ジエイ、ニス、及びストールプ、エム　、ディアベテス３９ ．３９：１４９Ａ（１９９０）及びクリュター、ディ０、オレ九ニス、ジェイ、 及びアントリユース、シイ、シイ−０、ディアベテス３９（補遺１）＋１２１Ａ （１９９０）。これらの効果は以下の実施例で測定され述べられたようなホルモ ンの生理的濃度で起きる。

アミリンは、又、動物中、インビボでのグルコース代謝の通路へのすぐれた効果 を生ずることが報告された。オイグリセミック、高インスリン血症グルコースク ランプを用いる実験において、アミリンはラットでの肝臓グルコース取込のイン スリン−伝達抑制を逆にした。モリナ、ジエイ、エム０、クーパー、シイ、ジエ イ　ニス１、ライドン　ビー、及びオレフスキー、ジェイ、エム１、ディアベテ ス３９：２６０−２６５（１９９０）及びクープマンズ、ニス、ジエイ１、ヴア ンマンスフエルド、エイ、ディ、エム１、ジャンツ、エッチ、ニス８、クラス、 エッチ、エム　ジエイ１、ラダー、ジエイ、ケイ１、フロリッチ、エム、デボア 、ニス　エフ０、クリュター、ディ、ケイ１、アンドリニウス、シイ、シー、及 びマーセン、ジェイ、エイ、ディアベテス３９＋１０１Ａ（１９９０）。アミリ ンは又、グルコースの抹消取込みを減じた。モリナ、ジェイ　エム９、クーパー 　シイ。

ジエイ、ニス１、ライドン、ビー、及びオレフスキー、ジェイ、エム８、ディア ベテス３９：２６０−２６５（１９９０）、クーブマンズ　ニス、ジエイ８、ヴ アンマンスフエルド、エイ、ディ、エム１、ジャンツ、エッチ、ニス１、フラン ス。

エッチ、エム　ノエイ　、ラダー　ジエイ　ケイ１、フロリッチ、エム、デポア 。

ニス、エフ９、クリュター、ディ　ケイ　、アンドリュウス、ンイ、シー、及び マーセン、ジェイ、エイ　ディアベテス３９；ｌ０ＩＡ（１９９０）及びヤング 。

ディ、エイ０、ディーニス。アール、オウ、マツクイントシュ、アール、エッチ 。

、デーコン、アール、ダブリュ、及びフォレイ、ジエイ、イー１、ディアベテス ３９（補遺１）＋１１６Ａ（１９９０）。

上で述べたように、グルカゴンは、低血糖の処置におけるその位置について、は とんど完全に、肝臓スホリラーゼの活性化を通し糖原分解を開始することにより 膵臓からグルコースを遊離させる能力の恩恵を受けている。グルコースホメオス タンスにおいて多分より重要である糖原分解を促進する能力は、この作用にごく 一部働くか、又はグルカゴンが抹消グルカゴン利用への有意な効果を有しないと 報告される（グルカゴン−促進インスリン分泌に二次的に促進するかもしれない ことを除き）。グルカゴンの過血糖症効果は、いかなる理由であれ、肝臓におけ るグリコーゲンの量が減じるか、又は、グルコースへの変化に利用できないとき 、終るか又は小さくなる。ヴイ、マークス、「グルカゴン・イン・ザ・ディアグ ノシス・アンド・トリートメントオブ・ヒポグリセミア」ノ１ンドブツク・オブ ・エクスベリメンタル・ファーマコロジイの５５章、６６−Ｉ　Ｉ（グルカゴン ＩＩ）ビー、ジエイ、レフエブヴアー（出版）（スブリンガーーヴアーラグ１９ ８３）。対照的に我々は増大した血液グルコース中のアミリンの効果が飼を与え た動物（即ち肝臓グリコーゲン貯蔵を有するもの）において大きく減じることを 見いだした。一方、我々は、アミリンが絶食した動物でのグルコースレベルを増 加するのに有効であることを見いだした。これに対しグルカゴンはほんの少しか 又は効果がなかった。図６参照。

本発明は、過血糖症条件、特に急性低血糖、例えばインスリン過剰用量又はスル ホニル尿素過剰用量によりもたらされるものの処置のためグルカゴン化合物とア ミリン又はアミリンアゴニストとの共投与を提供する。アミリンとグルカゴン化 合物の共投与は例えば低血糖偶発の処置についてより広い範囲の有用性を与える 。低血糖反応を受けている動物又は患者は身もだえするか又は昏睡し、それらの 栄養状態は知られていない。即ち、本発明の組成物は枯渇した又は実質的に小さ な肝臓グリコーン貯蔵を有する患者及び実質的に肝臓グリコーゲン貯蔵を有する よ（栄養の与えられた患者の緩和な低血糖に作用する。即ち、これらの組成物は 全ての場合に血液グルコースを上昇させるのに有効である。以下の実施例で示す ように、アミリンは、グルカゴンよりも、絶食状態での動物を処置するのにその 過血糖症活性においてはるかに有効であり、一方グルカゴンは、アミリンがより 少ない低血糖反応を惹起する飼を与えた動物を処置するのにさらに有効な過血糖 症活性を有する。すなわち、本発明の組成物はこのホルモン治療になじみやすい 低血糖エピソードの範囲と型を有益に越える（例えば図６参照）。

この点については、以下の実施例１に記載されたアミリンポーラス注射実験は、 血漿グルコース及び乳酸において実質的に活発な増大を生ずることに注意される 。

ハイバーラクテミアは１−２時間持続し、過血糖症は２−３時間持続した。これ らの反応は（それぞれのコントロール群に比べ）４−５時間持続した増加した内 因性（肝臓）グルコース生成に関連した。低血圧性コントロール以上のこれらの 反応の有意な増加は、それらがアミＩＪンの直接効果の結果として生じ単なる減 少潅流（ｐｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｒ）によるものでないことを示す。同様に、 処理群間の血漿カテコールアミンでの測定差の欠如は現われた効果がこれらの薬 剤により起こるものでないことを示す。アミリンによる低血糖に導く配列を越え るグルコース出現の観察された過剰の速度は持続した絶食期間にもかかわらず起 きた。このような絶食期間で、肝臓グリコーゲンはラットで０．　２％（ｖｔ／ ｖｔ）まで典型的に枯渇した。

シュルマン、ジー、アイ０、ロスマン、ディー、エル１、スミス、ディー１、ジ ョンソン、シー、エム３、グライア、ジェイ、ビイ−１、シェルマン、アール、 ジー、及びデクロンゾ、アール、エイ、ジャーナル・オブ・クリニカル・インヴ エスティゲイション、７６：１２２９−１２３６（１９８５）。

ラットにおける白い筋肉はインビトロで、アミリンに対応した増加した乳酸生成 を示す。ライドン、ビー１、フート、イー、エイ、及びクーパー、ジー、ジ工イ 、ニス９、デアベテインク・メディンン、６．補遺２１．へ４（１９８９）。図 ２においてアミリン投与後、血漿における乳酸の観察された出現は、筋肉グリコ ーゲン分解からのその始まりと一致する。肝臓グルコース生成及び血漿グルコー スは、血漿乳酸よりも悪く、コントロール値を越えて有意に上昇する。観察され た効果の配列は、アミリンポーラス後、筋肉乳酸が血漿に遊離されそれがグリコ ーゲン分解のための基質としての役立つ肝臓に供給されるという測定と一致する 。

即ちアミリンはコリ循環を増強する。

食物ホメオスタシスにおけるコリ循環の役割は最近再び評価されだした。マクガ リイ、ジェイ、ディ１、クワシマ、エム１、ニューガード、シー　ビー　、及び ホスター、ディー、ダブリュー１、アン、レヴ、ヌトル、７・５ｌ−７３（１９ ８７）。直接グリコーゲン合成（グルコース−グルコース−６−リン酸−グルコ ース−１−リン酸−ＵＤＰ−グルコース−グリコーゲン）を経由した肝臓グリコ ーゲン多血症の広く受け入れたメカニズムが調査され（ラドジク、ジエイ１、フ ェト、ブロク、４１：１１０−１１６（１９８２））と、同位体研究にニューガ ード。

シー、ビー１、ヒルシュ、エル、ジェイ６、ホスター、ディ、ダブリュ、及びマ クガリイ、ジェイ、ディ０、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリイ 、２５８：８０４６−８０５２（１９８３））は大部分の肝臓グリコーゲン多血 症が「間接」糖新生進路を経て起きることを示した。これは１３Ｃ−標識基質の 核磁気共鳴トレーシングにより本質的に確認された。ンユルマン、ジー、アイ１ 、ロスマン。

ディ、エル１、スミス、ディ１、ジョンソン、シー、エム１、プライア、ジェイ 。

ビー　、シュルマン、アール、シイ、及びデフロンゾ、アール、エイ０、ジャー ナル・オブ・クリニカル・インヴエスティゲイション、７６；１２２９−１２３ ６（１９８５）。コリ循環は、低親和りルコキナーゼを経てグルコースのグルコ ース−６−リン酸変換、直接グリコーゲン合成への障害の迂回を容易にする。マ クガリイ、ジェイ、ディ０、クワシマ、エム０、ニューガード、シー、ビー、及 びホスター、ディ、ダブリュ２、アン、レヴ、ヌトル、７二５ｌ−７３（１９８ ７）。

末梢ではへキソキナーゼは、高親和性で反応を触媒する。コリ循環は代謝食物が 高容量筋肉貯蔵と肝臓の間を変換できるメカニズムとして作用し、ここでそれは 要求されたように多様の代謝進路に再び向けることができる。乳酸は、解糖が典 型的に促進されたグリコーゲン分解と関連した酸化能力を超過すると筋肉から放 出される。連続的にこの反応を調節したホルモンは、乳酸の末梢から肝臓への供 給、それゆえに肝臓利用の割合を調節する。アミリン仲介ハイバーラクテミアは ホルモン用にそのような役割と一致する。従ってインスリンとアミリンの共放出 はコリ循環活性への調整効果を有する。インスリンは筋肉貯蔵への炭素流を調節 し、一方アミリンはその放出を調節する。結合された高インスリン血／高アリリ ン血はコリ循環を促進する。肥満した非インスリン依存糖尿病患者、上昇した血 漿アミリン／インスリン濃度を示すと報告されたグループ（ルドヴイク、ビー０ 、スヴオポダ、ティ９、バーター、イー１、クエンブルダ、イー、ブルンバー、 エム０、ウォロスズク、ダブリュ、及びブラガー、アール０、ディアベテス３９ （補遺１）、１１６Ａ（１９９０））も増大したコリ循環流を示す。ザワドスキ イ、ジエイ、ケイ１、ウオルフ、アール１、セット。ディ、エム、リリオジア、 ニス３、ホワード、ビー、ケイ１、及びボガードス、シー１、ディアベテス３７ ：１５４−１５９（１９８８）：コンソリ、エイ９、ヌルヤハン、エヌ、カパニ 、エフ、及びゲリチ、ジェイ１、ディアベテス３８：５５０−５５７（１９８９ ）。

他の研究が、インスリン仲介代謝変化を調節するその能力に関して、アミリンを 一般に観察した一方、ソマトスタチン注入は以下に記載するように、これらのホ ルモンにおいて変化のアミリン独立の効果を測定するのに内因性インスリン及び グルカゴン分泌を阻害するのに用いられた。アミリンの単一ポーラス用量後代側 パラメーターの範囲を観察した。結果は、末梢組織からの糖新生（ｇｌｕｃｏｎ ｅｏｇｅｎｉｃ）基質放出及び肝臓での糖新生／糖原分解を調節することにより 、アミリンは、コリ（グルコース−３−炭素化合物−グルコース）循環（コ１へ ジー、ティー及びシー、エフ１、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト リイ、１３１：２９７−２９８（１９３９））を経て、流れを調節するのに役割 を有するとの結論に一致する。コリ循環を経た食事後の流れは肝臓グリコーゲン 多血症の主要メカニズムであるように見える。ニューガード、シー、ビー　、ヒ ルンユ、エル　ジェイ　、ホスター　ディ、ダブリュ、及びマクガリイ、ジェイ 、ディ３、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストライ、２５８：８０４ ６−８０５２（１９８３）。

実施例３に記載した研究においてグルカゴン投与（０時間）次いでアミリンの投 与（６時間）の効果を絶食した（２０±１時間）及び飼を与えたラットについて 観察した。図７及び表１参照。

飼を与えたラットで、グルカゴン注射は、約０．６時間接続した速やかな血糖反 応を生じた。グルカゴンは、ヒトにおいて８５％の逆調節的に働く肝臓グルコー ス生成をはじめに説明する肝臓糖原分解の直接刺激を経てその即時効果に影響す ると考えられる。延長した逆調節的に働くホルモン刺激は、肝臓糖生成のモード として徐々に糖原分解に置き換る糖新生となると報告された（レカヴアリア。

エル等、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジイ、２５６：８４４−５ １（１９８９）。

逆に、２０時時間量ラットではグルカゴンにより少ない血糖反応があった。絶食 ラットでは、肝臓グリコーゲンは１８−２４時間で最低で約０．　１−０．　２ ％ｖｔ／ｖｔであった。この理由のため、「グルカゴンは、肝臓グリコーゲンが 入手可能である場合だけ、過血糖症に有用である」と言われ、又「副腎の不十分 な飢餓又は慢性低血糖にほとんど助けにならないか全（助けにならない」と言わ れる。（イーライ・リリー・アンド・カンパニー、「医師への報道」グルカゴン ・フォア・インジェクション・ニーエスピー・バンブレット・ＰＡＯ８６６ＡＭ Ｐ（１９８９））。肝臓グリコーゲン量はこの研究では測定されなかったが、観 察されたデータはグルカゴン注射後糖生成を限定する肝臓グリコーゲン枯渇と一 致した。

絶食動物ではアミリン注射により乳酸において比較的速やかな壊変を反映した血 漿乳酸における突然の増加及び血漿グルコースにおける十分な増加を示した。

飼を与えた動物では絶食した動物に観察されたとほぼ等しく血漿乳酸での増加が あった。しかしながら絶食動物に比べて、血漿乳酸においてよりおそい壊変に合 致した少ないグリセミック反応があった。

アミリンは、糖原分解（ヤング、ディ、エイ、等、アメリカン・ジャーナル・オ ブ・フィジオロジイ、２５９：Ｅ４５７−Ｅ４６１（１９９０））及び続く乳酸 産生（ライドン、ビー３、ジー、ジェイ、ニス、クーパー、ネイチャー３３５： ６３２−６３５（１９８８）：ライトン、ビー及びイー、フート、バイオケミカ ル・ジャーナル、２６９：１９−２３（１９９０））を刺激する。骨格筋肉への 直接効果を有すると報告される。この研究で観察される高乳酸血症は筋肉糖生成 から誘導される可能性がある。アミリンがラットで、インビボ（モリナ、ジェイ 、エム１、等、ディアベテス３９：２６０−２６５（１９９０）：クーブマンズ 、ニス、ジエイ９等、ディアベテス３９：１０１Ａ（１９９０）；ヤング、ディ 、エイ　等、ディアベテス３９：１１６Ａ（１９９０））及び幾つかのインビト ロ筋肉製品で（レイトン及びクーパー、ネイチャー３３５：６３２−６３５（１ ９８８）＋クレウター、ディ　等、ディアベテス３９：１２１Ａ（１９９０）、 グルコース取込みを減すると報告されたので、それはグルコースの末梢取込みを ブロックすることにより、本研究での過血糖症に貢献できることが可能である。

しかしながら、我々は、又、アミリンが２０時時間量ラットで内因性グルコース 出現を増加することを既に示した（ヤング等１９９０）。かかる動物に期待され る現存している肝臓グリコーゲンの全加水分解（例えばダビド、エム、等ジャー ナル・オブ・クリニカル・インベスティゲイション、８６：６１２−６１７（１ ９９０）；ゴールドスティン、ディ、イー１、メタポリズム２７＋３１５−３２ ３（１９７８）参照）は、（肝臓グルコシル残基のグルコース空間への即時分布 により評価される）あの研究及び現存報告される研究の両方に観察される過血糖 症の約３０％が説明できない。それゆえ我々は絶食ラットにおけるアミリン誘導 過血糖症の少くとも２／３は糖新生によると信する。

所望により、アミリンアゴニストをアミリンの代りに用いつる。アミリンアゴニ ストは非−ヒトアミリン種、例えばラットアミリン及びイヌアミリンを含み、又 、アミリンアゴニスト活性を発揮し、化学的に又、構造的に天然アミリンと関連 するペプチド及びペプチド同族体（又はミミソク）を含む。一般に有用なアミリ アミリンアゴニストはアミリンの修飾である化合物を含む。アミリンアゴニスト は、２．７−ジスルフィド結合のない化合物及び２，７−アミドリンケージを有 する化合物例えばンクロ２・７［Ａｓｐ２．　Ｌｙｓ’］又は２．７−リンケー ンを全く有しない化合物、例えば［Ｓｅｒ”、　Ｓｅｔ’コーヒトアミリン又は ［Ａ１ａ２．　Ａｌａ７］−ヒトアミリンを含むアミノ酸２及び７を結合するた めの交互の意味を有するものを含む。他のアミリンアゴニストは残基２３で置換 アミノ酸を有するもの、［ＸＸＸ”］アミリン及び／又は残２９、［ＸＸＨ］ア ミリン（式中［ＸＸＸ］１ｔ２０の自然に起きるアミノ酸又はそれらのＤ−異性 体の一つを示す）を含む。そのようなペプチドは［Ｌｅｕ　１３　］アミリン及 び［Ｐｒｏ”］アアミンを含む。他のアミリンアゴニストは最初の又は最終のア ミノ酸の欠損を有する化合物、例えばト３７−アミリン又はト３６−アミリンを 含む。他のアミリンアゴニストはアミリンプレカーサー、例えば（ボスト　Ｃ末 端Ｇ１ｙ末端Ｇ１ｙＳＬｙｓを有する）プレープロアミリン又は［Ｐｒｏ−ＮＨ ］アミリン及びｒＰｒｏ、Ａｒｇ−ＮＨ−］アアミンを含むＮ末端に付加アミノ 酸を有する化合物を含む。このようなアミリンアゴニストは天然アミリンの化学 修飾により、組換え技術により、又はペプチド合成に用いられる通常の技術、例 えば自動ペプチドシンセサイザーを用いる固相ペプチド合成により製造しつる。

本発明の生成物は一般にグルカゴンと同じ方法で、即ち、非経口的に又は注入に より投与される。これらの構造及び活性がグルカゴンと類似しているので、それ らは一般にグルカゴンと同じ型の製薬的許容しうる賦形剤と共に投与しつる。ア ミリン又はアミリンアゴニストは、事実、同一用量単位でグルカゴンと共に投与 しつる。

これらのアミリンアゴニストは、又、グルカゴン又はグルカゴン化合物と共にし かし別の医薬組成物で、同時に投与しつる。

本発明の生成物は両性であるので、それらは遊離塩基として、酸付加塩として、 又は金属塩として用いつる。もちろん塩は製薬的に許容されねばならず、それら は金属塩、特にアルカリ及びアルカリ土類金属塩、適当には、カリウム又はナト リウム塩を含む。広品種の製薬的に許容しつる酸付加塩を利用しつる。それらは 、有機及び無機塩、好ましくは鉱酸から製造されるものを含む。例によって述べ つる典型的酸は、クエン酸、コハク酸、乳酸、塩酸及び臭酸を含む。このような 生成物は、当業者によく知られた手段で容易に製造される。

本発明の生成物は通常、注射又は注入用に非経口的組成物として提供される。

それらは、例えば不活性油、適当には植物油、例えばゴマ、ピーナツ又はオリー ブ油中に懸濁できる。別法としてそれらは約５．６ないし７．４のｐＨで水性等 張緩新液中に勝濁できる。有用な緩衝液は、クエン酸ナトリウム−クエン酸及び リン酸ナトリウム−リン酸を含む。

望ましい等張性は、塩化ナトリウム又は他の製薬的に許容しつる試薬、例えばテ キストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレンゲルコール、又ハ他の無 機又は有機溶質を用いて達成しつる。

所望により、溶液はシックニング剤、例えばメチルセルロースで濃厚化しつる。

それらは、ウォーターインオイル又はオイルインウォーターで、乳化形に調製し つる。全ての広品種の製薬的に許容しつる乳化剤が用いられ、例えばアカシア粉 末又はアルカリポリエーテルアルコールサルフェート又はスルホネート例えばト リトンを含む。

本発明の治療上有用な組成物は、成分を一般に受け入れられる方法に従って混合 することにより調製される。例えば、選択された成分を混合機又は他の標準的容 器中、単に混合して、濃縮混合物を生成させ、これを次いで、水はシックニング 剤の添加により最終濃度及び粘度に調整し、緩衝液でｐＨを調節し、溶質を加え て緊張状態を調節する。

医師による使用のために組成物は、選択されたレベルで血糖を調節するため、１ 又は多用量で有効であるグルカゴン及び／又はアミリンアゴニストの量を含む用 量単位形で提供される。この分野の人により認識されるように、治療剤の有効量 は、患者の年齢及び体重、患者の身体的条件、得られるべき血糖レベル及び他の ファクターを含む緒おくのファクターで変化する。典型的な用量単位は、約０゜ １から１０１９のアミリン又はその効果を有するアミリンアゴニストの量、及び 約０．１ないし約１．　０１９のグルカゴン（又はその効果を有するグルカゴン 化合物の量）を有する。有効な結果を達成しつる限りこの範囲から広く変化する ことも可能である。

以下の実施例は本発明の方法及び組成物の例示であり、これらを限定するもので はない。使用のために修飾又は適応されつる他の適当な化合物も適切であり、又 、本発明の精神及び範囲内にある。

実施例１ 実験計画の各処理は６匹の雄バーラン・スブラーグ・ドウライラ・ソト（体重３ ８８±７ｇ、年齢９３±２日）を用いた。動物は１２：１２時間明：暗サイクル で２２．７±０．　８℃で収容しく実験は明サイクルの間に実施した）、任意に 餌と水を与えた（食餌ＬＭ−４８５、チクラド、マデイソン、ウイスコンシン） 。動物を一晩絶食した（手術前１３゜３±２，８時間）。麻酔を５％ノ＼ロダン で誘導し、手術の間２％で、代謝記録の間０．８−１％で保持した。気管切開及 び右大腿動脈及び静脈のカニユーレ挿入を実施した。

大腿動脈線を圧力ドランスジューサー（スペクトラムドＰ２３ＸＬトランスジュ ーサー、モデル１３−４５１５−５８アンブリフアイア、ゴウルド　クリーヴラ ンド　オハイオ）に連結し、ヘパリン添加食塩水（２Ｕ／菖ｌ）を３．　０ｗｌ ／ｈｒで潅流した。全ての長時間注入される剤をこの注入液（ｉｎｆｕｓａｔｅ ）に加えた。大腿静脈線は急性（ポーラス）注射に用いた。

４−肢ＥＣＧをＥＣＧ／ビオタクアンプリファイア・（モデル１３−４６１５− ６５Ａ、ゴウルド、クリーヴランド、オ／％イオ）によりモニターし、心拍数を 導いた。

結腸温度は加熱作動テーブルを切換えることによりコア温度の閉鎖ループコント ロールを提供したサーミスタープローブ及びコントローラー（モデル７３Ａ１Ｙ Ｓ１、イエロースプリング、オハイオ）を用いて測定した。

気管内チューブは、管潅流内の小圧縮を越えて特異圧７を測定した特に組立てた 呼吸気流計につないだ。産生は、較正表（ラブチク・ノートブック機能）を用い 流れにオンラインで線状とした。気管流の試料は呼吸質量分析機（ＭＧＡ３００ ０１エアスペック、ピッギン・ヒル、ケント、イングランド）を用いてＮ２．０ ２、Ａｒ、Ｃｏ、、水蒸気及びハロタンを連続的に分析した。

気管流、ｏ２、及びＣＯ２濃度、心拍数、動脈圧力及び結腸温度のシグナルは、 定時にサンプリングし、コンピューター化されたデータ獲得系（ＤＴ２８０１Ａ Ａ／Ｄコンｔ＜−ターステータトランスレーア＝Ｉン　マールボ叱マサチューセ ッツ、ＡＳＴプレミウム３８６コンピユーター、ＡＳＴリサーチ、アーヴイン。

カリナルニア。ラブチック、ノートブック・ソフトウェア、ラボラトライ・チク ノロシーズ・コープ、ウィルミントン、マサチューセッツ）を用い２０Ｈｚで１ ２−ビット精度でたくわえた。ガス張力及び流れシグナルは同調し、酸素消費速 度及び３０秒エポックを越えた呼吸商を誘導するのに用いた。カニユーレ挿入で 、動物はソマトスタチン（Ｓ−９１２９、シグマ、セントルイス、ミズウリ）３ ．４のモル／時、及び３−［”Ｈ］−グルコースにューイングランド・ニュクレ アー／シュポン、ウイルミントン、プラウエア）４４．４ＫＢｇ／ｈｒを含むヘ パリン添加食塩水を吹き込んだ。

三つの処置グループがあった。

（１）アミリンポーラス（ｎ−６）：２時間注入後、動物は２５．５ｎモルの新 しい溶解したラットアミリン（ロット＃ＺＧ４８５、バケム、トランス、カリホ ルニア）を含む１００１Ｊポーラスの食塩水を注射した。この研究で用いられる べきペプチドの生物学的活性はヒラメ筋基本アッセー（レイトン、ビー及びクー パー。

ジー、ジニイ、ニス、ネイチャー、３３５：６３２　６３５（１９８８０ＥＣｉ 。＝６．７±１．５ｍＭ）を用い最初に変化した。

（２）ペプチドコントロール（ｎ＝６）：新しいアミリンの代りに、ラットは、 １２１℃で９０分オートクレーブで加熱した同一ペプチド２５．５ｎモル（ｎ＝ 　３　）又は食塩水のみ（ｎ−３）を注射した。オートクレーブしたアミリン又 は食塩水の応答間に違いがなかったので、データは、「ペプチドコントロール」 として引用した単一コントロールグループに集めた。

（３）血圧コントロール（ｎ＝６）、新しいアミリンの代りに、５０μｌの食塩 水中１８ｎモルパルスのフエントラミンを、大腿静脈カニユーレを経て、６６０ モル／ｋｇアミリンポーラスにより生成される一時的低血圧性プロフィルをミミ ックするよう計算したスケジュールで注射した。

動脈試料はポーラス注射前０．　５．０．２５及び０時間、及び注射後０，５． １．１．　１．　５．２．３．４．５及び６時間に抜いた。試料はＮａ２・ＥＤ ＴＡ（最終濃度的５ｍＭ）に集め、グルコース、乳酸塩、トリチウム標識グルコ ース、インスリン及びラットアミリン用に分析される血漿に分けた。

グルコース及び乳酸塩は固定化酵素化学（グルコースオキシダーゼ、Ｌ−乳酸塩 オキシダーゼ、アナライザーモデル２３００−３ＴＡＴ、ＹＳＩ、イエロー・ス プリングス、オハイオ）により分析した。

トリチウム標識グルコース特異活性は、過塩素酸沈澱により蛋白の既に取り除か れた血漿の蒸発後、残っているトリチウムを数えたのち測定した。ベスト、ジエ イ、ディ１、シュドゼウィッチニ、ファイファー、エム、エイ、ベアード、ジエ イ、シー、バーター　ジェイ、エイ、及びボート、ディ０、ディアベテス３１： ３３３−３３８（１９８２）。放射グルコースの安定した注入速度で（４４，４ ＫＢｇ／ｈｒ）、内因性グルコース生成の速度を、スチールの非安定状態トレー サー希釈法の修飾（ブロイエト、ジエイ　、ローナーーヤーンレナウド、エフ、 ）＼オネスク　イー９、テレタズ、ジニイ１、サラター　ジエイ　エフ、及びマ ーンレナウド、ビー　、アメリカン・ジャーナル・オブ・フイジオロジイ２５２ ：Ｅ７７−Ｅ８４（１９８７））を用い、トリチウム標識グルコース特異活性及 び仮定されたグルコーススペースから測定した。スチール　アール、アンナルス 　オブ、二ニーヨーク、アカデミイ・オブ・サイエンス、８：４２０−４３０（ １９５９）。

インスリンをラシオイムノアッセ−（ミクロメゾツクヒトインスリンＲＩＡキッ ト、ＩＣＮバイオメディカルス　ホーノヤム　ペンシルヴアニア）により測定し た。感性６ｐＭ、ラットインスリンに対する交差反応性８９．５％。ラットアミ リンをラジオイムノアッセ−（キットＲＩ　Ｎ７３２３、ペニンスラ・ラボラト リーズ、ベルセント、カリホルニア）次いでＣ−１８樹脂抽出及び８０％アセト ニトリル１０，１％トリフルオロ酢酸による溶出によって測定した。

血漿カテコールアミン（エピネフリン及びノルエピネフリン）を注射後Ｏ１２， ４及び６時間に電気化学検出によるＨＰＬＣ次いでアルミナ血漿抽出を用い測定 した。内部標準（ンヒドロキシ酪酸）を抽出の前に血漿に加えた。ウェイカー等 の方法（ウェイカー６エツチ６、フエラウディ、エム１、ハグル、エッチ、及び ブルト、アール、クリニカル、キミカ、アクタ１４１：１７−２５（１９８４） の修飾は、７．８％の変化の係数で５０μＬ試料の分析を可能にした。

統計分析は、有意差のレベルとしてＰ＜０．０５を用いる５ＹＳＴＡＴ・システ ム（ジスタート　ニヴアンストン、イリノイ）に含まれるスチューデントのｔ検 定処理手段によった。特に説明しない限り、全ての結果は平均±平均の標準誤差 とて報告した。

測定した血液グルコース及び乳酸塩レベルを図１に示す。アミリン（６６０モル ／ｋｇ）の注射に従い。５．９士１３ｍＭから１１．０±Ｑ、５ｍＭグルコース の血漿グルコースでの速やかな上昇があった。これに対しコントロール動物では 、長く続いた実験条件がよりおそい持続した上昇が血漿グルコースで生じた。ア ミリン処理したラット（グループ１）は不活性ペプチドコントロール（グループ ２）に比較して少くとも３時間血圧コントロールに比べて少くとも２時間有意に 過血糖を維持した。図２は、血漿乳酸塩濃度が注射後３０分まで２３０％上昇し 、少くとも２時間有意に上昇して維持したことを示す。

平均動脈圧力では、２時間ソマトスタチン注入後、１０１±２から８３±５＋ｍ Ｈｇの有意な落下があった。（１３，４７±０．２７出１１．０７　０．６７Ｋ Ｐａ、ｐ＜３．０１）。加えて、ポーラスアミリン注射で、約６０秒以内で完全 であった平均動脈圧力でのさらに落下があった。血圧はアミリン注射グループで 注射後３０分、雑然として有意に低く（７３対９１ｍｍＨｇ）心臓速度は有意に 高かった（８３６対３２０ビ一ト／分）が両者は注射後６０分でペプチドコント ロールレベル（グループ２）にもどった（図３Ｂ参照）。

血圧コントロールグループ（グループ３）は、ソマトスタチンの存在下、この大 用量のアミリンの血管活性により生成した動脈圧での変化をくり返すよう設計さ れ、これにより、減少した動脈圧から得られる減少した組織潅流に起因する過血 糖及び高乳酸塩血症の成分を測る。

注射後６時間にわたりアミリン及びフエントラミノ処理グループ間の平均動脈圧 に有意差はなかった。図３Ａは、標的（グループ１）圧力プロフィールに比べ１ ８０モルのくり返し脈拍に応答する動脈圧を示す。このグループでは、正常血圧 コントロール以上の増加したグルコース及び乳酸塩応答があった。しかしながら これらは太き（はなく、図１及び２に示されたアミリン応答に対する明らかに異 なる一時的プロフィールがあった。

血液カテコールアミン（ノルエピネフリン）レベルは処理グループ比較（アミリ ン処理対ペプチドコントロール、アミリン処理対血圧コントロール、ペプチドコ ントロール対血圧コントロール）、４時間点の全てで（注射後Ｏ１２，４，６時 間）一つの場合を除き（ペプチドコントロール値〉アミリン処理グループ２時間 ）差はなかった。全ての３つの処理グループからの集めたデータセットにも、低 血圧性グループ（アミリン処理十血圧コントロール）からのものも、注射前レベ ルを越えてノルエピネフリンでの有意な増加はなかった。血漿ノルエピネフリン レベルは３．９±０．　４．５．１±０．６及び３．９±０．３ｎＭで、血漿エ ピネフリンレベルは４．１±０．９．３．７±０．４及び５．５±０．８ｎＭで 、それぞれ、アミリン処理、ペプチドコントロール及び血圧コントロールグルー プにおいてであった。

血液インスリンレベルに関しては、ソマトスタチンが観察された過血糖エピソー ドから期待され得た全ての過インスリンを有効に阻止することを示す。実験の間 を越えて、全ての処理グループにおいて、前注射レベルからの血漿インスリン濃 度で変化はなかった。同様に処理グループ間で、実験を通じて全ての時点で（０ ，２，４，６時間）差はなかった。グルコース活性化インスリン分泌はソマトス タチン注入により有効に阻害されグルカゴン分泌が同様に阻害されたことを確実 にした。ゲリッヒ、ジエイ、イー１、ロレンジ、エム、シュネイダー、ヴイ９、 クワン、シー、ダブリュ、カラム、ジエイ、エッチ　、ギレミン、アール、及び ホーシアム、ピー、エッチ１、ディアベテス２３：８７６−８８０（１９７４） 。

血漿インスリンレベルは、アミリン処理、ペプチドコントロール及び血圧コント ロールグループにおいてそれぞれ１２８±２１．１８４±２２及び１５３±１５ ＰＭであった。

アミリン注射グループにおけるアイソトープで測定された内因性グルコース生成 は、注射後１及び２時間でそれぞれ対応コントロール値の２１４％及び２１９％ に増加し、４時間、（ペプチドコントロール及び前・注射レベルに比べ）有意に 上昇を維持した。アミリン注射は０．１２ｍＭ／分の血漿グルコース濃度で初速 度を増加した。見積られたグルコーススペース（９７ｍｌ）が（まなく分配され ると、これは１１，３μモル／分のグルコース消失を越えて過剰のグルコース出 現に変る。

同様に、アミリン注射グループは、血圧コントロールに比べ注射後５時間有意に 上昇を維持した。図４に示すように、コントロールグループはどの時点でも互い に異ならなかった。

酸素消費の割合は実験又はペプチドコントロールグループのいずれかで、実験の コースを越えて変化しなかった。それらはグループ間で差はなかった（７．８９ 土０．３８及び７．４４±０．３４＠ｌ／分それぞれ注射前対７．８２±０．５ ５及び７．３２土０．２６＠ｌ／分ビーク糖血応答の時で［１時間注射後コ）。

−夜絶食後呼吸商（ＲＱ）は、アミリン処理動物（０，７２０±０．０１４）及 びペプチドコントロール（０，７４７±０．０１８）において、−夜絶食後理論 最小に近かった。ＲＱにおいて、注射前値から続くアミリン注射に変化はなく又 、アミリン処理及びペプチドコントロールグループ間に差はなかった。

実施例２ 本実施例では絶食した麻酔ラットで血漿グルコース及び乳酸塩へのアミリン及び グルカゴンの効果を比較した。１６雄／％−ラン・スブラーグ・ドウライラ・ソ トを１２・１２時間明暗サイクルで２２．７±０．８℃で収容しく実験は明サイ クルの間に実施した）任意に餌と水を与えた（食餌ＬＭ−４８５、チクラド、マ デイソン　ライスコンシン）。動物をは実験の前に一晩絶食した。麻酔を５％ノ １０タンで誘導し、手術の間２％で、代謝記録の間０．８−１％で維持した。気 管切開及び右大腿動脈及び静脈のカニユーレ挿入を実施した。

大腿動脈線を圧力ドランスジューサー（スペクトラムドＰ２３ＸＬトランスジュ ーサー、モデル１３−４５１５−５８アンブリフアイア、ゴウルド、クリーブラ ンド、オノゾオ）に連結し、ヘパリン添加食塩水（２Ｕ／寓ｌ）を３．　０ｍＡ ’／ｈｒで潅流した。全ての注入される剤をこの注入液に加えた。大腿静脈線は 急性（ポーラス）注射に用いた。４−肢ＥＣＧをＥＣＧ／ビオタクアンプリファ イア・（モデル１３−４６１５−６５Ａ、ゴウルド、クリーヴランド、オノ１イ オ）によりモニターし、心拍数を導いた。

結腸温度は、サーミスタープローブ及び加熱作動テーブルを切換えることにより コア温度の閉鎖ループコントロールを提供するコントローラー（モデル７３Ａ１ ＹＳ１、イエロースプリング、オフ１イオ）を用いて測定した。心拍数、動脈圧 力、及び結腸温度についてのシグナルは定時にサンプリングし、コンピューター 化されたデータ獲得系（ＤＴ２８０１Ａ　Ａ／Ｄコンバーターズ、データトラン スレーション、マールボロ、マサチューセッツ、ＡＳＴブレミウム３８６コンピ ユーター、、ＡＳＴリサーチ、アーヴイン、カリホルニア、ラブテ・ツク、ツー ドブ・ツク・ソフトウェア、ラボラトライ・チクノロシーズ・コープ、ウイルミ ントン、マサチューセッツ）を用い２０Ｈｚで１２−ビット精度でた（わえた。

３つの処理グループがあった。

１、　アミリンポーラス（ｎ＝６、マス＝３１０±７９、年令＝１１０±２ｄ、 絶食２００±０．　７時）、２時間注入後、動物は２５．５ｎモルの新しく溶解 したラットアミリン（ロット＃ＺＧ４８５、バケム、トランス、カリホルニア） を含む１００μｌポーラスの食塩水を注射した。この研究に用いられるべきペプ チドの生物学的活性はヒラメ筋基本アッセー（ＥＣ，。＝６．７±１．５ｎＭ） を用いて最初に変化した。

２、グルカゴンポーラス（ｎ＝６、マス＝３３１±５ｇ、年令７６±１ｄ、絶食 １８．７±０．　４時間、ラット及びヒトグルカゴンの構造は同一である）。２ 時間注入及び基本試料の採取後、動物は１００μｌポーラスの希釈液中、２８． ７ｎモルグルカゴンを注射した（注射用グルカゴン、ＵＳＰ、イーライ・リリー ・アンド・カンパニイ、インディアナポリス、インディア九　ロット＃４ＭＣ５ １Ｄ。

１．６％３リセリン及び０．２％フェノールの１ｍｌ水性溶液中に構成されたグ ルカゴン１１９、ラクトース４９冨９を含む）。グルカゴン応答の６時間観察に 続き、２５．５ｎモルのラットアミリン（グループ１の通り）を注射し、応答を さらに２時間続けた。

３、コントロール（ｎ；３、マス＝３５４±１７ｇ、年令８２±ｌｄ、絶食、１ ９．５±０．７時間）コントロール動物は食塩水のみを注射した。

動脈試料はポーラス注射前、０５．０．２５及び０時間及び注射後０．５．１． １．５．２．３．４．５．６時間（グループ１）及び６．５．７．　７．５及び ８時間（グループ２）に抜いた。動脈試料はヘパリンを加えた毛細管に集め、血 漿を分離し、直ちに固定化酵素化後（グルコースオキシダーゼ、Ｌ−乳酸塩オキ シダーゼ、アナライザー、モデル２３００−８ＴＡＴＳＹＳＩ、イエロー・スプ リングス、オハイオ）を用いてグルコース及び乳酸塩を分析した。統計分析は５ ＹＳＴＡＴシステム（ジスタート、工ヴアンストン、イリノイ）に含まれるスチ ューデントのｔ検定処理手段によった。特に説明しない限り、全ての結果は平均 ±平均の標準誤差として報告した。

結果は図５Ａ及び５Ｂに描かれる。アミリン注射（静脈内、２５．５ｎモルのボ −ラス）は血漿グルコース及び乳酸塩で速やかに増加した。コントロールより血 漿グルコースの上昇は３０分有意であり、２時間におよび持続した。ピーク精面 応答は１．５０±０．２２時間に起こり、注射前レベルより上５．５９±０４６ ！ＩＭ増加を示した。血漿乳酸塩レベルは、注射の３０分以内にピークとなり、 ０．７５±０．６ｍＭの注射前レベルより１．２±０．１１ｍＭの１３６％増加 を伴った（増加対コントロール、Ｐ＜０．００１）。

グルカゴン注射（２８，７ｎモルの静脈内ポーラス）は静脈内注射後、１．５８ ±０２４時間に起きた１、９４±０．３４ｍＭのピーク精面応答となった（図５ Ａ参照）。グルカゴンに対する精面応答は、アミリン応答のいずれよりも低かっ た（アミリンのみの応答の３５％、Ｐ＜０．００１、グルカゴン後アミリン応答 の３５％、Ｐｒｏ、００３）。コントロール動物に比べて、グルカゴンにより血 漿乳酸塩においては無視しうる増加しかかなった（図５Ｂ参照）。

グルカゴン注射６時間で、アミリン（２５，５ｎｍｏｌの静脈内ポーラス）は、 注射後１．６７±０．１７時間ピークで、５．６０±０．８６ｍＭの精面応答及 び注射３０分以内ピークで、３．４４±０．４２ｍＭの活発な乳酸塩応答となっ た（図５Ａ及び５Ｂ参照）。グルカゴン後のアミリン誘発乳酸塩応答はアミリン のみのものより３．４倍大きかった（Ｐｒｏ、００１）。血糖応答はほとんど同 一であった（Ｐ＝０．９９）。

アミリン産生グルコースの減少についてのｔ１／２は、アミリンのみ及びグルカ ゴン後アミリンについてそれぞれ１７５及び５９分であった。乳酸塩についての 応答値は５５及び３４分であった。アミリンのみ対コントロール、アミリンのみ 対グルカゴン又はアミリンのみ対グルカゴン後アミリンを比べ、注入前後の類似 点で平均動脈圧に有意の差はなかった。

実施例３ 本実施例では摂食及び絶食（２０±１時間）ラットにおける血漿グルコース及び 乳酸塩についてグルカゴン投与（０時間）続くアミリン投与（６時間）の効果を 比較した。

雄バーラン・スブラーグ・ドウライラット２２７±０．　８℃で１２：１２時間 明：暗サイクルで収容しく実験は明サイクルの間に実施した）、任意に餌と水を 与えた（食餌ＬＭ−４８５、チクラド　マディソン、ウィスコンシン）。絶食動 物は実験前２０±１時間食物を奪った。摂食動物は手術まで食物の利用が認めら れた。麻酔を５％ハロタンで誘導し、手術の間２％で、代謝記録の間０．８−１ ％で保持した。気管切開及び右大腿動脈及伏在静脈のカニユーレ挿入を実施した 。

大腿動脈線を圧力ドランスジューサー（スペクトラムドＰ２３ＸＬトランスジュ ーサー、モデル１３−４５１５−５８アンブリフアイア、ゴウルド、クリーヴラ ンド、オハイオ）に連結し、ヘパリン添加食塩水（２Ｕ／翼りを３．Ｏｍｊ！／ ｈｒで潅流した。全ての長時間注入される剤はこの注入液に加えた。静脈線は急 性（ポーラス）注射に用いた。

４肢ＥＣＧをＥＣＧ／バイオタックアンブリファイア・（モデル１３−４６１５ −６５Ａ、ゴールド、クリーヴランド、オハイオ）を介してモニターし、心拍数 を導いた。

加熱作動テーブルを切換えることによりコア温度の閉鎖ループコントロールを提 供するコントローラー（モデル７３Ａ、ＹＳＩ、イエロースプリング、オノゾオ ）及びサーミスタプローブを用いて結腸温度を測定した。

心拍数、動脈圧及び結腸温度の信号は、定期的にサンプリングし、コンピュータ ーデータ獲得システム（Ｄ７２８０１Ａ　Ａ／Ｄコンバーターズ、データトラン スレーション、マールボロ、マサチューセッツ、ＡＳＴブレミウム３８６コンピ ユーター、ＡＳＴリサーチ、アーヴイン、カリホルニア、ラブチック、ソフトウ ェア、ラボラトライ・チクノロシイ・コーポレイション、ウィルミントン、マサ チューセッツ）を用い２０Ｈｚで１２−ビット精度で貯えた。

２処理グループがあった。

１、グルカゴンポーラス＋アミリンポーラス、絶食（ｎ＝６、体重＝３３１±５ ｇ、年令＝７６±１７６±１１８．７±０．４時間）。ラット及びヒトグルカゴ ンの構造は同じである。２時間注入及び基本試料の摂取後、動物は１００μ！ポ ーラスの希釈液中８６．４ｎモル／ｋｇグルカゴンを注射した（注射ＵＳＰ用グ ルカゴン、イーライ・リリー・アンド・カンパニイ、インディアナポリスインデ ィア九　ロット＃４ＭＣ５１Ｄ、１．６％グリセリン及び０．　２％フェノール の１ｍｌ水性溶液に溶解したグルカゴン１調９、乳酸塩４９１９を含有）。グル カゴン応答を６時間観察してから、ラットアミリン７６、　８ｎモル／ｋｇ（第 １グループ当りとして）を注射し応答はさらに４時間続いた。

２、グルカゴンポーラス＋アミリンポーラス、摂食（ｎ＝９、体重３２２±１１ ９、年令６３±３日、絶食０時間）。餌料の摂取を継続した以外は、これらの動 物はグループＡと同一の処理を行なった。

動脈試料はポーラス注射前、０５．０．２５及び０時間、並びに注射後０．５． １．１．５．２．３．４．５．６．６．５．７．７．５、訳９及び１０時間に採 取した。動脈試料をヘパリン処理したキャピラリーに収集し、分離した血漿は、 固定化酵素化学（グルコースオキシダーゼ、Ｌ−乳酸塩オキシダーゼ、アナライ ザー、モデル２３００−３ＴＡＴ、ＹＳ　Ｉ、イエロー・スプリングス、オハイ オ）を用いグルコース及び乳酸塩を直ちに分析した。パックした赤血球は赤血球 容積の損失を最小にするために再注入した。

２時間毎にインスリン測定用に血漿を採取した。インスリンをラジオイムノアツ セ−（ミタロメデインク・ヒト・インスリンＲＩＡキット、ＩＣＮバイオメディ カルス　ホージャム　ペンシルヴアニア）により、感度６ｐＭ、ラットインスリ ンに対する交叉反応性８９．５％で測定した。

２０時時間量ラットにグルカゴンを注射した結果、静脈内注射後１．５８±領２ ４時間に１．９４±０．３４ｍＭの血糖応答ピークを生じた（図６参照）。グル カゴンに対する血糖応答は、アミリンのみで（３５％のその応答、ｐ＜ｏ、ｏ。

１）又は同一動物へ続いて注射したアミリンで（３５％のグループ１アミリン応 答、Ｐ＜０．００３）観察されものより少なかった。コントロール動物と比較す ると、グルカゴンによる血漿乳酸塩の有意な増加はなかった（０．０９±０．０ ４１１ＭＰ＝０．０６）。グルカゴン注射グループにおいては、報告された変力 および変時性効果と合致する平均動脈圧（Ｐ＜０．０５）及び心拍数（Ｐ＜０． ０５）の有意に上昇が認められた。絶食ラットにグルカゴン注射後６時間で、ア ミリンは、結果として血漿グルコース５．６０±０．８６ｍＭを増加し、主要値 （ｐｒｅｖａｉｌｉｎｇｌｅｕｅｌ）　８３７±０．４８ｍＭを超え、注射後１ ．６７士１２７時間でピークに達し、アミリンのみで観察された型とほぼ同じで あった。３，４４士領　４２１ｇＭの活発な乳酸塩応答も認められ（アミリン単 独の場合の３．４倍大）、絶食グループでは産生の乳酸塩の低下は３４分であっ た。アミリンのみを注射したラットに観察されたのと類似の動脈圧への効果があ った。

絶食動物（グループ１）と比べて、摂食動物は静脈内グルカゴンに対し活発な血 糖応答を示した（図６参照）。血漿グルコースの増加は注射前の値を超え６．２ ９±０．９２ｍＭであった。しかしながら、アミリンにより生成されるより長く 続（過血糖に比較してグルカゴンに対する血糖応答はコントロールに比して０． 　６時間しか続かなかった。絶食動物（グループ１）と同様グルカゴン血漿乳酸 塩の有意な増加とは関連しなかった（３０分増加０．０７±０．０８ｍＭ、有意 でない）。

これらの同一摂食ラットにアミリン投与後６時間で、絶食ラットに生成されたも のの５６％血中乳酸塩応答を示す結果となった（乳酸塩増加１．９２±０．２２ ０Ｍ、グループ２対グループ１、Ｐ＜０．０５）。血漿グルコースの増加は絶食 ラットで観察されたものに比べて低下した（２時間のグルコース増加１．７６± ０、．３７ｍＭ、グループ２応答＝３１％グループ１応答、Ｐ＜０．　０１）。

摂食ラットの血漿乳酸塩は絶食ラットに比べてより長時間より高い値（ｔｌ／２ ＝１３８分）を維持した。グループ１及び２の血漿インスリン値は表１に比較す る。値は摂食動物では絶食動物より約５倍高かった。

時　（時間）　絶食（グループ１）　給餌（グループ２）Ｐ０（ブレーク゛ルカ コ゛ン）　４６．２±３．６　２７９．６土９４．８　＜０．０３　□２　４３ ．８±４．２　２３２．８±６５．４　＜０．０１４　５８、８±９．０　３１ ０．　Ｉｌｌ±４８．０　＜０．００１６（ブレゴミリン）　４５．０±２．４ 　１９７．４±１９．２　＜０．００１実施例４ この実施例ではヒラメ筋ベースのアッセー（レイトン、ビー及びクーパー、ジー 、ジェイ、ニス１、ネイチャー３３５：６３２−６３５（１９８８））において アミリンアゴニスト活性を測定した。

結果は表Ｈに記載する。

表■ アミリンアゴニストの活性 ペプチド　ヒラメ筋アッセーにおけるＥ　Ｃｏ。

シフｏ”−７［Ａｓｐ’、　Ｌｙｓ’コーヒトアミリン　２２．９６ｎＭ士１１ ８対数単位［Ｐｒｏ”］−ヒトアミリン　１．１ｎＭ±０．１０対数単位［Ｌｅ ｕ”コーヒトアミリン　９４．４８ｎＭ±０．１９対数単位本発明は具体的な態 様、用途及び方法に関して記載したが、本発明から逸脱することなく種々変更及 び修飾をなしうることが理解されよう。

＼＊ 注射後時間 注射後時間 大量注射後秒 大量注射後時間 注射後時間 血漿グ／Ｌ−コー　ス、　ｍｇ／ｄＬ土ＳＥＸ血漿乳酸、ｍＭ十ＳＥＸ 要　約　書 哺乳動物におけるグルコース生成をコントロールするための、アミリン又はアミ リンアゴニスト及びグルカゴン化合物、特にペプチド化合物を有する組成物を提 供する。組成物は急性低血糖条件、例えばインスリン適用量及び経口低血糖剤の 過使用によりもたらされるものの処置に有用である。

国際調査報告

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. １．治療用投与に適した形に混合されたグルカゴン及びアミリンを含む組成物。
2. ２．治療用投与に適した形に混合されたグルカゴン化合物及びアミリンアゴニス トを含む組成物。
3. ３．該アミリンアゴニスト化合物がラットアミリンである請求項２の組成物。
4. ４．該アミリンアゴニストがカルシトニン遺伝子関連ペプチドである請求項２の 組成物。
5. ５．凍結乾燥された用量単位形にある請求項１、２又は３のいずれかの組成物。
6. ６．哺乳動物におけるグルコース生成の調節方法であって、請求項１、２、３又 は４のいずれかの組成物の治療上有効な量の投与を含む。
7. ７．哺乳動物における急性低血糖の処置方法であって請求項１、２、３又は４の いずれかの組成物の治療上有効な量の投与を含む。
8. ８．該投与が非経口注射による請求項６の方法。
9. ９．該投与が非経口注射による請求項７の方法。
10. １０．該投与が静脈内注入による請求項６の方法。
11. １１．該投与が静脈内注入による請求項７の方法。
12. １２．哺乳動物における低血糖条件の調節方法であって、治療上有効量のグルカ ゴン化合物及びアミリンアゴニストを共に投与することを含む。
13. １３．該アミリンアゴニストがアミリンである請求項１２の方法。
14. １４．該アミリンアゴニストがカルシトニン遺伝子関連ペプチドである請求項１ ２の方法。
15. １５．哺乳動物における急性低血糖の処置方法であって、治療上有効量のグルカ ゴン化合物及びアミリンアゴニストを共に投与することを含む。
16. １６．該アミリンアゴニストがアミリンである請求項１５の方法。
17. １７．該アミリンアゴニストがカルシトニン遺伝子関連ペプチドである請求項１ ５の方法。