JPH06509361A

JPH06509361A - インシュリン様増殖因子の用法

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Publication number: JPH06509361A
Application number: JP5520132A
Authority: JP
Inventors: ダンガー　ダビッド　ビー; サベジ　マーチン　オー; ソンクセン　ピーター　エッチ
Original assignee: カイロン　コーポレーション
Priority date: 1992-05-19
Filing date: 1993-05-14
Publication date: 1994-10-20
Also published as: DE69331045D1; NO940180D0; ATE207758T1; US5466670A; NZ252359A; NO940180L; EP0613376A1; EP0613376B1; AU669894B2; WO1993023071A1; SE9201573D0; AU4098893A; DE69331045T2; CA2112358A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称インシュリン様増殖因子の用法技術分野本発明は１型糖尿病（ＩＤＤＭ）の治療用薬剤製造用のインシュリン様増殖因子（ＩＧＦ−Ｉ）の用法に関する。詳述すれば、本薬剤は健康人、特に幼児、青年期や若者たちのＩＧＦ−Ｉ血清レベルの特徴達成に必要な皮下投与量から成る用法に関する。このような治療の効力に対する証拠はインシュリン依存性１型糖尿病を有する青年期に示されている。

背景技術ヒ１−ＩＧＦ−Ｉ　（ｈＩＧＦ−Ｉ）は血漿その他の体液に存在するペプチドである。それは人の血漿から精製され、その完全なアミノ酸配列は周知である。主要配列は３つのジスルフィド結合を含む７０アミノ酸から成る。

そのうえ、他の種の血漿からの精製ＩＧＦ−Ｉ　：　ＳはｈＩＧＦ−Ｉと広範囲の配列同族性を示す。

ｈＩＧＦ−Ｉは広範囲の種類の細胞の成長を刺激できる。それは全身的および局部的の両効果を有し、異なる結合蛋白に主として関連する循環に存在し、異なる結合蛋白のうちの６つを配列させる（ＩＧＦＢＰＩ−６）。

前記結合蛋白は生物学的機能とＩＧＦ−Ｉの有用性を調整する。前記結合蛋白に対する親和性変化に表面上関連して変化する生物的活動性を有するＩＧＦ−Ｉが生産された。

ＩＧＦ−Ｉは数多くの異種類の細胞の外面に曝された前記ＩＧＦ−Ｉ型の受容体を主として通して作用する。

しかし、活動の相対的特異性は細胞レベルで、たとえば係合蛋白の変化する作用のため変わることがある。前記ＩＧＦ−Ｉとインシュリン受容体の構造は極めて同族性があるが、ＩＧＦ−Ｉとインシュリンの結合は限度のある交叉反応以外は示さない。

精製血漿ｈＩＧＦ−Ｉが欠乏しているため、市販できる量の生産方法のシステムの開発が強くめられた。今日、ｈＩＧＦ−Ｉのこのような大規模生産が組換えＤＮＡ技術を用いることで容易に達成できる。

ＩＧＦ−Ｉは成長ホルモン（ＧＨ）の体因性効果の中和に主として関係する。組換えＤＮＡ誘導ｈＩＧＦ−Ｉ合成の研究の結果として、それが骨格の成長と骨格筋蛋白合成を促進することが実証された。そのうえ、ｈＩＧＦ−Ｉも異化状態の治療もしくは予防に有効である（国際特許出願公開９２１０３１５４号公報）。

国際特許出願公開箱９１／１２０１８号公報（パラート氏等）には、ＩＧＦ−Ｉまたはそのペプチド類似体を胃腸病の治療用に、あるいは外科手術後の短くなった腸の治療のための使用が開示されている。さらに、ＩＧＦ−Ｉが切断抹消神経損傷組織の再生を促進（ヨーロッパ特許第３０８゜３８６号明細書）し、またＩＧＦ−Ｉが筋細胞中のアクチン培養合成（フロリニ　ジュニア著「筋肉と神経」第１０巻、１９８７年、第５７７頁乃至第５９８頁）と、新生児ラットの心臓細胞の収縮性（ベラター　ニー著「心臓学の基礎研究」第３８巻、１９８８年、第６４７頁乃至第６５４頁）を促進することが試験管内で実証された。

ｈＩＧＦ−Ｉの大量投与は糖尿病にかかっていない動物と人の血中グルコースを大いに低下させる（ザブフジエイ著「臨床研究ジャーナル」６月号、第７７（６）巻、１９８６年、第１７６８頁乃至第１７７５頁及び、ダラー　エッチ　ビー著「新医療技術ジャーナル」第３１７巻、１９８７年、第１３７頁乃至第１４０頁）。これらの研究ではｈＩＧＦ−Ｉの低血糖効果がインシュリンの約１．５乃至７％であった。膵臓摘出した犬での最近の研究では血中グルコース低下用薬剤としてのｈＩＧＦ−１はインシュリンの８乃至１１％もの強さがあった（ギアツカ　エイ著「糖尿病」第３９巻、１９９０年、第３４０頁乃至第３４７頁）ことを実証した。しかし、これらの研究はさらに、ＩＧＦ−Ｉの代謝効果はインシュリンのそれらとは全く性質の異なるものであり得ることを立証した。ＩＧＦ−Ｉのグルコーゼ低下効果はグルコースの取り込みを増やすことで十分にもたらされる一方、グルコースの生成速度はそのまま変化しなかった。

この所見は成人の肝臓中のＩＧＦ−Ｉ受容体の相対的な不足で説明がつく（カロ　ジェイ　エフ著「臨床研究ジャーナル」第８１巻、１９８８年、第９７６頁乃至９８１頁）。ＩＧＦ−Ｉの効果が筋肉を通して十分にもたらされる。受容体の分布における同様の特異性は体外でのインシュリン（ボリンダー氏等著「臨床内分連字新陳代謝」第６５巻、１９８７年、第７３２頁乃至第７３７頁）および体内でのインシュリン（１９８６年のザック　ジェイ氏等、１９８７年のグラ−エッチ　ビー氏等、１９９０年のギアツカ　エイ氏等）と比較してＩＧＦ−Ｉの抗脂肪分解効果がそれほど強くないことで説明がつく。

ＩＧＦ−Ｉは蛋白質分解を弱め、また糖尿病にかかっていないネズミのアミノ酸レベルを低下させる（ヤコブアール氏等著の［臨床研究ジャーナル」第８３巻、１９８９年、第１７１７頁乃至第１７２３頁）。更に、１９９０年のギアツカ　エイ氏等の研究では、等しい力のインシュリン投与（グルコーゼ低下に対し）で起こらなかった泌乳増が観察された。

ＩＧＦ−Ｉは、５３ＫＧＨ−依存性酸安定ＩＧＦ結合成分と、酸不安定サブユニットとから成る大型１５０に複合体（ＩＧＦＢＰ３）として主として循環する。

比較的小型の２８乃至３５にの結合蛋白（ＩＧＦＢＰｌ）は成長ホルモン依存性でなく、インシュリンに逆に関連する著しい概日変異を示す（ブリスマー　ケー氏等著の「内分泌研究ジャーナルＪ第１１巻、１９８８年、第５９９頁乃至第６０２頁、コツチリル　エイ　エム氏等著の「臨床内分連字新陳代謝ジャーナル」第６７８巻、１９８８年、第８８２頁乃至第８８７頁、ホリー　ジェイエム　ビー氏等著の「臨床内分連字」第２９巻、１９８８年、第６６７頁乃至第６７５頁）。測定された循環ＩＧＦ−ＩレベルはＩＧＦＢＰ３の使用可能容量により主として測定されると考えられているのに対し、ＩＧＦＢＰＩは他の機能、たとえばＩＧＦ−Ｉの循環プールもしくは組織内の生物学的活動の調節に主として掛かり合っているようである（ホリー　ジェイ　エム　ビー氏等著の「内分泌ジャーナル」第１２１巻、１９８９年、第３８３頁乃至第３８７位頁および「糖尿病医学」第７巻、１９９０年、第６１８頁乃至第６２３頁）。

更に、インシュリンの欠乏はＩＧＦ−Ｉの生物学的活動を抑制するものと考えられるＩＧＦＢＰＩの高レベルをもたらす（タイロー　ニー　エム氏等著の「臨床内分連字」第３２巻、１９９０年、第２２９頁乃至第２３９頁）。

健康被実験者の血漿ＩＧＦ−Ｉの年齢に関係する変化を調査した（スミス　シー　ビー氏等著の「臨床内分連字新陳代謝」第６８巻第５号、１９８９年、第９３２頁乃至第９３７頁）。基礎血漿ＩＧＦ−Ｉ濃度は思春期中著しく上昇し、人生の３０歳台までには思春期前のレベルに下降することがわかった。濃度は思春期前後で約ＩＵ／ｍｌ、また思春期中で約２０／ｍｌであった。

糖尿病において異なるＩＧＦＢＰの分布が内因的もしくは外因的に投与されたＩＧＦ−Ｉの生物学的利用性もしくは対生物活性にどのように影響するかは今まで知られていなかった。

一夜のあいだに上昇したＧＨ血漿濃度を糖尿病の若者と標準的な若者との間で比較しくエツジ　ジェイ　ニー氏等著の「臨床内分連字新陳代謝ジャーナル」第７１巻第５号、第１３５６頁乃至第１３６２頁）、ＧＨ基線とピークレベルは糖尿病患者の方が標準対照被験者よりも高いことがわかった。

ヨーロッパ特許第３３１，６３０号明細書（チバ　ガイギー社）ではｈＩＧＦ− Ｉの投与にょるｌ型糖尿病における過インシュリン血症の２次的影響の治療と予防の方法を開示している。該ヨーロッパ特許において、用いられたｈＩＧＦ−Ｉ（７）投与は１日当り約５００　ｕ　ｇ／ｋｇであった。ｈＩＧＦ−Ｉを２人の健康被験者（非糖尿病患者）に６日間、１時間当り２０μｓ／ｋｇの割合で連続皮下注入により投与した。１日当りの投与量はｈＩＧＦ−Ｉ（７）内因性生成物（１日当り５０μｇ／ｋｇ）（７）１０倍に当る。このような多量のＨＩＧＦ− Ｉの投与によりインシュリン様効果が期待される。

前記ヨーロッパ特許の発明者は前記の結果を、これらの多量のＩＧＦ−Ｉ投与がインシュリンの城主と、その半減期の遷延をもたらしたものと解釈した。彼らはｈＩＧＦ−Ｉが生物体をインシュリンに対しさらに敏感にさインシュリンを少なくすることが必要で、インシュリンの大量投与による過インシュリン血症が防げるか、あるいは減少させ得る。しかし、投与経路や、特に実施例に用いられた多量投与の臨床上の適応性は極めて限られている。

ヨーロッパ特許第３３１，６３０号明細書の所見と対照的に、循環ＩＧＦ−Ｉレベルの生理的回復はフィードバック機構を介してＧＨレベルの減少を生じさせる。このＧＨとＩＧＦ−Ｉの標準化はインシュリンに対する感性を高め、また夜明は現象（朝方の血中グルコースレベルの急速な上昇が１型糖尿病に見られる）の減少に結びつき、長時間の良好な制御ができる。

ＩＧＦ−Ｉを用いて生理的ＩＧＦ−Ｉのレベルを回復させ、またそれにより成長ホルモン／ＩＧＦ−Ｉ軸を換えさせる治療の考えられる臨床的数値については初期に考慮されたことがなかった。

糖尿病におけるＧＨ／ＩＧＦ−Ｉ軸　。

インシュリン依存性糖尿病はＧＨ／ＩＧＦ−Ｉ軸に完全な反転をもたらす。十分に制御されていない１型糖尿病では、ＧＨのレベルが必ず上昇する。上昇し九ＧＨレベルには標準被験者のレベルと比べて脈拍振幅が大きく、またＧＨの基線濃度が高くなることを特徴とする。ＧＨのシグナルモードはそれが糖尿病被験者のインシュリン耐性の完全な変化に結びつく基線の増大よりもむしろ脈拍の振幅にあることを示す（パル氏等による「糖尿病学」と題する新聞論評）。高ＧＨレベルはインシュリン耐性に結びつき、糖尿病の代謝異常をさらに悪化させる。ＧＨ過剰はさらに夜明は現象の原因に関係しており、また増殖性網膜症を含む最小血管障害の誘発に拍車をかけることがある。最後に、ＧＨの上昇が原因のＢヒドロキシブタレート（ＢＯＨ）の過度の増加が特に思春期中に観察され、インシュリンが夜間に欠乏していく効果により倍加される。これらは糖尿病になっている若者における糖尿病ケト−ジスで起こる急激な代償不全の危険となる。

ＧＨレベルの上昇にもかかわらず、ＩＧＦ−Ｉのレベルは糖尿病では低くなる傾向があり、これはインシュリンの低レベルに起因するＧＨ受容体機能の低下に関連する（ホリー　ジェイ　エム　ビー氏等著「臨床内分易学」第２９巻、１９８８年、第６６７頁乃至第６７５頁）。

上昇ＧＨレベルの共存する時に比較的低いＩＧＦ−Ｉレベルは糖尿病に罹っている幼児の遅い成長と、成人身長になれない小人症との問題に関連している（サラルディー　ニス氏等著「古代幼児学科」第６２巻、１９８７年、第５７頁乃至第６２頁）。

上昇ＧＨレベルの基礎によるメカニズムは論議の主題となってきた。糖尿病患者個人における高血糖は健康人では抑制されるＧＨ分泌の抑制がなく、これが変化した視床下部機能を反映するものと提案されてきた。この改められた視床下部機能はソマトスタチンのレベルの低下とソマトスタチンの効果に対する耐性を特徴とする。血漿ＧＨをソマトスタチンの類似体とピレンゼピンによる抑制は代謝制御の報告された改善に繋がった。しかし、この方法は必然的に成長不全に繋がり、成長゛が急速な幼年期ならびに未成年期には不適当であることがわかった。

過度のＧＨ放出が低ＩＧＦ−Ｉレベルに関係することがあると論議されてきた。

しかし、シェーバ−氏等（１９９０年発行の「アクタ内分易学」第１２２号、付録第３２頁乃至第３９頁）はこのような患者のＧＨ放出ホルモンに対する血清ＩＧＦ−ＩレベルとＧＨ反応の間になんらの否定的相関関係も観察できなかったので、この仮説に対して反対理由を述べた。

この論議に照らして、ＩＧＦ−Ｉの予備研究が糖尿病をもつ若者におけるＩＧＦ −Ｉの１回の皮下注射による生理学的交替投与がＧＨレベルを低下させるだけでなく、前記１回の注射の場合のインシュリンの必要量の統計学的に著しい減少をもたらした。１回の注射がもたらす比較的長期に維持する効果は意外で、特に糖尿病をもつ幼児、未成年ならびに若成人の治療に１回の皮下注射による投与の可能性を開く。

図面の簡単な説明第１図は１８：００時から０８：００時までの平均血中グルコースと平均ＩＧＦ −Ｉレベルを示すグラフ図である。

第２図は１８：００時から１６：００時までの平均成長ホルモンレベルを示すグラフ図である。

第３図は２０：００時から０８：００時までのグループＡとグループＢの、また個人毎の平均成長ホルモンレベルを示すグラフ図である。

第４図は０２：００時から０８：００時までの平均血清インシュリンレベルを示すグラフ図である。

第５図は０２：００時から０８：００時までの血中グルコースの安定している間の平均インシュリン必要量百分比を示すグラフ図である。

・第６図は実施例２のおのおのの患者のぞれぞれ１週間前および４週間後におけるＩＧＦ−Ｉレベルを示すグラフ図である。

本発明の開示本発明による研究は生理学的投与量を投与されたＩＧＦ−ＩがＧＨレベルとＧＨ分泌に著しいフィードバック効果を及ぼすことを示す糖尿病の最初の研究である。ＩＧＦ−Ｉの生理的交替薬はインシュリンの必要量の著しい低下に繋がったが、それは今までの研究で報告された遊離ＩＧＦ−Ｉのいかなる直接効果よりもむしろＧＨレベルの低下によりもたらされるものであった。

本発明は１型糖尿病（ＩＤＤＭ、インシュリン依存性糖尿病）の治療用薬剤を製造するためのＩＧＦ−Ｉの用法に関するものであり、前記薬剤は健康な個人のＩＧＦ−■血清レベル特性達成の皮下注射投与量すなわち、血清中のＩＧＦ−Ｉの生理学的代替達成必要量以下から成る。この治療は特に１型糖尿病をもつ幼児、未成年もいくは若成人の治療に貴重で、その思春期成長の向上に導くものである。本薬剤はさらに過血糖症の改善と安定、虚弱質の改善、急性代償不全による危険の低減、および１型糖尿病における糖尿病ケト−ジスの発病率の低下にも有用である。

本発明はさらに１型糖尿病をもつ幼児、未成年や若成人のインシュリン必要量を減少させるための健康人のＩＧＦ−Ｉ血清レベル特性達成に必要な皮下注射投与量から成る薬剤の製造用のＩＧＦ−Ｉの用法に関するものである。本薬剤はＩＧＦ−Ｉだけで成ることも、あるいはインシュリン製剤との組合せで成っても差支えない。

本薬剤はなるべくなら１日に１回もしくは２回、１週間に２回か３回、１月に１乃至最高７回投与できる単一注射に適応させることである。本薬剤はさらにデポ製剤もしくはスローリリーズ製剤として投与してもよく、それによりそのように適応させる必要がある。本発明はさらに、１型糖尿病の治療法にも関連し、その薬剤は健康人のＩＧＦ−Ｉ血清レベル特性を達成する皮下注射投与量から成る。

生理学的血清ＩＧＦ−Ｉレベルは健康人にとっては約ＩＵ／ｍｌで、思春期中の約２倍の高レベルである。ＩＵ／ｍｌのＩＧＦ−Ｉは約２００ｎｇ／ｍｌのＩＧＦ−Ｉに相当する。

本発明は、標準的ＩＧＦ−Ｉ生物学的活性の回復がＧ自かつ進歩的である。本発明の意味はＩＧＦ−Ｉ治療が過血糖症制御の改善に時間がかかることと、糖尿病合併症の危険の低減に槃がる点で意味深い。

この発見は今までの研究が標準的被験者ではＩＧＦ−■の薬理的投与量だけがなんらかのＧＨの突然の停止に繋がり得ることを示した点で意外であった。ぞのうえ、ＩＧＦ−Ｉはそれが直接のインシュリン様効果の達成に必要な薬理的投与量に用いられる場合、糖尿病には価値のあるものとなる。１型糖尿病における生理学的交替治療の意味深い効果はかつて提案されたことはなかった。

臨床的改善は以下を含んでいる。

１）過血糖制御の改善とその因果関係（たとえば、血清脂質の標準化と後期骨性合併症の危険の低減）と、２）過血糖制御の安定化たとえば、虚弱質の改善（高、低側血糖症の予測不能かつ発現不能の症状がより少なくなること）ならびに急性代償不全の危険低下と、３）糖尿病ケト−ジスの頻度の減少と、４）思春期成長のさらなる標準化検定法１５分毎に測定した全血糖値をグルコース酸化法（英国、ハンツ所在のクラントン　サイエンティフィックリミテッド社製のＹＳＴ分析器）により決定する。

１５分毎に採取したＧＨ検定用の試料を分布が完結するまで室温で保ち、その後、それを回転、分離させて、血漿を検定まで一２０℃の温度で凍結する。血漿ＧＨ濃度を国際参照標準８０１５０５を用いて免疫放射検定（ＩＲＭＡ）により測定した。おのおのの個人分布からの全試料を同一のバッチで分析した。３．５．１５．２．７７．４’ｍＵ／ＬのＧＨ濃度での変量の相互検定係数はそれぞれ９．４．７．７と１０．５％であり、また２゜９．１４．３と６９．４ｍＵ／ＬのＧＨ濃度での変数の硝酸カルシウム検定係数はそれぞれ８．　Ｏ１２，０と３゜４％であった。

１時間ごとに測定した無血漿インシュリンに対し、１゜０ｍｌの全血液を０．６ｍｌの水冷２５％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ６０００）に直ちに添加し、その後、３００ｐｐｍの速度で２０分間回転させてから分離した（コリンズ　エイ　シー　ジー及びビカツプ　ジエイシー氏著の「糖尿病治療」第２巻、１９８５年、第４５６頁乃至第４６０頁）。前記血漿を一２０℃の温度で貯蔵し、モルガンおよびラザロー氏（１９６３年発行の「糖尿病」第１２巻、第１１５頁乃至第１２６頁）のものを改良した２重抗体放射免疫検定法（ギルドハイ　アンチセラ　リミテッド）により検定した。１２．２と４７．２ｍＵ／Ｌでの変数の相互検定の係数はそれぞれ５゜５と８．６％であった。

脈拍検出プログラムのパルサー（メリアム　ジー　アール及びワヒター　ケー　ダブリュー氏著の「生理学ジャーナル」第２４３巻、１９８２年、第Ｅ３１０頁乃至第８３１８頁）を用いて２２：００時から０８：００時の間の１２時間ＧＨ分布を分析した。それは検定標準偏差を目盛係数として用い平滑にして特定の方向を向かない基線からの偏差としてホルモン性脈拍を検出する。

血糖とインシュリン注入データは標準的に分布されていた。対数変数は無血漿インシュリンデータを標準化したので、従って母数による統計技術を用いた。変数の分布（２重ＡＮＯＶＡ）を用いて時間経過による変化を考察した。別設の特記がない限りデータを「平均上平均値の標準的誤差（ＳＥ）Ｊとして示した。

グリコジル化ヘモグロビン（ＨｂＡＩＣ）をダイアマット専用ＨＰＬＣ装置を使用して測定した。

血漿ＩＧＦ−Ｉを酸性エタール抽出後、標準ＲＩＡにより測定した。ｌ検定の最大感度はｌＯμｇ／ｌである。

検定間および検定的変数は検体濃度が２．３．１，２および０．２μｇ　／　ｍ　ｌでそれぞれ１０％と８％以下であった。

実施例１１型インシユリン依存性糖尿病をもつ年齢が１４乃至１８歳の後期思春期段階４もしくは５（タンナー）の９人の若者（５人の女性および４人の男性）が体重１ｋｇ当り４０μｇの投与量で皮下注射投与したＩＧＦ−Ｉの交叉二重盲検偽薬対照試験に参加した。皮下注射され、体重１ｋｇ当り４ｏＩＬｇで計算されたＩＧＦ−Ｉもしくアリング　グルコース　クランプにより１晩中５ｍモル／Ｌに抑えた。グループＡ検査計画案に従う治療では被験者は偽薬をグループＢではＩＧＦ −Ｉを投与される。

研究の継続時間は２時間であった。

被験者は、ボディマス指標（ＢＭＩ）が２　ｅ　ｋ　ｇ／ｒｒｉ以下の標準身長と体重（下が５０．３で、上が７３．９ｋｇ、中央体重値が６２．５ｋｇ）で、１型糖尿病をもつものとして先々３年問診断されてきた。Ｃペプチドレベルは０．０２５乃至０．２７５ｎモル／Ｌ以下（中央値が０．０４７ｎモル／Ｌ）であった。被験者は肝、腎および甲状腺機能とも正常の良好な健康状態であって、１日２乃至４回のいずれかで投与された短時間および中等度作用形インシュリンの組合せをすべて用いた（１日当り、下が０．６、上が１，５Ｕ／ｋｇの範囲、中央投与量値が１日当り１．ＯＵ／ｋｇであった）。喘息治療のため１日当り３回２００μｇのジプロピオン酸ベクロメタゾンを吸入した１人を除き全被験者は定期的薬物療法は受けてこなかった。本研究時におけるグルコシル化ヘモグロビン（全ＨｂＡ１）の中央値は１３．５％で、下が７．１であり、上が１７．０％であった。研究に加わった被験者の詳細を表１に要約する。

表１患者詳細番　号　１２３４５６７８９年　齢　１４　１４　１７　１４　１８　１８　１７　１５　１５性　別男女男女女女男女男思春期段階　５／４　４／４　５１５　５１５　５／４　５１５　５１５　４／４　５１５（Ｇ／Ｐ、）１．）体重（ｋ　ｇ）　６１．０５０，３６４．０６６．９５１．４７３．９７２．０５４．９６８．２インシユリン投与量　１．０　１．５　０．８　１．０　１．３　０．６　１．５　０．９　１．２（ｍＵ／ｋｇ）ＨｂＡｌ（％）　１７．０１５．６７．１１５．５１４．３１０，５１３，３１３．７８．４１人の被験者（３）を下記でわかるように研究中、無症候性血糖のため大部分の分析から除外した。残り８患者のうち４人を無作為で選び最初の研究期間中ＩＧＦ−Ｉを投与した。

結果血中グルコース被験者のだれもが研究中夜通しでも低血糖症状を経験しなかった。しかし、３被験者の最低血中グルコースが偽薬とＩＧＦ−Ｉ治療にかけて期間Ａと期間Ｂでそれぞれ３．３ｍモル／Ｌと０．５ｍモル／Ｌであった。両車例において、関係のある被験者は３であった。この研究のために、低血糖を３．５ｍモル／Ｌ以下の数値と規定した。比較的高い限界を採用することで、この研究の成果に影響する可能性のある低血糖に対する逆調節反応が誘発されないことを保証したと考える。被験者３に対する２つの研究期間からのデータはそれ故に、成長ホルモンの生成とインシュリン必要量の全分析から除外されたわけである。前記２つの研究期間は１被験者に対しては６週間離したこと以外、すべて１乃至２週間の間隔をおいた。

安定血中グルコースには両グループの被験者とも０２：００時までには到達し、０８：００時に到るまでずっと安定したままであった。第１図に示したように研究グループＡ（対照標準）とＢ　（ＩＧＦ−Ｉ）で０２：００時乃至０８　：　００時の平均血中グルコースはそれぞれ５゜６２±０．１３と５．５９±０．０７ｍモル／Ｌであった。グループ間とグループ内の変数の２法分析では血中グルコース値になんら著しい差異を示さなかった。

ＩＧＦ−ＩＩＧＦ−Ｉの平均血液レベルは組換えＩＧＦ−Ｉの注射後５．５時間で２２３．２ｎｇ／ｍｌから４１３，１ｎ　ｇ　／　ｍ　ｌのピークに達した。注射後３０分のレベルは偽薬投与後より著しく高かった（２５１．８±１７．６対２０２．ｌ±１８．７ｎｇ／ｍｌで、ｐ＝２００）。

その後、研究期間中、夜通し上昇したままであった（１ＧＦ−Ｉ研究夜間の全平均値：３５９，４±２５．９対偽薬：２０６，１±２２．３ｎｇ／ｍｌ　；ｐ＜０，００１）。第１図参照。

成長ホルモン成長ホルモンの生成を研究期間（１８：００から１６＝００まで）を通し、また２０：００時乃至０８：００時の夜通し分析した。１５分間の試料採取で得た平均値を用いた。ＩＧＦ−Ｉを投与した期間中に、偽薬を投与した期間と比べると成長ホルモンに全体として著しい減少が見られた（１６．９２±３．２１対２７．７±４．８８ｍＵ／Ｌ；ｐ＝“ｔ”試験との組合せで０．０１１）。

２２時間中の平均値を第２図に示す。著しい低下が２０：０時からｏｓ　：　ｏｏ時までの夜通しに見られた（１９゜３８±４．０３対３３．６５±５．７０ｍＵ／Ｌ；ｐ＝０．００９：　“ｔ”試験との組合せ）。第３図参照。前パルサーの脈拍プログラムはＩＧＦ−Ｉ投与後の成長ホルモン平均ピーク振幅（４１，１ ±７．１対７５．２±１２．２ｍＵ／Ｌ　；　ｐ＝ｏ、０１）と平均計算基線成長ホルモン濃度（１，４±０．５対８．２±２．５ｍＵ／Ｌ；ｐ＝ｏ、０２）とに著しい減少をそれぞれ示した。

インシュリン前記２２時間の研究期間中のインシュリン必要量を安定血中グルコースの確立に導く初期段階と、クランプ段階それ自体と、最後に朝食と１６：００時の研究終了との間の期間の３つに分割できる。ＩＧＦ−Ｉもしくは偽薬投与の時間と、０２　：　００時の安定インシュリン　ベアリング　グルコース　クランプの確立の間に注入されたインシュリンはグループＡ　（ＩＧＦ−４）とグループＢ（対照標準）の間では著しく異なってはいなかった（０，５７±０．０８対０．５１ ±０．０６ｍＵ／ｋｇ／分；ｐ＝Ｑ、４３６）。

安定血中グルコースは上述のように０２：００時まで確立された。０２　：　００時より０８　：　００時に至る期間中のインシュリン注入の分析はＩＧＦ−Ｉを投与されるグループにおける真正血糖値を維持するに必要なインシュリン量に前記対照標準グループと比較する時、著しい減少を示した（０．２５±０．１２対０．３１±０．０７ｍＵ／ｋｇ／分；ｐ＝“ｔ”試験との組合せで０．　０３）。インシュリン注入データ（体重１ｋｇ当りＵ）も０２　：　００時から０８　：　００時までの間の百分比変化の評価により分析した。おのおの個々の被験者のグループＡ治療に必要な平均インシュリンの量を除数として用いることで、グループＡとＢとの間のクランプ中の全差を個々の時点における平均百分比として示した。第４図参照。

グループＡのインシュリン必要量を除数として用いたので、そのグループの百分比値の総計が１００になる。

おのおの個々の被験者のグループＡとＢの平均百分比値の組合せ“ｔ”試験でＩＧＦ−Ｉ投与後のインシュリン必要量に著しい現象のあることを確認できる（８１．４％対１００％；ｐ＝Ｑ、００２）。

平均無血漿レベルもＩＧＦ−Ｉ投与後のこの期間中に減少していた（６７．８８ ±１５．９６対３１．９０±２．７４ｍＵ／Ｌ：　ｐ＝０．００１）、第５図参照。

実施例２ＩＧＦ−ＩレベルがＩＧＦ−Ｉを用いる２８日間の治療期間をずっと持続されたかどうか、換言すればＩＧＦ−Ｉの内因性生成を抑制したことを評価するため追従調査が行われた。

階の生殖器と恥毛に対しそれぞれ３乃至５と２乃至５に当り、１型インシユリン依存性糖尿病をもつ４人の男性患者を４週間の期間中にｒｈＩＧＦ−Ｉを用いて治療した。

研究中の通院日程は次の通りであった。

通院前４週間から１週間までの間：選抜通院。

通院開始の週：ＩＧＦ−Ｉの初回注射を１８：００に投与、その後夜通し分布。

通院開始１週目から４週間：治療期間で、最終ＩＧＦ−１注射を４週目通院の１８：００に投与、その後、夜通し分布。

通院開始８週日：継続管理通院。

体重１ｋｇ当り４０μｇのＩＧＦ−Ｉの投与量を１日に１回１８：００時に腿に皮下注射により２８日間連接投与した。本研究に参加したすべての被実験者は少なくとも５年間（５乃至ｌＯ平年間範囲で）の糖尿病が継続した。被験者は標準肝と腎機能をもつ正常な健康体であった。全患者は治療の開始時には甲状腺機能が正常で、１日４回投与された短時間および中等度作用形インシュリンの組合せを用いていた。被験者はインシュリン以外には定期的投薬を受けていなかった。

前記選抜通院・（通院前１週間）におけるグルコシル化ヘモグロビンＡ（ＨｂＡ１／ＨｂＡ１ｃ）の中央値は１１．２％／９．７％で、範囲としては９．　９／８．　５乃至１４．Ｏ／１２．３％であった。研究に加わった被験者の詳細は表２に要約されている。

患者で研究の開始時に腎障害もしくは網膜症のあるものはだれもいなかった。

表２患者の詳細番　号　１　２　３　４年　齢　１５　１５　１９　１６性　別　男　男　男　男思春期段階　５１５　３／２　５１５　５１５（Ｇ／Ｐ、Ｈ，）体重（ｋｇ）　７８．０　３８．　５　８３．　８　２８．　７結果代謝制御代謝制御の標識であるＨｂＡｌｃ　（１％）として測定した。健康の標準範囲はＨｂＡｌｃのほぼ５乃至６％である。前記４人の患者の個々のデータを第６図に示す。

ＨｂＡｌｃ　（１％）として測定したグリコジル化ヘモグロビンのレベルは前記４週間の治療期間中減少する傾向にあり、前記ＩＧＦ−Ｉ治療後に比較的高いレベルに戻った（第６図）。１ケ月の観察期間は余りに短く、代謝制御の変化（ＨｂＡｌｃの測定で評価）を確認できないが、ＩＧＦ−Ｉ治療の中止で起こる劣化は代謝制御がＩＧＦ−Ｉにより影響され得ることを意味している。観察された変化はＩＧＦ−Ｉ治療が血糖ならびに代謝制御を向上させる点で本発明にとってさらなる支持を導く。

ＩＧＦ−Ｉ表３は夜通し分布の平均値の個々のデータを示す。

表３　ＩＧＦ＝１　（Ｕ／ｍｌ）患者番号　週 −１０曽　４曽曽１　１．３４　２．０４　２，４８２　０．９０　１，５１　２０２３　１．１３　１．８２　２．４８４　１．３７　２．０７　２．１６本　ＩＧＦ−Ｉの１８：００時における第１回の注射後。

”’　ＩＧＦ−Ｉを毎日注射して４週間後。

前記４週間治療期間中、ＩＧＦ−Ｉレベルはこの年齢グループの健康人における標準生理的レベルに維持された。

そのうえ、内在性ＩＧＦ−Ｉ分泌の抑制は治療期間中には見られなかった。結果としてＩＧＦ−Ｉレベルの長期に亘る標準化は糖尿病をもつ幼児と若者の縦成長の標準化を意味することに他ならない。

ロツし％フロントページの続き（７２）発明者　ソンクセン　ビータ−エッチイギリス国、ロンドン　ニス　ダブリュ６３　ニー　チー、フリストン　ストリート２

Claims

【特許請求の範囲】１）１型糖尿病治療に用いて健康な人のインシユリン様増殖因子血清レベル特性を達成する皮下注射投与量から成る薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。２）前記１型糖尿病をもつ幼児、若者および若成人の治療を特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。３）前記１型糖尿病をもつ幼児、若者および若成人に必要なインシユリンの量を減少させることを特徴とする請求の範囲第２項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。４）前記１型糖尿病における改善かつ安定化された血糖制御用薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。５）前記１型糖尿病における虚弱性を減少させることを特徴とする請求の範囲第４項記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。６）前記１型糖尿病における急性代償不全の危険を低減させることを特徴とする請求の範囲第４項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。７）前記１型糖尿病の糖尿病ケト−ジスの頻度を低下させることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。８）前記１型糖尿病をもつ幼児と若者の思春期成長を向上させることを特徴とする請求の範囲第２項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。９）前記薬剤がインシユリン製剤から成ることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。１０）前記薬剤を単一注射に適応させることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。１１）前記薬剤を１日に１回または２回の単一注射に適応させることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。１２）前記薬剤を１週間に１乃至最高３回の単一注射に適応させることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。１３）前記薬剤を１月に１日乃至最高７日の単一注射に適応させることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。１４）前記薬剤をデポー製剤もしくはスローリリース製剤に適応させることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の薬剤の製造に用いるインシユリン様増殖因子の用法。１５）インシユリン様増殖因子（ＩＧＦ−Ｉ）を健康体のＩＧＦ−Ｉ血清レベル特性達成に必要な投与量で皮下注射投与して１型糖尿病を治療する方法。