JPH05500302A

JPH05500302A - Ｔ細胞性白血病及び黒色腫に伴うｔｃｌ―５遺伝子の転位

Info

Publication number: JPH05500302A
Application number: JP2509510A
Authority: JP
Inventors: クロセ，カルロ・エム
Original assignee: テンプル・ユニバーシティ
Priority date: 1989-07-03
Filing date: 1990-05-29
Publication date: 1993-01-28
Also published as: CA2063409A1; AU5932790A; EP0480970A1; WO1991000364A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】Ｔ　び　に°ＴＣＬ−５ｉ−の合衆国政府は本発明にベイト−アップライセンスを有し、一定の状況下で特許権所有者に米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＨｅａｌｔｈ）からの認可条件ｎｏ、ＣＡＯ９４８５、ＣＡ３９８６０．ＣＡ２５８７５によって指定される妥当な条件で他人にライセンスを許可するように要求する権利を有する。

２肌の侠術的分野本発明は癌の診断法と監視とに関する。さらに詳しくは、本発明は染色体転座ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）に関係する癌の診断と監視に関する。

ｇ胆の背量ＢＩＪンパ球と１９２８球の系統の白血病とリンパ種との大部分は特徴的な染色体異常性を有する［ユニス（Ｙｕｎｉｓ）、（１９８３）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２２１　：　２２７−２３５］　、それぞれ、バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ種と慢性骨髄性白血病とにおけるＭＭＣとＡＢＬ腫瘍遺伝子とに直接関係する矛盾のない染色体異常の発見［概観に関しては、クロース（Ｃｒｏｃｅ）とノーウェル（Ｎｏｗｅ　ｌ　ｌ）、（１９８５）、ブルッド（Ｂ　Ｉ　ｏｏｄ）　６５　：　１−７．タルツロツク（Ｋｕｒｚｒｏｃｋ）等、　（１９８８）、エヌ、イング、ジエイ、メト、（Ｎ、Ｅｎｇ、Ｊ、Ｍｅｄ、）３１９：９９０−９９８を参照のことＪは、特定遺伝子の発現を変える染色体異常はヒト白血病とリンパ種の病因に関係するという仮説に導いた。Ｔ細胞腫瘍では、染色体異常の大部分はバンドａｌｌにおける染色体１４上のＴ細胞受容体アルファ／ベータ座を含む［クロース等（１９８５）、サイエンス２２７　：１０４４〜１０４７　；ラビット７、　（Ｒａｂｂ　ｉ　ｔｔｓ）等（１９８８）、トレントス　ジエネット（Ｔｒｅｎｄｓ　Ｇｅｎｅｔ、）４　：　３００−３０４において再検討］。急性Ｔ細胞白血病に観察されるｔ（８゜１４）（ｑ２４　；　ｑｌｌ、）、ｔ　（１０；１４）（ｑ２４；ｑｌｌ）、ｔ　（１１；１４）（ｑ１３；ｑｌｌ）、ｔ　（１１；１４）（ｑ１５；ａｌｌ）、及びｔ　（１４；１４）（ｑｌｌ；ｑ３２）転座へのこのＴ細胞受容体座の関係はこれらの転座に関係する破断点（ｂｒｅａｋｐａｉｎｔ）の分子分析によって実証されている　［フィンガー（Ｆｉｎｇｅｒ）等（１９８６）、サイエンス２３１９８２−９８５、カガン（Ｋａｇａｎ）等（１９８７Ｌブロク　ナトル、アヵド、サイ。

（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、）ＵＳＡ、８４　：４５４３−４５４６、カガン等（１９８９）、ブロク　ナトル、アカド　サイ、ＵＳＡ　（印刷中）、ベーム（Ｂｏｅｈｍ）等（１９８８）エムボ　ジェイ、（ＥＭＢＯＪ、）等７　：　３８５−３９４　；ベーム等（１９８８Ｌエムボ　シエイ　７　：　２０１１−２０１７；メンゲル−ガラ（Ｍｅｎｇｅ　ｌ−Ｇａｗ）等（１９８８）、ブロク。

ナトル　アカド　サイ　ＵＳＡ８５　：　９１７１−９１７５　；ルッソー（ＲｕｓｓＯ）等（１９８８）、ブロク　ナトル、７カド、サイ、ＵＳＡ８６　：　６０２−６０６］。ヒト染色体１バンドｐ３２異常は急性Ｔ細胞性白血病［マチーウーマーウル（Ｍａｔｈｉｅｕ−Ｍａｈｕｌ）等（１９８６）、ティ、シー、アール、アカド、サイ、（Ｔ、’Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、Ｓｃ１　ン３０２　：　５２５−５２８　；ライマンシ（Ｒａ　ｉｍｏｎｄｉ）等（１９８７）ブルッド、６９　：１３１−１３４１、ヒト皮膚悪性黒色腫［パラバン（Ｂａｌａｂａｎ）等（１９８６）、カンサーシエネト、サイトジエネト、（Ｃａ’ｎｃｅｒ　Ｇｅｎｅｔ、　Ｃｙｔｏｇｅｎｅ　ｔ、）１９　：１１３−１２２コ及びヒト神経芽細胞腫［ギルバート（Ｇｉｌｂｅｒｔ）等（１９８２）、カンサー　ジエネト、サイトシェネト９．７・３３−４２］に観察されている。しかし、関連する腫瘍遺伝子は同定されていす、染色体破断点の所在も確認されていない。従って、これらの異常を確認する唯一っの方法は細胞遺伝学によるものであるが、これは費用的及び技術的に困難である。

従って、ヒト染色体異常に関係する疾患の診断と治療がルーチンに、安価に実施されつるように、ヒト染色体１バンドｐ３２を含むある種の染色体異常を確認する分子的方法が技術上で必要とされている。

光咀Ω櫃天ヒトにおける新生物の診断又は評価の方法を提供することが本発明の目的である。

新生物の診断又は評価のための核酸プローブを提供することが本発明の他の目的である。

ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座に起因する転座結合（ｔｒａｎｓｌ。

ｃａｔｉｏｎ　ｊｕｎｃｔｉｏｎ）を増幅するための核酸プライマーを提供することが本発明のさらに他の目的である。

本発明の上記その他の目的は下記の１つ以上の実施態様によって解決される。

本発明の１実施態様では、新生物であると疑われる細胞からヒ１−ＤＮＡを単離し、前記ＤＮＡ上のＴｃＬ−５遺伝子が転位されたものであるか否かを確認する（転位ＴＣＬ−５遺伝子は新生物を示唆する）ことを含むヒトにおける新生物の診断又は評価の方法を提供する。

本発明の他の実施態様では、新生物であると疑われる試験細胞から単離し、前記試験細胞中のＴＣＩ、−５遺伝子の発現産物（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔ）量を測定し、前記試験細胞中のＴＣＬ−５遺伝子の発現産物量を対照細胞、すなわち健康な細胞からもしくは健康なヒトから単離された対照細胞中の同量と比較することを含むヒトにおける新生物の診断又は評価の方法を提供する、前記試験細胞中のＴＣＬ−５遺伝子発現産物量が対照細胞中の同量に比べて異なることは新生物を示唆する。

本発明のさらに他の実施態様では、ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座のｌｐ＋″染色体の転座結合と制限酵素部位との間に配置された染色体１配列に起因する核酸プローブを提供する、前記部位と転座結合との間に前記酵素のための他の部位は存在しない。

本発明のさらに他の実施態様では、ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座のｌｐｌ″染色体の転座結合を増幅するための核酸プライマ一対であって、対の１プライマーが染色体１配列に由来し、１プライマーが染色体１４配列に由来する核酸プライマー対を提供する。

本発明は従って当技術分野に、ある種の新生物の診断と監視をルーチンにかつ安価にする、このような診断と監視のための方法、プローブ及びプライマーを提供する。

図面Ω！里を説明図１は７３０−３細胞ラインの典型的なトリプシンーギムザ　バンド染色核型・４７．ＸＹ、＋１７．ｔ　（１；１３）　（ｐ３２；ｑ３４）、ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ａｌｌ）を示す。ＴＣＬ−５を含むｔ（１；１４）転座に由来する１ｐ″″と１４Ｑ−染色体を示す、他の異常は矢印によって示す。

図２は白血病細胞ラインの１ｐ１染色体上のｔ（１：１４）染色体破断点の分析を示す。パネルＡはＴＣＲとｐＪＫ３．ＯＳプローブとにょるｔ（１；１４）細胞ラインからのＤＮＡのハイブリッド形成を示す。胎盤細胞（レーン１と４）、７３０−３　（レーン２と５）及びＤＵ、５２８　（レーン３と６）がらＤＮＡ　（１０ｔｔｇ）を単離し、ＢａｍＨＩ（レーン１−３）又はＨｉｎｄｌｌｒ（レーン４−５）によって消化させた。パネルＢ−ＤはＤＵ、５２８における１ｐ＋染色体破断点を囲む領域の制限マツプを示す。パネルＢは染色体１４上のＴＣＬ−５デルタ座の正常な形態を示す。パネルＣは１ｐ＋染色体上の転位ＴＣＬ− ５座を示す。パネルＤは染色体１上の相補性生殖ラインＴＣＬ−５座を示す。黒色バーは染色体１４ＤＮＡ配列を示し、白色バーは染色体１配列を示す。プローブはハッチトボックス（ｈａｔｃｈｅｄ　ｂｏｘ）として示す。使用略号はＥ、ＥｃｏＲＩ；Ｂ、ＢａｍＨＩ　；Ｈ，Ｈｉｎｄｍである。

図３は染色体１に対するｔ（１；１４）マツプの転座染色体中のＴＣＲデルタ座に並置した配列を示す。下記ソースからのＤＮＡ（１０μｇ／レーン）を過剰な制限酵素Ｈｉｎｄｌｌｒによって消化させ、電気泳動させ、ニトロセルロースフィルターに移し、ｐ５２８Ｈ５，１プローブによってハイブリッド化した（図２参照）　マウスＬＭＴＫ−細胞ライン（レーン１）：転座ｔ　（８；１４）（ｑ２４：ｑ３２）からの１４Ｑ４染色体を保持するＭ４４ｃ１２Ｓ５ハイブリッド（レーン２）：染色体４．１３．１４．１８．２０．２１、Ｘと部分染色体１７．２２を保持するＧＬ５ハイブリッド（レーン３）１部分８．２２と染色体１９．２１とＸとを保持する４０１ＡＤ５ＥＦ３ハイブリツド（レーン４）２転座ｔ　（１４：Ｘ）（ｑ３２；ｑ１３）からの１４Ｑ４染色体を保持する５２−６３ｃ１７−１７ハイブリツト（レーン５）：染色体１．６とＸを保持するＧＭ７２９９ハイブリッド（レーン６）：ヒト胎盤（レーン７）１部分染色体１．２．３．５と１７を保持するＰＢ５ハイブリッド（レーン８）。

図４は１４Ｑ−染色体相互破断点を示す。パネルＡはｔ（１；１４）破断点を囲む生殖ライン染色体１インサートを含むｐ５２８Ｂ０．７プローブ（図２参照）によってハイブリッド化したサンゲスターを示す。マウス細胞ライン（レーン１）：ヒト胎盤（レーン２）；ＤＵ、５２８細胞ライン（レーン３）：ハイブリッド７２６ｃｉ２２　（レーン４）及びハイブリッド？２６ｃ１２４　（レーン５）からのＤＮＡ　（１０Ｂｇ／レーン）をＥｃｏＲＩによって消化させ、電気泳動させ、ニトロセルロースフィルターに移した。パネルＢはｔ（１；１４）転座の１４ｑ−染色体（黒色と白色バー）を形成するために組み合わせた染色体１４ＴＣＬデルタ座（黒色バー）と染色体ＩＴＣＬ−５座（白色バー）の制限マツプを示す。Ｅ、ＥｃｏＲＩ　；Ｂ、ＢａｍＨＩ　；Ｈ，ＨｉｎｄｌｌＩ０図５はｔ（１；１４）転座結合におけるヌクレオチド配列と対応生殖ライン配列とを比較する。パネルＡはｌｐ”″染色体破断点配列を示す。パネルＢは１ｐ−染色体相互破断点配列を示す。生殖ライン染色体１４Ｄ−デルタ１とＤ−デルタ２配列は以前に公開されたように示す［タキーラ（Ｔａｋｉｈｒａ）等（１９８８）、ブロク、ナトル、アカド　サイ、ＵＳＡ“８５：６０９７−６１０１ｊ。ブラケットはＤ−デルタ　セグメントのヘプタマーシグナル配列を示す。灰色に濃淡をつけた配列はＮ領域を表すと考えられる。

図６は種々のＴ細胞ラインとＢ細胞ラインにおけるＴＣＬ−５転写の発現を示す。５細胞ラインからの全細胞ＲＮＡのサンプル（１０Ｂｇ）を２．２Ｍホルムアルデヒド含有１％アガロース中で電気泳動させてから、ニトロセルロース中に移した。二通りのフィルターを用意し、ＴＣＬ−５５２８Ｂ０．７プローブによって（パネルＡ）又はヒト　リポソームｐＡプローブ［エリクソン（Ｅｒｉｃｋｓｏｎ）等（１９８１）シーン（Ｇｅｎｅ）１６°１−９１によって（パネルＢ）ハイブリッド化した。オートラジオグラフィーの前にフィルターを４２℃の１５ｍＭＮａＣＬ／１ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７，４１０，１ｍＭ　ＥＤＴＡｌｏ　１％ＮａＤｏｄＳＯ４によって洗浄した。レーン１．７３０−３；レーン２．ＴＡＬＬ−１０１［ヴアルティーリ（Ｖａｌｔｉｅｒｉ）等（１９８７）ジェイ、イムツル、（Ｊ、Ｉｍｍ’ｕｎｏ１．）１３８：４０４２−４０５０１　；レーン３．ビール［ハタ（）（ａｔａ）等（１９８７）サイエンス２３８：６７Ｂ−６８１］　；レーン４．ジャーカット［サンゲスター（Ｓａｎｇｓ　ｔ　ｅ　ｒ）等（１９８６）ジｘイ、　イクス、　ｙ’ド、Ｄ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、”）１６３　：１４９１−１５０８）；レーン５．　６９７　［フィンドリー　ジュニア（Ｆｉｎｄｌｅｙ、Ｊｒ　）等（１９８２）ブルッド６０　：１３０５−１３０９１゜図７はＷＭ８黒色腫ＤＮＡ中にＴＣＬ−５座の転位が存在することを実証する。

生殖ライン対照として用いたＧＭ６０７　’　ＤＮＡ　（レーンＡ）又はＷＭ８　ＤＮＡ（レーンＢとＣ）１０Ｂｇを指示酵素によって消化させ、フラクション化し、ｐ５２８Ｂ４．４プローブによってハイブリッド化した。

図８はｔ（１：１４）転座イベントの２モデルを示す。Ｄデルタ、とＤデルタ２セグメントをそれぞれ点刻（ｓｔｉｐｐｌｅｄ）セグメントと充填セグメントとによって示す。染色体１と１４はそれぞれ一重線と二重線によって示す。パネルＡでは、転座とＤデルタ、−Ｄデルタ、結合未遂（ａｔｔｅｍｐｔｅｄ　ｊｏｉｎｉｎｇ）が同時に生ずる。パネルＢでは、ＤデルタＩ−Ｄデルタ、結合が転座に先行する。三角形は染色体１上の破断点部位を表す。

詐栂五説朋新生物形成プロセスの過程において転位する染色体ｌバンドル３２上に腫瘍遺伝子が存在することが、本発明の発見である。この転位が腫瘍遺伝子の発現産物の産生を増加させることが、他の発見である。

本発明によって形成されるＴＣＬ〜５腫瘍遺伝子の核酸配列を用いて、新生物を診断、評価又は監視することができる。例えば、ＴＣＬ−５遺伝子部分を含む核酸プローブを用いて、新生物であると疑われる細胞から単離されたＤＮＡにハイブリッド化することができる。ＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼによって消化させて、不連続フラグメントを形成することができる。対照ＤＮＡサンプルがらプローブによって検出されるフラグメントとは異なるサイズの単離ＤＮＡ中のハイブリッド化フラグメントの検出はＴＣＬ−５転位と新生物形成とを示唆する。

この転位はｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座に関係するが、例えば欠失、挿入及び逆位のような本発明の方法によって検出される他の転位の可能性もある。

新生物の診断は一般に、悪性状態が存在するという陽性結果を与える。さらに、ＴＣＬ−５転位が生じたことを測定することによって、このような転位を含む新生物の種類に新生物を分類することができる。新生物の種類の要素は治療法に同様に反応し、治療コースの選択に有用である。

本発明の方法を用いて、新生物を評価又は監視することができる。これは一般に患者内に留まる新生物細胞量を定量測定する。例えば、抗新生物療法、例えば化学療法又は放射線療法のコース中に、本発明の方法を用いてこのような療法の首尾を監視することができる。これは療法前に比べて検出可能な転位ＴＣＬ−５遺伝子量の定量を含む。又は、ＴＣＬ−５遺伝子産物の量と種類の測定及びこれらの療法前レベルとの比較を含む。

本発明の方法の他の用途では、新生物が軽減中であるヒトにおいてＴＣＬ−５転位を測定する。ＴＣＬ−５転位が検出された場合には最低に残留する疾患すなわち検出可能な新生物細胞の再発が測定又は示唆される。最低残留疾患の示唆は臨床医に抗新生物療法の再開を注意する。

本発明によると、新生物であると疑われる細胞からヒトＤＮＡを単離する。このような疑いは臨床医が信頼する形態学的、細胞学的又はその他の手段に基づくものである。次に、細胞から単離されたＤＮＡが転位ＴＣＬ−５を含むか否かを測定する。ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座を含む転位が特に考えられるか、新生物形成状態に導くと考えられる、例えば挿入、欠失又は通産のような、ＴＣＬ−５を含む他の転位が生じうる。

白血病細胞と黒色腫細胞の両方にＴＣＬ−５転位が生ずることが判明している。

しかし、他の新生物がＴＣＬ−５転位に関係することも本発明の範囲を越えていない。例えば、染色体１バンドｐ３２が神経芽細胞腫細胞中で転位することが判明しているので、神経芽細胞腫がＴＣＬ−５転位に関係することが考えられる。

ＴＣＬ−５転位が腫瘍遺伝子プロセス中に生じ、腫瘍遺伝子プロセスに貢献する多くの遺伝子変化の１つであると考えられる。ヒトが白血病を有する疑いがある場合には、Ｔリンパ球がＤＮＡ単離のための好ましい細胞ソースである。ヒトが黒色腫を有する疑いがある場合には、メラニン細胞がＤＮＡＩＩＩＩＩのための好ましい細胞ソースである。しかし、ある場合にはＴＣＬ−５転位が遺伝される可能性があり、この場合には全ての体細胞がこの転位を有すると考えられる。このような先天的転位を有する人々は新生物を発現しがちである。

本発明の１方法によると、染色体１配列に由来する核酸プローブをハイブリッド化することによってＴＣＬ−５転位を測定する。プローブ配列はｔ（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座後に１ｐ＋染色体上に保有される配列である。この配列は転座結合（染色体１配列が染色体１４配列に結合する）に充分に近接し、転座結合と第１制限酵素部位との間に存在する。転座結合と第１部位との間に制限酵素の他の部位は存在しない。このようなプローブはＴＣＬ−５ＲＮＡ転写体（発現産物）にハイブリット化するので、転写体の検出と定量に利泪することができる。適当なプローブを図２に示す、これはｐ５２８Ｂ４．４、ｐ５２８Ｈ５，１及びｐ５２８Ｂ０．７を含む。プローブｐ５２８Ｂ４．４、ｐ５２８Ｈ’５．１及びｐ５２８Ｂ０．７はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシヨン（ＡＴＣＣ）（メリーランド州、ロックビル）に、受は入れ番号　として寄託されている。好ましいプローブはその配列が転座結合と第１ＥｃｏＲ１部位との間にあるようなプローブである。これらには上記に挙げたプローブがある。

本発明の他の方法では、技術上周知のポリメラーゼ連鎖反応による特定配列の増幅によって測定を実施する。ムリス（Ｍｕｆｔｉｓ）、サイエンス（１９８８）、２３９巻、４８７−４９１頁、シャーフ（Ｓ　ｃ　ｈ　ａ　ｒ　ｆ　）　、サイ−１−：／７．（１９８８）、２３３巻、１０７６−１０７８頁参照。好ましく増幅された配列はｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）染色体に由来するｌｐ１″染色体の転座結合を含む配列である。このような増幅のプライマーが一重鎖核酸であり、その１つが染色体１４配列を含み、その１つが染色体１配列を含むことが好ましい。両セットの配列はｉｐ”染色体上に保有される。染色体１４配列がＴ細胞抗原受容体をコードするＴＣＲ−デルタ座に由来することが好ましい。これらがこの座のＤ−デルタ−２又はＪ−デルタ−１セグメントに由来する配列を含むことが最も好ましい。

この種類の適当なプローブはＡＴＣＣに受け入れ番号第６７９９６号として寄託されて、ｐｌｏＩＪ−デルタ−Ｅ５．０として公知である。好ましい染色体１プライマーは染色体１上の転座破断点に及ぶプロープル５２ＢＢ０．フ上の配列に由来する。

上記したように、新生物であると疑われる細胞中での蛋白質とリボ核酸との両方を含む遺伝子発現産物を定量し、対照細胞中に検出される量と比較する。対照細胞は試験細胞を供給する同じヒトの健康な細胞又は健康なヒトから単離する。

胎盤細胞を用いることもできる。蛋白質と核酸との定量方法は技術上周知である。

例えば、放射能標識核酸プローブを用いて、オートラジオグラフィーとデンシトメトリーによってハイブリッド化量を測定することができる。他の定量手段も用いることができる。ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座を有する細胞中で検出された遺伝子産物は約５．４ｋｂ、約２．２ｋｂ及び約２．６ｋｂＲＮＡ転写体である。転座を有する細胞では、２種の小さい転写体が大きい転写体よりも非常に多く存在する。転座を有さない細胞では、大きい転写体のみが存在する。

これらの転写体の蛋白質産物は蛋白質上のエピトープを認識する抗体によって検出される。特定蛋白質に特有なエピトープを認識する抗体を利用して、ＴＣＬ− ５蛋白質集団を識別することができる。蛋白質産物の定量方法は技術上周知であり、便利な方法を用いることかできる。便利な１方法は比色アッセイを用いる方法であって、発色が抗原存在量に相関するＥＬＩＳＡ方法である。特定蛋白質産物に対する抗体を得る手段もルーチンであり、技術上周知である。

本発明の実施に使用可能な、上記核酸プローブとプライマーも提供する。これらは例えば寄託細胞ラインもしくは上記プラスミドのような生物学的ソースから単離することができる、又は例えば図５に示すような既知配列に従って合成することかできる。プローブを製造し、標識する方法は技術上周知である。プライマー製造方法も技術上周知である。

下記実施例は本発明の上記説明及び下記請求の範囲によって表される、本発明の範囲を限定しない。

実施例伊Ｄ２この例は白血病細胞中のｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）染色体破断点の確認を説明する。

ｔ　（１；ｔ４）（ｐ３２；ｑｌｌ）染色体転座は急性ＴＩＪンパ芽球性白血病を有する１６歳少年の白血病細胞中で述べられている［ヘルシュフィールド（Ｈｅｒｓｈｆｉｅｌｄ）等（１９８４）ブロク　ナトル、アカド、サイ、ＵＳＡ８１・２３３−２５７１゜それぞれ化学療法前後の白血病細胞に由来する２ｍｍタラインＤｏ、５２８　［クルツヘルグ等（１９８５）シエイ、イクスブ、メト、１６２　：　２５３−２５７１　と７３０−３　［タルツベルグ、未公開結果］は明らかに同じ核型を示した。７３０−３核型の我々の表現は４７、ＸＹ、＋１７、ｔ（１゜１３）（ｐ３２；ｑ３４）ｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）である（図１参照）。両ナンバー１染色体のｐ３２領域を含む転座に関するこの説明は初期の報告［タルツベルグ等（１９８５）シエイ、イクスプ、メト、１６２：１５６１−１５７８］とは幾らか異なる。

パン）”Ｑｌｌの染色体１４上には、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常デルタ連鎖遺伝子か定常アルファ座領域の約８５ｋｂ上流のＴＣＲアルファ座内に存在する［イソベ（Ｉｓｏｂｅ）等（１９８８）プロ欠ナトル　アカド、サイ、ＵＳＡ８５３９３３−３９３７　、タキハラ（Ｔａｋｉｈａｒａ）等（１９８８）ブロク。

ナトル　アカド　サイ、ＵＳＡ８５　：　６０９７−６１０１］。結合ＤＵ、５２８ＤＮＡと７３０−３ＤＮＡによってサザンフィルターへのＴＣＲデルタｐＪＫ３゜ＯＳプローブのハイブリット化の結果によってｔ（１；１４）転座へのＴＣＲデルタ座の直接関与が示唆された（図２Ａ）。図２Ｂに示すようなＴＣＲデルタ座内に配置された３、０ｋｂ　５ｓｔｌフラグメントを含む、このプローブはＤ０５２８と７３０−３８ａｍ　Ｈ１消化ＤＮＡの両方内の１０．５ｋｂ　ＢａｍＨ■転位フラグメントにハイブリッド化する（図２Ａ、レーン２．３）。ｐＪＫ３゜ＯＳインサートは内部Ｈｉｎｄｍ部位を有するので、このプローブはＨｉ　ｎｄＩ［［消化胎盤ＤＮＡ中の３．４ｋｂと６．２ｋｂの２生殖ライン制限フラグメントを検出する（図２Ａ、レーン４）。予想生殖ラインＨｉｎｄＩ［［パターンとは対照的に、ｐＪＫ３．Ｏ３はＤＵ、５２８と７３０−３細胞のＨｉｎｄｌＩ［消化ＤＮＡ内の３．４ｋｂ生殖ライン制限フラグメントと９．８ｋｂ転位制限フラグメントを検出する（図２Ａ）。従って、ｔ（１；１４）破断点がｐＪＫ３．ＯＳプローブによって検出される９、８ｋｂＨｉｎｄＩ［［フラグメント内に生じたのであろうと我々は結論した（図２Ａ）。ＤＵ、５２８　（及び７３０−３）非転座染色体１４に由来する１９ｋｂＢａｍＨＩ生殖ラインフラグメントと６．２ｋｂＨｉｎｄ■生殖ラインフラグメントとの両方にｐＪＫ３．Ｏ３がハイブリッド化しないことは機能ＶアルファーＪアルファ転位後のこのデルタ対立遺伝子の欠失によると考えられる。

ラムダファージベクターＥＭＢＬａＡ中に構成されたＤＵ、５２８ゲノムライブラリーからのｔ（１；１４）染色体破断点を、我々はクローン化した［フィシャウフ（Ｆｉｓｈａｕｆ）等（１，９８３）ジエイ１モル、パイオル　（Ｊ、Ｍｏｌ。

Ｂｉｏｌ、）１７０・８２７−８４２３゜ＤＵ、５２８のファージライブラリーからの転位クローンの１クラスを得て、重複ファージクローンの典型的マツプを図２０に示す。転位ＤＵ、５２８フラグメントのサイズ（図２Ａ）は転位り０− ン中の適当な制限フラグメント（図２Ｃ）の算出値と一致する。転位クローン中のＴＣＲデルタ配列からの分岐点を測定するために、図２Ｂに示す５．０ｋｂＥｃｏＲＩを含む染色体１４ｐ５２８Ｅ５．Ｏプローブを用いて、ヒト胎盤ライブラリーから相補的生殖ラインＴＣＲデルタ座を単離して、マツプを作成した（図２Ｂ）。制限酵素部位か正常なデルタ座制限部位から分岐した破断点に近接して配置された反復のない５．１ｋｂＨｉｎｄｍフラグメント（図２Ｃ）をｐＵｃ１９　（ｐ５２８８５．１）にクローン化し、その染色体起源の判定に用いた。プローブｐ５２８Ｈ５，１を、ヒト染色体１又はヒト染色体１４のいずれかを含むげっ歯頚Ｘヒトハイブリッド細胞からの結合ＤＮＡによってサザンフィルターにハイブリッド化した。５．１ｋｂＨｉｎｄｍフラグメントのハイブリッド中の存在はヒト染色体１の存在のみと相関しく図３）、このことは我々がＤＵ、５２８　１ｐ＋染色体上のｔ（１；１４）破断点をクローン化したことを実証する（ｌｑｔｅｒ−＞１ｐ３２：　：１４ｑｌｌ−＞１４ｑｔｅｒ）。破断点領域の正常染色体１カウンターパートをクローン化するためにヒト胎盤ライブラリーの検査にも、ｐ５２８８５．１プローブを用いた（図２Ｄ）。

分子クローニング、サザンプロット分析、ＲＮＡ単離及びノーザンプロット分析の方法は既述されているように実施した［フィンガー等（１９８８）ブロク。

ナトル　アカド、サイ　ＵＳＡ８５　：　９１５８−９１６２］。

この研究でクローン化した種々なプローブはｐＵｃ１９に連結したインサートを含む。各プローブの詳細は本文に述べ、妥当である場合には図面に説明する。

全てのプローブはアルファー３２Ｐ　ｄＮＴＰｓを用いるニックトランスレーションによって約５ｘｌＯ’ｃｐｍ／μｇの比活性にまで放射能標識した。

この研究に用いた親細胞と体細胞ハイブリッドの単離、増殖及び特性化は他所で述べられている［クロース等１９８８、ブルッド６５　：１−７　；ダースト（Ｄｕｒｓｔ）等１９８７、ブロク、ナトル、アカド、サイ、ＵＳＡ８４　：１０７０−１０７４：ハルスカ（Ｈａｌｕｓｋａ）等１９８８、ブロク、ナトル、アカドサイ　ＵＳＡ８５　：　２２１５−２２１８］。特異的なヒト染色体又は染色体領域の存在は特異的ヒト染色体領域に指定された遺伝子プローブを用いたＤＮＡハイブリッド化によって確認されている。ＧＭ７２９９はＮＩＧＭＳヒユーマン　シネティック　ムタント　セル　レボジトリ−（ＮＩＧＭＳ　Ｈｕｍａｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｍｕｔａｎｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）　にューヨーク州、カムデン）から入手される体細胞ハイブリッドである。

例２− この例は相互転座結合セグメントの単離を説明する。

ｔ（１；１４）転座の構造面を完全に分析するために、誘導体１４Ｑ−染色体上の染色体１と染色体１４の間の結合セグメントを分析しようと考えた（１４ｐｔｅ　ｒ−＞１４ｑｌｌ　：　：　１ｐ３２−＞１ｐｔｅ　ｒ）、ｐ５２８Ｂ０．７ブローブはＤＵ、５２８　１ｐ”″転座破断点を含む染色体１からの生殖ライン０．　７ｋｂＢａｍＨＩインサートを含む（図２Ｄに説明するように）。ｐ５２８Ｂ０．７プローブとのハイブリッド化時に、ＤＵ、５２８ＤＮＡのＥｃｏＲＩ消化体（ｄｉｇｅｓｔ）は１７．５ｋｂの生殖ラインフラグメントと８ｋｂと１４ｋｂの転位フラグメントを示した（図４Ａ、レーン３］。１７．５ｋｂＥｃｏＲＩフラグランド（図４Ａ、レーン２，３）はＤＵ、５２８とヒト対照ＤＮＡの両方に検出される生殖ライン染色体１フラグメントに一致する。１４ｋｂＥｃｏＲ１転位フラグメント（図４Ａ、レーン３）はＤＵ、５２８染色体１ｐ＋上の破断点を含むＥｃｏＲＩセグメントに一致する、ｐ５２８ＥＢ２．７ブローブを用いた制限分析に基づ（結論。図２Ｃに示すように、ｐ５２８ＥＢ２．７ブローブはＤＵ、５２８染色体１ｐ４破断点に及び、ＤＵ、５２８ＥｃｏＲＩ−消化ＤＮＡ中の同じサイズの１４ｋｂ転位フラグメントを検出する。

８ｋｂＥｃｏＲ１転位フラグメント（図４Ａ、レーン３）はＤＵ。５２８中の誘導体染色体１４ｑ−に一致することができた。それ故、Ｉ）Ｕ、５２８ゲノムライブラリーをｐ５２８Ｂ０．７ブローブによって再検査した、我々の目的は１４ｑ−染色体に対応するクローンを得ることであった。初期ライブラリー検査後に、ｐ５２８Ｂ０．７ブローブにはハイブリッド化するが、ｐ５２８ＥＢ２．７ブローブ（染色体１ｐ゛結合又は正常染色体１カウンターバートを含むインサートによってＤＵ、５２８フアージクローンにハイブリット化するプローブ）にはハイブリッド化しないフ７−ンクローンを単離して、詳細に特性化した。示差スクリーニング方法の理論的根拠は相互１４ｑ−染色体上の転座結合を含むと考えられるクローンのみを単離することである。上記単離クローンを表す制限マツプと図４Ｂに示した染色体１と染色体１４正常カウンターバートを表す制限マツプとの比較は、我々がＤＵ、５２８のｔ（１；１４）転座の染色体１４ｑ−相互破断点をもクローン化したことを明確に実証する。

マウス細胞と７３０−３細胞との融合後に単離されたマウス−ヒトハイブリッドをサブクローン化することによって、１４ｑ−（１４ｐｔｅｒ−＞１４ｑ１．１１ｐ３２−＞１ｐｔｅｒ）染色体結合領域に一致する８ｋｂＥｃｏＲ［転位フラグメントを保有するハイブリッドライン７２６ｃ１２２と７２６ｃ４２４を得た（図４Ａ、レーン４．５）。この２種ハイブリ７ドは染色体領域１ｐ３２に位置決定されたＬ−ＭＹＣ座［ナラ（Ｎａｕ）等、１９８５、ネイチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ）３１８：６９−７３１をも含んだか、染色体領域１ｐ２２又は１ｐ１３に割り当てられる神経成長因子ヘータは保有しなかった［ムンケ（Ｍｕｎｋｅ）等１９８４、ソマト、セル、ジネト、（Ｓｏｍａｔ、Ｃｅ１ｌ　Ｇｅｎｅｔ、）１０　：　５８９−５９９　、ガルソン（Ｇａｒｓｏｎ）等１９８７、ヌクル、アシトス　レス、（Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、）１５：４７６１−４７７０１　。

このように、体細胞ハイブリッドの分析はＬ−ＭＹＣ座に対してはセントロメア的であり、神経成長因子ベータ座に対してはテロメア的である染色体１の短鎖上に存在するＴＣＬ−５座と一致する。

何重この例はｔ　（１；１４）（ｐ３２；ｑｌｌ）転座に関係する染色体１４配列がＤデルタ庫内に存在することを示す。問題の領域の良好なゲノムマツピング後に、ＤＮＡフラグメントをＭ１３ｍｐ１８とＭ１３ｍｐ１９においてサブクローン化し、それらの配列をサンガージデオキシ（Ｓａｎｇｅｒ　ｄ　１ｄｅｏｘｙ）法［サンガー（Ｓａｎｇｅｒ）等１９７７、ブロク、ナトル、アカド、サイ、ＵＳＡ７４　：　５４６３−５４６７１を用いてセクエナーゼ（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ）［ユナイテッド　ステート　バイオケミカル（Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｊ　ｃａ　ｌ）　、クリーブランド］によって決定した。

転座結合部位と正常カウンターバートとのヌクレオチド配列を図５に示す。破断点での１ヌクレオチド欠失を除いて、ｌｐ＋染色体と１４ｑ−染色体上の結合点の染色体ｌ配列は生殖ライン染色体１に比べて連続的であり、染色体１に対する転座の相互性を実証した。転座結合における染色体１４からの配列の検査は転座プロセスに影響を与えたと思われる特徴（ｆｅａｔｕｒｅ）を確認した。１ｐ◆ ５ｅｎｎｓｙｏｋｕｔａｉ上の結合はＤデルタ２セグメントにおいて生じた（図５Ａ）。未転位Ｄデルタ２セグメントは通常、Ｄセグメント転位中に用いられる３°　と５′ヘプタマー及びノナマー組み換えシグナル配列を有する［タキハラ等１９８８、ブロク、　−１−トル、　７カド　サイ、ＵＳＡ８５　：　６０９７−６１０１］。

１ｐ＋染色体上のｔ（１；１４）破断点は意外にも、Ｄデルタ２中の正’１ｉｔＤセグラント転位が生ずる部位において、すなわち３′〜５°　シグナル配列に直接の部位において正確に生じ、これらの配列は組み換えプロセス中に欠失する［サヵノ（Ｓａｋａｎｏ）等１９８１、ネイチ＋−２９０：　５６２−５６５７゜破断点の相互染色体１４ｑ−側からの染色体１４配列は結合部位がＴＣＲデルタ座のＤデルタ、セグメントに存在することを実証する（図５Ｂ）。正常Ｄセグメント転位［サカノ（Ｓａｋａｎｏ）等１９８１、ネイチ＋−２９０：　５６２ −５６５］と同様に、相互破断点は正確に５′〜３°　Ｄデルタ、シグナル配列に生じた。染色体１ｐ”＆１４Ｑ−上の両結合部位に存在する特別なヌクレオチドは図５の点刻ボックスで強調するが、これらは正常生殖ラインに由来するものではない。Ｂ細胞とＴ細胞転座の破断点におけるこのような付加的ヌクレオチドはＮ領域〔ツシモト（Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ）等１９８５、サイエンス２２９　：１３９０−１３９３；１９８５、ネイチャー３１５・３４０−３４３．フィンガー等１９浄書（内容に変更なし）例４この例は染色体１上の転座結合に配置された遺伝子が存在することを実証する。

染色体転位によって免疫グロブリンのスーパーファミリー座に誤って並置した染色林産はしばしば、不適切に転写活性であり、これは悪性プロセスに直接寄与する遺伝子の転写を表すと考えられる特徴である〔フィンガー等１９８９、ｒ免疫グロブリン遺伝子におけるＢ細胞新生物への免疫グロブリン座の関与（Ｉｎマｏ１マｅｍｅｎｌ　ｏｆ　ｔｈｅｌｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｌｏｃｉ　ｉｎ　Ｂ−ｃｅｌｌ　Ｎｅｏｐｌａｓｍｓ、ｉｎ　１ｍｍｕｎｏ−ｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｇｅｎｅｓ）　Ｊ　（エフ、アルド、（Ｆ、Ａ１１）　、ティ。

ホンジョー（Ｔ、　Ｈｏｎ１ｏ）　、ティ、エッチ、ラビットス（Ｔ、　Ｈ，Ｒａｂｂｉｌｌｓ）ｍ集）アカデミツクブレス社（ＡｃａｄｅｍｉｃＰ＋ｅｓｓ、Ｌｉｄ、）、ロンドン、２２１〜２３０頁〕。それ故、我々はｐ５２８Ｂ０．７ブローブからの精製インサート、破断点にオーＦ−ラップする正常染色体１からのフラグメントを用、いてノーザンプロット分析を浄書（内容に変更なし）接する染色体１の領域に配置された遺伝子が存在する証拠をめた。

ノーザンプロット分析に用いた全ての細胞ＲＮＡは７３０−３、Ｔ細胞ＡＬＬ細胞ライン（ＴＡＬＬ−１０１）、ガンマ／デルタ−産生Ｔ細胞ライン（Ｐ！ｅ＋）、アルファ／ベータ産生Ｔ細胞ライン（Ｊυ＋ｋａｔ）及びプレＢ白血病細胞ライン（６９７）からのものである。リポソームプローブへのこれらのＲＮＡ保有フィルターのハイブリッド化は、サンプルレーン中に２８ＳリポソームＲＮＡの同様な量が存在することを示唆する（図６Ｂ）。重複フィルター（＋Ｉｕｐｌｉｃａｌｅ　ｆｉｌｌｅ＋）上に同じＲＮＡプレバレージョンが存在することは染色体１プローブ、５２８Ｂ０．７にハイブリッド化する転写体のサイズと量が様々であることを示す（図６Ａ）。５２８Ｂ０．７プローブはＴ細胞ラインＩｕ＋ｋａｌとＴＡＬＬ−１０１中の５．４ｋｂＲＮＡ転写体と、低レベルの２．２ｋｂ、２．−’６ｋｂＲＮＡ転写体をも恐らく検出する。染色体１上の転座結合に配置されたこれらの転写体によって表される遺伝子はＴＣＬ−５（Ｔ細胞白血病／浄書（内容に変更なし）リンパ腫−５）と呼ばれる。７３０−３とＰｅｅｒＴ細胞ライン中及び６９７プレＢ細胞ライン中の５．４ｋｂＴＣＬ−５ＲＮＡ−転写体のレベルが検出困難であることは、ＴＣＬ−５の低レベルな発現又は２８ＳリポソームＲＮＡへの非特異的交差ハイブリッド化によると考えられる。しかし、７３０−３細胞ラインでは、５２８Ｂ０．７プローブは高レベル発現の２，２ｋｂと２．９ｋｂＴＣＬ− ５ＲＮＡ転写体を検出し、このことは７３０−３細胞のＴＣＬ−５遺伝子発現の変化がヒトＴ細胞白血病の新生物プロセスに直接関係することを示唆する。

例５この例は１ｐ３２染色体異常を付随する黒色腫細胞ラインではＴＣＬ−５座が転位することを実証する。

多くのヒト皮膚悪性黒色腫（ＣＭＭ）は、しばしば近位セグメントｌ　ｐ　１　：ｌｌ””　ｌ　ｐ　２２をも含むように思われる染色体１ｐ欠失又は転位を有することが判明して浄書（内容に変更なし）いる〔パラバン等１９８６．　カンサージネト、サイトジネト、１９：１１３〜１２２〕。全ＣＭＭの約８〜１２％はこの疾患の家族層を有する個人に生ずる〔グリーン（Ｇ＋ｅｅｎｅ）とフラウメニ（Ｆ＋ａｕｍｅｎｉ）　、１９７６゜［悪性黒色腫の遺伝的変形（Ｔｈｅ　Ｈｅ＋ｅｄｉｔａ＋ｙ　Ｖａｌｉａｎｔｏｆ　Ｍａｌｉｇｎａｎｔ　Ｍｅｌａｎｏｍａ）Ｊ　、ヒト悪性黒色腫（ＨｕｍａｎＭａｌｔｇｎｉｎｔ　Ｍｅｌａｎｏｍａ）　、グルーンとストラドン（Ｇ＋ｕｎｅａｎｄ　Ｓｌ＋ａＮｏｎ）　、　＝ニーヨーク、１３９〜１６６頁〕。

家族性０ＭＭ血縁関係の遺伝的研究は染色体領域１ｐ３４〜３６上のＲｈ血液座への暫定的結合による異形成神経症候群／ＣＭＭ感受性遺伝子の高浸透性常染色体優性遺伝モードを実証する〔グリーン等１９８３゜我々は幾つかの黒色腫細胞ライン中の染色体１異常へのＴＣＬ−５座−の可能な関与を調べた。図２Ｄに図示したようにｌ、ｐ＋染色体上の破断点に隣接浄書（内容に変更なし）する染色体に由来する４、４ＢａｍＨＩフラグメントを含むｐ５２８Ｂ４４プローブは一層黒色腫細胞うインＷＭ８からのＤＮＡのゲノム転位を検出した。ＷＭ８細胞ラインからの２ＤＮＡプレバレージヨンは同じ結果を生した（図７．レーンＢ、Ｃ）。ＷＭ８細胞ライン〔エム、ヘルリン憶、　Ｈｔ＋１ｙｎ）とピー、シー、ノウエル（Ｐ、　Ｃ，Ｎｏｖｅｌｌ）　、未公開結果）　。ＷＭ８ＤＮＡに検出されたゲノム転位とヒト対照ＤＮＡとの数種類の制限酵素を用いた比較は、新しい転位フラグメントの説明としての制限フラグメント長さの多形性を除外させた。生殖ライン制限フラグメントに比べて、転位制限フラグメントが低強度であることは、ハイポテトラプロイド（ｈ７ｐｏｔｅｌｒａｐｌｏｉｄ）細胞ラインであるＷＭ８に観察される他の染色体１に比べてｄｅｌ　（１）（３２）染色体のコピー数が低いこ一゛とによると考えられる。

ブダペスト条約に基づく菌受託証書の写（訳文）アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションアメリカ合衆国メリーランド州　２０８５２゜ロックビル、パークローン・ドライブ　１２３０１電話−（３０１）８８１−２６００テレックス：８９８−０５５　ＡＴＣＣＮ０ＲＴＨ特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約国際様式規則７．３の規定に基づく原寄託について交付される受託証および規則１０．２の規定に基づいて交付される生存に関する証明書宛名　（寄託者または代理人の氏名および住所）テンプル・ユニバーシティ、医学部フェルス・インスティテユート・フォア・キャンサー・リサーチ・アンド・モレキュラー・バイオロシーカルロ・エム・クロース、エム・ディー、ディレクター宛ペンシルベニア州　１９１４０．　フィラデルフイ乙　ノース・ブロード・ストリート　３４２０右の者に代わり寄託　カル口・エム・クロース、エム・ディー寄託者による識別のための表示　染色体１ｐ３２から得られたクローンＢ０．　７　ニー・ティー・シー・シー受託番号：　４０６２５Ｈ３，１ニー・ティー・シー・シー受託番号　４０６２６４、　４Ｂ　ニー・ティー・シー・シー受託番号　４０６２７この寄託は上記の指示に従って科学的、分類学上の位置の記載を伴ってなされた。

この寄託は１９８９年７月３日に当該国際寄託当局により受け入れられ、受託された。

寄託者の要請によりＸ　当該国際寄託当局は菌株の請求について３０年間にわったて寄託者に通知する。

ブダペスト条約に加盟している国の特許庁が当該菌株を入手する権利を保証した場合または当該菌株を引用している米国特許が発行された場合には、当該菌株を入手可能にさせる。

培養菌か寄託有効期間中に死滅したか若しくは破壊された場合には、寄託者の責任においてそれと同一の生存する培養菌に代えなければならない。

当該菌株は寄託ヨから少なくとも３０年間、および最新の試料請求時から少なくとも５年間は保管される。アメリカ合衆国および多くのその他の国々はブダペスト条約に加盟している。

上記の培養菌の生存試験が１９８９年７月５日に行われた。当日、培養菌は生存していた。

国際寄託当局　アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、アメリカ合衆国メリーランド州　２０８５２．　ロックビルニー・ティー・シー・シーを代表する権限を有する者の署名：（ミスイズ）ポピー・ニー・ブラントン、ニー・ティー・シー・シー特許寄託局長日付−１９８９年８月１８日ＦＩＧ、４Ａ −４，４ＦＩＧ、　３ｂＦＩＧ、　６補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成　４年　１月　４日

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒトにおける新生物の診断又は評価方法において、新生物であると疑われる細胞からヒトのＤＮＡを単離する工程；及び前記ＤＮＡ上のＴＣＬ−５遺伝子が転位したものであるかどうかを判定する工程（転位ＴＣＬ−５遺伝子は新生物を示唆する）を含む方法。２．新生物が白血病である請求項１記載の方法。３．新生物が黒色種である請求項１記載の方法。４．ＤＮＡを単離する細胞がヒトのＴリンパ球である請求項１記載の方法。５．ＤＮＡを単離する細胞がヒトのメラニン細胞である請求項１記載の方法。６．判定工程をｔ（１；１４）（ｐ３２；ｑ１１）転座の１ｐ＋染色体の転座結合と制限酵素部位との問に配置された染色体１配列に由来する核酸プローブのハイブリッド化によって実施され、前記部位と転座結合との間に前記酵素のための他の部位が存在しない請求項１記載の方法。７．プローブが転座結合とＥｃｏＲＩ部位との間の配列に由来する請求項１記載の方法。８．判定工程をｔ（１；１４）（ｐ３２；ｑ１１）転座の１ｐ＋染色体の転座結合を含む配列の増幅によって実施する請求項１記載の方法。９．プローブが受け入れ番号第号としてＡＴＣＣに寄託されたｐ５２８Ｂ０．７である請求項７記載の方法。１０．増幅を染色体１４配列と染色体１配列とを含むプライマーを用いて実施する請求項８記載の方法。１１．染色体１４配列がＴＣＲデルタ座のＤデルタ２又はＪデルタ１に由来する請求項１０記載の方法。１２．染色体１配列が受け入れ番号第号としてＡＴＣＣに寄託されたｐ５２８Ｂ０．７上の配列に由来する請求項１０記載の方法。１３．ヒトにおける新生物の診断又は評価方法において、新生物であると疑われる試験細胞をヒトから単離する工程；前記試験細胞中のＴＣＬ−５遺伝子の発現産物置を灘足する工程；及び前記試験細胞中のＴＣＬ−５遺伝子の発現産物量をヒトの健康な細胞から又は健康なヒトから単離した対照細胞中の量と比較する工程（前記対照細胞に比べて、前記試験細胞中のＴＣＬ−５遺伝子の発現産物量が変化することは新生物を示唆する）を含む方法。１４．遺伝子発現産物がＲＮＡ転写体である請求項１３記載の方法。１５．遺伝子発現産物が約５．４ｋｂ、約２、２ｋｂ及び約２．６ｋｂから成る群から選択されるサイズの転写体である請求項１４記載の方法。１６．ｔ（１；１４）（ｐ３２；ｑ１１）転座の１ｐ＋染色体の転座結合と制限酵素部位との間に配置された染色体１配列に由来する核酸プローブであって、前記部位と転座結合との間に前記酵素のための他の部位が存在しないプローブ。１７．制限部位がＥｃｏＲＩである請求項１６記載のプローブ。１８．受け入れ番号第号としてＡＴＣＣに寄託されたｐ５２８Ｂ０．７である請求項１７記載のプローブ。１９．ｔ（１；１４）（ｐ３２；ｑ１１）転座の１ｐ＋染色体の転座結合を増幅するための核酸プライマー対であって、対の１プライマーが染色体１配列に由来し、１プライマーが染色体１４配列に由来する核酸プライマー対。２０．染色体１４配列がＴＣＲデルタ座めＤデルタ２又はＪデルタ１に由来する請求項１９記載のプライマー対。２１．染色体１配列が受け入れ番号第号としてＡＴＣＣに寄託されたｐ５２８Ｂ０．７上の配列に由来する請求項１９記載のプライマー対。２２．ヒトが抗新生物療法を受け、転位ＴＣＬ−５遺伝子の検出が当該療法の効力の尺度である請求項１記載の方法。２３．ヒトの新生物が軽減中であり、転位ＴＣＬ−５遺伝子の検出が最低残留疾患の尺度である請求項１記載の方法。