JPH0542000A - ホルムアルデヒドの定量法 - Google Patents
ホルムアルデヒドの定量法Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 本発明は、ホルムアルデヒドにホルムアルデ
ヒド脱水素酵素を作用させ、そのとき生成する還元型ニ
コチンアデニンジヌクレオチドを測定することを特徴と
するホルムアルデヒドの選択的定量法である。 【効果】 酵素を用いてホルムアルデヒドの測定を選択
的に行うことができ、測定時間が短く、その感度や精度
の向上したホルムアルデヒドの測定方法を提供すること
ができる。
ヒド脱水素酵素を作用させ、そのとき生成する還元型ニ
コチンアデニンジヌクレオチドを測定することを特徴と
するホルムアルデヒドの選択的定量法である。 【効果】 酵素を用いてホルムアルデヒドの測定を選択
的に行うことができ、測定時間が短く、その感度や精度
の向上したホルムアルデヒドの測定方法を提供すること
ができる。
Description
【０００１】本発明は、酵素を用いて高感度な測定を短
時間に行うホルムアルデヒドの定量法に関する。
時間に行うホルムアルデヒドの定量法に関する。
【０００２】
【従来の技術と発明が解決しようとする課題】ホルムア
ルデヒドは、稀薄な溶液でも細胞原形質のタンパク質を
不可逆的に凝固させ、全ての細胞機能を停止、死滅させ
る作用があるために、細胞毒として知られている。その
ため、ホルムアルデヒドを吸引、内服した場合には、様
々な障害を引き起こす。吸引した場合には、呼吸器など
の粘膜を刺激し、咽頭充血、呼吸困難、蛋白尿などの症
状を、内服した場合には、呼吸困難、めまい、嘔吐、胃
けいれんなどが起こるとされている。このような毒性を
考慮して、食品中、大気中、フェノール樹脂などの合成
樹脂食器類などのホルムアルデヒドを測定することが重
要である。
ルデヒドは、稀薄な溶液でも細胞原形質のタンパク質を
不可逆的に凝固させ、全ての細胞機能を停止、死滅させ
る作用があるために、細胞毒として知られている。その
ため、ホルムアルデヒドを吸引、内服した場合には、様
々な障害を引き起こす。吸引した場合には、呼吸器など
の粘膜を刺激し、咽頭充血、呼吸困難、蛋白尿などの症
状を、内服した場合には、呼吸困難、めまい、嘔吐、胃
けいれんなどが起こるとされている。このような毒性を
考慮して、食品中、大気中、フェノール樹脂などの合成
樹脂食器類などのホルムアルデヒドを測定することが重
要である。
【０００３】現在、ホルムアルデヒドの測定方法は、一
般的には衛生試験法に収載されている比色法（アセチル
アセトン、あるいは４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−
メルカプト−１，２，４−トリアゾールによる定量方
法）によって行われている。しかし、これらの方法は測
定範囲が0.5 〜８ ppmと狭く、１検体当たりの測定時間
は30分程度必要とする問題点があった。
般的には衛生試験法に収載されている比色法（アセチル
アセトン、あるいは４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−
メルカプト−１，２，４−トリアゾールによる定量方
法）によって行われている。しかし、これらの方法は測
定範囲が0.5 〜８ ppmと狭く、１検体当たりの測定時間
は30分程度必要とする問題点があった。
【０００４】本発明は、これらの問題点を解決し、短時
間で高感度に行うことができるホルムアルデヒドの定量
法を提供することを目的とする。
間で高感度に行うことができるホルムアルデヒドの定量
法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、ホルムアルデ
ヒドに、ホルムアルデヒド脱水素酵素を作用させ、その
とき生成する還元型ニコチンアデニンジヌクレオチドを
測定することにより、ホルムアルデヒドの選択的定量を
行うことを特徴とする。さらに、酵素反応時に発生する
還元型ニコチンアデニンジヌクレオチドを、還元性色素
の１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルサル
フェート、あるいは還元型ニコチンアデニンジヌクレオ
チドを用いて過酸化水素を発生させ、ルミノールとの化
学発光により高感度に定量する。
ヒドに、ホルムアルデヒド脱水素酵素を作用させ、その
とき生成する還元型ニコチンアデニンジヌクレオチドを
測定することにより、ホルムアルデヒドの選択的定量を
行うことを特徴とする。さらに、酵素反応時に発生する
還元型ニコチンアデニンジヌクレオチドを、還元性色素
の１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルサル
フェート、あるいは還元型ニコチンアデニンジヌクレオ
チドを用いて過酸化水素を発生させ、ルミノールとの化
学発光により高感度に定量する。
【０００６】本発明による１連の反応式を図式化すると
化１の通りである。
化１の通りである。
【０００７】
【化１】
【０００８】ＨＣＨＯ：ホルムアルデヒド、ＦＤＨ：ホ
ルムアルデヒド脱水素酵素、ＨＣＯＯＨ：蟻酸、ＮＡＤ
+ ：酸化型ニコチンアデニンジヌクレオチド、ＮＡＤ
Ｈ：還元型ニコチンアデニンジヌクレオチド、１−ＭＰ
ＭＳ：１−メトキシ−５−メチルフェナチニウムメチル
サルフェート、ＮＯＤ：ＮＡＤＨオキシダーゼ。すなわ
ち、Ｉ式のようにホルムアルデヒド脱水素酵素により測
定対照物のホルムアルデヒドを蟻酸に酸化する。この
時、ホルムアルデヒド量に比例した還元型ニコチンアデ
ニンジヌクレオチドが生成する。次に、II、III 式に示
したように１−メトキシ−５−メチルフェナチニウムメ
チルサルフェートあるいは、還元型ニコチンアデニンジ
ヌクレオチドオキシダーゼにより過酸化水素を生成さ
せ、この過酸化水素を電極反応、化学発光、比色法を用
いて定量することを研究した。その結果２分以内に、0.
1 〜100ppmのホルムアルデヒド測定が可能であると判っ
た。これら一連の反応は溶液状態でも測定可能である
が、望ましくは用いた酵素試薬の固定化操作を行い、酵
素固定化カラムを用いて連続測定を行うフローインジェ
クション分析法システムとして測定する方がよい。しか
し、この操作に関しては何ら限定せしめるものではな
い。
ルムアルデヒド脱水素酵素、ＨＣＯＯＨ：蟻酸、ＮＡＤ
+ ：酸化型ニコチンアデニンジヌクレオチド、ＮＡＤ
Ｈ：還元型ニコチンアデニンジヌクレオチド、１−ＭＰ
ＭＳ：１−メトキシ−５−メチルフェナチニウムメチル
サルフェート、ＮＯＤ：ＮＡＤＨオキシダーゼ。すなわ
ち、Ｉ式のようにホルムアルデヒド脱水素酵素により測
定対照物のホルムアルデヒドを蟻酸に酸化する。この
時、ホルムアルデヒド量に比例した還元型ニコチンアデ
ニンジヌクレオチドが生成する。次に、II、III 式に示
したように１−メトキシ−５−メチルフェナチニウムメ
チルサルフェートあるいは、還元型ニコチンアデニンジ
ヌクレオチドオキシダーゼにより過酸化水素を生成さ
せ、この過酸化水素を電極反応、化学発光、比色法を用
いて定量することを研究した。その結果２分以内に、0.
1 〜100ppmのホルムアルデヒド測定が可能であると判っ
た。これら一連の反応は溶液状態でも測定可能である
が、望ましくは用いた酵素試薬の固定化操作を行い、酵
素固定化カラムを用いて連続測定を行うフローインジェ
クション分析法システムとして測定する方がよい。しか
し、この操作に関しては何ら限定せしめるものではな
い。
【０００９】
【実施例】次に実施例を用い、本発明を具体的に説明す
る。 実施例１ ホルムアルデヒド脱水素酵素の固定化カラムと１−ＭＰ
ＭＳを用いた場合の実施例を以下に示す。 (1) 試薬の調整 ａ）試薬Ｉ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを37.2mg、１−メ
トキシ−５−メチルフェナジニウム メチルサルフェー
トを２mg、酸化型ニコチンアデニンジヌクレオチドを2
8.7mg量り採り、50mMリン酸緩衝液(pH7.0) を用いて200
ml に定容した。
る。 実施例１ ホルムアルデヒド脱水素酵素の固定化カラムと１−ＭＰ
ＭＳを用いた場合の実施例を以下に示す。 (1) 試薬の調整 ａ）試薬Ｉ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを37.2mg、１−メ
トキシ−５−メチルフェナジニウム メチルサルフェー
トを２mg、酸化型ニコチンアデニンジヌクレオチドを2
8.7mg量り採り、50mMリン酸緩衝液(pH7.0) を用いて200
ml に定容した。
【００１０】ｂ）試薬II エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを37.2mg、ルミノ
ールを0.2mg 、ペルオキシダーゼを0.2mg 量り採り、0.
2Mホウ酸緩衝液(pH9.5) を用いて200ml に定容した。 ｃ）試薬III アミノプロピル化処理した多孔質のガラスビーズ（粒径
200 〜400mメッシュ、孔径約500 オングストローム）0.
1gと2.5％グルタルアルデヒド溶液を、緩やかに攪拌し
ながら室温で１時間反応させた。水洗後、グルタルアル
デヒド処理後のガラスビーズと５mgのホルムアルデヒド
脱水素酵素とを混合し、４℃で20時間反応させてアルコ
ールオキシダーゼの固定化酵素を得た。
ールを0.2mg 、ペルオキシダーゼを0.2mg 量り採り、0.
2Mホウ酸緩衝液(pH9.5) を用いて200ml に定容した。 ｃ）試薬III アミノプロピル化処理した多孔質のガラスビーズ（粒径
200 〜400mメッシュ、孔径約500 オングストローム）0.
1gと2.5％グルタルアルデヒド溶液を、緩やかに攪拌し
ながら室温で１時間反応させた。水洗後、グルタルアル
デヒド処理後のガラスビーズと５mgのホルムアルデヒド
脱水素酵素とを混合し、４℃で20時間反応させてアルコ
ールオキシダーゼの固定化酵素を得た。
【００１１】ｄ）試薬IV 試薬III を30×２mm i.d. のカラムに詰め、酵素固定化
カラムを得た。 (2) 測定操作 試薬Ｉ、II、IVを用いて図１に示すような測定システム
を組み測定を行った。試薬Ｉを酵素固定化カラム１の試
薬IVに注入し、これを混合器２を用いて試薬IIと混合
し、化学発光検出器３で測定し、記録計４で読み取っ
た。化学発光の検出は、極大波長が約450nm で行い、検
出器は825-CL (日本分光株式会社製) を用いた。この測
定システムにより求めたホルムアルデヒドに対する検量
線を図２に示した。縦軸は相対発光強度、横軸はホルム
アルデヒド濃度である。
カラムを得た。 (2) 測定操作 試薬Ｉ、II、IVを用いて図１に示すような測定システム
を組み測定を行った。試薬Ｉを酵素固定化カラム１の試
薬IVに注入し、これを混合器２を用いて試薬IIと混合
し、化学発光検出器３で測定し、記録計４で読み取っ
た。化学発光の検出は、極大波長が約450nm で行い、検
出器は825-CL (日本分光株式会社製) を用いた。この測
定システムにより求めたホルムアルデヒドに対する検量
線を図２に示した。縦軸は相対発光強度、横軸はホルム
アルデヒド濃度である。
【００１２】このとき、この検量線は以下のように作成
した。すなわち、ホルムアルデヒドの純品を用い、0.1
〜100ppm濃度に50mMリン酸緩衝液（pH7.0)を用いて調製
した溶液を20μl インジェクターにより注入し、記録計
に出力された信号の高さをそれぞれの濃度に対してプロ
ットすることにより作成した。このとき、記録計に出力
されるシグナルは図３のようになり、この図中、Ａの高
さを計測することにより検量線を作成した。図２の結果
より、ホルムアルデヒドは0.1 〜100ppmまで測定可能で
あることが判り、10ppm のホルムアルデヒドを10回繰り
返し測定した際の変動係数は4.12％と良好な結果が得ら
れた。
した。すなわち、ホルムアルデヒドの純品を用い、0.1
〜100ppm濃度に50mMリン酸緩衝液（pH7.0)を用いて調製
した溶液を20μl インジェクターにより注入し、記録計
に出力された信号の高さをそれぞれの濃度に対してプロ
ットすることにより作成した。このとき、記録計に出力
されるシグナルは図３のようになり、この図中、Ａの高
さを計測することにより検量線を作成した。図２の結果
より、ホルムアルデヒドは0.1 〜100ppmまで測定可能で
あることが判り、10ppm のホルムアルデヒドを10回繰り
返し測定した際の変動係数は4.12％と良好な結果が得ら
れた。
【００１３】実施例２ ホルムアルデヒド脱水素酵素、還元型ニコチンアデニン
ジヌクレオチドオキシダーゼの固定化カラムを用いた場
合の実施例を以下に示す。 (1) 試薬の調整 ａ）試薬Ｖ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを37.2mg、酸化型
ニコチンアデニンジヌクレオチドを28.7mg量り採り、50
mMリン酸緩衝液(pH7.0) を用いて200ml に定容した。 ｂ）試薬II 実施例１の試薬IIと同様に調製した。
ジヌクレオチドオキシダーゼの固定化カラムを用いた場
合の実施例を以下に示す。 (1) 試薬の調整 ａ）試薬Ｖ エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを37.2mg、酸化型
ニコチンアデニンジヌクレオチドを28.7mg量り採り、50
mMリン酸緩衝液(pH7.0) を用いて200ml に定容した。 ｂ）試薬II 実施例１の試薬IIと同様に調製した。
【００１４】ｃ）試薬III 実施例１の試薬III と同様に調製した。 ｄ）実施例VI 実施例１の試薬III と同様に調製し、５mgの還元型ニコ
チンアデニンジヌクレオチドオキシダーゼを用いて還元
型ニコチンアデニンジヌクレオチドオキシダーゼの固定
化酵素を得る。
チンアデニンジヌクレオチドオキシダーゼを用いて還元
型ニコチンアデニンジヌクレオチドオキシダーゼの固定
化酵素を得る。
【００１５】ｅ）試薬VII 試薬III 、VIを同量 (約50mg) 採り、リン酸緩衝液中で
混合した後、これを30×２mm i.d. のカラムに詰め、酵
素固定化カラムを得た。 (2) 測定操作 試薬Ｖ、II、VII を用いて図４に示すような測定システ
ムを組み、測定を行った。試薬Ｖを酵素固定化カラム１
の試薬VII に注入し、これを混合器２を用い試薬IIと混
合し、化学発光検出器３で測定し、記録計４で読み取っ
た。この測定システムにより求めたホルムアルデヒドに
対する検量線を図５に示した。このときの検量線は、実
施例１と同様に作成した。すなわち、ホルムアルデヒド
の純品を用い、0.1 〜100ppm濃度に50mMリン酸緩衝液
（pH7.0)を用いて調製した溶液を20μl インジェクター
より注入し、記録計に出力された信号の高さをそれぞれ
の濃度に対してプロットすることにより作成した。図５
の結果より実施例１と同様にホルムアルデヒドは0.1 〜
100ppmまで測定可能であることが判り、10ppm のホルム
アルデヒドを10回繰り返し測定した際の変動係数は4.23
％と良好な結果が得られた。
混合した後、これを30×２mm i.d. のカラムに詰め、酵
素固定化カラムを得た。 (2) 測定操作 試薬Ｖ、II、VII を用いて図４に示すような測定システ
ムを組み、測定を行った。試薬Ｖを酵素固定化カラム１
の試薬VII に注入し、これを混合器２を用い試薬IIと混
合し、化学発光検出器３で測定し、記録計４で読み取っ
た。この測定システムにより求めたホルムアルデヒドに
対する検量線を図５に示した。このときの検量線は、実
施例１と同様に作成した。すなわち、ホルムアルデヒド
の純品を用い、0.1 〜100ppm濃度に50mMリン酸緩衝液
（pH7.0)を用いて調製した溶液を20μl インジェクター
より注入し、記録計に出力された信号の高さをそれぞれ
の濃度に対してプロットすることにより作成した。図５
の結果より実施例１と同様にホルムアルデヒドは0.1 〜
100ppmまで測定可能であることが判り、10ppm のホルム
アルデヒドを10回繰り返し測定した際の変動係数は4.23
％と良好な結果が得られた。
【００１６】
【発明の効果】本発明によれば、酵素を用いてホルムア
ルデヒドの測定を選択的に行うことができ、測定時間が
短く、その感度や精度の向上したホルムアルデヒドの測
定方法を提供することができる。
ルデヒドの測定を選択的に行うことができ、測定時間が
短く、その感度や精度の向上したホルムアルデヒドの測
定方法を提供することができる。
【図１】実施例１による測定システムの概略図。
【図２】実施例１におけるホルムアルデヒドの検量線を
示すグラフ。縦軸は相対発光強度、横軸は濃度。
示すグラフ。縦軸は相対発光強度、横軸は濃度。
【図３】実施例１における記録計に出力されるシグナル
を示す図。
を示す図。
【図４】実施例２にによる測定システムの概略図。
【図５】実施例２におけるホルムアルデヒドの検量線を
示すグラフ。縦軸は相対発光強度、横軸は濃度。
示すグラフ。縦軸は相対発光強度、横軸は濃度。
１：酵素固定化カラム ２：混合器 ３：化学発光検出器 ４：記録計 ５：インジェクター ６：ポンプ
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成３年１０月１８日
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項７
【補正方法】変更
【補正内容】
Claims (7)
- 【請求項１】ホルムアルデヒドにホルムアルデヒド脱水
素酵素を作用させ、そのとき生成する還元型ニコチンア
デニンジヌクレオチドを測定することを特徴とするホル
ムアルデヒドの選択的定量法。 - 【請求項２】 酵素反応により生成した還元型ニコチン
アデニンジヌクレオチドの測定を、還元性色素を用いて
酸化し、このとき生成する過酸化水素を定量することに
より行う請求項１記載の定量法。 - 【請求項３】 還元性色素が１−メトキシ−５−メチル
フェナジニウムメチルサルフェートであり、これを用い
て酸化し、このとき生成する過酸化水素を定量すること
により行う請求項１または２記載の定量法。 - 【請求項４】 酵素反応により生成した還元型ニコチン
アデニンジヌクレオチドの測定を、還元型ニコチンアデ
ニンジヌクレオチドオキシダーゼにより酸化し、このと
き生成する過酸化水素を定量することにより行う請求項
１記載の定量法。 - 【請求項５】 最終生成物の過酸化水素の定量をルミノ
ールを用いた化学発光測定法により行う請求項２、３ま
たは４記載の定量法。 - 【請求項６】 ホルムアルデヒド脱水素酵素を固定化し
た反応カラムを用いて、フローインジェクション分析法
により定量する請求項２、３または５記載の定量法。 - 【請求項７】 ホルムアルデヒド脱水素酵素と還元型ニ
コチンアデニンジヌクレオチドオキシダーゼを固定化し
た反応カラムを用いてフローインジェクション分析法に
より定量する請求項３または４記載の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3259545A JPH0542000A (ja) | 1991-08-09 | 1991-08-09 | ホルムアルデヒドの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3259545A JPH0542000A (ja) | 1991-08-09 | 1991-08-09 | ホルムアルデヒドの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0542000A true JPH0542000A (ja) | 1993-02-23 |
Family
ID=17335600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3259545A Pending JPH0542000A (ja) | 1991-08-09 | 1991-08-09 | ホルムアルデヒドの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0542000A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009133990A1 (en) * | 2008-04-30 | 2009-11-05 | Lg Electronics Inc. | Air cleaning filter comprising formaldehyde dehydrogenase and process for producing the same |
| CN108660133A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-16 | 浙江古玛环境科技有限公司 | 一种骨架表面固定植物酶的气凝胶及其制备方法和应用 |
-
1991
- 1991-08-09 JP JP3259545A patent/JPH0542000A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009133990A1 (en) * | 2008-04-30 | 2009-11-05 | Lg Electronics Inc. | Air cleaning filter comprising formaldehyde dehydrogenase and process for producing the same |
| US8323940B2 (en) | 2008-04-30 | 2012-12-04 | Lg Electronics Inc. | Air cleaning filter comprising formaldehyde dehydrogenase and process for producing the same |
| CN108660133A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-16 | 浙江古玛环境科技有限公司 | 一种骨架表面固定植物酶的气凝胶及其制备方法和应用 |
| CN108660133B (zh) * | 2018-05-17 | 2020-09-25 | 浙江古玛环境科技有限公司 | 一种骨架表面固定植物酶的气凝胶及其制备方法和应用 |
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