JPH0532614A - ２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基および該基の使用法 - Google Patents
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基および該基の使用法Info
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- JPH0532614A JPH0532614A JP3193151A JP19315191A JPH0532614A JP H0532614 A JPH0532614 A JP H0532614A JP 3193151 A JP3193151 A JP 3193151A JP 19315191 A JP19315191 A JP 19315191A JP H0532614 A JPH0532614 A JP H0532614A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ３’−および／または５’−末端にりん酸残
基を有するオリゴヌクレオチドを合成する際に使用する
りん酸残基の保護基が提供される。 【構成】 ３’−および／または５’−末端にりん酸残
基を有するオリゴヌクレオチドを合成する際に、式
（１） 【化１】 ＭＭＴｒＯ−ＣＨ2 ＣＨ2 ＳＣＨ2 ＣＨ2 − （１） （式中、ＭＭＴｒはモノメトキシトリチル基を示す）で
表わされる２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）
エチルチオ｝エチル基をりん酸残基の保護基として用い
ることにより、オリゴヌクレオチドを有利に合成するこ
とができる。
基を有するオリゴヌクレオチドを合成する際に使用する
りん酸残基の保護基が提供される。 【構成】 ３’−および／または５’−末端にりん酸残
基を有するオリゴヌクレオチドを合成する際に、式
（１） 【化１】 ＭＭＴｒＯ−ＣＨ2 ＣＨ2 ＳＣＨ2 ＣＨ2 − （１） （式中、ＭＭＴｒはモノメトキシトリチル基を示す）で
表わされる２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）
エチルチオ｝エチル基をりん酸残基の保護基として用い
ることにより、オリゴヌクレオチドを有利に合成するこ
とができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、３’−および／または
５’−末端にりん酸残基を有するオリゴヌクレオチド
（以下、オリゴマーと称することもある）を合成する際
に使用する３’−および／または５’−りん酸残基の保
護基に関するものである。
５’−末端にりん酸残基を有するオリゴヌクレオチド
（以下、オリゴマーと称することもある）を合成する際
に使用する３’−および／または５’−りん酸残基の保
護基に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】長鎖オリゴヌクレオチドの合法法の一つ
として、ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼを用いる短鎖オリ
ゴヌクレオチドの結合反応による方法がある。この際、
基質となるオリゴマーは３’−末端水酸基を有するオリ
ゴマー（アクセプター）および５’−末端りん酸残基を
有するオリゴマー（ドナー）の２つのオリゴマーであ
る。従来、５’−りん酸残基を有するオリゴマーは、
５’−水酸基を有するオリゴマーの５’−末端をポリヌ
クレオチドキナーゼとＡＴＰとを用いてりん酸化する方
法により調製されていた。しかし、この酵素的りん酸化
はライゲーションごとに行なわなければならず、このた
め目的とするオリゴマーの収率が低下するという問題を
有していた。また、リガーゼによる結合反応は、ドナー
となるオリゴマーが３’−末端に水酸基を有するため、
環化反応や重合反応などの副反応が生じやすい。この副
反応を防止する方法としては、酵素を用いて３’−末端
水酸基をりん酸残基で保護する方法が報告されている
（「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ； Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」
（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．），１８５〜１９７，ＩＲ
Ｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ／Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
Ｄ．Ｃ．（１９８４））ものの、上述と同様に得られ
るオリゴマーの収率が低いという問題を有していた。上
記問題を解決する方法としては、３’−および／または
５’−末端にりん酸残基を有するオリゴマーを化学的に
合成する方法が挙げられる。
として、ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼを用いる短鎖オリ
ゴヌクレオチドの結合反応による方法がある。この際、
基質となるオリゴマーは３’−末端水酸基を有するオリ
ゴマー（アクセプター）および５’−末端りん酸残基を
有するオリゴマー（ドナー）の２つのオリゴマーであ
る。従来、５’−りん酸残基を有するオリゴマーは、
５’−水酸基を有するオリゴマーの５’−末端をポリヌ
クレオチドキナーゼとＡＴＰとを用いてりん酸化する方
法により調製されていた。しかし、この酵素的りん酸化
はライゲーションごとに行なわなければならず、このた
め目的とするオリゴマーの収率が低下するという問題を
有していた。また、リガーゼによる結合反応は、ドナー
となるオリゴマーが３’−末端に水酸基を有するため、
環化反応や重合反応などの副反応が生じやすい。この副
反応を防止する方法としては、酵素を用いて３’−末端
水酸基をりん酸残基で保護する方法が報告されている
（「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ； Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」
（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．），１８５〜１９７，ＩＲ
Ｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ／Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ
Ｄ．Ｃ．（１９８４））ものの、上述と同様に得られ
るオリゴマーの収率が低いという問題を有していた。上
記問題を解決する方法としては、３’−および／または
５’−末端にりん酸残基を有するオリゴマーを化学的に
合成する方法が挙げられる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上記化学的合成法にお
ける５’−りん酸残基の保護基としては、３’−りん
酸残基の保護基である２−シアノエチル基の除去条件で
安定であること、脱保護時に容易に除去できること、
オリゴヌクレオチドの合成時の縮合反応の簡易な定量
が行なえること、および高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）による精製が容易に行なえること、の各条
件を満足するものが好ましく、これらの各条件を満足す
るものは３’−りん酸残基の保護基の条件をも満たすも
のであるが、現在までにこのような各条件を充足する性
質を有する保護基は報告されていない。
ける５’−りん酸残基の保護基としては、３’−りん
酸残基の保護基である２−シアノエチル基の除去条件で
安定であること、脱保護時に容易に除去できること、
オリゴヌクレオチドの合成時の縮合反応の簡易な定量
が行なえること、および高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）による精製が容易に行なえること、の各条
件を満足するものが好ましく、これらの各条件を満足す
るものは３’−りん酸残基の保護基の条件をも満たすも
のであるが、現在までにこのような各条件を充足する性
質を有する保護基は報告されていない。
【０００４】よって、本発明は、３’−および／または
５’−末端にりん酸残基を有するオリゴマーを合成する
際に使用するりん酸残基の保護基であって、上記の〜
条件を充足する保護基を提供することを目的とするも
のである。
５’−末端にりん酸残基を有するオリゴマーを合成する
際に使用するりん酸残基の保護基であって、上記の〜
条件を充足する保護基を提供することを目的とするも
のである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
達成すべく、鋭意研究を重ねた結果、
達成すべく、鋭意研究を重ねた結果、
【０００６】式（１）
【化２】
ＭＭＴｒＯ−ＣＨ2 ＣＨ2 ＳＣＨ2 ＣＨ2 − （１）
【０００７】（式中、ＭＭＴｒはモノメトキシトリチル
基を示す）で表わされる２−｛２−（モノメトキシトリ
チルオキシ）エチルチオ｝エチル基が上記の〜の各
条件を満足するものであることを知見し、本発明を完成
させた。
基を示す）で表わされる２−｛２−（モノメトキシトリ
チルオキシ）エチルチオ｝エチル基が上記の〜の各
条件を満足するものであることを知見し、本発明を完成
させた。
【０００８】すなわち、本発明は、上記式（１）で表わ
される２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチ
ルチオ｝エチル基に関するものである。また、本発明
は、３’−および／または５’−末端にりん酸残基を有
するオリゴヌクレオチドを合成する方法において、３’
−および／または５’−りん酸残基の保護基として上記
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エチル基を使用する方法に関するものである。更
に、本発明は、ヌクレオチドと２−｛２−（モノメトキ
シトリチルオキシ）エチルチオ｝エタノールとを縮合剤
の存在下に反応させることによりヌクレオチドの３’−
および／または５’−りん酸残基に保護基として２−
｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エ
チル基を導入する方法に関するものである。
される２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチ
ルチオ｝エチル基に関するものである。また、本発明
は、３’−および／または５’−末端にりん酸残基を有
するオリゴヌクレオチドを合成する方法において、３’
−および／または５’−りん酸残基の保護基として上記
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エチル基を使用する方法に関するものである。更
に、本発明は、ヌクレオチドと２−｛２−（モノメトキ
シトリチルオキシ）エチルチオ｝エタノールとを縮合剤
の存在下に反応させることによりヌクレオチドの３’−
および／または５’−りん酸残基に保護基として２−
｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エ
チル基を導入する方法に関するものである。
【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エチル基（以下、本発明の保護基と称することもあ
る）は上記式（１）で表わされるものである。トリチル
基中のモノメトキシ基の置換位置は特に制限されず、オ
ルト、メタ、パラのいずれの位置であってもよい。
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エチル基（以下、本発明の保護基と称することもあ
る）は上記式（１）で表わされるものである。トリチル
基中のモノメトキシ基の置換位置は特に制限されず、オ
ルト、メタ、パラのいずれの位置であってもよい。
【００１０】本発明の保護基は、２，２’−チオジエタ
ノールとハロゲン化モノメトキシトリチル（たとえば、
モノメトキシトリチルクロライド、モノメトキシトリチ
ルブロマイドなど）とを反応溶媒（塩化メチレン、クロ
ロホルム、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、
ピリジンなどの単独または混合溶媒）中、０〜１００℃
で反応させることにより２−｛２−（モノメトキシトリ
チルオキシ）エチルチオ｝エタノールの形で調製するこ
とができる。
ノールとハロゲン化モノメトキシトリチル（たとえば、
モノメトキシトリチルクロライド、モノメトキシトリチ
ルブロマイドなど）とを反応溶媒（塩化メチレン、クロ
ロホルム、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、
ピリジンなどの単独または混合溶媒）中、０〜１００℃
で反応させることにより２−｛２−（モノメトキシトリ
チルオキシ）エチルチオ｝エタノールの形で調製するこ
とができる。
【００１１】反応液中にトリエチルアミン、ピリジン、
ピコリン、ジエチルアミノピリジン等の酸受容体を共存
させておくことにより反応を効率よく進行させることが
できる。反応後、２−｛２−（モノメトキシトリチルオ
キシ）エチルチオ｝エタノールはシリカゲル等を使用し
た吸着クロマトグラフィー法により単離精製することが
できる。
ピコリン、ジエチルアミノピリジン等の酸受容体を共存
させておくことにより反応を効率よく進行させることが
できる。反応後、２−｛２−（モノメトキシトリチルオ
キシ）エチルチオ｝エタノールはシリカゲル等を使用し
た吸着クロマトグラフィー法により単離精製することが
できる。
【００１２】本発明の保護基は３’−および／または
５’−末端にりん酸残基を有するＤＮＡ型またはＲＮＡ
型オリゴヌクレオチドの合成に使用することができる。
まず、ヌクレオチドの３’−および／または５’−末端
に本発明の保護基を導入し、以下、通常の方法（たとえ
ば、りん酸トリエステル法、ホスファイト法など）に従
って目的とするオリゴヌクレオチドを合成すればよい。
５’−末端にりん酸残基を有するＤＮＡ型またはＲＮＡ
型オリゴヌクレオチドの合成に使用することができる。
まず、ヌクレオチドの３’−および／または５’−末端
に本発明の保護基を導入し、以下、通常の方法（たとえ
ば、りん酸トリエステル法、ホスファイト法など）に従
って目的とするオリゴヌクレオチドを合成すればよい。
【００１３】ヌクレオチドへの本発明の保護基の導入
は、たとえば、ヌクレオチド１モルに対して２−｛２−
（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エタノー
ル１〜２倍モル使用し、反応溶媒（ピリジン、ピコリ
ン、塩化メチレン、などの単独または混合溶媒）中、通
常の縮合剤（たとえば、２，４，６−トリイソプロピル
ベンゼンスルホニルクロライド−１−メチルイミダゾー
ル系、８−キノリンスルホニルクロライド−１−メチル
イミダゾール系、２，４，６−トリメチルベンゼンスル
ホニル−３−ニトロトリアゾリド、２，４，６−トリイ
ソプロピルベンゼンスルホニル−３−ニトロトリアゾリ
ドなど）の存在下、０〜５０℃で反応させることにより
実施することができる。
は、たとえば、ヌクレオチド１モルに対して２−｛２−
（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エタノー
ル１〜２倍モル使用し、反応溶媒（ピリジン、ピコリ
ン、塩化メチレン、などの単独または混合溶媒）中、通
常の縮合剤（たとえば、２，４，６−トリイソプロピル
ベンゼンスルホニルクロライド−１−メチルイミダゾー
ル系、８−キノリンスルホニルクロライド−１−メチル
イミダゾール系、２，４，６−トリメチルベンゼンスル
ホニル−３−ニトロトリアゾリド、２，４，６−トリイ
ソプロピルベンゼンスルホニル−３−ニトロトリアゾリ
ドなど）の存在下、０〜５０℃で反応させることにより
実施することができる。
【００１４】反応後、本発明の保護基を３’−および／
または５’−末端に有するヌクレオチドは、必要により
シリカゲル等を使用した吸着クロマトグラフィー、再結
晶法等のヌクレオチドの通常の単離精製法により単離精
製することができる。
または５’−末端に有するヌクレオチドは、必要により
シリカゲル等を使用した吸着クロマトグラフィー、再結
晶法等のヌクレオチドの通常の単離精製法により単離精
製することができる。
【００１５】以下、実施例を示し、本発明を具体的に説
明する。
明する。
【００１６】実施例１２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エタノールの合成および、ヌクレオチドへの２−
｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エ
チル基の導入 ２，２’−チオジエタノール（４．５１ml，７５ｍｍｏ
ｌ）とモノメトキシトリチルクロリド（４．６３２２
ｇ，１５ｍｍｏｌ）とを塩化メチレン（６０ml）に溶か
し、トリエチルアミン（２．１７ml，１５ｍｍｏｌ）を
滴下しながら攪拌し、さらに室温で１時間攪拌した。塩
化メチレンで抽出し、水で洗浄して有機層を減圧下濃縮
した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ｎ−ヘキサンークロロホルム系）により精製して、２
−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝
エタノールを収率７０％（４．１７１ｇ，１０．５７１
８ｍｍｏｌ）で得た。 1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 −ＴＭＳ）δ；２．１０〜
２．３３（１Ｈ，ｍ，−ＯＨ），２．６５（４Ｈ，ｔ，
−ＣＨ2 ×２），３．３０（２Ｈ，ｔ，−ＣＨ2 −），
３．６３（２Ｈ，ｔ，−ＣＨ2 −），３．８３（３Ｈ，
ｓ，ＯＣＨ3 ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａ
ｒ−Ｈ），７．００〜７．６０（１２Ｈ，ｍ，Ａｒ−
Ｈ） さらに下記構造式１で表わされるウリジン誘導体（１）
（０．５２８３ｇ，０．５ｍｍｏｌ）と２−｛２−（モ
ノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エタノール
（０．３７４０ｇ，０．７５ｍｍｏｌ）をピリジンで共
沸脱水した後、ピリジン（２．５ml）に溶かし２，４，
６−トリイソプロピルベンゼスルホニルクロライド（Ｔ
ＰＳＣｌ）（０．４５４３ｇ，１．５ｍｍｏｌ）、１−
メチルイミダゾール（１−Ｍｅｉｍ）（０．２３９ml、
３．０ｍｍｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。その
後、塩化メチレンで抽出して水で洗浄した。有機層を減
圧下濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにより精製して、３’−りん酸基に２−｛２−（モ
ノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基を導
入した下記構造式２で表わされるウリジン誘導体（２）
を収率３１％（０．２００ｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）で
得た。
オ｝エタノールの合成および、ヌクレオチドへの２−
｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エ
チル基の導入 ２，２’−チオジエタノール（４．５１ml，７５ｍｍｏ
ｌ）とモノメトキシトリチルクロリド（４．６３２２
ｇ，１５ｍｍｏｌ）とを塩化メチレン（６０ml）に溶か
し、トリエチルアミン（２．１７ml，１５ｍｍｏｌ）を
滴下しながら攪拌し、さらに室温で１時間攪拌した。塩
化メチレンで抽出し、水で洗浄して有機層を減圧下濃縮
した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ｎ−ヘキサンークロロホルム系）により精製して、２
−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝
エタノールを収率７０％（４．１７１ｇ，１０．５７１
８ｍｍｏｌ）で得た。 1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 −ＴＭＳ）δ；２．１０〜
２．３３（１Ｈ，ｍ，−ＯＨ），２．６５（４Ｈ，ｔ，
−ＣＨ2 ×２），３．３０（２Ｈ，ｔ，−ＣＨ2 −），
３．６３（２Ｈ，ｔ，−ＣＨ2 −），３．８３（３Ｈ，
ｓ，ＯＣＨ3 ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａ
ｒ−Ｈ），７．００〜７．６０（１２Ｈ，ｍ，Ａｒ−
Ｈ） さらに下記構造式１で表わされるウリジン誘導体（１）
（０．５２８３ｇ，０．５ｍｍｏｌ）と２−｛２−（モ
ノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エタノール
（０．３７４０ｇ，０．７５ｍｍｏｌ）をピリジンで共
沸脱水した後、ピリジン（２．５ml）に溶かし２，４，
６−トリイソプロピルベンゼスルホニルクロライド（Ｔ
ＰＳＣｌ）（０．４５４３ｇ，１．５ｍｍｏｌ）、１−
メチルイミダゾール（１−Ｍｅｉｍ）（０．２３９ml、
３．０ｍｍｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。その
後、塩化メチレンで抽出して水で洗浄した。有機層を減
圧下濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにより精製して、３’−りん酸基に２−｛２−（モ
ノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基を導
入した下記構造式２で表わされるウリジン誘導体（２）
を収率３１％（０．２００ｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）で
得た。
【００１７】
【化３】
【００１８】（式中、ＭＭＴｒは前記と同意義、Ａｎは
アニソイル基、ＤＭＴｒはジメトキシトリチル基、ＴＨ
Ｐはテトラヒドロピラニル基、Ｅｔはエチル基、ＰｈＣ
ｌはｏ−クロロフェニル基を示す）
アニソイル基、ＤＭＴｒはジメトキシトリチル基、ＴＨ
Ｐはテトラヒドロピラニル基、Ｅｔはエチル基、ＰｈＣ
ｌはｏ−クロロフェニル基を示す）
【００１９】ウリジン誘導体（２）の 1Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ
ＤＣｌ3 −ＴＭＳ）δ：１．３３−１．６７（６Ｈ，
ｍ，ＣＣＨ2 ×３），２．５３−２．８０（４Ｈ，ｍ，
ＣＨ2 ×２），３．２３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ
2 ），３．４７−３．６３（２Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2 ），
３．７７（１２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ×４），３．８０−
３．８７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５’，５”），４．０７−
４．３３（２Ｈ，ｍ，ＰＯＣＨ2 ）４．３７−４．５０
（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’），４．６７−４．９３（２Ｈ，
ｍ，ＯＣＨ，Ｈ−２’），５．１３−５．３６（１Ｈ，
ｍ，Ｈ−３’），５．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ56＝７．５Ｈ
ｚ，Ｈ−５），６．２０，６．３５（１Ｈ，ｄ×２，Ｊ
1'2'＝６Ｈｚ，Ｊ1'2'＝７．５Ｈｚ，Ｈ−１’）６．８
０−７．６０（３３Ｈ，ｍ，Ｐｈ−Ｈ），７．７５（１
Ｈ，ｄ，Ｈ−６），７．９５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，
Ｐｈ−Ｈ）
ＤＣｌ3 −ＴＭＳ）δ：１．３３−１．６７（６Ｈ，
ｍ，ＣＣＨ2 ×３），２．５３−２．８０（４Ｈ，ｍ，
ＣＨ2 ×２），３．２３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ
2 ），３．４７−３．６３（２Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2 ），
３．７７（１２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3 ×４），３．８０−
３．８７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５’，５”），４．０７−
４．３３（２Ｈ，ｍ，ＰＯＣＨ2 ）４．３７−４．５０
（１Ｈ，ｍ，Ｈ−４’），４．６７−４．９３（２Ｈ，
ｍ，ＯＣＨ，Ｈ−２’），５．１３−５．３６（１Ｈ，
ｍ，Ｈ−３’），５．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ56＝７．５Ｈ
ｚ，Ｈ−５），６．２０，６．３５（１Ｈ，ｄ×２，Ｊ
1'2'＝６Ｈｚ，Ｊ1'2'＝７．５Ｈｚ，Ｈ−１’）６．８
０−７．６０（３３Ｈ，ｍ，Ｐｈ−Ｈ），７．７５（１
Ｈ，ｄ，Ｈ−６），７．９５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，
Ｐｈ−Ｈ）
【００２０】２−（２−（モノメトキシトリチルオキ
シ）エチルチオ）エチル基の除去 ウリジン誘導体（２）（０．１ｇ，０．０７８ｍｍｏ
ｌ）に０．５Ｍ Ｎ1 ，Ｎ 1 ，Ｎ3 ，Ｎ3 −テトラメチ
ルグアニジウム−（Ｅ）−２−ピリジンアルドオキシマ
ート（ＴＭＧ−ＰＡＯ）（０．５ml）を加え室温で３時
間放置した。塩化メチレン（１００ml）で抽出し０．２
Ｍテトラエチルアンモニウムブロミド（ＴＥＡＢ）（５
０ml×２）で洗浄した。有機層を減圧下濃縮し、残留物
に０．２ＭＴＥＡＢ−ピリジン（２：１ｖ／ｖ）（１０
０ml）を加え抽出し、ジエチルエーテル（５０ml×２）
で洗浄した。有機層を減圧下濃縮し、残留物に０．２Ｍ
１−クロロコハク酸イミド（ＮＣＳ）／０．４Ｍ Ｔ
ＥＡＢ：１，４−ジオキサン（１：１ｖ／ｖ）溶液（５
ml）を加えて溶かし、室温で２時間放置した。その後、
０．２Ｍ ＴＥＡＢ（５ml）を加えジエチルエーテル
（５ml×２）で洗浄した。水層を減圧下濃縮し、残留物
に濃アンモニア水（５ml）−ピリジン（０．５ml）を加
え室温で２０時間放置した。減圧下濃縮し、残留物にpH
２の塩酸溶液（５ml）を加えさらに２２時間放置した。
希アンモニア水で中和した後、水１０mlを加えジエチル
エーテル（５ml×２）で洗浄した。水層を減圧下濃縮
し、ペーパークロマトグラフィー（東洋漉紙Ｎｏ．５
１；ＩＰＡ：ｃｏｎｃ．ＮＨ4 ＯＨ：Ｈ 2 Ｏ＝７：１：
２ｖ／ｖ／ｖ）により完全に脱保護されていることを確
認した。
シ）エチルチオ）エチル基の除去 ウリジン誘導体（２）（０．１ｇ，０．０７８ｍｍｏ
ｌ）に０．５Ｍ Ｎ1 ，Ｎ 1 ，Ｎ3 ，Ｎ3 −テトラメチ
ルグアニジウム−（Ｅ）−２−ピリジンアルドオキシマ
ート（ＴＭＧ−ＰＡＯ）（０．５ml）を加え室温で３時
間放置した。塩化メチレン（１００ml）で抽出し０．２
Ｍテトラエチルアンモニウムブロミド（ＴＥＡＢ）（５
０ml×２）で洗浄した。有機層を減圧下濃縮し、残留物
に０．２ＭＴＥＡＢ−ピリジン（２：１ｖ／ｖ）（１０
０ml）を加え抽出し、ジエチルエーテル（５０ml×２）
で洗浄した。有機層を減圧下濃縮し、残留物に０．２Ｍ
１−クロロコハク酸イミド（ＮＣＳ）／０．４Ｍ Ｔ
ＥＡＢ：１，４−ジオキサン（１：１ｖ／ｖ）溶液（５
ml）を加えて溶かし、室温で２時間放置した。その後、
０．２Ｍ ＴＥＡＢ（５ml）を加えジエチルエーテル
（５ml×２）で洗浄した。水層を減圧下濃縮し、残留物
に濃アンモニア水（５ml）−ピリジン（０．５ml）を加
え室温で２０時間放置した。減圧下濃縮し、残留物にpH
２の塩酸溶液（５ml）を加えさらに２２時間放置した。
希アンモニア水で中和した後、水１０mlを加えジエチル
エーテル（５ml×２）で洗浄した。水層を減圧下濃縮
し、ペーパークロマトグラフィー（東洋漉紙Ｎｏ．５
１；ＩＰＡ：ｃｏｎｃ．ＮＨ4 ＯＨ：Ｈ 2 Ｏ＝７：１：
２ｖ／ｖ／ｖ）により完全に脱保護されていることを確
認した。
【００２１】実施例２シチジン３’，５’−ジホスフェイト誘導体の合成
下記構造式３で表わされるシチジン誘導体（３）（１．
２６８ｇ，１．８３４９ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸脱
水した後、塩化メチレン（１０ml）に溶かし、２−クロ
ロフェニルホスホロジクロリド（０．４５３０ml，２．
７５２５ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１０ml）に攪拌し
つつ２時間かけて滴下し、さらに３０分攪拌した。水
（１ml）で反応を停止した後、減圧下濃縮した。残留物
を水−ピリジン（２：１）溶液（１００ml）で抽出しエ
ーテル（５０ml×３）で洗浄し、水層を減圧下濃縮し下
記構造式４で表わされるシチジン誘導体（４）を収率６
７％（１．２０２ｇ，１．２２３１ｍｍｏｌ）で得た。
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エタノール（１．４３５６ｇ，３．６３８７ｍｍｏ
ｌ）とシチジン誘導体（４）（１．１９２ｇ，１．２１
２９ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸脱水した後、ピリジン
（６ml）に溶かし８−キノリンスルホニルクロライド
（ＱＳＣｌ）（０．８２４ｇ，３．６３８７ｍｍｏ
ｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．５８ml，７．２７７４ｍｍｏ
ｌ）を加え１時間攪拌した。析出した８−キノリンスル
ホン酸（ＱＳ）の分子内塩を濾別した後、濾液に冷水
（２ml）を加えて反応を停止させ、水（１５ml）および
ピリジン（６ml）を加えジエチルエーテル（３０ml×
３）で抽出し、有機層を水−ピリジン（２：１）溶液
（１５ml×２）で洗浄した。有機層を減圧下濃縮しシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して下記構
造式５で表わされるシチジン誘導体（５）を収率３８％
（０．５８８ｇ，０．４６５２ｍｍｏｌ）で得た。
２６８ｇ，１．８３４９ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸脱
水した後、塩化メチレン（１０ml）に溶かし、２−クロ
ロフェニルホスホロジクロリド（０．４５３０ml，２．
７５２５ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１０ml）に攪拌し
つつ２時間かけて滴下し、さらに３０分攪拌した。水
（１ml）で反応を停止した後、減圧下濃縮した。残留物
を水−ピリジン（２：１）溶液（１００ml）で抽出しエ
ーテル（５０ml×３）で洗浄し、水層を減圧下濃縮し下
記構造式４で表わされるシチジン誘導体（４）を収率６
７％（１．２０２ｇ，１．２２３１ｍｍｏｌ）で得た。
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エタノール（１．４３５６ｇ，３．６３８７ｍｍｏ
ｌ）とシチジン誘導体（４）（１．１９２ｇ，１．２１
２９ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸脱水した後、ピリジン
（６ml）に溶かし８−キノリンスルホニルクロライド
（ＱＳＣｌ）（０．８２４ｇ，３．６３８７ｍｍｏ
ｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．５８ml，７．２７７４ｍｍｏ
ｌ）を加え１時間攪拌した。析出した８−キノリンスル
ホン酸（ＱＳ）の分子内塩を濾別した後、濾液に冷水
（２ml）を加えて反応を停止させ、水（１５ml）および
ピリジン（６ml）を加えジエチルエーテル（３０ml×
３）で抽出し、有機層を水−ピリジン（２：１）溶液
（１５ml×２）で洗浄した。有機層を減圧下濃縮しシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して下記構
造式５で表わされるシチジン誘導体（５）を収率３８％
（０．５８８ｇ，０．４６５２ｍｍｏｌ）で得た。
【００２２】シチジン誘導体（５）（０．５７８ｇ，
０．４５５８ｍｍｏｌ）にトリエチルアミン−ピリジン
（１：３ｖ／ｖ）（５ml）を加え２時間攪拌した。減圧
下濃縮して下記構造式６で表わされるシチジン誘導体
（６）を定量的に得た。この際５’−りん酸に導入した
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エチル基が損なわれていないことはＭＭＴｒ基の酸
による発色で確認した。すなわち、６０％過塩素酸−エ
タノール（３：２（ｖ／ｖ））溶液にて発色させ、４７
０ｎｍでの吸光度を測定し、ε470 ＝５６０００（Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１１，４３６５（１
９８３））よりＭＭＴｒ基の量を算定する方法によっ
た。
０．４５５８ｍｍｏｌ）にトリエチルアミン−ピリジン
（１：３ｖ／ｖ）（５ml）を加え２時間攪拌した。減圧
下濃縮して下記構造式６で表わされるシチジン誘導体
（６）を定量的に得た。この際５’−りん酸に導入した
２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチ
オ｝エチル基が損なわれていないことはＭＭＴｒ基の酸
による発色で確認した。すなわち、６０％過塩素酸−エ
タノール（３：２（ｖ／ｖ））溶液にて発色させ、４７
０ｎｍでの吸光度を測定し、ε470 ＝５６０００（Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，１１，４３６５（１
９８３））よりＭＭＴｒ基の量を算定する方法によっ
た。
【００２３】
【化４】
【化５】
【００２４】（式中、Ａｎ，ＴＨＰ，ＰｈＣｌ，Ｅｔ，
ＭＭＴｒは前記と同意義）
ＭＭＴｒは前記と同意義）
【００２５】
シチジン誘導体（５）の元素分析値 Ｃ61Ｈ62Ｎ4 Ｏ9 Ｐ2 ＳＣｌ2 として
Ｃ Ｈ Ｎ
計算値（％） ５７．６０ ４．９２ ４．４０
実測値（％） ５７．６２ ４．９１ ４．４３
【００２６】実施例３１１量体の合成
図１〜３の反応スキームで１１量体を合成した。
【００２７】２量体の合成
シチジン誘導体（６）（０．８４９３ｇ，０．６４５２
ｍｍｏｌ）と下記構造式７で表わされるウリジン誘導体
（７）（０．３７９６ｇ，０．５３７７ｍｍｏｌ）を共
沸脱水した後、ピリジン（３ml）に溶かし、ＱＳ（０．
４４０７ｇ，１．９３５６ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ
（０．３０８６ml，３．８７１２ｍｍｏｌ）を加え２時
間攪拌した。析出したＱＳの分子内塩を吸引濾過により
除去し、濾液に水（１ml）を加えて反応を停止し、水−
ピリジン（４：１ｖ／ｖ）溶液（２５ml）を加えジエチ
ルエーテル（３０ml×３）で抽出した。有機層を減圧下
濃縮してグラス状の図１の化学式８で表わされる２量体
（８）を収率８６％（０．８８３ｇ，０．４６１５ｍｍ
ｏｌ）で得た。
ｍｍｏｌ）と下記構造式７で表わされるウリジン誘導体
（７）（０．３７９６ｇ，０．５３７７ｍｍｏｌ）を共
沸脱水した後、ピリジン（３ml）に溶かし、ＱＳ（０．
４４０７ｇ，１．９３５６ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ
（０．３０８６ml，３．８７１２ｍｍｏｌ）を加え２時
間攪拌した。析出したＱＳの分子内塩を吸引濾過により
除去し、濾液に水（１ml）を加えて反応を停止し、水−
ピリジン（４：１ｖ／ｖ）溶液（２５ml）を加えジエチ
ルエーテル（３０ml×３）で抽出した。有機層を減圧下
濃縮してグラス状の図１の化学式８で表わされる２量体
（８）を収率８６％（０．８８３ｇ，０．４６１５ｍｍ
ｏｌ）で得た。
【００２８】下記構造式９で表わされるシチジン誘導体
（９）（２．８７５ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）と下記構造
式１０で表わされるグアノシン誘導体（１０）（１．６
９０ｇ，２．３ｍｍｏｌ）を共沸脱水した後、ピリジン
（１１．５ml）に溶かし、ＱＳ（１．８８５０ｇ，８．
２８ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（１．３２０１ml，１
６．５６ｍｍｏｌ）を加え２時間攪拌した。析出したＱ
Ｓの分子内塩を吸引濾過により除去し、濾液に水（１m
l）を加えて反応を停止し、水−ピリジン（４：１ｖ／
ｖ）溶液（５０ml）を加えジエチルエーテル（４０ml×
３）で抽出した。有機層を減圧下濃縮してグラス状の図
１の化学式１１で表わされる２量体（１１）を収率９５
％（３．６５２ｇ，２．１９１４ｍｍｏｌ）で得た。
（９）（２．８７５ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）と下記構造
式１０で表わされるグアノシン誘導体（１０）（１．６
９０ｇ，２．３ｍｍｏｌ）を共沸脱水した後、ピリジン
（１１．５ml）に溶かし、ＱＳ（１．８８５０ｇ，８．
２８ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（１．３２０１ml，１
６．５６ｍｍｏｌ）を加え２時間攪拌した。析出したＱ
Ｓの分子内塩を吸引濾過により除去し、濾液に水（１m
l）を加えて反応を停止し、水−ピリジン（４：１ｖ／
ｖ）溶液（５０ml）を加えジエチルエーテル（４０ml×
３）で抽出した。有機層を減圧下濃縮してグラス状の図
１の化学式１１で表わされる２量体（１１）を収率９５
％（３．６５２ｇ，２．１９１４ｍｍｏｌ）で得た。
【００２９】
【化６】
【化７】
【００３０】（式中、Ａｎ，ＴＨＰ，ＰｈＣｌ，ＤＭＴ
ｒ，Ｅｔは前記と同意義、ＣＥはシアノエチル基、ｉＢ
ｕはイソブチリル基を示す）
ｒ，Ｅｔは前記と同意義、ＣＥはシアノエチル基、ｉＢ
ｕはイソブチリル基を示す）
【００３１】４量体の５’−末端りん酸トリエステル−
３’−末端りん酸トリエステル誘導体（１４）の合成 ２量体（８）（０．４９１ｇ，０．２５９２ｍｍｏｌ）
は、トリエチルアミン−ピリジン（１：３ｖ／ｖ）（４
ml）に溶かし室温で２時間攪拌した後反応溶液を減圧下
濃縮しりん酸部の保護基である２−シアノエチル基を除
去し図１の化学式１２で表わされる２量体（１２）を収
率９１％（０．４２６ｇ，０．２３５６ｍｍｏｌ）で得
た。一方２量体（１１）（１．８７６５ｇ，１．１２６
０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１０ｍ）に溶かし氷冷下
４％ジクロロ酢酸／塩化メチレン溶液（１０ｍ）を加え
て１５分間反応させＤＭＴｒ基を除去した。その後５％
炭酸水素ナトリウム溶液を加えて中和し、クロロホルム
（５０ml）で抽出、さらに水（２０ml×２）で洗浄した
後有機層を減圧下濃縮した。残留物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィーにより精製し図１の化学式１３で表
わされる２量体（１３）を定量的に得た。このようにし
て合成した２量体（１２）（０．４２６ｇ，０．２３５
６ｍｍｏｌ）および２量体（１３）（０．２６７８ｇ，
０．１９６３ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸脱水した後、
ピリジン（３ml）に溶かしＱＳ（０．１６０９ｇ，０．
７０６８ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．１１２７ml，
１．４１３６ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間攪拌し
た。析出したＱＳの分子内塩を吸引濾過により除去し、
濾液に水（０．５ml）を加えて反応を停止し、水−ピリ
ジン（４：１ｖ／ｖ）溶液（２５ml）を加えジエチルエ
ーテル（３０ml×３）で抽出した。有機層を減圧下濃縮
しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して
グラス状の図１の化学式１４で表わされる４量体（１
４）を収率４４％（０．０８５９１ｍｍｏｌ）で得た。
３’−末端りん酸トリエステル誘導体（１４）の合成 ２量体（８）（０．４９１ｇ，０．２５９２ｍｍｏｌ）
は、トリエチルアミン−ピリジン（１：３ｖ／ｖ）（４
ml）に溶かし室温で２時間攪拌した後反応溶液を減圧下
濃縮しりん酸部の保護基である２−シアノエチル基を除
去し図１の化学式１２で表わされる２量体（１２）を収
率９１％（０．４２６ｇ，０．２３５６ｍｍｏｌ）で得
た。一方２量体（１１）（１．８７６５ｇ，１．１２６
０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１０ｍ）に溶かし氷冷下
４％ジクロロ酢酸／塩化メチレン溶液（１０ｍ）を加え
て１５分間反応させＤＭＴｒ基を除去した。その後５％
炭酸水素ナトリウム溶液を加えて中和し、クロロホルム
（５０ml）で抽出、さらに水（２０ml×２）で洗浄した
後有機層を減圧下濃縮した。残留物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィーにより精製し図１の化学式１３で表
わされる２量体（１３）を定量的に得た。このようにし
て合成した２量体（１２）（０．４２６ｇ，０．２３５
６ｍｍｏｌ）および２量体（１３）（０．２６７８ｇ，
０．１９６３ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸脱水した後、
ピリジン（３ml）に溶かしＱＳ（０．１６０９ｇ，０．
７０６８ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．１１２７ml，
１．４１３６ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間攪拌し
た。析出したＱＳの分子内塩を吸引濾過により除去し、
濾液に水（０．５ml）を加えて反応を停止し、水−ピリ
ジン（４：１ｖ／ｖ）溶液（２５ml）を加えジエチルエ
ーテル（３０ml×３）で抽出した。有機層を減圧下濃縮
しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して
グラス状の図１の化学式１４で表わされる４量体（１
４）を収率４４％（０．０８５９１ｍｍｏｌ）で得た。
【００３２】４量体の５’−末端りん酸トリエステル−
３’−末端りん酸ジエステル誘導体（１５）の合成 ４量体（１４）（０．０８５９１ｍｍｏｌ）をトリエチ
ルアミン−ピリジン（１：３ｖ／ｖ）（１ml）を加えて
２時間攪拌し減圧下濃縮した。残留物をＣ−１８逆相カ
ラムクロマトグラフィーにより精製して図１の化学式１
５で表わされる４量体（１５）を収率６０％（０．１６
９ｇ，０．０５１７７ｍｍｏｌ）で得た。同様にして図
２に示す順序で５’−末端にりん酸残基を有しない図２
の化学式１６で表わされる６量体の３’−末端りん酸ジ
エステル誘導体（１６）を合成した。
３’−末端りん酸ジエステル誘導体（１５）の合成 ４量体（１４）（０．０８５９１ｍｍｏｌ）をトリエチ
ルアミン−ピリジン（１：３ｖ／ｖ）（１ml）を加えて
２時間攪拌し減圧下濃縮した。残留物をＣ−１８逆相カ
ラムクロマトグラフィーにより精製して図１の化学式１
５で表わされる４量体（１５）を収率６０％（０．１６
９ｇ，０．０５１７７ｍｍｏｌ）で得た。同様にして図
２に示す順序で５’−末端にりん酸残基を有しない図２
の化学式１６で表わされる６量体の３’−末端りん酸ジ
エステル誘導体（１６）を合成した。
【００３３】担持体の合成
６量体（１６）（０．２１０７ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）
と下記構造式１７で表わされるアデノシン誘導体を担持
した担体（１７）（０．４９６５ｇ，０．３０ｍｍｏ
ｌ）を共にピリジンで共沸脱水した後、ピリジン（５m
l）に溶かしＴＰＳＣｌ（０．０７５７ｇ，０．２５ｍ
ｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．０３９８ml，０．５０ｍ
ｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。その後無水酢酸
（１．５ml）を加えてさらに室温で６時間攪拌し、反応
溶液を塩化メチレンで薄めてから攪拌しているエタノー
ル（５００ml）中に注いで沈殿としてヌクレオシド誘導
体を担持したアセチルセルロースを得た。さらにトルエ
ンで共沸してピリジンを除き塩化メチレン（１０ml）に
溶かし４％ジクロロ酢酸塩化メチレン溶液（１０ml）を
加えて氷冷下１０分間攪拌した。その後ピリジン（２m
l）を加え中和して反応を停止し攪拌しているエタノー
ル（５００ml）中に注ぐことにより沈澱として図３の１
８で表わされる７量体を担持した担体（１８）を収率４
８％（０．４６４ｇ，０．０２４２２ｍｍｏｌ）で得
た。（担持量０．０５２１９ｍｍｏｌ／ｇ）さらに４量
体（１５）（０．１１８６ｇ，０．０３６３３ｍｍｏ
ｌ）と担体（１８）（０．２３２ｇ，０．０１２１１ｍ
ｍｏｌ）を共にピリジンで共沸脱水した後、ピリジン
（２ml）に溶かしＴＰＳＣｌ（０．０６０６ｇ，０．１
８１７ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．０３１８ml，
０．３６３３ｍｍｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。
その後、反応溶液を塩化メチレンで薄めてから攪拌して
いるエタノール（５００ml）中に注いで担持体を沈澱さ
せ、図３の１９で表わされる１１量体を担持した担体
（１９）を収率６１％（０．２２１０ｇ，０．００７３
７６ｍｍｏｌ）で得た。（担持量０．０３３３８ｍｍｏ
ｌ／ｇ）
と下記構造式１７で表わされるアデノシン誘導体を担持
した担体（１７）（０．４９６５ｇ，０．３０ｍｍｏ
ｌ）を共にピリジンで共沸脱水した後、ピリジン（５m
l）に溶かしＴＰＳＣｌ（０．０７５７ｇ，０．２５ｍ
ｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．０３９８ml，０．５０ｍ
ｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。その後無水酢酸
（１．５ml）を加えてさらに室温で６時間攪拌し、反応
溶液を塩化メチレンで薄めてから攪拌しているエタノー
ル（５００ml）中に注いで沈殿としてヌクレオシド誘導
体を担持したアセチルセルロースを得た。さらにトルエ
ンで共沸してピリジンを除き塩化メチレン（１０ml）に
溶かし４％ジクロロ酢酸塩化メチレン溶液（１０ml）を
加えて氷冷下１０分間攪拌した。その後ピリジン（２m
l）を加え中和して反応を停止し攪拌しているエタノー
ル（５００ml）中に注ぐことにより沈澱として図３の１
８で表わされる７量体を担持した担体（１８）を収率４
８％（０．４６４ｇ，０．０２４２２ｍｍｏｌ）で得
た。（担持量０．０５２１９ｍｍｏｌ／ｇ）さらに４量
体（１５）（０．１１８６ｇ，０．０３６３３ｍｍｏ
ｌ）と担体（１８）（０．２３２ｇ，０．０１２１１ｍ
ｍｏｌ）を共にピリジンで共沸脱水した後、ピリジン
（２ml）に溶かしＴＰＳＣｌ（０．０６０６ｇ，０．１
８１７ｍｍｏｌ）、１−Ｍｅｉｍ（０．０３１８ml，
０．３６３３ｍｍｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。
その後、反応溶液を塩化メチレンで薄めてから攪拌して
いるエタノール（５００ml）中に注いで担持体を沈澱さ
せ、図３の１９で表わされる１１量体を担持した担体
（１９）を収率６１％（０．２２１０ｇ，０．００７３
７６ｍｍｏｌ）で得た。（担持量０．０３３３８ｍｍｏ
ｌ／ｇ）
【００３４】
【化８】
【００３５】１１量体の脱保護および構造確認
担体（１９）（２９．９２mg，１．０μｍｏｌ）を０．
５Ｍ ＴＭＧ−ＰＡＯ／ピリジン−水（９：１ｖ／ｖ）
溶液（０．５ml）に溶かし、室温で２４時間放置した。
反応溶液にエタノール（３０ml）を加えセルロース残渣
を沈澱させた後、−２０℃で３０分放置してから遠心分
離（３０００回転／分、ｒ．ｔ．，１５分間）し、上清
を減圧下濃縮した。残留物に濃アンモニア水（２８％）
（１５ml）を加え、密栓をし、５５℃６時間放置した
後、減圧下濃縮した。あらかじめ、アセトニトリル−水
（９：１ｖ／ｖ）（１０ml）を注入して３時間以上放置
した後、５０ｍＭ ＴＥＡＢ水溶液（２０ml）を流出さ
せておいたＳＥＰ−ＰＡＫ（Ｃ−１８）（Ｗａｔｅｒｓ
社）に５０ｍＭＴＥＡＢ水溶液（２０ml）に溶かした１
１量体を注入した。１５％アセトニトリル−５０ｍＭ
ＴＥＡＢ水溶液（３０ml）でＴＭＧ、ＰＡＯ等を溶出し
た後、３５％アセトニトリル−５０ｍＭ ＴＥＡＢ水溶
液（２０ml）で１１量体を溶出し溶出液を減圧下濃縮し
た。
５Ｍ ＴＭＧ−ＰＡＯ／ピリジン−水（９：１ｖ／ｖ）
溶液（０．５ml）に溶かし、室温で２４時間放置した。
反応溶液にエタノール（３０ml）を加えセルロース残渣
を沈澱させた後、−２０℃で３０分放置してから遠心分
離（３０００回転／分、ｒ．ｔ．，１５分間）し、上清
を減圧下濃縮した。残留物に濃アンモニア水（２８％）
（１５ml）を加え、密栓をし、５５℃６時間放置した
後、減圧下濃縮した。あらかじめ、アセトニトリル−水
（９：１ｖ／ｖ）（１０ml）を注入して３時間以上放置
した後、５０ｍＭ ＴＥＡＢ水溶液（２０ml）を流出さ
せておいたＳＥＰ−ＰＡＫ（Ｃ−１８）（Ｗａｔｅｒｓ
社）に５０ｍＭＴＥＡＢ水溶液（２０ml）に溶かした１
１量体を注入した。１５％アセトニトリル−５０ｍＭ
ＴＥＡＢ水溶液（３０ml）でＴＭＧ、ＰＡＯ等を溶出し
た後、３５％アセトニトリル−５０ｍＭ ＴＥＡＢ水溶
液（２０ml）で１１量体を溶出し溶出液を減圧下濃縮し
た。
【００３６】１１量体を水（０．２００ml）に溶かし、
ＨＰＬＣ（μＢＯＭＤＡＳＰＨＥＲＥ ５μ Ｃ−１８
−１００Å ３．９mm×１５cm，１０％−５０％アセト
ニトリル−０．１ＭＴＥＡＡ水溶液系）により１１量体
（０．０７７６ml）を精製した（図４参照）。主ピーク
の中央部分を分取し、減圧下濃縮した。さらに水（１m
l）を加えトリエチルアミン臭がしなくなるまで減圧留
去した後、残留物を０．５ＭＴＥＡＢ−１，４−ジオキ
サン（１：１）（１００μｌ）に溶かしＮ−クロロコハ
ク酸イミド（０．００２７ｇ）を加え室温で２時間放置
した。さらに濃アンモニア水（１ml）を加え２０時間放
置した。酢酸エチル（５ml×２）で洗浄した後、水層を
減圧下濃縮し、残留物をpH２．０塩酸（５ml）に溶かし
室温で２日間放置した。希アンモニア水で中和し、酢酸
エチル（２０ml）で洗浄した後、水層を減圧下濃縮し
た。残留物を水（０．０７５ml）に溶かしＨＰＬＣ（μ
ＢＯＭＤＡＳＰＨＥＲＥ ５μ Ｃ−１８−１００Å
３．９mm×１５cm，５％−１９％アセトニトリル−０．
１ＭＴＥＡＡ水溶液系）で精製し（図５参照）、主ピー
クの中央部分を分取して減圧下濃縮し保護基が完全に除
去された図３の２０で表わされる１１量体（２０）を
０．８８４Ａ260 ユニット得た。
ＨＰＬＣ（μＢＯＭＤＡＳＰＨＥＲＥ ５μ Ｃ−１８
−１００Å ３．９mm×１５cm，１０％−５０％アセト
ニトリル−０．１ＭＴＥＡＡ水溶液系）により１１量体
（０．０７７６ml）を精製した（図４参照）。主ピーク
の中央部分を分取し、減圧下濃縮した。さらに水（１m
l）を加えトリエチルアミン臭がしなくなるまで減圧留
去した後、残留物を０．５ＭＴＥＡＢ−１，４−ジオキ
サン（１：１）（１００μｌ）に溶かしＮ−クロロコハ
ク酸イミド（０．００２７ｇ）を加え室温で２時間放置
した。さらに濃アンモニア水（１ml）を加え２０時間放
置した。酢酸エチル（５ml×２）で洗浄した後、水層を
減圧下濃縮し、残留物をpH２．０塩酸（５ml）に溶かし
室温で２日間放置した。希アンモニア水で中和し、酢酸
エチル（２０ml）で洗浄した後、水層を減圧下濃縮し
た。残留物を水（０．０７５ml）に溶かしＨＰＬＣ（μ
ＢＯＭＤＡＳＰＨＥＲＥ ５μ Ｃ−１８−１００Å
３．９mm×１５cm，５％−１９％アセトニトリル−０．
１ＭＴＥＡＡ水溶液系）で精製し（図５参照）、主ピー
クの中央部分を分取して減圧下濃縮し保護基が完全に除
去された図３の２０で表わされる１１量体（２０）を
０．８８４Ａ260 ユニット得た。
【００３７】１１量体の酵素分解
１１量体（２０）（０．２Ａ260 ユニット）をＴｒｉｓ
緩衝液（０．１ml）に溶かしヘビ毒のホスホジエステラ
ーゼを３μｌ加え３７℃で１時間放置した。ＨＰＬＣ
（ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ １８−５ ４．６mm×
１５０mm，１％アセトニトリル−０．１ＭＴＥＡＡ水溶
液）の溶出パターンには４種類全てのヌクレオチドのピ
ークが認められ（図６参照）、その積分強度比はｐＣ：
ｐＵ：ｐＧ：ｐＡ＝（６：２：１：２）［理論比（６：
２：１：２）］でありシチジンのピークは認められなか
った。ヘビ毒のホスホジエステラーゼはオリゴヌクレオ
チドの３’−位の酸素とりん酸との結合を選択的に開裂
する活性を有しており分解物のＨＰＬＣ（図６）では
５’−りん酸基を有するヌクレオチドのみが見られるこ
とから本発明の保護基の有用性が示された。
緩衝液（０．１ml）に溶かしヘビ毒のホスホジエステラ
ーゼを３μｌ加え３７℃で１時間放置した。ＨＰＬＣ
（ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ １８−５ ４．６mm×
１５０mm，１％アセトニトリル−０．１ＭＴＥＡＡ水溶
液）の溶出パターンには４種類全てのヌクレオチドのピ
ークが認められ（図６参照）、その積分強度比はｐＣ：
ｐＵ：ｐＧ：ｐＡ＝（６：２：１：２）［理論比（６：
２：１：２）］でありシチジンのピークは認められなか
った。ヘビ毒のホスホジエステラーゼはオリゴヌクレオ
チドの３’−位の酸素とりん酸との結合を選択的に開裂
する活性を有しており分解物のＨＰＬＣ（図６）では
５’−りん酸基を有するヌクレオチドのみが見られるこ
とから本発明の保護基の有用性が示された。
【００３８】
【発明の効果】上述の実施例１より、本発明の保護基は
導入および除去とも極めて容易に行なえるとともに、２
−シアノエチル基の除去条件下でも安定であることが明
らかとなった。また、本発明の保護基中にはモノメトキ
シトリチル基を有するため通常の方法により発色させる
ことができ、この発色の程度で定量を行なうこともでき
る。
導入および除去とも極めて容易に行なえるとともに、２
−シアノエチル基の除去条件下でも安定であることが明
らかとなった。また、本発明の保護基中にはモノメトキ
シトリチル基を有するため通常の方法により発色させる
ことができ、この発色の程度で定量を行なうこともでき
る。
【００３９】さらに、図４に示されているように、本発
明の保護基を有するオリゴマーは他の反応未反応物との
分離がよく、ＨＰＬＣにより目的とするオリゴマーを単
離精製することができる。このように本発明の保護基は
３’−および／または５’−末端にりん酸残基を有する
オリゴマーを調製する際のりん酸残基の保護基として有
用である。
明の保護基を有するオリゴマーは他の反応未反応物との
分離がよく、ＨＰＬＣにより目的とするオリゴマーを単
離精製することができる。このように本発明の保護基は
３’−および／または５’−末端にりん酸残基を有する
オリゴマーを調製する際のりん酸残基の保護基として有
用である。
【図１】図１は実施例３で合成した１１量体の合成スキ
ームを示したものである。
ームを示したものである。
【図２】図２は実施例３で合成した１１量体の合成スキ
ームを示したものである。
ームを示したものである。
【図３】図３は実施例３で合成した１１量体の合成スキ
ームを示したものである。
ームを示したものである。
【図４】図４は２’位にＴＨＰ基、５’位に本発明の保
護基を有する１１量体のＨＰＬＣにおける溶出パターン
を示したものである。
護基を有する１１量体のＨＰＬＣにおける溶出パターン
を示したものである。
【図５】図５は、保護基を有しない１１量体のＨＰＬＣ
における溶出パターンを示したものである。
における溶出パターンを示したものである。
【図６】図６は、無保護の１１量体をヘビ毒のホスホジ
エステラーゼで酵素分解して得られる分解物のＨＰＬＣ
における溶出パターンを示したものである。
エステラーゼで酵素分解して得られる分解物のＨＰＬＣ
における溶出パターンを示したものである。
図中の略号は以下のとおりである。
Ｐ ｏ−クロロフェニルホスホニル基
ＣＥ ２−シアノエトキシ基
ＮＥｔ3 トリエチルアミン
Claims (3)
- 【請求項１】式（１） 【化１】 ＭＭＴｒＯ−ＣＨ2 ＣＨ2 ＳＣＨ2 ＣＨ2 − （１） （式中、ＭＭＴｒはモノメトキシトリチル基を示す）で
表わされる２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）
エチルチオ｝エチル基。 - 【請求項２】 ３’−および／または５’−末端にりん
酸残基を有するオリゴヌクレオチドを合成する方法にお
いて、３’−および／または５’−りん酸残基の保護基
として請求項１記載の２−｛２−（モノメトキシトリチ
ルオキシ）エチルチオ｝エチル基を使用する方法。 - 【請求項３】 ヌクレオチドと２−｛２−（モノメトキ
シトリチルオキシ）エチルチオ｝エタノールとを縮合剤
の存在下に反応させることによりヌクレオチドの３’−
および／または５’−りん酸残基に保護基として２−
｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エ
チル基を導入する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3193151A JP3061659B2 (ja) | 1991-08-01 | 1991-08-01 | ２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基および該基の使用法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3193151A JP3061659B2 (ja) | 1991-08-01 | 1991-08-01 | ２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基および該基の使用法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0532614A true JPH0532614A (ja) | 1993-02-09 |
| JP3061659B2 JP3061659B2 (ja) | 2000-07-10 |
Family
ID=16303136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3193151A Expired - Fee Related JP3061659B2 (ja) | 1991-08-01 | 1991-08-01 | ２−｛２−（モノメトキシトリチルオキシ）エチルチオ｝エチル基および該基の使用法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3061659B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0611075A1 (en) * | 1993-01-29 | 1994-08-17 | Sankyo Company Limited | Modified oligodeoxyribonucleotides, their preparation and their therapeutic use |
-
1991
- 1991-08-01 JP JP3193151A patent/JP3061659B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0611075A1 (en) * | 1993-01-29 | 1994-08-17 | Sankyo Company Limited | Modified oligodeoxyribonucleotides, their preparation and their therapeutic use |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3061659B2 (ja) | 2000-07-10 |
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