JPH05310779A

JPH05310779A - オリゴヌクレオチド類似体、その製造法および用途

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Publication number: JPH05310779A
Application number: JP5008391A
Authority: JP
Inventors: Eugen Dr Uhlmann; オイゲン・ウールマン; Anuschirwan Peyman; アヌーシルヴアーン・パイマン; Gerard O'malley; ジエラード・オマリー; Matthias Helsberg; マテイーアス・ヘルスベルク; Irvin Dr Winkler; イルヴイン・ヴインクラー
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1992-01-22
Filing date: 1993-01-21
Publication date: 1993-11-22
Anticipated expiration: 2020-11-16
Also published as: DE59310285D1; NO308215B1; EP0552766A2; CA2087818A1; HU227794B1; CA2087818C; DK0552766T3; ES2177532T3; HU9300162D0; JP3717081B2; NZ245720A; IL104461A0; FI115214B; NO930199D0; FI930220A; IL104461A; FI930220A0; PL297515A1; PT552766E; AU3191093A

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】次式〔式中、Ｒ¹はＨ、アルキル、アシル、アリール等；Ｒ²
はＨ、ＯＨ、アルコキシ、ＮＨ₂等；Ｂはヌクレオチド
化学において慣用の塩基；ａはＯまたはＣＨ₂；ｎは１
〜１００の整数；ＷはＯ、ＳまたはＳｅ；ＶはＯ、Ｓま
たはＮＨ；ＹはＯ、Ｓ、ＮＨまたはＣＨ₂；Ｙ′はＯ、
Ｓ、ＮＨまたはアルキレン等；ＸはＯＨまたはＳＨ；Ｕ
はＯＨ、ＳＨ、ＳｅＨ、アルキルまたはアミン等；Ｚは
ＯＨ、ＳＨ、ＳｅＨ、アルキルまたは細胞内吸収を有利
にし、ＤＮＡプローブの標識として作用し、もしくはハ
イブリッド形成の間、標的の核酸を攻撃する基等であ
る〕の化合物。【効果】上記化合物は遺伝子発現の阻害剤、核酸を検
出するためのプローブおよび分子生物学における補助剤
として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は有用な物理的、生物学的および薬
理学的特性を有する新規なオリゴヌクレオチド類似体、
並びにこれらの製造法に関する。これらの用途は遺伝子
発現の阻害剤（アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボ
チーム、センスオリゴヌクレオチドおよびトリプレック
ス形成オリゴヌクレオチド）、核酸を検出するためのプ
ローブおよび分子生物学的における補助剤としてのこれ
らの使用に関する。オリゴヌクレオチドは遺伝子発現の
阻害剤としてますます多く使用されている〔G.ZonのPha
rmaceutical Research 5，539（1988年)；J.S. Cohenの
Topics in Molecular and Structural Biology 12（198
9年）、Macmillan出版; C. HeleneおよびJ.J. Toulmeの
Biochimica et Biophysica Acta 1049, 99（1990年）;
E. UhlmannおよびA. PeymanのChemical Reviews 90, 54
3（1990年）〕。アンチセンスオリゴヌクレオチドはそ
の塩基配列が阻害されるｍＲＮＡに対して相補的である
核酸フラグメントである。この標的のｍＲＮＡは細胞、
ウイルスまたは他の病原体から由来するものでありう
る。好適な細胞状の標的塩基配列は例えばレセプター、
酵素、免疫調節剤、イオンチャンネルまたは腫瘍遺伝子
のものである。アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用
するウイルスの複製の阻害は例えばＲＳＶ（ラウス肉腫
ウイルス）、ＨＳＶ−１および−２（単純ヘルペスウイ
ルスＩ型およびII型）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイル
ス）、並びにインフルエンザウイルスについて開示され
ている。ここでは、ウイルスの核酸に相補的なオリゴヌ
クレオチドが使用されている。対比して、センスオリゴ
ヌクレオチドの配列はこれらのオリゴヌクレオチドが例
えば核酸結合タンパク質または核酸プロセッシング酵素
を結合(“捕獲")し、それによりこれらの生物学的活性
を阻害するように構成されている（Helene, 1990年）。
ここで例として挙げることのできるウイルスの標的は逆
転写酵素、ＤＮＡポリメラーゼおよび転移活性剤（tran
sactivator）タンパク質である。トリプレックス形成オ
リゴヌクレオチドは一般にこれらの標的としてＤＮＡを
有し、そしてこれに結合した後、ＤＮＡは三重のヘリッ
クス構造を形成する。一般に、ｍＲＮＡのプロセッシン
グ（スプライシングなど）およびそのタンパク質への翻
訳はアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて阻害され
るが、他方トリプレックス形成オリゴヌクレオチドはＤ
ＮＡの転写または複製を阻害する（Heleneら、1990年；
UhlmannおよびPeyman，1990年）。しかしながら、最初
のハイブリット形成で一重鎖核酸をアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドと結合することもまた可能であり、次に第
２のハイブリット形成でトリプレックス形成オリゴヌク
レオチドと三重構造を形成する二重鎖の形成を伴なう。
この場合、２つの別々のオリゴヌクレオチドまたは１つ
のオリゴヌクレオチド中にアンチセンスおよび三重結合
部分を含ませることができる。いわゆるリボチームはこ
れらのリボヌクレアーゼ活性の結果として標的ＲＮＡを
分解〔J.J. RossiおよびN. SarverのTIBTECH 8, 179（1
990年）〕し、さらに合成オリゴヌクレオチドの用途を
示す。

【０００２】好適に標識された核酸フラグメントはＤＮ
Ａ診断研究において検出される核酸への特異的ハイブリ
ッド形成のためのいわゆるＤＮＡプローブとして使用さ
れる。ここで、好ましくは放射性ではない標識化を用い
て新しい二重鎖の特異的形成が引き続く。このようにし
て、遺伝子疾患、悪性疾患およびウイルスまたは他の病
原体により生じた疾患を検出することができる。

【０００３】このような用途の大部分に適した、天然由
来の形態のオリゴヌクレオチドは殆んど、または全くな
い。これらは特定の要件について適当であるように化学
的に修飾されなければならない。例えばウイルスの複製
の阻害のために、オリゴヌクレオチドを生物学的系にお
いて使用する場合、これらは次の前提条件を満たす必要
がある：１．これらはインビボ条件下、すなわち細胞内だけでな
く血清中でも十分高い程度の安定性を有しなければなら
ない。２．これらは細胞および核膜を通過することができなけ
ればならない。３．これらは阻害効果を発揮するために生理学的条件
下、塩基特異的方法でこれらの標的の核酸に結合しなけ
ればならない。

【０００４】これらの前提条件はＤＮＡプローブについ
て不可欠ではないが、しかしこれらのオリゴヌクレオチ
ドは例えばケイ光、化学ルミネセンス、比色定量または
特異染色による検出を可能にする方法で誘導化されなけ
ればならない〔BeckおよびKoesterのAnal. Chem. 62, 2
258（1990年）〕。

【０００５】オリゴヌクレオチドの化学変化は通常リン
酸エステル主鎖、リボース単位またはヌクレオチド塩基
を適当な方法で変化させることにより起こる(Cohen, 19
89年; UhlmannおよびPeyman, 1990年）。しばしば使用
される別法は５′−ヒドロキシル基を適当なリン酸化試
薬と反応させるこしによるオリゴヌクレオチド５′−抱
合体の製造である。５′−末端のみが修飾されたオリゴ
ヌクレオチドはこれらが血清中で分解されるという欠点
を有する。一方、すべてのヌクレオチド間のホスフェー
ト基が変化された場合、オリゴヌクレオチドの特性はし
ばしば徹底的に変化される。例えば、水性溶媒中におけ
るメチルホスホネートオリゴヌクレオチドの溶解性は減
少し、そしてこれらのハイブリッド形成能力もまたそう
である。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは非特
異的効果を有し、そのため例えばホモオリゴマーもまた
ウイルスに対して活性である。

【０００６】したがって、本発明の目的は特異的活性、
増大した血清安定性および良好な溶解性を有するオリゴ
ヌクレオチド類似体を製造することである。本発明は式
Ｉ

【化３】〔式中、Ｒ¹は水素、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アルキル好ましくはＣ
₁〜Ｃ₆−アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₁₈−アルケニル、Ｃ₂〜Ｃ₁₈
−アルキニル、Ｃ₂〜Ｃ₁₈−アルキルカルボニル、Ｃ₃〜
Ｃ₁₉−アルケニルカルボニル、Ｃ₃〜Ｃ₁₉−アルキニル
カルボニル、Ｃ₆〜Ｃ₂₀−アリール、（Ｃ₆〜Ｃ₁₄）−ア
リール−（Ｃ₁〜Ｃ₈）−アルキルまたは式II

【化４】の基であり；Ｒ²は水素、ヒドロキシル、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−ア
ルコキシ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ₂であり；Ｂは
ヌクレオチド化学において慣用の塩基例えばアデニン、
シトシン、グアニンおよびチミンのような天然の塩基、
またはプリン、２,６−ジアミノプリン、７−デアザア
デニン、７−デアザグアニン、Ｎ⁴Ｎ⁴−エタノシトシ
ン、Ｎ⁶Ｎ⁶−エタノ−２,６−ジアミノプリン、プソイ
ドイソシトシンのような非天然の塩基であり；ａはオキ
シまたはメチレンであり；ｎは１〜１００好ましくは１
０〜４０の整数であり；Ｗはオキソ、チオキソまたはセ
レノキソであり；Ｖはオキシ、チオまたはイミノであ
り；Ｙはオキシ、チオ、イミノまたはメチレンであり；
Ｙ′はオキシ、チオ、イミノ、(ＣＨ₂)_mまたはＶ(Ｃ
Ｈ₂)_m（ここでｍは１〜１８好ましくは１〜６の整数で
ある）であり；Ｘはヒドロキシルまたはメルカプトであ
り；Ｕはヒドロキシル、メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ₁〜Ｃ
₁₈−アルコキシ好ましくはＣ₁〜Ｃ₆−アルコキシ、Ｃ₁
〜Ｃ₁₈−アルキル好ましくはＣ₁〜Ｃ₆−アルキル、Ｃ₆
〜Ｃ₂₀−アリール、(Ｃ₆〜Ｃ₁₄)−アリール−(Ｃ₁〜
Ｃ₈)−アルキル、ＮＨＲ ³、ＮＲ³Ｒ⁴または式III (ＯＣＨ₂ＣＨ₂)_pＯ(ＣＨ₂)_qＣＨ₂Ｒ″ （III）の基（ここでＲ³はＣ₁〜Ｃ₁₈−アルキル好ましくはＣ₁
〜Ｃ₈−アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₂₀−アリール、(Ｃ₆〜Ｃ₁₄)
−アリール−(Ｃ₁〜Ｃ₈)−アルキル、２−(ＣＨ₂) _C−
〔ＮＨ(ＣＨ₂)_c〕_d−ＮＲ¹²Ｒ¹²（ここでｃは２〜６の
整数であり、ｄは０〜６の整数であり、そしてＲ¹²はそ
れぞれ互いに独立して水素、Ｃ₁〜Ｃ₆−アルキルまたは
Ｃ₁〜Ｃ₄−アルコキシ−Ｃ₁〜Ｃ₆−アルキル好ましくは
メトキシエチルである）であり、Ｒ⁴はＣ₁〜Ｃ₁₈−アル
キル好ましくはＣ₁〜Ｃ₈−アルキル、特に好ましくはＣ
₁〜Ｃ₄−アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₂₀−アリールまたは（Ｃ₆〜
Ｃ₁₀）−アリール−（Ｃ₁〜Ｃ₈）−アルキルであり、あ
るいはＮＲ³Ｒ⁴の場合、Ｒ⁴はＲ³およびこれらを担持す
る窒素原子と一緒になって５〜６員の複素環式環（これ
はさらにＯ、Ｓ、Ｎからなる群より選択されたヘテロ原
子を含有することができる）を形成し、ｐは１〜１００
好ましくは３〜２０、特に好ましくは３〜８の整数であ
り、ｑは０〜２２好ましくは０〜１５の整数であり、そ
してＲ¹¹は水素または官能基例えばヒドロキシル、アミ
ノ、ＮＨＲ¹³、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＯＲ¹²また
はハロゲン（ここでＲ¹²はＣ₁〜Ｃ₄−アルキル、好まし
くはメチルである）であり；Ｚ＝Ｚ′はヒドロキシル、
メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₂−アルコキシ好ましく
はＣ₆〜Ｃ₁₈−アルコキシ、−Ｏ−(ＣＨ₂)_b−ＮＲ¹²Ｒ
¹³（ここでｂは１〜６の整数であり、そしてＲ¹³はＣ₁
〜Ｃ₆−アルキルであり、またはＲ¹²およびＲ ¹³はこれ
らを担持する窒素原子と一緒になって３〜６員の環を形
成する）、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アルキル好ましくはＣ₁〜Ｃ₈−
アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₂₀−アリール、（Ｃ₆〜Ｃ₁₄）−アリ
ール−（Ｃ₁〜Ｃ₈）−アルキル好ましくは（Ｃ₆〜
Ｃ₁₀）−アリール−（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アルキル、（Ｃ₆〜
Ｃ₁₄）−アリール−（Ｃ₁〜Ｃ₈）−アルコキシ好ましく
は（Ｃ₆〜Ｃ₁₀）−アリール−（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アルコキ
シ（ここでアリールはヘテロアリールを包含し、そして
アリールは場合によってはカルボキシル、アミノ、ニト
ロ、Ｃ₁〜Ｃ₄−アルキルアミノ、Ｃ₁〜Ｃ₆−アルコキ
シ、ヒドロキシル、ハロゲンおよびシアノからなる群よ
り選択された１、２または３個の同一のまたは異なった
基により置換される）、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アルキルメルカプ
ト、ＮＨＲ³、ＮＲ³Ｒ⁴、式IIIの基または細胞内吸収を
有利にする、もしくはＤＮＡプローブ用標識として作用
する、あるいはオリゴヌクレオチド類似体の標的の核酸
へのハイブリッド形成の間に結合、架橋または開裂を伴
なって後者を攻撃する基であり；曲線状の中括弧はＲ²
およびその隣りのホスホリル残基が２′−および３′−
位に、または反対に３′−および２′−位に位置するこ
とができることを示し、各ヌクレオチドはＤ−またはＬ
−配置で存在することができ、そして塩基Ｂはα−また
はβ−位に位置することができる。但し、Ｚがヒドロキ
シル、メルカプト、メチルまたはエトキシである場合、
基Ｘ、Ｙ、Ｙ′、ＶおよびＷのうち少なくとも１つはヒ
ドロキシル、オキシまたはオキソではなく、あるいはＲ
¹は水素ではない〕のオリゴヌクレオチド類似体および
これらの生理学的に許容しうる塩に関する。

【０００７】塩基Ｂがβ−位に位置し、ヌクレオチドが
Ｄ−配置で存在し、Ｒ²が２′−位に位置し、そしてａ
がオキシである式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体および
これらの生理学的に許容しうる塩が好ましい。

【０００８】Ｒ¹が水素、Ｃ₁〜Ｃ₆−アルキル、特にメ
チルまたは式IIの基であり；Ｒ²が水素またはヒドロキ
シル、特に水素であり；ｎが１０〜４０、特に１２〜３
０の整数であり；ｍが１〜６の整数、特に１であり；Ｕ
がヒドロキシル、メルカプト、Ｃ₁〜Ｃ₆−アルコキシ、
Ｃ₁〜Ｃ₆−アルキル、ＮＲ³Ｒ⁴またはＮＨＲ³、特にヒ
ドロキシルまたはＣ₁〜Ｃ₆−アルキル（ここでＲ³はＣ₁
〜Ｃ₈−アルキル、好ましくはＣ₁〜Ｃ₄−アルキルまた
はメトキシエチルである）であり、そしてＢ、Ｗ、Ｖ、
Ｙ、Ｙ′、ＸおよびＺは上記の意味を有する式Ｉのオリ
ゴヌクレオチド類似体が特に好ましい。

【０００９】Ｖ、Ｙ′およびＹがオキシである式Ｉのオ
リゴヌクレオチド類似体が特に好ましい。さらに、Ｖ、
Ｙ、Ｙ′およびＷがオキシまたはオキソである式Ｉのオ
リゴヌクレオチド類似体がとりわけ好ましい。

【００１０】Ｖ、Ｙ、Ｙ′、ＷおよびＵがオキシ、オキ
ソまたはヒドロキシルである式Ｉのオリゴヌクレオチド
類似体が非常に好ましい。さらに、Ｒ¹が水素である式
Ｉのオリゴヌクレオチド類似体が好ましい。

【００１１】Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ′およびＹがオキシ、
オキソまたはヒドロキシルであり、そしてＲ¹が水素で
ある式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体が特に好ましい。
Ｒ²、Ｂ、ａ、Ｗ、Ｖ、Ｙ、Ｕ、Ｒ³、Ｒ⁴、ｐ、ｑおよ
びＺのような繰り返して生じる残基は互いに独立して同
一のまたは異なった意味を有する。すなわち例えばそれ
ぞれのＶは他のものとは独立してオキシ、チオまたはイ
ミノである。

【００１２】ハロゲンは好ましくはフッ素、塩素または
臭素である。ヘテロアリールは環系に１個または２個の
Ｎ原子および／または１個のＳもしくはＯ原子を含有す
る単環式または二環式の（Ｃ₃〜Ｃ₉）−ヘテロ芳香族の
基を意味するものと理解される。

【００１３】細胞内吸収を有利にする基の例は各種の親
油性基例えば−Ｏ−(ＣＨ₂)_xＣＨ₃（ここでｘは６〜１
８の整数である）、−Ｏ−(ＣＨ₂)_n−ＣＨ＝ＣＨ−(Ｃ
Ｈ₂)_m−ＣＨ₃（ここでｎおよびｍは互いに独立して６〜
１２の整数である）、−Ｏ−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₄−(ＣＨ₂)
₉−ＣＨ₃、−Ｏ−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₈−(ＣＨ₂)₁₃−ＣＨ₃
および−Ｏ−(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₇−(ＣＨ₂)₁₅−ＣＨ₃、ま
たはステロイド残基例えばコレステリル、そして天然の
担体系を利用する抱合体例えば胆汁酸、葉酸、２−（Ｎ
−アルキル、Ｎ−アルコキシ）−アミノアントラキノ
ン、並びにオリゴヌクレオチドのレセプター媒介エンド
サイド−シスをもたらすマンノースとその対応するレセ
プターのペプチドとの抱合体例えばＥＧＦ（上皮成長因
子）、ブラジキニンおよびＰＤＧＦ（血小板由来成長因
子）である。

【００１４】標識グループは例えばダンシル（＝Ｎ−ジ
メチル−１−アミノナフチル−５−スルホニル）誘導
体、フルオレセイン誘導体もしくはクマリン誘導体のケ
イ光グループまたは例えばアクリジン誘導体の化学ルミ
ネセンスグループ、並びにＥＬＩＳＡによって検出可能
なジゴキシゲニン系、ビオチン／アビジン系によって検
出可能なビオチングループ、または検出可能なリポータ
ーグループを用いて引き続いての誘導化を可能にする官
能基を有するリンカーアーム例えばアクリジニウム活性
エステルと反応して化学ルミネセンスプローブを形成す
るアミノアルキルリンカーアームを意味するものと理解
される。典型的な標識グループは下記に示されるもので
ある：

【化５】

【００１５】

【化６】

【００１６】核酸に結合し、または挿入し、そして／ま
たは開裂し、または架橋するオリゴヌクレオチド類似体
には例えばアクリジン、プソラレン（psoralen）、フェ
ナントリジン、ナフトキノン、ダウノマイシンまたはク
ロロエチルアミノアリール抱合体が含まれる。典型的な
挿入用および架橋用残基は下記に示されるものである：

【００１７】

【化７】

【００１８】

【化８】

【００１９】ＮＲ³Ｒ⁴基（式中、Ｒ³およびＲ⁴はこれら
を担持する窒素原子と一緒になって、追加的に別のヘテ
ロ原子を含む５〜６員の複素環式環を形成する）の例と
して、モルホリニルおよびイミダゾリジニル基を挙げる
ことができる。

【００２０】本発明はα−およびβ−Ｄ−またはＬ−リ
ボフラノシド、α−およびβ−Ｄ−またはＬ−デオキシ
リボフラノシド、並びに対応する炭素環式の５員環類似
体に限定されないが、他の糖成分例えば環が伸張した、
および環が収縮した糖、非環状の糖誘導体または他のタ
イプの適当な糖誘導体から構成されるオリゴヌクレオチ
ド類似体もまた可能である。さらに、本発明は式Ｉで例
を挙げられるホスフェート基の誘導体に限定されず、公
知のデホスホ誘導体にもまた関する。

【００２１】生物的オリゴヌクレオチドの合成におい
て、式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体の製造は場合によ
っては自動合成装置を用いて、溶液中または好ましくは
固体相上で行なわれる。

【００２２】しかしながら、３′−末端にホスフェート
またはホスフェートエステル基を有するオリゴヌクレオ
チドの固体相合成はCaruthersの標準的なホスホラミジ
ット（Phosphoramidite）化学〔M.D. Matteucciおよび
M.H CaruthersのJ. Am. Chem.Soc., 103, 3185（1981
年）〕では最初のヌクレオチド単位が３′−ヒドロキシ
ル基を介して固体支持体に結合されるため不可能であ
り、そしてこの理由により３′−ヒドロキシル基を有す
るオリゴヌクレオチドがいつもこれらの合成から得られ
る。固相法に基づく種々の方法が開示されているが、こ
れらの方法はすべて労力を要し、そしてしばしばホスフ
ェートエステルまたはアルキルホスホネートのような誘
導体を製造するためには使用することができない〔R. E
ritjaらのTetrahedron Lett. 32, 1511（1991年）; P.
KumarらのTetrahedron Lett. 32, 967（1991年）; W.T.
MarkiewiczおよびT.K. Wyrzykiewiczのリン、硫黄およ
びケイ素51／52，374（1990年）; E. FelderらのTetrah
edron Lett. 25, 3967（1984年）; R. Lohrmannおよび
J. RuthのDMA 3，122（1984年）〕。

【００２３】したがって、本発明はａ）３′（２′）
−末端のリン（Ｖ）グループおよび遊離の５′−ヒドロ
キシルもしくはメメカプト基を有するヌクレオチド単位
を３′−位にリン（III）もしくはリン（Ｖ）グループ
を有するもう１つのヌクレオチド単位またはその活性化
誘導体と反応させ、あるいはｂ）オリゴヌクレオチド
類似体を同様にしてフラグメントを用いて構成し、そし
て（ａ）または（ｂ）により得られたオリゴヌクレオチ
ド中に他の官能基を保護するために一時的に導入された
保護基を除去し、場合によってはこのようにして得られ
た式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体をその生理学的に許
容しうる塩に変換することからなる式Ｉのオリゴヌクレ
オチド類似体の製造法に関する。

【００２４】固相合成のための出発物質として使用され
るのは式IV Ｄ−Ｘ′−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ(Ｏ)_x−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ａ−Ｔ
(IV) 〔式中、Ａはリンカーアーム例えばジカルボン酸、ジオ
ール、アルキルアミン、ジカルボン酸モノアルキルアミ
ド、酸アミドまたは式

【化９】（ここで、Ｒは水素または場合によっては−ＣＮによっ
て置換されたＣ₁〜Ｃ₆−アルキル、好ましくはメチルも
しくは２−シアノエチルである）のホスフェートの残基
であり；Ｔは例えばＣＰＧ（制御多孔ガラス）、シリカ
ゲルまたは有機樹脂例えばポリスチレン（ＰＳ）もしく
はＰＳおよびポリエチレングリコール（ＰＯＥ）（側鎖
がヒドロキシル、アミノ、ハロゲンまたはＣＯＯＨのよ
うな官能基によって修飾される）のグラフトコポリマー
のような材料の固体支持体であり；Ｄはリンカーアーム
ＡおよびＸ′−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ(Ｏ)_x−ＣＨ₂ＣＨ₂−基
を開裂することなく除去できる保護基(Bioorg. Chem. 1
4, 274〜325(1986年)を参照）、例えば４−メトキシテ
トラヒドロピラニルおよびジメトキシリチル、好ましく
はジメトキシリチルであり；ｘは０、１または２の整数
であり；そしてＸ′はオキシまたはチオである〕の固体
支持体である。

【００２５】固体支持体Ｔをイオウ含有基と化学結合
（中でもアミド、エステル）により連結するリンカーア
ームＡ〔DamkaらのNucleic Acids Res. 18, 3813(1990
年)〕は好ましくはコハク酸残基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₂−Ｃ(Ｏ)−）、シュウ酸残基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ(Ｏ)
−）、アルキルアミン好ましくはＬＣＡＡ（長鎖アルキ
ルアミン）、またはポリエチレングリコールである。コ
ハク酸残基が特に好ましい。特定の場合、例えばアンモ
ニアでの長期の処理に耐えられない置換基と組み合わせ
る場合、オキサリルリンカーのようなより不安定なリン
カーが有利である。式IVａ〜ｃの固体支持体の製造は実
施例１に記載する。

【００２６】

【表１】

【００２７】固相合成はホスフェートトリエステル法、
Ｈ−ホスホネート法またはホスホラミジット(phosphora
midite)法、好ましくはホスホラミジット法〔E. Sonvea
uxのBioorg. Chem. 14, 274(1986年)に従って行うこと
ができる。通常、保護基Ｄが最初に式IVの支持体から、
好ましくは酸例えば塩化メチレン中におけるトリクロロ
酢酸によって除去される。ホスホラミジット法の場合、
このようにして得られた式IV′ ＨＸ′−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｓ(Ｏ)_x−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ａ−Ｔ
（IV′）（式中、ｘ、Ｘ′、ＡおよびＴは上記の意味を有する）
の支持体はテトラゾールのような弱酸の存在下で式Ｖ

【化１０】〔式中、Ｒは緩やかな条件下で除去することのできる保
護基例えば４−メトキシテトラヒドロピラニルまたはジ
メトキシリチルであり；Ｒ²′は水素、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アル
コキシ、ハロゲンまたは保護されたヒドロキシルもしく
はアミノ基であり；Ｒ⁵およびＲ⁶は互いに独立してＣ₁
〜Ｃ₁₂−アルキルであり、またはこれらの残基は一緒に
なって５〜６員環を形成し；Ｙ″はオキシ、チオまたは
(ＣＨ₂)_mであり；そしてａ、ｍ、ＶおよびＺは上記の意
味を有する〕のヌクレオシドホスホラミジットと縮合さ
れる。

【００２８】次に、このようにして得られた支持体はそ
れ自体公知の方法でヨウ素水（Ｗ＝Ｏ）、ＴＥＴＤ（テ
トラエチルチウラムジスルフィド）もしくは元素状イオ
ウ（Ｗ＝Ｓ）、またはセレン（Ｗ＝Ｓｅ）を用いて酸化
され式VII

【化１１】（式中、Ｒ、Ｖ、Ｂ′、Ｒ²′、Ｚ、Ｘ′、Ｗ、Ｙ″、
ＡおよびＴは上記の意味を有する）の誘導化された支持
体を生成する。好ましくは、式VIIａ

【化１２】の支持体が製造される。

【００２９】式Ｖのホスホラミジットは例えば式VI

【化１３】（式中、Ｒ⁷およびＲ⁸はＲ⁵およびＲ⁶と同一であり、そ
してａ、Ｒ、Ｖ、Ｂ′、Ｒ²′、Ｙ″、Ｒ⁵およびＲ⁶は
上記の意味を有する）のビスアミジット(bisamidite)か
ら、Ｚがアルコキシまたはアルキルメルカプトならばテ
トラゾール触媒を用いて、その対応するアルコールまた
はチオアルコールと反応（実施例２、方法Ａ）させるこ
とにより得られる〔J. E. MaruggらのTetrahedron Let
t. 27, 2271(1986年)〕。好ましいビスアミジットは式V
Iａ

【化１４】で表されるものである。

【００３０】このようにして、式VIIIａ〜ｍのアミジッ
トは製造された、例えば次式

【化１５】〔式中、Ｒ⁵およびＲ⁶は上記の意味を有し；Ｚはａ）Ｏ
−ＣＨ₂ＣＨ₃、ｂ）Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇、ｃ）Ｏ−ｎ−Ｃ₆
Ｈ₁₃、ｄ）Ｏ−ｎ−Ｃ₁₈Ｈ₃₇、

【化１６】ｇ）〜ｋ）式III(Ｒ″＝Ｈ）の残基（ここで、それぞ
れ、ｇ）ｐ＝３、ｑ＝０、ｈ）ｐ＝４、ｑ＝９、ｉ）ｐ
＝５、ｑ＝４、ｋ）ｐ＝８、ｑ＝１３、ｐ）ＣＨ₃、

【化１７】である）であり；そしてＢ′はａ）、ｃ）およびｄ）の
場合Ｃｙｔ^i-Buであり、ｂ）およびｐ）の場合Ｔｈｙで
あり、ｅ）〜ｋ）およびｍ）の場合Ｃｙｔ^Bzである〕で
表されるものである。

【００３１】支持体に負荷する(loading)ための別法は
式IX Ｚ″−ＰＲ⁹Ｒ¹⁰ (IX) 〔式中、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は互いに独立してＣｌ、−ＮＲ⁵
Ｒ⁶、−ＮＲ⁷Ｒ⁸またはＺ″（ここでＺ″はＺである。
但し、ヒドロキシル、メルカプトおよびＳｅＨは保護さ
れた誘導体、例えばＯ−ＣＨ₂ＣＨ₂−ＣＮ、Ｏ−Ｃ
Ｈ₃、Ｓ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ、Ｘ′−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ
(Ｏ)_x′−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｘ′−Ｄまたは

【化１８】好ましくはＸ′−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ(Ｏ)_x′−ＣＨ₂ＣＨ₂
−Ｘ′−ＤＭＴｒ（ここでｘ′は０または１の整数であ
る）、特にＯ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−ＤＭ
Ｔｒとして存在しなければならない）であり、そしてＲ
⁵、Ｒ⁶、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｘ′、ＤＭＴｒおよびＤは上記の意
味を有する〕のホスフィチル化試薬(Phosphitylation r
eagent)を式Ｘ

【化１９】（式中、Ｙ′′′はオキシまたはチオであり、そして
Ｖ、Ｂ′およびＲは上記の意味を有する）の遊離の３′
(２′)−基を有するヌクレオシドと反応させ、次いで、
このようにして得られた化合物を縮合剤例えばテトラゾ
ール（Ｒ⁹，Ｒ¹⁰＝ＮＲ⁵Ｒ⁶またはＮＲ⁷Ｒ⁸の場合）ま
たはジイソプロピルアミン（Ｒ⁹，Ｒ¹⁰＝Ｃｌの場合）
の存在下で式IV′の支持体上に縮合させることである：
これはしばしばより迅速な方法となる（実施例３、方法
Ｂ）。引き続くヨウ素水、イオウまたはセレンを用いて
の酸化により式VIIａの化合物が得られる。次いで、公
知の方法により保護基Ｒを除去し、オリゴヌクレオチド
合成を継続させることができる。合成の最後に、このよ
うにして得られた支持体の結合したオリゴヌクレオチド
類似体から保護基が公知の方法で除去され、そして本発
明の式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体は次に支持体と開
裂される。

【００３２】合成が式Ｖの単位で最後のサイクルを完了
する場合、５′−ヒドロキシル基および３′−末端にリ
ン含有抱合部分を有する式Ｉ（Ｒ′＝Ｈ）のオリゴヌク
レオチド類似体が得られる。一方、最後の縮合段階で例
えば式IX（式中、Ｒ⁹はＺ″である）のリン酸化試薬を
用いた場合、合成の結果として３′−および５′−末端
の両方にホスフェート含有置換基を有する式Ｉ（Ｒ′＝
式II）のオリゴヌクレオチド類似体が得られる。

【００３３】３′−末端にホスホラミデート(Phosphora
midate)基を有するオリゴヌクレオチドの製造は例えばJ
aegerらのBiochemistry, 27, 7237(1988年)に記載され
ているようにヨウ素／Ｈ₂ＮＲ³またはＨＮＲ³Ｒ⁴（ここ
でＲ³およびＲ⁴は上記の意味を有する）を用いて酸化が
行われるならばテトラゾールの存在下で式IV′（ｘ＝
０）の支持体を式Ｖ（Ｚ＝Ｏ−ＣＨ₃）のモノマーメト
キシホスホラミジットと反応させることにより可能であ
る。

【００３４】特定の場合（Ｚ＝ＮＨＲ³、ＮＲ³Ｒ⁴、
Ｏ、ＳまたはＳｅ）、Ｚ基の導入はまたＨ−ホスホネー
ト法により行うこととができ、先ず式(XI)

【化２０】（式中、Ｒ、Ｖ、ａ、Ｂ′、Ｙ′、Ｘ′およびＷは上記
の意味を有する）のヌクレオシドＨ−ホスホネートを縮
合剤例えば塩化ピバロイルまたはアダマントイルおよび
塩基例えばピリジンの存在下で式IV′の支持体と反応さ
せる。次に、生成した式VII′

【化２１】のＨ−ホスホネートジエステルを酸化的ホスホラミド化
〔Oxidative phosphoramidation；B. FroehlerのTetrah
edron Lett. 27, 5575(1986年)〕またはヨウ素水イオウ
もしくはセレンを用いての酸化に付される。このように
して、３′−末端にコレステリル基を有するオリゴヌク
レオチドが、例えばVII′（ｘ＝０）を出発物質として
四塩化炭素の存在下でコレステリルオキシカルボニル−
アミノアルキルアミンを用いて製造することができる。
例えば、２−メトキシエチルアミンを用いての酸化的ア
ミド化により３′−Ｏ−（２′−メトキシエチル）−ホ
スホラミデート残基を有するオリゴヌクレオチドが得ら
れる。次の連鎖構成はホスホラミジット、Ｈ−ホスホネ
ートまたはトリエステル法に従って公知の方法で行われ
る。

【００３５】式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体の製造は
またトリエステル法を用いて可能であり、式IV′の支持
体のヒドロキシル基を縮合剤の存在下で式XII

【化２２】（式中、Ｒ、Ｖ、ａ、Ｂ′、Ｒ²、Ｙ′、Ｚ、Ｗおよび
Ｘ′は上記の意味を有する）の保護されたホスフェート
ジエステルと反応させる。好ましい縮合剤は求核触媒例
えばイミダゾール、トリアゾール、テトラゾールまたは
これらの置換誘導体例えばＮ−メチルイミダゾール、３
−ニトロトリアゾールもしくは５−（ｐ−ニトロフェニ
ル）−テトラゾールの存在下における塩化アリールスル
ホニル例えば塩化メシチレンスルホニル、塩化２,４,６
−トリイソプロピルベンゼンスルホニルまたは塩化８−
キノリンスルホニルである。特に好ましい縮合剤はピリ
ジン−Ｎ−オキシドまたはキノリン−Ｎ−オキシドの４
−置換誘導体〔EfimovらのNucleic Acids Research 13,
3651(1985年)〕である。Ｈ−ホスホネートおよびホス
ホラミジット法と比較して、トリエステル法は追加の酸
化段階が必要でないという点で有利である。

【００３６】オリゴヌクレオチド合成が式IV′のチオ
（ｘ＝０）またはスルフィニル（ｘ＝１）支持体を用い
て行われる場合、これらの基は塩基好ましくはアンモニ
アでの開裂を容易なものとするためにそれ自体公知の方
法〔FunakoshiらのProc. Natl.Acad. Sci. 88, 6982(19
91年)〕で最後にスルホニル基に酸化される。合成が完
了すると困難なく除去できなければならないため、塩基
Ｂ′のアミノ保護基およびリンカーアームＡの構成の性
質はそれぞれ置換基Ｚの性質に依存する。例えば、オリ
ゴヌクレオチド３′−ホスフェートイソプロピルエステ
ル（Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）を製造する際、Ｂ＝Ａｄｅお
よびＣｙｔの場合ベンゾイル（Ｂｚ）保護基を、そして
Ｂ＝Ｇｕａの場合、イソブチリル（ｉ−Ｂｕ）保護基を
用いることができる。一方、オリゴヌクレオチド３′−
メチルホスホネートエステル（Ｚ＝ＣＨ₃）またはエチ
ルエステル（Ｚ＝Ｏ−Ｃ₂Ｈ₅）を合成するために、Ｂ＝
ＡｄｅおよびＧｕａ、そしてＢ＝Ｃｙｔの場合、それぞ
れより不安定なフェノキシアセチル（ＰＡＣ）およびイ
ソブチリル保護基が使用される。

【００３７】多くの抱合体は、式Ｖのモノマー単位に組
込まれる前に適当な方法で保護されなければならない追
加の官能基を有する。例えば、フルオレセインのカルボ
キシル基はアルキルエステルとして保護されなければな
らない。プソラレンでは、アミド基はＮ−Ｆｍｏｃ（フ
ルオレニルメトキシカルボニル）−保護化合物として存
在しうる。ヒドロキシル基はアシル化またはシリル化
（ｔ−ブチルジメチルシリル）による副反応によって保
護することができる。アミノ基はまたトリフルオロアセ
チル−保護形態で存在しうる。例外的な場合、抱合体は
非常に不安定なため、オリゴヌクレオチド合成の間に保
護基の除去の条件下で分解されうる。このような場合、
式Ｖのモノマーに官能基例えばＺ＝ＨＮ−(ＣＨ₂)_x−Ｎ
Ｈ−Ｆｍｏｃ（ここでｘは２〜１２、好ましくは４〜６
の整数である）を有するリンカーアームを１個だけ組込
むことが好都合である。オリゴヌクレオチド中への組込
みおよび好ましくはアンモニアを用いての保護基の除去
後、遊離のアミノ基は活性エステルに結合されうる。例
えば塩基不安定なアクリジニウムエステルはこのように
して製造された。

【００３８】合成したオリゴヌクレオチド誘導体の特性
決定は電気スプレーイオン化質量分析法により行われる
〔StultsおよびMastersのRapid Commun. Mass. Spectr.
5,350(1991年)〕。

【００３９】本発明の式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体
を血清中における、および公知のエキソヌクレアーゼに
対する安定性について試験した。

【００４０】驚くべきことに、非修飾オリゴヌクレオチ
ドと比較して、すべての式Ｉのオリゴヌクレオチド類似
体は血清ヌクレアーゼに対する非常に増大した安定性を
有し、他方これらのハイブリッド形成作用はほんのわず
かしか影響されないことを見い出した。

【００４１】非修飾オリゴヌクレオチドはウシ胎児血清
中、約２時間の半減期を有するが、すべての式Ｉのオリ
ゴヌクレオチド類似体は約１６時間、十分安定である。
さらに、式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体はＲ′が水素
でないものだけが脾臓ホスホジエステラーゼに対して抵
抗性があるが、ヘビ毒ホスホジエステラーゼに対して安
定である。非修飾オリゴヌクレオチドはヘビ毒ホスホジ
エステラーゼにより３′−末端から、そして脾臓ホスホ
ジエステラーゼにより５′−末端からエキソ核酸分解的
に分解される。

【００４２】相補性一重鎖ヌクレオチド配列では、式Ｉ
のオリゴヌクレオチド類似体はワトソン−クリック型塩
基対による二重鎖ハイブリッドを形成し、他方これらは
フーグスティーン型塩基対による二重鎖核酸を有する三
重らせん構造を形成する。このようにして、核酸の生物
学的機能の調整または抑圧、例えば細胞遺伝子および腫
瘍遺伝子の発現もしくはウィルスのゲノムの機能の抑圧
は本発明のオリゴヌクレオチド類似体を用いることによ
り可能である。従って、式Ｉのオリゴヌクレオチド類似
体はウィルス感染もしくは癌の治療または予防のための
医薬として使用することができる。

【００４３】本発明のオリゴヌクレオチドの活性はＨＳ
Ｖ−１ウィルス複製の阻害に基づいて測定した。例とし
て、次の式ＩのオリゴヌクレオチドがＨＳＶ−１に対し
て活性であることがわかった：配列 HSV-1における攻撃点 5′GGG GCG GGG CTC CAT GGG GG IE 110(開始時) 5′CCG GAA AAC ATC GCG GTT GT UL 30 (中間時) 5′GGT GCT GGT GCT GGA CGA CA UL 48 (中間時) 5′GGC CCT GCT GTT CCG TGG CG UL 52 (中間時) 5′CGT CCA TGT CGG CAA ACA GCT UL 48 (開始時) 5′GAC GTT CCT CCT GCG GGA AG IE4/5(スプライス部位)

【００４４】これらの天然形態、すなわち３′−誘導化
のない形態において、所定の配列はおそらく血清中で急
速な分解に付されるか、または不十分な細胞浸透を有す
るため、細胞培養においてＨＳＶ−１に対して不活性で
ある。一方、式Ｉの３′−誘導化オリゴヌクレオチドは
ＨＳＶ−１複製を様々の程度まで阻害する。適当な化学
的誘導化を伴うが抗ウィルス活性を持たないコントロー
ル配列として役にたつものを下記に示す： 5′CCA GGG TAC AGG TGG CCG GC コントロール 5′GAC TAA TCG GGA ATG TTA AG コントロール

【００４５】３′−末端がプソラレンで修飾された式Ｉ
のオリゴヌクレオチド（実施例４Ｓ）はＨＳＶ−２のＩ
Ｅ4/5領域を認識し、そしてＨＳＶ−２の複製を阻害す
る。プソラレン抱合体の抗ウィルス活性はUV光で照射す
ることにより有意に増大されうる。１６０,０００塩基
を有するＨＳＶ−1/2ゲノムは自然に、ウィルス複製を
阻害するための種々の効果を有する数多くの別の標的配
列を提供する。ヌクレオチド配列を変えることにより、
治療原理を他の何れかのウィルス、細菌または他の病原
体に適用することができる。他の病原体に適用するため
の唯一の前提条件は、これらの病原体の生活環のために
不可欠な遺伝子が公知であるということである。これら
の遺伝子の配列はいわゆる遺伝子データベース中に非常
に多様に蓄えられる。これはその機能が抑圧されうる腫
瘍遺伝子および他の細胞遺伝子の場合についてもそうで
ある。他の細胞遺伝子の例は酵素、レセプター、イオン
チャンネル、免疫調節剤、成長因子および他の調節タン
パク質を符号化するものである。腫瘍遺伝子の例はａｂ
ｌ、ｎｅｕ、ｍｙｃ、ｍｙｂ、ｒａｓ、ｆｏｓ、ｍｏ
ｓ、ｅｒｂＢ、ｅｔｓ、ｊｕｎ、ｐ５３、ｓｒｃおよび
ｒｅｌである。

【００４６】アンチセンスおよびトリプレックス形成オ
リゴヌクレオチド配列は例えば、サイクリックＡＭＰ依
存性プロテインキナーゼ〔L. SheffieldのExp. Cell Re
s. 192, 307(1991年)〕、ストリキニン感受性グリシン
レセプター〔AkagiらのProc.Natl. Acad. Sci. USA 86,
8103(1989年)〕、クロライドチャンネル〔Sorscherら
のProc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 7759(1991年)〕、
インターロイキン−６〔LevyらのJ. Clin. Invest. 88,
696(1991年)〕、塩基性繊維芽細胞成長因子〔Beckerら
のEMBO J. 8, 3685(1989年)〕およびｃ−ｍｙｃ腫瘍遺
伝子〔PostelらのProc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 822
7(1991年)〕の阻害剤として知られている。他の標的分
子の配列の次のさらなる例は、本発明のオリゴヌクレオ
チドの幅広い応用性を説明するためのものである。

【００４７】ａ）ＨＩＶ−１に対するアンチセンスオ
リゴヌクレオチド： 5′ACA CCC AAT TCT GAA AAT GG 3′（スプライス部
位） 5′AGG TCC CTG TTC GGG CGC CA 3′（プライマー結合
部位）ｂ）ＥＧＦレセプター（上皮成長因子レセプター） 5′GGG ACT CCG GCG CAG CGC 3′ （５′未翻訳） 5′GGC AAA CTT TCT TTT CCT CC 3′（アミノ末端）ｃ）ｐ５３腫瘍サプレッサー 5′GGG AAG GAG GAG GAT GAG G 3′ （５′非符号
化） 5′GGC AGT CAT CCA GCT TCG GAG 3′（翻訳開始）ｄ）ｃ−ｆｏｓ腫瘍遺伝子 5′CCC GAG AAC ATC ATG GTC GAA G 3′（翻訳開始） 5′GGG GAA AGC CCG GCA AGG GG 3′ （５′非符号
化）ｅ）ＥＬＡＭ−１（内皮白血球癒着分子） 5′ACT GCT GCC TCT TGT CTC AGG 3′ (５′−非符号
化） 5′CAA TCA ATG ACT TCA AGA GTT C 3′（翻訳開始）ｆ）ＩＣＡＭ−１（細胞内癒着分子） 5′CTC CCC CAC CAC TTC CCC TC 3′（３′−未翻訳） 5′GCT GGG AGC CAT AGC GAG G 3′ （翻訳開始）ｇ）ＢＣＲ−ＡＢＬ（フィラデルフィア染色体転座） 5′GCT GAA GGG CTT CTT CCT TAT TG 3′（ＢＣＲ−Ａ
ＢＬ中断点）

【００４８】文献公知の３′−ヒドロキシル基を有する
オリゴヌクレオチド誘導体と比較して、式Ｉのオリゴヌ
クレオチド類似体からなるＤＮＡプローブは一方で増大
したヌクレアーゼ安定性の利点を提供し、そして他方で
はオリゴヌクレオチドの両方の末端で同一のまたは異な
った標識分子の受容を可能にする。異なった標識グルー
プを１個のオリゴヌクレオチド内で選択的に活性化する
ことができる（二重標識化）ということは有利である。
一方の末端に標識をつけ、そして他方の末端に付加的な
官能基を導入（例えば親和性標識）するために二官能性
誘導化もまた用いることができる。この目的のために、
例えば、アビジンまたはストレプトアビジンを認識する
ビオチンをオリゴヌクレオチドの３′−末端に組込むこ
とができるが、他方アルキルアミノリンカーを介してア
クリジニウムエステル化学ルミネセンス標識を５′−末
端に付けることができる。

【００４９】その上、本発明のオリゴヌクレオチド類似
体の浸透作用は多くの場合、非修飾オリゴヌクレオチド
よりも有利であり、特に親油性基が導入された場合はそ
うである。オリゴヌクレオチドの増大した安定性および
これらの改良された細胞浸透は、非修飾オリゴヌクレオ
チドと比較してより高い生物学的活性を有する形態にお
いて現れる。

【００５０】前述した本発明のオリゴヌクレオチド類似
体の診断上、予防上および治療上の用途は単なる代表例
であって、したがってこれらの類似体の使用はこれらに
限定されない。その上、本発明のオリゴヌクレオチド類
似体は例えばバイオテクノロジーおよび分子生物学にお
ける補助剤として使用されうる。

【００５１】さらに、本発明は場合によっては生理学的
に許容しうる補助剤および／または賦形剤および／また
は他の公知の活性物質とともに、有効量の１種以上の式
Ｉの化合物またはこれらの生理学的に許容しうる塩を含
有する製剤、並びに活性物質が賦形剤そしておそらくは
さらに補助剤、添加剤または他の活性物質とともに適当
な形態に変換されることからなるこれらの製剤の製造法
に関する。投与は好ましくは静脈内的に、局所的に、ま
たは鼻内的に行われる。

【００５２】

【実施例】

実施例１式IVの支持体の製造ａ）アミノプロピル−ＣＰＧをビスヒドロキシエチル
スルホンジメトキシトリチルエーテルのスクシネートと
反応させることによる式IVａの支持体の製造４.５６ｇのビス−（２−ヒドロキシエチル）スルホン
のジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）モノエーテル（１０
ミリモル）を２回無水ピリジン中に入れて濃縮すること
により乾燥し、２５mlの無水ピリジンに溶解し、１.７
８ｇ（１４ミリモル）のＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリ
ジン）および１.４ｇの無水コハク酸（１４ミリモル）
を加え、そしてこの混合物を室温で３時間撹拌した。反
応が完了した後、混合物を濃縮し、残留物を３回トルエ
ン中に入れて濃縮してピリジンを除去し、次いで２２０
mlの塩化メチレン中に入れた。有機相を１０％強度クエ
ン酸（１１０ml）および３回１１０mlの水で洗浄し、硫
酸ナトリウム上で乾燥し、そして濃縮した。得られた固
体残留物を真空乾燥した（５.６４ｇ）。１.６７ｇ（３
ミリモル）のこのスクシネートを２回無水ピリジン中に
入れて濃縮し、０.６５mlの無水ピリジンおよび６mlの
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）の混合物中に溶解した。
２.１mlの無水ＴＨＦ中における４２０mg（３ミリモ
ル）のｐ−ニトロフェノールおよび６８７mgのＤＣＣ
（ジシクロヘキシルカルボジイミド、３.３ミリモル）
の溶液を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応が
完了した後、遠心分離により沈殿したジシクロヘキシル
尿素を除去した。沈殿物を１mlの無水エーテル中に懸濁
し、再び遠心分離した。１.５ｇのアミノプロピル−Ｃ
ＰＧ支持体（Fluka社製、５００Å、１００μモル／ｇ
のアミノ基）を１.８mlの無水ＤＭＦおよび３５０μｌ
のトリエチルアミンの混合物中に懸濁し、沈殿物からデ
カンテーションしたニトロフェニルスクシネートエステ
ルの合一した溶液を加え、そして混合物を室温で１６時
間振とうした。固体支持体を分離し、３mlのキャッピン
グ試薬（無水酢酸／２,６−ルチジン／ＤＭＡＰ；それ
ぞれＴＨＦ中０.２５Ｍ）と一緒に室温で１時間振とう
して反応性基をブロックした。次に、誘導化されたＣＰ
Ｇ支持体を吸引濾過し、メタノール、ＴＨＦ、塩化メチ
レンおよびエーテルで洗浄し、そして４０℃で真空乾燥
した。ジメトキシトリチル含有成分を有する式IVａの支
持体の荷重（loading）は３８μモル／ｇであった。

【００５３】ｂ） TentaGel^R（Rapp社の登録商標名）
をビスヒドロキシエチルスルホンジメトキシトリチルエ
ーテルのスクシネートと反応させることによる式IVｂの
支持体の製造１００mgのアミノ形態のTentaGel樹脂、２５０μモル／
ｇのアミノ基を有するＰＳ／ＰＯＥコポリマーを３６０
μｌのＤＭＦおよび７０μｌのトリエチルアミンの混合
物中に懸濁し、４００μモルのｐ−ニトロフェニルスク
シネートエステル（製造：実施例１ａ参照）を加え、そ
して混合物を室温で１６時間乾燥した。次に、実施例１
ａ）に記載したように後処理した。ジメトキシトリチル
含有成分を有する式IVｂのTentaGel樹脂の荷重は９８μ
モル／ｇであった。

【００５４】ｃ） TentaGel（ヒドロキシ形態）を式IX
（Ｚ″＝ＤＭＴｒ−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂ＣＨ₂−
Ｏ−；Ｒ⁹＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂；Ｒ¹⁰＝Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂
ＣＮ）のホスフィチル化試薬と反応させることによる支
持体IVｃの製造５００μモル／ｇのヒドロキシル基を有する５０mgのヒ
ドロキシ形態のTentaGel樹脂を２５当量のテトラゾール
の存在下、１０当量の式IX（Ｚ″＝ＤＭＴｒ−Ｏ−ＣＨ
₂ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｏ−；Ｒ⁹＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)
₂；Ｒ¹⁰＝Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ）のホスフィチル化試薬
とアセトニトリル中、２２℃で反応させた。ヨウ素水
（ＴＨＦ／水／ピリジン中における１.３ｇのヨウ素；
７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖ）で酸化した後、実施例１
ａ）に記載したように後処理を行った。ジメトキシトリ
チル含有成分を有する式IVｃの支持体の荷重は２４７μ
モル／ｇであった。

【００５５】実施例２式VIIIの保護されたヌクレオシ
ド３′−ホスホラミジットの製造ａ） VIIIａ(Ｂ′＝Ｃｙｔ^iBu、Ｚ＝Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₃、
Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の製造２ミリモルの式VI（Ｂ′＝Ｃｙｔ^iBu、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝
Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のヌクレオシド３′−ホスホロビス
アミジットを２回２０mlの無水アセトニトリル中に入れ
て濃縮して、そして２０mlの無水アセトニトリル中に溶
解した。次に、５mlの無水アセトニトリル中における
２.４ミリモルのエタノールおよび１.２ミリモルの昇華
したテトラゾールの溶液を１５分間にわたって滴加し
た。撹拌をさらに２.５時間継続した後、混合物を７５m
lの塩化メチレンで希釈し、そして有機相を５０mlの５
％強度重炭酸ナトリウム溶液で抽出した。水性溶液を２
回５０mlの塩化メチレンで洗浄し、合一した有機相を硫
酸ナトリウム上で乾燥し、真空濃縮した。残留物を塩化
メチレン／ｎ−ヘプタン／トリエチルアミン（４５：４
５：１０；ｖ：ｖ：ｖ）を用いるシリカゲル上における
カラムクロマトグラフィーにより精製した。０.７ｇの
所望のジアステレオマー物質が、薄層クロマトグラフィ
ーにより精製した化合物（³¹Ｐ−ＮＭＲ σ＝１４６.
７、１４７.５ppm）として得られた。痕跡量のその相当
するビス−エチルホスフィットが副生成物（ ³¹Ｐ−ＮＭ
Ｒ σ＝１３９.３ppm）として単離された。

【００５６】ｂ） VIIIｂ（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−ｉ
−Ｃ₃Ｈ₇、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の製造１０mlの無水塩化メチレン中におけるテトラゾール
（０.５ミリモル）の存在下、式IX（Ｚ″＝Ｏ−ｉ−Ｃ₃
Ｈ₇、Ｒ⁹＝Ｒ¹⁰＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂；４ミリモル）のビ
スアミジットを用いる式Ｘ（Ｂ′＝Ｔｈｙ（β−位）；
Ｒ＝ＤＭＴｒ、Ｖ＝Ｏ、ａ＝Ｏ、Ｙ″＝Ｏ；２ミリモ
ル）の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジンのホスフ
ィチル化により製造を行った。混合物を実施例２ａ）の
ようにして後処理した（³¹Ｐ−ＮＭＲ σ＝１４５.０４
ppm、１４５.６６ppm）。

【００５７】ｃ） VIIIｃ（Ｂ′＝Ｃｙｔ^iBu、Ｚ＝Ｏ
−ｎ−Ｃ₆Ｈ₁₃、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ(Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^iBu、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミ
ジットからテトラゾール触媒の存在下、１当量のｎ−ヘ
キサノールとの反応により製造した（³¹Ｐ−ＮＭＲ１
４８.１ppm、１４８.５ppm）。

【００５８】ｄ） VIIIｄ（Ｂ′＝Ｃｙｔ^iBu、Ｚ＝Ｏ
−ｎ−Ｃ₁₈Ｈ₃₇、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙｔ
^iBu、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジ
ットからテトラゾール触媒の存在下、１当量のｎ−オク
タデカノールとの反応により製造した（³¹Ｐ−ＮＭＲ
１４７.２ppm、１４７.９ppm）。

【００５９】ｅ） VIIIｅ(Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝３−
ピリジルプロパン−３−オキシ、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝
ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇、Ｒ²′＝Ｈ）
のビスアミジットから、テトラゾール触媒の存在下、１
当量の３−ピリジン（プロパン−３−オール）との反応
により製造した。この場合、カラムクロマトグラフィー
により２つのジアステレオマーを分離することができた
（³¹Ｐ−ＮＭＲジアステレオマー１：１４７.７ppm、
ジアステレオマー２：１４８.２ppm）。

【００６０】ｆ） VIIIｆ（Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝ｐ−
ニトロフェニルエチル−２−オキシ、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ
₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジ
ットからテトラゾール触媒の存在下、１当量のｐ−ニト
ロフェニルエタン−２−オールとの反応により製造した
（³¹Ｐ−ＮＭＲ１４８.１ppm、１４８.６ppm）。

【００６１】ｇ） VIIIｇ（Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝−
(ＯＣＨ₂ＣＨ₂)₃ＯＣＨ₃、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の製
造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジ
ットからテトラゾール触媒の存在下、１当量のトリエチ
レングリコールモノメチルエーテルとの反応により製造
した(³¹Ｐ−ＮＭＲ１４８.５ppm、１４８.９ppm）。

【００６２】ｈ） VIIIｈ(Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝−(Ｏ
ＣＨ₂ＣＨ₂)₄Ｏ(ＣＨ₂)₉ＣＨ₃、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ
₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジ
ットからテトラゾール触媒の存在下、１当量のテトラエ
チレングリコールモノデシルエーテルとの反応により製
造した（³¹Ｐ−ＮＭＲ１４８.４ppm、１４８.８pp
m）。

【００６３】ｉ） VIIIｉ(Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝−(Ｏ
ＣＨ₂ＣＨ₂)₅Ｏ(ＣＨ₂)₄ＣＨ₃、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ
₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジ
ットからテトラゾール触媒の存在下、１当量のペンタエ
チレングリコールモノペンチルエーテルとの反応により
製造した（³¹Ｐ−ＮＭＲ１４８.４ppm、１４８.９pp
m）。

【００６４】ｋ） VIIIｋ（Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝−
(ＯＣＨ₂ＣＨ₂)₈Ｏ(ＣＨ₂)₁₃ＣＨ₃、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃
Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジ
ットからテトラゾール触媒の存在下、１当量のオクタエ
チレングリコールモノテトラデシルエーテルとの反応に
より製造した（³¹Ｐ−ＮＭＲ１４８.４ppm、１４８.８
ppm）。

【００６５】ｌ） VIIIｐ(Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝ＣＨ₃、
Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、５′−Ｏ−ジメトキシト
リチルチミジンから触媒としてテトラゾールの代りに２
当量のジイソプロピルエチルアミンを用いて、式IX
（Ｚ″＝ＣＨ₃、Ｒ⁹＝Ｃｌ、Ｒ¹⁰＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂）
の試薬でのホスフィチル化により製造した（³¹Ｐ−ＮＭ
Ｒ１２０.６ppm、１２１.０ppm）。

【００６６】ｍ） VIIIｍ（Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝アク
リジン−９−（ブチル−４−オキシ）−、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ
−Ｃ₃Ｈ₇）の製造実施例２ａ）と同様の方法で、式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｒ⁷＝Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジ
ットからテトラゾール触媒の存在下、１当量の９−（４
−ヒドロキシブチル）アクリジンとの反応により製造し
た（³¹Ｐ−ＮＭＲ１４６.７ppm、１４７.４ppm）。

【００６７】実施例３式VIIの支持体の結合したヌク
レオチドの製造ａ）方法Ａ：式VIIIｂのヌクレオシド３′−ホスホラ
ミジットを結合することによる式VIIａ−１の支持体の
製造それに０.２μモルのビスヒドロキシエチルスルホンジ
メトキシトリチルエーテルが結合された実施例１ａ）で
得られた７.５mgの支持体を３％強度のトリクロロ酢酸
で処理し、これによりＤＭＴｒ保護基を除去し、アセト
ニトリルで洗浄し、次いでアセトニトリル中、テトラゾ
ール（１０μモル）の存在下で２μモルの式VIIIｂ
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−
Ｃ₃Ｈ₇）のヌクレオシド３′−ホスホラミジットと反応
させた。反応時間は２.５分である。次に、ヨウ素での
酸化（Ｗ＝Ｏの場合；ＴＨＦ／水／ピリジン中における
１.３ｇのヨウ素；７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖ）を行
った。

【００６８】ｂ）方法Ｂ：式IXのホスフィチル化試薬
を介しての反応による式VIIａ−２の支持体の製造式IX（Ｚ″＝ｎ−オクチル、Ｒ⁹＝Ｒ¹⁰＝Ｃｌ；１当
量）のホスフィチル化試薬を無水アセトニトリルまたは
塩化メチレン中、１.２当量のジイソプロピルエチルア
ミン（ＤＩＰＥＡ）の存在下、式Ｘのヌクレオシド（１
当量の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン、Ｂ′＝
β−位、Ｙ′′′＝Ｏ）と−７８℃で反応させて相当す
るヌクレオシド−３′−Ｏ−ｎ−オクチルホスホンモノ
クロライドを生成した。保護基Ｄ＝ＤＭＴｒを除去する
ために、式IVａの支持体を方法Ａのようにして処理し、
次いでアセトニトリルで洗浄し、ＤＩＰＥＡの存在下、
その場で製造した過剰のヌクレオシド−３′−Ｏ−ｎ−
オクチルホスホンモノクロライドと反応させた。ヨウ素
水で酸化した後、式VIIａ−２の支持体の結合したヌク
レオチドが得られた。これは次のオリゴヌクレオチド合
成に利用できる。

【００６９】実施例４式Ｉのオリゴヌクレオチド（そ
れぞれの場合において、モノマーはβ−Ｄ−デオキシリ
ボヌクレオシドである）の製造ａ）式Ｉａ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇、ａ
＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ、Ｂ＝Ｔｈｙ、ｎ＝
９）のオリゴヌクレオチドの製造ＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐ−(Ｏ−ｉ
−Ｃ_３Ｈ_７) 実施例３ａ）で得られた０.２μモルの支持体VIIａ−１
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）を次の
試薬を用いて順番に処理した：１．無水アセトニトリル２．ジクロロメタン中における３％トリクロロ酢酸３．無水アセトニトリル４．０.１５mlの無水アセトニトリル中における４μモ
ルのβ−シアノエチル５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチ
ミジン−３′−ホスフィット−ジイソプロピルアミジッ
トおよび２.５μモルのテトラゾール５．アセトニトリル６．４０％ルチジンおよび１０％ジメチルアミノピリジ
ンとともにＴＨＦ中における２０％無水酢酸７．アセトニトリル８．ヨウ素（ＴＨＦ／水／ピリジン中１.３ｇ；７０：
２０：５＝ｖ：ｖ：ｖ）

【００７０】段階１〜８（以後、一反応サイクルと称す
る）を８回繰り返してデカチミジレート誘導体を生成し
た。合成が完了した後、段階１〜３に記載のようにして
ジメトキシトリチル基の除去を行った。オリゴヌクレオ
チドを支持体から開裂し、と同時にアンモニアで１.５
時間処理することによりβ−シアノエチル基を除去し
た。オリゴヌクレオチドはアミノ保護基を全く含まない
ので、アンモニアを用いてのこれ以上の処理は必要では
ない。得られたイソプロピルデカチミジレート３′−ホ
スフェートの粗生成物はポリアクリルアミドゲル電気泳
動またはＨＰＬＣにより精製した。

【００７１】ｂ）式Ｉｂ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝Ｏ−ｉ
−Ｃ₃Ｈ₇、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリ
ゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐＴｐ−Ｏ−ｉ−Ｃ
₃Ｈ₇）モノマー中、異なったヌクレオチド塩基を用いる以外は
実施例４ａ）と同様の方法で合成を行った。合成段階１
〜８において、一般にモノマーはアデニン（Ａｄｅ）、
シトシン（Ｃｙｔ）またはグアニン（Ｇｕａ）のアミノ
基が適当な保護基で保護されたβ−シアノエチル５′−
Ｏ−ジメトキシトリチル−ヌクレオシド−３′−ホスフ
ィット−ジアルキルアミドとして使用される。本実施例
においては、Ｎ⁶−ベンゾイル−Ａｄｅ（Ａｄｅ^Bz）、
Ｎ⁴−ベンゾイル−Ｃｙｔ（Ｃｙｔ ^Bz）およびＮ²−イソ
ブチリル−Ｇｕａ（Ｇｕａ^iBu）を使用した。実施例４
ａ）に記載のようにして式VIIａ−１（Ｂ′＝Ｔｈｙ、
Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の支持体を出発物質とし
て用い、上記の順序に従ってその相当するモノマー上に
縮合して連鎖構成を行った。しかしながら、アミノ保護
基を除去するために、さらにアンモニアでの処理（５０
℃で１６時間）を行った。

【００７２】ｃ）式Ｉｃ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝Ｏ−Ｃ
Ｈ₂ＣＨ₃、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−Ｏ−ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₃）その製造が方法Ａ（実施例３ａ））に従って式VIIIａの
モノマーの助けによって行われる、式VIIａ−３（Ｂ′
＝Ｃｙｔ^iBu、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝Ｏ−Ｃ₂Ｈ₅）の支持体を出
発物質として、実施例４ｂ）と同様の方法で合成を行っ
た。しかしながら、塩基−不安定な置換基（ここではＺ
＝Ｏ−Ｃ₂Ｈ₅）を製造するために、合成の最後により容
易に開裂されうるより不安定なアミノ保護基Ｎ⁶−フェ
ノキシアセチル−Ａｄｅ（Ａｄｅ^PAC）、Ｎ⁴−イソブチ
リル−Ｃｙｔ（Ｃｙｔ^iBu）およびＮ²−フェノキシアセ
チル−Ｇｕａ（Ｇｕａ^PAC）が有利に用いられた。次
に、アンモニアでの保護基の除去に５０℃で２時間だけ
かかった。生成物を５０℃においてアンモニアでさらに
６時間処理した場合、約５〜１０％のオリゴヌクレオチ
ド−３′−ホスフェートがエチルホスフェートエステル
の開裂の結果としての副生成物として得られた。

【００７３】ｄ）式Ｉｄ〔Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝Ｏ−
（ＣＨ₂)₁₇ＣＨ₃、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ；Ｗ
＝Ｏ、最後の２個の５′−末端ホスホロチオエートヌク
レオチド間結合(Ｗ＝Ｓ、Ｐｓとして示される)を除く〕
のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（Ｃｐ_sＧｐ_sＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐ
ＧｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−Ｏ−（ＣＨ₂)
₁₇ＣＨ₃）その製造が方法Ａ（実施例３ａ））に従って式VIIIｄの
モノマーの助けによって行われる、式VIIａ−４（Ｂ′
＝Ｃｙｔ^iBu、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝Ｏ−（ＣＨ₂)₁₇ＣＨ ₃）の支
持体を出発物質として、実施例４ｃ）に記載のものと同
様の方法でより不安定な保護基を用いて合成を行った。
末位から２番目のヌクレオチド（Ｇ）および最後のヌク
レオチド（Ｃ）を結合した後、ヨウ素水の代りにＴＥＴ
Ｄ溶液（アセトニトリル中における０.４Ｍのテトラエ
チルチウラムジスルフィド）をイオウ酸化のために使用
した。保護基をアンモニアで２時間処理することにより
除去した。２個の５′−末端ホスホロチオエートヌクレ
オチド間結合および３′−Ｏ−ｎ−オクタデシルホスフ
ェートエステル残基を有する式Ｉｄのオリゴヌクレオチ
ドが得られた。

【００７４】ｅ）式Ｉｅ〔Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝Ｃ
Ｈ₃、ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ；Ｕ＝Ｏ、２個の
５′−末端メチルホスホネートヌクレオチド間結合（Ｕ
＝ＣＨ₃、Ｐ_Meとして示される)を除く〕のオリゴヌクレ
オチドの製造ｄ（Ｃｐ_MeＧｐ_MeＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧ
ｐＧｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐＴｐ_Me）その製造が方法Ａ（実施例３ａ））に従って式VIIIｐの
モノマーの助けによって行われる、式VIIａ−５（Ｂ′
＝Ｔｈｙ、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝ＣＨ₃）の支持体を出発物質と
して、実施例４ｃ）と同様の方法で合成を行った。通常
のシアノエチルで保護されたモノマー（式VIII、Ｚ＝Ｏ
ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ）の代りに、その相当するメチルホスホ
ンアミジット（式VIII、Ｚ＝ＣＨ₃）を最後の２個のヌ
クレオチド単位（ＧおよびＣ）を結合するために用い
た。濃アンモニア（室温で１.５時間）で支持体から開
裂し、次いでエチレンジアミン／エタノール／水（５：
４：１；ｖ：ｖ：ｖ）で６時間処理して塩基のアミノ基
を遊離させた。その結果、２個の５′−末端メチルホス
ホネートヌクレオチド間結合を有する式Ｉｅのオリゴヌ
クレオチド−３′−メチルホスホネートが得られた。

【００７５】ｆ）式Ｉｆ(Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝ＣＨ₃、
Ｘ＝Ｓ、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌク
レオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ_(s)Me）実施例１ａ）で得られた式IVａの支持体を出発物質とし
て、式VIII(Ｚ＝ＣＨ₃、Ｂ′＝Ｃｙｔ^iBu、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝
ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のメチルホスホンアミジットを実施例３
ａ）に記載されているように最初の反応サイクルで結合
した。酸化はＴＥＴＤを用いて行った。さらなる合成は
実施例３ｃ）に記載のようにして行った。実施例３ｅ）
と同様の方法で保護基を除去した後、式Ｉｆのオリゴヌ
クレオチド−３′−メチルホスホノチオエートが得られ
た。

【００７６】ｇ）式Ｉｇ(Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝Ｘ＝
Ｓ、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオ
チドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ_(s)s）実施例４ｂ）に記載された合成法と同様にして、実施例
１ａ）で得られた式IVａの支持体を出発物質として行っ
たが、しかし最初の縮合段階でメチルホスホンアミジッ
トの代りに式VIII(Ｚ＝２,４−ジクロロチオベンジル；
Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝エチル）のヌクレオシド−３′−ホスホラミ
ジットを使用した。ＴＥＴＤ（アセトニトリル中０.４
Ｍ）を用いての酸化により再び第２のＳ原子の導入を行
った。ジクロロベンジルチオ基の開裂は公知の方法でチ
オフェノール／トリエチルアミンを用いて行った。濃ア
ンモニアで保護基を除去した後、式Ｉｇのオリゴヌクレ
オチド−３′−ホスホロジチオエートが得られた。

【００７７】ｈ）式Ｉｈ(Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝ｐ−ニ
トロフェニルエチル−２−オキシ、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ
＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造

【化２３】その製造が方法Ａ（実施例３ａ））に従って式VIIIｆの
モノマーの助けによって行われる、式VIIａ−６（Ｂ′
＝Ｃｙｔ^Bz、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝ｐ−ニトロフェニルエチル−
２−オキシ）の支持体を出発物質として、実施例４ｂ）
と同様の方法で合成を行った。５５℃において１０時間
アンモニアで処理することにより保護基を除去した後、
式Ｉｈのオリゴヌクレオチド−３′−Ｏ−（ｐ−ニトロ
フェニルエチル）ホスフェートが得られた。

【００７８】ｉ）式Ｉｉ(Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝３−ピ
リジルプロパン−３−オキシ、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ
＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造

【化２４】実施例３ａ）に記載のようにして式VIIIｅのアミジット
の助けによって製造した式VIIａ−７（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^iBu、Ｗ＝Ｏ、

【化２５】の支持体を出発物質として、実施例４ｃ）と同様にして
オリゴヌクレオチド合成を行った。

【００７９】ｋ）式Ｉｋ(Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝−Ｏ−
（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₃ＣＨ₃、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝
Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＧｐＡｐＧｐＧｐＡｐＣｐＧｐＴｐＴｐＣｐＣｐＴ
ｐＣｐＣｐＴｐＧｐＣｐＧｐＧｐＧｐＡｐＡｐＧｐＧｐ
Ｃｐ−Ｏ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₃ＣＨ₃）実施例３ａ）に記載のようにして式VIIIｇのアミジット
の助けによって製造した式VIIａ−８（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝−Ｏ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₃ＣＨ₃）の
支持体を出発物質として、実施例４ｂ）と同様にして上
記の配列に相当するオリゴヌクレオチド合成を行った。

【００８０】ｌ）式Ｉｌ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝−Ｏ−
（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₅（ＣＨ₂)₄ＣＨ₃、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ
＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−Ｏ−（ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₂Ｏ)₅−（ＣＨ₂)₄ＣＨ₃）実施例３ａ）に記載のようにして式VIIIｉのアミジット
の助けによって製造した式VIIａ−９（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝−Ｏ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₅（ＣＨ₂)₄
ＣＨ₃）の支持体を出発物質として、実施例４ｂ）と同
様にしてオリゴヌクレオチド合成を行った。

【００８１】ｍ）式Ｉｍ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝−Ｏ−
（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₈（ＣＨ₂)₁₃ＣＨ₃、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝
Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−Ｏ−（ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₂Ｏ)₈−（ＣＨ₂)₁₃ＣＨ₃）実施例３ａ）に記載のようにして式VIIIｋのアミジット
の助けによって製造した式VIIａ−１０（Ｂ′＝Ｃｙｔ
^Bz、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝−Ｏ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₈（ＣＨ₂)₁₃Ｃ
Ｈ₃）の支持体を出発物質として、実施例４ｂ）と同様
にしてオリゴヌクレオチド合成を行った。

【００８２】ｎ）式Ｉｎ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝−（Ｃ
Ｈ₃）Ｎ（ＣＨ₂)₂Ｎ（ＣＨ₃)₂、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝
Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−Ｎ(ＣＨ₃)(ＣＨ
₂)₂Ｎ−(ＣＨ₃)₂ 実施例１ｃ）で得られた式IVｃの支持体を出発物質とし
て、実施例４ａ）に記載のようにしてオリゴヌクレオチ
ド合成を行った。但し、最初の縮合反応には式VIII
（Ｂ′＝Ｃｙｔ^i-Bz、Ｚ＝ＯＣＨ₃、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｎ(ｉ−
Ｃ₃Ｈ₇)）のメトキシホスホラミジットを使用し、そし
て酸化的アミド化は２回ＴＨＦ／Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−トリメ
チルエチレンジアミン（２：１；ｖ：ｖ）中における
０.１Ｍヨウ素溶液を用いて１５分間行った。オリゴヌ
クレオチド配列の構成後、塩基に安定なスルフィド支持
体をそれ自体公知の方法でＮａＩＯ₄を用いて酸化して
塩基に不安定なスルホン支持体とした。支持体からの開
裂および保護基（ＡｄｅおよびＧｕａの場合はＰＡＣ；
Ｃｙｔの場合はｉ−Ｂｕ）の除去は５０℃においてｔ−
ブチルアミン／メタノール（１：１、ｖ：ｖ）を用いて
１６時間行った。式Ｉｎのオリゴヌクレオチド−３′−
トリメチルエチレンジアミン−ホスホラミジットが得ら
れた。

【００８３】ｏ）式Ｉｏ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝−ＨＮ
(ＣＨ₂)₂Ｏ−ＣＨ₃、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝
Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−ＨＮ(ＣＨ₂)₂Ｏ
−ＣＨ₃）実施例４ｎ）と同様にして行った。ＴＨＦ／２−メトキ
シ−エチルアミン（２：１；ｖ：ｖ）中における０.１
Ｍヨウ素溶液を用いての酸化的アミド化は２回１５分間
行った。保護基を除去した後、式Ｉｏのオリゴヌクレオ
チド−３′−（２−メトキシエチル）−ホスホラミデー
トが得られた。

【００８４】ｐ）式Ｉｐ（Ｒ¹＝式II、Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝
Ｓ、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｚ′＝Ｏ）のオリ
ゴヌクレオチドの製造ｄ（ｐ_sＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧ
ｐＧｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ_s）式IVａの支持体を出発物質として、実施例４ｂ）に記載
のようにして合成を行った。しかしながら、最初の単位
（式VIII；Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz；Ｚ＝Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ；
Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂）を結合した後、酸化はＴ
ＥＴＤを用いて行った。加えた最後の塩基のＤＭＴｒ保
護基を除去した後、式IX（Ｒ⁹＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂、
Ｚ″＝Ｒ¹⁰＝ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ）のビス−シアノエチル
オキシ−ホスホラミジットを用いて遊離の５′−ヒドロ
キシル基をホスフィチル化し、次いでＴＥＴＤで酸化し
てチオホスフェートとした。アンモニア処理の間にシア
ノエチル保護基を除去した。その結果、式Ｉｐのオリゴ
ヌクレオチド−３′,５′−ビス−チオホスフェートが
得られた。

【００８５】ｑ）式Ｉｑ（Ｒ¹＝式II、Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝
Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｚ′
＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ｉ−Ｃ₂Ｈ₇−Ｏ−ｐＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐ
ＧｐＴｐＣｐＧｐＧｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣ
ｐＴｐ−Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）実施例４ｂ）に記載のようにして合成を行った。加えた
最後の塩基のＤＭＴｒ保護基を除去した後、式IX（Ｒ⁹
＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂、Ｒ¹⁰＝ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＮ、Ｚ″＝
Ｏ−ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のシアノエチルオキシ−ｉ−プロピル
オキシ−ホスホラミジットを用いて遊離の５′−ヒドロ
キシル基をホスフィチル化し、次いでヨウ素水で酸化し
た。その結果、式Ｉｑのオリゴヌクレオチド−３′,
５′−ビス−イソプロピルホスフェートエステルが得ら
れた。

【００８６】ｒ）式Ｉｒ（Ｒ¹＝式II、Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝
ｎ−Ｃ₈Ｈ₁₇、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｚ′＝
Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣＨ₃(ＣＨ₂)₇−ｐＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐ
ＧｐＴｐＣｐＧｐＧｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣ
ｐＴｐ−(ＣＨ₂)₇ＣＨ₃）実施例３ｂ）に記載のようにして製造した式VIIａ−２
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝(ＣＨ₂)₇ＣＨ₃）の支持
体を出発物質として、実施例４ｃ）と同様にして合成を
行った。加えた最後のＤＭＴｒ保護基を除去した後、Ｄ
ＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）を用いて式IX
（Ｚ″＝(ＣＨ₂)₇ＣＨ₃、Ｒ⁹＝Ｒ¹⁰＝Ｃｌ）のｎ−オク
チルジクロロホスファンで遊離の５′−ヒドロキシル基
をホスフィチル化した。酸化および加水分解後、オリゴ
ヌクレオチドを実施例４ｅ）のようにして支持体から開
裂した。式Ｉｒのオリゴヌクレオチド−３′,５′−ビ
ス−（ｎ−オクチルホスホネート）が得られた。

【００８７】ｓ）式Ｉｓ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ″＝“プ
ソラレン”、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオ
リゴヌクレオチドの製造ｄ（ＧｐＧｐＣｐＧｐＣｐＣｐＣｐＧｐＧｐＣｐＣｐＴ
ｐＧｐＣｐＧｐＡｐＧｐＡｐＡｐＡｐＧｐＣｐＧｐＣｐ
Ｇｐ−“プソラレン”）その前に実施例２ａ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｇｕａ^PAC、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）から“プ
ソラレン”−Ｈとの反応〔V. PielesおよびU.Englisch
のNucleic Acids Research １７，２８５（１９８９
年）〕により得られた式VIII（Ｂ′＝Ｇｕａ^PAC、Ｚ＝
“プソラレン”、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のモノマーか
ら実施例３ａ）と同様にして製造した式VIIａ−１１
（Ｂ′＝Ｇｕａ^PAC、Ｚ＝“プソラレン”、Ｗ＝Ｏ）の
支持体を出発物質として、実施例４ｃ）と同様にして合
成を行った。アンモニアで保護基を除去した後、３′−
末端に“プソラレン”ホスフェートエステルが結合され
た式Ｉｓのオリゴヌクレオチドが得られた。

【００８８】ｔ）式Ｉｔ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝“ビオ
チン”、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴ
ヌクレオチドの製造ｄ（ＧｐＧｐＣｐＧｐＣｐＣｐＣｐＧｐＧｐＣｐＣｐＴ
ｐＧｐＣｐＧｐＡｐＧｐＡｐＡｐＡｐＧｐＣｐＧｐＣｐ
Ｇｐ−“ビオチン”）その前に実施例２ａ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｇｕａ^PAC、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）から“ビ
オチン”−Ｈとの反応〔R. PonのTetrahedronLett., ３
２，１７１５（１９９１年）〕により得られた式VIII
（Ｂ′＝Ｇｕａ^P ^AC、Ｚ＝“ビオチン”、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ
−Ｃ₃Ｈ₇）のモノマーから実施例３ａ）と同様にして製
造した式VIIａ−１２（Ｂ′＝Ｇｕａ^PAC、Ｚ＝“ビオチ
ン”、Ｗ＝Ｏ）の支持体を出発物質として、実施例４
ｃ）と同様にして合成を行った。アンモニアで保護基を
除去した後、３′−末端に“ビオチン”ホスフェートエ
ステルが結合された式Ｉｔのオリゴヌクレオチドが得ら
れた。

【００８９】ｕ）式Ｉｕ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝“フル
オレセイン”、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）の
オリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＧｐＧｐＣｐＧｐＣｐＣｐＣｐＧｐＧｐＣｐＣｐＴ
ｐＧｐＣｐＧｐＡｐＧｐＡｐＡｐＡｐＧｐＣｐＧｐＣｐ
Ｇｐ−“フルオレセイン”）その前に実施例２ａ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｇｕａ^PAC、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）から“フ
ルオレセイン”−Ｈとの反応〔SchnbertらのNucleic Ac
ids Research, １８，３４２７（１９９１年）〕により
得られた式VIII（Ｂ′＝Ｇｕａ^PAC、Ｚ＝“フルオレセ
イン”、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のモノマーから実施例
３ａ）と同様にして製造した式VIIａ−１３（Ｂ′＝Ｇ
ｕａ^PAC、Ｚ＝“フルオレセイン”、Ｗ＝Ｏ）の支持体
を出発物質として、実施例４ｃ）と同様にして合成を行
った。

【００９０】ｖ）式Ｉｖ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝アクリ
ジン−９−イル−ブタ−４−オキシ、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝
Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−（アクリジン−
９−イル−ブタ−４−オキシ））その製造が式VIIIｍのモノマーを用いて実施例３ａ）と
同様にして行われる式VIIａ−１４（Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、
Ｗ＝Ｏ、Ｚ＝アクリジン−９−イル−ブタ−４−オキ
シ）の支持体を出発物質として、実施例４ｂ）に記載の
ようにしてオリゴヌクレオチド合成を行った。脱保護し
た後、３′−末端にアクリジン−９−イル−ブタ−４−
イルホスフェートエステルを含有する式IVのオリゴヌク
レオチドが得られた。

【００９１】ｗ）式Ｉｗ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝ＨＮ
(ＣＨ₂)₃ＮＨ(ＣＨ₂)₄ＮＨ(ＣＨ₂)₃ＮＨ₂、ａ＝Ｕ＝Ｖ
＝Ｗ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造ｄ（ＣｐＧｐＴｐＣｐＣｐＡｐＴｐＧｐＴｐＣｐＧｐＧ
ｐＣｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡｐＧｐＣｐ−ＨＮ(ＣＨ₂)₃Ｎ
Ｈ−(ＣＨ₂)₄ＮＨ(ＣＨ₂)₃ＮＨ₂）実施例４ｎ）と同様にして合成を行い、そして酸化的ア
ミド化はスペルミンを用いて行った。次に、無水酢酸の
代りに無水トリフルオロ酢酸を用いてキャッピング反応
を行った。保護基を除去した後、３′−末端にスペルミ
ン−ホスホラミデート残基を含有する式Ｉｗのオリゴヌ
クレオチドが得られた。

【００９２】ｘ）式Ｉｘ（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝アジリ
ジル−Ｎ−エチル−２−オキシ、ａ＝Ｕ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｘ＝
Ｙ＝Ｙ′＝Ｏ）のオリゴヌクレオチドの製造

【化２６】その前に実施例２ａ）と同様にして式VIａ（Ｂ′＝Ｃｙ
ｔ^Bz、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のビスアミジットからＮ
−（２−ヒドロキシエチル）アジリジンとの反応により
得られた式VIII（Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝アジリジル−Ｎ
−エチル−２−オキシ、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のモノ
マーから実施例３ａ）と同様にして製造した式VIIａ−
１５（Ｂ′＝Ｃｙｔ^Bz、Ｚ＝アジリジル−Ｎ−エチル−
２−オキシ、Ｗ＝Ｏ）の支持体を出発物質として、実施
例４ｃ）と同様にして合成を行った。アンモニアで保護
基を除去した後、３′−末端にアジリジン−Ｎ−エタ−
２−イルホスフェートエステルが結合された式Ｉｘのオ
リゴヌクレオチドが得られた。

【００９３】ｙ−１）式Ｉｙ−１（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ
＝−Ｏ−ファルネシル、ｐｓについてはＷ＝Ｓ）のオリ
ゴヌクレオチドの製造５′ＣｐＳＣｐＳＧｐＳＧｐＳＡｐＳＡｐＳＡｐＳＡｐ
ＳＣｐＳＡｐＳＴｐＳＣｐＳＧｐＳＣｐＳＧｐＳＧｐＳ
ＴｐＳＴｐＳＧｐＳＴｐＳ-Ｏ-ファルネシルその前に実施例２ｂ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）からファルネ
シルとの反応によって製造された式VIII（Ｂ′＝Ｔｈ
ｙ、Ｚ＝Ｏ−ファルネシル、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）の
モノマーから実施例３ａ）と同様にして製造した式VII
ａ−１６（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−ファルネシル）の支
持体を出発物質として、実施例４ｄ）と同様にして合成
を行った。酸化はそれぞれ実施例４ｄ）に記載のように
ＴＥＴＤ溶液を用いて行った。アンモニアで保護基を除
去した後、３′−末端にファルネシルチオホスフェート
エステルが結合された式Ｉｙ−１のアロホスホロチオエ
ートオリゴヌクレオチドが得られた。

【００９４】ｙ−２）式Ｉｙ−２（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ
＝−Ｏ−フィチル、ｐｓ(ｓ)についてはＷ＝Ｕ＝Ｓ）の
オリゴヌクレオチドの製造５′ＣｐＳ(Ｓ)ＣｐＳ(Ｓ)ＧｐＧｐＡｐＡｐＡｐＡｐＣ
ｐＡｐＴｐＣｐＧｐＣｐＧＧｐＴｐＴｐＳ(Ｓ)ＧｐＳ
(Ｓ)Ｔｐ−Ｏ−フィチル３′ その前に実施例２ｂ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）からフィトー
ルとの反応により得られた式VIII（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝
Ｏ−フィチル、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のモノマーから
実施例３ａ）と同様にして製造された式VIIａ−１７
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−フィチル）の支持体を出発物
質として、実施例４ｙ−１）と同様にして合成を行っ
た。ヌクレオチド２、３、１９および２０（ヌクレオチ
ドのカウンティングは３′から５′への合成の方向に対
応する）は式VIII（Ｚ＝２,４−ジクロロチオベンジ
ル、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝Ｃ₂Ｈ₅）の単位を介して導入した。これ
らのヌクレオチドの場合、酸化はＴＥＴＤ溶液を用いて
行った。他の反応サイクルでは、ヨウ素水を用いて酸化
を行った。アンモニアで保護基を除去した後、各場合と
も３′−および５′−末端に２個のホスホロジチオエー
トヌクレオシド間結合を有し、そして３′−末端にファ
ルネシルホスフェートエステルが結合された式Ｉｙ−２
のオリゴヌクレオチドが得られた。

【００９５】ｙ−３）式Ｉｙ−３（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ
＝“−Ｏ−コレステロール”、ｐＭｅについてはＵ＝Ｃ
Ｈ₃）のオリゴヌクレオチドの製造５′ＣｐＭｅＣｐＭｅＧｐＧｐＡｐＡｐＡｐＡｐＣｐＡ
ｐＴｐＣｐＧｐＣｐＧｐＧｐＴｐＴｐＭｅＧｐＭｅＴｐ
−“Ｏ−コレステロール” その前に実施例２ｂ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）から“コレス
テロール”との反応により得られた式VIII（Ｂ′＝Ｔｈ
ｙ、Ｚ＝Ｏ−“コレステロール”、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃
Ｈ₇）のモノマーから実施例３ａ）と同様にして製造し
た式VIIａ−１８（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−“コレステ
ロール”）の支持体を出発物質として、実施例４ｙ−
１）と同様にして合成を行った。ヌクレオチド２、３、
１９および２０は実施例４ｅ）に記載のようにして式VI
II（Ｚ＝ＣＨ₃）のメチルホスホンアミジットを介して
導入した。各場合とも、酸化はヨウ素水を用いて行っ
た。保護基を除去（実施例４ｄ）を参照）した後、各場
合とも３′−および５′−末端に２個のメチルホスホネ
ートヌクレオシド間結合を有し、そして３′−末端に
“コレステロール”ホスフェートエステルが結合された
式Ｉｙ−３のオリゴヌクレオチドが得られた。

【００９６】ｙ−４）式Ｉｙ−４（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ
＝−Ｏ−テストステロン、ｐＭｅについてはＵ＝Ｃ
Ｈ₃）のオリゴヌクレオチドの製造５′ＣｐＭｅＣｐＭｅＧｐＭｅＧｐＭｅＡｐＭｅＡｐＭ
ｅＡｐＡｐＣｐＡｐＴｐＣｐＧｐＣｐＭｅＧｐＭｅＧｐ
ＭｅＴｐＭｅＴｐＭｅＧｐＭｅＴｐ−“テストステロ
ン” その前に実施例２ｂ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）から“テスト
ステロン”との反応により得られた式VIII（Ｂ′＝Ｔｈ
ｙ、Ｚ＝Ｏ−“テストステロン”、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃
Ｈ₇）のモノマーから実施例３ａ）と同様にして製造し
た式VIIａ−１９（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−“テストス
テロン”）の支持体を出発物質として、実施例４ｙ−
３）と同様にして合成を行った。ヌクレオチド２〜７お
よび１５〜２０は実施例４ｅ）に記載のようにして式VI
II（Ｚ＝ＣＨ₃）のメチルホスホンアミジットを介して
導入した。各場合とも酸化はヨウ素水を用いて行った。
保護基を除去した後、各場合とも３′−および５′−末
端に６個のメチルホスホネートヌクレオシド間結合を有
し、そして３′−末端に“テストステロン”ホスフェー
トエステルが結合された式Ｉ_y-4のオリゴヌクレオチド
が得られた。

【００９７】ｙ−５）式Ｉｙ−５（Ｒ¹＝Ｒ²＝Ｈ、Ｚ
＝−Ｏ−ビタミン−Ａ、ｐＭｅ(Ｓ)についてはＵ＝ＣＨ
₃およびＷ＝Ｓ、ｐＳについてはＵ＝ＳおよびＷ＝Ｏ）
のオリゴヌクレオチドの製造ＣｐＭｅ(Ｓ)ＣｐＭｅ(Ｓ)ＧｐＭｅ(Ｓ)ＧｐＭｅ(Ｓ)Ａ
ｐＭｅ(Ｓ)ＡｐＭｅ(Ｓ)ＡｐＳＡｐＳＣｐＳＡｐＳＴｐ
ＳＣｐＳＧｐＳＣｐＭｅ(Ｓ)ＧｐＭｅ(Ｓ)ＧｐＭｅ(Ｓ)
ＴｐＭｅ(Ｓ)ＴｐＭｅ(Ｓ)ＧｐＭｅ(Ｓ)Ｔｐ−Ｏ−“ビ
タミンＡ” その前に実施例２ｂ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）から“ビタミ
ンＡ−アルコール”との反応により得られた式VIII
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−“ビタミンＡ”、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝
ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のモノマーから実施例３ａ）と同様にして
製造した式VIIａ−２０（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−“ビ
タミンＡ”）の支持体を出発物質として、実施例４ｙ−
４）と同様にして合成を行った。ヌクレオチド２〜７お
よび１５〜２０は実施例４ｅ）に記載のようにして式VI
II（Ｚ＝ＣＨ₃）のメチルホスホラミジットを介して導
入した。酸化は実施例４ｄ）に記載のようにしてＴＥＴ
Ｄを用いて行った。保護基を除去した後、メチルホスホ
ノチオエートおよび内部に７個のホスホロチオエートヌ
クレオシド間結合を含有する式Ｉｙ−５のオリゴヌクレ
オチドが得られた。このオリゴヌクレオチドの３′−末
端にはさらに“ビタミンＡ”ホスフェートエステルが位
置する。

【００９８】ｙ−６）式Ｉｙ−６（Ｒ¹＝Ｈ、Ｒ²＝Ｏ
−ＣＨ₃；Ｔの場合Ｒ²＝Ｈ、Ｚ＝−Ｏ−ビタミンＥ）の
オリゴヌクレオチドの製造５′２′−Ｏ−ＣＨ₃（ＣｐＣｐＧｐＧｐＡｐＡｐＡｐ
ＡｐＣｐＡｐＵｐＣｐＧｐＣｐＧｐＧｐＵｐＵｐＧｐ）
Ｔｐ−Ｏ−“ビタミンＥ” その前に実施例２ｂ）と同様にしてビスアミジットVIａ
（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｒ⁵〜Ｒ⁸＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）からトコフェ
ロールとの反応により得られた式VIII（Ｂ′＝Ｔｈｙ、
Ｚ＝Ｏ−“ビタミンＥ”、Ｒ⁵＝Ｒ⁶＝ｉ−Ｃ₃Ｈ₇）のモ
ノマーから実施例３ａ）と同様にして製造した式VIIａ
−２１（Ｂ′＝Ｔｈｙ、Ｚ＝Ｏ−“ビタミンＥ”）の支
持体を出発物質として、実施例４ｙ−４）と同様にして
合成を行った。ヌクレオチド２〜２０は式Ｖ(Ｒ＝ＤＭ
Ｔｒ、Ｒ²＝Ｏ−ＣＨ₃)の２′−Ｏ−メチルリボヌクレ
オシド−ホスホラミジットを介して導入した。酸化は実
施例４ａ）に記載のようにしてヨウ素水を用いて行っ
た。不安定なフェノキシアセチル保護基を除去した後、
３′−末端に“ビタミンＥ”ホスフェートエステルを含
有する式Ｉｙ−６の２′−Ｏ−メチルオリゴリボヌクレ
オチドが得られた。

【００９９】実施例５ヌクレアーゼ安定性試験１０ナノモルの調査対象のオリゴヌクレオチドをＲＰＭ
Ｉ培地および５０mlの２回蒸留した水中における４５０
μlの２０％濃度ウシ胎児血清に溶解し、３７℃でイン
キュベートした。ゲル電気泳動のためのサンプル１０μ
lおよびＨＰＬＣのためのサンプル２０μlを直ちに、そ
して１、２、４、７および２４時間後に取り出し、各場
合ともそれぞれ５または１０μlのホルムアミドと混合
して反応を終了させ、次いで９５℃で５分間加熱した。
ゲル電気泳動分析のために、サンプルを１５％ポリアク
リルアミドゲル（２％ビス）上に負荷し、次いで約３,
０００ボルト時間行った。銀染色法によりバンドを可視
化した。ＨＰＬＣ分析のためにサンプルをＧｅｎ−Ｐａ
ｋＦａｘＨＰＬＣカラム（Waters／Millipore社製）
に注入し、そして緩衝剤Ｂ中における５〜５０％の緩衝
剤Ａ〔緩衝剤Ａ：１０ミリＭのリン酸二水素ナトリウ
ム、アセトニトリル／水（１：４＝ｖ：ｖ）中０.１Ｍ
ＮａＣｌ、pH６.８；緩衝剤Ｂ：Ａと同じだが、１.５Ｍ
ＮａＣｌ〕を用いて１ml／分でクロマトグラフィー処
理した。

【０１００】実施例６抗ウイルス活性本発明の化合物の抗ウイルス活性をインビトロ試験で調
べた。この目的のために、本発明の化合物を微量滴定用
プレート中におけるＨｅＬａおよびＶｅｒｏ細胞の細胞
培養物に種々の希釈度で加えた。３時間後、その培養物
をヒトの病因となる種々のウイルス（例えば、ヘルペス
ウイルスのＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、オルトミクソウイ
ルスのインフルエンザＡ２、ピコルナウイルスのライノ
ウイルス２）で感染させた。感染後４８〜７２時間経過
してから治療上の効果を細胞変性効果に基づいて、顕微
鏡検査により、そしてニュートラルレッドを加えてから
光度測定〔Finter呈色試験；N.B. Finterらの「インタ
ーフェロン」、North Holland出版社、１９６６年〕す
ることにより測定した。感染した細胞の半分が細胞変性
効果を全く示さない最小濃度を最小阻止濃度（ＭＩＣ）
とみなした。

【０１０１】実施例７ホスフィチル化試薬ＤＭＴｒ−
Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ−Ｐ−｛ＯＣＨ₂Ｃ
Ｈ₂ＣＮ｝｛Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂｝〔請求項９；Ｘ′＝Ｏ、ｘ′＝０、Ｒ⁹＝ＯＣＨ₂ＣＨ₂
ＣＮ、Ｒ¹⁰＝Ｎ（ｉ−Ｃ₃Ｈ₇)₂〕の製造ビス−ヒドロキシエチルスルフィド（３.０５ｇ）を７
５mlの無水ピリジンに溶解し、この溶液を０℃まで冷却
した。次に、６０mlの無水ピリジンに溶解したジメトキ
シトリチルクロライド（８.０４ｇ）を撹拌しながら１
時間にわたって滴加した。反応混合物を室温で加温した
後、これをさらに、１.５時間撹拌した。５mlの水をそ
の溶液に加え、真空濃縮した。残留物を２５０mlの塩化
メチレン中に溶解した。この溶液をそれぞれ１２５mlの
０.１Ｍリン酸塩緩衝剤（pH７）で３回抽出し、そして
有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空濃縮した。粗
生成物を、酢酸エチル／ｎ−ヘプタン／トリエチルアミ
ン（グラジエント６：１４：１〜２：２：１、ｖ：
ｖ：ｖ）を用いてシリカゲルカラム上でクロマトグラフ
ィー処理した。５.３ｇのビス−ヒドロキシエチルスル
フィド−モノ−（ジメトキシトリチル）エーテルＤＭ
Ｔｒ−Ｏ−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ（５２％）
が得られた。

【０１０２】１２.５mlの無水アセトニトリル中におけ
るこのジメトキシトリチル化合物（１.０６ｇ）および
テトラゾール（８８mg）の溶液を無水アセトニトリル
（２０ml）中におけるシアノエトキシ−ジ−イソプロピ
ルアミノ−ホスファン（０.７５ｇ）の溶液にゆっくり
と（２０分）、滴加した。さらに３時間の反応後、反応
溶液を９５mlの塩化メチレンで希釈し、５％強度の炭酸
ナトリウム溶液（６５ml）で洗浄した。有機相を硫酸ナ
トリウム上で乾燥し、真空濃縮した。残留物を酢酸エチ
ル／ｎ−ヘキサン／トリエチルアミン（１１：８：１、
ｖ：ｖ：ｖ）を用いるシリカゲルカラム上におけるクロ
マトグラフィーにより精製した。１.２５ｇ（８０％）
の所望のホスフィチル化試薬（³¹Ｐ−ＮＭＲ：δ１４８
ppm〔ｄ〕、９９％の総リン含量）が得られた。

【０１０３】実施例４に記載の化合物は下記に示す残基
を有する：

【化２７】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｈ 21/00 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 8114−4Ｂ (72)発明者ジエラード・オマリーアメリカ合衆国ペンシルベニア州18940. ニユータウン．イーストペンストリート 523 (72)発明者マテイーアス・ヘルスベルクドイツ連邦共和国デー−6233ケルクハイム／タウヌス．アム・ローゼンガルテン３ (72)発明者イルヴイン・ヴインクラードイツ連邦共和国デー−6237リーダーバハ．インデンアイヒエン40

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式Ｉ【化１】〔式中、Ｒ¹は水素、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₁₈
−アルケニル、Ｃ₂〜Ｃ₁₈−アルキニル、Ｃ₂〜Ｃ₁₈−ア
ルキルカルボニル、Ｃ₃〜Ｃ₁₉−アルケニルカルボニ
ル、Ｃ₃〜Ｃ₁₉−アルキニルカルボニル、Ｃ₆〜Ｃ₂₀−ア
リール、（Ｃ₆〜Ｃ₁₄）−アリール−（Ｃ₁〜Ｃ₈）−ア
ルキルまたは式II 【化２】の基であり；Ｒ²は水素、ヒドロキシル、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−ア
ルコキシ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ₂であり；Ｂは
ヌクレオチド化学において慣用の塩基であり；ａはオキ
シまたはメチレンであり；ｎは１〜１００の整数であ
り；Ｗはオキソ、チオキソまたはセレノキソであり；Ｖ
はオキシ、チオまたはイミノであり；Ｙはオキシ、チ
オ、イミノまたはメチレンであり；Ｙ′はオキシ、チ
オ、イミノ、(ＣＨ₂)_ｍまたはＶ(ＣＨ₂)_m（ここでｍは
１〜１８の整数である）であり；Ｘはヒドロキシルまた
はメルカプトであり；Ｕはヒドロキシル、メルカプト、
ＳｅＨ、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アルコキシ、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アルキ
ル、Ｃ₆〜Ｃ₂₀−アリール、（Ｃ₆〜Ｃ₁₄）−アリール−
（Ｃ₁〜Ｃ₈）−アルキル、ＮＨＲ³、ＮＲ³Ｒ⁴または式I
II (ＯＣＨ₂ＣＨ₂)_pＯ(ＣＨ₂)_qＣＨ₂Ｒ″ （III）の基（ここでＲ³はＣ₁〜Ｃ₁₈−アルキル、Ｃ₆〜Ｃ₂₀−
アリール、(Ｃ₆〜Ｃ₁₄)−アリール−（Ｃ₁〜Ｃ₈）−ア
ルキル、２−(ＣＨ₂)_c−〔ＮＨ(ＣＨ₂)_c〕_d−ＮＲ¹ ²Ｒ
¹²（ここでｃは２〜６の整数であり、ｄは０〜６の整数
であり、そしてＲ¹²はそれぞれ互いに独立して水素、Ｃ
₁〜Ｃ₆−アルキルまたはＣ₁〜Ｃ₄−アルコキシ−Ｃ₁〜
Ｃ₆−アルキルである）であり、Ｒ⁴はＣ₁〜Ｃ₁₈−アル
キル、Ｃ₆〜Ｃ₂ ₀−アリールまたは（Ｃ₆〜Ｃ₁₀）−アリ
ール−（Ｃ₁〜Ｃ₈）−アルキルであり、あるいはＮＲ³
Ｒ⁴の場合、Ｒ⁴はＲ³およびこれらを担持する窒素原子
と一緒になって５〜６員の複素環式環（これはさらに
Ｏ、Ｓ、Ｎからなる群より選択されたヘテロ原子を含有
することができる）を形成し、ｐは１〜１００の整数で
あり、ｑは０〜２２の整数であり、そしてＲ¹¹は水素ま
たは官能基である）であり；Ｚ＝Ｚ′はヒドロキシル、
メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₂−アルコキシ、−Ｏ−
(ＣＨ₂)_b−ＮＲ¹²Ｒ¹³（ここでｂは１〜６の整数であ
り、そしてＲ¹³はＣ₁〜Ｃ₆−アルキルであり、またはＲ
¹²およびＲ¹³はこれらを担持する窒素原子と一緒になっ
て３〜６員の環を形成する）、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−アルキル、
Ｃ₆〜Ｃ₂₀−アリール、（Ｃ₆〜Ｃ₁₄）−アリール−（Ｃ
₁〜Ｃ₈）−アルキル、（Ｃ₆〜Ｃ₁₄）−アリール−（Ｃ₁
〜Ｃ₈）−アルコキシ（ここでアリールはヘテロアリー
ルを包含し、そしてアリールは場合によってはカルボキ
シル、アミノ、ニトロ、Ｃ₁〜Ｃ₄−アルキルアミノ、Ｃ
₁〜Ｃ₆−アルコキシ、ヒドロキシル、ハロゲンおよびシ
アノからなる群より選択された１、２または３個の同一
のまたは異なった基により置換される）、Ｃ₁〜Ｃ₁₈−
アルキルメルカプト、ＮＨＲ³、ＮＲ³Ｒ⁴、式IIIの基ま
たは細胞内吸収を有利にする、もしくはＤＮＡプローブ
用標識として作用する、あるいはオリゴヌクレオチド類
似体の標的の核酸へのハイブリッド形成の間に結合、架
橋または開裂を伴なって後者を攻撃する基であり；曲線
状の中括弧はＲ²およびその隣りのホスホリル残基が
２′−および３′−位に、または反対に３′−およびお
よび２′−位に位置することができることを示し、各ヌ
クレオチドはＤ−またはＬ−配置で存在することがで
き、そして塩基Ｂはα−またはβ−位に位置することが
できる。但し、Ｚがヒドロキシル、メルカプト、メチル
またはエトキシである場合、基Ｘ、Ｙ、Ｙ′、Ｖおよび
Ｗのうち少なくとも１つはヒドロキシル、オキシまたは
オキソではなく、あるいはＲ¹は水素ではない〕のオリ
ゴヌクレオチド類似体およびその生理学的に許容しうる
塩。
【請求項２】塩基Ｂがβ−位に位置し、ヌクレオチド
がＤ−配置で存在し、Ｒ²が２′−位に位置し、そして
ａがオキシである請求項１記載のオリゴヌクレオチド類
似体。
【請求項３】Ｒ¹が水素、Ｃ₁〜Ｃ₆−アルキル、特に
メチルまたは式IIの基であり；Ｒ²が水素またはヒドロ
キシル、特に水素であり；ｎが１０〜４０、特に１２〜
３０の整数であり；ｍが１〜６の整数、特に１であり；
Ｕがヒドロキシル、メルカプト、Ｃ₁〜Ｃ₆−アルコキ
シ、Ｃ₁〜Ｃ₆−アルキル、ＮＲ³Ｒ⁴またはＮＨＲ³、特
にヒドロキシルまたはＣ₁〜Ｃ₆−アルキル（ここでＲ³
はＣ₁〜Ｃ₈−アルキル、好ましくはＣ₁〜Ｃ₄−アルキル
またはメトキシエチルである）であり、そしてＢ、Ｗ、
Ｖ、Ｙ、Ｙ′、ＸおよびＺは上記の意味を有する請求項
１または２記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項４】Ｖ、ＹおよびＹ′がオキシである請求項
１〜３の何れかの項記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項５】Ｗがオキソである請求項１〜４の何れか
の項記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項６】Ｕがヒドロキシルである請求項１〜５の
何れかの項記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項７】Ｒ¹が水素である請求項１〜５の何れか
の項記載のオリゴヌクレオチド類似体。
【請求項８】ａ）３′(２′)−末端のリン(Ｖ)グル
ープおよび遊離の５′−ヒドロキシルもしくはメルカプ
ト基を有するヌクレオチド単位を３′−位にリン（II
I）もしくはリン（Ｖ）グループを有するもう１つのヌ
クレオチド単位またはその活性化誘導体と反応させ、あ
るいはｂ）オリゴヌクレオチド類似体を同様にして、フラグ
メントを用いて構成し、そして(ａ)または(ｂ)により得
られたオリゴヌクレオチド中に他の官能基を保護するた
めに一時的に導入された保護基を除去し、場合によって
はこのようにして得られた式Ｉのオリゴヌクレオチド類
似体をその生理学的に許容しうる塩に変換することから
なる請求項１記載の式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体の
製造法。
【請求項９】式ＤＭＴｒ−Ｘ′−ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｓ(Ｏ)_x′−ＣＨ₂ＣＨ₂
−Ｘ′−ＰＲ⁹Ｒ¹⁰ 〔式中、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は互いに独立してＣｌ、ＮＲ⁵Ｒ
⁶、ＮＲ⁷Ｒ⁸またはＺ″（ここでＺ″はＺである。但
し、ヒドロキシル、メルカプトおよびＳｅＨは保護され
た誘導体として存在しなければならない。）であり、Ｒ
⁵、Ｒ⁶、Ｒ⁷およびＲ⁸は互いに独立してＣ₁〜Ｃ₁₂−ア
ルキルであり、またはＲ⁵およびＲ⁶もしくはＲ⁷および
Ｒ⁸は一緒になって５〜６員の環を形成し、Ｘ′はオキ
シまたはチオであり、Ｘ′は０または１であり、そして
ＤＭＴｒはジメトキシトリチルである〕のホスフィチル
化試薬。
【請求項１０】遺伝子発現の阻害剤としての請求項１
〜７の何れかの項記載のオリゴヌクレオチド類似体の使
用。
【請求項１１】核酸を検出するためのプローブとして
の、または分子生物学的における補助剤としての請求項
１〜７の何れか項記載のオリゴヌクレオチド類似体の使
用。
【請求項１２】場合によっては生理学的に許容しうる
補助剤および／または賦形剤および／または他の公知の
活性物質とともに、請求項１〜７の何れかの項記載の式
Ｉのオリゴヌクレオチド類似体を含有する製剤。