JPH05305139A - 生理活性物質固定化成形品の製造方法 - Google Patents
生理活性物質固定化成形品の製造方法Info
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- JPH05305139A JPH05305139A JP4140921A JP14092192A JPH05305139A JP H05305139 A JPH05305139 A JP H05305139A JP 4140921 A JP4140921 A JP 4140921A JP 14092192 A JP14092192 A JP 14092192A JP H05305139 A JPH05305139 A JP H05305139A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】活性が高く、価格の安い生理活性物質固定化成
形品を提供する。 【構成】アミノ基を有する生理活性物質を成形品担体に
固定化反応させることにより、生理活性物質固定化成形
品を製造する方法において、該固定化反応に用いる生理
活性物質量を、成形品担体単位表面積あたり２ｍｇ／ｍ
2 以上、２００ｍｇ／ｍ2 以下とすることを特徴とする
生理活性物質固定化成形品の製造方法。 【効果】本発明により、治療用血液浄化剤、抗菌剤、治
療用イミノモジュレータ、アフィニティークロマトグラ
フ用吸着剤等の用途に有用な、高活性、均質かつ安価な
生理活性物質固定化成形品を提供できた。
形品を提供する。 【構成】アミノ基を有する生理活性物質を成形品担体に
固定化反応させることにより、生理活性物質固定化成形
品を製造する方法において、該固定化反応に用いる生理
活性物質量を、成形品担体単位表面積あたり２ｍｇ／ｍ
2 以上、２００ｍｇ／ｍ2 以下とすることを特徴とする
生理活性物質固定化成形品の製造方法。 【効果】本発明により、治療用血液浄化剤、抗菌剤、治
療用イミノモジュレータ、アフィニティークロマトグラ
フ用吸着剤等の用途に有用な、高活性、均質かつ安価な
生理活性物質固定化成形品を提供できた。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アミノ基を有する生理
活性物質が固定化された成形品の製造方法に関する。
活性物質が固定化された成形品の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】生理活性物質を成形品担体に固定化した
成形品は、治療用血液浄化剤、抗菌剤、治療用イミノモ
ジュレータ、アフィニティークロマトグラフ用吸着剤等
の用途に広く利用され、高活性、均質かつ安価な生理活
性物質固定化成形品が求められている。例えば、共有結
合によりポリミキシンを繊維状担体に固定化したエンド
トキシン中和剤は、ポリミキシン本来のエンドトキシン
中和解毒作用をそのまま生かしつつ、ポリミキシンの副
作用を解消するという、優れた特徴を有し、エンドトキ
シン血症患者の治療、輸液および透析液中のエンドトキ
シン除去等の用途に極めて有用な中和剤として知られて
いる（特開昭６０−５１６６号公報）。
成形品は、治療用血液浄化剤、抗菌剤、治療用イミノモ
ジュレータ、アフィニティークロマトグラフ用吸着剤等
の用途に広く利用され、高活性、均質かつ安価な生理活
性物質固定化成形品が求められている。例えば、共有結
合によりポリミキシンを繊維状担体に固定化したエンド
トキシン中和剤は、ポリミキシン本来のエンドトキシン
中和解毒作用をそのまま生かしつつ、ポリミキシンの副
作用を解消するという、優れた特徴を有し、エンドトキ
シン血症患者の治療、輸液および透析液中のエンドトキ
シン除去等の用途に極めて有用な中和剤として知られて
いる（特開昭６０−５１６６号公報）。
【０００３】生理活性物質は、通常極めて高価であり、
必要かつ最少限の生理活性物質を効率良く、かつ安定に
固定化することが工業化の上で重要である。
必要かつ最少限の生理活性物質を効率良く、かつ安定に
固定化することが工業化の上で重要である。
【０００４】上記特開昭６０−５１６６号公報の実施例
１では、固定化反応時、担体繊維１１ｇに４．８ｇ（担
体１ｇ当たり４４０ｍｇ）のポリミキシンＢファイザー
を使用し、１１０ｍｇ／ｇ繊維を固定化している。
１では、固定化反応時、担体繊維１１ｇに４．８ｇ（担
体１ｇ当たり４４０ｍｇ）のポリミキシンＢファイザー
を使用し、１１０ｍｇ／ｇ繊維を固定化している。
【０００５】また、特公平１−１６３８９号公報の実施
例１では、固定化反応時、ＢｒＣＮ活性化架橋アガロー
ス担体（湿潤状態）１０ｇに１ｇの硫酸ポリミキシンＢ
（担体１ｇ当たり１００ｍｇ）を、実施例２では、固定
化反応時、エポキシ化セルロースビーズ２ｇに、コリス
チン硫酸４００ｍｇ（担体１ｇ当たり２００ｍｇ）を、
それぞれ使用する技術が示されている。
例１では、固定化反応時、ＢｒＣＮ活性化架橋アガロー
ス担体（湿潤状態）１０ｇに１ｇの硫酸ポリミキシンＢ
（担体１ｇ当たり１００ｍｇ）を、実施例２では、固定
化反応時、エポキシ化セルロースビーズ２ｇに、コリス
チン硫酸４００ｍｇ（担体１ｇ当たり２００ｍｇ）を、
それぞれ使用する技術が示されている。
【０００６】これらの例では、生理活性物質の使用量
は、最小の例でも成形品担体１ｇあたり１００ｍｇであ
り、生理活性物質固定化成形品が、高価であった。
は、最小の例でも成形品担体１ｇあたり１００ｍｇであ
り、生理活性物質固定化成形品が、高価であった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、アミ
ノ基を有する生理活性物質の使用量を必要最少限に止
め、高活性、均質かつ安価な生理活性物質固定化成形品
の製造方法を提供することである。
ノ基を有する生理活性物質の使用量を必要最少限に止
め、高活性、均質かつ安価な生理活性物質固定化成形品
の製造方法を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】前記の課題は、以下の本
発明により達成される。「アミノ基を有する生理活性物
質を成形品担体に固定化反応させることにより、生理活
性物質固定化成形品を製造する方法において、該固定化
反応に用いる生理活性物質量を、成形品担体単位表面積
あたり２ｍｇ／ｍ2 以上、２００ｍｇ／ｍ2 以下とする
ことを特徴とする生理活性物質固定化成形品の製造方
法。」以下に本発明を詳述する。
発明により達成される。「アミノ基を有する生理活性物
質を成形品担体に固定化反応させることにより、生理活
性物質固定化成形品を製造する方法において、該固定化
反応に用いる生理活性物質量を、成形品担体単位表面積
あたり２ｍｇ／ｍ2 以上、２００ｍｇ／ｍ2 以下とする
ことを特徴とする生理活性物質固定化成形品の製造方
法。」以下に本発明を詳述する。
【０００９】本発明者らは生理活性物質固定化成形品に
おいて、表面近傍の固定化生理活性物質が生理活性の発
現に支配的に寄与していることを発見した。そのため、
本発明においては、費用対効果の点から、固定化反応に
用いるアミノ基を有する生理活性物質量を、成形品担体
単位表面積あたり２ｍｇ／ｍ2 以上、２００ｍｇ／ｍ2
以下とする。
おいて、表面近傍の固定化生理活性物質が生理活性の発
現に支配的に寄与していることを発見した。そのため、
本発明においては、費用対効果の点から、固定化反応に
用いるアミノ基を有する生理活性物質量を、成形品担体
単位表面積あたり２ｍｇ／ｍ2 以上、２００ｍｇ／ｍ2
以下とする。
【００１０】本発明でいうアミノ基を有する生理活性物
質としては、ポリぺプチド系抗生物質、グリコペプチド
系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質等が挙げられ
るが、これらに限定されるものではない。
質としては、ポリぺプチド系抗生物質、グリコペプチド
系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質等が挙げられ
るが、これらに限定されるものではない。
【００１１】これらの中でも、ポリぺプチド系抗生物質
は、極めて優れた抗菌作用を有するものの、腎毒性、神
経毒性等の副作用のため、体内投与できない問題があ
り、成形品に固定化することにより副作用の問題を解決
し、治療用血液浄化剤として本来の優れた抗菌作用を有
効に発揮できるため、特に効果的である。
は、極めて優れた抗菌作用を有するものの、腎毒性、神
経毒性等の副作用のため、体内投与できない問題があ
り、成形品に固定化することにより副作用の問題を解決
し、治療用血液浄化剤として本来の優れた抗菌作用を有
効に発揮できるため、特に効果的である。
【００１２】ポリぺプチド系抗生物質としては、グラム
陰性菌に対して強力な抗菌作用を呈する、ポリミキシン
Ａ、ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＢ２、ポリミキシ
ンＤ１、ポリミキシンＥ１およびポリミキシンＥ２等
が、また、グラム陽性菌に対して強力な抗菌作用を呈す
るバシトラシン等が挙げられる。
陰性菌に対して強力な抗菌作用を呈する、ポリミキシン
Ａ、ポリミキシンＢ１、ポリミキシンＢ２、ポリミキシ
ンＤ１、ポリミキシンＥ１およびポリミキシンＥ２等
が、また、グラム陽性菌に対して強力な抗菌作用を呈す
るバシトラシン等が挙げられる。
【００１３】グリコペプチド系抗生物質としては、好気
性および嫌気性グラム陽性菌に効能があるバンコマイシ
ンが、アミノグリコシド系抗生物質としては、緑膿菌、
変形菌等に効能のあるトブラマイシン、ジベカシンおよ
びアミカシン等がそれぞれ挙げられる。
性および嫌気性グラム陽性菌に効能があるバンコマイシ
ンが、アミノグリコシド系抗生物質としては、緑膿菌、
変形菌等に効能のあるトブラマイシン、ジベカシンおよ
びアミカシン等がそれぞれ挙げられる。
【００１４】本発明においては、アミノ基を有する生理
活性物質を固定化する反応液のｐＨを７以上に調整する
ことが好ましい。さらに固定化反応速度、固定化反応収
率および生理活性物質固定化成形品の生理活性のバラン
スの点で、アミノ基を有する生理活性物質を含む固定化
反応液のｐＨは、８から１０の範囲の一定値に制御する
ことが、特に好ましい。
活性物質を固定化する反応液のｐＨを７以上に調整する
ことが好ましい。さらに固定化反応速度、固定化反応収
率および生理活性物質固定化成形品の生理活性のバラン
スの点で、アミノ基を有する生理活性物質を含む固定化
反応液のｐＨは、８から１０の範囲の一定値に制御する
ことが、特に好ましい。
【００１５】また、上記反応液中の生理活性物質濃度
は、実用的な反応速度の範囲で低いほうが良く、特に
０．０５ｋｇ／ｍ3 以上、１０ｋｇ／ｍ3 以下が好まし
い。
は、実用的な反応速度の範囲で低いほうが良く、特に
０．０５ｋｇ／ｍ3 以上、１０ｋｇ／ｍ3 以下が好まし
い。
【００１６】前記特開昭６０−５１６６号公報の実施例
１では、固定化剤として酸化マグネシウムを用いてい
る。このような難溶性の塩基の場合、所望のｐＨの制御
が困難であり、また析出ないし未溶解の酸化マグネシウ
ムが成形品担体の表面を被覆し、成形品担体表面での均
一な固定化反応の進行を妨害するといった問題がある。
そこで、本発明においては、アミノ基を有する生理活性
物質を成形品担体に固定化するにあたり、固定化反応液
のｐＨを高めて、かつ、反応を促進する固定化剤とし
て、アミノ基を有する生理活性物質を含む反応液に易溶
の塩基が、特に好ましく用いられる。固定化反応液の溶
媒が水の場合、塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム、水酸化リチウム、水酸化アンモニウム等が
挙げられるが、これらに限定されるものではなく、固定
化反応液の溶媒、生理活性物質の種類に応じて適宜選べ
ば良い。また、水以外にも、溶媒としては、メタノー
ル、エタノールなどのアルコールおよびその水溶液等も
用いることができる。
１では、固定化剤として酸化マグネシウムを用いてい
る。このような難溶性の塩基の場合、所望のｐＨの制御
が困難であり、また析出ないし未溶解の酸化マグネシウ
ムが成形品担体の表面を被覆し、成形品担体表面での均
一な固定化反応の進行を妨害するといった問題がある。
そこで、本発明においては、アミノ基を有する生理活性
物質を成形品担体に固定化するにあたり、固定化反応液
のｐＨを高めて、かつ、反応を促進する固定化剤とし
て、アミノ基を有する生理活性物質を含む反応液に易溶
の塩基が、特に好ましく用いられる。固定化反応液の溶
媒が水の場合、塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム、水酸化リチウム、水酸化アンモニウム等が
挙げられるが、これらに限定されるものではなく、固定
化反応液の溶媒、生理活性物質の種類に応じて適宜選べ
ば良い。また、水以外にも、溶媒としては、メタノー
ル、エタノールなどのアルコールおよびその水溶液等も
用いることができる。
【００１７】また、成形品担体としては、使用条件下で
化学的かつ物理的に安定で、アミノ基を有する生理活性
物質を、化学的に固定出来る官能基を有するものが用い
られる。例えばα−ハロゲン化アシル基、ハロゲン化ベ
ンジル基またはイソシアン酸基を有するポリスチレン成
形品または架橋ポリスチレン成形品、アクリル酸・アク
リロニトリル共重合体成形品、カルボキシル基を有する
ポリビニルアルコール成形品等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。特にα−クロロアセトアミ
ドメチル基を有する架橋ポリスチレン成形品は、生理活
性物質の生理活性発現の点で優れ、好ましく用いられ
る。
化学的かつ物理的に安定で、アミノ基を有する生理活性
物質を、化学的に固定出来る官能基を有するものが用い
られる。例えばα−ハロゲン化アシル基、ハロゲン化ベ
ンジル基またはイソシアン酸基を有するポリスチレン成
形品または架橋ポリスチレン成形品、アクリル酸・アク
リロニトリル共重合体成形品、カルボキシル基を有する
ポリビニルアルコール成形品等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。特にα−クロロアセトアミ
ドメチル基を有する架橋ポリスチレン成形品は、生理活
性物質の生理活性発現の点で優れ、好ましく用いられ
る。
【００１８】成形品担体の形状は、特に限定されるもの
ではないが、繊維状成形品担体は、単位容積あたりの表
面積を大きくするのが容易、カラムに充填した時の流体
の流動抵抗が低い等の優れた特徴があり、特に好まし
い。
ではないが、繊維状成形品担体は、単位容積あたりの表
面積を大きくするのが容易、カラムに充填した時の流体
の流動抵抗が低い等の優れた特徴があり、特に好まし
い。
【００１９】本発明の生理活性物質固定化成形品は、治
療用血液浄化剤、抗菌剤、治療用イミノモジュレータ、
アフィニティークロマトグラフ用吸着剤等の用途に、好
適に用いられるが、これらに限定されるものではない。
中でも、治療用血液浄化剤の具体例としては、α−クロ
ロアセトアミドメチル基を有する架橋ポリスチレン繊維
にポリミキシン、バシトラシン等のポリペプチド系抗生
物質を固定化した浄化剤を、カラムに充填したエンドト
キシン血症治療用血液浄化器が挙げられる。
療用血液浄化剤、抗菌剤、治療用イミノモジュレータ、
アフィニティークロマトグラフ用吸着剤等の用途に、好
適に用いられるが、これらに限定されるものではない。
中でも、治療用血液浄化剤の具体例としては、α−クロ
ロアセトアミドメチル基を有する架橋ポリスチレン繊維
にポリミキシン、バシトラシン等のポリペプチド系抗生
物質を固定化した浄化剤を、カラムに充填したエンドト
キシン血症治療用血液浄化器が挙げられる。
【００２０】
【実施例】以下の実施例により本発明をさらに詳細に説
明する。本発明は、これらの実施例に限定されるもので
はない。 実施例１ ポリプロピレン（三井東圧株製“ノ−ブレン”Ｊ３Ｈ−
Ｇ）５０重量部を島成分とし、ポリスチレン（旭化成工
業株製“スタイロン”６７９）４６重量部とポリプロピ
レン（三井東圧株製”ノ−ブレン”Ｊ３Ｈ−Ｇ）４重量
部の混合物を海成分とする原料を用いて、２８０℃で溶
融紡糸（島数１６個）した後、３．１倍に延伸すること
により、多芯海島型複合繊維（単糸デニール３）を得
た。
明する。本発明は、これらの実施例に限定されるもので
はない。 実施例１ ポリプロピレン（三井東圧株製“ノ−ブレン”Ｊ３Ｈ−
Ｇ）５０重量部を島成分とし、ポリスチレン（旭化成工
業株製“スタイロン”６７９）４６重量部とポリプロピ
レン（三井東圧株製”ノ−ブレン”Ｊ３Ｈ−Ｇ）４重量
部の混合物を海成分とする原料を用いて、２８０℃で溶
融紡糸（島数１６個）した後、３．１倍に延伸すること
により、多芯海島型複合繊維（単糸デニール３）を得
た。
【００２１】この複合繊維を編地に加工したもの７００
ｇを開孔ボビンに巻き取り、直径２００ｍｍ、高さ３０
０ｍｍのカラムに充填した。
ｇを開孔ボビンに巻き取り、直径２００ｍｍ、高さ３０
０ｍｍのカラムに充填した。
【００２２】ステンレス鋼製容器にてニトロベンゼン１
５ｋｇ、９８％濃硫酸１５ｋｇ、Ｎ−メチロール−α−
クロロアセトアミド２．２５ｋｇ、パラホルムアルデヒ
ド３２．３ｇからなるクロロアセトアミドメチル化反応
液を調製した。
５ｋｇ、９８％濃硫酸１５ｋｇ、Ｎ−メチロール−α−
クロロアセトアミド２．２５ｋｇ、パラホルムアルデヒ
ド３２．３ｇからなるクロロアセトアミドメチル化反応
液を調製した。
【００２３】この反応液をポンプでカラム中のボビン芯
中空部に供給し、繊維層中を半径方向に流通させ、カラ
ムから流出した反応液をステンレス鋼製容器に循環させ
た。
中空部に供給し、繊維層中を半径方向に流通させ、カラ
ムから流出した反応液をステンレス鋼製容器に循環させ
た。
【００２４】１０〜２０℃で２時間反応後、カラム、ス
テンレス鋼製容器からクロロアセトアミドメチル化反応
液を抜き出し、室温下でニトロベンゼン２０ｋｇ、純水
２０ｋｇの順で反応と同様の経路によりカラム中の繊維
を循環洗浄後、残存硫酸を２４％水酸化ナトリウム水溶
液で中和した。
テンレス鋼製容器からクロロアセトアミドメチル化反応
液を抜き出し、室温下でニトロベンゼン２０ｋｇ、純水
２０ｋｇの順で反応と同様の経路によりカラム中の繊維
を循環洗浄後、残存硫酸を２４％水酸化ナトリウム水溶
液で中和した。
【００２５】同様の操作により、メタノールで残存ニト
ロベンゼンを、７０℃の温水で残存メタノールを、それ
ぞれ抽出除去し、精製クロロアセトアミドメチル化繊維
（繊維Ａ）９８０ｇを得た。
ロベンゼンを、７０℃の温水で残存メタノールを、それ
ぞれ抽出除去し、精製クロロアセトアミドメチル化繊維
（繊維Ａ）９８０ｇを得た。
【００２６】ステンレス鋼製容器にて純水２０ｌ、ポリ
ミキシンＢ硫酸塩１４．２ｇから成る固定化反応液（ポ
リミキシンＢ硫酸塩濃度０．７１ｋｇ／ｍ3 ）を調製し
た。
ミキシンＢ硫酸塩１４．２ｇから成る固定化反応液（ポ
リミキシンＢ硫酸塩濃度０．７１ｋｇ／ｍ3 ）を調製し
た。
【００２７】上記ポリミキシンＢ硫酸塩量は、担体繊維
単位表面積あたり４３ｍｇ／ｍ2 である。
単位表面積あたり４３ｍｇ／ｍ2 である。
【００２８】この反応液をクロロアセトアミドメチル化
反応と同様の経路で繊維Ａのカラムにポンプ循環し、１
／１０規定水酸化ナトリウム水溶液を反応液に連続的に
滴下することにより固定化反応液のｐＨを９．５に制御
した。１時間反応後、カラム、ステンレス鋼製容器から
固定化反応液を抜き出し、１／１０規定塩酸１５ｋｇで
３回、純水１５ｋｇで４回循環洗浄してポリミキシンＢ
固定化繊維を得た。
反応と同様の経路で繊維Ａのカラムにポンプ循環し、１
／１０規定水酸化ナトリウム水溶液を反応液に連続的に
滴下することにより固定化反応液のｐＨを９．５に制御
した。１時間反応後、カラム、ステンレス鋼製容器から
固定化反応液を抜き出し、１／１０規定塩酸１５ｋｇで
３回、純水１５ｋｇで４回循環洗浄してポリミキシンＢ
固定化繊維を得た。
【００２９】アミノ酸分析で求めた、固定化繊維単位表
面積あたりのポリミキシンＢ固定化量は、２４ｍｇ／ｍ
2 （担体繊維１ｇあたり８ｍｇ）であった。固定化反応
に用いたポリミキシンＢの５６％が固定化されており、
ポリミキシンＢの収率は、極めて高いと言える。
面積あたりのポリミキシンＢ固定化量は、２４ｍｇ／ｍ
2 （担体繊維１ｇあたり８ｍｇ）であった。固定化反応
に用いたポリミキシンＢの５６％が固定化されており、
ポリミキシンＢの収率は、極めて高いと言える。
【００３０】バッチ吸着試験のエンドトキシン除去率
は、９５％であった。この高い除去率は、蛋白成分に富
む血漿系の競合吸着において、ポリミキシンＢ固定化繊
維がエンドトキシンに対する、優れた特異的吸着性能を
発揮できることを示す。
は、９５％であった。この高い除去率は、蛋白成分に富
む血漿系の競合吸着において、ポリミキシンＢ固定化繊
維がエンドトキシンに対する、優れた特異的吸着性能を
発揮できることを示す。
【００３１】次いで、凍結乾燥法で得られたポリミキシ
ン固定化繊維の超薄切片を作製、酸化ルテニウムで染色
した後、透過型電子顕微鏡（日本電子株製ＪＥＭ−１２
００ＥＸ）で固定化繊維断面を観察した。その断面写真
を図１に示した。表面近傍に幅５千オングストローム前
後の帯状に固定化されたポリミキシンＢが観察された。
ン固定化繊維の超薄切片を作製、酸化ルテニウムで染色
した後、透過型電子顕微鏡（日本電子株製ＪＥＭ−１２
００ＥＸ）で固定化繊維断面を観察した。その断面写真
を図１に示した。表面近傍に幅５千オングストローム前
後の帯状に固定化されたポリミキシンＢが観察された。
【００３２】前記ポリミキシン固定化量（アミノ酸分
析）は、次の方法により測定した。
析）は、次の方法により測定した。
【００３３】常法により固定化繊維を加水分解し、生成
したアミノ酸をフェニルイソチオシアネートでカップリ
ングした後、高速液体クロマトグラフィでアミノ酸を定
量し、ポリミキシン固定化量を決定した。
したアミノ酸をフェニルイソチオシアネートでカップリ
ングした後、高速液体クロマトグラフィでアミノ酸を定
量し、ポリミキシン固定化量を決定した。
【００３４】固定化繊維断面の透過型電子顕微鏡写真に
より固定化繊維の周長を測定し、固定化繊維の表面積を
算定した。
より固定化繊維の周長を測定し、固定化繊維の表面積を
算定した。
【００３５】これと上記アミノ酸分析で求めたポリミキ
シン固定化量とを用いて担体繊維単位表面積あたりのポ
リミキシン固定化量を算定した。
シン固定化量とを用いて担体繊維単位表面積あたりのポ
リミキシン固定化量を算定した。
【００３６】また、エンドトキシン除去率（バッチ吸着
試験）については、次の方法により測定した。
試験）については、次の方法により測定した。
【００３７】固定化繊維０．５ｇ（乾燥重量）をエンド
トキシン・フリーとした乾熱滅菌（２５０℃で２時間以
上）済みの５０ｍｌ共栓フラスコに秤り取り、生理食塩
液１５ｍｌを加えて、高圧蒸気滅菌（１１５℃、３０
分）を行った。
トキシン・フリーとした乾熱滅菌（２５０℃で２時間以
上）済みの５０ｍｌ共栓フラスコに秤り取り、生理食塩
液１５ｍｌを加えて、高圧蒸気滅菌（１１５℃、３０
分）を行った。
【００３８】該繊維を注射用蒸留水で洗った後、エンド
トキシン（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１：Ｂ４Ｗ、リポポリ
サッカライド）添加牛血清（エンドトキシン濃度１０ｎ
ｇ／ｍｌ）１５ｍｌを加え、３７℃で２時間振盪した。
トキシン（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１１１：Ｂ４Ｗ、リポポリ
サッカライド）添加牛血清（エンドトキシン濃度１０ｎ
ｇ／ｍｌ）１５ｍｌを加え、３７℃で２時間振盪した。
【００３９】振盪後の牛血清を検体とし、注射用蒸留水
で１０倍に希釈後、７０℃で１０分間加熱処理し、トキ
シノメータ（和光純薬株製）を用いてゲル化時間を測定
した。
で１０倍に希釈後、７０℃で１０分間加熱処理し、トキ
シノメータ（和光純薬株製）を用いてゲル化時間を測定
した。
【００４０】同様に操作して得た検量線からエンドトキ
シン濃度を求めた。
シン濃度を求めた。
【００４１】エンドトキシン除去率は｛（初期濃度−検
体濃度）／初期濃度｝×１００（％）により算出した。
体濃度）／初期濃度｝×１００（％）により算出した。
【００４２】実施例２ 固定化反応時のポリミキシンＢ硫酸塩濃度が０．０７ｋ
ｇ／ｍ3 である点を除き、実施例１と同様の方法でポリ
ミキシンＢ固定化繊維を合成した。
ｇ／ｍ3 である点を除き、実施例１と同様の方法でポリ
ミキシンＢ固定化繊維を合成した。
【００４３】アミノ酸分析で求めた、固定化繊維単位表
面積あたりのポリミキシンＢ固定化量は、２ｍｇ／ｍ2
（担体繊維１ｇあたり０．７ｍｇ）であった。
面積あたりのポリミキシンＢ固定化量は、２ｍｇ／ｍ2
（担体繊維１ｇあたり０．７ｍｇ）であった。
【００４４】バッチ吸着試験のエンドトキシン除去率
は、９０％であった。ポリミキシンＢ固定化量は、実施
例１の１／１０弱であるが吸着性能は大差なく、従っ
て、ポリミキシンＢ固定化繊維の表面近傍の固定化ポリ
ミキシンＢが生理活性の発現に支配的に寄与しているこ
とを示唆している。 実施例３ ポリミキシンＢの代わりにコリスチン（ポリミキシン
Ｅ）を用いる以外は、実施例１と同様の方法でコリスチ
ン固定化繊維を合成した。
は、９０％であった。ポリミキシンＢ固定化量は、実施
例１の１／１０弱であるが吸着性能は大差なく、従っ
て、ポリミキシンＢ固定化繊維の表面近傍の固定化ポリ
ミキシンＢが生理活性の発現に支配的に寄与しているこ
とを示唆している。 実施例３ ポリミキシンＢの代わりにコリスチン（ポリミキシン
Ｅ）を用いる以外は、実施例１と同様の方法でコリスチ
ン固定化繊維を合成した。
【００４５】アミノ酸分析で求めた、固定化繊維単位表
面積あたりのコリスチン固定化量は、２４ｍｇ／ｍ
2 （担体繊維１ｇあたり８ｍｇ）であった。
面積あたりのコリスチン固定化量は、２４ｍｇ／ｍ
2 （担体繊維１ｇあたり８ｍｇ）であった。
【００４６】バッチ吸着試験のエンドトキシン除去率は
９８％であった。
９８％であった。
【００４７】
【発明の効果】本発明により、治療用血液浄化剤、抗菌
剤、治療用イミノモジュレータ、アフイニティークロマ
トグラフ用吸着剤等の用途に広く利用できる、高活性、
均質かつ安価な生理活性物質固定化成形品を提供でき
た。
剤、治療用イミノモジュレータ、アフイニティークロマ
トグラフ用吸着剤等の用途に広く利用できる、高活性、
均質かつ安価な生理活性物質固定化成形品を提供でき
た。
【図１】透過型電子顕微鏡により撮影した、実施例１の
ポリミキシンＢ固定化繊維の断面写真である。
ポリミキシンＢ固定化繊維の断面写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 村上 睦夫 滋賀県大津市園山１丁目１番１号 東レ株 式会社滋賀事業場内 (72)発明者 小路 久敬 滋賀県大津市園山１丁目１番１号 東レ株 式会社滋賀事業場内
Claims (6)
- 【請求項１】アミノ基を有する生理活性物質を成形品担
体に固定化反応させることにより、生理活性物質固定化
成形品を製造する方法において、該固定化反応に用いる
生理活性物質量を、成形品担体単位表面積あたり２ｍｇ
／ｍ2 以上、２００ｍｇ／ｍ2 以下とすることを特徴と
する生理活性物質固定化成形品の製造方法。 - 【請求項２】アミノ基を有する生理活性物質を含む固定
化反応液中の該生理活性物質濃度が、０．０５ｋｇ／ｍ
3 以上、１０ｋｇ／ｍ3 以下であることを特徴とする請
求項１記載の生理活性物質固定化成形品の製造方法。 - 【請求項３】アミノ基を有する生理活性物質が、ポリペ
プチド系抗生物質であることを特徴とする請求項１記載
の生理活性物質固定化成形品の製造方法。 - 【請求項４】アミノ基を有する生理活性物質を含む固定
化反応液に易溶の塩基を、固定化剤として用いることを
特徴とする請求項１記載の生理活性物質固定化成形品の
製造方法。 - 【請求項５】アミノ基を有する生理活性物質を含む固定
化反応液のｐＨが、８以上１０以下の範囲で、一定値に
制御することを特徴とする請求項１記載の生理活性物質
固定化成形品の製造方法。 - 【請求項６】該成形品が、繊維状であることを特徴とす
る請求項１記載の生理活性物質固定化成形品の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4140921A JP2853452B2 (ja) | 1992-05-06 | 1992-05-06 | 生理活性物質固定化成形品の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4140921A JP2853452B2 (ja) | 1992-05-06 | 1992-05-06 | 生理活性物質固定化成形品の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05305139A true JPH05305139A (ja) | 1993-11-19 |
| JP2853452B2 JP2853452B2 (ja) | 1999-02-03 |
Family
ID=15279917
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4140921A Expired - Lifetime JP2853452B2 (ja) | 1992-05-06 | 1992-05-06 | 生理活性物質固定化成形品の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2853452B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09234246A (ja) * | 1995-12-28 | 1997-09-09 | Toray Ind Inc | β２ミクログロブリンと親和性を有する材料及びそれを用いた体液浄化カラム |
| JP2007144028A (ja) * | 2005-11-30 | 2007-06-14 | Toray Ind Inc | 吸着担体の製造方法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6659289B1 (en) * | 1998-12-24 | 2003-12-09 | Toray Industries, Inc. | Hemocathartic column for purifying blood |
| PL2692372T3 (pl) | 2011-03-30 | 2016-12-30 | Kolumna do oczyszczania krwi |
-
1992
- 1992-05-06 JP JP4140921A patent/JP2853452B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09234246A (ja) * | 1995-12-28 | 1997-09-09 | Toray Ind Inc | β２ミクログロブリンと親和性を有する材料及びそれを用いた体液浄化カラム |
| JP2007144028A (ja) * | 2005-11-30 | 2007-06-14 | Toray Ind Inc | 吸着担体の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2853452B2 (ja) | 1999-02-03 |
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