JPH05294982A - 抗生物質ａｂ−０４１およびその製造法 - Google Patents
抗生物質ａｂ−０４１およびその製造法Info
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- JPH05294982A JPH05294982A JP4325716A JP32571692A JPH05294982A JP H05294982 A JPH05294982 A JP H05294982A JP 4325716 A JP4325716 A JP 4325716A JP 32571692 A JP32571692 A JP 32571692A JP H05294982 A JPH05294982 A JP H05294982A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/28—Streptomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Abstract
(57)【要約】
【目的】 蔓延する草から作物を保護するための手段を
提供する。 【構成】 水性培地中でのStreptomyces sp.ＮＣＩＭＢ
４０４２８の制御された好気性培養により得られる抗生
物質ＡＢ−０４１。この抗生物質ＡＢ−０４１は、生物
活性、特に除草活性を示す。
提供する。 【構成】 水性培地中でのStreptomyces sp.ＮＣＩＭＢ
４０４２８の制御された好気性培養により得られる抗生
物質ＡＢ−０４１。この抗生物質ＡＢ−０４１は、生物
活性、特に除草活性を示す。
Description
【０００１】本発明は、任意にＡＢ−０４１と命名され
た抗生物質に関する。
た抗生物質に関する。
【０００２】本発明は、Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４
０４２８を醗酵することによるそれらの製造法およびそ
れらに感受性の蔓延する草(grasses) から作物を保護す
るためのそれらの使用にも関する。
０４２８を醗酵することによるそれらの製造法およびそ
れらに感受性の蔓延する草(grasses) から作物を保護す
るためのそれらの使用にも関する。
【０００３】前記の物質が高い除草活性を示すため、有
用な作物を蔓延する植物から保護するため農業において
使用するのに好適である。
用な作物を蔓延する植物から保護するため農業において
使用するのに好適である。
【０００４】この活性は広汎な蔓延する植物に対して示
されるが、有用な植物には毒性作用がないことが示され
ている。
されるが、有用な植物には毒性作用がないことが示され
ている。
【０００５】本発明は、Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢを
醗酵することによって得られる抗生物質ＡＢ−０４１と
分かり、総ての成分が除草活性を有する混合物を提供す
る。
醗酵することによって得られる抗生物質ＡＢ−０４１と
分かり、総ての成分が除草活性を有する混合物を提供す
る。
【０００６】本発明は、Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４
０４２８の使用に限定されるものではなく、抗生物質Ａ
Ｂ−０４１を産生するという条件付きで前記の微生物の
天然または人工の変異体(mutant)または変種(variant)
をも包含するということに留意すべきである。
０４２８の使用に限定されるものではなく、抗生物質Ａ
Ｂ−０４１を産生するという条件付きで前記の微生物の
天然または人工の変異体(mutant)または変種(variant)
をも包含するということに留意すべきである。
【０００７】前記の抗生物質は、下記の特性を示した。抗生物質ＡＢ−０４１の物理および化学特性 抗生物質ＡＢ−０４１は、下記によって特徴づけられる
白色または白色−黄土色粉末の形態である。 a) 水、ジメチルスルホキシド、およびジメチルスルホ
キシド／水混合物には良好に溶解するが、エチルエーテ
ルおよびヘキサンには実質上不溶性である。
白色または白色−黄土色粉末の形態である。 a) 水、ジメチルスルホキシド、およびジメチルスルホ
キシド／水混合物には良好に溶解するが、エチルエーテ
ルおよびヘキサンには実質上不溶性である。
【０００８】b) 炭素、水素、窒素、酸素、硫黄を含
む。
む。
【０００９】c) 次の操作条件： ＨＲＦＡＢ−ＭＳ、Ｘｅ９．５kV：グリセロールマトリ
ックスではｍ／ｚ＝４６４．１４５２±０．０００６
（ＭＨ）＋およびｍ／ｚ＝４８６．１２７０±０．００
０７（ＭＮａ）＋にピークを示すＦＡＢ−ＨＲＭＳスペ
クトルによって測定した分子量が４６３．１３７３であ
る。
ックスではｍ／ｚ＝４６４．１４５２±０．０００６
（ＭＨ）＋およびｍ／ｚ＝４８６．１２７０±０．００
０７（ＭＮａ）＋にピークを示すＦＡＢ−ＨＲＭＳスペ
クトルによって測定した分子量が４６３．１３７３であ
る。
【００１０】ｍ／ｚ４６４における［ＭＨ］＋の値は、
高性能液体クロマトグラフィ／熱噴射マススペクトル法
（ＨＰＬＣ／ＴＳＭＳ）で酢酸アンモニウムの０．０５
Ｍ溶液とメタノール（５０／５０）から成る移動相を用
いて得られたスペクトルによって確認した。
高性能液体クロマトグラフィ／熱噴射マススペクトル法
（ＨＰＬＣ／ＴＳＭＳ）で酢酸アンモニウムの０．０５
Ｍ溶液とメタノール（５０／５０）から成る移動相を用
いて得られたスペクトルによって確認した。
【００１１】e) 実験式：Ｃ16Ｈ25Ｎ５Ｏ９Ｓ 添付図面の図１に示されるｐＨ４．５で水中で記録した
紫外部（ＵＶ）吸収スペクトル。これは２７８nmに吸収
極大を示す。
紫外部（ＵＶ）吸収スペクトル。これは２７８nmに吸収
極大を示す。
【００１２】f) 添付図面の図２に示されるＫＢｒ錠剤
での下記の極大値を有する赤外（ＩＲ）吸収スペクト
ル：3395; 1663; 1594; 1449; 1403; 1338; 1307; 128
5; 1246;1225; 1159; 1102; 1074; 1037; 1017; 960; 9
42; 917; 888; 741 cm-1。
での下記の極大値を有する赤外（ＩＲ）吸収スペクト
ル：3395; 1663; 1594; 1449; 1403; 1338; 1307; 128
5; 1246;1225; 1159; 1102; 1074; 1037; 1017; 960; 9
42; 917; 888; 741 cm-1。
【００１３】g) 添付図面の図３に示される 1ＨＮＭＲ
スペクトル。このスペクトルはブルーカー(Bruker)ＡＭ
３００ＮＭＲ分光計でＤ２Ｏ中で記録した。それぞれの
スキャンニングの間に２秒間の遅延で３０００回スキャ
ンニングを行った。化学シフトは４．８０ｐｐｍの重水
素化水ピークを内部基準と仮定してＴＭＳ＝０．００ｐ
ｐｍ（δＴＭＳ）に対して間接的に表わした。３．６７
ｐｐｍにおける３個の重なり合ったシグナルは、Ｄ２Ｏ
中のスペクトルをヘキサジューテロジメチルスルホキシ
ド（ＤＭＳＯ−ｄ６）中で記録した類似のスペクトルで
あって対応するシグナルが３．４８、３．４３および
３．２８ｐｐｍにはっきりと現れるもの（図４）との比
較および二次元ＮＭＲ実験によって分割した。 δ（ｐｐｍ）：8.26 (s, 1H); 4.55 (t, 1H); 4.43 (d,
1H); 4.26 (d, 1H); 4.04 (m, 1H); 3.67 (m, 3H); 3.
36 (t, 1H); 3.26 (t, 1H); 3.09 (m, 1H); 2.71(dd, 1
H); 2.19 (d, 1H); 1.26 (d, 3H) 、
スペクトル。このスペクトルはブルーカー(Bruker)ＡＭ
３００ＮＭＲ分光計でＤ２Ｏ中で記録した。それぞれの
スキャンニングの間に２秒間の遅延で３０００回スキャ
ンニングを行った。化学シフトは４．８０ｐｐｍの重水
素化水ピークを内部基準と仮定してＴＭＳ＝０．００ｐ
ｐｍ（δＴＭＳ）に対して間接的に表わした。３．６７
ｐｐｍにおける３個の重なり合ったシグナルは、Ｄ２Ｏ
中のスペクトルをヘキサジューテロジメチルスルホキシ
ド（ＤＭＳＯ−ｄ６）中で記録した類似のスペクトルで
あって対応するシグナルが３．４８、３．４３および
３．２８ｐｐｍにはっきりと現れるもの（図４）との比
較および二次元ＮＭＲ実験によって分割した。 δ（ｐｐｍ）：8.26 (s, 1H); 4.55 (t, 1H); 4.43 (d,
1H); 4.26 (d, 1H); 4.04 (m, 1H); 3.67 (m, 3H); 3.
36 (t, 1H); 3.26 (t, 1H); 3.09 (m, 1H); 2.71(dd, 1
H); 2.19 (d, 1H); 1.26 (d, 3H) 、
【００１４】h) ブルーカー(Bruker)ＡＭ３００分光計
でＤ２Ｏ中で記録した図５に示される13ＣＮＭＲスペク
トル。それぞれのスキャンニングの間に２０秒間の遅延
で１００００回スキャンニングを行った（９０°パル
ス）。化学シフトはＴＭＳ＝０．００ｐｐｍ（δＴＭ
Ｓ）に対して間接的に表わした。図６の拡大図は、４
３．６ｐｐｍに２つのシグナルが重なり合っていること
を示している。シグナルの多重性に関するデーターは、
４５°、９０°および１３５°でのＤＥＰＴ実験によっ
て得た。 δ (ppm)：180.9 (s); 174.7 (s); 165.8 (s); 158.3
(s); 137.8 (d); 107.8 (s); 73.1 (d); 70.0 (s); 66.
8 (t); 62.0 (t); 51.1 (d); 47.3 (t); 43.6 (d); 43.
6 (t); 42.0 (d); 18.5 (q)。
でＤ２Ｏ中で記録した図５に示される13ＣＮＭＲスペク
トル。それぞれのスキャンニングの間に２０秒間の遅延
で１００００回スキャンニングを行った（９０°パル
ス）。化学シフトはＴＭＳ＝０．００ｐｐｍ（δＴＭ
Ｓ）に対して間接的に表わした。図６の拡大図は、４
３．６ｐｐｍに２つのシグナルが重なり合っていること
を示している。シグナルの多重性に関するデーターは、
４５°、９０°および１３５°でのＤＥＰＴ実験によっ
て得た。 δ (ppm)：180.9 (s); 174.7 (s); 165.8 (s); 158.3
(s); 137.8 (d); 107.8 (s); 73.1 (d); 70.0 (s); 66.
8 (t); 62.0 (t); 51.1 (d); 47.3 (t); 43.6 (d); 43.
6 (t); 42.0 (d); 18.5 (q)。
【００１５】i) 下記の条件下での逆相ＨＰＬＣカラム
中で分析したときの保持時間（Ｒｔ）約４．７分： カラム＝Ｈｉｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ１００Ｒ
Ｐ１８含有（５μｍ）の２５０×４mmのもの（メルク、
ダルムシュタット、ドイツ国）、 プレカラム＝ＬｉＣｈｒｏＣＡＲＴ４−４、ＬｉＣｈｒ
ｏｓｐｈｅｒ１００ＲＰ１８含有（５μｍ）のもの（メ
ルク、ダルムシュタット、ドイツ国）、 溶離剤＝メタノール：リン酸二水素カリウムの２０mM水
溶液をリン酸でｐＨ３．５に調整したもの（１２．１：
８７．９、容量／容量） 流速＝０．７ml／分、 温度＝４０℃、 ＵＶ検出器２７６nm、
中で分析したときの保持時間（Ｒｔ）約４．７分： カラム＝Ｈｉｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ１００Ｒ
Ｐ１８含有（５μｍ）の２５０×４mmのもの（メルク、
ダルムシュタット、ドイツ国）、 プレカラム＝ＬｉＣｈｒｏＣＡＲＴ４−４、ＬｉＣｈｒ
ｏｓｐｈｅｒ１００ＲＰ１８含有（５μｍ）のもの（メ
ルク、ダルムシュタット、ドイツ国）、 溶離剤＝メタノール：リン酸二水素カリウムの２０mM水
溶液をリン酸でｐＨ３．５に調整したもの（１２．１：
８７．９、容量／容量） 流速＝０．７ml／分、 温度＝４０℃、 ＵＶ検出器２７６nm、
【００１６】l) アセトン中０．２％（重量／容量）ニ
ンヒドリンと、およびピナクリプトールイエロー水溶液
（０．０７％重量／容量）と陽性の呈色反応を示し、ジ
アゾ化試薬と陰性の呈色反応を示し、α−ナフトールと
カップリングする。
ンヒドリンと、およびピナクリプトールイエロー水溶液
（０．０７％重量／容量）と陽性の呈色反応を示し、ジ
アゾ化試薬と陰性の呈色反応を示し、α−ナフトールと
カップリングする。
【００１７】m) セルロースＦクロマトグラフィプレー
ト（メルク・アーゲー、ダルムシュタット、ドイツ国）
上で溶離剤としてアセトニトリル／水９１：９（容量／
容量）を用いた場合のＲｆ＝０．３５。
ト（メルク・アーゲー、ダルムシュタット、ドイツ国）
上で溶離剤としてアセトニトリル／水９１：９（容量／
容量）を用いた場合のＲｆ＝０．３５。
【００１８】Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２８の
形態学および培養特性
形態学および培養特性
【００１９】この微生物は、コール（ペルジア）のサン
・マルチノで採取した土壌試料から単離して、内部コー
ドＳＤ７４９で目録に掲載した。
・マルチノで採取した土壌試料から単離して、内部コー
ドＳＤ７４９で目録に掲載した。
【００２０】この微生物の培養物は、ブタペスト条約に
従って、１９９１年６月２７日にナショナル・コレクシ
ョン・オブ・インダストリアル・アンド・マリーン・バ
クテリア・リミテッド(National Collection of Indust
rial and Marine Bacteria Ltd.)、２３セイント・マー
シャー・ドライブ、アバディーンＡＢ２ １ＲＹ、スコ
ットランド、英国、に提出し、寄託番号ＮＣＩＭＢ４０
４２８を受けた。形態学的特徴を表Ａに示す（培養物の
名称は、インターナショナル・ストレプトミセス・プロ
グラム(International Streptomyces Program)によって
用いられている名称である）。表Ａ ＩＳＰコード 培地 説明 Ｍ１ トリプトン酵母ブロス 不連続成長、メラニン色素の形成 Ｍ２ 麦芽エキス寒天 豊富な成長、低コロニー、白色の気 中菌糸、若干のメラニン色素 Ｍ３ オートミール寒天 豊富な成長、高コロニー、灰色の吸 湿性気中菌糸 Ｍ４ 澱粉寒天 豊富な成長、低コロニー、白色の気 中菌糸 Ｍ５ グリセロール・アスパラギ 低成長、低コロニー、 ン寒天 Ｍ６ ペプトン鉄寒天 不連続成長、低コロニー、灰色の気 中菌糸 Ｍ７ チロシン寒天 低成長、低コロニー、気中菌糸なし − 栄養寒天 豊富な成長、低コロニー、透明 − エマーソン寒天 豊富な成長、高放射状コロニー、豊 富な白色気中菌糸 − Ｖ８トマトジュース寒天 豊富な成長、低コロニー、豊富な灰 色の気中菌糸 − デキストロースジャガイモ 豊富な成長、低コロニー、白色気中 菌糸、若干のメラニン色素
従って、１９９１年６月２７日にナショナル・コレクシ
ョン・オブ・インダストリアル・アンド・マリーン・バ
クテリア・リミテッド(National Collection of Indust
rial and Marine Bacteria Ltd.)、２３セイント・マー
シャー・ドライブ、アバディーンＡＢ２ １ＲＹ、スコ
ットランド、英国、に提出し、寄託番号ＮＣＩＭＢ４０
４２８を受けた。形態学的特徴を表Ａに示す（培養物の
名称は、インターナショナル・ストレプトミセス・プロ
グラム(International Streptomyces Program)によって
用いられている名称である）。表Ａ ＩＳＰコード 培地 説明 Ｍ１ トリプトン酵母ブロス 不連続成長、メラニン色素の形成 Ｍ２ 麦芽エキス寒天 豊富な成長、低コロニー、白色の気 中菌糸、若干のメラニン色素 Ｍ３ オートミール寒天 豊富な成長、高コロニー、灰色の吸 湿性気中菌糸 Ｍ４ 澱粉寒天 豊富な成長、低コロニー、白色の気 中菌糸 Ｍ５ グリセロール・アスパラギ 低成長、低コロニー、 ン寒天 Ｍ６ ペプトン鉄寒天 不連続成長、低コロニー、灰色の気 中菌糸 Ｍ７ チロシン寒天 低成長、低コロニー、気中菌糸なし − 栄養寒天 豊富な成長、低コロニー、透明 − エマーソン寒天 豊富な成長、高放射状コロニー、豊 富な白色気中菌糸 − Ｖ８トマトジュース寒天 豊富な成長、低コロニー、豊富な灰 色の気中菌糸 − デキストロースジャガイモ 豊富な成長、低コロニー、白色気中 菌糸、若干のメラニン色素
【００２１】表Ｂにこの菌株の幾つかの特徴を示す。表Ｂ 特徴 応答 ＮａＣｌ（７％）に対する耐性 陰性 フェノール（０．１％）に対する耐性 陽性 ４５℃での成長 陰性 ４℃における成長 陰性 脂肪分解 陽性 ＤＮＡアーゼ 陰性 硫化水素産生 陰性 下記の菌に対する抗生作用： B. subtilis ＮＣＩＭＢ３６１０ 陰性 M. luteus ＮＣＩＭＢ１９６ 陰性 C. albicans ＣＢＳ５６２ 陰性 S. cerivisiae ＣＢＳ１１７１ 弱い S. murinusＩＳＰ５０９１ 陰性 A. nigerＬＩＶ１３１ 陰性
【００２２】表Ｃに、単一の炭素源としての幾つかの有
機物質上での菌株の成長を示す。表Ｃ 化合物 成長 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン ＋＋＋ アドニトール ＋＋＋ Ｌ−アラビノース ＋＋＋ セロビオース ＋＋＋ ガラクトース ＋＋＋ グリセロール ＋＋＋ グルコース ＋＋＋ イノシトール ＋ ラクトース ＋＋ ２−ケト−Ｄ−グルコネート ＋＋＋ マルトース ＋＋ メレジトース ＋＋ メチル−Ｄ−グルコシド ＋＋ ラフィノース ＋＋ 蔗糖 ＋＋＋ ソルビトール ＋＋＋ トレアロース ＋＋ キシリトール ＋＋＋ キシロース ＋＋＋
機物質上での菌株の成長を示す。表Ｃ 化合物 成長 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン ＋＋＋ アドニトール ＋＋＋ Ｌ−アラビノース ＋＋＋ セロビオース ＋＋＋ ガラクトース ＋＋＋ グリセロール ＋＋＋ グルコース ＋＋＋ イノシトール ＋ ラクトース ＋＋ ２−ケト−Ｄ−グルコネート ＋＋＋ マルトース ＋＋ メレジトース ＋＋ メチル−Ｄ−グルコシド ＋＋ ラフィノース ＋＋ 蔗糖 ＋＋＋ ソルビトール ＋＋＋ トレアロース ＋＋ キシリトール ＋＋＋ キシロース ＋＋＋
【００２３】表Ｄは、ある種の抗生物質に対する菌株の
感受性を示す。
感受性を示す。
【００２４】他の微生物の場合と同様に、Streptomyces
sp. ＮＣＩＭＢ４０４２８は変異を行うことができ
る。
sp. ＮＣＩＭＢ４０４２８は変異を行うことができ
る。
【００２５】例えば、Ｘ線または紫外線（ＵＶ）、高周
波、および亜硝酸、ハロゲン化アルキルアミン、ニトロ
ソグアニジン、カンファーなどのような化学物質といっ
た各種の既知の突然変異誘発物質で処理することによっ
て、人工的変種または変異体を得ることができる。
波、および亜硝酸、ハロゲン化アルキルアミン、ニトロ
ソグアニジン、カンファーなどのような化学物質といっ
た各種の既知の突然変異誘発物質で処理することによっ
て、人工的変種または変異体を得ることができる。
【００２６】抗生物質ＡＢ−０４１を産生するストレプ
トミセス種に関する総ての天然または人工変種または変
異体は、Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２８株と等
価であると考えられ、本発明の範囲内に包含される。
トミセス種に関する総ての天然または人工変種または変
異体は、Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２８株と等
価であると考えられ、本発明の範囲内に包含される。
【００２７】抗生物質ＡＢ−０４１の産生法 抗生物質ＡＢ−０４１を産生させる方法は、水性栄養中
で、制御された好気性醗酵条件下でStreptomyces sp.Ｎ
ＣＩＭＢ４０４２８またはそれと等価な変異体を培養
し、既知の手段により抗生物質を分離することから成っ
ている。抗生物質を産生させるのに普通に用いられる培
養栄養物または醗酵ブロスを用いることができるが、あ
る種の培地が好ましい。
で、制御された好気性醗酵条件下でStreptomyces sp.Ｎ
ＣＩＭＢ４０４２８またはそれと等価な変異体を培養
し、既知の手段により抗生物質を分離することから成っ
ている。抗生物質を産生させるのに普通に用いられる培
養栄養物または醗酵ブロスを用いることができるが、あ
る種の培地が好ましい。
【００２８】前記の培地は、ストレプトミセス属の微生
物が同化することができる炭素および窒素源を含まなけ
ればならず、低水準の無機塩も含まなければならない。
物が同化することができる炭素および窒素源を含まなけ
ればならず、低水準の無機塩も含まなければならない。
【００２９】前記の培地は、微生物の成長および発育に
必要な痕跡量の金属も含まなければならないが、これら
は細菌の成長を行うのに提供される炭素またはタンパク
質窒素に不純物として既に含まれていることがあり、ま
たは必要であれば培地に添加することができる。
必要な痕跡量の金属も含まなければならないが、これら
は細菌の成長を行うのに提供される炭素またはタンパク
質窒素に不純物として既に含まれていることがあり、ま
たは必要であれば培地に添加することができる。
【００３０】一般的には、用いられる炭素源は、炭水化
物、特にグルコースまたはフルクトースのような糖類、
または代わりに若しくは更に澱粉または可溶性デキスト
リン澱粉のような澱粉と化学的に同様な工業生成物、ま
たはグリセロールのような多価アルコールから成ること
ができる。
物、特にグルコースまたはフルクトースのような糖類、
または代わりに若しくは更に澱粉または可溶性デキスト
リン澱粉のような澱粉と化学的に同様な工業生成物、ま
たはグリセロールのような多価アルコールから成ること
ができる。
【００３１】前記の組成物は、単独でまたは組合せて用
いることができる。
いることができる。
【００３２】培地中の炭素源の濃度は、一般的には培地
の他の成分の種類および量によって変わるが、通常は
０．５〜５重量％の濃度で十分である。
の他の成分の種類および量によって変わるが、通常は
０．５〜５重量％の濃度で十分である。
【００３３】用いることができる窒素源は、酵母エキ
ス、カゼイン加水分解物のようなタンパク質加水分解
物、または大豆粉のような穀粉、またはプロフィロ(pro
filo) 、コーン・スティープ・リカーまたは醸造可溶成
分のようなこのために発売されている工業生成物である
ことができる。
ス、カゼイン加水分解物のようなタンパク質加水分解
物、または大豆粉のような穀粉、またはプロフィロ(pro
filo) 、コーン・スティープ・リカーまたは醸造可溶成
分のようなこのために発売されている工業生成物である
ことができる。
【００３４】これらの化合物は、培地中で０．２〜６重
量％の濃度で、単独でまたは組合せて用いることができ
る。
量％の濃度で、単独でまたは組合せて用いることができ
る。
【００３５】含まれる痕跡量の金属は、例えばコバル
ト、マンガン、鉄などであることができる。
ト、マンガン、鉄などであることができる。
【００３６】用いることができる無機塩には、例えばナ
トリウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウムおよ
びカルシウム塩がリン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩ま
たは硝酸塩として挙げられる。
トリウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウムおよ
びカルシウム塩がリン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩ま
たは硝酸塩として挙げられる。
【００３７】下記の水性配合物のようなある種の培地
は、Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２８からの抗生
物質ＡＢ−０４１の産生を促進する特別な能力を示して
おり、次の製造例で用いられる。
は、Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２８からの抗生
物質ＡＢ−０４１の産生を促進する特別な能力を示して
おり、次の製造例で用いられる。
【００３８】 培地Ｐ 濃度 （成分） (g/l) プロフィロ（綿実粉） 10 グリセロール 15 ＣａＣＯ３ 3
【００３９】 培地Ｖ 濃度 （成分） (g/l) 肉エキス 4 酵母エキス 1 ペプトン 4 デキストロース 10 ＮａＣｌ 2.5
【００４０】 培地Ｖ１ 濃度 （成分） (g/l) 肉エキス 3 ペプトン 5
【００４１】 培地Ｓ 濃度 （成分） (g/l) グルコース 1 肉および肝臓ペプトン 10 肉エキス 5 ＮａＣｌ 3 寒天 12.5
【００４２】菌株Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２
８は、２０℃〜３５℃、好ましくは２５℃〜３０℃の温
度で成長させることができる。
８は、２０℃〜３５℃、好ましくは２５℃〜３０℃の温
度で成長させることができる。
【００４３】ｐＨ条件は、約５から約９まで変化するこ
とができる。
とができる。
【００４４】酸素濃度が低い値に低下することがあると
きには、培地に吹き込まれる無菌空気は通常は接種後約
２４時間を除き、酸素濃度が培地中の飽和値の２０％以
上を保持するような量で用いられる。
きには、培地に吹き込まれる無菌空気は通常は接種後約
２４時間を除き、酸素濃度が培地中の飽和値の２０％以
上を保持するような量で用いられる。
【００４５】醗酵中の抗生物質の産生は、ブロス試料に
ついての生物活性によって追跡することができる。
ついての生物活性によって追跡することができる。
【００４６】醗酵は、実質的な生物活性が得られるよう
な時間行う。７２〜１２０時間の時間で通常十分であ
る。
な時間行う。７２〜１２０時間の時間で通常十分であ
る。
【００４７】抗生物質の分離および精製 前記の醗酵条件下で培養した後、抗生物質ＡＢ−０４１
を培養ブロスから分離した後、従来の分離技術の方法に
よって精製することができる。
を培養ブロスから分離した後、従来の分離技術の方法に
よって精製することができる。
【００４８】これらの方法には、例えば非溶媒を用いる
沈澱、限外濾過、逆浸透、シリカゲルクロマトグラフ
ィ、セルロースクロマトグラフィ、逆相クロマトグラフ
ィ、イオン交換樹脂クロマトグラフィ、非イオン性のマ
クロポーラス樹脂などの上でのクロマトグラフィ、サイ
ズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）、およびゲル浸透ク
ロマトグラフィ（ＧＰＣ）が挙げられる。
沈澱、限外濾過、逆浸透、シリカゲルクロマトグラフ
ィ、セルロースクロマトグラフィ、逆相クロマトグラフ
ィ、イオン交換樹脂クロマトグラフィ、非イオン性のマ
クロポーラス樹脂などの上でのクロマトグラフィ、サイ
ズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）、およびゲル浸透ク
ロマトグラフィ（ＧＰＣ）が挙げられる。
【００４９】醗酵中に産生される抗生物質は、主として
醗酵ブロス中に見出される。
醗酵ブロス中に見出される。
【００５０】抗生物質ＡＢ−０４１を回収するのに好ま
しい方法は、遠心分離によって培養ブロスから菌糸塊を
分離することである。このようにして得られるブロスを
１μｍフィルターを通して濾過し、２０kDの見掛けの排
除を有する螺旋状メンブランを通して限外濾過を行う。
浸透液を５００D の見掛けの排除を有する逆浸透により
螺旋状メンブランを通して濃縮する。
しい方法は、遠心分離によって培養ブロスから菌糸塊を
分離することである。このようにして得られるブロスを
１μｍフィルターを通して濾過し、２０kDの見掛けの排
除を有する螺旋状メンブランを通して限外濾過を行う。
浸透液を５００D の見掛けの排除を有する逆浸透により
螺旋状メンブランを通して濃縮する。
【００５１】逆浸透によって保持されるものを、ある種
の親油性不純物を保持するが抗生物質ＡＢ−０４１は保
持しない非イオン性樹脂上で処理した後、（予めクロリ
ド型に転換したアンバーライトＩＲＡ４０１のような）
イオン交換樹脂を含むカラムに入れた後、樹脂を水で洗
浄し、生成物を水性ＨＣｌ溶液で溶出する。
の親油性不純物を保持するが抗生物質ＡＢ−０４１は保
持しない非イオン性樹脂上で処理した後、（予めクロリ
ド型に転換したアンバーライトＩＲＡ４０１のような）
イオン交換樹脂を含むカラムに入れた後、樹脂を水で洗
浄し、生成物を水性ＨＣｌ溶液で溶出する。
【００５２】抗生物質ＡＢ−０４１を含む画分を集め、
３２％アンモニア水溶液で中和し、真空下にて濃縮す
る。
３２％アンモニア水溶液で中和し、真空下にて濃縮す
る。
【００５３】この方法で得られる溶液をＣ１８逆相中シ
リカに載せ、水で溶出する。
リカに載せ、水で溶出する。
【００５４】抗生物質ＡＢ−０４１を含む画分を集め、
真空下にて濃縮し、例えば定常相としてフラクトゲル(F
RAKTOGEL) ＴＳＫ ＨＷ４０（Ｆ）を含むサイズ排除ク
ロマトグラフィカラムに加え、水で溶出し、抗生物質Ａ
Ｂ−０４１を含む画分を集め、真空下にて濃縮して、純
粋な抗生物質ＡＢ−０４１を得る。
真空下にて濃縮し、例えば定常相としてフラクトゲル(F
RAKTOGEL) ＴＳＫ ＨＷ４０（Ｆ）を含むサイズ排除ク
ロマトグラフィカラムに加え、水で溶出し、抗生物質Ａ
Ｂ−０４１を含む画分を集め、真空下にて濃縮して、純
粋な抗生物質ＡＢ−０４１を得る。
【００５５】生物活性 発生前および後の除草活性を、例に記載した方法で測定
した。
した。
【００５６】化合物ＡＢ−０４１は、広範囲の様々な野
生種の単子葉および双子葉の蔓延する草に対してかなり
の発生後除草活性を有する（表Ｅを参照）。しかしなが
ら、発生前除草活性はある種の双子葉種に限定される
（表Ｅ参照）。
生種の単子葉および双子葉の蔓延する草に対してかなり
の発生後除草活性を有する（表Ｅを参照）。しかしなが
ら、発生前除草活性はある種の双子葉種に限定される
（表Ｅ参照）。
【００５７】化合物ＡＢ−０４１は、小麦、大麦および
トウモロコシおよび綿のようなある種の有用な植物に対
して選択性を有し（表Ｆ参照）、これらは蔓延する草に
対して活性な投与量ではほとんど植物毒性を示さない。
トウモロコシおよび綿のようなある種の有用な植物に対
して選択性を有し（表Ｆ参照）、これらは蔓延する草に
対して活性な投与量ではほとんど植物毒性を示さない。
【００５８】前記の特性は、本発明の抗生物質が農業上
関心の高い植物毒性活性を有するので、除草剤として有
効に用いることができる。
関心の高い植物毒性活性を有するので、除草剤として有
効に用いることができる。
【００５９】使用および配合 実際には、農業および他の分野の用途でも、本発明の化
合物は好適な組成物の形態で極めて有効に用いられる。
合物は好適な組成物の形態で極めて有効に用いられる。
【００６０】活性成分のほかに、これらの組成物は固形
または液状の不活性キャリヤー（有機溶媒、植物性また
は鉱油、水およびそれらの混合物）および場合によって
は界面活性剤、分散剤および湿潤剤のような配合物に普
通に用いられる他の添加剤を含む。
または液状の不活性キャリヤー（有機溶媒、植物性また
は鉱油、水およびそれらの混合物）および場合によって
は界面活性剤、分散剤および湿潤剤のような配合物に普
通に用いられる他の添加剤を含む。
【００６１】例えば水への溶解度および安定性に関する
その陽性の特徴を考慮して、生成物を水溶性粉末または
水性溶液として好都合に配合して、有機溶媒の使用によ
って生じる環境への影響を最少限にすることができる。
その陽性の特徴を考慮して、生成物を水溶性粉末または
水性溶液として好都合に配合して、有機溶媒の使用によ
って生じる環境への影響を最少限にすることができる。
【００６２】適用法は、達成すべき目的および用いられ
る配合物の種類の両方に関して選択される。
る配合物の種類の両方に関して選択される。
【００６３】特定の適用には、または組成物の作用の範
囲を拡げるために、他の除草剤、殺虫剤、殺黴剤または
肥料のような他の活性成分を前記の組成物に加えること
ができる。
囲を拡げるために、他の除草剤、殺虫剤、殺黴剤または
肥料のような他の活性成分を前記の組成物に加えること
ができる。
【００６４】適用量は、蔓延の種類および程度、用いる
組成物の種類、および気候および環境の要因のような様
々な要因によって変化する。
組成物の種類、および気候および環境の要因のような様
々な要因によって変化する。
【００６５】農業で実際に使用するためには、０．１〜
２kg／haの抗生物質の投与量で十分な結果が得られる。
２kg／haの抗生物質の投与量で十分な結果が得られる。
【００６６】下記の例により本発明を説明するが、発明
を限定するものではない。
を限定するものではない。
【００６７】例１ 発生後除草活性の試験 様々な植物群に関する蔓延する一年生の草(grass) の１
０品種の種子を、農業用土壌を入れてある直径が１１cm
のプラスチックジャーに播種し、双子葉植物種の場合に
は子葉が開いてしまうまで、また単子葉植物種の場合に
は最初の葉が開いてしまい二番目の葉が見えるまで、種
類によって７〜１５日間温室で好適な条件下で生育し
た。ＡＢ−０４１の１．０g/l 水性溶液（１．０kg／ha
の投与量に対応）をドゥ・ビルビス(De Vilbiss)噴霧器
によって試験を行っている植物に投与する。除草効果
は、１週間毎に観察する。表Ｅに、４週間後の成長抑制
の百分率として表わした活性の結果を示す。試験を行っ
た品種の総ての植物は６０％〜１００％の抑制水準を示
している（０％＝健康な植物；１００％＝完全に抑制さ
れた植物）。
０品種の種子を、農業用土壌を入れてある直径が１１cm
のプラスチックジャーに播種し、双子葉植物種の場合に
は子葉が開いてしまうまで、また単子葉植物種の場合に
は最初の葉が開いてしまい二番目の葉が見えるまで、種
類によって７〜１５日間温室で好適な条件下で生育し
た。ＡＢ−０４１の１．０g/l 水性溶液（１．０kg／ha
の投与量に対応）をドゥ・ビルビス(De Vilbiss)噴霧器
によって試験を行っている植物に投与する。除草効果
は、１週間毎に観察する。表Ｅに、４週間後の成長抑制
の百分率として表わした活性の結果を示す。試験を行っ
た品種の総ての植物は６０％〜１００％の抑制水準を示
している（０％＝健康な植物；１００％＝完全に抑制さ
れた植物）。
【００６８】例２ 発生前除草活性の試験 様々な植物群に関する蔓延する一年生の草の１０品種の
種子を、農業用土壌を入れてある直径が１１cmのプラス
チックジャーに播種した。ＡＢ−０４１の１ g/l水性溶
液（１kg／haの投与量に対応）を、ドゥ・ビルビス(De
Vilbiss)噴霧器によってジャーに含まれる土壌の表面に
投与する。除草効果を１週間毎に観察する。表Ｅに、４
週間後の成長抑制の百分率として表わした活性の結果を
示す（０％＝健康な植物；１００％＝完全に抑制された
植物）。表Ｅ ＡＢ−０４１ １kg／ha 成長抑制率（％） 蔓延植物 発生後 発生前 Convolvolus arvensis 75 70 Convolvolus sepium 100 90 Ipomea leptofilla 85 35 Geranium dissectum 95 0 Stellaria media 100 100 Abutilon theophrasti 100 10 Solanum nigrum 95 20 Veronica sp. 100 20 Setaria glauca 60 10 Digitaria sanguinalis 75 10
種子を、農業用土壌を入れてある直径が１１cmのプラス
チックジャーに播種した。ＡＢ−０４１の１ g/l水性溶
液（１kg／haの投与量に対応）を、ドゥ・ビルビス(De
Vilbiss)噴霧器によってジャーに含まれる土壌の表面に
投与する。除草効果を１週間毎に観察する。表Ｅに、４
週間後の成長抑制の百分率として表わした活性の結果を
示す（０％＝健康な植物；１００％＝完全に抑制された
植物）。表Ｅ ＡＢ−０４１ １kg／ha 成長抑制率（％） 蔓延植物 発生後 発生前 Convolvolus arvensis 75 70 Convolvolus sepium 100 90 Ipomea leptofilla 85 35 Geranium dissectum 95 0 Stellaria media 100 100 Abutilon theophrasti 100 10 Solanum nigrum 95 20 Veronica sp. 100 20 Setaria glauca 60 10 Digitaria sanguinalis 75 10
【００６９】例３ 有用植物に対する発生後除草活性の試験 試験は、６種類の有用な単子葉および双子葉植物につい
て「発生後除草活性」の項で記載したのと同様に行う。
表Ｆに、４週間後の成長抑制の百分率として表わした活
性の結果を示す。表Ｆ ＡＢ−０４１ １kg／ha 作物 成長抑制率（％） Triticum aestivum 5 Hordeum vulgare 0 Zea mays 15 Glycine maxima 15 Beta vulgaris 77 Pisum sativum 70 Gossypium hirsutum 0 植物毒性の徴候をまったく示さない種類は綿（Gossypiu
m hirsutum) および大麦(Hordeum vulgare) である。小
麦(Triticum aestivum) 、トウモロコシ(Zea Mays)およ
び大豆(Glycine maxima)は、５％〜１５％の間の植物毒
性の小さな徴候を示す。ビート(Beta vulgaris) および
エンドウ(Pisum sativum) は最も感受性のある種類であ
り、それぞれ５５％および７０％の成長抑制を示す。
て「発生後除草活性」の項で記載したのと同様に行う。
表Ｆに、４週間後の成長抑制の百分率として表わした活
性の結果を示す。表Ｆ ＡＢ−０４１ １kg／ha 作物 成長抑制率（％） Triticum aestivum 5 Hordeum vulgare 0 Zea mays 15 Glycine maxima 15 Beta vulgaris 77 Pisum sativum 70 Gossypium hirsutum 0 植物毒性の徴候をまったく示さない種類は綿（Gossypiu
m hirsutum) および大麦(Hordeum vulgare) である。小
麦(Triticum aestivum) 、トウモロコシ(Zea Mays)およ
び大豆(Glycine maxima)は、５％〜１５％の間の植物毒
性の小さな徴候を示す。ビート(Beta vulgaris) および
エンドウ(Pisum sativum) は最も感受性のある種類であ
り、それぞれ５５％および７０％の成長抑制を示す。
【００７０】例４Streptomyces sp. ＮＣＩＭＢ４０４２８株の醗酵Streptomyces sp. ＮＣＩＭＢ４０４２８菌糸（−２０℃
で１０％グリセロール中に保存したもの）２mlを入れた
バイアルを用いて、前記の培地Ｖ１５０mlに接種した
後、回転式振盪培養機中で２８℃で７２時間インキュベ
ーションする。得られる培養物を用いて、培地Ｐと消泡
剤としてニクソレン(Nixolen) １．０g/lを含む醗酵装
置（見掛け容積１０リットル）に下記の条件下で接種す
る：温度２９℃、通気３００l/時、撹拌３２０rpm 、醗
酵時間約９６時間。
で１０％グリセロール中に保存したもの）２mlを入れた
バイアルを用いて、前記の培地Ｖ１５０mlに接種した
後、回転式振盪培養機中で２８℃で７２時間インキュベ
ーションする。得られる培養物を用いて、培地Ｐと消泡
剤としてニクソレン(Nixolen) １．０g/lを含む醗酵装
置（見掛け容積１０リットル）に下記の条件下で接種す
る：温度２９℃、通気３００l/時、撹拌３２０rpm 、醗
酵時間約９６時間。
【００７１】例５Streptomyces sp. ＮＣＩＭＢ４０４２８株の醗酵 凍結乾燥した形態のStreptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４
２８を含むバイアルを無菌的に開いて、滅菌蒸溜水で再
水和する。この懸濁液を用いて、前記の培地Ｐ１００ml
を含む５００mlフラスコに接種した後、これを回転式振
盪培養機（２００rpm ）中で２８℃で９０時間インキュ
ベーションする。その後、培養ブロスを遠心分離を行っ
て、菌糸から分離し、生物試験に使用する。
２８を含むバイアルを無菌的に開いて、滅菌蒸溜水で再
水和する。この懸濁液を用いて、前記の培地Ｐ１００ml
を含む５００mlフラスコに接種した後、これを回転式振
盪培養機（２００rpm ）中で２８℃で９０時間インキュ
ベーションする。その後、培養ブロスを遠心分離を行っ
て、菌糸から分離し、生物試験に使用する。
【００７２】例６Streptomyces sp. ＮＣＩＭＢ４０４２８株の醗酵 培地Ｓ上で生育したStreptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４
２８の純粋培養物を用いて、３個のそれぞれが培地Ｖ２
０mlを含むフラスコに接種した後、これを回転式振盪培
養機（２５０rpm ）中で２８℃で７２時間インキュベー
ションする。これらの培養物を用いて、１０個のそれぞ
れ培地Ｖ１５００mlを含む２．０リットルのフラスコに
接種した後、これを再度前記の条件下で７２時間インキ
ュベーションする。その後、この培養物を用いて、３個
の培地Ｐ２５リットルと消泡剤としてニクソレン(Nixol
en) １．０ g/lを含む醗酵装置（見掛け容積４０リット
ル）に下記の条件下で接種する：温度２９℃、通気３０
０リットル／時、醗酵時間７４時間。
２８の純粋培養物を用いて、３個のそれぞれが培地Ｖ２
０mlを含むフラスコに接種した後、これを回転式振盪培
養機（２５０rpm ）中で２８℃で７２時間インキュベー
ションする。これらの培養物を用いて、１０個のそれぞ
れ培地Ｖ１５００mlを含む２．０リットルのフラスコに
接種した後、これを再度前記の条件下で７２時間インキ
ュベーションする。その後、この培養物を用いて、３個
の培地Ｐ２５リットルと消泡剤としてニクソレン(Nixol
en) １．０ g/lを含む醗酵装置（見掛け容積４０リット
ル）に下記の条件下で接種する：温度２９℃、通気３０
０リットル／時、醗酵時間７４時間。
【００７３】例７ 抗生物質ＡＢ−０４１の単離 前記の方法で得られる醗酵ブロス９０リットルを遠心分
離し、透明になったブロスを１μｍフィルターを通して
濾過する。濾液を、２０kDの見掛け排除を有するＧ−５
０螺旋状メンブラン（ハイドロ・エアー・リサーチ(Hyd
ro Air Research)を備えた限外濾過／逆浸透装置（ハイ
ドロ・エアー・リサーチ、エス・アール・エル、(Hydro
Air Research S.R.L.) 、ゼルボ・ディ・オペラ、イタ
リア国）中で処理する。約８０リットルを浸透させた
後、保持された液体に水１０リットルを加え、更に１０
リットルを浸透させ、これを前に得た８０リットルの浸
透液に加える。限外濾過によって保持される物質を廃棄
する。限外濾過浸透液９０リットルを、５００ Dの見掛
け排除を有するＤＳ−５逆浸透螺旋状メンブラン（ハイ
ドロ・エアー・リサーチ(Hydro Air Research)を備えた
逆浸透装置（ハイドロ・エアー・リサーチ(Hydro Air R
esearch)）で処理する。８２リットルを浸透させ、濃縮
物を集めて、浸透液を水２．５リットルで洗浄し、洗浄
水を逆浸透濃縮物に加えて、抗生物質ＡＢ−０４１を含
む溶液９．５リットルを得る。これをＸＡＤ−４（ロー
ム・アンド・ハース・カンパニー(Rohm & Haas Co.)、
フィラデルフィア、ペンシルバニア州）２．４kgを含む
カラム（内径９０mm×高さ３００mm）に加えて、溶出液
８．０リットルを集める。樹脂を水４．０リットルで洗
浄し、最初の１．５リットルを集め、これを前の８．０
リットルの溶出液に加える。ｐＨが約７．１であり、抗
生物質ＡＢ−０４１を含むこの溶液を、クロリド型のア
ンバーライトＩＲＡ４０１、２０〜５０メッシュ（フル
カ・ヒェミー・アーゲー(Fluka Chemie AG) 、ブッフ
ス、スイス国）１．５kgを含むカラム（内径９０mm×高
さ３００mm）に２０ml／分の速度で加えた後、カラムを
水６．０リットルで洗浄し、０．５Ｎ水性ＨＣｌ溶液で
溶出する。抗生物質ＡＢ−０４１は、溶離剤４リットル
の後の７リットル内に溶出する。抗生物質ＡＢ−０４１
を含む酸溶液を３２％アンモニア水溶液で中和し、真空
で約１．０リットルの容積まで濃縮し、ＲＳｉＬ Ｃ１
８ＨＬシリカ（０．０４４〜０．０６３mm、多孔度９０
オングストローム、バイオ−ラッド・ラボラトリーズ、
エスアールエル(Bio-Rad Laboratories S.r.L.) 、ミラ
ノ、イタリア国）１．２kgを含むカラム（内径９０mm×
高さ５００mm）に加え、水で３５ml／分の速度で溶出す
る。抗生物質ＡＢ−０４１は、溶離剤７．５リットルの
後に３．２リットル内に溶出する。この量を真空下にて
蒸発して、水５０mlに吸収させ、フラクトゲルＴＳＫＨ
Ｗ４０（Ｆ）（メルク・アーゲー、ダルムシュタット、
ドイツ国）を充填したカラム（内径７０mm×高さ５００
mm）に加え、水で５ml／分の速度で溶出し、３５mlの画
分を集める。抗生物質ＡＢ−０４１は画分２１から画分
３０までの３５０ml内に溶出する。集めた画分を真空下
にて蒸発させ、抗生物質ＡＢ−０４１の３００mgを得
る。
離し、透明になったブロスを１μｍフィルターを通して
濾過する。濾液を、２０kDの見掛け排除を有するＧ−５
０螺旋状メンブラン（ハイドロ・エアー・リサーチ(Hyd
ro Air Research)を備えた限外濾過／逆浸透装置（ハイ
ドロ・エアー・リサーチ、エス・アール・エル、(Hydro
Air Research S.R.L.) 、ゼルボ・ディ・オペラ、イタ
リア国）中で処理する。約８０リットルを浸透させた
後、保持された液体に水１０リットルを加え、更に１０
リットルを浸透させ、これを前に得た８０リットルの浸
透液に加える。限外濾過によって保持される物質を廃棄
する。限外濾過浸透液９０リットルを、５００ Dの見掛
け排除を有するＤＳ−５逆浸透螺旋状メンブラン（ハイ
ドロ・エアー・リサーチ(Hydro Air Research)を備えた
逆浸透装置（ハイドロ・エアー・リサーチ(Hydro Air R
esearch)）で処理する。８２リットルを浸透させ、濃縮
物を集めて、浸透液を水２．５リットルで洗浄し、洗浄
水を逆浸透濃縮物に加えて、抗生物質ＡＢ−０４１を含
む溶液９．５リットルを得る。これをＸＡＤ−４（ロー
ム・アンド・ハース・カンパニー(Rohm & Haas Co.)、
フィラデルフィア、ペンシルバニア州）２．４kgを含む
カラム（内径９０mm×高さ３００mm）に加えて、溶出液
８．０リットルを集める。樹脂を水４．０リットルで洗
浄し、最初の１．５リットルを集め、これを前の８．０
リットルの溶出液に加える。ｐＨが約７．１であり、抗
生物質ＡＢ−０４１を含むこの溶液を、クロリド型のア
ンバーライトＩＲＡ４０１、２０〜５０メッシュ（フル
カ・ヒェミー・アーゲー(Fluka Chemie AG) 、ブッフ
ス、スイス国）１．５kgを含むカラム（内径９０mm×高
さ３００mm）に２０ml／分の速度で加えた後、カラムを
水６．０リットルで洗浄し、０．５Ｎ水性ＨＣｌ溶液で
溶出する。抗生物質ＡＢ−０４１は、溶離剤４リットル
の後の７リットル内に溶出する。抗生物質ＡＢ−０４１
を含む酸溶液を３２％アンモニア水溶液で中和し、真空
で約１．０リットルの容積まで濃縮し、ＲＳｉＬ Ｃ１
８ＨＬシリカ（０．０４４〜０．０６３mm、多孔度９０
オングストローム、バイオ−ラッド・ラボラトリーズ、
エスアールエル(Bio-Rad Laboratories S.r.L.) 、ミラ
ノ、イタリア国）１．２kgを含むカラム（内径９０mm×
高さ５００mm）に加え、水で３５ml／分の速度で溶出す
る。抗生物質ＡＢ−０４１は、溶離剤７．５リットルの
後に３．２リットル内に溶出する。この量を真空下にて
蒸発して、水５０mlに吸収させ、フラクトゲルＴＳＫＨ
Ｗ４０（Ｆ）（メルク・アーゲー、ダルムシュタット、
ドイツ国）を充填したカラム（内径７０mm×高さ５００
mm）に加え、水で５ml／分の速度で溶出し、３５mlの画
分を集める。抗生物質ＡＢ−０４１は画分２１から画分
３０までの３５０ml内に溶出する。集めた画分を真空下
にて蒸発させ、抗生物質ＡＢ−０４１の３００mgを得
る。
【００７４】例８ 処方：水溶性粉末の調製 a) 活性成分（ＡＢ−０４１） 70〜90％ b) リグノスルホン酸カルシウム 2〜 5％ c) 陰イオン性または非イオン性界面活性剤 5〜10％ （ベンゼンスルホン酸ナトリウム、 ナフタレン−ホルムアルデヒド縮合物、 ポリエトキシル化アルキルフェノール などの、単独または混合物） d) シリコーン消泡剤 0.5 〜2 ％ 場合によっては、硫酸ナトリウム、ＫＣｌなどのような
不活性な可溶性塩を加える。
不活性な可溶性塩を加える。
【００７５】例９ 処方：濃縮した水性溶液の調製 a) 活性成分（ＡＢ−０４１） 5〜15％ b) ポリエトキシル化ノニルフェノール 1〜 5％ c) プロピレングリコール 5〜10％ d) ポリエトキシル化アルキルアミン 2〜 5％ e) 水を加えて100 ％にする。
【図１】抗生物質ＡＢ−０４１の紫外部吸収スペクト
ル。
ル。
【図２】抗生物質ＡＢ−０４１の赤外吸収スペクトル。
【図３】抗生物質ＡＢ−０４１の１ＨＮＭＲスペクト
ル。
ル。
【図４】ＤＭＳＯ−ｄ６およびＤ２Ｏ中で測定した抗生
物質ＡＢ−０４１のスペクトルの比較を示す説明図。
物質ＡＢ−０４１のスペクトルの比較を示す説明図。
【図５】抗生物質ＡＢ−０４１の13ＣＮＭＲスペクト
ル。
ル。
【図６】４３．６ｐｐｍにおける２個のシグナルの重な
り合いを示すスペクトル。
り合いを示すスペクトル。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 ヌンツィオ、アンドリオロ イタリー国ミラノ、ボラーテ、ビア、フィ リポ、トゥラティ、21 (72)発明者 アレッサンドロ、スカッキ イタリー国ノバラ、ビア、アカチエ、７ (72)発明者 ジョルジオ、エットーレ、ボルゴノビ イタリー国ミラノ、ビアレ、コルシカ、75 (72)発明者 ジョルジオ、カッサーニ イタリー国ミラノ、アルルノ、ビア、ロー マ、93 (72)発明者 シルビア、スペラ イタリー国ノバラ、ビア、エス、フランチ ェスコ、ド、アシシ、14 (72)発明者 ジャンフランコ、グリエルメッティ イタリー国ノバラ、ボゴニョ、ビア、クワ ルト、ノベンブレ、15／ア (72)発明者 ジョルジオ、ピラリ イタリー国バレセ、サロノ、ビア、ティチ ノ、２ (72)発明者 ジョバンニ、コンファロニエリ イタリー国ミラノ、モンツァ、ビア、カロ ニ、15
Claims (13)
- 【請求項１】Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２８ま
たは等価変異体を炭素、窒素および無機塩源を含む水性
培地中で制御した好気性培養を行った後、前記の抗生物
質を回収することによって得ることができる、下記の特
性を有するＡＢ−０４１抗生物質類。 紫外部吸収極大：２７８nm、 赤外吸収極大（cm-1）：3395; 1663; 1594; 1449; 140
3; 1338; 1307; 1285;1246; 1225; 1159; 1102; 1074;
1037; 1017; 960; 942; 917; 888; 741 。 - 【請求項２】下記の特性を有する、ＡＢ−０４１抗生物
質類の一成分である抗生物質ＡＢ−０４１。 a) 水、ジメチルスルホキシド、およびジメチルスルホ
キシド／水混合物には良好に溶解するが、エチルエーテ
ルおよびヘキサンには実質上不溶性である、 b) 元素分析によれば、炭素、水素、窒素、酸素、硫黄
を含む、 c) 分子量４６３、 d) 紫外部（ＵＶ）吸収スペクトルは２７８nmに吸収極
大を示す、 e) 赤外（ＩＲ）吸収極大：3395; 1663; 1594; 1449;
1403; 1338; 1307; 1285; 1246; 1225; 1159; 1102; 10
74; 1037; 1017; 960; 942; 917; 888; 741 cm-1、 f) 1ＨＮＭＲスペクトルの主要ピーク： ＴＭＳ (ppm)：8.26 (s, 1H); 4.55 (t, 1H); 4.43 (d,
1H); 4.26 (d, 1H); 4.04 (m, 1H); 3.67 (m, 3H); 3.
36 (t, 1H); 3.26 (t, 1H); 3.09 (m, 1H); 2.71(dd, 1
H); 2.19 (d, 1H); 1.26 (d, 3H) 、 g) 13ＣＮＭＲスペクトルの主要ピーク： ＴＭＳ (ppm)：181.3 (s); 174.7 (s); 165.8 (s); 15
8.3 (s); 137.8 (s); 107.8 (s); 105.3 (s) 極めて弱
い; 73.1 (d); 66.8 (t); 62.0 (t); 51.1 (d); 47.3
(t); 43.6 (d); 43.6 (t); 42.0 (d); 18.5 (q)、 h) 下記の条件下での逆相ＨＰＬＣカラム中の保持時間
（Ｒｔ）：約４．５分、カラム＝Ｈｉｂａｒ ＬｉＣｈ
ｒｏｓｐｈｅｒ１００ＲＰ１８含有（５μｍ）の２５０
×４mmのもの（メルク、ダルムシュタット、ドイツ
国）、 プレカラム＝ＬｉＣｈｒｏＣＡＲＴ４−４、ＬｉＣｈｒ
ｏｓｐｈｅｒ１００ＲＰ１８含有（５μｍ）のもの（メ
ルク、ダルムシュタット、ドイツ国）、 溶離剤＝メタノール：リン酸二水素カリウムの２０mM水
溶液をリン酸でｐＨ３．５に調整したもの（１２．１：
８７．９、容量／容量）、 流速＝０．７ml／分、 温度＝４０℃、 ＵＶ検出器２７６nm、 i) アセトン中０．２％（重量／容量）ニンヒドリンお
よびピナクリプトールイエロー水溶液（０．０７％重量
／容量）と陽性の呈色反応を示し、ジアゾ化試薬と陰性
の呈色反応を示し、α−ナフトールとカップリングす
る、 l) セルロースＦクロマトグラフィプレート（メルク・
アーゲー、ダルムシュタット、ドイツ国）上で溶離剤と
してアセトニトリル／水９１：９（容量／容量）を用い
た場合のＲｆ＝０．３５。 - 【請求項３】Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４２８ま
たはその変異体を培養した後、前記の抗生物質類を培養
ブロスから回収することを特徴とする、請求項１または
２に記載のＡＢ−０４１抗生物質類の製造法。 - 【請求項４】培養を２０〜３５℃の温度で行う、請求項
３に記載の方法。 - 【請求項５】培養を２５〜３０℃の温度で行う、請求項
４に記載の方法。 - 【請求項６】醗酵をｐＨ５〜９で行う、請求項３に記載
の方法。 - 【請求項７】抗生物質類を培養ブロスから、濾過後にク
ロマトグラフィ法を用いて単離する、請求項３に記載の
方法。 - 【請求項８】ＡＢ−０４１抗生物質類を、 螺旋状メンブランを介するブロスの限外濾過、 逆浸透による螺旋状メンブランを介する透過物の濃縮、 それぞれ非イオン性樹脂およびイオン交換樹脂を含むカ
ラムを通す連続的クロマトグラフィ処理、 サイズ排除クロマトグラフィ、から成る精製法によって
単離する、請求項３に記載の方法。 - 【請求項９】微生物Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０４
２８。 - 【請求項１０】微生物Streptomyces sp.ＮＣＩＭＢ４０
４２８またはＡＢ−０４１抗生物質類を産生することが
できる等価変異体の生物学的純粋培養。 - 【請求項１１】請求項１および２に記載されているＡＢ
−０４１抗生物質類の除草剤としての使用。 - 【請求項１２】請求項１および２に記載の抗生物質類か
ら選択される化合物を活性成分として、固形および液状
キャリヤーおよび所望により他の添加剤と共に含む、除
草剤組成物。 - 【請求項１３】蔓延する草の成長を阻害する方法であっ
て、有用な成長する植物またはその複製形態に、この有
用な植物に害を及ぼすことなく草の成長を阻害すること
ができる請求項１または２に記載の化合物を所定量投与
するから成る方法。
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