JPH05219999A - 核酸の定量化 - Google Patents

核酸の定量化

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JPH05219999A
JPH05219999A JP4205202A JP20520292A JPH05219999A JP H05219999 A JPH05219999 A JP H05219999A JP 4205202 A JP4205202 A JP 4205202A JP 20520292 A JP20520292 A JP 20520292A JP H05219999 A JPH05219999 A JP H05219999A
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Abstract

(57)【要約】 【構成】十分に限定されたターゲット核酸と識別され
る、変異株配列を含む対応する核酸の公知の数の分子を
試験サンプルに添加し、続いて、核酸の競合増幅反応を
実施し、その後、増幅した核酸の定量化を鑑別検出によ
り実施する、試験サンプル中のターゲット核酸を定量化
する方法。 【効果】高感度、高速度、高い再現性及び正確さをもっ
て、ターゲット核酸を定量できる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、試験サンプル中のター
ゲット核酸の定量化方法に関する。前記方法を実施する
ための試験用キットは、本発明の一部である。
【０００２】
【従来の技術】試験サンプル中の核酸の増幅を実施する
ための方法は、中でも、米国特許第4,683,195号及び同
第4,683,202号（Cetus Corp.）に、所謂ポリメラーゼ鎖
反応（ＰＣＲ）として開示されている。
【０００３】近年、試験サンプル中の核酸、特にＲＮＡ
配列を増幅するもう１つの方法が、欧州特許出願第0,32
9,822号（Cangene Corp.）により開示された。この方法
自体は、本明細書中では詳細を記載しないが、所謂ＮＡ
ＳＢＡ法（商標）（核酸配列をベースとする増幅）に拘
わる。
【０００４】増幅は、指数的な方法である。反応速度を
制御する任意の因子に於ける違いは、増幅産生物の収率
では大きな違いとなる。ＰＣＲ並びにＮＡＳＢＡ法は、
遺伝子病の病気の診断に広く適用されたが、これらの方
法からは定性的な結果しか得られなかった。
【０００５】試験サンプル中に存在する特異的な核酸の
量を、直接、正確且つ再現可能に定量化する方法が必要
である。
【０００６】感染性の病気（例えば、ＡＩＤＳまたは肝
炎など）に罹患している患者から得られた試験サンプル
の、高感度の、再現可能で、定量的な分析は、患者内に
ある感染因子の量を決定するのに非常に重要であり得、
その情報は、患者の治療をモニターするのに有用であ
る。
【０００７】本発明は、ターゲット核酸と識別される、
匹敵し得る効率で増幅可能な、十分に限定された変異株
配列を含む対応する核酸の公知の数の分子を試験サンプ
ルに添加し、核酸の増幅反応を実質的に実施し、その
後、増幅した核酸の定量化を鑑別検出により実施するこ
とを含む、試験サンプル中のターゲット核酸の定量化方
法を提供する。
【０００８】ターゲット核酸は、デオキシリボ核酸（Ｄ
ＮＡ）並びにリボ核酸（ＲＮＡ）であってもよい。
【０００９】ターゲット核酸配列は、リボ核酸であるの
が好ましい。この方法に必要な鑑別検出は、ターゲット
核酸と変異株配列の両方にハイブリダイズするために１
種類の標識配列を使用するか、またはターゲット配列と
変異株配列を識別する２種類の標識を使用することによ
り実施される。
【００１０】前記鑑別方法は、変異株配列を切断し得る
が、ターゲット配列は切断しないリボザイム（ribpzym
e）、またはこの反対の（即ち、ターゲット配列を切断
し得るが、変異株配列は切断しない）リボザイムを使用
することによっても実施し得る。
【００１１】本発明は、前述の方法を実施するための試
験用キットも含む。
【００１２】近年、内部標準核酸セグメントとターゲッ
ト配列の共-増幅を記載した国際特許出願WO91/02817号
が開示された。この出願で使用した方法は、競合反応で
はない。本出願と対照的に、この出願での定量化は、得
られたシグナルを測定し、次いで増幅した両方の配列の
間の比率を決定することにより実施する。本発明は、他
の方法の中でも、野生型（ターゲット核酸）と十分に限
定された（well-defined）変異株配列との間の競合が本
発明の本質的な部分であるため、この方法とは全く異な
っている。
【００１３】本発明の方法は、十分限定された変異株配
列の既知量を添加した、野生型のターゲット核酸の未知
の濃度を含む臨床サンプルから核酸を競合的に増幅する
原理に基づいている。
【００１４】さらに、ターゲット核酸と変異株配列の両
方の増幅を、各類プライマーがターゲット核酸及び変異
株配列に同一効率でハイブリダイズする２種のプライマ
ーを含む１つのプライマーセットで実施するのが好まし
い。
【００１５】この競合増幅は、固定量の（臨床）サンプ
ルと変異株配列の系列希釈（dilution series）、また
はその反対（臨床サンプルの系列希釈と固定量の変異株
配列）で実施する。
【００１６】添加した配列中の突然変異は、野生型及び
変異した増幅配列と、野生型及び突然変異に特異的に標
識したオリゴヌクレオチドの各々を識別検出に必要であ
る。
【００１７】このことは、競合増幅後、サンプルを任意
の配列に特異的な検出法、例えば： １．ゲル電気泳動、ブロッティング、ハイブリダイゼー
ション、オートラジオグラフィー、スキャニング； ２．スロット-ブロッティング、ハイブリダイゼーショ
ン、オートラジオグラフィー、スキャニング； ３．非-捕獲（non-capture）ビーズベース分析、カウン
ティング；及び ４．捕獲（capture）ビーズベース分析、カウンティン
グ を使用するin duplo分析される。
【００１８】野生型及び変異した配列の当初の割合は、
野生型及び変異したシグナルの割合から知見される。
１：１の割合で且つ増幅効率が等しい場合、野生型及び
変異した両方の配列のシグナルは、50%減少する。従っ
て、変異した核酸の希釈物で、シグナルが50%減少する
場合、変異した核酸の量は、（臨床）サンプル中の野生
型核酸の量と等しい。
【００１９】配列中に、１個の塩基の突然変異（例え
ば、Ａ→Ｇ転移）を含む十分に限定した変異株配列を使
用すると、たった１種類の制限酵素、即ち、リボザイム
を、ターゲット核酸と変異株配列との識別に使用するだ
けである。
【００２０】続いて、ターゲット核酸を定量するのに、
たった１回の分析（例えば、１回のゲルシステム）が必
要なだけである。
【００２１】この方法による分析に好適なサンプルは、
ヒトまたは非-ヒト由来であってもよい。サンプルは、
培養したサンプル（例えば、単核細胞）から誘導して
も、または切開した組織から単離してもよい。血液及び
血漿並びに、脳髄液（brain-liquor）、尿なども試験サ
ンプル材料として使用し得る。
【００２２】例えば、試験サンプルが、本発明により定
量されるべきターゲットウイルスを含む血液である場
合、ウイルスの核酸は、試験サンプルから抽出し得る。
本発明による非常に迅速、単純且つ再現性のある方法を
得るために、十分に限定した変異株配列を、抽出工程で
干渉することなく、ターゲット核酸抽出の前、最中また
はその後に添加し得る。続いて、抽出工程の直後に本発
明の競合増幅及び鑑別検出を実施し得る。
【００２３】その高い感度、速度、再現性及び正確さに
より、本発明の方法は、病気に罹患していると思われる
患者から得られた試験サンプル中の、ＡＩＤＳ-ウイル
スまたは肝炎ウイルス様ウイルスなどの量を正確に定量
するのに使用し得る。
【００２４】例えば、患者に適用すべき薬物の用量を知
るために、ウイルスまたは他の病気を引き起こす病因の
正確な量を、病気の種々の段階で知ることが非常に重要
である。
【００２５】本発明の試験用キットは、その最も単純な
態様で、所望の増幅反応を実施するために、十分に限定
された変異株配列及び適当なオリゴヌクレオチド、即
ち、プライマー/プライマー対及び標識配列またはリボ
ザイムを提供する。
【００２６】さらに、増幅反応を実施するために試験用
キットに適当な酵素を供給してもよい。
【００２７】本発明の方法は、以下の実施例により説明
されよう。
【００２８】
【実施例】実施例１ 定量的ＮＡＳＢＡ（商標）の原則を証明するために、in
vitro生成した野生型（ＷＴ）及び変異株（Ｑ）ＲＮＡ
を使用した。in vitroＲＮＡ合成に使用したプラスミド
は、pGEM3中またはpGEM4（Promega製）中にクローン化
した部分Fok１制限酵素消化物（HIV-１hxb2配列のヌク
レオチド1186-2638，Ratnerら.,1987）から得られたHIV
-１配列の1416bpフラグメントを含んでいた。制限部位P
stＩ（HIV-１ hxb2上の位置1418）とSphＩ（HIV-１ hxb
2上の位置1446）との間の配列は、ＷＴ中のＧＡＡＴＧ
ＧＧＡＴＡＧＡＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＡＴＧ（OT
309）からＱ ＲＮＡ中のＧＡＣＡＧＴＧＴＡＧＡＴＡＧ
ＡＴＧＡＣＡＧＴＣＧＣＡＴＧ（OT321）に変化した。i
n vitroＲＮＡを、T7 ＲＮＡポリメラーゼまたはSP6 Ｒ
ＮＡポリメラーゼ（Sambrookら.,1989）のいずれかを用
いてこれらの構築物から生成した。
【００２９】反応混合物をDNaseで処理し、プラスミド
ＤＮＡを除去した。フェノール抽出及びエタノール沈澱
後、リボソーマルＲＮＡの既知量のキャリブレーション
（calibration series）との比較により、回収したＲＮ
Ａをエチジウムブロミドで染色したアガロースゲル上で
定量した。ＲＮＡ溶液を所望の濃度に希釈し、欧州特許
第0329,822号に記載の如くＮＡＳＢＡ法（商標）により
増幅するためにインプットとして使用した。増幅に使用
したプライマーは、142nt（位置1357〜1499）のHIV-1hx
b2配列に相補であるＲＮＡ分子を生成するOT 270（ＡＡ
ＴＴＣＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＧＴ
ＧＣＴＡＴＧＴＣＡＣＴＴＣＣＣＣＴＴＧＧＴＴＣＴＣ
ＴＣＡ，Ｐ１）及びOT 271（ＡＧＴＧＧＧＧＧＧＡＣＡ
ＴＣＡＡＧＣＡＧＣＣＡＴＧＣＡＡＡ，Ｐ２）であっ
た。各増幅物10μlの検出を、バキュームブロット装置
（Pharmacia製）を使用してZeta-Probe（Biorad製）上
にブロットした３%NuSieve、１%アガロースゲル（Sambr
ookら.,1989）上でin duplo電気泳動により実施し、次
いで上述のSphＩとPst１部位との間のＷＴまたはＱＲＮ
Ａ配列のいずれかに特異的な32Ｐ標識したオリゴヌクレ
オチドにハイブリダイズした。Ｘ-線フィルム（Kodak
製）への暴露時間は、30分〜３日とした。
【００３０】バンドのシグナルを定量化するために、フ
ィルムをLKB Ultroscan XLデンシトメーターでスキャン
した。ＷＴ及びＱ ＲＮＡの両方のターゲット分子数を
表１に列記した。
【００３１】
【表１】
【００３２】対照として、ＷＴ ＲＮＡまたはＱ ＲＮＡ
だけのの増幅を実施した。競合的ＮＡＳＢＡ法（商標）
の結果を、図１に示した。ＷＴ及びＱ ＲＮＡの両方の5
0%減少の平均値に於いて、インプット分子数はＱ ＲＮ
Ａ約103分子であり、これはＷＴ ＲＮＡ分子数と等しか
った。
【００３３】Ｑ及びＷＴ ＲＮＡの両方の50%減少の平均
値を検出するために使用した式は、 log(conc.W.T.)＝{log(［Ｑ］50% Sig Ｑ)＋log(［Ｑ］50% Sig．WT)}/２ ［式中、（［Ｑ］50% Sig.Ｑ）は、Ｑ ＲＮＡに特異的
なOT 321を使用するシグナルが、Ｑ ＲＮＡだけが増幅
されるときに得られたシグナルのたった50%である時の
Ｑ ＲＮＡ分子数であり、及び（［Ｑ］50% Sig.WT）
は、ＷＴ ＲＮＡに特異的なOT 309を使用するシグナル
が、ＷＴ ＲＮＡだけが増幅されるときに得られたシグ
ナルのたった50%である時のＱ ＲＮＡ分子数である。］
であった。
【００３４】実施例２ インプットＲＮＡ分子が表２の通りである以外には、実
施例１を繰り返した。
【００３５】
【表２】
【００３６】図２に表された結果より、以下の式： log.（conc.WT）＝｛log(［Ｑ］Sig Ｑ 50%)＋log(［Ｑ］ Sig.WT 50%)｝/２ を使用すると、ＷＴ ＲＮＡのインプット分子数は、104
であった。
【００３７】実施例３ インプットＲＮＡ分子が表３の通りである以外には、実
施例１を繰り返した。
【００３８】
【表３】
【００３９】図３に示された結果より、式： log（conc.W.T.）＝｛log(［Ｑ］Sig Ｑ 50%)＋log(［Ｑ］Sig. WT 50%)｝/２ を使用すると、ＷＴ ＲＮＡのインプット分子数は6.5×
104分子であった。
【００４０】実施例４ 定量的なＮＡＳＢＡ（商標）を、HIV-１感染固体の血漿
から単離した核酸に適用した。血漿-陽性のHIV-１感染
固体の１ml血漿サンプルを使用して、核酸を単離した
（Boomら.,1990）。
【００４１】最終的に核酸を、水100μl中に回収した。
インプットＲＮＡ分子が以下の表４に列記した通りであ
った以外には、実施例１の通りに増幅させた。
【００４２】
【表４】
【００４３】図４、５及び６に表された結果は各々、患
者１、２及び３に対応する。
【００４４】結果から、患者１、２及び３のW.T.ＲＮＡ
分子の数は、式： log（conc.WT）＝｛log(［Ｑ］Sig Ｑ 50%)＋log(［Ｑ］Sig.WT 50%)｝/２ を使用すると、２μl核酸溶液中、各々4.5×103、2.1×
103及び1.2×104であった。
【００４５】実施例５ インプットＲＮＡ分子を表５の通りにし、ＮＡＳＢＡ増
幅したＷＴ-及びＱ−ＲＮＡの検出を、以下に記載の方
法により実施した以外には、実施例１を繰り返した。
【００４６】５μlＮＡＳＢＡ反応の増幅したＷＴ-及び
Ｑ-ＲＮＡを、中間体としてbiotynylatedオリゴヌクレ
オチドOT 700（５’ビオチン−ＴＧＴＴＡＡＡＡＧＡＧ
ＡＣＣＡＴＣＡＡＴＧＡＧＧＡ ３’）で、ストレプト
バジン（streptvadin）被覆したマグネチックダイナビ
ーズ（dynabeads：Dynal製）上で捕獲した。捕獲ハイブ
リダイゼーション方法は、100μlハイブリダイゼーショ
ン緩衝液II（５×SSPE，0.1% SDS，0.1% ミルクパウダ
ー，10μg/ml変性salm-sperm ＤＮＡ）中で45℃、30分
実施する。この段階後、磁石を使用して、ビーズを２×
SSC、0.1%ＢＳＡ中で洗浄し、反応試験管またはミクロ
滴定プレートにビーズを保持した。
【００４７】続いて、セイヨウワサビペルオキシダーゼ
（HRP）で標識したＲＮＡを、記載のPstＩ及びSphＩ部
位の間のＷＴ-またはＱ-ＲＮＡ配列に特異的なオリゴヌ
クレオチドに、緩衝液II中、45℃30分ハイブリダイズし
た。
【００４８】ハイブリダイズしていないHRP-オリゴヌク
レオチドを、上記方法と同一方法を使用して洗浄した。
ビーズ上に保持されたHRPの検出は、100μl基質溶液
（0.45mM TMB.HCl・H2O，0.5mM CTAB，7.65g/l Emdex，2
7mM クエン酸ナトリウム・2H2O，22.1mM クエン酸・H2O，
2.25mM ウレア-ペルオキシド及び5.35mM 2-クロロ-アセ
トアミド）を添加することにより実施した。
【００４９】反応は、適当な時点で、50μl 250mM蓚酸
で停止した。無色から黄色への基質の転換量を、Organo
n Teknika 510ミクロプレートリーダーで450nmでの吸光
度を測定することにより決定した。ＷＴ-及びＱ-標識の
両方Ａ450の値を、記載の如く分析した（図７）。
【００５０】図７の結果より、式： log（conc.WT）＝｛log(［Ｑ］Sig Ｑ 50%)＋log(［Ｑ］Sig.WT 50%)｝/２ を使用すると、ＷＴ-ＲＮＡのインプット分子数は、2.7
×102分子であった。
【００５１】
【表５】
【００５２】
【参照文献】Boom R，Sol CFA，Salimans MMM，Jansen
CL，Werthiem-van Dillen PME及びVander Noordaa J． Rapid and simple method for purification of nuclei
c acids． J．Clin．Micribiol．1990；28：495−503． Ratner L，Fisher A，Jagodzinske HH，Mitsuya H.，Li
on RS，Gallo RC及びWong-staal F． Complete nucleotide sequence of functional clones
of the AIDS virus． AIDS Res．Hum．Retroviruses 1987；3：57-69． Sambrook J，Maniatis T，Fritsch E． Molecular cloning．A laboratory manual，第2版． Cold Spring Harbor laboratories，Cold Spring Harbo
r，New York，1989．
【図面の簡単な説明】
【図１】インプット分子数10ｅ3の場合の定量的ＮＡＳ
ＢＡ法の結果を示す図である。
【図２】インプット分子数10ｅ4の場合の定量的ＮＡＳ
ＢＡ法の結果を示す図である。
【図３】インプット分子数10ｅ5の場合の定量的ＮＡＳ
ＢＡ法の結果を示す図である。
【図４】患者１の定量的ＮＡＳＢＡ法の結果を示す図で
ある。
【図５】患者２の定量的ＮＡＳＢＡ法の結果を示す図で
ある。
【図６】患者３の定量的ＮＡＳＢＡ法の結果を示す図で
ある。
【図７】ビーズ分析によるＷＴ-ＲＮＡの定量化の結果
を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 テイム・キーフイツツ オランダ国、5262・イツクス・ベー・フー ト、フアン・ミールトストラート・20 (72)発明者 ペーテル・フランクリン・レンス オランダ国、5237・エー・ウエー・デン・ ボスハ、ヘネテイーカーデ・９

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ターゲット核酸と識別される、十分に限
    定された変異株配列を含む対応する核酸の公知の数の分
    子を添加し、続いて、核酸の競合増幅反応を実施し、次
    いで鑑別検出により増幅した核酸を定量化することを含
    む、試験サンプル中のターゲット核酸を定量化する方
    法。
  2. 【請求項２】 ターゲット核酸がリボ核酸であることを
    特徴とする請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 公知の数の分子がＲＮＡ分子であること
    を特徴とする請求項２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 ターゲット核酸と変異株配列にハイブリ
    ダイズし得る２種類の標識配列を使用することにより鑑
    別検出を実施することを特徴とする請求項１〜３のいず
    れか１項に記載の方法。
  5. 【請求項５】 ターゲット核酸並びに変異株配列の両方
    にハイブリダイズし得る１種類の標識配列を使用するこ
    とにより鑑別検出を実施することを特徴とする請求項１
    〜３のいずれか１項に記載の方法。
  6. 【請求項６】 変異株配列またはターゲット核酸を切断
    し得る１種類のリボザイムを使用することにより鑑別検
    出を実施することを特徴とする請求項１〜３のいずれか
    １項に記載の方法。
  7. 【請求項７】 十分に限定された変異株配列及び適当な
    オリゴヌクレオチドを含む請求項１に記載の方法を実施
    するための試験用キット。
  8. 【請求項８】 十分に限定された変異株配列が、 ＧＡＣＡＧＴＧＴＡＧＡＴＡＧＡＴＧＡＣＡＧＴＣＧＣ
    ＡＴＧ である請求項７に記載の試験用キット。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5856088A (en) * 1989-07-11 1999-01-05 Gen-Probe Incorporated Detection of human immunodeficiency virus type 1
US6589734B1 (en) 1989-07-11 2003-07-08 Gen-Probe Incorporated Detection of HIV
EP0586112A3 (en) * 1992-08-14 1994-09-14 Pharma Gen S A Control of pcr mediated detection of micro-organisms
ZA936015B (en) * 1992-08-24 1994-03-10 Akzo Nv Elimination of false negatives in nuleic acid detection.
AU686616B2 (en) 1993-03-26 1998-02-12 Gen-Probe Incorporated Detection of human immunodeficiency virus type 1
US5457027A (en) * 1993-05-05 1995-10-10 Becton, Dickinson And Company Internal controls for isothermal nucleic acid amplification reactions
US5470723A (en) 1993-05-05 1995-11-28 Becton, Dickinson And Company Detection of mycobacteria by multiplex nucleic acid amplification
US5837501A (en) * 1993-07-09 1998-11-17 Akzo Nobel N.V. Nucleic acid quantitation by co-amplification of target with multiple internal controls
ES2131699T3 (es) * 1993-07-09 1999-08-01 Akzo Nobel Nv Procedimiento mejorado de cuantificacion del acido nucleico.
US5710029A (en) * 1995-06-07 1998-01-20 Gen-Probe Incorporated Methods for determining pre-amplification levels of a nucleic acid target sequence from post-amplification levels of product
CA2223241C (en) * 1995-06-07 2009-11-17 Gen-Probe Incorporated Methods and kits for determining pre-amplification levels of a nucleic acid target sequence from post-amplification levels of product
US5705365A (en) * 1995-06-07 1998-01-06 Gen-Probe Incorporated Kits for determining pre-amplification levels of a nucleic acid target sequence from post-amplification levels of product
US5677124A (en) * 1996-07-03 1997-10-14 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant viral RNA standards
US5939262A (en) * 1996-07-03 1999-08-17 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant RNA preparation and utilization
US6121023A (en) * 1998-01-22 2000-09-19 Akzo Nobel N.V. Isothermal transcription based assay for the detection and quantification of the chemokine rantes
US6365346B1 (en) * 1998-02-18 2002-04-02 Dade Behring Inc. Quantitative determination of nucleic acid amplification products
DE69940903D1 (de) * 1998-03-27 2009-07-02 Johnson & Johnson Res Pty Ltd Diagnostische methoden basierend auf katalytischen nukleinsäuren
DE19915141C2 (de) * 1999-03-26 2002-11-21 Artus Ges Fuer Molekularbiolog Detektion von Nucleinsäure-Amplifikaten
WO2001007661A2 (en) 1999-07-23 2001-02-01 Gen-Probe Incorporated Polynucleotide amplification method
US6440706B1 (en) 1999-08-02 2002-08-27 Johns Hopkins University Digital amplification
US6783934B1 (en) 2000-05-01 2004-08-31 Cepheid, Inc. Methods for quantitative analysis of nucleic acid amplification reaction
WO2002034951A2 (en) 2000-10-23 2002-05-02 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detecting human immunodeficiency virus 2 (hiv-2)
US20030027135A1 (en) 2001-03-02 2003-02-06 Ecker David J. Method for rapid detection and identification of bioagents
US7666588B2 (en) 2001-03-02 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA and characterization of mitochondrial DNA heteroplasmy
US20040121335A1 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Ecker David J. Methods for rapid detection and identification of bioagents associated with host versus graft and graft versus host rejections
US7226739B2 (en) 2001-03-02 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc Methods for rapid detection and identification of bioagents in epidemiological and forensic investigations
US7718354B2 (en) 2001-03-02 2010-05-18 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US8073627B2 (en) 2001-06-26 2011-12-06 Ibis Biosciences, Inc. System for indentification of pathogens
US7217510B2 (en) 2001-06-26 2007-05-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for providing bacterial bioagent characterizing information
US20030027150A1 (en) * 2001-08-03 2003-02-06 Katz David A. Method of haplotyping and kit therefor
EP2292801B1 (en) 2002-06-14 2018-08-08 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detecting hepatitis b virus
US7115374B2 (en) 2002-10-16 2006-10-03 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detecting West Nile virus
CA2508726A1 (en) 2002-12-06 2004-07-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
JP2005065687A (ja) 2003-01-23 2005-03-17 National Institute Of Advanced Industrial & Technology β１，３−Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン転移酵素タンパク質及びそれをコードする核酸、並びにそれを用いた癌化検定方法
US8046171B2 (en) 2003-04-18 2011-10-25 Ibis Biosciences, Inc. Methods and apparatus for genetic evaluation
US8057993B2 (en) 2003-04-26 2011-11-15 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of coronaviruses
US8158354B2 (en) 2003-05-13 2012-04-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
US7964343B2 (en) 2003-05-13 2011-06-21 Ibis Biosciences, Inc. Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
US8097416B2 (en) 2003-09-11 2012-01-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US20120122099A1 (en) 2003-09-11 2012-05-17 Rangarajan Sampath Compositions for use in identification of bacteria
US8546082B2 (en) 2003-09-11 2013-10-01 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8163895B2 (en) 2003-12-05 2012-04-24 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of orthopoxviruses
DE602004028862D1 (de) 2003-12-19 2010-10-07 Gen Probe Inc Der nukleinsäuren von hiv-1 und hiv-2
US7666592B2 (en) 2004-02-18 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for concurrent identification and quantification of an unknown bioagent
US8119336B2 (en) 2004-03-03 2012-02-21 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of alphaviruses
CA2567839C (en) 2004-05-24 2011-06-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Mass spectrometry with selective ion filtration by digital thresholding
US20050266411A1 (en) 2004-05-25 2005-12-01 Hofstadler Steven A Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA
US7811753B2 (en) 2004-07-14 2010-10-12 Ibis Biosciences, Inc. Methods for repairing degraded DNA
US20060223080A1 (en) 2004-11-09 2006-10-05 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detecting group a streptococci
WO2006086438A2 (en) 2005-02-07 2006-08-17 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detecting group b streptococci
DK1853706T3 (da) 2005-02-18 2011-03-07 Gen Probe Inc Prøve-fremstillingsfremgangsmåde med et alkali-chock
US8084207B2 (en) 2005-03-03 2011-12-27 Ibis Bioscience, Inc. Compositions for use in identification of papillomavirus
CA2600184A1 (en) 2005-03-03 2006-09-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for use in identification of adventitious viruses
CA2599576C (en) 2005-03-10 2015-09-15 Gen-Probe Incorporated Systems and methods to perform assays for detecting or quantifying analytes within samples
US8026084B2 (en) 2005-07-21 2011-09-27 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid identification and quantitation of nucleic acid variants
US7831417B2 (en) 2005-11-14 2010-11-09 Gen-Probe Incorporated Parametric calibration method
JP5420412B2 (ja) 2006-09-14 2014-02-19 アイビス バイオサイエンシズ インコーポレイティッド 病原体の同定のための標的全ゲノム増幅方法
JP5680304B2 (ja) 2007-02-23 2015-03-04 アイビス バイオサイエンシズ インコーポレイティッド 迅速な法医学的ｄｎａ分析法
WO2008151023A2 (en) 2007-06-01 2008-12-11 Ibis Biosciences, Inc. Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids
KR101414714B1 (ko) 2007-11-20 2014-07-03 삼성전자주식회사 경쟁적 증폭 반응을 이용하여 표적 핵산을 검출하는 방법
EP2281070B1 (en) 2008-04-21 2015-01-21 Gen-Probe Incorporated Method for detecting chikungunya virus
EP2347254A2 (en) 2008-09-16 2011-07-27 Ibis Biosciences, Inc. Sample processing units, systems, and related methods
EP2344893B1 (en) 2008-09-16 2014-10-15 Ibis Biosciences, Inc. Microplate handling systems and methods
EP2349549B1 (en) 2008-09-16 2012-07-18 Ibis Biosciences, Inc. Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, and system
US8158936B2 (en) 2009-02-12 2012-04-17 Ibis Biosciences, Inc. Ionization probe assemblies
WO2011008971A1 (en) 2009-07-17 2011-01-20 Ibis Biosciences, Inc. Lift and mount apparatus
WO2011008972A1 (en) 2009-07-17 2011-01-20 Ibis Biosciences, Inc. Systems for bioagent identification
US9890408B2 (en) 2009-10-15 2018-02-13 Ibis Biosciences, Inc. Multiple displacement amplification
EP2612678B1 (en) 2010-09-02 2018-01-17 Tokyo Institute of Technology Screening method for antidiabetic agent using newly identified insulin secretion regulation factor
EP2877952B1 (en) 2012-07-27 2023-04-12 Gen-Probe Incorporated Dual reference calibration method and system for quantifying polynucleotides
EP2971090B1 (en) 2013-03-15 2020-05-06 Gen-Probe Incorporated Calibration method, apparatus and computer program product
EP3670664B1 (en) 2014-02-28 2022-09-07 Gen-Probe Incorporated Method of isolating nucleic acid from specimens in liquid-based cytology preservatives containing formaldehyde
DE102015203606C5 (de) 2014-02-28 2023-12-21 Gen-Probe Incorporated Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäure von zytologischen Proben in flüssigen Konservierungsmitteln, die Formaldehyd enthalten
EP4212634A1 (en) 2017-03-24 2023-07-19 Gen-Probe Incorporated Compositions and methods for detection of flu b in samples
WO2020005584A1 (en) 2018-06-28 2020-01-02 Gen-Probe Incorporated Sample preparation method and system
AU2020402029B2 (en) 2019-12-09 2022-12-15 Gen-Probe Incorporated Quantification of polynucleotide analytes from dried samples
WO2024073659A1 (en) 2022-09-30 2024-04-04 Biotheranostics, Inc. Biomarker assay to select breast cancer therapy

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1340807C (en) * 1988-02-24 1999-11-02 Lawrence T. Malek Nucleic acid amplification process
BR8907830A (pt) * 1988-12-16 1991-10-22 Siska Diagnostics Inc Processo para preparar uma dna de filamento duplo que codifica uma sequencia que corresponde a uma sequencia objetivada de acido nucleico e processo util para deteccao de pelo menos uma sequencia de acido nucleico objetivada especifica
WO1991002815A1 (de) * 1989-08-19 1991-03-07 Diagen Institut Für Molekularbiologische Diagnostik Gmbh Verfahren und vorrichtung zur trennung und detektion von komponenten eines stoffgemisches durch temperaturgradienten-gelelektrophorese
US5219727A (en) * 1989-08-21 1993-06-15 Hoffmann-Laroche Inc. Quantitation of nucleic acids using the polymerase chain reaction
US5213961A (en) * 1989-08-31 1993-05-25 Brigham And Women's Hospital Accurate quantitation of RNA and DNA by competetitive polymerase chain reaction

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