JPH0460585B2 - - Google Patents
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Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規な吸着剤およびその製造方法に
関する。 本発明によつて提供される吸着剤はニコチン性
アセチルコリンレセプターに対するヒト抗体を特
異的に吸着しうる。従つて、本発明によつて提供
される吸着剤は、神経筋接合部のシナプス後膜上
に存在するニコチン性アセチルコリンレセプター
に対する自己抗体に原因する神経筋伝達障害が病
態の中心であるとされている重症筋無力症の治療
において有用である。 〔従来の技術〕 ネイチヤー(Nature)、第299巻、第793〜797
頁(1982年)には、シビレエイの1種であるトル
ペド・カリホルニカ(Torpedo californica)の
電気器官から取得されるニコチン性アセチルコリ
ンレセプターのα−サブユニツト前駆体が461個
のアミノ酸から構成されており、その一次構造を
解明し得たことが報告されている。この報告によ
れば、該α−サブユニツト前駆体の一次構造にお
ける第183〜200位のアミノ酸配列は式−Gly−
Trp−Lys−His−Trp−Val−Tyr−Tyr−Thr
−Cys−Cys−Pro−Asp−Thr−Pro−Tyr−Leu
−Asp−で示されている。 プロシ−デイングス・オブ・ザ・ナシヨナル・
アカデミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユ
ナイテツド・ステーツ・オブ・アメリカ
(Proceedings of the National Academy of
Sciences of the United States of America)、
第84巻、第3633〜3637頁(1987年)には、トルペ
ド・カリホルニカの電気器官から取得されるニコ
チン性アセチルコリンレセプターのα−サブユニ
ツトの一次構造における第182〜198位のアミノ酸
配列に対応するペプチドが合成され、このペプチ
ドをアガロース系担体〔CNBr−活性化セフアロ
ースCL−4B(CNBr−activated Sepharose CL
−4B)〕に固定化して形成させた吸着剤が、ニコ
チン性アセチルコリンレセプターに対するマウス
抗体およびウサギ抗体と結合することが報告され
ている。バイオケミカル・アンド・バイオフイジ
カル・リサーチ・コミユニケーシヨンズ
(Biochemical and Biophysical Research
Communications)、第135巻、第82〜89頁(1986
年)には、トルペド・カリホルニカから取得され
たニコチン性アセチルコリンレセプターのα−サ
ブユニツトをプロテアーゼで分解することによつ
て該α−サブユニツトの一次構造における第153
〜350位のアミノ酸配列に対応すると考えられる
分子量18キロドルトンのフラグメントが得られ、
このフラグメントがニコチン性アセチルコリンレ
セプターのリガンド結合部位に対するマウスモノ
クローン抗体およびα−ブンガロトキシンと結合
することが報告されている。 〔発明が解決しようとする課題〕 重症筋無力症の治療において重症筋無力症の主
たる原因物質であるとされているニコチン性アセ
チルコリンレセプターに対するヒト自己抗体を除
去する手段の確立が望まれているが、その実用的
な手段はまだ確立されていないのが実状である。 しかして、本発明の目的は、ニコチン性アセチ
ルコリンレセプターに対するヒト抗体を有効に吸
着する能力を有し、かつ効率的に製造される新規
な吸着剤およびその製造方法を提供することにあ
る。 〔課題を解決するための手段〕 本発明によれば、上記の目的は、一般式 H−X−Gly−Trp−Lys−His−Trp−Val−
Tyr−Tyr−Thr−Cys−Cys−Pro−Asp−Thr
−Pro−Tyr−Leu−Asp−Y−Z () 〔式中、XおよびYは一方が単結合を表わす
か、またはAsp、Glu、Lysおよび式
関する。 本発明によつて提供される吸着剤はニコチン性
アセチルコリンレセプターに対するヒト抗体を特
異的に吸着しうる。従つて、本発明によつて提供
される吸着剤は、神経筋接合部のシナプス後膜上
に存在するニコチン性アセチルコリンレセプター
に対する自己抗体に原因する神経筋伝達障害が病
態の中心であるとされている重症筋無力症の治療
において有用である。 〔従来の技術〕 ネイチヤー(Nature)、第299巻、第793〜797
頁(1982年)には、シビレエイの1種であるトル
ペド・カリホルニカ(Torpedo californica)の
電気器官から取得されるニコチン性アセチルコリ
ンレセプターのα−サブユニツト前駆体が461個
のアミノ酸から構成されており、その一次構造を
解明し得たことが報告されている。この報告によ
れば、該α−サブユニツト前駆体の一次構造にお
ける第183〜200位のアミノ酸配列は式−Gly−
Trp−Lys−His−Trp−Val−Tyr−Tyr−Thr
−Cys−Cys−Pro−Asp−Thr−Pro−Tyr−Leu
−Asp−で示されている。 プロシ−デイングス・オブ・ザ・ナシヨナル・
アカデミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユ
ナイテツド・ステーツ・オブ・アメリカ
(Proceedings of the National Academy of
Sciences of the United States of America)、
第84巻、第3633〜3637頁(1987年)には、トルペ
ド・カリホルニカの電気器官から取得されるニコ
チン性アセチルコリンレセプターのα−サブユニ
ツトの一次構造における第182〜198位のアミノ酸
配列に対応するペプチドが合成され、このペプチ
ドをアガロース系担体〔CNBr−活性化セフアロ
ースCL−4B(CNBr−activated Sepharose CL
−4B)〕に固定化して形成させた吸着剤が、ニコ
チン性アセチルコリンレセプターに対するマウス
抗体およびウサギ抗体と結合することが報告され
ている。バイオケミカル・アンド・バイオフイジ
カル・リサーチ・コミユニケーシヨンズ
(Biochemical and Biophysical Research
Communications)、第135巻、第82〜89頁(1986
年)には、トルペド・カリホルニカから取得され
たニコチン性アセチルコリンレセプターのα−サ
ブユニツトをプロテアーゼで分解することによつ
て該α−サブユニツトの一次構造における第153
〜350位のアミノ酸配列に対応すると考えられる
分子量18キロドルトンのフラグメントが得られ、
このフラグメントがニコチン性アセチルコリンレ
セプターのリガンド結合部位に対するマウスモノ
クローン抗体およびα−ブンガロトキシンと結合
することが報告されている。 〔発明が解決しようとする課題〕 重症筋無力症の治療において重症筋無力症の主
たる原因物質であるとされているニコチン性アセ
チルコリンレセプターに対するヒト自己抗体を除
去する手段の確立が望まれているが、その実用的
な手段はまだ確立されていないのが実状である。 しかして、本発明の目的は、ニコチン性アセチ
ルコリンレセプターに対するヒト抗体を有効に吸
着する能力を有し、かつ効率的に製造される新規
な吸着剤およびその製造方法を提供することにあ
る。 〔課題を解決するための手段〕 本発明によれば、上記の目的は、一般式 H−X−Gly−Trp−Lys−His−Trp−Val−
Tyr−Tyr−Thr−Cys−Cys−Pro−Asp−Thr
−Pro−Tyr−Leu−Asp−Y−Z () 〔式中、XおよびYは一方が単結合を表わす
か、またはAsp、Glu、Lysおよび式
【式】(式中、nは1〜17の整数
を表わす。)で示される二価の基からなる群から
選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれる
少なくとも1種のアミノ酸残基の2〜10個がペプ
チド結合によつて形成するペプチド残基を表わ
し、他方がAsp、Glu、Lysおよび式
選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれる
少なくとも1種のアミノ酸残基の2〜10個がペプ
チド結合によつて形成するペプチド残基を表わ
し、他方がAsp、Glu、Lysおよび式
【式】(式中、nは前記定義のと
おりである。)で示される二価の基からなる群か
ら選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれ
る少なくとも1種のアミノ酸残基の2〜10個がペ
プチド結合によつて形成するペプチド残基を表わ
し、Zは水酸基またはアミノ基を表わし、上記ア
ミノ酸配列のCys−Cysにおいて各々のCysが有
するメルカプト基は相互に結合してジスルフイド
結合を形成していてもよい。〕 で示されるペプチド〔以下、これをペプチド
()と称することがある〕を担体上に固定化し
てなるニコチン性アセチルコリンレセプターに対
する抗体用の吸着剤を提供することによつて達成
され、またペプチド()を担体上に固定化する
ことを特徴とする前記吸着剤の製造方法を提供す
ることによつて達成される。 本明細書において各種アミノ酸残基を慣例の略
号で記述する。略号は本発明の技術分野において
よく知られたものであり、その例を以下に列記す
る。 Asp:L−アスパラギン酸残基 Cys:L−システイン残基 Glu:L−グルタミン酸残基 Gly:グリシン残基 His:L−ヒスチジン残基 Leu:L−ロイシン残基 Lys:L−リジン残基 Pro:L−プロリン残基 Thr:L−トレオニン残基 Trp:L−トリプトフアン残基 Tyr:L−チロシン残基 Val:L−バリン残基 また本明細書においては、常法に従つてアミノ
酸配列をN末端のアミノ酸が左側に位置し、C末
端のアミノ酸が右側に位置するように記述する。 ペプチド()は担体上に効率的に、すなわち
高収率で固定化することができる。担体上に固定
化されたペプチド()は、血液、血漿、血清な
どの体液中のニコチン性アセチルコリンレセプタ
ーに対するヒト抗体を吸着する能力を発現する。 ペプチド()が有する一般式()における
XおよびYは上記のとおり定義されるが、Xおよ
びYの両方が単結合であるペプチドならびにXお
よびYのいずれかが上記で定義されたものと異な
るアミノ酸残基またはペプチド残基であるペプチ
ドは、担体上に効率よく固定化されない場合があ
るだけでなく、担体上に固定化された場合にニコ
チン性アセチルコリンレセプターに対するヒト抗
体を吸着する能力が充分には発現しない場合があ
る。ペプチド()が有する一般式()におけ
るXおよびYが表わすペプチド残基としては、例
えば、次のペプチド残基を挙げることができる。 −Asp−Asp−,−Glu−Glu−,−Lys−Lys−,
−Gly−Gly−,
ら選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれ
る少なくとも1種のアミノ酸残基の2〜10個がペ
プチド結合によつて形成するペプチド残基を表わ
し、Zは水酸基またはアミノ基を表わし、上記ア
ミノ酸配列のCys−Cysにおいて各々のCysが有
するメルカプト基は相互に結合してジスルフイド
結合を形成していてもよい。〕 で示されるペプチド〔以下、これをペプチド
()と称することがある〕を担体上に固定化し
てなるニコチン性アセチルコリンレセプターに対
する抗体用の吸着剤を提供することによつて達成
され、またペプチド()を担体上に固定化する
ことを特徴とする前記吸着剤の製造方法を提供す
ることによつて達成される。 本明細書において各種アミノ酸残基を慣例の略
号で記述する。略号は本発明の技術分野において
よく知られたものであり、その例を以下に列記す
る。 Asp:L−アスパラギン酸残基 Cys:L−システイン残基 Glu:L−グルタミン酸残基 Gly:グリシン残基 His:L−ヒスチジン残基 Leu:L−ロイシン残基 Lys:L−リジン残基 Pro:L−プロリン残基 Thr:L−トレオニン残基 Trp:L−トリプトフアン残基 Tyr:L−チロシン残基 Val:L−バリン残基 また本明細書においては、常法に従つてアミノ
酸配列をN末端のアミノ酸が左側に位置し、C末
端のアミノ酸が右側に位置するように記述する。 ペプチド()は担体上に効率的に、すなわち
高収率で固定化することができる。担体上に固定
化されたペプチド()は、血液、血漿、血清な
どの体液中のニコチン性アセチルコリンレセプタ
ーに対するヒト抗体を吸着する能力を発現する。 ペプチド()が有する一般式()における
XおよびYは上記のとおり定義されるが、Xおよ
びYの両方が単結合であるペプチドならびにXお
よびYのいずれかが上記で定義されたものと異な
るアミノ酸残基またはペプチド残基であるペプチ
ドは、担体上に効率よく固定化されない場合があ
るだけでなく、担体上に固定化された場合にニコ
チン性アセチルコリンレセプターに対するヒト抗
体を吸着する能力が充分には発現しない場合があ
る。ペプチド()が有する一般式()におけ
るXおよびYが表わすペプチド残基としては、例
えば、次のペプチド残基を挙げることができる。 −Asp−Asp−,−Glu−Glu−,−Lys−Lys−,
−Gly−Gly−,
【式】
【式】−Asp−Glu−,−Asp
−Gly−,−Glu−Asp−,−Glu−Lys−,−Lys−
Glu−,
Glu−,
【式】−Gly−Asp
−,−Gly−Lys−,
【式】
【式】
【式】
【式】−Lys−Lys−Gly
−,(−Asp)−5,(−Glu)−5,(−Lys)−5,(−
Gly)−5,
Gly)−5,
【式】
Gly−Lys−Glu−Glu−Asp−,
(−Asp)−10,(−Glu)−10,(−Lys)−10,(−G
ly)−10,
ly)−10,
【式】
以下、実施例により本発明を説明するが、本
発明は実施例により限定されるものではない。 合成例 1 式 で示されるペプチドをペプチド自動合成装置
〔米国アプライド・バイオシステムズ
(Applied Biosystems)社製モデル430A
(Model 430A)〕を用いて固相合成法により合
成した。4−〔N−(t−ブトキシカルボニル)
グリシルオキシメチル〕フエニルアセトアミド
メチル 基を0.78ミリモル/g(樹脂)で割合で有する
スチレン−ジビニルベンゼン共重合体〔スチレ
ンとジビニルベンゼンの構成比(モル比):99
対1〕からなる粒状樹脂〔米国アプライド・バ
イオシステムズ(Applied Biosystems)社製
PAMグリシン(Glycine),t−Boc−Gly〕を
0.64g用い、これに第1表に示す一連の操作に
従つて目的とするペプチドのN末端の方向に向
つてL−アスパラギン酸、L−システイン、グ
リシン、L−ヒスチジン、L−ロイシン、L−
リジン、L−プロリン、L−トレオニン、L−
トリプトフアン、L−チロシン、およびL−バ
リンから選ばれる対応するアミノ酸を順次結合
させた。縮合反応において上記のアミノ酸はそ
れぞれN−(t−ブトキシカルボニル)−O4−
ベンジル−L−アスパラギン酸無水物、N−
(t−ブトキシカルボニル)−S−(p−メトキ
シベンジル)−L−システイン無水物、N−(t
−ブトキシカルボニル)グリシン無水物、N〓
−(t−ブトキシカルボニル)−NIm−トシル−
L−ヒスチジン無水物、N−(t−ブトキシカ
ルボニル)−L−ロイシン無水物、N2−(t−
ブトキシカルボニル)−N6−ベンジルオキシカ
ルボニル−L−リジン無水物、N−(t−ブト
キシカルボニル)−L−プロリン無水物、N−
(t−ブトキシカルボニル)O3−ベンジル−L
−トレオニン無水物、N〓−(t−ブトキシカル
ボニル)−L−トリプトフアン無水物、N−(t
−ブトキシカルボニル)O4−ベンジル−L−
チロシン無水物およびN−(t−ブトキシカル
ボニル)−L−バリン無水物として用い、それ
らの使用量は基質に対して約2倍モル量とし
た。縮合反応は室温下で行い、反応時間は縮合
させるアミノ酸の種類によつて異なるが18〜30
分間の範囲内であつた。またN〓−(t−ブトキ
シカルボニル)−NIm−トシル−L−ヒスチジ
ン無水物を用いる縮合反応では変換率が低いた
めに、第1表に示す一連の操作を終了したの
ち、さらに第1表における工程4〜6の操作を
繰り返すことによつて縮合反応を再度実施し
た。
発明は実施例により限定されるものではない。 合成例 1 式 で示されるペプチドをペプチド自動合成装置
〔米国アプライド・バイオシステムズ
(Applied Biosystems)社製モデル430A
(Model 430A)〕を用いて固相合成法により合
成した。4−〔N−(t−ブトキシカルボニル)
グリシルオキシメチル〕フエニルアセトアミド
メチル 基を0.78ミリモル/g(樹脂)で割合で有する
スチレン−ジビニルベンゼン共重合体〔スチレ
ンとジビニルベンゼンの構成比(モル比):99
対1〕からなる粒状樹脂〔米国アプライド・バ
イオシステムズ(Applied Biosystems)社製
PAMグリシン(Glycine),t−Boc−Gly〕を
0.64g用い、これに第1表に示す一連の操作に
従つて目的とするペプチドのN末端の方向に向
つてL−アスパラギン酸、L−システイン、グ
リシン、L−ヒスチジン、L−ロイシン、L−
リジン、L−プロリン、L−トレオニン、L−
トリプトフアン、L−チロシン、およびL−バ
リンから選ばれる対応するアミノ酸を順次結合
させた。縮合反応において上記のアミノ酸はそ
れぞれN−(t−ブトキシカルボニル)−O4−
ベンジル−L−アスパラギン酸無水物、N−
(t−ブトキシカルボニル)−S−(p−メトキ
シベンジル)−L−システイン無水物、N−(t
−ブトキシカルボニル)グリシン無水物、N〓
−(t−ブトキシカルボニル)−NIm−トシル−
L−ヒスチジン無水物、N−(t−ブトキシカ
ルボニル)−L−ロイシン無水物、N2−(t−
ブトキシカルボニル)−N6−ベンジルオキシカ
ルボニル−L−リジン無水物、N−(t−ブト
キシカルボニル)−L−プロリン無水物、N−
(t−ブトキシカルボニル)O3−ベンジル−L
−トレオニン無水物、N〓−(t−ブトキシカル
ボニル)−L−トリプトフアン無水物、N−(t
−ブトキシカルボニル)O4−ベンジル−L−
チロシン無水物およびN−(t−ブトキシカル
ボニル)−L−バリン無水物として用い、それ
らの使用量は基質に対して約2倍モル量とし
た。縮合反応は室温下で行い、反応時間は縮合
させるアミノ酸の種類によつて異なるが18〜30
分間の範囲内であつた。またN〓−(t−ブトキ
シカルボニル)−NIm−トシル−L−ヒスチジ
ン無水物を用いる縮合反応では変換率が低いた
めに、第1表に示す一連の操作を終了したの
ち、さらに第1表における工程4〜6の操作を
繰り返すことによつて縮合反応を再度実施し
た。
【表】
【表】
全てのアミノ酸についての反応操作が終了し
たのち、得られた樹脂をグラスフイルター上で
ジエチルエーテル、ジクロロメタンおよびメタ
ノールを用いて順次洗浄し、次いで真空乾燥す
ることによつて2.1gの乾燥樹脂を得た。ポリ
トリフルオロモノクロロエチレン製の反応容器
(株式会社ペプチド研究所製HF−反応装置I
型)中で、乾燥樹脂1gをアニソール1.5mlお
よびエチルメチルスルフイド0.25mlと混合し、
この混合物に−20℃の温度でフツ化水素10mlを
加え、同温度で30分間、次いで0℃の温度で30
分間攪拌した。得られた反応混合物からフツ化
水素、アニソールおよびエチルメチルスルフイ
ドを減圧下に除去し、残留物をグラスフイルタ
ー上でジエチルエーテルを用いて充分洗浄し
た。得られた残留物を2規定の酢酸水溶液で抽
出し、抽出液を凍結乾燥することによりペプチ
ドの粗製物を0.5g得た。 得られた粗製物を分取用逆相高速液体クロマ
トグラフイー〔カラム:オクタデシル化シリカ
ゲル(粒径:5μm)充填カラム(内径:10mm、
長さ:300mm)〔株式会社ケムコ製デベロシル
(Develosil)ODS 10mmφ×300mm〕;移動相:
トリフルオロ酢酸を0.05容量%含有するアセト
ニトリルと水の混合溶媒(アセトニトリルの濃
度は20分間で20容量%から35容量%になるよう
に漸次変化させた)〕で精製することによつて、
目的とするペプチドの精製物を50mg得た。 得られた精製物を分析用逆相高速液体クロマ
トグラフイー〔カラム:オクタデシル化シリカ
ゲル(粒径:5μm)充填カラム(内径:4mm、
長さ:150mm)(東ソー株式会社製 TSKgel
ODS−80TM 4mmφ×150mm);移動相:トリ
フルオロ酢酸を0.05容量%含有するアセトニト
リルと水の混合溶媒(アセトニトリルの濃度は
30分間で5容量%から50容量%になるように漸
次変化させた);流速:1ml/分;検出法:波
長210nmにおける吸光度〕に付したところ、
19.2分に単一の鋭いピークが示された。FAB
(高速原子衝撃)法マススペクトルにより求め
られた精製物の分子量は2814であつた(理論
値:2815.21)。また、精製物を塩酸を用いて加
水分解して得られた生成物をアミノ酸組成分析
に付した結果は次のとおりであつた(括弧内の
数字は理論値を示す)。リジン:5.23(5),グ
リシン:1.94(2),トリプトフアン:2.02
(2),ヒスチジン:0.98(1),バリン:0.92
(1),チロシン:3.07(3),トレオニン:2.07
(2),シスチン:0.85(1),プロリン:2.13
(2),アスパラギン酸:2.10(2),ロイシン:
1.00(1)。 合成例 2〜16 合成例1におけると同様な方法でペプチドの
固相合成および精製を行うことにより第2表に
示すペプチドを得た。ただし、固相用の樹脂と
して、合成例2および合成例10では4−〔N−
(t−ブトキシカルボニル)グリシルオキシメ
チル〕フエニルアセトアミドメチル基を0.78ミ
リモル/g(樹脂)の割合で有するスチレン−
ジビニルベンゼン共重合体〔スチレンとジビニ
ルベンゼンの構成比(モル比):99対1〕から
なる粒状樹脂〔米国アプライド・バイオシステ
ムズ(Applied Biosystems)社製PAMグリシ
ン(Glycine),t−Boc−Gly〕を用い、合成
例3、合成例5、合成例8および合成例12では
4−〔N−(t−ブトキシカルボニル)−O4−ベ
ンジル−α−L−アスパルチルオキシメチル〕
フエニルアセトアミドメチル基を0.78ミリモ
ル/g(樹脂)の割合で有するスチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体〔スチレンとジビニルベ
ンゼンの構成比(モル比):99対1〕からなる
粒状樹脂〔米国アプライド・バイオシステムズ
(Applied Biosystems)社製PAMアスパラギ
ン酸(Aspartic acid),t−Boc−L−Asp
(OBzl)〕を用い、合成例4および合成例6で
は4−〔N−(t−ブトキシカルボニル)−O5−
ベンジル−α−L−グルタミルオキシメチル〕
フエニルアセトアミドメチル基を0.78ミリモ
ル/g(樹脂)の割合で有するスチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体〔スチレンとジビニルベ
ンゼンの構成比(モル比):99対1〕からなる
粒状樹脂〔米国アプライド・バイオシステムズ
(Applied Biosystems)社製PAMグルタミン
酸(Glutamic acid),t−Boc−L−Glu
(OBzl)〕を用い、合成例7、合成例9および
合成例11では4−〔N2−(t−ブトキシカルボ
ニル)−N6−(クロロベンジルオキシカルボニ
ル)−L−リジルオキシメチル〕フエニルアセ
トアミドメチル基を0.78ミリモル/g(樹脂)
の割合で有するスチレン−ジビニルベンゼン共
重合体〔スチレンとジビニルベンゼンの構成比
(モル比):99対1〕からなる粒状樹脂〔米国ア
プライド・バイオシステムズ(Applied
Biosystems)社製PAMリジン(Lysine),t
−Boc−L−Lys(C−Z)〕を用い、また合
成例13〜16ではα−アミノ−p−メチルベンジ
ル基を0.78ミリモル/g(樹脂)の割合で有す
るスチレン−ジビニルベンゼン共重合体〔スチ
レンとジビニルベンゼンの構成比(モル比):
99対1〕からなる粒状樹脂〔米国アプライド・
バイオシステムズ(Applied Biosystems)社
製p−メチルBHAレジン(p−Methyl BHA
Resin)〕を用いた。また縮合反応においてL
−グルタミン酸、12−アミノドデカン酸および
18−アミノオクタデカン酸はそれぞれ、N−
(t−ブトキシカルボニル)−O5−ベンジル−
L−グルタミン酸無水物、12−(t−ブトキシ
カルボニルアミノ)ドデカン酸無水物および18
−(t−ブトキシカルボニルアミノ)オクタデ
カン酸無水物として用いた。 得られたペプチドの精製物を分析用逆相高速
液体クロマトグラフイーに付したところ、いず
れも単一のピークが示された。それらの精製物
についてFAB法マススペクトルにより求めら
れた分子量および塩酸を用いて加水分解して得
られた生成物のアミノ酸組成分析値をそれぞれ
第3表に示す。
たのち、得られた樹脂をグラスフイルター上で
ジエチルエーテル、ジクロロメタンおよびメタ
ノールを用いて順次洗浄し、次いで真空乾燥す
ることによつて2.1gの乾燥樹脂を得た。ポリ
トリフルオロモノクロロエチレン製の反応容器
(株式会社ペプチド研究所製HF−反応装置I
型)中で、乾燥樹脂1gをアニソール1.5mlお
よびエチルメチルスルフイド0.25mlと混合し、
この混合物に−20℃の温度でフツ化水素10mlを
加え、同温度で30分間、次いで0℃の温度で30
分間攪拌した。得られた反応混合物からフツ化
水素、アニソールおよびエチルメチルスルフイ
ドを減圧下に除去し、残留物をグラスフイルタ
ー上でジエチルエーテルを用いて充分洗浄し
た。得られた残留物を2規定の酢酸水溶液で抽
出し、抽出液を凍結乾燥することによりペプチ
ドの粗製物を0.5g得た。 得られた粗製物を分取用逆相高速液体クロマ
トグラフイー〔カラム:オクタデシル化シリカ
ゲル(粒径:5μm)充填カラム(内径:10mm、
長さ:300mm)〔株式会社ケムコ製デベロシル
(Develosil)ODS 10mmφ×300mm〕;移動相:
トリフルオロ酢酸を0.05容量%含有するアセト
ニトリルと水の混合溶媒(アセトニトリルの濃
度は20分間で20容量%から35容量%になるよう
に漸次変化させた)〕で精製することによつて、
目的とするペプチドの精製物を50mg得た。 得られた精製物を分析用逆相高速液体クロマ
トグラフイー〔カラム:オクタデシル化シリカ
ゲル(粒径:5μm)充填カラム(内径:4mm、
長さ:150mm)(東ソー株式会社製 TSKgel
ODS−80TM 4mmφ×150mm);移動相:トリ
フルオロ酢酸を0.05容量%含有するアセトニト
リルと水の混合溶媒(アセトニトリルの濃度は
30分間で5容量%から50容量%になるように漸
次変化させた);流速:1ml/分;検出法:波
長210nmにおける吸光度〕に付したところ、
19.2分に単一の鋭いピークが示された。FAB
(高速原子衝撃)法マススペクトルにより求め
られた精製物の分子量は2814であつた(理論
値:2815.21)。また、精製物を塩酸を用いて加
水分解して得られた生成物をアミノ酸組成分析
に付した結果は次のとおりであつた(括弧内の
数字は理論値を示す)。リジン:5.23(5),グ
リシン:1.94(2),トリプトフアン:2.02
(2),ヒスチジン:0.98(1),バリン:0.92
(1),チロシン:3.07(3),トレオニン:2.07
(2),シスチン:0.85(1),プロリン:2.13
(2),アスパラギン酸:2.10(2),ロイシン:
1.00(1)。 合成例 2〜16 合成例1におけると同様な方法でペプチドの
固相合成および精製を行うことにより第2表に
示すペプチドを得た。ただし、固相用の樹脂と
して、合成例2および合成例10では4−〔N−
(t−ブトキシカルボニル)グリシルオキシメ
チル〕フエニルアセトアミドメチル基を0.78ミ
リモル/g(樹脂)の割合で有するスチレン−
ジビニルベンゼン共重合体〔スチレンとジビニ
ルベンゼンの構成比(モル比):99対1〕から
なる粒状樹脂〔米国アプライド・バイオシステ
ムズ(Applied Biosystems)社製PAMグリシ
ン(Glycine),t−Boc−Gly〕を用い、合成
例3、合成例5、合成例8および合成例12では
4−〔N−(t−ブトキシカルボニル)−O4−ベ
ンジル−α−L−アスパルチルオキシメチル〕
フエニルアセトアミドメチル基を0.78ミリモ
ル/g(樹脂)の割合で有するスチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体〔スチレンとジビニルベ
ンゼンの構成比(モル比):99対1〕からなる
粒状樹脂〔米国アプライド・バイオシステムズ
(Applied Biosystems)社製PAMアスパラギ
ン酸(Aspartic acid),t−Boc−L−Asp
(OBzl)〕を用い、合成例4および合成例6で
は4−〔N−(t−ブトキシカルボニル)−O5−
ベンジル−α−L−グルタミルオキシメチル〕
フエニルアセトアミドメチル基を0.78ミリモ
ル/g(樹脂)の割合で有するスチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体〔スチレンとジビニルベ
ンゼンの構成比(モル比):99対1〕からなる
粒状樹脂〔米国アプライド・バイオシステムズ
(Applied Biosystems)社製PAMグルタミン
酸(Glutamic acid),t−Boc−L−Glu
(OBzl)〕を用い、合成例7、合成例9および
合成例11では4−〔N2−(t−ブトキシカルボ
ニル)−N6−(クロロベンジルオキシカルボニ
ル)−L−リジルオキシメチル〕フエニルアセ
トアミドメチル基を0.78ミリモル/g(樹脂)
の割合で有するスチレン−ジビニルベンゼン共
重合体〔スチレンとジビニルベンゼンの構成比
(モル比):99対1〕からなる粒状樹脂〔米国ア
プライド・バイオシステムズ(Applied
Biosystems)社製PAMリジン(Lysine),t
−Boc−L−Lys(C−Z)〕を用い、また合
成例13〜16ではα−アミノ−p−メチルベンジ
ル基を0.78ミリモル/g(樹脂)の割合で有す
るスチレン−ジビニルベンゼン共重合体〔スチ
レンとジビニルベンゼンの構成比(モル比):
99対1〕からなる粒状樹脂〔米国アプライド・
バイオシステムズ(Applied Biosystems)社
製p−メチルBHAレジン(p−Methyl BHA
Resin)〕を用いた。また縮合反応においてL
−グルタミン酸、12−アミノドデカン酸および
18−アミノオクタデカン酸はそれぞれ、N−
(t−ブトキシカルボニル)−O5−ベンジル−
L−グルタミン酸無水物、12−(t−ブトキシ
カルボニルアミノ)ドデカン酸無水物および18
−(t−ブトキシカルボニルアミノ)オクタデ
カン酸無水物として用いた。 得られたペプチドの精製物を分析用逆相高速
液体クロマトグラフイーに付したところ、いず
れも単一のピークが示された。それらの精製物
についてFAB法マススペクトルにより求めら
れた分子量および塩酸を用いて加水分解して得
られた生成物のアミノ酸組成分析値をそれぞれ
第3表に示す。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
括弧内の数字は理論値を示す。
合成例 17および18 合成例1におけると同様な方法でペプチドの
固相合成および精製を行うことにより、式 で示されるペプチド(合成例17)および式 で示されるペプチド(合成例18)を得た。ただ
し、固相用の樹脂として、4−〔N−(t−ブト
キシカルボニル)−O4−ベンジル−α−L−ア
スパルチルオキシメチル〕フエニルアセトアミ
ドメチル基を0.78ミリモル/g(樹脂)の割合
で有するスチレン−ジビニルベンゼン共重合体
〔スチレンとジビニルベンゼンの構成比(モル
比):99対1〕からなる粒状樹脂〔米国アプラ
イド・バイオシステムズ(Applied
Biosystems)社製PAMアスパラギン酸
(Aspartic acid),t−Boc−L−Asp(OBzl)〕
を用いた。 得られたペプチドの精製物を分析用逆相高速
液体クロマトグラフイーに付したところ、いず
れも単一のピークが示された。それらの精製物
についてFAB法マススペクトルにより求めら
れた分子量および塩酸を用いて加水分解して得
られた生成物のアミノ酸組成分析値をそれぞれ
第4表に示す。
合成例 17および18 合成例1におけると同様な方法でペプチドの
固相合成および精製を行うことにより、式 で示されるペプチド(合成例17)および式 で示されるペプチド(合成例18)を得た。ただ
し、固相用の樹脂として、4−〔N−(t−ブト
キシカルボニル)−O4−ベンジル−α−L−ア
スパルチルオキシメチル〕フエニルアセトアミ
ドメチル基を0.78ミリモル/g(樹脂)の割合
で有するスチレン−ジビニルベンゼン共重合体
〔スチレンとジビニルベンゼンの構成比(モル
比):99対1〕からなる粒状樹脂〔米国アプラ
イド・バイオシステムズ(Applied
Biosystems)社製PAMアスパラギン酸
(Aspartic acid),t−Boc−L−Asp(OBzl)〕
を用いた。 得られたペプチドの精製物を分析用逆相高速
液体クロマトグラフイーに付したところ、いず
れも単一のピークが示された。それらの精製物
についてFAB法マススペクトルにより求めら
れた分子量および塩酸を用いて加水分解して得
られた生成物のアミノ酸組成分析値をそれぞれ
第4表に示す。
【表】
括弧内の数字は理論値を示す。
実施例 1 (a) 金属ナトリウムの存在下で蒸留することに
よつて得られたジオキサン50ml中にセルロース
粒子(生化学工業株式会社販売、CM−セルロ
フアインCH)10gを縣濁し、得られた縣濁液
にN−ヒドロキシコハク酸イミド0.5gおよび
ジシクロヘキシルカルボジイミド1.0gを加え、
混合物を室温下で1晩振盪攪拌した。得られた
混合物を0.02モル/のリン酸塩緩衝液(PH:
7.4)で洗浄し、吸引濾過した。得られた粒子
を、合成例1で得られたペプチドの20mgを含有
する0.02モル/のリン酸塩緩衝液(PH:7.4)
20mlと混合し、この混合物を4℃の温度で1晩
攪拌した。得られた混合物を吸引濾過した。濾
液を分析用逆相高速液体クロマトグラフイーに
付したが、残存するペプチドは認められなかつ
た(担体上へのペプチドの固定化率:約100
%)。このようにして、合成例1で得られたペ
プチドの20mgが固定化されたセルロース粒子
(熱処理されていない吸着剤)を約10g得た。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
されたセルロース粒子の1gずつを、塩化ナト
リウムを0.15モル/含有する0.02モル/の
リン酸塩緩衝液(PH:7.4)の各5ml中に縣濁
し、それぞれ80℃(水浴上、常圧下)、100℃
(水浴上、常圧下)、121℃(オートクレーブ滅
菌器中、加圧下)および150℃(オートクレー
ブ滅菌器中、加圧下)の温度で20分間熱処理し
た。このようにして熱処理された吸着剤をそれ
ぞれ得た。 実施例 2 (a) 実施例1(a)においてセルロース粒子10g
の代りにポリビニルアルコール粒子(東ソー株
式会社製CM−トヨパール650C)10gを用い、
かつ合成例1で得られたペプチド20mgの代りに
合成例2で得られたペプチド20mgを用いる以外
は同様な方法により、合成例2で得られたペプ
チドの18.4mgが固定化されたポリビニルアルコ
ール粒子(熱処理されていない吸着剤)を約10
g得た(ペプチドの固定化率:約92%)。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
されたポリビニルアルコール粒子の1gを、塩
化ナトリウムを0.15モル/含有する0.02モ
ル/のリン酸塩緩衝液(PH:7.4)5ml中に
縣濁し、オートクレーブ滅菌器中で加圧下に
121℃の温度で20分間熱処理した。このように
して熱処理された吸着剤を得た。 実施例 3 (a) 多孔性ガラス粒子〔米国エレクトロ−ニユー
クレオニクス(Electro−nucleonics)社製
CPG−10−1000〕10gを、γ−アミノプロピ
ルトリエトキシシランを5ml含有するトルエン
溶液100ml中で24時間加熱還流下に反応させた。
得られた混合物を、金属ナトリウムの存在下で
蒸留することによつて得られたジオキサンで洗
浄し、吸引濾過した。得られた粒子を、金属ナ
トリウムの存在下で蒸留することによつて得ら
れたジオキサン100ml中に縣濁し、この縣濁液
に無水コハク酸3gを加え、混合物を室温下で
1晩攪拌した。得られた混合物を、金属ナトリ
ウムの存在下で蒸留することによつて得られた
ジオキサンで洗浄し、吸引濾過した。得られた
粒子を、金属ナトリウムの存在下で蒸留するこ
とによつて得られたジオキサン50ml中に縣濁
し、この縣濁液にN−ヒドロキシコハク酸イミ
ド0.5gおよびジシクロヘキシルカルボジイミ
ド1.0gを加え、混合物を室温下で1晩攪拌し
た。得られた混合物を0.02モル/のリン酸塩
緩衝液(PH:7.4)で洗浄し、吸引濾過した。
得られた粒子を、合成例3で得られたペプチド
20mgを含有する0.02モル/のリン酸塩緩衝液
(PH:7.4)20mlと混合し、この混合物を4℃の
温度で1晩攪拌した。得られた混合物を吸引濾
過し、合成例3で得られたペプチドの20mgが固
定化された多孔性ガラス粒子(熱処理されてい
ない吸着剤)を約10g得た(ペプチドの固定化
率:約100%)。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
された多孔性ガラス粒子の1gをペプチドが固
定化されたポリビニルアルコール粒子1gの代
りに用いる以外は実施例2(b)におけると同
様な方法により、熱処理された吸着剤を得た。 実施例 4〜16 (a) 第5表に示すペプチドの20mgを用いる以外は
実施例1(a)、実施例2(a)または実施例3
(a)のいずれかにおけると同様な方法により
ペプチドが固定化された粒子状担体(熱処理さ
れていない吸着剤)をそれぞれ得た。使用した
粒子状担体および担体上へのペプチドの固定化
率をそれぞれ第5表に示す。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
された粒子状担体の1gを実施例2(a)で得
られたペプチドが固定化されたポリビニルアル
コール粒子1gの代りに用いる以外は実施例2
(b)におけると同様な方法により、熱処理さ
れた吸着剤をそれぞれ得た。
実施例 1 (a) 金属ナトリウムの存在下で蒸留することに
よつて得られたジオキサン50ml中にセルロース
粒子(生化学工業株式会社販売、CM−セルロ
フアインCH)10gを縣濁し、得られた縣濁液
にN−ヒドロキシコハク酸イミド0.5gおよび
ジシクロヘキシルカルボジイミド1.0gを加え、
混合物を室温下で1晩振盪攪拌した。得られた
混合物を0.02モル/のリン酸塩緩衝液(PH:
7.4)で洗浄し、吸引濾過した。得られた粒子
を、合成例1で得られたペプチドの20mgを含有
する0.02モル/のリン酸塩緩衝液(PH:7.4)
20mlと混合し、この混合物を4℃の温度で1晩
攪拌した。得られた混合物を吸引濾過した。濾
液を分析用逆相高速液体クロマトグラフイーに
付したが、残存するペプチドは認められなかつ
た(担体上へのペプチドの固定化率:約100
%)。このようにして、合成例1で得られたペ
プチドの20mgが固定化されたセルロース粒子
(熱処理されていない吸着剤)を約10g得た。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
されたセルロース粒子の1gずつを、塩化ナト
リウムを0.15モル/含有する0.02モル/の
リン酸塩緩衝液(PH:7.4)の各5ml中に縣濁
し、それぞれ80℃(水浴上、常圧下)、100℃
(水浴上、常圧下)、121℃(オートクレーブ滅
菌器中、加圧下)および150℃(オートクレー
ブ滅菌器中、加圧下)の温度で20分間熱処理し
た。このようにして熱処理された吸着剤をそれ
ぞれ得た。 実施例 2 (a) 実施例1(a)においてセルロース粒子10g
の代りにポリビニルアルコール粒子(東ソー株
式会社製CM−トヨパール650C)10gを用い、
かつ合成例1で得られたペプチド20mgの代りに
合成例2で得られたペプチド20mgを用いる以外
は同様な方法により、合成例2で得られたペプ
チドの18.4mgが固定化されたポリビニルアルコ
ール粒子(熱処理されていない吸着剤)を約10
g得た(ペプチドの固定化率:約92%)。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
されたポリビニルアルコール粒子の1gを、塩
化ナトリウムを0.15モル/含有する0.02モ
ル/のリン酸塩緩衝液(PH:7.4)5ml中に
縣濁し、オートクレーブ滅菌器中で加圧下に
121℃の温度で20分間熱処理した。このように
して熱処理された吸着剤を得た。 実施例 3 (a) 多孔性ガラス粒子〔米国エレクトロ−ニユー
クレオニクス(Electro−nucleonics)社製
CPG−10−1000〕10gを、γ−アミノプロピ
ルトリエトキシシランを5ml含有するトルエン
溶液100ml中で24時間加熱還流下に反応させた。
得られた混合物を、金属ナトリウムの存在下で
蒸留することによつて得られたジオキサンで洗
浄し、吸引濾過した。得られた粒子を、金属ナ
トリウムの存在下で蒸留することによつて得ら
れたジオキサン100ml中に縣濁し、この縣濁液
に無水コハク酸3gを加え、混合物を室温下で
1晩攪拌した。得られた混合物を、金属ナトリ
ウムの存在下で蒸留することによつて得られた
ジオキサンで洗浄し、吸引濾過した。得られた
粒子を、金属ナトリウムの存在下で蒸留するこ
とによつて得られたジオキサン50ml中に縣濁
し、この縣濁液にN−ヒドロキシコハク酸イミ
ド0.5gおよびジシクロヘキシルカルボジイミ
ド1.0gを加え、混合物を室温下で1晩攪拌し
た。得られた混合物を0.02モル/のリン酸塩
緩衝液(PH:7.4)で洗浄し、吸引濾過した。
得られた粒子を、合成例3で得られたペプチド
20mgを含有する0.02モル/のリン酸塩緩衝液
(PH:7.4)20mlと混合し、この混合物を4℃の
温度で1晩攪拌した。得られた混合物を吸引濾
過し、合成例3で得られたペプチドの20mgが固
定化された多孔性ガラス粒子(熱処理されてい
ない吸着剤)を約10g得た(ペプチドの固定化
率:約100%)。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
された多孔性ガラス粒子の1gをペプチドが固
定化されたポリビニルアルコール粒子1gの代
りに用いる以外は実施例2(b)におけると同
様な方法により、熱処理された吸着剤を得た。 実施例 4〜16 (a) 第5表に示すペプチドの20mgを用いる以外は
実施例1(a)、実施例2(a)または実施例3
(a)のいずれかにおけると同様な方法により
ペプチドが固定化された粒子状担体(熱処理さ
れていない吸着剤)をそれぞれ得た。使用した
粒子状担体および担体上へのペプチドの固定化
率をそれぞれ第5表に示す。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
された粒子状担体の1gを実施例2(a)で得
られたペプチドが固定化されたポリビニルアル
コール粒子1gの代りに用いる以外は実施例2
(b)におけると同様な方法により、熱処理さ
れた吸着剤をそれぞれ得た。
【表】
比較例 1
(a) 実施例1(a)において合成例1で得られた
ペプチドの20mgの代りに合成例17で得られたペ
プチドの20mgを用いる以外は同様な方法によ
り、合成例17で得られたペプチドの14.4mgが固
定化されたセルロース粒子を約10g得た(ペプ
チドの固定化率:約72%)。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
されたセルロース粒子の1gをペプチド固定化
されたポリビニルアルコール粒子1gの代りに
用いる以外は実施例2(b)におけると同様な
方法により、熱処理された吸着剤を得た。 比較例 2 (a) 実施例2(a)において合成例2で得られた
ペプチドの20mgの代りに合成例18で得られたペ
プチドの20mgを用いる以外は同様な方法により
ペプチドのポリビニルアルコール粒子への固定
化操作を行つた。合成例18で得られたペプチド
はリン酸塩緩衝液中での溶解度が低いため、濾
液中に残存するペプチドを分析用逆高速液体ク
ロマトグラフイーにより定量することが不可能
であつた。 (b) 上記の固定化操作に付して得られたポリビニ
ルアルコールの粒子1gを実施例2(a)で得
られたペプチドが固定化されたポリビニルアル
コール粒子1gの代りに用いる以外は実施例2
(b)におけると同様な方法により、熱処理さ
れた吸着剤を得た。 試験例 1 重症筋無力症患者の血清0.5mlに実施例1で得
られた熱処理されていない吸着剤または熱処理さ
れた吸着剤の50mgを加え、37℃の温度で3時間縣
濁させた。得られた縣濁物を遠心分離し、上清を
得た。得られた上清中におけるニコチン性アルチ
ルコリンレセプターに対するヒト抗体の濃度を
Con A法〔蛋白質 核酸 酵素 、第26巻、第
1578〜1591頁(1981年)など参照〕により求め
た。すなわち、被検液をニコチン性アルチルコリ
ンレセプターおよび放射線標識したα−ブンガロ
トキシンと順次接触させ、得られた処理液をコン
カナバリンA(Con A)を固定化したセフアロー
ス(Sepharose)を充填したカラムに通したのち
カラムの放射活性を計測することによつて、該被
検液中に含まれていたα−ブンガロトキシンとニ
コチン性アセチルコリンレセプターとの結合を阻
害するヒト抗体の量をトキシン結合阻害活性度
(カラムの放射活性の減少率)として定量した。
結果を第6表に示す。なお、比較のために、合成
例1で得られたペプチドの代りにグリシンを用い
る以外は実施例1(a)におけると同様な方法に
より得られたグリシンが固定化されたセルロース
粒子、およびこのグリシンが固定化されたセルロ
ース粒子をペプチドが固定化されたセルロース粒
子の代りに用いる以外は実施例1(b)における
と同様な方法により121℃で熱処理して得られた
吸着剤を使用した場合に得られた結果をあわせて
第6表に示す。
ペプチドの20mgの代りに合成例17で得られたペ
プチドの20mgを用いる以外は同様な方法によ
り、合成例17で得られたペプチドの14.4mgが固
定化されたセルロース粒子を約10g得た(ペプ
チドの固定化率:約72%)。 (b) 上記のようにして得られたペプチドが固定化
されたセルロース粒子の1gをペプチド固定化
されたポリビニルアルコール粒子1gの代りに
用いる以外は実施例2(b)におけると同様な
方法により、熱処理された吸着剤を得た。 比較例 2 (a) 実施例2(a)において合成例2で得られた
ペプチドの20mgの代りに合成例18で得られたペ
プチドの20mgを用いる以外は同様な方法により
ペプチドのポリビニルアルコール粒子への固定
化操作を行つた。合成例18で得られたペプチド
はリン酸塩緩衝液中での溶解度が低いため、濾
液中に残存するペプチドを分析用逆高速液体ク
ロマトグラフイーにより定量することが不可能
であつた。 (b) 上記の固定化操作に付して得られたポリビニ
ルアルコールの粒子1gを実施例2(a)で得
られたペプチドが固定化されたポリビニルアル
コール粒子1gの代りに用いる以外は実施例2
(b)におけると同様な方法により、熱処理さ
れた吸着剤を得た。 試験例 1 重症筋無力症患者の血清0.5mlに実施例1で得
られた熱処理されていない吸着剤または熱処理さ
れた吸着剤の50mgを加え、37℃の温度で3時間縣
濁させた。得られた縣濁物を遠心分離し、上清を
得た。得られた上清中におけるニコチン性アルチ
ルコリンレセプターに対するヒト抗体の濃度を
Con A法〔蛋白質 核酸 酵素 、第26巻、第
1578〜1591頁(1981年)など参照〕により求め
た。すなわち、被検液をニコチン性アルチルコリ
ンレセプターおよび放射線標識したα−ブンガロ
トキシンと順次接触させ、得られた処理液をコン
カナバリンA(Con A)を固定化したセフアロー
ス(Sepharose)を充填したカラムに通したのち
カラムの放射活性を計測することによつて、該被
検液中に含まれていたα−ブンガロトキシンとニ
コチン性アセチルコリンレセプターとの結合を阻
害するヒト抗体の量をトキシン結合阻害活性度
(カラムの放射活性の減少率)として定量した。
結果を第6表に示す。なお、比較のために、合成
例1で得られたペプチドの代りにグリシンを用い
る以外は実施例1(a)におけると同様な方法に
より得られたグリシンが固定化されたセルロース
粒子、およびこのグリシンが固定化されたセルロ
ース粒子をペプチドが固定化されたセルロース粒
子の代りに用いる以外は実施例1(b)における
と同様な方法により121℃で熱処理して得られた
吸着剤を使用した場合に得られた結果をあわせて
第6表に示す。
【表】
試験例 2
試験例1において実施例1で得られた熱処理さ
れていない吸着剤および熱処理された吸着剤の代
りに実施例2〜16で得られた熱処理された吸着剤
を用いる以外は同様な方法により、血清の縣濁処
理を行い、得られた上清中におけるニコチン性ア
セチルコリンレセプターに対するヒト抗体の濃度
を求めた。得られた結果を第7表に示す。なお、
比較のために、比較例1または比較例2で得られ
た熱処理された吸着剤を使用した場合に得られた
結果、ならびに試験例1で比較のために使用した
ものと同じグリシンが固定化されたセルロース粒
子を121℃で熱処理して得られた吸着剤を使用し
た場合に得られた結果を第7表にあわせて示す。
れていない吸着剤および熱処理された吸着剤の代
りに実施例2〜16で得られた熱処理された吸着剤
を用いる以外は同様な方法により、血清の縣濁処
理を行い、得られた上清中におけるニコチン性ア
セチルコリンレセプターに対するヒト抗体の濃度
を求めた。得られた結果を第7表に示す。なお、
比較のために、比較例1または比較例2で得られ
た熱処理された吸着剤を使用した場合に得られた
結果、ならびに試験例1で比較のために使用した
ものと同じグリシンが固定化されたセルロース粒
子を121℃で熱処理して得られた吸着剤を使用し
た場合に得られた結果を第7表にあわせて示す。
【表】
【表】
阻害活性度
吸着剤 (%)
吸着剤 (%)
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 一般式 H−X−Gly−Trp−Lys−His−Trp−Val−
Tyr−Tyr−Thr−Cys−Cys−Pro−Asp−Thr
−Pro−Tyr−Leu−Asp−Y−Z () 〔式中、XおよびYは一方が単結合を表わす
か、または Asp、Glu、Lysおよび式
【式】(式中、nは1〜17の整数 を表わす。)で示される二価の基からなる群から
選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれる
少なくとも1種のアミノ酸残基の2〜10個がペプ
チド結合によつて形成するペプチド残基を表わ
し、他方がAsp、Glu、Lysおよび式
【式】(式中、nは前記定義のと おりである。)で示される二価の基からなる群か
ら選ばれるアミノ酸残基もしくは該群から選ばれ
る少なくとも1種のアミノ酸残基の2〜10個がペ
プチド結合によつて形成するペプチド残基を表わ
し、Zは水酸基またはアミノ基を表わし、上記ア
ミノ酸配列のCys−Cysにおいて各々のCysが有
するメルカプト基は相互に結合してジスルフイド
結合を形成していてもよい。〕 で示されるペプチドを担体上に固定化してなるニ
コチン性アセチルコリンレセプターに対する抗体
用の吸着剤。 2 一般式 H−X−Gly−Trp−Lys−His−Trp−Val−
Tyr−Tyr−Thr−Cys−Cys−Pro−Asp−Thr
−Pro−Tyr−Leu−Asp−Y−Z () (式中、X、Y、Zは請求項1における定義の
とおりである。) で示されるペプチドを担体上に固定化することを
特徴とする請求項1記載の吸着剤の製造方法。 3 ペプチドを担体上に固定化し、次いで該担体
上に固定化されたペプチドを熱処理する請求項2
記載の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63294686A JPH01230526A (ja) | 1987-11-25 | 1988-11-24 | 吸着剤およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP29536987 | 1987-11-25 | ||
JP62-295369 | 1987-11-25 | ||
JP63294686A JPH01230526A (ja) | 1987-11-25 | 1988-11-24 | 吸着剤およびその製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01230526A JPH01230526A (ja) | 1989-09-14 |
JPH0460585B2 true JPH0460585B2 (ja) | 1992-09-28 |
Family
ID=26559946
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63294686A Granted JPH01230526A (ja) | 1987-11-25 | 1988-11-24 | 吸着剤およびその製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH01230526A (ja) |
-
1988
- 1988-11-24 JP JP63294686A patent/JPH01230526A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH01230526A (ja) | 1989-09-14 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
EXPY | Cancellation because of completion of term |