JPH0449298A

JPH0449298A - 新規なエンケファリン誘導体および鎮痛剤

Info

Publication number: JPH0449298A
Application number: JP2158890A
Authority: JP
Inventors: Iwao Oshima; 尾島　巌; Kazuaki Nakabashi; 中橋　和明
Original assignee: Fuji Yakuhin Kogyo KK; State University of New York SUNY; New York University NYU
Current assignee: Fuji Yakuhin Kogyo KK; State University of New York SUNY; New York University NYU
Priority date: 1990-06-19
Filing date: 1990-06-19
Publication date: 1992-02-18
Also published as: US5276137A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［技術分野］本発明は、新規なエンケファリン誘導体および鎮痛剤に
関する。さらに詳しく言えば、本発明は、天然に存在す
るペンタペプチドであるエンケファリンの化学構造中に
おけるアミ“ノ酸単位であるグリシン構造を、光学活性
の５．５．５−トリフルオロノルバリンで１換したペプ
チド構造を有する下記式（Ｉ）で表わされるアミノ酸配
列構造の新規なトリフルオロメチルエンケファリン誘導
体またはその酸付加塩ならびにその薬理学的に許容され
る塩を有効成分として含有する鎮痛剤を提供するもので
ある。

式（■）：Ｔｙｒ−＾、−Ａ２−　ＰＭＪｌｅｉ−ＮＨｚ　　　　
　　（Ｉ　）（式中、Ａ１およびＡ２の一方はＧ１ｙ残
基であり、他方は式（ＩＩ＞で表わされる光学活性アミ
ノ酸残基を意味する）（ＣＨ２）ｚｃＦａＨ２Ｎ−Ｃｌ−ＣＯＯＮ　　　　　　　　　　　（Ｉｆ
　）［背景技術］従来、生体内に存在するペプチド性鎮痛作用物質の一つ
として、ペプチド構造のアミノ酸配列が式（Ｉ［）で表
わされるメチオニン５−エンゲファリンと式（ＩＶ）で
表わされるロイシン５−エンケファリンの２Ｎ類のエン
ケファリン類が存在し、それぞれ著しい鎮痛作用を示す
ことが知られている（Ｊ、Ｈｕｇｈｅｓ　ｅｔ　ａｔ、
　Ｎａｔｕｒｅ。

並ム５７７、１９７５）　。

Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ　　　　　　
　（Ｉ［）Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ　
　　　　　　（ＴＶ　）しかしながら、これら天然型の
エンケファリン類は、例えば血管内経由で投与しても　
生体内に存在するペプチド分解酵素により極めて速やか
に分解され、その生理的活性を失ってしまうので、医薬
として用いることができない。特に１位の千ロジンと２
位のグリシンとの結合が切断されたときには、完全に生
理的活性を失うことが報告されている（植木正彬、有機
合成化学、４４　（３）、２１９．１９８６）　、この
ペプチド分解酵素による分解を防ぐためには、その酵素
が基質となるペプチドの構成アミノ酸部を認識しなけれ
ばよいことになるというところから、非天然型アミノ酸
をペプチド構造中に有する種々のエンケファリン誘導体
が製造されている。しかしながら、これまで、未だ十分
な生理活性をもつ化合物は得られていないのが現状であ
る（Ａ。

Ｔ、ＨｃＫｎｉｇｈｔ　ｅｔ　ａｌ、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｐｈ
ａｒｎａｃｏｌ、、８６．３９３゜１９８３）　。

［発明の開示］本発明者らは、ペプチド分解酵素がチロシン−グリシン
あるいはグリシン−グリシン結合を持具的に認識して、
エンケファリンを分解し、活性を低下させることに着目
し、この分解反応を防いで生理的活性を維持する化合物
の開発を目的として、鋭意研究を重ねた結果、フッ素原
子を構造中に含有する光学的に活性な脂肪族アミノ酸を
エンケファリンの２位あるいは３位のグリシン残基と置
換した、新規な非天然型エンケファリン誘導体が、天然
型のエンケファリンを著しく上回る鎮痛活性を示すこと
を見出ｉ−な。

本発明は、かかる知見に基づいてなされたものである。

すなわち、本発明は、アミノ酸配列が、Ｔｙｒ−Ａ１−
Ａ＊−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ｎｔ１２　　　　　　　（Ｉ　
）（式中、Ａ１およびＡ２の一方はＧｌｙ残基であり、
他方は式（ＩＩ）で表わされる光学活性アミノ酸残基を
意味する）で表わされるペプチドである新規なエンケフ
ァリン誘導体またはその酸付加塩（ＣＨ２）２ＣＦａＨ２Ｎ−ＣＨ−ＣＯＯＨ（ＩＩ　）を提供するものであり、さらに、式（Ｉ）で表わされる
、新規なエンケファリン誘導体もしくはその薬理学的に
許容される塩を主成分として含有する鎮痛剤に関するも
のである。

本発明にかかるエンケファリン誘導体は、通常のペプチ
ド合成に適用されている同相ペプチド合成法および液相
ペプチド合成法のいずれの合成法によっても製造するこ
とができる。

固相法によるペプチド合成は一般に市販されているペプ
チド合成機を用いて行なわれる。先ず、アミノ基が保護
されたアミノ酸を固相と反応させて、固相にそのアミノ
酸を結合させたのち、この保護基を除去する。このよう
にして得た固相に結合しているアミノ酸に、同じように
アミノ基が保護されたアミノ酸を結合する反応とその保
護基を除去する反応を繰返すことによって、所望の新規
な式（Ｉ）で表わされるエンケファリン誘導体が製造さ
れる。

また、液相ペプチド合成法は、必要により保護されたＣ
−末端アミノ酸とアミノ基が保護されたアミノ酸とをジ
シクロへキシルカルボジイミドのような縮合剤の存在の
下で、ＤＨＦ　、テトラヒドロフランあるいはハロゲン
化炭化水素などの適当な有機溶媒中で縮合する公知のペ
プチド合成法が適用される。

式（Ｉ［）の光学活性の５．５．５−トリフルオロノル
バリンは、以下のようにして製造することができる。

３−（トリフルオロメチル）プロパナールに一酸化炭素
および水素の存在下、アセトアミドをオートクレーブ中
で反応させて、Ｎ−アセチルー５，５．５−　）リフル
オロノルバリンに変換し、ついでこのアセチル体を加水
分解して、Ｓ一体を単離し、この８体を単離した後の母
液から同様に加水分解して高収率でＲ一体が得られる（
）、０ｊｉｉａ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、Ｏｒａ、Ｃｈｅｌ
、、　１９８９．５４゜４５１１　（１９８９）　）　
。

本発明にかかる新規なエンケファリン誘導体の酸付加塩
の例としては、塩酸、硫酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸
、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、酢酸、サリチル酸、
アスコルビン酸などの各種の無機あるいは有機の酸の付
加塩があげられる。

本発明にかかる式（Ｉ）の新規なエンケファリン誘導体
は、価値ある薬理学上の作用を示し、医薬として有用な
物質である。特に、この新規なエンケファリン誘導体は
、鎮痛作用に関与する薬学上の受容体部位に作用して鎮
痛薬および／または麻酔性拮抗薬として有効な組成物を
与える。

実験動物のもだえ（１４ｒｉｔｈｉｎＱ）抑制試験にお
ける抑制率、すなわち鎮痛剤としての作用はこれらの化
合物の投与量に依存性がある。

なお、本明細書中に記載の略記号は下記の意味を有する
。また、ペプチド構造中のアミノ酸配列におけるアミノ
酸を表わす記号は、ペプチド化学において慣用されてい
るアミノ酸単位を表わし、そのＣ−末端および（または
）Ｎ−末端においてペプチド結合を構成しているもので
ある。

Ｔｙｒ　　：Ｌ−チロシンａｎｙ　　ニゲリシンＰｈｅ：Ｌ−フェニルアラニンＭｅｔ：Ｌ−メチオニンｔｅｕ：ｔ、−ロイシンＬ−ＴＦＮＶ：　Ｌ　（あルイハＳ　）　−５，５，５
−トリフルオロノルバリン［）−ＴＦＮＶ：　Ｄ　（あルイハＲ）　−５，５，５
−）リフルオロノルバリンＤＨＦ　　　ニジメチルフォルムアミドＦｏｏｃ　　：
フルオレニルメトキシカルボニル基Ｆｎｏｃ−ＣＪ　：
フルオレニルメトキシカルボニルクロリド ■ＦＡニトリフルオロ酢酸次に実施例および動物試験の結果を掲げ、本発明をさら
に詳しく説明する。

なお、本発明は、以下に掲げる具体例により限定される
ものではない。

実施例Ｉ　　Ｎ−アセチル−５，５，５−）リフルオロ
ノルバリン（Ｎ−Ａｃ−ＴＦＮＶ）３００１ｊのオート
クレーブに、３−（トリフルオロメチル）プロパナール
（１，２６ｇ、　１０ミリモル）、アセトアミド（８８
５■、１５ミリモル）、ＣＯ２（ＣＯ）８　（１７１ｔ
ａｌｚ、０．５ミリモル）とジオキサン（１０ｍｌりと
を入れ、−酸化炭素で置換したのち、室温で、−酸化炭
素：水素−１：１の混合ガスを用いて１，５００ｐｓｉ
に加圧する。

次に、１２０℃に加熱し、１２時間撹拌した後、０℃で
注意深くガスを排気し、次いで、反応混合物に撹拌しな
がら５％Ｎａ２ＣＯ３５０ｃｆ！と酢酸エチル３ｏｍｅ
とを加える。水層を分離し、有機層をさらに水で抽出す
る。抽出後の水溶液を水層と合わせ、リン酸で酸性にし
て、酢酸エチルで抽出する。抽出液を無水ＨＱＳＯａで
乾燥し、濾過したのち、溶媒を留去して、目的とするＮ
−Ａｃ−ＴＦＮＶを白色結晶として得た（１．７０ｇ、
８０％）。融点１１９−１２２℃、”ｔ（ＮＨＲ（ＤＨ
３Ｏ−ｄ６／　Ｔ　ＨＳ　）δ１，８６（Ｓ、３Ｈ）　
、１．７０−２．００（１１，２Ｈ）　、２．２０−２
．４０（ＩＩ、２Ｈ）　、４．２７（−１１旧、８．２
Ｈｄ、Ｊ・７．８Ｈｚ　、ＩＨ）　；”ＦＮＨＲ（ＤＨ
３Ｏ−ｄｓ　／ＣＦ３Ｃｊ　）δ−６４，５（↑、Ｊ・
９．７Ｈ２）　；　ＩＲ（にＢ「円盤）　３３６５　（
νＮＨ）　、１７２０（シＣ−〇）、１６１０　（νＣ
＝０）、１５５０　（δＮ旧０元素分析（Ｃ７８１０Ｆ
８ＮＯ３）計算値：Ｃ１３９，４４、Ｈ５４，７３，Ｎ
、６．５７゜測定値：Ｃ１３９，１７；Ｈ１４，７３；
Ｎ、６．８２゜実施例２　　　Ｓ　−５，５，５−）−リフルオロノル
バリン（Ｓ−ＴＦＮＶ）Ｎ−Ａｃ−ＴＦＮＶ　　（５，ＯＯｇ、２３．５ミリモ
ル）ノ水溶液に２５℃でブタ腎臓由来アシラーゼＩ（４
５■、８５０単位／■）を加え、ｐＨを７に調整する０
反応混合物を２５℃にて、１４時間撹拌する６反応液の
不溶物を濾過して集め、不溶物を水に溶解し、逆層型濾
過器を通したのち、減圧下で水を留去して、目的とする
５−ＴＦＮＶを得た（１．６１ｇ、４０％　）、［α　
コ　２０＝＋７．２’　　　（ｃ　　１．５　、　）１
２０）。

実施例３　　　Ｒ−５，５，５−トリフルオロノルバリ
ン（Ｒ−ＴＦＮＶ）上記実施例２の反応液の炉液をＩＮ塩酸でｐＨ３，０と
し酢酸エチルで抽出、抽出液を無水ＨｇＳＯ４で乾燥し
た後濃縮して、Ｒ−ＡＣ−ＴＦＮＶを白色固体として得
た（１．２５ｇ、２５％）。

［α］も’＝−０，６°（Ｃ５，２５、酢酸エチル）。

得られたＲ−Ａｃ−ＴＦＮＶ　　（１，ＯＯｇ、４．６
９ミ’）　モル）を３Ｎ塩酸と３時間加熱還流し、アン
モニア水で中和し、上記と同様に処理してＲ−ＴＦＮＶ
を白色固体として得た（６６９■、８３．４％）、［α
］も０＝−６，８°　（ｃ　Ｏ，５８、Ｈ２Ｏ）。

実施例４　　Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル−３
−５，５，５−トリフルオロノルバリ：ｙ　（ＦＩＩＯＣ−３−ＴＦＮＶ）Ｓ−ＴＦ
ＮＶ　（６５０ｗ、３．８ミ’Ｊモル）を２０＋ｌ！の
水に炭酸ナトリウム（１，０１ｇ、９．５ミリモル）と
−緒に溶解する。これにＦａｏｃ−Ｃｊ（９３８■、３
．８ミリモル）をジオキサン（１０ｍｇ）に溶解した溶
液を激しい撹拌下に０℃にて３０分間で加え、さらに０
℃にて撹拌を４時間継続する。４０−の水を加えて、室
温で一晩撹拌した後、反応液を水（３００Ｉｌｊ）に注
ぎ、５０−のエーテルで２回洗浄し、ｐＨを１に調整後
、０℃で２時間撹拌する。析出する沈殿物を濾過して集
め、乾燥して目的とすルＦＩＯＣ−３−ＴＦＮＶを１．
３０ｇ　（収率：８７％）得た。融点＝１３１℃、１Ｈ
−ＮＨＲ（ＣＤＣｊａ　）δ　１．６−２．０　（ｉ、
２Ｈ）　；　　２．０−２．３６（ｉ、２Ｈ）　；　４
．１８（ｔ、Ｊ＝６．０　Ｈｚ、ＩＨ）　：　４．４０
（ｄ、　Ｊ＝７．０　Ｈｚ、２日）；４．５６（ｍ、Ｉ
Ｈ）　；　５．２１（ｄ、　Ｊ＝８．６　Ｈｚ、ＩＨ）
　；　　７．２−７．８　（ＩＩ、８Ｈ）　；　”Ｆ−
ＮＨＲ（ＣＤＣｊ３／ＣＦ３Ｃｊ　）δ−７３，７，ｌ
Ｒａｍ−’　　３３２５．２　（１）；２９１８．９　
（Ｓ）；１６９０．２　（ｍ）　；　１５３３．７　［
ｓ）　；　１４５８．１　［ｓ）　；　１３７６．６（
１１）　　、　１２５５．１　（１）。［α］も’＝　
−１４，８°　（ＣＯ１５４、ＥｔＯＨ）　。

実施例５　　Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｒ
−５，５，５−トリフルオロメルバ！Ｊ　：ｙ　（Ｆｍｏｃ−Ｒ−ＴＦＮＶ）Ｆｍｏ
ｃ−Ｒ−ＴＦＨＶを、Ｆｉｏｃ−３−ＴＦＮＶ　　（実
施例４）と同様の操作により製造した。［α］２°＝＋
１４．８°　（ｃ　Ｏ，５４、ＥｔＯＨ）　。

実施例６　　トリフルオロメチルエンケファリン誘導体
の製造トリフルオロメチルエンケファリン誘導体を、固相とし
て、２，４−ジメトキシベンゾしドリルアミン樹脂を使
用し、溶媒としてＤＨＦおよびＣＨ２ＣＪ！２の混合溶
媒を用いて製造した。まず、［−〇Ｃ基で保護されたメ
チオニンペンタフルオロフェニルエステル（０，２５＋
ｕｇｏｊ　）を、ジイソプロピルカルボジイミドおよび
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下に混合溶媒
中で固相（０，１ｉａｏｊ当量）とカップリング反応さ
せ、次いてメチルアルコールで洗浄し、ピペリジン−Ｄ
ＨＦ（１：１）を用いて約９分で保護基を除去する。こ
のようにして、逐次Ｆｓｏｃ保護されたアミノ酸のカッ
プリング反応と保護基の除去とを繰返し、保護基の結合
したトリフルオロメチルエンケファリンを製造した。各
カップリング反応は、室温にて約２時間で完了する。全
カップリング反応と保護基の除去を完了した後、反応混
合物をトリフルオロ酢酸で１６時間処理することによっ
て樹脂を除去したのち、精製し、凍結乾燥して、目的と
するトリフルオロメチルエンケファリンを微黄色粉末と
して得た。得られた、トリフルオロメチルエンケファリ
ン誘導体の、物理的化学的特性を表−１に記載する。

実施例７５週齢のマウス（オス）に０．７％酢酸（０，１−／体
重１０ｇ）を腹腔的投与し、さらにその１０分後に被検
化合物を脳室内（２０μｊ／マウス）に投与し、投与か
ら１０分後に発現するもだえ（ＷｒｉｔｈｉｎＱ）の回
数を測定した。このとき、同時に実施した生理食塩液投
与対照群のもだえ回数を１００％反応率としてその抑制
率（％）を求めたところ、第１図に示す結果が得られた
。

この結果に基づき被検化合物がもだえ回数を５０％抑制
する濃度を求めた結果は表−２に示すとおりである。

実施例８５週齢のマウス（オス）に、式（７）で表わされるトリ
フルオロメチルエンゲファリンおよびモルヒネを静脈内
投与しく投与量：０．０５−／体重１０ｇ）、もだえ回
数を測定し、これを５０％抑制する濃度を求めた。被検
化合物の濃度は２．２■／体重にぎであり、モルヒネ（
０，２２■／体重眩）の１０％の鎮痛効果を示した。そ
の結果は第２図に示すとおりである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、マウスを用いた酢酸もだえ法による被検化合
物の鎮痛効果試験（脳内投与）、第２図は、モルヒネと
対比した鎮痛効果（静脈内投与／マウス）を示す。

Claims

【特許請求の範囲】１）式（ I ）Ｔｙｒ−Ａ＿１−Ａ＿２−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−ＮＨ＿２（
I ）（式中、Ａ＿１およびＡ＿２の一方はＧｌｙ残基
であり、他方は式（II）で表わされる光学活性アミノ酸
残基を意味する）で表わされるエンケファリン誘導体ま
たはその酸付加塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（II）２）式（ I ）で表わされるエンケファリン誘導体もし
くはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有
する鎮痛剤。