JPH0437075B2 - - Google Patents

Description

請求の範囲 １ 1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビタミン
Ｄ化合物とそれに対応する1α−ヒドロキシ−５，
６−トランス−ビタミンＤ異性体との混合物を、
ジエノフイルで処理して1α−ヒドロキシ−５，
６−トランス−ビタミンＤ異性体のジエノフイル
−付加体と未反応1α−ヒドロキシ−５，６−シ
ス−ビタミンＤ化合物の混合を得、そして前記混
合物を分離することを特徴とする1α−ヒドロキ
シ−５，６−シス−ビタミンＤ化合物の調製方
法。 ２ ジエノフイルがマレイン酸、マレイン酸モノ
アルキルエステル、マレイン酸ジアルキルエステ
ルおよび無水マレイン酸からなる群から選ばれる
特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 使用ジエノフイルがアセチレンジカルボン
酸、またはそのアルキル−もしくはジアルキルエ
ステルである特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４ ジエノフイルが４−アルキル−または４−ア
リール−トリアゾリン−３，５−ジオン化合物で
ある特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５ 1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビタミン
Ｄ化合物をクロマトグラフイーにより５，６−ト
ランス異性体の付加体から分離する特許請求の範
囲第１項記載の方法。 ６ 1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビタミン
Ｄ化合物を混合物のアルカリ金属水酸化物による
処理および1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビ
タミンＤ化合物を有機溶媒から回収できるよう水
性および有機溶媒間の分配により５，６−トラン
ス−ビタミンＤ異性体の付加体から分離する特許
請求の範囲第２項または第３項記載の方法。 ７ シス／トランスビタミンＤ混合物が1α−ヒ
ドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₃および1α
−ヒドロキシ−５，６−トランス−ビタミンD₃
を含有する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８ シス／トランスビタミンＤ混合物が1α−ヒ
ドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₂および1α
−ヒドロキシ−５，６−トランス−ビタミンD₂
を含有する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ９ シス／トランスビタミンＤ混合物が1α，25
−ジヒドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₃お
よび1α，25−ジヒドロキシ−５，６−トランス
−ビタミンD₃を含有する特許請求の範囲第１項
記載の方法。 １０ シス／トランスビタミンＤ混合物が1α，
25−ジヒドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₂
および1α，25−ジヒドロキシ−５，６−トラン
ス−ビタミンD₂を含有する特許請求の範囲第１
項記載の方法。 明細書 この発明はデパートメント・オブ・ヘルス・ア
ンド・ヒユーマン・サービスにより授与された
NIH補助金No.AM−14881号による政府の援助に
より行われた。政府はこの発明に一定の権利をも
つている。 技術分野 この発明は1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物
の新規な調製方法に関する。さらに詳しくは、こ
の発明は1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物とそ
れに対応する５，６−トランス−ビタミンＤ異性
体を含有する混合物から実質的に純粋な1α−ヒ
ドロキシ−５，６−シス−ビタミンＤ化合物を得
る新規な方法に関する。 背 景 1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物、詳細には
1α，25−ジヒドロキシビタミンD₃および1α，25
−ジヒドロキシビタミンD₂は動物および人間の
カルシウムホスタシスおよび正常な骨の形成の重
要な調整剤として知られている。それゆえ、これ
らの化合物およびある構造類似体（例えば、1α
−ヒドロキシビタミンD₃、1α−ヒドロキシビタ
ミンD₂および関連化合物）は人間および家畜両
方の医薬として多くの重要な用途が見出され、あ
るいは提案されてきた。それらの用途には腎臓オ
ステオジストロフイー、くる病、骨軟化症、骨粗
しよう症、動物のミルク熱症などのカルシウム代
謝不調の予防および／または治療を含んでいる。 1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物の医薬的用
途の結果として、それについての多種の調製法が
開発されてきた。これら既知の方法の総括は、例
えばキヤモビツチ、ラシヤン・ケミストリー・レ
ビユーズ49，371（1980）、およびデルーカら、ト
ピツクス・イン・カレント・ケミストリー第83巻
１〜65ページ（1979）、およびデルーカとシユノ
ーズ、アニユアル・レビユー・オブ・バイオケミ
ストリー52，411（1983）により提示されている。 これらの1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物調
製法のいくつかは５，６−シスおよびトランス異
性体（すなわち、1α−ヒドロキシ−５，６−シ
ス−ビタミンＤおよびこれに対応する５，６−ト
ランス異性体）の混合物を得る結果となる。この
種混合物はある種の治療用またはその他の用途に
直接使用されることもあるけれども、医薬調剤用
として特に所望されるのは一般に５，６−シス型
生成物である。したがつて、その種のシス／トラ
ンス混合物を得るすべての合成法は一般に異性体
の分離を必要とし、その分離は困難で非常に手間
がかかり、かつ純粋生成物の収率は顕著に低下す
る。 本発明に関連するものとして、特に、米国特許
第4195027号および同第4260549号に開示されたよ
うな３，５−シクロビタミンＤ中間体経由の1α
−ヒドロキシル化法がある。この方法では、ビタ
ミンＤ化合物のＣ−３−ヒドロキシ基がトシル化
され、そのトシル化物はソルボリシス付されて
３，５−シクロビタミン中間体となる。次いでこ
の中間体は酸化されて1α−ヒドロキシシクロビ
タミン化合物となり、これがソルボリシスにより
５，６−シスおよび５，６−トランス−1α−ヒ
ドロキシビタミンＤ化合物（通常は３−アセテー
ト誘導体として）になる。医薬用にはいつでも
５，６−シス化合物が所望の生成物であり、ソル
ボリシスから得られたシス／トランス混合物は分
離されねばならない。 また本発明に関連するものとして、サルモン
ド、米国特許第4206131号の1α−ヒドロキシビタ
ミンＤ化合物調製法がある。この方法では、1α
−ヒドロキシ−５，６−トランス−ビタミンＤ化
合物が中間体として調製され、次いで目的の５，
６−シス−ビタミンＤに異性化される。既知の異
性化法ではシス型とトランス型のビタミンＤ化合
物の混合物が得られるので、やはり混合物からの
目的のシス型生成物の分類が必要となる。同様
に、米国特許第4202829号、同第4263215号、同第
4265822号、および同第4338250号において提示さ
れた1α−ヒドロキシル化法、すなわち、５，６
−トランス−ビタミンＤ化合物を直接１−ヒドロ
キシル化し、次いで５，６−二重結合異性化を行
う方法において純粋なシス型生成物が望まれる場
合はシス／トランス混合物から５，６−シス化合
物を分離する方法が必要になる。 シスおよびトランス異性体は非常な類似したク
ロマトグラフイー性であるから、両異性体の分離
は効率的なカラムを用いる小規模では可能である
が、特に製剤規模では非常に困難で、労力および
経費のかかるものである。以上のように、シス型
とトランス型の異性体分離の困難さが上述の方法
の主な欠点である。 発明の開示 ５，６−シス−およびトランス−異性体の混合
物から目的の５，６−シス−ビタミンＤ異性体を
実質上純粋な形で得られるよう５，６−トランス
−1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物を効果的か
つ効率的に除去することができる５，６−シス−
1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物の新しい調製
法がここに見いだされた。詳しくは、この新規な
方法は５，６−シス−およびトランス−1α−ヒ
ドロキシビタミンＤ化合物の混合物を５，６−ト
ランス−ビタミンＤ化合物のデイールス−アルダ
ー付加体が選択的に生成するように選択された反
応条件でジエノフイルで処理することからなる。
その結果の未反応５，６−シス−ビタミンＤ化合
物と５，６−トランスビタミンＤ化合物のデイー
ルス−アルダー付加体の混合物はクロマトグラフ
イーまたは抽出段階により容易に分離される。 したがつて、ジエノフイルを用いる反応の目的
は、クロマトグラフイー的に非常に類似した２成
分、５，６−シスおよびトランス−ビタミンＤ化
合物の混合物を目的の５，６−シス−ビタミンＤ
化合物が実質上純粋な形で得られるように付加体
が容易に除去できる化学的およびクロマトグラフ
イー的に非常に異つた２成分、トランス−化合物
の付加体および未反応５，６−シス−ビタミンの
混合物に変えることにある。 混合物が上記に要約した方法により分離するこ
とができる５，６−シスビタミンＤおよび５，６
−トランスビタミンＤ化合物は下記の一般式によ
り特徴づけられる。 ここに、X₁およびX₂はそれぞれ別々に水素ま
たはヒドロキシ保護基であり、Ｒはいかなるステ
ロイド側鎖であつてもよく、例えばＲは水素また
はアルキル基であつてもよく、またはＲは次の形
の置換された側鎖であつてもよい。 ここに、R₁、R₂およびR₃はそれぞれ水素、ヒ
ドロキシ、ハロゲンおよび保護ヒドロキシ基から
なる群から選ばれ、R₄は水素、ハロゲンまたは
アルキル基であり、R₅およびR₆はそれぞれ独立
に水素、ヒドロキシおよび保護ヒドロキシ基から
選ばれ、または相互に炭素−炭素の二重結合を形
成していてもよい。 本明細書および特許請求の範囲において、ヒド
ロキシ保護基はアシル、アルキルシリル基または
エーテル基のようにヒドロキシ官能基を一時的に
保護するために使用されるこの技術分野で周知の
いかなる基も意味している。したがつて、保護ヒ
ドロキシはこれら保護基の１つにより誘導体化
（すなわち、アシル化、エーテル化）されたヒド
ロキシ官能基である。アシル基は炭素数１〜６の
すべての異性体を含んだアルカノイル基、例え
ば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリ
ル、ピバロイル基などであり、またはベンゾイル
基、またはアルキル−、ハロ−もしくはニトロ−
置換ベンゾイル基のようなアロイル基である。好
適なアルキルシリルヒドロキシ−保護基は、例え
ば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−
ブチルジメチルシリルおよび類似体のアルキル置
換シリルラジカルである。好適なエーテル保護基
はメトキシメチルまたはエトキシメチル基または
テトラヒドロフラニルまたはテトラヒドロピラニ
ル基であり、すべてこの技術分野で周知の基であ
る。ここで「アルキル」は炭素数１〜６のすべて
の異性体を含む炭化水素基、例えば、メチル、エ
チル、プロピル、イソプロピル、ブチルなどを意
味する。「アリル」はフエニル基またはアルキル
−、ハロ−、またはニトロ−置換フエニル基を意
味する。 シスおよびトランスビタミンＤ化合物の混合物
分離の鍵は反応性ジエノフイルによるこの混合物
を処理することにある。５，６−シスおよびトラ
ンスビタミンＤはともにジエノフイルと反応する
ことができるが、５，６−トランス化合物がより
早く反応をうけ、したがつて、シスおよびトラン
ス化合物をある条件下でジエノフイルで処理する
ことによりシス−化合物が未変化で残存する間に
トランス−異性体のデイールス−アルダー付加体
がほとんど排他的に得られる。 上記用途に適したジエノフイルはそれぞれ次の
一般式により特徴づけられるオレフイン系、アセ
チレン系またはジアゼン系化合物である。

【式】Y₂−Ｃ≡Ｃ−Y₁ Y₂−Ｎ＝Ｎ− Y₁ ここに、各置換基Y₁、Y₂、Y₃、およびY₄はそ
れぞれ水素、アルキル、および電子求引性基から
なる群から選ばれ、Ｙ−置換基のうちいずれか２
つが互いに結合して炭素環または複素環を形成し
ていてもよいが、そのいずれかの場合も置換基Ｙ
の少なくとも１つは電子求引性である。この発明
の説明において関連する電子求引性基はジエノフ
イルをジエンと反応するよう活性化する基であ
る。このような活性化基はこの分野で周知であり
（例えば、M.C.クロエツエル、オルガニツクリア
クシヨンズ、第５巻、２〜４ページ、H.L.ホル
メス、オルガニツクリアクシヨンズ、第５巻、65
ページ参照）、例えば、ケト、シアノ、ニトロ、
Ｏ−アルキル、Ｏ−アシル、ハロゲン、アリー
ル、カルボキシアルデヒド、カルボン酸、アルキ
ルカルボン酸、カルボキサアミド、またはイミ
ド、またはジカルボン酸の無水物などが含まれ
る。 好適なジエノフイルの詳細な例はアクリル酸お
よびそのアルキルエステル、アクリルアミドおよ
びアクリロニトリル、プロピオル酸およびそのア
ルキルエステルまたはアセチレンジカルボン酸お
よびそのモノ−またはジ−アルキルエステルのよ
うなアセチレン酸およびエステル、無水マレイン
酸、マレイミド、Ｎ−置換マレイミドおよびマレ
イン酸モノ−またはジーアルキルエステルのよう
なマレイン酸およびその誘導体、ベンゾキノンま
たはナフトキノンのようなキノン、およびＮ(4)−
アルキル−またはN4−アリール−置換トリアゾ
リン−３，５−ジオン、ジアゾ−ｐ−ベンゾキノ
ン、ジアゾ−ｐ−ナフトキノン、またはアゾジカ
ルボン酸のアルキルエステルのようなジジアゼン
−ジエノフイルである。 大規模の操作用にはマレイン酸およびその誘導
体のようなジエノフイル、例えば無水マレイン酸
は低価格および反応混合物から得られた付加体を
脱水／抽出仕上げ（後述）により除去できる能力
の故に特に有用である。その他の好ましいジエノ
フイルにはアセチレンジカルボン酸およびそのエ
ステル、およびＮ(4)−アルキルまたはフエニル置
換トリアゾリン−３，５−ジオンが含まれる。ジ
アゾ−ｐ−ベンゾキノンまたはジアゾナフトキノ
ンジエノフイルも本発明の目的に対して有用であ
るけれども、極度に高い反応性の故にシスおよび
トランスビタミンＤ化合物の付加体形成に差別を
生生じさせるには反応を極度に低い温度で行わせ
る必要があり、利点が少なくなる。 上述のジエノフイルとシス／トランスビタミン
Ｄ化合物との反応は有機溶媒中のビタミン混合物
中へジエノフイルを添加することにより行われ
る。５，６−シスおよびトランスビタミンＤはそ
のような混合物中で相互にいかなる相対比率でも
存在し得ることに留意すべきである。 トランス−ビタミンの完全な反応を確実にする
ため、ジエノフイル試薬は存在する５，６−トラ
ンス化合物の既知（または評価）量の1.5〜５倍
に及び過剰量添加される。好適な溶媒は炭化水
素、塩素化炭化水素、低分子量エーテルまたは低
分子量酸またはエステル溶媒であり、具体例とし
てはベンゼン、ヘキサン、トルエン、クロロベン
ゼン、エチルエーテルまたは酢酸エチルが含まれ
る。上に指摘したように、ジエノフイルは５，６
−トランス化合物の存在評価量の１，５〜５倍量
添加するのが有利利である。反応は広い温度範
囲、例えば約−50℃から使用溶媒の沸点までの範
囲で行なわせることができ、時間は存在する５，
６−トランス化合物の全量が反応するに十分な時
間である。ジエノフイルの反応性に依存して特定
の温度および時間が選ばれる。高度の反応性のジ
エノフイルには上記範囲の低い方の温度が適して
おり、低反応性には高い温度範囲が好ましい。反
応に必要な時間もまたジエノフイルの反応性によ
つて左右され、数分から数時間の間に変動する。 例えば、シス／トランスビタミンＤ混合物と反
応性のジエノフイル４−フエニル−トリアゾリン
−３，５−ジオンの反応について適した反応条件
は約２〜３倍の過剰試薬を用い０〜10℃で１〜２
時間となる。シス／トランスビタミン混合物と若
干反応性の低い試薬である無水マレイン酸との反
応に対する適切な条件はジエノフイル４倍過剰量
を用いて30〜40℃の温度で約12〜24時間である。
より高温、例えば50〜60℃では反応は１〜２時間
以内で完了し、約80℃では10〜20分の反応時間が
適当となる。一般に、ある与えられたジエノフイ
ルに対する適切な反応条件（例えば時間と温度）
は単に少量のシス／トランスビタミンＤ混合物を
そのジエノフイルで処理し、反応の進行（すなわ
ち、トランス−化合物との反応の完了度）を反応
液の分析（例えば、薄層クロマトグラフイーまた
は高性能液体クロマトグラフイー）によつてチエ
ツクすることにより容易に決定される。シス／ト
ランスビタミンＤ化合物とジエノフイルの不当に
長い時間の反応は明らかに目的の５，６−シス−
ビタミンＤ化合物のジエノフイルとの反応（付加
体形成）のために生じる損失を防ぐために避ける
べきである。 ジエノフイルによる処理後の化合物混合物は下
記の構造式に示されるような５，６−トランス化
合物のデイールス−アルダ−付加体および未反応
の５，６−シス化合物からなる。

【式】および

【式】 ここに、ＲおよびX₁およびX₂は上記で定義し
た置換基を表わし、Ｚは炭素または窒素であり、
反応に使用したジエノフイルに応じて単結合また
は二重結合となつていて結合していてもよく、
Y₁、Y₂、Y₃およびY₄は上記で定義した意味をも
つているが、例外として、当業者自明のように、
Ｚが窒素または二重結合の炭素である場合はY₃
およびY₄は不在となる。 例えば、５，６−トランス化合物と無水マレイ
ン酸、ジメチルアセチレンジカルボン酸および４
−フエニルトリアゾリン−３，５−ジオンの反応
ではそれぞれ下記の構造式により特徴づけられた
付加体が得られる。

【式】

【式】

【式】 ５，６−シス異性体とクロマトグラフイー的に
非常に類似している遊離５，６−トランス化学物
と異つてトランス化合物のデイールス−アルダー
付加体は上記の構造式を見て容易に明らかなよう
に、実質的に変質されており、従つて遊離の５，
６−シス化合物とクロマトグラフイー的に非常に
異つた挙動をする。それゆえ、このような付加体
はクロマトグラフイーにより、例えばシリカゲル
カラム上にあるいは分取高圧液体クロマトグラフ
イーにより遊離の５，６−シス−化合物から容易
に分離される。特に大規模の調製においてさらに
大きい利点は遊離の５，６−シス化合物から簡単
な溶媒抽出により付加体が分離されることであ
る。このことは、上記デイールス−アルダー反応
に使用されるジエノフイルが酸性官能基（例え
ば、フエノール性または酸官能基）または容易に
カルボキシレート基にけん化され得るエステルま
たは無水物ごとき官能基を含有するもであれば常
に可能である。これにより５，６−トランス−ビ
タミン−付加体は希釈した塩基を含有する有機相
での抽出により５，６−シス−ビタミンから除去
され得る。例えば、シス／トランスビタミンＤ混
合物の無水マレイン酸を用いる処理で、遊離の
５，６−シス−ビタミンＤ化合物と５，６−トラ
ンス化合物の無水マレイン酸付加体の混合物が得
られる。この反応生成混合物は次いで水酸化アル
カリ金属（例えば、NaOHまたはKOH）水溶液
で処理して無水物付加体をけん化して相当して相
当のジカルボン酸塩にすることができる。得られ
た水溶性の付加体−ジカルボン酸塩誘導体は次い
で塩基性溶液対非混和性有機溶媒の簡単な溶液分
配により有機溶媒可溶性の５，６−シス−1α−
ヒドロキシビタミンＤ化合物から容易に分離され
る。有機相に保持された目的の1α−ヒドロキシ
−５，６−シス−ビタミンＤ生成物は次いで溶媒
の蒸発によつて単離され、もし必要ならば、在来
の方式、すなわち、クロマトグラフイーおよび／
または結晶化法によりさらに精製される。他方、
所望でない５，６−トランス−ビタミンＤ付加体
カルボン酸塩は混合物のイオン交換樹脂を用いる
標準的な処理（または通過）法により遊離の1α
−ヒドロキシビタミンＤ化合物から除去すること
ができ、これにより遊離の1α−ヒドロキシビタ
ミンＤ化合物が回収され、もし必要ならば、さら
に精製される。 上述の1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物の調
製方法は５，６−シスおよびトランス−異性体の
いかなる混合物にもその混合物合成法に関係なく
有効に適用できることは特記されるべきである。
この新しい方法は５，６−シス、およびトランス
−異性体混合物の直接分離（例えばクロマトグラ
フイー法）が特に困難な場合に特に有用である。
このことは、例えば、上記した５，６−シスおよ
びトランス化合物の構造における置換基X₁およ
びX₂が同じまたは非常に類似した場合（例えば、
X₁およびX₂がともに水素またはともにアシル基
である場合）においても事実である。これに加え
て、この新しい方法が大規模（商業規模）で行わ
れるすべての調製作業において有利に適用され得
ることは明白である。また、もし必要ならば、上
記のジエノフイルを用いた分離操作を同じ調製法
にくり返し適用できることも明白である。例え
ば、もし本発明方法により得られた5α−ヒドロ
キシビタミンＤ生成物が目的としない５，６−ト
ランス−異性体の残存量を若干含有すること（例
えば、反応時間が不十分であつた場合などにあり
得る）がわかつた場合、そのような好ましくない
残留物を除去するため、この生成物を上記の処方
に従つて再度同じかまたは異つたジエノフイルで
簡単に処理することができよう。 例 １ 酢酸エチル（25ml）に溶解した５，６−シス−
および５，６−トランス−1α−ヒドロキシビタ
ミンD₃（トランス化合物を約20−25％含有する）
混合物（１ｇ）再結晶無水マレイン酸（存在する
５，６−トランス−ビタミン化合物に対しモル比
４倍量）で処理し、窒素中で24時間35℃に加温し
た。次いで、溶媒を真空下で除去し、NaOHの
10％水溶液（25ml）を加えて５，６−トランス化
合物の無水物付加体を加水分解した。15分後に混
合物をエーテルで抽出し、そのエーテル抽出物を
10％NaOH、水および食塩水で洗浄し、MgSO₄
上で乾燥した。溶媒を真空下で除去し、結果の残
留物をシリカゲルカラム（２×30cm）にかけ、生
成物を酢酸エチル／ヘキサン混合液（酢酸エチル
10％含有の500ml）、次いで30％の500ml、50％の
500ml（％はヘキサン中の酢酸エチル％）により
溶離させた。目的の1α−ヒドロキシ−５，６−
シス−ビタミンD₃を含有する各画分は一括し、
溶媒を蒸発させた後、結果の油の一部をギ酸メチ
ルから結晶化させた。同じ溶媒から２回の再結晶
化後に結晶1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビ
タミンD₃、融点135−37゜が得られた。 例 ２ 1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₃3
−アセテートと1α−ヒドロキシ−５，６−トラ
ンス−ビタミンD₃3−アセテート（トランス異性
体を約30％含有）の混合物（0.75ｇ）を酢酸エチ
ル25mlに溶解し、過剰の無水マレイン酸（存在す
る５，６−トランス異性体の評価量のモル比約４
倍量）で処理した。35℃で24時間後、溶媒を真空
下で除去し、水酸化ナトリウムの10％水溶液（25
ml）をを加え、その混合物を10−20分間撹拌して
５，６−トランス−化合物の無水物付加体をけん
化した。（このけん化はまたアセチル基を除去す
る。）この混合物を分液漏斗に移してくりかえし
エーテルで抽出し、エーテル抽出物は統合して
NaOHの10％水溶液、水および飽和NaCl−溶液
で洗浄し、次いで乾燥した（MgSO₄）。溶媒を蒸
発させ、目的の1α−ヒドロキシ−５，６−シス
−ビタミンD₃生成物をシリカゲルカラム上での
クロマトグラフイー（酢酸エチル／ヘキサン混合
液で溶離）により、次いで分取TLC（50％酢酸エ
チル／ヘキサン）により精製し、290mgの1α−ヒ
ドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₃を得た。 例 ３ 酢酸エチル10ml中の５，６−シスおよびトラン
ス1α−ヒドロキシビタミンD₃（トランス化合物を
約20−25％含有）混合物（840mg）を無水マレイ
ン酸820mgで窒素下55℃において90分間処理した。
溶媒を蒸発させて、残留物をNaOH水溶液で
（20分間、室温）処理した後、混合物をくり返し
エーテルで抽出し、その有機相をH₂Oおよび飽
和NaCl溶液で洗浄し、次いでMgSO₄上で乾燥
し、ろ過後溶媒を蒸発させた。残留物（目的の
1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₃化
合物を含有する）は３×27のフロリシル
（Florisil）カラム上のクロマトグラフイーにかけ
た。15％酢酸エチル含有ヘキサン300mlを通過さ
せた後、生成物（1α−ヒドロキシ−５，６−シ
ス−ビタミンD₃）を25％酢酸エチル含有ヘキサ
ンで溶離した。溶媒の蒸発が無色油440mgを与え
たが、これはギ酸メチルから結晶化して1α−ヒ
ドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₃生成物の
結晶を与えた。 例 ４ 1α−ヒドロキシ−５，６−シス−ビタミンD₃3
−アセテートと1α−ヒドロキシ−５，６−トラ
ンス−ビタミンD₃3−アセテートの約１：１混合
物をヘキサン中に溶解し、モル比1.5倍（存在す
るトランス−化合物に対し）の４−フエニルトリ
アゾリン−３，５−ジオン（１mg／酢酸エチル溶
液１ml）で処理した。生じた混合物は０〜10℃に
おいて65分間反応させた。過剰の試薬はイソプレ
ンの添加により消費させ、その混合物を直接クロ
マトグラフイーにかけ1α−ヒドロキシ−５，６
−シス−ビタミンD₃結晶を得た。