JPH04349889A - 細胞処理方法 - Google Patents
細胞処理方法Info
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- JPH04349889A JPH04349889A JP15256791A JP15256791A JPH04349889A JP H04349889 A JPH04349889 A JP H04349889A JP 15256791 A JP15256791 A JP 15256791A JP 15256791 A JP15256791 A JP 15256791A JP H04349889 A JPH04349889 A JP H04349889A
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- 238000003693 cell processing method Methods 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 17
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞処理方法、特に、
細胞にＤＮＡの注入等を行うための細胞処理方法に関す
る。
細胞にＤＮＡの注入等を行うための細胞処理方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】たとえば、培養細胞中にキャピラリーを
刺入して、細胞中にＤＮＡ等の外来物質を注入したり、
細胞内物質を吸引したり、また、細胞内あるいは細胞表
面の電圧測定を行ったりする場合、細胞をホールドピペ
ットにより捕捉して、細胞の刺入部位がキャピラリー側
に対向するように細胞の向きを変える。そして、前記刺
入部位にキャピラリーを刺入することによって、注入等
の処理を行う。
刺入して、細胞中にＤＮＡ等の外来物質を注入したり、
細胞内物質を吸引したり、また、細胞内あるいは細胞表
面の電圧測定を行ったりする場合、細胞をホールドピペ
ットにより捕捉して、細胞の刺入部位がキャピラリー側
に対向するように細胞の向きを変える。そして、前記刺
入部位にキャピラリーを刺入することによって、注入等
の処理を行う。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】前記注入等の細胞処理
の際には、一般にマイクロマニピュレータが用いられる
が、顕微鏡視野下での操作のため、極めて熟練した技術
が要求され、一般の研究者にとってその処理は容易では
ない。
の際には、一般にマイクロマニピュレータが用いられる
が、顕微鏡視野下での操作のため、極めて熟練した技術
が要求され、一般の研究者にとってその処理は容易では
ない。
【０００４】本発明の目的は、注入等の細胞処理を容易
に行える細胞処理方法を提供することにある。
に行える細胞処理方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明に係る細胞処理方
法は、以下の工程を含んでいる。 ◎対向電極間に処理すべき細胞を含む液を導入する。 ◎前記対向電極間に交流電圧を印加して細胞によるパー
ルチェーンを形成する。 ◎前記交流周波数を変化させることにより細胞を回転さ
せて処理すべき細胞の所望部位を所望位置に配置する。 ◎前記所望部位にキャピラリーを刺入する。
法は、以下の工程を含んでいる。 ◎対向電極間に処理すべき細胞を含む液を導入する。 ◎前記対向電極間に交流電圧を印加して細胞によるパー
ルチェーンを形成する。 ◎前記交流周波数を変化させることにより細胞を回転さ
せて処理すべき細胞の所望部位を所望位置に配置する。 ◎前記所望部位にキャピラリーを刺入する。
【０００６】
【作用】本発明に係る細胞処理方法では、まず、処理す
べき細胞を含む液を対向電極間に導入する。そして、対
向電極間に交流電圧を印加する。すると、対向電極間に
おいて、細胞によるパールチェーンが形成される。
べき細胞を含む液を対向電極間に導入する。そして、対
向電極間に交流電圧を印加する。すると、対向電極間に
おいて、細胞によるパールチェーンが形成される。
【０００７】次に、交流周波数を変化させる。すると、
対向電極間でパールチェーンを形成した細胞が回転する
。そして、細胞の所望部位が所望位置に位置したところ
で、前記所望部位にキャピラリーを刺入し、ＤＮＡの注
入等の処理を行う。
対向電極間でパールチェーンを形成した細胞が回転する
。そして、細胞の所望部位が所望位置に位置したところ
で、前記所望部位にキャピラリーを刺入し、ＤＮＡの注
入等の処理を行う。
【０００８】この場合には、パールチェーンを形成した
各細胞は、交流電界の中でクーロン力により隣り合う細
胞に連結されている。このため、キャピラリーの刺入時
には、細胞が移動しにくくなっており、これにより注入
等の処理が容易に行える。また、交流電源の周波数の操
作により細胞の向きを変えるので、熟練した技術を必要
とせず、処理を容易に行える。
各細胞は、交流電界の中でクーロン力により隣り合う細
胞に連結されている。このため、キャピラリーの刺入時
には、細胞が移動しにくくなっており、これにより注入
等の処理が容易に行える。また、交流電源の周波数の操
作により細胞の向きを変えるので、熟練した技術を必要
とせず、処理を容易に行える。
【０００９】
【実施例】図１は、本発明の一実施例が適用されるマイ
クロマニピュレータを示している。図１において、この
マイクロマニピュレータは、ベース１上に載置された顕
微鏡２と、顕微鏡２の両側方に配置された１対の駆動装
置３，４とを有している。
クロマニピュレータを示している。図１において、この
マイクロマニピュレータは、ベース１上に載置された顕
微鏡２と、顕微鏡２の両側方に配置された１対の駆動装
置３，４とを有している。
【００１０】顕微鏡２は、その中央部に操作台６を有し
ており、操作台６には被処理物が入れられたシャーレ等
の容器７が載置されるようになっている。操作台６の下
方には対物レンズ８が配置されており、対物レンズ８の
下端部にテレビカメラ９が接続されている。操作台６は
、図示しない駆動機構によって水平方向及び上下方向に
駆動され得る。
ており、操作台６には被処理物が入れられたシャーレ等
の容器７が載置されるようになっている。操作台６の下
方には対物レンズ８が配置されており、対物レンズ８の
下端部にテレビカメラ９が接続されている。操作台６は
、図示しない駆動機構によって水平方向及び上下方向に
駆動され得る。
【００１１】駆動装置３，４は、ベース１上に載置され
た台１０と、台１０の上に取り付けられた粗動部１１と
、粗動部１１の上部に取り付けられた微動部１２とを主
に有している。粗動部１１は、図示しないステッピング
モータにより、台１０に対して数１０μｍ単位の動きを
垂直方向及び水平方向に行い得る。微動部１２は、電磁
方式により、垂直方向及び水平方向に１μｍ単位の動き
を行う得る。各微動部１２の顕微鏡２側端部には、垂直
方向及び水平方向に駆動されるアーム１３，１４が設け
られている。一方のアーム１３の先端には、ピックアッ
プキャピラリー１５が取り付けられている。ピックアッ
プキャピラリー１５は、容器７側に延びており、図２に
示すように先端に吸着孔１５ａを有している。また、ピ
ックアップキャピラリー１５の基端には、吸引ポンプか
ら延びるチューブの一端が接続されている（図示せず）
。他方のアーム１４の先端には、インジェクションキャ
ピラリー１６が取り付けられている。
た台１０と、台１０の上に取り付けられた粗動部１１と
、粗動部１１の上部に取り付けられた微動部１２とを主
に有している。粗動部１１は、図示しないステッピング
モータにより、台１０に対して数１０μｍ単位の動きを
垂直方向及び水平方向に行い得る。微動部１２は、電磁
方式により、垂直方向及び水平方向に１μｍ単位の動き
を行う得る。各微動部１２の顕微鏡２側端部には、垂直
方向及び水平方向に駆動されるアーム１３，１４が設け
られている。一方のアーム１３の先端には、ピックアッ
プキャピラリー１５が取り付けられている。ピックアッ
プキャピラリー１５は、容器７側に延びており、図２に
示すように先端に吸着孔１５ａを有している。また、ピ
ックアップキャピラリー１５の基端には、吸引ポンプか
ら延びるチューブの一端が接続されている（図示せず）
。他方のアーム１４の先端には、インジェクションキャ
ピラリー１６が取り付けられている。
【００１２】容器７内には、図２に示すように、１対の
対向電極２０が配置されている。各対向電極２０は、そ
の下部に配置された透明の絶縁板２１上に所定間隔を隔
てて固定されている。各電極２０には、交流電源２５が
接続されている。この交流電源２５は、周波数及び電圧
が可変となっている。
対向電極２０が配置されている。各対向電極２０は、そ
の下部に配置された透明の絶縁板２１上に所定間隔を隔
てて固定されている。各電極２０には、交流電源２５が
接続されている。この交流電源２５は、周波数及び電圧
が可変となっている。
【００１３】次に、前記マイクロマニピュレータを用い
た細胞処理方法を、その手順を示すフローチャート（図
３）にしたがって説明する。なお、ここでは、ＤＮＡ溶
液を細胞に注入する場合を例にとる。また、インジェク
ションキャピラリー１６内には、予めＤＮＡ溶液が吸入
されているものとする。
た細胞処理方法を、その手順を示すフローチャート（図
３）にしたがって説明する。なお、ここでは、ＤＮＡ溶
液を細胞に注入する場合を例にとる。また、インジェク
ションキャピラリー１６内には、予めＤＮＡ溶液が吸入
されているものとする。
【００１４】まず、図３のステップＳ１において、容器
７内に処理すべき細胞を含む細胞懸濁液を導入する。な
お、この細胞懸濁液のイオン濃度は、電圧印加時の発熱
を抑制するために低目に設定しておく。次に、ステップ
Ｓ２において、交流電源２５からの交流電圧を各電極２
０間に印加する。印加する電圧は１０〜５００Ｖ／ｃｍ
の範囲で、また周波数は５００ＫＨｚ〜５ＭＨｚの
範囲で、処理すべき細胞の種類等に応じて適宜調節する
。 この交流電圧の印加により、図２に示すように、対向電
極２０間において各細胞２６が互いに連結して成長し、
パールチェーンを形成する。なお、このパールチェーン
を形成する細胞の数としては、１０個以上が好ましい。 また、両端の細胞が必ずしも各電極２０上に接触してい
なくてもよい。
７内に処理すべき細胞を含む細胞懸濁液を導入する。な
お、この細胞懸濁液のイオン濃度は、電圧印加時の発熱
を抑制するために低目に設定しておく。次に、ステップ
Ｓ２において、交流電源２５からの交流電圧を各電極２
０間に印加する。印加する電圧は１０〜５００Ｖ／ｃｍ
の範囲で、また周波数は５００ＫＨｚ〜５ＭＨｚの
範囲で、処理すべき細胞の種類等に応じて適宜調節する
。 この交流電圧の印加により、図２に示すように、対向電
極２０間において各細胞２６が互いに連結して成長し、
パールチェーンを形成する。なお、このパールチェーン
を形成する細胞の数としては、１０個以上が好ましい。 また、両端の細胞が必ずしも各電極２０上に接触してい
なくてもよい。
【００１５】次に、ステップＳ３において、交流電源２
５の周波数を変化させる。パールチェーンを形成した細
胞２６は、この周波数の変化によって回転を始める。そ
して、処理すべき細胞２６の所望部位が適切な位置、た
とえばインジェクションキャピラリー４との対向位置に
一致したところで、交流周波数をステップＳ２での設定
値に戻す。これにより、パールチェーンを形成した状態
で細胞２６が停止する。
５の周波数を変化させる。パールチェーンを形成した細
胞２６は、この周波数の変化によって回転を始める。そ
して、処理すべき細胞２６の所望部位が適切な位置、た
とえばインジェクションキャピラリー４との対向位置に
一致したところで、交流周波数をステップＳ２での設定
値に戻す。これにより、パールチェーンを形成した状態
で細胞２６が停止する。
【００１６】次に、駆動装置４を駆動して、インジェク
ションキャピラリー１６を容器７内に配置させる。そし
て、駆動装置４の駆動により、インジェクションキャピ
ラリー１６の先端を、細胞２６の前記所望部位に刺入し
、インジェクションキャピラリー１６内のＤＮＡ溶液を
細胞２６内に注入する。これにより、ＤＮＡ溶液の注入
処理が完了する。
ションキャピラリー１６を容器７内に配置させる。そし
て、駆動装置４の駆動により、インジェクションキャピ
ラリー１６の先端を、細胞２６の前記所望部位に刺入し
、インジェクションキャピラリー１６内のＤＮＡ溶液を
細胞２６内に注入する。これにより、ＤＮＡ溶液の注入
処理が完了する。
【００１７】この場合には、パールチェーンを形成して
いる処理すべき細胞２６は、交流電界の中でクーロン力
により隣り合う細胞に連結されている。このため、イン
ジェクションキャピラリー１６の刺入時に細胞２６が容
易に動くことなく、インジェクションキャピラリー１６
の刺入が容易に行われる。また、処理すべき細胞２６の
所望部位をインジェクションキャピラリー１６側に向け
る際に、交流電源２５の周波数の操作により行うため、
熟練した技術を必要とせず、容易に処理が行える。
いる処理すべき細胞２６は、交流電界の中でクーロン力
により隣り合う細胞に連結されている。このため、イン
ジェクションキャピラリー１６の刺入時に細胞２６が容
易に動くことなく、インジェクションキャピラリー１６
の刺入が容易に行われる。また、処理すべき細胞２６の
所望部位をインジェクションキャピラリー１６側に向け
る際に、交流電源２５の周波数の操作により行うため、
熟練した技術を必要とせず、容易に処理が行える。
【００１８】次に、ステップＳ５において、交流電源２
５をオフにするとともに、駆動装置３の駆動により、ピ
ックアップキャピラリー１５を容器７内に入れ、処理後
の細胞２６に接近させる。そして、図示しないポンプの
駆動により、ピックアップキャピラリー１５先端に処理
後の細胞２６を吸着させ、細胞２６を容器７外部に取り
出す。
５をオフにするとともに、駆動装置３の駆動により、ピ
ックアップキャピラリー１５を容器７内に入れ、処理後
の細胞２６に接近させる。そして、図示しないポンプの
駆動により、ピックアップキャピラリー１５先端に処理
後の細胞２６を吸着させ、細胞２６を容器７外部に取り
出す。
【００１９】なお、前記実施例では、１対の対向電極２
０と、これに接続された交流電源２５を用いて細胞処理
を行う場合を示したが、本発明が適用される装置はこれ
に限定されず、たとえば、図４に示すようなものであっ
てもよい。
０と、これに接続された交流電源２５を用いて細胞処理
を行う場合を示したが、本発明が適用される装置はこれ
に限定されず、たとえば、図４に示すようなものであっ
てもよい。
【００２０】図４では、２対の対向電極３０，３１が互
いに直交して配置されている。各対向電極には、それぞ
れ交流電源３２，３３が接続されている。各交流電源３
２，３３は、交流電源２５と同様に電圧及び周波数が可
変となっているが、その位相はそれぞれ異なっている。 この装置を用いて細胞処理を行う際には、たとえば対向
電極３０間に交流電源３２から交流電圧を印加し、処理
すべき細胞３４を対向電極３０間に配列させる。そして
、わずかに細胞３４を回転させたいときには、対向電極
３０における周波数を変化させる。また、大きく細胞３
４を回転させたいときには対向電極３１にも交流電圧を
印加する。
いに直交して配置されている。各対向電極には、それぞ
れ交流電源３２，３３が接続されている。各交流電源３
２，３３は、交流電源２５と同様に電圧及び周波数が可
変となっているが、その位相はそれぞれ異なっている。 この装置を用いて細胞処理を行う際には、たとえば対向
電極３０間に交流電源３２から交流電圧を印加し、処理
すべき細胞３４を対向電極３０間に配列させる。そして
、わずかに細胞３４を回転させたいときには、対向電極
３０における周波数を変化させる。また、大きく細胞３
４を回転させたいときには対向電極３１にも交流電圧を
印加する。
【００２１】この場合には、互いに直交する方向から細
胞に交流電圧を印加し得るので、細胞の大きな回転量が
容易に得られ、処理が一層容易になる。
胞に交流電圧を印加し得るので、細胞の大きな回転量が
容易に得られ、処理が一層容易になる。
【００２２】
【発明の効果】本発明に係る細胞処理方法によれば、交
流周波数の変化により、パールチェーンを形成した細胞
を回転させて所望位置に配置するので、細胞の所望部位
へのキャピラリーの刺入が容易に行え、細胞処理を容易
に行える。
流周波数の変化により、パールチェーンを形成した細胞
を回転させて所望位置に配置するので、細胞の所望部位
へのキャピラリーの刺入が容易に行え、細胞処理を容易
に行える。
【図１】本発明の一実施例による細胞処理方法が適用さ
れるマイクロマニピュレータの概略図。
れるマイクロマニピュレータの概略図。
【図２】前記マイクロマニピュレータの電極部分の斜視
概略図。
概略図。
【図３】前記実施例の手順を示すフローチャート。
【図４】前記電極部分の他の例を示す概略平面図。
１６ インジェクションキャピラリー２０ 対向電
極 ２５ 交流電源 ２６ 細胞
極 ２５ 交流電源 ２６ 細胞
Claims (1)
- 【請求項１】対向電極間に処理すべき細胞を含む液を導
入する工程と、前記対向電極間に交流電圧を印加して前
記細胞によるパールチェーンを形成する工程と、前記交
流周波数を変化させることにより前記細胞を回転させて
処理すべき細胞の所望部位を所望位置に配置する工程と
、前記所望部位にキャピラリーを刺入する工程と、を含
む細胞処理方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15256791A JPH04349889A (ja) | 1991-05-27 | 1991-05-27 | 細胞処理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15256791A JPH04349889A (ja) | 1991-05-27 | 1991-05-27 | 細胞処理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04349889A true JPH04349889A (ja) | 1992-12-04 |
Family
ID=15543308
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15256791A Pending JPH04349889A (ja) | 1991-05-27 | 1991-05-27 | 細胞処理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04349889A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006087890A1 (ja) * | 2005-02-15 | 2006-08-24 | Kochi University Of Technology | 電極対式非接触型マニピュレーション装置並びにマニピュレーション方法 |
| WO2007116771A1 (ja) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | Absize Inc. | 細胞融合用チップ |
| US7479388B2 (en) | 2004-04-28 | 2009-01-20 | Fujitsu Limited | Apparatus for injecting solution into cell |
-
1991
- 1991-05-27 JP JP15256791A patent/JPH04349889A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7479388B2 (en) | 2004-04-28 | 2009-01-20 | Fujitsu Limited | Apparatus for injecting solution into cell |
| WO2006087890A1 (ja) * | 2005-02-15 | 2006-08-24 | Kochi University Of Technology | 電極対式非接触型マニピュレーション装置並びにマニピュレーション方法 |
| EP1854870A1 (en) * | 2005-02-15 | 2007-11-14 | Kochi University of Technology | Electrode pair noncontact manipulation device and manipulation method |
| EP1854870A4 (en) * | 2005-02-15 | 2009-04-15 | Univ Kochi Technology | CONTACTLESS MANIPULATION DEVICE WITH ELECTRODE PAIR AND HANDLING METHOD |
| WO2007116771A1 (ja) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | Absize Inc. | 細胞融合用チップ |
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