JPH04325093A - 耐熱性ヒダントイナーゼ、及びそれをコードする遺伝子 - Google Patents
耐熱性ヒダントイナーゼ、及びそれをコードする遺伝子Info
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は５−置換ヒダントインか
ら対応するＮ−カルバミル−アミノ酸を製造する方法に
関する。Ｎ−カルバミル−アミノ酸はアミノ酸の原料で
ある。 （Ｒはヒダントイン残基）
ら対応するＮ−カルバミル−アミノ酸を製造する方法に
関する。Ｎ−カルバミル−アミノ酸はアミノ酸の原料で
ある。 （Ｒはヒダントイン残基）
【０００２】
【従来の技術】従来、５−置換ヒダントインをＬ−アミ
ノ酸に変換する微生物としては、フラボバクテリウム属
（特開昭５２−１８８８７）、アリスロバクター属（特
開昭６０−２１４８８９）、バチルス属（特開昭６３−
２４８９５）、シュードモナス属（特開昭６４−７１４
７６）に属する細菌が知られている。５−置換ヒダント
インをＬ−アミノ酸に変換するには、ヒダントイナーゼ
、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼが必要である。これらの
微生物のヒダントイナーゼは中温度に至適温度があり、
中性付近に至適ｐＨがある。本発明者らの研究によると
、好熱性細菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅ
ｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２Ａ（ＦＥＲＭＢＰ
−３１５４）による５−置換ヒダントインからのＬ−ア
ミノ酸への変換反応は、塩基性溶液中で７０℃付近に至
適温度がある。即ち、ＮＳ１１２２Ａ菌は、塩基性溶液
中で活性のある耐熱性のヒダントイナーゼ、及びＬ−Ｎ
−カルバミラーゼを持つものと考えられている（特願平
２−３０７２２２）。この菌株のＬ−Ｎ−カルバミラー
ゼ遺伝子については既にクローニングされている（特願
平２−３０７２２１）。
ノ酸に変換する微生物としては、フラボバクテリウム属
（特開昭５２−１８８８７）、アリスロバクター属（特
開昭６０−２１４８８９）、バチルス属（特開昭６３−
２４８９５）、シュードモナス属（特開昭６４−７１４
７６）に属する細菌が知られている。５−置換ヒダント
インをＬ−アミノ酸に変換するには、ヒダントイナーゼ
、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼが必要である。これらの
微生物のヒダントイナーゼは中温度に至適温度があり、
中性付近に至適ｐＨがある。本発明者らの研究によると
、好熱性細菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅ
ｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２Ａ（ＦＥＲＭＢＰ
−３１５４）による５−置換ヒダントインからのＬ−ア
ミノ酸への変換反応は、塩基性溶液中で７０℃付近に至
適温度がある。即ち、ＮＳ１１２２Ａ菌は、塩基性溶液
中で活性のある耐熱性のヒダントイナーゼ、及びＬ−Ｎ
−カルバミラーゼを持つものと考えられている（特願平
２−３０７２２２）。この菌株のＬ−Ｎ−カルバミラー
ゼ遺伝子については既にクローニングされている（特願
平２−３０７２２１）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ヒダントイナーゼ、及
びＬ−Ｎ−カルバミラーゼを用いることにより、５−置
換ヒダントインを対応するＬ−アミノ酸へ変換すること
が可能である。 しかしながら、従来のヒダントイナ
ーゼ、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼを有する微生物では
酵素生産量が少なかった。また、遺伝子組換えの技術に
より酵素の生産量を高めても、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２
Ａ菌以外の微生物の酵素では耐熱性が低く、至適ｐＨが
中性付近にあることから、使用し得る条件下では、５−
置換ヒダントインの化学的ラセミ化が起こり難く、Ｄ−
５−置換ヒダントインが利用され難い。さらに生成する
Ｌ−アミノ酸の溶解度も低いため、効率的なＬ−アミノ
酸生産は期待できないものであった。本発明は、この様
な課題を解決するために、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅ
ａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２Ａ菌
から耐熱性ヒダントイナーゼの遺伝子をクローニングし
、遺伝子増幅、転写翻訳活性を高めることにより、耐熱
性ヒダントイナーゼを大量に得ることを目的とするもの
である。
びＬ−Ｎ−カルバミラーゼを用いることにより、５−置
換ヒダントインを対応するＬ−アミノ酸へ変換すること
が可能である。 しかしながら、従来のヒダントイナ
ーゼ、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼを有する微生物では
酵素生産量が少なかった。また、遺伝子組換えの技術に
より酵素の生産量を高めても、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２
Ａ菌以外の微生物の酵素では耐熱性が低く、至適ｐＨが
中性付近にあることから、使用し得る条件下では、５−
置換ヒダントインの化学的ラセミ化が起こり難く、Ｄ−
５−置換ヒダントインが利用され難い。さらに生成する
Ｌ−アミノ酸の溶解度も低いため、効率的なＬ−アミノ
酸生産は期待できないものであった。本発明は、この様
な課題を解決するために、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅ
ａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２Ａ菌
から耐熱性ヒダントイナーゼの遺伝子をクローニングし
、遺伝子増幅、転写翻訳活性を高めることにより、耐熱
性ヒダントイナーゼを大量に得ることを目的とするもの
である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ Ｎ
Ｓ１１２２Ａ菌のヒダントイナーゼ遺伝子、それを含む
ＤＮＡ断片、そのＤＮＡ断片を組み込んだベクターＤＮ
Ａ、そのベクターＤＮＡにより形質転換された微生物、
該微生物を使用するＮ−カルバミル−アミノ酸の製造方
法、該微生物から調製したヒダントイナーゼ、本ヒダン
トイナーゼによるＮ−カルバミル−アミノ酸の製造方法
、及び本ヒダントイナーゼとＬ−Ｎ−カルバミラーゼを
使用したＬ−アミノ酸の製造方法である。なお、本発明
において、特に断わらない限り５−置換ヒダントイン、
及びＮ−カルバミル−アミノ酸は、各々Ｌ体、Ｄ体、Ｄ
Ｌ体の総称を意味する。以下に本発明について具体的に
説明する。
ｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ Ｎ
Ｓ１１２２Ａ菌のヒダントイナーゼ遺伝子、それを含む
ＤＮＡ断片、そのＤＮＡ断片を組み込んだベクターＤＮ
Ａ、そのベクターＤＮＡにより形質転換された微生物、
該微生物を使用するＮ−カルバミル−アミノ酸の製造方
法、該微生物から調製したヒダントイナーゼ、本ヒダン
トイナーゼによるＮ−カルバミル−アミノ酸の製造方法
、及び本ヒダントイナーゼとＬ−Ｎ−カルバミラーゼを
使用したＬ−アミノ酸の製造方法である。なお、本発明
において、特に断わらない限り５−置換ヒダントイン、
及びＮ−カルバミル−アミノ酸は、各々Ｌ体、Ｄ体、Ｄ
Ｌ体の総称を意味する。以下に本発明について具体的に
説明する。
【０００５】１）遺伝子のクローニングＢａｃｉｌｌｕ
ｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ
１１２２Ａ菌（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１５４）は、５−
置換ヒダントインをＮ−カルバミル−アミノ酸を経てＬ
−アミノ酸に変換する能力を持つ好熱性細菌である（特
願平２−３０７２２２）。この変換反応は本菌の有する
耐熱性のヒダントイナーゼ、及びＬ−Ｎ−カルバミラー
ゼによるものと推定される。本菌のＬ−Ｎ−カルバミラ
ーゼについては大腸菌のプラスミドベクターｐＵＣ１９
を用いて既にクローニングされており（ＪＭ１０５／ｐ
ＡＨＡ０８，ＦＥＲＭ ＢＰ−３１５５）、ＪＭ１０
５／ｐＡＨＡ０８により生産されたＬ−Ｎ−カルバミラ
ーゼは、種々のＬ−Ｎ−カルバミル−アミノ酸を対応す
るＬ−アミノ酸に変換することが明かとなっている（特
願平２−３０７２２１）。
ｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ
１１２２Ａ菌（ＦＥＲＭ ＢＰ−３１５４）は、５−
置換ヒダントインをＮ−カルバミル−アミノ酸を経てＬ
−アミノ酸に変換する能力を持つ好熱性細菌である（特
願平２−３０７２２２）。この変換反応は本菌の有する
耐熱性のヒダントイナーゼ、及びＬ−Ｎ−カルバミラー
ゼによるものと推定される。本菌のＬ−Ｎ−カルバミラ
ーゼについては大腸菌のプラスミドベクターｐＵＣ１９
を用いて既にクローニングされており（ＪＭ１０５／ｐ
ＡＨＡ０８，ＦＥＲＭ ＢＰ−３１５５）、ＪＭ１０
５／ｐＡＨＡ０８により生産されたＬ−Ｎ−カルバミラ
ーゼは、種々のＬ−Ｎ−カルバミル−アミノ酸を対応す
るＬ−アミノ酸に変換することが明かとなっている（特
願平２−３０７２２１）。
【０００６】このプラスミドｐＡＨＡ０８をクローニン
グベクターとし、５−置換ヒダントインを唯一の窒素源
とした寒天倍地でスクリーニングすることにより、ヒダ
ントイナーゼ遺伝子をクローニングすることができる。 すなわち、ヒダントイナーゼ遺伝子が挿入されたプラス
ミドを持ち、本遺伝子を発現する大腸菌形質転換株のみ
が、５−置換ヒダントインをＮ−カルバミル−アミノ酸
に変換し、さらにＬ−Ｎ−カルバミラーゼによりＬ−ア
ミノ酸に変換し、その際生じるアンモニアを窒素源とし
て生育できる。
グベクターとし、５−置換ヒダントインを唯一の窒素源
とした寒天倍地でスクリーニングすることにより、ヒダ
ントイナーゼ遺伝子をクローニングすることができる。 すなわち、ヒダントイナーゼ遺伝子が挿入されたプラス
ミドを持ち、本遺伝子を発現する大腸菌形質転換株のみ
が、５−置換ヒダントインをＮ−カルバミル−アミノ酸
に変換し、さらにＬ−Ｎ−カルバミラーゼによりＬ−ア
ミノ酸に変換し、その際生じるアンモニアを窒素源とし
て生育できる。
【０００７】プラスミドｐＡＨＡ０８のＬ−Ｎ−カルバ
ミラーゼ遺伝子の転写、翻訳に関与している領域の塩基
配列は明かとなっている。ヒダントイナーゼ遺伝子のク
ローニングに用いるベクタープラスミドとして、Ｌ−Ｎ
−カルバミラーゼ遺伝子の転写、翻訳に関与している領
域のみをプラスミドｐＵＣ１８にサブクローニングした
プラスミドｐＡＨＡ３０（４１３５塩基対）を用いた。 プラスミドｐＡＨＡ３０には、プラスミドｐＵＣ１８の
マルチクローニングサイト由来の制限酵素ＢａｍＨＩサ
イトが１ヶ所存在し、これをクローニングサイトとした
。
ミラーゼ遺伝子の転写、翻訳に関与している領域の塩基
配列は明かとなっている。ヒダントイナーゼ遺伝子のク
ローニングに用いるベクタープラスミドとして、Ｌ−Ｎ
−カルバミラーゼ遺伝子の転写、翻訳に関与している領
域のみをプラスミドｐＵＣ１８にサブクローニングした
プラスミドｐＡＨＡ３０（４１３５塩基対）を用いた。 プラスミドｐＡＨＡ３０には、プラスミドｐＵＣ１８の
マルチクローニングサイト由来の制限酵素ＢａｍＨＩサ
イトが１ヶ所存在し、これをクローニングサイトとした
。
【０００８】ＮＳ１１２２Ａ菌の全ＤＮＡを単離し、制
限酵素ＭｂｏＩで部分消化した後、制限酵素ＢａｍＨＩ
で消化したプラスミドｐＡＨＡ３０にＤＮＡリガーゼを
用いて連結し、組換体プラスミドＤＮＡを調製した。こ
れを用いて大腸菌を形質転換し、５−置換ヒダントイン
を唯一の窒素源とした寒天培地にまくことにより、目的
のヒダントイナーゼ遺伝子を持つ大腸菌を得ることが出
来る。
限酵素ＭｂｏＩで部分消化した後、制限酵素ＢａｍＨＩ
で消化したプラスミドｐＡＨＡ３０にＤＮＡリガーゼを
用いて連結し、組換体プラスミドＤＮＡを調製した。こ
れを用いて大腸菌を形質転換し、５−置換ヒダントイン
を唯一の窒素源とした寒天培地にまくことにより、目的
のヒダントイナーゼ遺伝子を持つ大腸菌を得ることが出
来る。
【０００９】選択培地上に形成されたコロニーをアンピ
シリン耐性を指標として培養し、培養菌体よりプラスミ
ドＤＮＡを調製した。プラスミドＤＮＡ溶液をそのまま
、及び数種の制限酵素で消化した後、アガロースゲル電
気泳動で分析した。その結果、ベクタープラスミドｐＡ
ＨＡ３０に約２．７キロ塩基対のＤＮＡが挿入された約
６．９キロ塩基対のプラスミドが存在することが明かと
なった。本プラスミドをｐＡＨＮ１０１と命名した。 プラスミドｐＡＨＮ１０１の制限酵素地図を第１図に示
した。
シリン耐性を指標として培養し、培養菌体よりプラスミ
ドＤＮＡを調製した。プラスミドＤＮＡ溶液をそのまま
、及び数種の制限酵素で消化した後、アガロースゲル電
気泳動で分析した。その結果、ベクタープラスミドｐＡ
ＨＡ３０に約２．７キロ塩基対のＤＮＡが挿入された約
６．９キロ塩基対のプラスミドが存在することが明かと
なった。本プラスミドをｐＡＨＮ１０１と命名した。 プラスミドｐＡＨＮ１０１の制限酵素地図を第１図に示
した。
【００１０】また、ｐＡＨＮ１０１で形質転換したＪＭ
１０５（ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１）、及びベクター
プラスミドｐＡＨＡ３０で形質転換したＪＭ１０５（Ｊ
Ｍ１０５／ｐＡＨＡ３０）の培養菌体を５５ｍＭ Ｄ
Ｌ−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントイン溶液（
０．２Ｍ 塩化アンモニウムバッファー、ｐＨ８．５
）に懸濁し、６０℃にて１０時間保温した。遠心上清を
ＨＰＬＣ（ＯＤＳ−８０ＴＭ、東ソー）を用いて分析し
た。ＪＭ１０５／ｐＡＨＡ３０を用いた反応でのＮ−カ
ルバミル−メチオニン、及びメチオニンの生成量は、５
５ｍＭ ５−（２−メチルチオエチル）ヒダントイン
溶液（０．２Ｍ 塩化アンモニウムバッファー、ｐＨ
８．５）のみを保温したものとほとんど差は無く、ほと
んどの５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインは残
存していた。
１０５（ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１）、及びベクター
プラスミドｐＡＨＡ３０で形質転換したＪＭ１０５（Ｊ
Ｍ１０５／ｐＡＨＡ３０）の培養菌体を５５ｍＭ Ｄ
Ｌ−５−（２−メチルチオエチル）ヒダントイン溶液（
０．２Ｍ 塩化アンモニウムバッファー、ｐＨ８．５
）に懸濁し、６０℃にて１０時間保温した。遠心上清を
ＨＰＬＣ（ＯＤＳ−８０ＴＭ、東ソー）を用いて分析し
た。ＪＭ１０５／ｐＡＨＡ３０を用いた反応でのＮ−カ
ルバミル−メチオニン、及びメチオニンの生成量は、５
５ｍＭ ５−（２−メチルチオエチル）ヒダントイン
溶液（０．２Ｍ 塩化アンモニウムバッファー、ｐＨ
８．５）のみを保温したものとほとんど差は無く、ほと
んどの５−（２−メチルチオエチル）ヒダントインは残
存していた。
【００１１】それに対し、ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１
による反応では２５ｍＭのＮ−カルバミル−メチオニン
、及び６ｍＭのメチオニンが検出され、ヒダントイナー
ゼ、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼ活性が認められた。 即ち、プラスミドｐＡＨＮ１０１にはベクター由来のＬ
−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子に加えて、ヒダントイナー
ゼ遺伝子がクローニングされていること、及び本遺伝子
は大腸菌中で活性のある酵素タンパク質として発現して
いることが明かとなった。
による反応では２５ｍＭのＮ−カルバミル−メチオニン
、及び６ｍＭのメチオニンが検出され、ヒダントイナー
ゼ、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼ活性が認められた。 即ち、プラスミドｐＡＨＮ１０１にはベクター由来のＬ
−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子に加えて、ヒダントイナー
ゼ遺伝子がクローニングされていること、及び本遺伝子
は大腸菌中で活性のある酵素タンパク質として発現して
いることが明かとなった。
【００１２】２）塩基配列の決定
ヒダントイナーゼ遺伝子を含むＤＮＡ断片をバクテリオ
ファージＭ１３ｍｐ１９に組換え、キロシークエンス用
デレーションキット（宝酒造）を用いて様々な大きさに
縮め、ジデオキシ法によって塩基配列を決定した。その
結果、配列表の第３４５番目塩基から第１７６０番目塩
基までのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が見
いだされた。本ＯＲＦの直前には大腸菌の１６ｓリボー
ゾムＲＮＡ結合配列（ＲＢＳ）が存在し（配列表の第３
３２番目から第３３６番目塩基）、さらに上流には２ヶ
所に大腸菌のプロモーター様の配列も存在した（配列表
の第１５０番目から１８０番目塩基、及び第２２０番目
から２４８番目塩基）。本ＯＲＦは配列表に示した第１
番目から第４７１番目のアミノ酸配列からなる分子量５
１，７２４のタンパク質をコードし得る。ヒダントイナ
ーゼを精製し、Ｎ末端アミノ酸配列分析を行った結果、
塩基配列から予想されるアミノ酸配列と一致した。
ファージＭ１３ｍｐ１９に組換え、キロシークエンス用
デレーションキット（宝酒造）を用いて様々な大きさに
縮め、ジデオキシ法によって塩基配列を決定した。その
結果、配列表の第３４５番目塩基から第１７６０番目塩
基までのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が見
いだされた。本ＯＲＦの直前には大腸菌の１６ｓリボー
ゾムＲＮＡ結合配列（ＲＢＳ）が存在し（配列表の第３
３２番目から第３３６番目塩基）、さらに上流には２ヶ
所に大腸菌のプロモーター様の配列も存在した（配列表
の第１５０番目から１８０番目塩基、及び第２２０番目
から２４８番目塩基）。本ＯＲＦは配列表に示した第１
番目から第４７１番目のアミノ酸配列からなる分子量５
１，７２４のタンパク質をコードし得る。ヒダントイナ
ーゼを精製し、Ｎ末端アミノ酸配列分析を行った結果、
塩基配列から予想されるアミノ酸配列と一致した。
【００１３】更に、ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１、及び
ヒダントイナーゼ遺伝子を持たないＪＭ１０５／ｐＡＨ
Ａ３０の菌体タンパク質を還元処理し、ＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動で分析したところ、分子量約
５３，０００のタンパク質がＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０
１のみに検出された。これは塩基配列から予想されるタ
ンパク質の分子量とほぼ一致した。以上の結果より本Ｏ
ＲＦがヒダントイナーゼ遺伝子であることが明かとなっ
た。また、本遺伝子は、ベクタープラスミドｐＡＨＡ３
０のｌａｃプロモーター、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼ
遺伝子のプロモーターと逆方向に挿入されていたことか
ら、上述した２ヶ所のプロモーター様配列の両方または
一方、及びＲＢＳにより転写、翻訳されているものと考
えられる。
ヒダントイナーゼ遺伝子を持たないＪＭ１０５／ｐＡＨ
Ａ３０の菌体タンパク質を還元処理し、ＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動で分析したところ、分子量約
５３，０００のタンパク質がＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０
１のみに検出された。これは塩基配列から予想されるタ
ンパク質の分子量とほぼ一致した。以上の結果より本Ｏ
ＲＦがヒダントイナーゼ遺伝子であることが明かとなっ
た。また、本遺伝子は、ベクタープラスミドｐＡＨＡ３
０のｌａｃプロモーター、及びＬ−Ｎ−カルバミラーゼ
遺伝子のプロモーターと逆方向に挿入されていたことか
ら、上述した２ヶ所のプロモーター様配列の両方または
一方、及びＲＢＳにより転写、翻訳されているものと考
えられる。
【００１４】
実施例１．バチルス属細菌ＮＳ１１２２Ａ菌（ＦＥＲＭ
ＢＰ−３１５４）の全ＤＮＡの調製１００ｍｌのＬ
Ｂ培地（１．０％ トリプトン、 ０．５％ イ
ーストエキストラクト、 １．０％ 塩化ナトリウ
ム、 ｐＨ７．４）にＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏ
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２Ａ菌を植菌
し、４２℃にて一晩振盪培養した。遠心により集菌し、
１０ｍｌの１０ｍＭ トリス塩酸、１ｍＭＥＤＴＡ、
１０ｍＭ 塩化ナトリウム、 ５０ｍｇ／ｍｌ
リゾチーム、ｐＨ８．０溶液に懸濁し、３７℃にて
１０分間保温した。これに１ｍｌの１０％ ＳＤＳを
加え、更に３７℃にて１０分間保温した。０．２２ｍｌ
の５Ｍ塩化ナトリウムを加えた後、ＴＥバッファー（１
０ｍＭ トリス塩酸、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）
で飽和したフェノールを等量加え緩やかに撹拌後、遠心
した（フェノール抽出）。ＤＮＡを含む水相を別の容器
に移し、同様にフェノール抽出を繰り返した。
ＢＰ−３１５４）の全ＤＮＡの調製１００ｍｌのＬ
Ｂ培地（１．０％ トリプトン、 ０．５％ イ
ーストエキストラクト、 １．０％ 塩化ナトリウ
ム、 ｐＨ７．４）にＢａｃｉｌｌｕｓｓｔｅａｒｏ
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＮＳ１１２２Ａ菌を植菌
し、４２℃にて一晩振盪培養した。遠心により集菌し、
１０ｍｌの１０ｍＭ トリス塩酸、１ｍＭＥＤＴＡ、
１０ｍＭ 塩化ナトリウム、 ５０ｍｇ／ｍｌ
リゾチーム、ｐＨ８．０溶液に懸濁し、３７℃にて
１０分間保温した。これに１ｍｌの１０％ ＳＤＳを
加え、更に３７℃にて１０分間保温した。０．２２ｍｌ
の５Ｍ塩化ナトリウムを加えた後、ＴＥバッファー（１
０ｍＭ トリス塩酸、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）
で飽和したフェノールを等量加え緩やかに撹拌後、遠心
した（フェノール抽出）。ＤＮＡを含む水相を別の容器
に移し、同様にフェノール抽出を繰り返した。
【００１５】更に、ＴＥ Ｂｕｆｆｅｒで飽和したフ
ェノール／クロロホルム（１：１）による抽出，クロロ
ホルム：イソアミルアルコール（２４：１）による抽出
を繰り返した。抽出後、ＤＮＡを含む水相を１０ｍＭ
トリス塩酸、１ｍＭＥＤＴＡ、１０ｍＭ 塩化ナト
リウム、ｐＨ８．０を用いて透析した。透析後、０．０
５ｍｌの１０ｍｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅＡを加え、３７
℃にて２時間保温し、更に０．０２５ｍｌの２０ｍｇ／
ｍｌのプロテアーゼＫを加え、３７℃にて１時間保温し
た。フェノール抽出・フェノール／クロロホルム抽出・
クロロホルム／イソアミルアルコール抽出を行った後、
２倍量のエタノールを加え、ガラス棒でゆるやかに撹拌
し、巻き付けることにより、ＤＮＡを回収した。これを
３ｍｌのＴＥバッファーに溶解した後、ＴＥバッファー
を用いて透析した。このＤＮＡ溶液をＮＳ１１２２Ａ菌
の全ＤＮＡ標品として組換体の作製に用いた。
ェノール／クロロホルム（１：１）による抽出，クロロ
ホルム：イソアミルアルコール（２４：１）による抽出
を繰り返した。抽出後、ＤＮＡを含む水相を１０ｍＭ
トリス塩酸、１ｍＭＥＤＴＡ、１０ｍＭ 塩化ナト
リウム、ｐＨ８．０を用いて透析した。透析後、０．０
５ｍｌの１０ｍｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅＡを加え、３７
℃にて２時間保温し、更に０．０２５ｍｌの２０ｍｇ／
ｍｌのプロテアーゼＫを加え、３７℃にて１時間保温し
た。フェノール抽出・フェノール／クロロホルム抽出・
クロロホルム／イソアミルアルコール抽出を行った後、
２倍量のエタノールを加え、ガラス棒でゆるやかに撹拌
し、巻き付けることにより、ＤＮＡを回収した。これを
３ｍｌのＴＥバッファーに溶解した後、ＴＥバッファー
を用いて透析した。このＤＮＡ溶液をＮＳ１１２２Ａ菌
の全ＤＮＡ標品として組換体の作製に用いた。
【００１６】実施例２．ベクタープラスミドｐＡＨＡ３
０の作製 ＮＳ１１２２Ａ菌のＬ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子を持
つプラスミドｐＡＨＡ０８で形質転換した大腸菌ＪＭ１
０５（ＪＭ１０５／ｐＡＨＡ０８、ＦＥＲＭＢＰ−３１
５５）の培養菌体から、アルカリ溶菌法によってプラス
ミドＤＮＡを調製した。これを制限酵素ＡａｔＩＩ、及
びＡｌｗＮＩで消化し、フェノール抽出、フェノール／
クロロホルム抽出を行い、エタノール沈澱を行った。Ｔ
４ ＤＮＡポリメラーゼ処理により平滑末端化し、フ
ェノール抽出、フェノール／クロロホルム抽出を行い、
エタノール沈澱を行った後、少量のＴＥバッファーに溶
解した。尚、ＡｌｗＮＩはＬ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝
子の開始コドンより１４２塩基上流を、ＡａｔＩＩは終
止コドンの７７塩基下流を消化する。両制限酵素で消化
することにより、Ｌ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子、及び
その転写、翻訳に必要な領域を含むＤＮＡ断片を得るこ
とが出来る。
０の作製 ＮＳ１１２２Ａ菌のＬ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子を持
つプラスミドｐＡＨＡ０８で形質転換した大腸菌ＪＭ１
０５（ＪＭ１０５／ｐＡＨＡ０８、ＦＥＲＭＢＰ−３１
５５）の培養菌体から、アルカリ溶菌法によってプラス
ミドＤＮＡを調製した。これを制限酵素ＡａｔＩＩ、及
びＡｌｗＮＩで消化し、フェノール抽出、フェノール／
クロロホルム抽出を行い、エタノール沈澱を行った。Ｔ
４ ＤＮＡポリメラーゼ処理により平滑末端化し、フ
ェノール抽出、フェノール／クロロホルム抽出を行い、
エタノール沈澱を行った後、少量のＴＥバッファーに溶
解した。尚、ＡｌｗＮＩはＬ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝
子の開始コドンより１４２塩基上流を、ＡａｔＩＩは終
止コドンの７７塩基下流を消化する。両制限酵素で消化
することにより、Ｌ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子、及び
その転写、翻訳に必要な領域を含むＤＮＡ断片を得るこ
とが出来る。
【００１７】別にプラスミドｐＵＣ１８を制限酵素Ｓｍ
ａＩで消化し、アルカリフォスファターゼ処理を行った
。フェノール抽出、フェノール／クロロホルム抽出を行
い、エタノール沈澱を行った後、少量のＴＥバッファー
に溶解した。ライゲーションキット（宝酒造）を用いて
、両ＤＮＡ断片を連結し、大腸菌ＪＭ１０５に形質転換
した。０．０５ｍｇ／ｍｌのアンピシリンを含んだＬＢ
（ＬＢａｍｐ）寒天培地にまき、３０℃で一晩保温した
。生育したコロニーをＬＢａｍｐ培養液で培養し、培養
菌体を用いて、プラスミドＤＮＡの調製、及びＬ−Ｎ−
カルバミル−メチオニン変換反応を行った。変換反応に
おいてＬ−メチオニンを生成した株のプラスミドＤＮＡ
を種々の制限酵素で消化し、アガロースゲル電気泳動で
分析することにより、プラスミドｐＡＨＡ０８のＡｌｗ
ＮＩからＡａｔＩＩまでの１，４４８塩基対のＤＮＡ断
片を含むプラスミドｐＡＨＡ３０を得た。プラスミドｐ
ＡＨＡ３０はプラスミドｐＵＣ１８のｌａｃプロモータ
ーと同方向にＬ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子が挿入され
ており、更にその下流にプラスミドｐＵＣ１８由来の制
限酵素ＢａｍＨＩサイトが存在する。
ａＩで消化し、アルカリフォスファターゼ処理を行った
。フェノール抽出、フェノール／クロロホルム抽出を行
い、エタノール沈澱を行った後、少量のＴＥバッファー
に溶解した。ライゲーションキット（宝酒造）を用いて
、両ＤＮＡ断片を連結し、大腸菌ＪＭ１０５に形質転換
した。０．０５ｍｇ／ｍｌのアンピシリンを含んだＬＢ
（ＬＢａｍｐ）寒天培地にまき、３０℃で一晩保温した
。生育したコロニーをＬＢａｍｐ培養液で培養し、培養
菌体を用いて、プラスミドＤＮＡの調製、及びＬ−Ｎ−
カルバミル−メチオニン変換反応を行った。変換反応に
おいてＬ−メチオニンを生成した株のプラスミドＤＮＡ
を種々の制限酵素で消化し、アガロースゲル電気泳動で
分析することにより、プラスミドｐＡＨＡ０８のＡｌｗ
ＮＩからＡａｔＩＩまでの１，４４８塩基対のＤＮＡ断
片を含むプラスミドｐＡＨＡ３０を得た。プラスミドｐ
ＡＨＡ３０はプラスミドｐＵＣ１８のｌａｃプロモータ
ーと同方向にＬ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子が挿入され
ており、更にその下流にプラスミドｐＵＣ１８由来の制
限酵素ＢａｍＨＩサイトが存在する。
【００１８】実施例３．組換体プラスミドの作製実施例
１．で得られた０．００４５ｍｇのＮＳ１１２２Ａ菌の
全ＤＮＡを０．３６単位の制限酵素ＭｂｏＩを用い、３
７℃で１時間処理することにより部分消化した。 フェノール抽出、フェノール／クロロホルム抽出を行っ
た後、エタノール沈澱し、組換体の作製に用いた。別に
実施例２．で作製した０．００２ｍｇのプラスミドｐＡ
ＨＡ３０を５０単位の制限酵素ＢａｍＨＩで消化した後
、アルカリフォスファターゼで処理した。フェノール抽
出、フェノール／クロロホルム抽出を行った後、エタノ
ール沈澱し、ベクターＤＮＡ断片を調製した。両者をラ
イゲーションキット（宝酒造）を用いて、常法に従って
ＤＮＡを結合させ、様々な挿入ＤＮＡを持つ組換体プラ
スミドを作製した。
１．で得られた０．００４５ｍｇのＮＳ１１２２Ａ菌の
全ＤＮＡを０．３６単位の制限酵素ＭｂｏＩを用い、３
７℃で１時間処理することにより部分消化した。 フェノール抽出、フェノール／クロロホルム抽出を行っ
た後、エタノール沈澱し、組換体の作製に用いた。別に
実施例２．で作製した０．００２ｍｇのプラスミドｐＡ
ＨＡ３０を５０単位の制限酵素ＢａｍＨＩで消化した後
、アルカリフォスファターゼで処理した。フェノール抽
出、フェノール／クロロホルム抽出を行った後、エタノ
ール沈澱し、ベクターＤＮＡ断片を調製した。両者をラ
イゲーションキット（宝酒造）を用いて、常法に従って
ＤＮＡを結合させ、様々な挿入ＤＮＡを持つ組換体プラ
スミドを作製した。
【００１９】実施例４． 目的遺伝子組換体の選定実
施例３．で得られた組換体プラスミド溶液を用い、常法
に従って大腸菌ＪＭ１０３を形質転換し、ヒダントイン
を唯一の窒素源とする選択培地（６ｇ／ｌリン酸水素二
ナトリウム、３ｇ／ｌ リン酸二水素カリウム、０．
５ｇ／ｌ 塩化ナトリウム、０．１％ ヒダントイ
ン、０．２％ グリセロール、２ｍＭ 硫酸マグネ
シウム、０．１ｍＭ 塩化カルシウム、０．００１％
硫酸マンガン、、０．００１ｍｇ／ｍｌ 塩化チ
アミン、１．６％ 寒天、ｐＨ７．４）にまいた。３
０℃で５日間保温したところコロニーが形成された。コ
ロニーをＬＢａｍｐ培養液を用いて培養し、プラスミド
ＤＮＡをアルカリ溶菌法により調製した。このプラスミ
ドＤＮＡを種々の制限酵素で消化した後、アガロースゲ
ル電気泳動で分析したところ、ベクタープラスミドｐＡ
ＨＡ３０に約２．７キロ塩基対のＤＮＡ断片が挿入され
た約６．９キロ塩基対のプラスミドであることが分かっ
た。このプラスミドをｐＡＨＮ１０１と命名した。図に
プラスミドｐＡＨＮ１０１の制限酵素地図を示した。
施例３．で得られた組換体プラスミド溶液を用い、常法
に従って大腸菌ＪＭ１０３を形質転換し、ヒダントイン
を唯一の窒素源とする選択培地（６ｇ／ｌリン酸水素二
ナトリウム、３ｇ／ｌ リン酸二水素カリウム、０．
５ｇ／ｌ 塩化ナトリウム、０．１％ ヒダントイ
ン、０．２％ グリセロール、２ｍＭ 硫酸マグネ
シウム、０．１ｍＭ 塩化カルシウム、０．００１％
硫酸マンガン、、０．００１ｍｇ／ｍｌ 塩化チ
アミン、１．６％ 寒天、ｐＨ７．４）にまいた。３
０℃で５日間保温したところコロニーが形成された。コ
ロニーをＬＢａｍｐ培養液を用いて培養し、プラスミド
ＤＮＡをアルカリ溶菌法により調製した。このプラスミ
ドＤＮＡを種々の制限酵素で消化した後、アガロースゲ
ル電気泳動で分析したところ、ベクタープラスミドｐＡ
ＨＡ３０に約２．７キロ塩基対のＤＮＡ断片が挿入され
た約６．９キロ塩基対のプラスミドであることが分かっ
た。このプラスミドをｐＡＨＮ１０１と命名した。図に
プラスミドｐＡＨＮ１０１の制限酵素地図を示した。
【００２０】プラスミドｐＡＨＮ１０１で形質転換した
ＪＭ１０５（ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１）、及びＪＭ
１０５／ｐＡＨＡ３０を培養し、遠心により集菌した。 これらを培養液の１／１０量の５５ｍＭ ＤＬ−５−
（２−メチルチオエチル）ヒダントン溶液（０．２Ｍ
塩化アンモニウムバッファー、ｐＨ８．５）に懸濁し
、６０℃にて１０時間保温した。遠心上清０．００５ｍ
ｌをＨＰＬＣ（ＯＤＳ−８０ＴＭ、東ソー）により分析
した。Ｌ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子のみを持つＪＭ１
０５／ｐＡＨＡ３０を用いた変換反応では、Ｎ−カルバ
ミル−メチオニン、及びメチオニンの生成量はわずかで
あり、５２ｍＭのＤＬ−５−（２−メチルチオエチル）
ヒダントンが残存した。これは、５５ｍＭ ＤＬ−５
−（２−メチルチオエチル）ヒダントン溶液のみを保温
した場合とほぼ同等であった。それに対し、ＪＭ１０５
／ｐＡＨＮ１０１を用いた変換反応では、ＪＭ１０５／
ｐＡＨＡ３０による反応とは明かな差が認められ、Ｎ−
カルバミル−メチオニンが２５ｍＭ、メチオニンが６ｍ
Ｍ生成されており、ＤＬ−５−（２−メチルチオエチル
）ヒダントンの残存量は２３ｍＭであった。この結果よ
り、プラスミドｐＡＨＮ１０１にはＮＳ１１２２Ａ菌の
ヒダントイナーゼ遺伝子がクローニングされていること
、本遺伝子は大腸菌中で活性のある酵素タンパク質とし
て、発現していることが明かとなった。ＪＭ１０５／ｐ
ＡＨＮ１０１を微工研に寄託した（微工研菌寄第 １
２１９１ 号：ＦＥＲＭ Ｐ−１２１９１）。
ＪＭ１０５（ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１）、及びＪＭ
１０５／ｐＡＨＡ３０を培養し、遠心により集菌した。 これらを培養液の１／１０量の５５ｍＭ ＤＬ−５−
（２−メチルチオエチル）ヒダントン溶液（０．２Ｍ
塩化アンモニウムバッファー、ｐＨ８．５）に懸濁し
、６０℃にて１０時間保温した。遠心上清０．００５ｍ
ｌをＨＰＬＣ（ＯＤＳ−８０ＴＭ、東ソー）により分析
した。Ｌ−Ｎ−カルバミラーゼ遺伝子のみを持つＪＭ１
０５／ｐＡＨＡ３０を用いた変換反応では、Ｎ−カルバ
ミル−メチオニン、及びメチオニンの生成量はわずかで
あり、５２ｍＭのＤＬ−５−（２−メチルチオエチル）
ヒダントンが残存した。これは、５５ｍＭ ＤＬ−５
−（２−メチルチオエチル）ヒダントン溶液のみを保温
した場合とほぼ同等であった。それに対し、ＪＭ１０５
／ｐＡＨＮ１０１を用いた変換反応では、ＪＭ１０５／
ｐＡＨＡ３０による反応とは明かな差が認められ、Ｎ−
カルバミル−メチオニンが２５ｍＭ、メチオニンが６ｍ
Ｍ生成されており、ＤＬ−５−（２−メチルチオエチル
）ヒダントンの残存量は２３ｍＭであった。この結果よ
り、プラスミドｐＡＨＮ１０１にはＮＳ１１２２Ａ菌の
ヒダントイナーゼ遺伝子がクローニングされていること
、本遺伝子は大腸菌中で活性のある酵素タンパク質とし
て、発現していることが明かとなった。ＪＭ１０５／ｐ
ＡＨＮ１０１を微工研に寄託した（微工研菌寄第 １
２１９１ 号：ＦＥＲＭ Ｐ−１２１９１）。
【００２１】実施例５． 塩基配列の決定実施例４．
で得られたプラスミドｐＡＨＮ１０１を制限酵素Ｈｉｎ
ｄＩＩＩで消化し、ヒダントイナーゼ遺伝子を含む約２
．９キロ塩基対のＤＮＡ断片を、Ｍ１３ｍｐ１９ファー
ジＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩサイトに組換えた。組換体フ
ァージＤＮＡ（レプリカフォーム）を調製し、制限酵素
ＸｂａＩ、及びＫｐｎＩで消化した後、キロシークエン
ス用デレーションキット（宝酒造）を用いて様々な大き
さに縮め、大腸菌ＪＭ１０５を形質転換した。常法に従
ってプラークの形成、培養を行い、１本鎖ＤＮＡを調製
した。数十個のプラークから得た１本鎖ＤＮＡを鋳型と
して、シーケネース（東洋紡）を用いてジデオキシ法に
より塩基配列を決定した。その結果、配列表に示した第
３４５番目から第１７６０番目の塩基配列をからなるオ
ープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が存在すること
が分かった。このＯＲＦは、配列表に示した第１番目か
ら第４７１番目のアミノ酸配列を有する分子量５１，７
２４のタンパク質をコードし得る。
で得られたプラスミドｐＡＨＮ１０１を制限酵素Ｈｉｎ
ｄＩＩＩで消化し、ヒダントイナーゼ遺伝子を含む約２
．９キロ塩基対のＤＮＡ断片を、Ｍ１３ｍｐ１９ファー
ジＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩサイトに組換えた。組換体フ
ァージＤＮＡ（レプリカフォーム）を調製し、制限酵素
ＸｂａＩ、及びＫｐｎＩで消化した後、キロシークエン
ス用デレーションキット（宝酒造）を用いて様々な大き
さに縮め、大腸菌ＪＭ１０５を形質転換した。常法に従
ってプラークの形成、培養を行い、１本鎖ＤＮＡを調製
した。数十個のプラークから得た１本鎖ＤＮＡを鋳型と
して、シーケネース（東洋紡）を用いてジデオキシ法に
より塩基配列を決定した。その結果、配列表に示した第
３４５番目から第１７６０番目の塩基配列をからなるオ
ープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が存在すること
が分かった。このＯＲＦは、配列表に示した第１番目か
ら第４７１番目のアミノ酸配列を有する分子量５１，７
２４のタンパク質をコードし得る。
【００２２】ヒダントイナーゼを精製し、Ｎ末端アミノ
酸配列を決定したところ、本ＯＲＦの塩基配列から予想
されるＮ末端のアミノ酸配列と一致した。また、開始コ
ドンの上流には典型的な大腸菌の１６ｓリボゾームＲＮ
Ａ結合配列が見いだされ（配列表の第３３２番目から第
３３６番目塩基）、２ヶ所に大腸菌のプロモーター様の
配列も見いだされた（配列表の第１５０番目から第１８
０番目塩基、及び第２２０番目から第２４８番目塩基）
。さらに、ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１、及びＪＭ１０
５／ｐＡＨＡ３０の培養菌体を、超音波破砕し、還元処
理した後、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で
分析した。その結果、ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１にの
み、分子量約５３，０００のタンパク質が検出された。 これは塩基配列から予想されるタンパク質の分子量とほ
ぼ一致した。
酸配列を決定したところ、本ＯＲＦの塩基配列から予想
されるＮ末端のアミノ酸配列と一致した。また、開始コ
ドンの上流には典型的な大腸菌の１６ｓリボゾームＲＮ
Ａ結合配列が見いだされ（配列表の第３３２番目から第
３３６番目塩基）、２ヶ所に大腸菌のプロモーター様の
配列も見いだされた（配列表の第１５０番目から第１８
０番目塩基、及び第２２０番目から第２４８番目塩基）
。さらに、ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１、及びＪＭ１０
５／ｐＡＨＡ３０の培養菌体を、超音波破砕し、還元処
理した後、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で
分析した。その結果、ＪＭ１０５／ｐＡＨＮ１０１にの
み、分子量約５３，０００のタンパク質が検出された。 これは塩基配列から予想されるタンパク質の分子量とほ
ぼ一致した。
【００２３】以上の結果より、本ＯＲＦがヒダントイナ
ーゼ遺伝子であり、本遺伝子は、活性のある酵素タンパ
ク質として大腸菌中で発現、蓄積されていることが明か
となった。
ーゼ遺伝子であり、本遺伝子は、活性のある酵素タンパ
ク質として大腸菌中で発現、蓄積されていることが明か
となった。
【００２４】
【発明の効果】本発明により、耐熱性ヒダントイナーゼ
遺伝子を大腸菌などの微生物で安定に生産させることが
可能になった。
遺伝子を大腸菌などの微生物で安定に生産させることが
可能になった。
【００２５】
【配列表】配列の長さ：１９３８
配列の型：核酸
鎖の数：二本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ起源
生物名：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍ
ｏｐｈｉｌｕｓ 株名：ＮＳ１１２２Ａ 直接の起源：プラスミドｐＡＨＮ１０１配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：３４５．．１７６０ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＴＧＡＴＴＧＧＧＧＡ ＧＡＴＴＴＧＧＧＡＣ ＣＴＣ
ＡＡＴＴＡＴＡ ＡＧＧＴＴＧＴＧＧＣ ＧＣＧＡＡＴ
ＴＣＡＴ ＣＧＴＧＡＧＣＧＣＴ ６０ＧＴＡＴＴ
ＣＡＧＴＧ ＣＡＡＴＡＡＧＴＧＣ ＴＡＣＡＴＴＴＣ
ＴＴ ＧＴＧＡＡＧＡＴＧＣ ＴＴＣＣＣＡＴＣＡＡ
ＴＧＣＡＴＴＧＡＧＣ １２０ＧＴＣＴＣＧＴＡＧＡ
ＣＧＡＡＡＡＣＧＧＡ ＡＡＡＧＡＡＴＡＴＴ ＴＡ
ＡＡＡＧＴＧＣＧ ＣＧＡＡＧＡＡＧＡＴ ＴＧＴＧＴ
ＡＧＧＡＴ １８０ＧＣＡＡＴＴＴＡＴＧ ＴＴＣＣ
ＡＴＣＧＴＣ ＴＧＴＣＣＧＧＴＴＧ ＡＣＧＧＡＧＣ
ＧＡＴ ＴＧＡＧＡＴＧＧＴＣ ＧＡＡＧＴＧＣＣＡＡ
２４０ＧＣＧＡＡＣＡＴＣＣ ＣＣＣＧＡＴＧＡＣ
Ａ ＴＧＧＡＡＴＧＡＡＣ ＧＧＣＡＡＧＴＧＧＣ Ｃ
ＣＴＴＧＧＣＣＧＧ ＣＴＡＡＧＣＧＧＴＴ ３００
ＧＣＡＧＴＧＴＧＧＡ ＴＡＴＣＡＡＡＴＣＡ ＴＴＡ
ＴＡＡＡＴＧＡ ＡＧＧＡＧＧＧＴＡＴ ＣＡＴＧ Ａ
ＴＧ ＡＣＡ ＡＡＡ ＴＴＧ ３５６
Ｍｅｔ Ｔｈ
ｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
１ＡＴＡ ＡＡＡ
ＡＡＴ ＧＧＡ ＡＣＡ ＡＴＴ ＧＴＣ ＡＣＣ Ｇ
ＣＴ ＡＣＡ ＧＡＴ ＡＴＡ ＴＡＴ ＧＡＡ ＧＣ
Ｃ ＧＡＴ ４０４Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇ
ｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈ
ｒ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｓｐ
５ １
０ １５
２０ ＣＴＣ ＣＴ
Ｃ ＡＴＴ ＣＡＡ ＧＡＴ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＴＴ
ＧＣＡ ＧＴＡ ＡＴＣ ＧＧＧ ＡＧＡ ＡＡＴ
ＴＴＡ ＧＡＴ ４５２Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ
Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｌａ
Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａ
ｓｐ ２
５ ３０
３５ ＧＡＧ ＡＧＣ
ＧＧＡ ＧＣＧ ＧＡＡ ＧＴＧ ＡＴＴ ＧＡＴ Ｇ
ＣＣ ＡＣＡ ＧＧＴ ＴＧＴ ＴＡＴ ＧＴＧ ＴＴ
Ｔ ＣＣＡ ５００Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａ
ｌａ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ａｌａ Ｔｈ
ｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｐｒｏ
４０
４５
５０ ＧＧＡ ＧＧＣ ＡＴＴ ＧＡＴ
ＣＣＧ ＣＡＣ ＡＣＣ ＣＡＴ ＴＴＡ ＧＡＴ Ａ
ＴＧ ＣＣＧ ＴＴＴ ＧＧＣ ＧＧＣ ＡＣＴ
５４８Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｈ
ｉｓ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｐｒ
ｏ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
５５
６０ ６５ Ｇ
ＴＧ ＡＣＡ ＡＡＡ ＧＡＣ ＧＡＣ ＴＴＴ ＧＡ
Ｇ ＴＣＧ ＧＧＧ ＡＣＧ ＡＴＴ ＧＣＣ ＧＣＣ
ＧＣＡ ＴＴＴ ＧＧＣ ５９６Ｖａｌ Ｔｈ
ｒ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ
Ｐｈｅ Ｇｌｙ ７０
７５
８０ ＧＧＧ ＡＣＧ ＡＣＧ ＡＣＣ Ａ
ＴＴ ＡＴＴ ＧＡＴ ＴＴＴ ＴＧＣ ＴＴＡ ＡＣ
Ｇ ＡＡＴ ＡＡＡ ＧＧＴ ＧＡＧ ＣＣＣ
６４４Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｉｌ
ｅ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｓｎ
Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｐｒｏ ８５
９０
９５
１００ ＣＴＧ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＣＧ
ＡＴＴ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＧ ＣＡＴ ＡＡＣ
ＡＡＡ ＧＣＧ ＡＣＧ ＧＧＧ ＡＡＡ ＧＣＧ
６９２Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ
Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａ
ｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｌａ
１０５
１１０
１１５ ＧＴＧ ＡＴＣ ＧＡＴ ＴＡＣ ＧＧＧ
ＴＴＣ ＣＡＴ ＴＴＧ ＡＴＧ ＡＴＣ ＡＧＴ
ＧＡＡ ＡＴＡ ＡＣＧ ＧＡＣ ＧＡＴ ７４
０Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ
Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｉ
ｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓｐ
１２０
１２５ １３０
ＧＴＧ ＣＴＴ ＧＡＡ ＧＡＧ ＣＴＴ ＣＣＡ Ａ
ＡＡ ＧＴＧ ＡＴＣ ＧＡＡ ＧＡＡ ＧＡＡ ＧＧ
Ａ ＡＴＴ ＡＣＣ ＴＣＣ ７８８Ｖａｌ Ｌ
ｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｖａ
ｌ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｉｌｅ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ １３５
１４０
１４５ ＴＴＴ ＡＡＡ ＧＴ
Ａ ＴＴＴ ＡＴＧ ＧＣＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＧＡＴ
ＧＴＧ ＴＴＴ ＣＡＡ ＧＣＴ ＧＡＴ ＧＡＴ
ＧＧＡ ８３６Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｐｈｅ
Ｍｅｔ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｖａｌ
Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｙ
１５０
１５５ １６０ Ａ
ＣＣ ＴＴＧ ＴＡＴ ＣＧＧ ＡＣＧ ＣＴＡ ＧＴ
Ｃ ＧＣＧ ＧＣＡ ＡＡＡ ＧＡＡ ＣＴＣ ＧＧＡ
ＧＣＧ ＣＴＴ ＧＴＣ ８８４Ｔｈｒ Ｌｅ
ｕ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｖａｌ １６５
１７０
１７５ １８０
ＡＴＧ ＧＴＧ ＣＡＴ ＧＣＣ ＧＡＧ ＡＡＴ
ＧＧＡ ＧＡＣ ＧＴＧ ＡＴＴ ＧＡＣ ＴＡＴ Ｔ
ＴＡ ＡＣＧ ＡＡＡ ＡＡＡ ９３２Ｍｅｔ
Ｖａｌ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａ
ｓｐ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈ
ｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
１８５ １９０
１９５ ＧＣＣ Ｔ
ＴＧ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＧＧ ＣＡＴ ＡＣＴ ＧＡ
Ｔ ＣＣＧ ＡＴＴ ＴＡＴ ＣＡＴ ＧＣＡ ＴＴＡ
ＡＣＧ ＡＧＡ ９８０Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌ
ｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｐｒｏ
Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｔｈｒ
Ａｒｇ ２００
２０５
２１０ ＣＣＴ ＣＣＡ ＧＡＧ ＣＴＡ
ＧＡＡ ＧＧＡ ＧＡＡ ＧＣＧ ＡＣＧ ＧＧＧ
ＣＧＣ ＧＣＣ ＴＧＴ ＣＡＡ ＴＴＧ ＡＣＡ
１０２８Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａ
ｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ
２１５ ２２０
２２５ ＧＡＡ
ＣＴＣ ＧＣＴ ＧＧＴ ＴＣＧ ＣＡＡ ＴＴＧ Ｔ
ＡＣ ＧＴＣ ＧＴＴ ＣＡＴ ＧＴＡ ＴＣＧ ＴＧ
Ｔ ＧＣＴ ＣＡＡ １０７６Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａ
ｌａ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｖａ
ｌ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｇｌｎ ２３０
２３５
２４０ ＧＣＧ ＧＴＡ ＧＡＧ ＡＡＡ ＡＴＴ
ＧＣＴ ＧＡＡ ＧＣＧ ＣＧＣ ＡＡＴ ＡＡＧ Ｇ
ＧＧ ＴＴＧ ＡＡＴ ＧＴＡ ＴＧＧ １１２４
Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｇ
ｌｕ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅ
ｕ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｒｐ ２４５
２５０
２５５ ２
６０ ＧＧＣ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＴ ＣＣＣ ＣＡ
Ｇ ＴＡＴ ＣＴＧ ＧＴＧ ＣＴＣ ＧＡＴ ＣＡＧ
ＴＣＣ ＴＡＴ ＴＴＡ ＧＡＡ １１７２Ｇｌ
ｙ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｔｙｒ
Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｓｅｒ
Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
２６５
２７０ ２７５ Ａ
ＡＧ ＣＣＧ ＡＡＴ ＴＴＴ ＧＡＡ ＧＧＴ ＧＣ
Ｔ ＡＡＡ ＴＡＴ ＧＴＡ ＴＧＧ ＴＣＡ ＣＣＧ
ＣＣＧ ＣＴＴ ＣＧＴ １２２０Ｌｙｓ Ｐｒ
ｏ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ａｒｇ ２８０
２８５
２９０ ＧＡＧ ＡＡＡ Ｔ
ＧＧ ＣＡＴ ＣＡＡ ＧＡＡ ＧＴＧ ＣＴＡ ＴＧ
Ｇ ＡＡＴ ＧＣＣ ＴＴＧ ＡＡＡ ＡＡＣ ＧＧＣ
ＣＡＧ １２６８Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ｈｉ
ｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ
２９５
３００
３０５ ＣＴＧ ＣＡＡ ＡＣＧ ＣＴＣ ＧＧＡ Ｔ
ＣＴ ＧＡＣ ＣＡＡ ＴＧＣ ＴＣＡ ＴＴＴ ＧＡ
Ｔ ＴＴＴ ＡＡＡ ＧＧＣ ＣＡＡ １３１６Ｌ
ｅｕ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｓ
ｐ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｐｈｅ
Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｎ ３１０
３１５
３２０ ＡＡＡ ＧＡＡ ＴＴＡ
ＧＧＡ ＡＧＧ ＧＧＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＡＣＣ Ａ
ＡＡ ＡＴＣ ＣＣＡ ＡＡＴ ＧＧＴ ＧＧＴ ＣＣ
Ｔ １３６４Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａ
ｒｇ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｉｌ
ｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ ３２
５ ３３０
３３５
３４０ ＡＴＴ ＡＴＴ ＧＡＧ
ＧＡＴ ＣＧＧ ＧＴＧ ＡＧＴ ＡＴＴ ＣＴＴ
ＴＴＣ ＡＧＴ ＧＡＡ ＧＧＡ ＧＴＧ ＡＡＡ Ａ
ＡＡ １４１２Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｓｐ
Ａｒｇ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｓ
ｅｒ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
３４５
３５０
３５５ＧＧＧ ＡＧＡ ＡＴＴ ＡＣＣ ＣＴＣ
ＡＡＣ ＣＡＧ ＴＴＴ ＧＴＴ ＧＡＴ ＡＴＴ
ＧＴＡ ＴＣＡ ＡＣＡ ＡＧＡ ＡＴＣ １４６
０Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｓ
ｅｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ
３６０ ３６５
３７０ＧＣＣ ＡＡ
Ａ ＴＴＧ ＴＴＴ ＧＧＴ ＣＴＡ ＴＴＣ ＣＣＧ
ＡＡＧ ＡＡＡ ＧＧＡ ＡＣＣ ＡＴＴ ＧＣＣ
ＧＴＣ ＧＧＴ １５０８Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ
Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇ
ｌｙ ３７５
３８０
３８５ＧＣＧ ＧＡＴ ＧＣＧ ＧＡＴ ＴＴＡ
ＧＴＣ ＡＴＴ ＴＴＴ ＧＡＴ ＣＣＡ ＡＣＧ Ｇ
ＴＴ ＧＡＡ ＣＧＧ ＧＴＧ ＡＴＴ １５５６
Ａｌａ Ａｓｐ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉ
ｌｅ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌ
ｕ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｉｌｅ ３９０
３９５
４００ＴＣＡ ＧＣＣ ＧＡＡ
ＡＣＡ ＣＡＣ ＣＡＴ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＧ Ｇ
ＡＴ ＴＡＴ ＡＡＴ ＣＣＧ ＴＴＴ ＧＡＡ ＧＧ
Ｇ １６０４Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｈ
ｉｓ Ｈｉｓ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｔｙ
ｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ４０５
４１０
４１５
４２０ＡＴＧ ＡＡＡ ＧＴＡ ＡＣＡ
ＧＧＧ ＧＡＡ ＣＣＴ ＧＴＧ ＴＣＧ ＧＴＴ Ｔ
ＴＡ ＴＧＴ ＡＧＡ ＧＧＡ ＧＡＡ ＴＴＴ
１６５２Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｃｙ
ｓ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｐｈｅ
４２５
４３０
４３５ＧＴＧ ＧＴＡ ＣＧＴ ＧＡＴ ＡＡＡ ＣＡ
Ａ ＴＴＴ ＧＴＣ ＧＧＧ ＡＡＡ ＣＣＧ ＧＧＧ
ＴＡＣ ＧＧＣ ＣＡＡ ＴＡＴ １７００Ｖａ
ｌ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｐｈｅ
Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｙｒ
Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｔｙｒ
４４０ ４４５
４５０ＧＴＴ ＡＡＡ
ＣＧＣ ＧＣＧ ＡＡＡ ＴＡＴ ＧＧＧ ＧＣＧ
ＣＴＡ ＡＴＧ ＧＣＣ ＧＡＣ ＣＡＡ ＧＡＴ Ｇ
ＴＧ ＧＴＧ １７４８Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｍ
ｅｔ Ａｌａ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｖａ
ｌ ４５５
４６０
４６５ＡＡＡ ＡＴＧ ＴＣＣ ＴＡＡＣＧＴＡＡＡ
Ｔ ＡＡＡＴＣＡＴＴＧＡ ＡＣＡＣＣＡＡＣＡＡ Ｇ
ＣＴＧＴＧＣＣＴＧ １７９７Ｌ
ｙｓ Ｍｅｔ Ｓｅｒ
４７０ ＧＣＧＧＴＡＡＧＧＡ ＴＧＣＧＧＧＴＣＡＣ ＧＡＣ
ＧＡＧＡＡＧＣ ＧＧＧＧＧＧＴＧＴＧ ＴＧＡＴＧＡ
ＣＴＴＡ ＣＣＡＴＣＡＧＴＴＴ １８５７ＣＴＡＣＧ
ＴＧＡＧＣ ＧＡＧＡＡＡＡＧＡＴ ＣＧＡＴＴＡＣＴ
ＴＡ ＡＴＴＧＡＡＣＡＡＧ ＧＡＴＡＣＴＡＴＡＴ
ＧＡＡＡＡＧＣＧＴＡ １９１７ＡＡＡＧＡＡＡＡＴＴ
ＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣ Ｃ
１９３８
ｏｐｈｉｌｕｓ 株名：ＮＳ１１２２Ａ 直接の起源：プラスミドｐＡＨＮ１０１配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：３４５．．１７６０ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＴＧＡＴＴＧＧＧＧＡ ＧＡＴＴＴＧＧＧＡＣ ＣＴＣ
ＡＡＴＴＡＴＡ ＡＧＧＴＴＧＴＧＧＣ ＧＣＧＡＡＴ
ＴＣＡＴ ＣＧＴＧＡＧＣＧＣＴ ６０ＧＴＡＴＴ
ＣＡＧＴＧ ＣＡＡＴＡＡＧＴＧＣ ＴＡＣＡＴＴＴＣ
ＴＴ ＧＴＧＡＡＧＡＴＧＣ ＴＴＣＣＣＡＴＣＡＡ
ＴＧＣＡＴＴＧＡＧＣ １２０ＧＴＣＴＣＧＴＡＧＡ
ＣＧＡＡＡＡＣＧＧＡ ＡＡＡＧＡＡＴＡＴＴ ＴＡ
ＡＡＡＧＴＧＣＧ ＣＧＡＡＧＡＡＧＡＴ ＴＧＴＧＴ
ＡＧＧＡＴ １８０ＧＣＡＡＴＴＴＡＴＧ ＴＴＣＣ
ＡＴＣＧＴＣ ＴＧＴＣＣＧＧＴＴＧ ＡＣＧＧＡＧＣ
ＧＡＴ ＴＧＡＧＡＴＧＧＴＣ ＧＡＡＧＴＧＣＣＡＡ
２４０ＧＣＧＡＡＣＡＴＣＣ ＣＣＣＧＡＴＧＡＣ
Ａ ＴＧＧＡＡＴＧＡＡＣ ＧＧＣＡＡＧＴＧＧＣ Ｃ
ＣＴＴＧＧＣＣＧＧ ＣＴＡＡＧＣＧＧＴＴ ３００
ＧＣＡＧＴＧＴＧＧＡ ＴＡＴＣＡＡＡＴＣＡ ＴＴＡ
ＴＡＡＡＴＧＡ ＡＧＧＡＧＧＧＴＡＴ ＣＡＴＧ Ａ
ＴＧ ＡＣＡ ＡＡＡ ＴＴＧ ３５６
Ｍｅｔ Ｔｈ
ｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
１ＡＴＡ ＡＡＡ
ＡＡＴ ＧＧＡ ＡＣＡ ＡＴＴ ＧＴＣ ＡＣＣ Ｇ
ＣＴ ＡＣＡ ＧＡＴ ＡＴＡ ＴＡＴ ＧＡＡ ＧＣ
Ｃ ＧＡＴ ４０４Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇ
ｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈ
ｒ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｓｐ
５ １
０ １５
２０ ＣＴＣ ＣＴ
Ｃ ＡＴＴ ＣＡＡ ＧＡＴ ＧＧＧ ＡＡＡ ＡＴＴ
ＧＣＡ ＧＴＡ ＡＴＣ ＧＧＧ ＡＧＡ ＡＡＴ
ＴＴＡ ＧＡＴ ４５２Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ
Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｌａ
Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａ
ｓｐ ２
５ ３０
３５ ＧＡＧ ＡＧＣ
ＧＧＡ ＧＣＧ ＧＡＡ ＧＴＧ ＡＴＴ ＧＡＴ Ｇ
ＣＣ ＡＣＡ ＧＧＴ ＴＧＴ ＴＡＴ ＧＴＧ ＴＴ
Ｔ ＣＣＡ ５００Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａ
ｌａ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ａｌａ Ｔｈ
ｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｐｒｏ
４０
４５
５０ ＧＧＡ ＧＧＣ ＡＴＴ ＧＡＴ
ＣＣＧ ＣＡＣ ＡＣＣ ＣＡＴ ＴＴＡ ＧＡＴ Ａ
ＴＧ ＣＣＧ ＴＴＴ ＧＧＣ ＧＧＣ ＡＣＴ
５４８Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｈ
ｉｓ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｐｒ
ｏ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
５５
６０ ６５ Ｇ
ＴＧ ＡＣＡ ＡＡＡ ＧＡＣ ＧＡＣ ＴＴＴ ＧＡ
Ｇ ＴＣＧ ＧＧＧ ＡＣＧ ＡＴＴ ＧＣＣ ＧＣＣ
ＧＣＡ ＴＴＴ ＧＧＣ ５９６Ｖａｌ Ｔｈ
ｒ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ
Ｐｈｅ Ｇｌｙ ７０
７５
８０ ＧＧＧ ＡＣＧ ＡＣＧ ＡＣＣ Ａ
ＴＴ ＡＴＴ ＧＡＴ ＴＴＴ ＴＧＣ ＴＴＡ ＡＣ
Ｇ ＡＡＴ ＡＡＡ ＧＧＴ ＧＡＧ ＣＣＣ
６４４Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｉｌ
ｅ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｓｎ
Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｐｒｏ ８５
９０
９５
１００ ＣＴＧ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＣＧ
ＡＴＴ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＧ ＣＡＴ ＡＡＣ
ＡＡＡ ＧＣＧ ＡＣＧ ＧＧＧ ＡＡＡ ＧＣＧ
６９２Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ
Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａ
ｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｌａ
１０５
１１０
１１５ ＧＴＧ ＡＴＣ ＧＡＴ ＴＡＣ ＧＧＧ
ＴＴＣ ＣＡＴ ＴＴＧ ＡＴＧ ＡＴＣ ＡＧＴ
ＧＡＡ ＡＴＡ ＡＣＧ ＧＡＣ ＧＡＴ ７４
０Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ
Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｉ
ｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓｐ
１２０
１２５ １３０
ＧＴＧ ＣＴＴ ＧＡＡ ＧＡＧ ＣＴＴ ＣＣＡ Ａ
ＡＡ ＧＴＧ ＡＴＣ ＧＡＡ ＧＡＡ ＧＡＡ ＧＧ
Ａ ＡＴＴ ＡＣＣ ＴＣＣ ７８８Ｖａｌ Ｌ
ｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｖａ
ｌ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｉｌｅ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ １３５
１４０
１４５ ＴＴＴ ＡＡＡ ＧＴ
Ａ ＴＴＴ ＡＴＧ ＧＣＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＧＡＴ
ＧＴＧ ＴＴＴ ＣＡＡ ＧＣＴ ＧＡＴ ＧＡＴ
ＧＧＡ ８３６Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｐｈｅ
Ｍｅｔ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｖａｌ
Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｙ
１５０
１５５ １６０ Ａ
ＣＣ ＴＴＧ ＴＡＴ ＣＧＧ ＡＣＧ ＣＴＡ ＧＴ
Ｃ ＧＣＧ ＧＣＡ ＡＡＡ ＧＡＡ ＣＴＣ ＧＧＡ
ＧＣＧ ＣＴＴ ＧＴＣ ８８４Ｔｈｒ Ｌｅ
ｕ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｌａ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｖａｌ １６５
１７０
１７５ １８０
ＡＴＧ ＧＴＧ ＣＡＴ ＧＣＣ ＧＡＧ ＡＡＴ
ＧＧＡ ＧＡＣ ＧＴＧ ＡＴＴ ＧＡＣ ＴＡＴ Ｔ
ＴＡ ＡＣＧ ＡＡＡ ＡＡＡ ９３２Ｍｅｔ
Ｖａｌ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａ
ｓｐ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈ
ｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
１８５ １９０
１９５ ＧＣＣ Ｔ
ＴＧ ＧＡＧ ＧＡＣ ＧＧＧ ＣＡＴ ＡＣＴ ＧＡ
Ｔ ＣＣＧ ＡＴＴ ＴＡＴ ＣＡＴ ＧＣＡ ＴＴＡ
ＡＣＧ ＡＧＡ ９８０Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌ
ｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｐｒｏ
Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｔｈｒ
Ａｒｇ ２００
２０５
２１０ ＣＣＴ ＣＣＡ ＧＡＧ ＣＴＡ
ＧＡＡ ＧＧＡ ＧＡＡ ＧＣＧ ＡＣＧ ＧＧＧ
ＣＧＣ ＧＣＣ ＴＧＴ ＣＡＡ ＴＴＧ ＡＣＡ
１０２８Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａ
ｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ
２１５ ２２０
２２５ ＧＡＡ
ＣＴＣ ＧＣＴ ＧＧＴ ＴＣＧ ＣＡＡ ＴＴＧ Ｔ
ＡＣ ＧＴＣ ＧＴＴ ＣＡＴ ＧＴＡ ＴＣＧ ＴＧ
Ｔ ＧＣＴ ＣＡＡ １０７６Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ａ
ｌａ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｖａ
ｌ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｇｌｎ ２３０
２３５
２４０ ＧＣＧ ＧＴＡ ＧＡＧ ＡＡＡ ＡＴＴ
ＧＣＴ ＧＡＡ ＧＣＧ ＣＧＣ ＡＡＴ ＡＡＧ Ｇ
ＧＧ ＴＴＧ ＡＡＴ ＧＴＡ ＴＧＧ １１２４
Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｇ
ｌｕ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅ
ｕ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｒｐ ２４５
２５０
２５５ ２
６０ ＧＧＣ ＧＡＡ ＡＣＴ ＴＧＴ ＣＣＣ ＣＡ
Ｇ ＴＡＴ ＣＴＧ ＧＴＧ ＣＴＣ ＧＡＴ ＣＡＧ
ＴＣＣ ＴＡＴ ＴＴＡ ＧＡＡ １１７２Ｇｌ
ｙ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｔｙｒ
Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｓｅｒ
Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
２６５
２７０ ２７５ Ａ
ＡＧ ＣＣＧ ＡＡＴ ＴＴＴ ＧＡＡ ＧＧＴ ＧＣ
Ｔ ＡＡＡ ＴＡＴ ＧＴＡ ＴＧＧ ＴＣＡ ＣＣＧ
ＣＣＧ ＣＴＴ ＣＧＴ １２２０Ｌｙｓ Ｐｒ
ｏ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ａｒｇ ２８０
２８５
２９０ ＧＡＧ ＡＡＡ Ｔ
ＧＧ ＣＡＴ ＣＡＡ ＧＡＡ ＧＴＧ ＣＴＡ ＴＧ
Ｇ ＡＡＴ ＧＣＣ ＴＴＧ ＡＡＡ ＡＡＣ ＧＧＣ
ＣＡＧ １２６８Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ｈｉ
ｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ
２９５
３００
３０５ ＣＴＧ ＣＡＡ ＡＣＧ ＣＴＣ ＧＧＡ Ｔ
ＣＴ ＧＡＣ ＣＡＡ ＴＧＣ ＴＣＡ ＴＴＴ ＧＡ
Ｔ ＴＴＴ ＡＡＡ ＧＧＣ ＣＡＡ １３１６Ｌ
ｅｕ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｓ
ｐ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｐｈｅ
Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｎ ３１０
３１５
３２０ ＡＡＡ ＧＡＡ ＴＴＡ
ＧＧＡ ＡＧＧ ＧＧＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＡＣＣ Ａ
ＡＡ ＡＴＣ ＣＣＡ ＡＡＴ ＧＧＴ ＧＧＴ ＣＣ
Ｔ １３６４Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａ
ｒｇ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｉｌ
ｅ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ ３２
５ ３３０
３３５
３４０ ＡＴＴ ＡＴＴ ＧＡＧ
ＧＡＴ ＣＧＧ ＧＴＧ ＡＧＴ ＡＴＴ ＣＴＴ
ＴＴＣ ＡＧＴ ＧＡＡ ＧＧＡ ＧＴＧ ＡＡＡ Ａ
ＡＡ １４１２Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｓｐ
Ａｒｇ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｓ
ｅｒ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
３４５
３５０
３５５ＧＧＧ ＡＧＡ ＡＴＴ ＡＣＣ ＣＴＣ
ＡＡＣ ＣＡＧ ＴＴＴ ＧＴＴ ＧＡＴ ＡＴＴ
ＧＴＡ ＴＣＡ ＡＣＡ ＡＧＡ ＡＴＣ １４６
０Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｓ
ｅｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ
３６０ ３６５
３７０ＧＣＣ ＡＡ
Ａ ＴＴＧ ＴＴＴ ＧＧＴ ＣＴＡ ＴＴＣ ＣＣＧ
ＡＡＧ ＡＡＡ ＧＧＡ ＡＣＣ ＡＴＴ ＧＣＣ
ＧＴＣ ＧＧＴ １５０８Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ
Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇ
ｌｙ ３７５
３８０
３８５ＧＣＧ ＧＡＴ ＧＣＧ ＧＡＴ ＴＴＡ
ＧＴＣ ＡＴＴ ＴＴＴ ＧＡＴ ＣＣＡ ＡＣＧ Ｇ
ＴＴ ＧＡＡ ＣＧＧ ＧＴＧ ＡＴＴ １５５６
Ａｌａ Ａｓｐ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉ
ｌｅ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌ
ｕ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｉｌｅ ３９０
３９５
４００ＴＣＡ ＧＣＣ ＧＡＡ
ＡＣＡ ＣＡＣ ＣＡＴ ＡＴＧ ＧＣＴ ＧＴＧ Ｇ
ＡＴ ＴＡＴ ＡＡＴ ＣＣＧ ＴＴＴ ＧＡＡ ＧＧ
Ｇ １６０４Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｈ
ｉｓ Ｈｉｓ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｔｙ
ｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ４０５
４１０
４１５
４２０ＡＴＧ ＡＡＡ ＧＴＡ ＡＣＡ
ＧＧＧ ＧＡＡ ＣＣＴ ＧＴＧ ＴＣＧ ＧＴＴ Ｔ
ＴＡ ＴＧＴ ＡＧＡ ＧＧＡ ＧＡＡ ＴＴＴ
１６５２Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇ
ｌｕ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｃｙ
ｓ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｐｈｅ
４２５
４３０
４３５ＧＴＧ ＧＴＡ ＣＧＴ ＧＡＴ ＡＡＡ ＣＡ
Ａ ＴＴＴ ＧＴＣ ＧＧＧ ＡＡＡ ＣＣＧ ＧＧＧ
ＴＡＣ ＧＧＣ ＣＡＡ ＴＡＴ １７００Ｖａ
ｌ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｐｈｅ
Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｙｒ
Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｔｙｒ
４４０ ４４５
４５０ＧＴＴ ＡＡＡ
ＣＧＣ ＧＣＧ ＡＡＡ ＴＡＴ ＧＧＧ ＧＣＧ
ＣＴＡ ＡＴＧ ＧＣＣ ＧＡＣ ＣＡＡ ＧＡＴ Ｇ
ＴＧ ＧＴＧ １７４８Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｍ
ｅｔ Ａｌａ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｖａ
ｌ ４５５
４６０
４６５ＡＡＡ ＡＴＧ ＴＣＣ ＴＡＡＣＧＴＡＡＡ
Ｔ ＡＡＡＴＣＡＴＴＧＡ ＡＣＡＣＣＡＡＣＡＡ Ｇ
ＣＴＧＴＧＣＣＴＧ １７９７Ｌ
ｙｓ Ｍｅｔ Ｓｅｒ
４７０ ＧＣＧＧＴＡＡＧＧＡ ＴＧＣＧＧＧＴＣＡＣ ＧＡＣ
ＧＡＧＡＡＧＣ ＧＧＧＧＧＧＴＧＴＧ ＴＧＡＴＧＡ
ＣＴＴＡ ＣＣＡＴＣＡＧＴＴＴ １８５７ＣＴＡＣＧ
ＴＧＡＧＣ ＧＡＧＡＡＡＡＧＡＴ ＣＧＡＴＴＡＣＴ
ＴＡ ＡＴＴＧＡＡＣＡＡＧ ＧＡＴＡＣＴＡＴＡＴ
ＧＡＡＡＡＧＣＧＴＡ １９１７ＡＡＡＧＡＡＡＡＴＴ
ＴＡＡＧＣＧＧＡＴＣ Ｃ
１９３８
【図１】図はプラスミドｐＡＨＮ１０１の制限酵素地図
である。
である。
Claims (2)
- 【請求項１】 配列表に記載された第３４５番目塩基
から第１７６０番目塩基までの配列を有することを特徴
とする耐熱性ヒダントイナーゼ遺伝子 - 【請求項２】 配列表に記載された第１番目アミノ酸
から第４７１番目アミノ酸までの配列を有することを特
徴とする耐熱性ヒダントイナーゼ
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3117802A JPH04325093A (ja) | 1991-04-23 | 1991-04-23 | 耐熱性ヒダントイナーゼ、及びそれをコードする遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3117802A JPH04325093A (ja) | 1991-04-23 | 1991-04-23 | 耐熱性ヒダントイナーゼ、及びそれをコードする遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04325093A true JPH04325093A (ja) | 1992-11-13 |
Family
ID=14720643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3117802A Pending JPH04325093A (ja) | 1991-04-23 | 1991-04-23 | 耐熱性ヒダントイナーゼ、及びそれをコードする遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04325093A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0643133A2 (de) * | 1993-08-27 | 1995-03-15 | Roche Diagnostics GmbH | Rekombinante D-Hydantoinase, Verfahren zur Herstellung und Verwendung |
| WO1996020275A1 (fr) * | 1994-12-28 | 1996-07-04 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | PROCEDE DE FABRICATION DE L'ACIDE D-N-CARBAMYLE-α-AMINE |
| FR2728905A1 (fr) * | 1994-12-29 | 1996-07-05 | Rhone Poulenc Nutrition Animal | Nouvelle acide amine amidohydrolase, sequence nuclotidique correspondant et leurs utilisations |
| WO2007069509A1 (ja) * | 2005-12-12 | 2007-06-21 | Kaneka Corporation | 新規ヒダントイナーゼ及びｎ－カルバモイル－ｄ－アミノ酸の製造方法 |
-
1991
- 1991-04-23 JP JP3117802A patent/JPH04325093A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0643133A2 (de) * | 1993-08-27 | 1995-03-15 | Roche Diagnostics GmbH | Rekombinante D-Hydantoinase, Verfahren zur Herstellung und Verwendung |
| EP0643133A3 (de) * | 1993-08-27 | 1995-05-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Rekombinante D-Hydantoinase, Verfahren zur Herstellung und Verwendung. |
| WO1996020275A1 (fr) * | 1994-12-28 | 1996-07-04 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | PROCEDE DE FABRICATION DE L'ACIDE D-N-CARBAMYLE-α-AMINE |
| FR2728905A1 (fr) * | 1994-12-29 | 1996-07-05 | Rhone Poulenc Nutrition Animal | Nouvelle acide amine amidohydrolase, sequence nuclotidique correspondant et leurs utilisations |
| WO2007069509A1 (ja) * | 2005-12-12 | 2007-06-21 | Kaneka Corporation | 新規ヒダントイナーゼ及びｎ－カルバモイル－ｄ－アミノ酸の製造方法 |
| JP5159319B2 (ja) * | 2005-12-12 | 2013-03-06 | 株式会社カネカ | 新規ヒダントイナーゼ及びｎ−カルバモイル−ｄ−アミノ酸の製造方法 |
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