JPH04231863A - 毛管電気泳動実施のための方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は毛管電気泳動動作のため
の方法及び装置に関し、詳しくは、溶液から溶質を、そ
の分離に先立って毛管電気泳動によって濃縮可能とする
毛管電気泳動のための改良方法及び装置に関する。

【０００２】

【従来技術】毛管電気泳動（ＣＥ）は、少量のサンプル
を分析するためには効率的な分析的分離手法である。電
気泳動分離は”キャリヤー電解質と称される導電性媒体
を充填した小径毛細管内で実施される。毛細管の２端間
に電界が印加され、それによりサンプル内のスペシーズ
は、一方の電極から他方の電極に向けて、各々のスペシ
ーズの電気泳動上の移動度並びに毛細管内の流体運動の
速度に依存する速度で移動する。電気泳動は、緩衝体の
如き、毛細管内のゲル或いは液体を使用して行なわれ得
る。自由帯域電気泳動として既知の１モードに於ては、
分離はサンプルのスペシーズの自由溶液の移動度の差に
基付いている。別の液体モードに於ては疎水性の差によ
る分離を生じさせるためにミセルが使用される。これは
ミセル動電学的毛細電気泳動（ＭＥＣＣ）として知られ
ている。

【０００３】電気泳動は幾つかの理由によって有益であ
る。そうした理由には、分離速度が早いこと、分解能が
高いことそしてサンプルサイズが小さいことが含まれる
。例えば、電気泳動を使用しての分離速度は従来からの
ゲル電気泳動におけるそれの１０乃至２０倍であり、し
かも実施後染色が不要である。高い分解能は部分的には
高電圧の使用によって入手され得る。これは毛細管によ
って熱が急速に分散されることによるものである。更に
は、毛細管の内径が小さいことによって、バンド拡張が
最小化される。自由帯域電気泳動では電気浸透或いは電
気浸透性流れ（ＥＯＦ）現象が生じる。これは、電荷に
関わらずサンプルの全ての分子に悪影響を及ぼす液体の
塊状流れである。ある状況下ではＥＯＦは自由帯域電気
泳動における分解能及び分離速度を改善する。電気泳動
が為し得る高い分解能を達成するためには、電気泳動プ
ロセス開始時にサンプルを狭い開始帯域に閉じ込める必
要がある。これが、毛細管に導入され得るサンプルの量
を毛細管の全容積の極く一部を占めるに過ぎない量とし
てしまう。更に、光学濃度検出は一般に毛細管軸を横断
する放射線のビームを使用して実施されることから、毛
細管の内径が小さいことにより紫外線及び可視的な光学
濃度検出によって電気泳動に於て検出し得る物質の最低
濃度は厳しく制限される。これらの事実を総合するに、
電気泳動は液体クロマトグラフィーの如きその他の手法
によって分析され得るような低濃度のサンプルを分析す
ることは出来ないということである。こうした限定事項
に対する一つの解決策が何人かの研究者によって説明さ
れてきた。それには、電気泳動分離を実行するために使
用されるキャリヤー電解液のそれよりも実質的にイオン
強度の低い緩衝体或いは電解液内にサンプルを溶解する
ことが含まれる。溶解されたサンプルは通常の様式で毛
細管内に導入されるが、より多くの容量が導入可能とさ
れる。電気泳動による分離を開始させるために電界を適
用するとサンプル帯域での電界強度が周囲のキャリヤー
電解液におけるそれよりも高くなる。これはサンプル帯
域のイオン強度、そして結局は導電性が低いからである
。その結果、サンプル内のイオンは電解液内のイオンよ
りも早い速度でキャリヤー電解液に移動する。斯くして
サンプルのイオンは、それらはキャリヤー電解液に入る
と速度が低下することから、導電性の低いサンプル帯域
及びキャリヤー電解液間の界面に堆積する。こうしたプ
ロセスは狭幅のサンプル帯域を効率的に創生し、分析し
得るサンプルの最低濃度での、恐らくは５つの要因を改
善可能とする。

【０００４】サンプルを電気泳動によって分離する以前
に予備濃縮するための技法が１９９０年１月のＨｉｇｈ
　　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　　ＣａｐｉｌｌａｒｙＥ
ｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ
に於てＡｅｂｅｒｓｏｌｄ及びＭｏｒｒｉｓｏｎによっ
て報告された。短い毛細管の内側表面が吸着性コーティ
ングによってコーティングされる。この毛細管は次いで
コーティングしない毛細管の端部に接続される。この配
列構成により、コーティングした毛細管内部への、及び
それに次でのコーティングしない毛細管内への大量のサ
ンプル（通常は厳しく拡張されたピークを生じる）の注
入を可能とする。サンプルの分子はコーティング上に吸
着され、一方、溶媒は毛細管を通過しそして電解液と共
に毛細管から排出される。次で少量の有機溶媒が接続さ
れた毛細管に導入される。この有機溶媒はサンプルの分
子をしてコーティングから脱着せしめ、従ってサンプル
分子は濃縮形態に於てコーティングされない毛細管に入
る。 有機溶媒の導電性はキャリヤー電解液のそれよりも低い
ことから、先に言及したサンプル帯域の狭幅化が生じる
。次で、電解液内の毛細管の両端での毛管電気泳動によ
る分離が通常の様式で実施される。こうした予備濃縮段
階が、これまで毛管電気泳動を使用して可能であったよ
りも５乃至１０倍も低い濃度での毛管電気泳動の使用を
可能とすることが報告された。

【０００５】サンプルの分離のために、液体クロマトグ
ラフィーに於て充填した毛細管カラムが使用された。こ
うした毛細管カラムは種々の方法で作成された。その１
つの方法は、ジャーナルオブクロマトグラフィー（１９
８１）２１８巻２０９−２１６ページに於てＪｏｒｇｅ
ｎｓｏｎ他によって説明される。毛細管カラムは毛細管
の一端を粒状物充填物で充填することにより形成される
。次で、充填された端部が火炎内で加熱され、粒状充填
物が焼結され多孔質のフリット（第１のフリット）が形
成される。クロマトグラフィー分離された粒状物のスラ
リーが毛細管の、前記フリットが形成されたとは反対側
の端部から毛細管が一杯になるまで導入される。次で毛
細管の開放端内に先にフリットが形成されたと同一の態
様で第２のフリットが形成される。米国特許第４７９３
９２０号に記載されるように、パックされたシリカによ
る毛管クロマトグラフィー管が、加熱による等して溶融
する多孔質のプラグを形成するためのセラミック材料か
ら成るプラグを毛細管の一端に注型することによって形
成される。次で毛細管の残余部分にクロマトグラフ充填
物が装入される。米国特許第４４８３７７３号には毛細
クロマトグラフィー管内部にプラグ及びクロマトグラフ
充填物を形成するための手段が記載される。現在入手し
得る毛管電気泳動を使用して分析し得る濃度よりも更に
低濃度の希釈サンプル溶液の毛管電気泳動による分析を
可能とする手段を提供することが所望される。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】現在入手し得る毛管電
気泳動を使用して分析し得る濃度よりも更に低濃度の希
釈サンプル溶液の毛管電気泳動による分析を可能とする
手段を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、現在入
手し得る毛管電気泳動方法によって分析し得るよりも少
なくとも１オーダー低い濃度のサンプルの、毛管電気泳
動を使用しての分析を可能とする毛管電気泳動のための
予備処理プロセス及び装置が提供される。本発明に従え
ばサンプル濃縮手段が設けられ、溶質サンプルは該サン
プル濃縮手段に於て管内に閉じ込められた中実充填物或
いはゲル充填物内に維持され、一方、溶媒はそれら充填
物を通過する。粒状物が、充填された濃縮用の固形粒状
物或いはゲルの両端に位置決めされた、管狭窄部の如き
機械的手段或いは多孔質プラグ毛細管によって管内に閉
じ込められる。濃縮用の固形粒状物或いはゲルは吸着性
配合物による壁面コーティングと比較してより高い吸着
キャパシティ及びより長い有効寿命を有し得る。本発明
のサンプル濃縮手段は、毛管電気泳動に於て使用し得る
毛細管と一体的に形成されるか或いは毛管電気泳動に於
て使用し得る毛細管と組合わせて使用し得る別の管とさ
れる。１具体例に於ては管には充填物材料をそこから管
内部に導入する第１の狭窄部が形成され、一方、充填物
材料を管内部に閉じ込めるための第２の狭窄部が形成さ
れる。別の具体例では低温加熱によって溶融し得る粒状
物が管に導入され、これを加熱することによって第１の
多孔質プラグが形成される。次で充填物材料が管の第１
の多孔質プラグに導入され、同一様式にて第２の多孔質
プラグが充填物材料の反対側の端部に形成され、それに
より充填物材料が管内部に閉じ込められる。

【０００８】

【実施例】本発明のサンプル濃縮手段或いはサンプル濃
縮用管部は、電気泳動のために使用される毛細管の一部
として一体的に形成し得或いは電気泳動に使用される毛
細管のそれよりも大きい或いは小さい内径を有する別の
、しかし毛管電気泳動に於て使用される毛細管と共に使
用し得る管から形成され得る。”毛細管”とは、内径約
１及び５００マイクロメターの管を言う。

【０００９】サンプル濃縮用管部は吸着、吸収或いは化
学的相互作用如きによってサンプルを維持し、また引き
続き、好適な溶媒と接触した場合にサンプルを釈放し得
る固形粒状物或いはゲル充填物を含む。代表的な好適な
粒状物には、Ｃ１８複合物、Ｃ８複合物或いはＣ４複合
物の如き疎水性表面コーティングを施したシリカ粒状物
、アルミニューム粒状物或いはジルコニア粒状物、ジエ
チルアミノエチル（ＤＥＡＥ）、スルフォプロピル（Ｓ
）或いは四基アミノエチル（ＱＡＥ）、或いはプロテイ
ン、抗体、或いはアゾ染料の如き親和力コーティングし
た粒状物が含まれる。別様には、充填物材料は、ポリア
クリルアミド、アガローゼ、セルロースそしてポリエチ
レン酸化物の如きゲル充填物が含まれ得る。

【００１０】固形粒状物或いはゲル充填物は多孔質プラ
グ或いは狭窄部によって管内部の然るべき位置に保持さ
れる。多孔質プラグを形成するために使用し得る代表的
な好適な粒状物には、ホウケイ酸ガラス粒状物の如き低
融点ガラス粒状物が含まれる。該低融点ガラス粒状物は
予備形成された管或いは多孔質セラミックプラグ内でそ
の場焼結によってフリットとし、次で管に装入し得る。 追加的に、そこを通しての液体の通過を可能とするが、
しかし充填物を維持する他の機械的手段を多孔質プラグ
として使用可能である。

【００１１】充填物が管内部の狭窄部によって然るべく
保持されて成るサンプル濃縮用管部の形成に際しては狭
窄部は、熱エネルギーを管の狭窄部を形成しようとする
場所の短い長さに沿って集中させることによって形成さ
れる。熱エネルギーは管の該当部分をして流動せしめそ
れにより管内部により小さい内径部分を形成するに十分
なものとされる。狭窄部を形成するための好都合な方法
は、管を電極間に形成される電気アーク内部で回転させ
ることである。一方の、即ち第１の狭窄部を作成した後
、管は冷却され前記狭窄部が固化され、管内部に粒状の
充填物が導入される。次で同一の様式で充填物の反対側
の端部に他方の、即ち第２の狭窄部が形成される。別態
様に於ては管の一部に管よりも融点の低い粒状物が充填
される。該粒状物は溶融された場合に多孔質プラグを形
成し得るものとされる。サンプルと相互作用する粒状物
が管内の多孔質プラグに導入され、そして毛細管内のサ
ンプル濃縮用管部、即ち粒状物の他方の端部に同一様式
に於て他の多孔質プラグが形成される。粒状物は一般に
直径が約１ミクロン及び５０ミクロンの間であり、充填
体としての長さは約０．５から１０ミリである。

【００１２】図１を参照するに、サンプル濃縮用管部１
０（以下端に管１０と称する。）が毛管電気泳動で使用
し得る毛細管１２と一体的に形成されている。管１０に
は第１の狭窄部１４が、その開口１６の直径が約１及び
５０ミクロンの間であるようにして形成される。次で充
填体１８が管１０に、真空引き或いは圧力によるポンピ
ングの如き任意の好適な手段によってスラリーとして導
入される。次で、先に説明した様式の如きによって管１
０に第２の狭窄部２０が、その開口２２の直径が約１及
び５０ミクロンの間であるようにして形成される。様に
際し、処理されるべきサンプルが管入り口２４を通し矢
印２６で示される方向から溶媒内に導入され、サンプル
溶質が充填体１８に保持され、一方、溶質は毛細管１２
を通り抜ける。次で少量（１−１０ナノリットル）の第
２の溶媒が、溶質を充填体１８から釈放させそしてそれ
らを毛細管１２内部に搬送するために管入り口２４に導
入される。釈放された溶質はそこで以下にもっと詳しく
説明される態様で毛管電気泳動によって分離される。前
記第２の溶媒の導電性はキャリヤー電解液のそれよりも
低くし得る。これが、サンプル帯域を先に説明した様式
で効果的に狭幅化する。随意的には、電解液を毛細管１
２に、そこに第２の溶媒を導入する以前に導入し、それ
によりサンプル溶媒をフラッシュアウトし、毛管電気泳
動を実施するために毛細管全体に電解液を満たし得る。

【００１３】図２を参照するに、同じ要素が同じ参照番
号で示され、加熱によって多孔質プラグに変換され得る
低融点の粒状物が、毛細管１２と等しい或いはそれより
小さい直径のタンピングワイヤー（図示せず）の如き任
意の好都合な手段によって毛細管１２に導入されている
。この低融点の粒状物は、毛細管１２を熱源に晒し、毛
細管１２は溶融させずに前記低融点の粒状物を溶融させ
ることにより加熱され、引き続き冷却されることによっ
て、多孔質プラグ２８が形成される。次で溶質を維持し
得る充填体１８が毛細管１２内に導入され、多孔質プラ
グ２８と接触される。単数或いは複数のサンプル溶質を
含む溶媒を開口２４から導入されるに際し、溶媒は多孔
質プラグ２８及び３０そして充填体１８を通り抜け、一
方、サンプル溶質は充填体１８に維持される。次で、サ
ンプル溶質を釈放した少量の（１−１０ナノリットル）
が多孔質プラグ２８及び３０そして充填体１８を通過し
、毛管電気泳動による分析のために毛細管１２の内部３
２へと送達される。充填体１８はその使用中は多孔質プ
ラグ２８及び３０間に維持される。

【００１４】図３を参照するに、本発明のサンプル濃縮
用管部のツーピース型構造が示される。ここでは該ツー
ピース型構造は毛細管１２及び、毛細管１２と実質的に
同じ内径を有する濃縮管３６を含むスリーブ３４内に収
納されている。濃縮管３６はその内側に２つの多孔質プ
ラグ２８及び３０並びに、先に図２を参照して説明した
ような且つ同一様式に於て使用される粒状物充填体３８
を内蔵している。ツーピース型の利点は、濃縮管３６の
有効性が低下した場合にそれをスリーブ３４から除去し
て廃棄し得、一方、毛細管１２はそのままとし得ること
である。同様に、毛細管はその有効性がなくなった場合
に別個に廃棄可能である。

【００１５】ツーピース型構造の別態様が図４に示され
る。ここではサンプル濃縮用管部４０は毛細管１２より
も直径が大きく、またサンプル濃縮用管部４０及び毛細
管１２は共にスリーブ３４内部に維持されている。サン
プル濃縮用管部４０の外径を、スリーブ３４の形状を毛
細管１２及びサンプル濃縮用管部４０とを互いに接触さ
せそれによって流体がそれら部材間を流動するようなも
のとした上で、毛細管１２の外径よりも大きくし得るこ
とを理解されたい。サンプル濃縮用管部４０は多孔質プ
ラグ２８及び３０と粒状物充填体１８とを収納し、先に
説明されたと同一様式に於て形成され且つ使用される。 この具体例の利点は、一定長さのサンプル濃縮用管部に
対しより大きなサンプル溶質維持能力を入手し得ること
及び、サンプル濃縮用管部、即ち毛細管を先に説明した
如く選択的に廃棄出来ることである。図３及び図４に示
される具体例は図示されたような多孔質プラグではなく
むしろ図１に示されるような管構造を使用し得る。同様
に、サンプル濃縮用管部４０は毛細管１２よりも大きい
のではなく、より小さい内径を有し得る。

【００１６】図５を参照するに、自由帯域での毛管電気
泳動（ＣＥ）、毛管ゲル電気泳動或いはミセル動電学的
毛細電気泳動（ＭＥＣＣ）に於て使用し得る基本システ
ムが例示される。毛管ゲル電気泳動に於ては毛細管には
毛管電気泳動におけるような液体電解質ではなく導電性
ゲルが充填される。上記全てのメカニズムに対し、図５
に示されるような、その詳細が図１−４に示される、各
々電解液５６を含む管配列構成５０が電解液リザーバ５
２及び５４間に位置決めされる。第１段階に於て、電解
液リザーバ５２が、サンプルを収納するリザーバと置き
換えられ、電源５８からの電圧がサンプルリザーバ及び
リザーバ５４間に印加される。サンプルは管配列構成５
０の、サンプル濃縮用の前記充填体を収納する前方部分
５１を通過する。ある量のサンプルが管配列構成５０の
前方部分５１を通過し、充填体部分に溶質が維持された
後、電解液リザーバ５２が、維持されたサンプルを充填
体から溶出させ得る溶媒を含むリザーバと交換される。 この溶媒は代表的には約５乃至４０キロボルトの電位を
溶媒リザーバ及びリザーバ５４間に短時間（１−１０秒
）印加することによって管配列構成５０内に導入される
。最後に、溶媒リザーバが電解液リザーバ５２と交代さ
れ、該電解液リザーバ５２及びリザーバ５４間に分離の
ための電位が印加される。溶出されたサンプルは管配列
構成５０を貫き、検出器６０を通過しそしてリザーバ５
４に入る。検出器はサンプルを分析し得る任意の検出器
、例えば、ＵＶ光学濃度検出器、蛍光検出器、導電性検
出器、質量スペクトロメーター、赤外線光学濃度検出器
その他とし得る。以下の例は本発明を例示するものであ
り、これに限定するものではない。

【００１７】例１ 本例は図１及び図２に示されるサンプル濃縮用管部を作
成するための方法を例示するものである。使用される毛
細管は、毛細管（全長１０乃至１００ｃｍ）の、そうで
ない場合には空の内部に短い（１乃至５ｍｍ）クロマト
グラフ充填材料を収納する溶融シリカ毛細管であった。 前記クロマトグラフ充填材料は毛細管の注入端部に接近
して配置された。

【００１８】方法１ 内径７５ミクロン長さ６０ｃｍの溶融シリカ毛細管が毛
細管クリービングツールを使用して塊状材料から切断さ
れた。毛細管の一端が、電極を含むマニピュレーター内
で、その端部が前記電極から約１センチ伸延する状態で
配置された。毛細管の他端がモーターの軸に付設され、
毛細管は熱が均等に適用されるようマニピュレーター内
で１０−１０００ｒｐｍにて回転され（前記マニピュレ
ーターはアリゾナ州フェニックスのＰｏｌｙｍｉｃｒｏ
　　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能）た。マニ
ピュレーターは１０秒間に１乃至４回燃焼され、各燃焼
でのカレントセッティングは２５であった。毛細管の、
図１に示される如き内側位置１４内部にネックが形成さ
れた。最も狭い部分の内径は約１０ミクロンであった。 次いで毛細管はモーター及びマニピュレーターから取り
外された。毛細管の他端に真空が適用され、ネックが形
成された側の端部が、寸法分布が１５乃至２０ミクロン
であるクロマトグラフ粒状物ｕＢｏｎｄａｐａｋ　　Ｃ
１８（マサチューセッツ州ミルフォードのミリポア社の
Ｗａｔｅｒｓ　　Ｄｉｖｉｓｉｏｎから入手可能）の懸
濁液中に浸された。メタノール中にビードが懸濁された
。これらビードは真空の力を使用して毛細管内に引き込
まれ、図１に於て参照番号１８で示されるような、前記
ネック部分から毛細管の端部へと続く充填床を形成した
。次いで毛細管が充填物懸濁液から取り出され、全ての
メタノールが除去されるまで、真空が適用された。次い
で毛細管がマニピュレーターに戻され、充填材量を収納
するためと同一の様式に於て、他のネック２０が創生さ
れた。 最終的な毛細管が図１に示される。毛細管の流れ特性が
、Ｈａｍｉｌｔｏｎ　　Ｇａｓ　　Ｔｉｇｈｔｓｙｒｉ
ｎｇｅを使用して毛細管を貫いてメタノールを押し込む
ことによって試験された。仮に流体が自由に移動する場
合は毛細管は使用準備状態であるとされた。

【００１９】方法２ 内径１００ミクロン長さ６０センチの溶融シリカ毛細管
が毛細管クリービングツールを使用して塊状材料から切
断された。毛細管の一端が、粒状分布が１及び５０ミク
ロンである乾燥グラスショット（低融点ホウケイ酸塩グ
ラスビード）内に押しもまれた。これにより少量のグラ
スビードが毛細管の先端に入り込んだ。次いで、外径が
７５及び１００ミクロンの間である金属ワイヤー或いは
溶融シリカファイバーが、可視化のために双眼顕微鏡を
使用して毛細管の一端に装入された。グラスビードは毛
細管内に押し込まれ、毛細管の端部から３から５ミリの
小領域に濃縮された。次いで毛細管はマニピュレーター
内に、グラスビード群が電極間に配置されるよう配置さ
れた。次いで、カレントセッティングが１０である状態
で毛細管にワンバーストの電圧が１０秒間加えられた。 これによりグラスビードは部分的に溶融し、多孔質フリ
ットを形成した（図２（２８）参照）。次いで毛細管の
他端が真空源に付設され、多孔質フリットを含む側の端
部が、粒状分布が１５−２０ミクロンである、Ｃ１８コ
ーティング多孔質シリカビード（マサチューセッツ州ミ
ルフォードのミリポア社のＷａｔｅｒｓ　　Ｄｉｖｉｓ
ｉｏｎから入手可能なＤｅｌｔａ　　Ｐａｋ　　Ｃ１８
）内に懸濁された。ビードはメタノール中に懸濁された
。その結果、多孔質フリット２８から毛細管の端部へと
伸延するビード充填床が形成された。次いで毛細管が顕
微鏡下に配置され、ビード充填床にサイドワイヤーがよ
り深く、毛細管の端部に１−２ミリの空間が残る程度に
装入された。次いで毛細管の反対側の端部に真空源が付
設され、充填床が形成された端部が先に使用されたと同
一のグラスショットメタノール内の懸濁液に浸された。 これにより毛細管の端部が最終的にグラスショットで満
たされた。最後に毛細管は再度マニピュレータ内に、毛
細管の端部におけるグラスビードが電極間に配置される
状態で配置され、次いでワンバーストの電圧がカレント
セッティング１０の下で１０秒間加えられた。その結果
、充填材量１８（図２参照）を収納するための第２のフ
リット３０が形成された。毛細管の流れ特性が、Ｈａｍ
ｉｌｔｏｎ　　Ｇａｓ　　Ｔｉｇｈｔ　　ｓｙｒｉｎｇ
ｅを使用して毛細管を貫いてメタノールを押し込むこと
によって試験された。流体が自由に移動する場合は毛細
管は使用準備状態であるとされた。

【００２０】使用 図１及び図２の毛細管内に、７ｋｖでの電気泳動を使用
してサンプルが付着された。サンプルは、毛細管内のビ
ード上に付着されるとアセトニトリル／ランニング緩衝
体の６０／４０混合物の３ｋｖでの電気泳動を使用して
の引き続いての注入によって分離釈放された。使用され
たランニング緩衝体はｐＨが７．０の１０ｍＭのＮａＰ
Ｏ４　であった。

【００２１】使用１ 参照例として図６にはペプチドニューロメヂンが示され
る。これは非改質溶融シリカ毛細管を使用して分子され
たものである。ここに示されたものとしての２１４ナノ
メーターでの検出限界は約１ミクロングラム／ミリリッ
トルであった。この機器を使用してはそれよりも小さな
濃度は検出し得なかった。同じペプチドが図１に示され
る方法１に於て作成された毛細管を使用して分離された
。サンプルの濃度はやはり１ミクロングラム／ミリリッ
トルであった。しかしながら、検出限界は劇的に低減し
た。これは図７に示されるように、検出限界における約
５０倍の増大を示した。

【００２２】１００ナノグラム／ミリリットルでのペプ
チドＡＣＴＨ１−４が、方法２によって作成された、図
２に示される毛細管を使用して分離された。予備濃縮無
しでのこのペプチドの検出限界は約１ミクロングラム／
ミリリットルであった。ここでの検出限界の予測増大値
は４００倍であった。ペプチド混合物が方法２で作成さ
れた毛細管で分離された。前記ペプチド混合物は、１ミ
クロングラム／ミリリットルのＡＣＴＨ１−４＋５０ナ
ノグラム／ミリリットルのＡＣＴＨ１−１０＋５ナノグ
ラム／ミリリットルのニューロメヂンであった。分離状
況が図８に示される。ここには約４００倍の検出限界の
増大が示される。

【００２３】

【発明の効果】現在入手し得る毛管電気泳動を使用して
分析し得る濃度よりも更に低濃度の希釈サンプル溶液の
毛管電気泳動による分析を可能とする手段が提供される
。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のワンピース型具体例の断面図である。

【図２】本発明のワンピース型具体例の別態様の断面図
である。

【図３】本発明のツーピース型具体例の断面図である。

【図４】本発明のツーピース型具体例の別態様の断面図
である。

【図５】本発明を使用する毛管電気泳動方法の該略図で
ある。

【図６】従来方法によって入手されるサンプルの電気泳
動図である。

【図７】本発明を使用しての、図６に示されると同一サ
ンプルの電気泳動図である。

【図８】本発明の方法による、例２でプロセス処理され
たサンプルの電気泳動図である。

【符号の説明】

１０：サンプル濃縮用管部 １２：毛細管 １８：充填体 ２０：第２の狭窄部 ２４：管入り口 ２８：多孔質プラグ ３０：多孔質プラグ ３６：濃縮管 ３８：粒状物充填体 ３４：スリーブ

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　毛管電気泳動或いはミセル動電学的毛
   管クロマトグラフィーから選択された毛管分離プロセス
   を実施するための装置であって、溶質サンプルを保持し
   得そして引き続き前記溶質サンプルを釈放することの出
   来る充填物を収納する管を含む第１の管セクションにし
   て、前記充填物をその内部に保持しつつそこを通して流
   体を流動させるための手段を含み且つ入口及び出口を具
   備する前記第１の管セクションと、該第１の管セクショ
   ンの前記出口と連通する毛細管セクションと、前記毛細
   管セクションに於て毛管分離プロセスを実施するための
   手段とによって構成される前記装置。
2. 【請求項２】　　充填物は粒状充填物である請求項１の
   装置。
3. 【請求項３】　　充填物はゲル充填物である請求項１の
   装置。
4. 【請求項４】　　充填物を第１の管セクションの内部に
   保持しつつそこを通して流体を流動させるための手段は
   、前記第１の管セクションにおける２つの狭窄部を含み
   、前記充填物はそれら狭窄部間に位置決めされる請求項
   １の装置。
5. 【請求項５】　　充填物を第１の管セクションの内部に
   保持しつつそこを通して流体を流動させるための手段は
   、前記第１の管セクションにおける２つの多孔質プラグ
   を含み、前記充填物はそれら多孔質プラグ間に位置決め
   される請求項１の装置。
6. 【請求項６】　　第１の管セクション及び毛細管セクシ
   ョンは一体的に形成される請求項１、２、３、４、或い
   は５の何れかに記載の装置。
7. 【請求項７】　　第１の管セクション及び毛細管セクシ
   ョンは別体構成とされ且つそれらセクションを取り巻く
   スリーブによって相互に維持される請求項１、２、３、
   ４、或いは５の何れかに記載の装置。
8. 【請求項８】　　請求項１の装置における毛管電気泳動
   を実施するための方法であって、第１の溶媒及び溶質サ
   ンプルを含む溶液を第１の管セクション内に導入し、該
   第１の管セクション内の充填物によって前記溶質サンプ
   ルをそこに維持させる一方、前記第１の溶媒を前記第１
   の管セクションを通過させる段階と、前記第１の管セク
   ションに第２の溶媒を通し、前記粒状充填物から溶質サ
   ンプルを釈放させ、それを毛細管セクションに移動させ
   そこで毛管電気泳動によって前記釈放された溶質サンプ
   ルを分析する段階とを包含する前記方法。
9. 【請求項９】　　溶質サンプルが、第１の管セクション
   に導入された後、且つ第１の管セクションに第２の溶媒
   を導入するに先立って毛細管セクションに導入される請
   求項６の方法。