JPH04211698A - 腫瘍細胞増殖阻害因子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規な腫瘍細胞増殖阻害
因子に関する。更に詳細には、３Ｔ３細胞由来株化細胞
の培養上清から得ることができ、腫瘍細胞の増殖を阻害
する作用を有する新規な腫瘍細胞増殖阻害因子に関する
。

【０００２】

【従来の技術】従来、抗腫瘍剤として化学療法剤、免疫
療法剤などの合成医薬品が広く用いられているが、一般
に特異性が低く副作用が強いなどの問題がある。これに
対して、組織培養細胞から多くの腫瘍細胞増殖阻害因子
が見出されておりこれらの因子は特異性が高く、副作用
が低い抗腫瘍剤になり得ると考えられている。このよう
な物質としては、例えばインターフェロン、リンフォト
キシン、ガン壊死因子（ＴＮＦ）などが広く知られてい
る。また最近では、ヒト由来の線維芽細胞から得られる
腫瘍細胞障害因子（特開平１−１４８１９７号公報）、
ヒト由来肺癌細胞から得られる腫瘍細胞増殖抑制因子（
特開平１−１８７０９４号公報）などが報告されている
。

【０００３】一方、Ｓｗｉｓｓマウス胎児から得た細胞
から樹立された線維芽細胞様細胞株３Ｔ３細胞からもい
くつかの細胞増殖阻害因子が単離されている。即ち、例
えば、Ｎａｔｒａｊらは静止期の３Ｔ３細胞の細胞表層
から増殖阻害因子が得られることを報告しており〔Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７５，６
１１５−６１１９（１９７８）〕、またＨａｒｅｌらは
、３Ｔ３細胞の培養上清から分子量４０ｋＤａの増殖阻
害因子が得られることを報告している〔Ｊ．Ｃｅｌｌ．
Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１１９，１０１−１０６（１９８４
）；ｉｂｉｄ．，１２３，１３９−１４３（１９８５）
〕。しかしながらこれらの増殖阻害因子はいずれも腫瘍
細胞に対しては有意な阻害活性を示さないことが知られ
ている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、３Ｔ３細胞
由来株化細胞の培養上清から得ることのできる蛋白質で
あって、腫瘍細胞の増殖を阻害する作用を有する新規な
腫瘍細胞増殖阻害因子を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、３Ｔ３
細胞由来株化細胞の培養上清から得ることができる蛋白
質であり、以下の性質を有する腫瘍細胞増殖阻害因子が
提供される： （ａ）　　　分子量 還元および非還元条件下におけるＳＤＳポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法による測定で、３，７００±３７０
ダルトン； （ｂ）　　　カラム特性 ｐＨ約７．４で陰イオン交換樹脂カラムに実質的に吸着
せず、ｐＨ約５．０で陽イオン交換樹脂カラムに実質的
に吸着する； （ｃ）　　　生理活性 少なくとも、ヒト前骨髄性白血病細胞及びヒト子宮頸癌
由来細胞の増殖を阻害する活性を有する。

【０００６】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子は以下のよ
うにして得ることができる。

【０００７】 ３Ｔ３細胞由来株化細胞の調製 Ｓｗｉｓｓマウス胎児から得られる細胞から樹立された
線維芽細胞様細胞株３Ｔ３細胞の１種である例えばＮＩ
Ｈ３Ｔ３細胞〔Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，４，５４９（１９６
９）〕から調製することができる。即ち、例えばＮＩＨ
３Ｔ３細胞を、ダルベッコ改変ＭＥＭ〔Ｖｉｒｏｌｏｇ
ｙ，８，３９６（１９５９）〕とＨａｍＦ−１２〔Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，５３，２８８（１
９６５）〕との混合培養液であるＤＦ培養液に血清を添
加して継代培養し、次いでインスリンなどのホルモンを
含むＤＦ培養液で培養して増殖するクローンを得、この
クローンを更にＤＦ培養液のみで培養し増殖するクロー
ンを得ることにより、目的とする３Ｔ３細胞由来株化細
胞を調製することができる。

【０００８】培養上清の調製 ３Ｔ３細胞由来株化細胞を、最初に血清を含むＤＦ培養
液で培養し、細胞がコンフルエンスに達した時点で培養
液を除去し、更に一定期間血清を含まないＤＦ培養液で
培養後、この培養液を除去する。次いで、血清を含まな
いＤＦ培養液で、例えば、約９６時間から約１２０時間
培養し、約９６時間から約１２０時間毎に培養液を新鮮
な培養液に交換することによって、培養上清を収集する
。収集した培養上清を遠心分離することにより培養上清
を調製することができる。

【０００９】腫瘍細胞増殖阻害因子の精製培養上清を、
限外濾過に付して分子量分画を行い濃縮する。次いで必
要に応じて塩析、透析に付す。

【００１０】次いで、活性成分を含有する適当なバッフ
ァー溶液を、Ｑ−セファロースカラム（ファルマシア）
、ＤＥＡＥ−セファロース（ファルマシア）などの陰イ
オン交換樹脂カラムに付して部分精製する。本発明の腫
瘍細胞増殖阻害因子はｐＨ７．４で陰イオン交換樹脂カ
ラムに実質的に吸着しない特性を有する。従ってｐＨ約
７．４で陰イオン交換樹脂カラムに付し非吸着画分を採
集することにより部分精製された因子が得られる。

【００１１】本発明の因子は、ｐＨ約５．０で陽イオン
交換樹脂カラムに実質的に吸着する。従って、ｐＨ約５
．０で、Ｓ−セファロースカラム（ファルマシア）、Ｃ
Ｍセファロースカラム（ファルマシア）、ＴＳＫ　ｇｅ
ｌ　　ＣＭ−３ＳＷ（東洋ソーダ）などの陽イオン交換
樹脂カラムに付し吸着画分を採集することにより更に精
製された因子が得られる。尚、上記した陰イオン及び陽
イオン交換樹脂カラムによる精製は、必要に応じて適宜
それらの精製順序を変えることもできる。

【００１２】次いで、更に、ヒドロキシアパタイトカラ
ムなどを用いた吸着クロマトグラフィー；ＴＳＫ　ｇｅ
ｌ　　ＣＭ−３ＳＷ、Ｐｅｎｙｌ　　１５ＰＷ−ＲＰ逆
相カラムなどを用いた高速液体クロマトグラフィー等に
適宜付すことによって高純度に精製された本発明の腫瘍
細胞増殖阻害因子が得られる。

【００１３】 腫瘍細胞増殖阻害因子の特性 以下に本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子の特性について説
明する。

【００１４】（ａ）　　　分子量 還元および非還元条件下におけるＳＤＳポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法による測定で、３，７００±３７０
ダルトンの分子量を示す。還元および非還元条件下にお
いて、分子量に変化がないことから１本鎖の構造を有す
る蛋白質である。

【００１５】（ｂ）　　　カラム特性 前記したように、ｐＨ約７．４で陰イオン交換樹脂カラ
ムに実質的に吸着せず、他方、ｐＨ約５．０で陽イオン
交換樹脂カラムに実質的に吸着する、という特性を有す
る。

【００１６】（ｃ）　　　生理活性 ＨＬ−６０などのヒト前骨髄性白血病細胞、及びＨｅＬ
ａ細胞などのヒト子宮頸癌由来細胞に対して少なくとも
増殖阻害活性を有する。従って、本発明の因子は、白血
病、あるいは子宮癌などの固型癌の治療に有用である。

【００１７】（ｄ）　　　アミノ酸配列気相プロテイン
シークエンサーを用いた自動エドマン分解法による解析
の結果、以下に示す２つのアミノ酸配列〔（Ｐ−１）及
び（Ｐ−２）〕のうちのいずれかのアミノ酸配列を有す
る。

【表３】 　　１　　　　　　２　　　　　　３　　　　　　４　
　　　　　５　　　　　　６　　　　　　７　　　　　
　８　　　　　　９Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−
Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−　　１０　
　　　　　１１　　　　　　１２　　　　　　１３　　
　　　　１４　　　　　　１５　　　　　　１６　　　
　　　１７　　　　　　１８Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−
Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−　
　１９　　　　　　２０　　　　　　２１　　　　　　
２２　　　　　　２３　　　　　　２４　　　　　　２
５　　　　　　２６　　　　　　２７Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−
Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇ
ｌｕ−　　２８　　　　　　２９　　　　　　３０　　
　　　　３１　　　　　　３２　　　　　　３３　　　
　　　３４　　　　　　３５　　　　　　３６Ｌｙｓ−
Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｈｙ−　　３７　　　　　　３８　　　　　　
３９　　　　　　４０　　　　　　４１　　　　　　４
２　　　　　　４３　　　　　　４４　　　　　　４５
Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｈ
ｉｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−　　４６ Ｌｅｕ（Ｐ−１）

【表４】 　　１　　　　　　２　　　　　　３　　　　　　４　
　　　　　５　　　　　　６　　　　　　７　　　　　
　８　　　　　　９Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−
Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−　　１０　
　　　　　１１　　　　　　１２　　　　　　１３　　
　　　　１４　　　　　　１５　　　　　　１６　　　
　　　１７　　　　　　１８Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−
Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−　
　１９　　　　　　２０　　　　　　２１　　　　　　
２２　　　　　　２３　　　　　　２４　　　　　　２
５　　　　　　２６　　　　　　２７Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−
Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇ
ｌｕ−　　２８　　　　　　２９　　　　　　３０　　
　　　　３１　　　　　　３２　　　　　　３３　　　
　　　３４　　　　　　３５　　　　　　３６Ｌｙｓ−
Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｙｒ−　　３７　　　　　　３８　　　　　　
３９　　　　　　４０　　　　　　４１　　　　　　４
２　　　　　　４３　　　　　　４４Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−
Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ（Ｐ
−２）

【００１８】

【発明の効果】３Ｔ３細胞由来株化細胞の培養上清から
新規な蛋白である腫瘍細胞増殖阻害因子が得られる。こ
の因子は、ヒト前骨髄性白血病細胞、ヒト子宮頸癌由来
細胞等の増殖を有意に阻害する活性を有する。従って、
白血病あるいは子宮癌などの固型癌等の治療剤として有
用である。

【００１９】

【実施例】 以下、本発明を実施例により更に詳細に説明する。 実施例

【００２０】１．３Ｔ３細胞由来株化細胞の調製ＮＩＨ
３Ｔ３細胞を１０％牛胎児血清を含むＤＦ培養液（ダル
ベッコウ改変ＭＥＭ：ＨａｍＦ−１２＝１：１）で継代
培養した後、インスリン５μｇ／ｍｌ、トランスフェリ
ン５μ／ｍｌ、セレン酸塩　　２×１０−８Ｍを含むＤ
Ｆ培養液で培養し、増殖するクローンを得た。

【００２１】さらに、このクローンより、ＤＦ培養液の
みで増殖するクローンを得、継代培養して株化した。得
られた株化細胞をＮＩＨ３Ｔ３−ｓｆと命名した。培養
は、３７℃、５％ＣＯ２　の気相下で行った。培養液は
３日毎に７０％の新鮮培養液を交換する方法で行った。 継代は、培養細胞が、サブコンフルエンスに達した時点
で２倍に希釈する方法で行なった。培養液は、コンディ
ション　　メディウム５０％、新鮮培養液５０％の比率
の培養液を調整して用いた。

【００２２】 ２．ＮＩＨ３Ｔ３−ｓｆ細胞の無血清培養上清の調整Ｎ
ＩＨ３Ｔ３−ｓｆ細胞を、１０％牛胎児血清含有ＤＦ培
養液を用い培養した。細胞がコンフルエンスに達した時
点で、この培養液を、除去し、ＰＢＳ（−）で１回洗浄
した後、ＤＦ培養液で４８時間培養した。この培養液を
除去し、新たにＤＦ培養液で９６時間から１２０時間培
養した。９６時間から１２０時間毎に培養液を交換し１
００Ｌ収集した。収集した培養液は、遠心分離（２００
０回転×１０分間）を行ない上清を回収した。

【００２３】３．精製 １）　　Ｑ−セファロースカラムクロマトグラフィー回
収した培養上清１００Ｌをペリコンカセットシステム（
限外濾過膜システム、分画分子量１０００）を用いて、
約５０倍に濃縮した。さらに９０％硫安飽和により塩析
し、８０００×ｇで６０分間遠心した沈澱を２０ｍＭト
リス・ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．４）に溶解し、同バ
ッファーに対し透析した。次に、予め同バッファーで平
衡化したＱ−セファロースカラム（ファルマシア）（φ
５ｃｍ×５　ｃｍ）に添加し非吸着画分及び洗浄画分を
集めた。

【００２４】 溶出条件は以下の通りである。 流速　　　　８ｍｌ／ｍｉｎ　 分画　　　　２ｍｌ／ｔｕｂｅ 溶離液　　　　２０ｍＭトリス．ＨＣｌバッファー（ｐ
Ｈ７．４）

【００２５】 ２）　　Ｓ−セファロースカラムクロマトグラフィー非
吸着画分のｐＨを酢酸で５．０に調整し、２０ｍＭ酢酸
バッファー（ｐＨ５．０）で平衡化したＳ−セファロー
スカラム（ファルマシア）（φ２．５ｃｍ×６ｃｍ）に
添加した。活性成分は吸着し、次いで、２０ｍＭトリス
．ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．４）を用いて溶出するこ
とで活性画分を得た。

【００２６】 溶出条件は以下の通りである。 流速　　　　０．８５ｍｌ／ｍｉｎ　 分画　　　　４ｍｌ／ｔｕｂｅ 溶離液　　　　２０ｍＭトリス．ＨＣｌバッファー（ｐ
Ｈ７．４）

【００２７】３）　　ヒドロキシアパタイトカラムクロ
マトグラフィー　　ＦＰＬＣＳ−セファロースカラムよ
り溶出された活性画分を酢酸でｐＨ６．０に調整し、予
め２０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ６．０）で平衡化した
ヒドロキシアパタイトカラム（ペンタックスφ７．５ｍ
ｍ×１０ｃｍ　　旭光学）に注入し、非吸着画分を集め
た。

【００２８】 溶出条件は以下の通りである。 流速　　　　１ｍｌ／ｍｉｎ　 分画　　　　１ｍｌ／ｔｕｂｅ 溶離液　　　　２０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ６．０）

【００２９】４）　　ＴＳＫｇｅｌＣＭ−３ＳＷ　　カ
ラムクロマトグラフィーＨＰＬＣ活性画分を酢酸でｐＨ
５．０に調整し、予め５％アセトニトリル（ＣＨ３　Ｃ
Ｎ）含有２０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ５．０）で平衡
化したＴＳＫｇｅｌＣＭ−３ＳＷカラム（φ７．５ｍｍ
×７．５ｃｍ　　東ソー）に注入した。溶出条件は以下
の通りである。

【００３０】 流速　　　　１ｍｌ／ｍｉｎ　 分画　　　　１ｍｌ／ｔｕｂｅ Ａ）　　２０／ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ５．０）／５
％ＣＨ３ＣＮ Ｂ）　　２０／ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ５．０）／５
％ＣＨ３ＣＮ／０．２ＭＮａＣＬ　　Ａ−−＞Ｂの直線
濃度勾配（１２０分） 活性は、２分画にわかれ、各々ＮａＣｌ濃度８６ｍＭ（
Ｐ−１）、１００ｍＭ（Ｐ−２）で溶出した（図１参照
）。

【００３１】５）　　Ｐｅｎｙｌ　　５ＰＷ−ＲＰ　　
逆相カラムクロマトグラフィー　　ＨＰＬＣＣＭ−３Ｓ
Ｗ　　ＨＰＬＣ　　ステップより得られた活性画分を、
各々５％ＣＨ３　ＣＮ含有燐酸バッファー（ｐＨ７．４
）で平衡化したＰｅｎｙｌ−５ＰＷＲＰカラム（φ４．
６ｍｍ×７．５ｃｍ　　東ソー）に注入した。溶出は２
０％ＣＨ３　ＣＮ含有５ｍＭ燐酸バッファー（ｐＨ７．
４）で２０分間溶出した後、２０％から４０％ＣＨ３　
ＣＮ含有同バッファーを用いて８０分間の直線型濃度勾
配で溶出をおこなった。流速は、１ｍｌ／ｍｉｎ　、分
取は、２ｍｌ／ｔｕｂｅで行った。Ｐ−１はリテンショ
ンタイム５９分から６０分の位置に、Ｐ−２は６０分か
ら６１分の位置に溶出した（図２及び図３参照）。

【００３２】４．ＳＤＳ−ＰＡＧＥ 逆相ＨＰＬＣにより得られた２活性画分について、一部
にサンプルバッファー（０．０６２５Ｍトリス・ＨＣｌ
バッファー　　ｐＨ６．８、２％ＳＤＳ、０．３Ｍショ
糖）を添加し、１００℃、３分間加熱後、ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥに供した。泳動は、０．１％ＳＤＳ含有２０％ポリ
アクリルアミドゲル（１ｍｍ厚）を用い、Ｌａｅｍｍｌ
ｉの方法〔Ｎａｔｕｒｅ、２２７、６８０（１９７０）
〕に準じて行った。泳動後、タンパク質バンドは、銀染
色（銀染色キット、和光）により検出した。分子量マー
カーとして、ミオグロビン（１７２０１）、ミオグロビ
ンＩ＋ＩＩ（１４６３２）、ミオグロビンＩ（８２３５
）、ミオグロビンＩＩ（６３８３）、ミオグロビンＩＩ
Ｉ　（２５５６）、ミオグロビン１−１４（１６９６）
を用いた。その結果、Ｐ−１、Ｐ−２とも分子量３，７
００±３７０ダルトンの位置に単一バンドとして検出さ
れた。還元、非還元条件下でも、分子量に変化はなかっ
た。ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果は図４に示した。

【００３３】５．アミノ酸配列の決定 ２種類の精製品について、気相プロテインシークエンサ
ー（モデル４７０Ａアプライドバイオシステムズ社）を
使用した自動エドマン分解法によりアミノ酸配列を決定
した。前記した通りのアミノ酸配列を有することが判っ
た（図５及び図６参照）。

【００３４】６．生物活性 １）　　ヒト子宮癌細胞ＨｅＬａ、ヒト前骨髄性白血病
細胞ＨＬ−６０、ヒト肺癌細胞Ａ−５４９に対する増殖
阻害活性 ９６穴プレート（ファルコン）に各細胞を５×１０３　
／１００μｌ／ｗｅｌｌで播種し２４時間３７℃、５％
ＣＯ２　気相下で培養した。培養液を、フェニル５ＰＷ
−ＲＰ逆相ＨＰＬＣにより得られる精製品〔（Ｐ−１）
あるいは（Ｐ−２）〕５ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌを
含む培養液に交換し６日間培養した。培養液は３日間毎
に交換した。６日後、生細胞数をトリパンブルー染色法
により計測した。 尚、ＨＬ−６０細胞の培養はＲＤＦ−２％ＦＢＳ、Ｈｅ
Ｌａ細胞、Ａ−５４９細胞の培養はＤＦ−２％ＦＢＳ培
養液を用いた。各細胞に対する増殖阻害効果を図７及び
図８に示した。図７及び図８から明らかなように、本発
明の因子はＨｅＬａ細胞、Ａ−５４９細胞、ＨＬ−６０
細胞の増殖を有意に阻害した。

【００３５】 ２）　　ヒト子宮癌由来ＨｅＬａ細胞の形態変化４８穴
プレート（コーニング社）にＨｅＬａ細胞２×１０４　
／２５０μｌ、１０％ＦＢＳ含有ＤＦ／ｗｅｌｌとなる
ように播種し３７℃、５％ＣＯ２　気相下２４時間培養
した。培養液を、フェニル５ＰＷ−ＲＰ逆相ＨＰＬＣに
より得られる精製品（Ｐ−１）１０ｎｇ／ｍｌを含むＤ
Ｆ培養液２５０μｌ／ｗｅｌｌに交換し、４８時間培養
した後、位相差倒立顕微鏡により形態変化を観察した。 得られた結果は図９に示した。図９から、本発明の因子
がＨｅＬａ細胞の増殖を有意に阻害することが判る。精
製品（Ｐ−２）を用いた場合にも同様の結果が得られた
。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子のＣＭ−３ＳＷ
陽イオン交換クロマトグラムの溶出プロファイルを示す
グラフである。

【図２】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子のフェニル５Ｐ
Ｗ−ＲＰ逆相ＨＰＬＣの溶出プロファイルを示すグラフ
である。

【図３】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子のフェニル５Ｐ
Ｗ−ＲＰ逆相ＨＰＬＣの溶出プロファイルを示すグラフ
である。

【図４】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子をＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥに付した結果を示す写真である。

【図５】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子（Ｐ−１）の一
次構造である。

【図６】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子（Ｐ−２）の一
次構造である。

【図７】ヒト子宮癌細胞ＨｅＬａ、ヒト前骨髄性白血病
細胞ＨＬ−６０、ヒト肺癌細胞Ａ−５４９に対する本発
明の腫瘍細胞増殖阻害因子（Ｐ−１）の増殖阻害効果を
示すグラフである。

【図８】ヒト子宮癌細胞ＨｅＬａ、ヒト前骨髄性白血病
細胞ＨＬ−６０、ヒト肺癌細胞Ａ−５４９に対する本発
明の腫瘍細胞増殖阻害因子（Ｐ−２）の増殖阻害効果を
示すグラフである。

【図９】本発明の腫瘍細胞増殖阻害因子（Ｐ−１）のヒ
ト子宮癌由来ＨｅＬａ細胞に対する阻害活性を示す写真
である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　３Ｔ３細胞由来株化細胞の培養上清か
   ら得ることができる蛋白質であり、以下の性質を有する
   腫瘍細胞増殖阻害因子： （ａ）　　　分子量 還元および非還元条件下におけるＳＤＳポリアクリルア
   ミドゲル電気泳動法による測定で、３，７００±３７０
   ダルトン； （ｂ）　　　カラム特性 ｐＨ約７．４で陰イオン交換樹脂カラムに実質的に吸着
   せず、ｐＨ約５．０　で陽イオン交換樹脂カラムに実質
   的に吸着する； （ｃ）　　　生理活性 少なくとも、ヒト前骨髄性白血病細胞及びヒト子宮頸癌
   由来細胞の増殖を阻害する活性を有する。
2. 【請求項２】　　以下に示す２つのアミノ酸配列〔（Ｐ
   −１）及び（Ｐ−２）〕のうちのいずれかのアミノ酸配
   列を有する請求項１記載の腫瘍細胞増殖阻害因子。 【表１】 　　１　　　　　　２　　　　　　３　　　　　　４　
   　　　　　５　　　　　　６　　　　　　７　　　　　
   　８　　　　　　９Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−
   Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−　　１０　
   　　　　　１１　　　　　　１２　　　　　　１３　　
   　　　　１４　　　　　　１５　　　　　　１６　　　
   　　　１７　　　　　　１８Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−
   Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−　
   　１９　　　　　　２０　　　　　　２１　　　　　　
   ２２　　　　　　２３　　　　　　２４　　　　　　２
   ５　　　　　　２６　　　　　　２７Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−
   Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇ
   ｌｕ−　　２８　　　　　　２９　　　　　　３０　　
   　　　　３１　　　　　　３２　　　　　　３３　　　
   　　　３４　　　　　　３５　　　　　　３６Ｌｙｓ−
   Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇ
   ｌｙ−Ｔｙｒ−　　３７　　　　　　３８　　　　　　
   ３９　　　　　　４０　　　　　　４１　　　　　　４
   ２　　　　　　４３　　　　　　４４　　　　　　４５
   Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｈ
   ｉｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−　　４６ Ｌｅｕ（Ｐ−１） 【表２】 　　１　　　　　　２　　　　　　３　　　　　　４　
   　　　　　５　　　　　　６　　　　　　７　　　　　
   　８　　　　　　９Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−
   Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−　　１０　
   　　　　　１１　　　　　　１２　　　　　　１３　　
   　　　　１４　　　　　　１５　　　　　　１６　　　
   　　　１７　　　　　　１８Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−
   Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−　
   　１９　　　　　　２０　　　　　　２１　　　　　　
   ２２　　　　　　２３　　　　　　２４　　　　　　２
   ５　　　　　　２６　　　　　　２７Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−
   Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇ
   ｌｕ−　　２８　　　　　　２９　　　　　　３０　　
   　　　　３１　　　　　　３２　　　　　　３３　　　
   　　　３４　　　　　　３５　　　　　　３６Ｌｙｓ−
   Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇ
   ｌｙ−Ｔｙｒ−　　３７　　　　　　３８　　　　　　
   ３９　　　　　　４０　　　　　　４１　　　　　　４
   ２　　　　　　４３　　　　　　４４Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−
   Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ（Ｐ
   −２）