JPH01148197A

JPH01148197A - 腫瘍細胞障害因子

Info

Publication number: JPH01148197A
Application number: JP62305744A
Authority: JP
Inventors: Munehiro Noda; 宗宏野田; Yuriko Sukenobu; 資延　由利子; Koji Mazaki; 真崎　厚司; Kazuo Takechi; 武智　和男; Hideyuki Ishikawa; 英之石川; Hirobumi Arimura; 有村　博文
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1987-12-04
Filing date: 1987-12-04
Publication date: 1989-06-09

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は腫瘍細胞に対して障害作用を有する新規な因子
に関する。

（従　来　技　術）人の線輪芽細胞が産生ずる腫瘍細胞障害因子としては特
開昭５９−８８４２３．６１−１８７２１号公報に記載
の物質が知られている。

（発明が解決しようとする問題点）人由来の線維芽細胞から得られる新規な腫瘍細胞障害因
子の提供にある。

（問題点を解決するための手段） ■　原料細胞の調製原料細胞はヒト由来の培養株化線維芽細胞が利用される
。好適な細胞としては、ヒト腎由来株化細胞であり、例
えばヒト胎児腎より得たｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅ
又はｄｉｐｌｏｉｄ　ｃｅｌｌを入手し、これを継代培
養して株化したものが例示される。

■　培養条件細胞培養用の培地としては、例えばＷａｙｍｏｕｔｈの
培地、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＭＢ
Ｍ培地などの無血清培地、好ましくは、ヒト血清アルブ
ミンを適量（０，０５〜０．２Ｗ／Ｖ％）　添加した無
血清培地、低濃度（０，０５〜０．　２Ｗ／Ｖ％）　（
７）血清を添加した培地を用いて培養する。培地にはそ
の他ラクトアルブミン氷解物、トランスフェリン、各種
アミノ酸、各種脂肪酸、インシュリン等のホルモンなど
を添加してもよい。

この培地中には空気（Ａ　ｉ　ｒ　９５％、００２５％
）を適宜導入（流速：　１０〜５００ｍｌ！／分）する
ことが好ましく、温度は２０〜３７℃が好ましい。培養
液は２〜３日程度ごとに、交換する。

■精製培養上清中に本発明物質は存在するので、細胞を除去し
た後、当該物質の物理化学的、生化学的性状を利用して
精製される。例えば、濃縮、イオン交換体処理、分子量
に基づく分画処理等を適宜組み合わせることによって行
われる。

具体的には、次の如き方法によって回収される。

即ち、まず培地を遠心分離（例えば１５００回転５分）
し、上滑を回収する。

上清は陽イオン交換体処理によって未吸着画分を得る。

陽イオン交換体処理としては、例えばＣＭ交換体（ｃＭ
−３ｅｐｈａｄｅｘ）が例示される。担体をｐＨ５〜６
、イオン強度０．１〜０゜２Ｍの緩衝液で平衡化した後
、前記培地上清を含有する溶液で接触させ、夾雑物を吸
着させて、未吸着画分を回収する。

未吸着画分はついで、陰イオン交換体処理がされ、未吸
着画分を得る。

陰イオン交換体処理としては、例えばＤＥＡＥ交換体（
ＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｒｏｓｅ）が例示され、この処理
による未吸着画分を分取する。処理は、ＣＭ−３ｅｐｈ
ａｄｅｘ未吸着画分を分子量１万カツトの限外濾過膜（
例えばベリコンＴＸ。

ミリポア社製）によって高分子画分を取得、濃縮して、
例えば５０ｍＭ）リス・Ｈ（ｌ緩衝液（ｐＨ７，０）に
対して透析し、同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−３ｅｐ
ｈａｒｏｓｅカラムに添加後、これに同じ緩衝液を流し
て通過してくる液を集めて得られた未吸着画分を濃縮し
た。この濃縮について同様の操作を３回くり返し未吸着
画分の濃縮液を得る。この濃縮液は次いで、陰イオン交
換体例えばＰｏ１ｙ　ｂｕｆｆｅｒ交換体でクロマトフ
オーカシング処理をし、ｐＨ９，０〜９．４の溶出画分
を得る。

クロマトフオーカシング処理としてはＤＥＡＥ交換体処
理で得られた濃縮液を２５ｍＭ）ＩＪエチルアミン塩酸
緩衝液（ｐＨ１１）に対して透析し、同緩衝液で平衡化
した　Ｐｏ１ｙ　　ｂｕｆｆｅｒ　ＴＸ　　交換体ＰＢ
Ｅ　　１１８カラムに添加後、ｐＨ１０，５から７．０
までの直線型ｐＨ勾配により緩衝液（例えば、２．５ｖ
／ｖ％フォルマライト１０．５〜８など）を流してカラ
ムからｐＨ９，４から９．０で溶出される活性画分を得
る。

次いでゲル濾過処理をして、活性蛋白画分を得る。

ゲル濾過処理としてはＰｏ１ｙ　ｂｕｆｆｅｒ交換体Ｐ
ＢＥ　１１８力ラム溶出画分を分子量１万カツトの限外
濾過膜（例えばＰＭ−１０”Ｍ：アミコン社）によって
高分子画分を分取・濃縮して、０．１５Ｍ塩化ナトリウ
ム含有０．１Ｍ！ｊン酸緩衡液緩衝Ｈ７，０）で平衡化
したゲル濾適用カラム（分画可能分子量１万〜３０万程
度例えば、ＴＳＫＧＥＬ３０００および２００　ＯＳＷ
カラムを用いたＨＰＬＣ）によりゲル濾過を行い、分子
量４万前後の活性を伴った蛋白ピークを回収する。

次いで活性画分について逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマ
トグラフィー）を行い純品を得る。処理は活性画分を集
め、逆相用カラム（例えば、ＲＰ−３０４、Ｃｏｓｍｏ
ｓｉｌ　　５Ｃ４−３００、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ　　Ｗ
ｉｄｅ　　Ｐｏｒｅ　　Ｂｔｘｔｙｌ　　（ｃ４）など
）を用いた逆相ＨＰＬＣ（クロマト条件として例えば、
Ａ液を０．１％トリフルオロ酢酸、Ｂ液を８０％アセト
ニトリル含有Ａ液Ａ液、Ａ液からＢ液へ、直線勾配で溶
出させる）により行われる。

■　本発明物質の特性本発明の腫瘍細胞障害因子は、糖蛋白質であり、以下の
性質を有する。

（ａ）分子量：還元および非還元化におけるＳＤＳを含
むポリアクリルアミドゲルを用いる電気泳動法により３８゜０００±２．０００ダルトンの単一バンド（ｂ）等電点：９．０〜９．４（ｃ）コンカナバリンＡとの結合性：吸着（ｄ）Ｎ末端
アミノ酸配列：（Ｘは未同定）（ｅ）アミノ酸組成（５μｇ中）ｐｍｏ　Ｉｌ　　　　　　％Ａｓｐ　　　　　　　５０５３　　　　１０．８Ｇｌｕ
　　　　　　　４０８７　　　　　８．７μｍｏ　１　
　　　　　　　　％Ｓｅｒ　　　　　　　　　２９８７　　　　　　　６．
４Ｇｌｙ　　　　　　　　　３４２５　　　　　　７．
３Ｈｉｓ　　　　　　　　１５０２　　　　　　３．２
Ａｒｇ　　　　　　　　　１８９８　　　　　　　４．
　０Ｔｈｒ　　　　　　　　　２５２２　　　　　　　
５．４Ａｌａ　　　　　　　　　３９５０　　　　　　
　８．４Ｐｒｏ　　　　　　　　　３０１３　　　　　
　　６．　４Ｔｙｒ　　　　　　　　　１５８４　　　
　　　　３．４Ｖａｌ　　　　　　　　　２７３９　　
　　　　　５．８Ｍｅｔ　　　　　　　　　　６２３　
　　　　　　１．３Ｃｙｓ　　　　　　　　　　　　Ｎ
Ｄ　　　　　　　　　−１１ｅ　　　　　　　　　２２
３０　　　　　　　４．８Ｌｅｕ　　　　　　　　　５
９０７　　　　　１２．　６Ｐｈｅ　　　　　　　　　
１８９１　　　　　　　４．　０Ｔｒｐ　　　　　　　
　　　　　ＮＤ　　　　　　　　　−Ｌｙｓ　　　　　
　　　　３４９８　　　　　　　７．５ＮＤ：未同定（ｆ）アミノ糖分析（５μｇ中）ｐｍｏ　Ｉｌ　　　　　　％ガラクトサミン　　　　４７１　　　　１３．７合　　
　計　　　　　　　３４３８　　　　　１００．０（ｇ
）生理活性：少なくともＫＢ細胞（鼻咽腔癌由来：ＡＴ
ＣＣＣＣＬ−１７）、ＨｅＬａ細胞（子宮頚部癌由来二ＡＴＣＣＣＣＬ−２）に対して増殖抑制作用を有する。

（ｈ）交叉反応性：抗ＴＮＦモノクローナル抗体、抗イ
ンターフェロンのα、β、Ｔの各々モノクローナル抗体、によって中和されない。

（効果）かくして得られた細胞障害性物質は、以下に示す特性か
ら新規物質であり、生化学用、薬理学用の試薬として用
いてもよく、また、医薬品として用いる場合には医薬品
製造の通例技術にしたがって、要すれば滅菌・除菌処理
、製剤化を行えばよい。かくして新規な腫瘍細胞障害性
物質を含有する医薬が提供される。

（実施例）本発明をより詳細に説明するために実験例・実施例を挙
げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるもので
はない。

実験例（ａ）活性の測定９６穴マイクロプレートを用いて本発明物質（以下ＦＴ
Ｘ）サンプルを２倍段階希釈した（５ＱｐＲ／ｗｅ　１
１）　。これに１０　Ｘ　１０　’Ｃｅ１ｌｓ／ｍｌの
ＫＢ細胞（ヒト鼻咽喉癌由来：ＡＴＣＣＣＣＬ−１７，
５０μＡ’／ｗｅ　？　？）またはＨｅＬａ細胞（子宮
頚部癌由来：ＡＴＣＣＣＣＬ−２，５０Ａｔｌ／Ｗｅ　
１１）を加え３７℃５％Ｃ０２以下で７日間培養した。

培養後、上滑をすて０゜０５％クリスタルヴアイオレッ
ト染色液で残存細胞を染色し生細胞にとり込まれた色素
量を、マルチスキャン（タイターチック製）を用いて５
９０ｎｍでの吸光度により測定した。そして未処理細胞
の吸光度に対するＦＴＸサンプル処理細胞の吸光度の割
合を求めて、これを増殖率とし５０％増殖抑制を示すＦ
ＴＸサンプルの希釈倍数をＦＴＸ活性量　（Ｕ／ｍｎ）
としてあられした。

（ｂ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥ逆相ＨＰＬＣから得られたＦＴＸの蛋白ピークを回収し
、約３７℃で減圧濃縮・乾固した。これに、２％ＳＤＳ
、０．３Ｍシヨ糖含有０．０６２５Ｍ１−リス−ＨＣｌ
バッファー、ｐＨ１３，８あるいは、同バッファーに２
％２−メルカプトエタノールを含んだバッファーを添加
し、溶解して、室温で約３０分間放置（前者バッファー
処理：非還元ＳＤＳ処理）あるいは、１００℃で３分間
加熱（後者バッファー処理：還元ＳＤＳ処理）後、５Ｄ
Ｓ−ＰＡＧＥに供した。泳動は、０．１％ＳＤＳ含有１
５％ポリアクリルアミドゲル（１ｍｍｍｍラスラブゲル
用い、Ｌａｅｍｍｌｉの方法［Ｎａｔｕｒｅ、２２７．
６８０　（１９７０）コに準じて行った。また、５ＤＳ
−ＰＡＧＥ　　Ｐｈ−ａｓｔ　　Ｇｅｔ　　Ｇｒａｄｉ
ｅｎｔ８−２５を用いたＰｈａｓｔ　　Ｓｙｓｔｅｍ（
ファルマシア製電気泳動装置）でも実施した。泳動後、
蛋白バンドは銀染色（銀染色キット、和光製）により検
出した。分子量マーカーとして、ホスホリラーゼＢ（９
４Ｋ）、　ウシ血清アルブミン（６７Ｋ）、オバルブミ
ン（４３Ｋ）、カルボニックアンヒドラーゼ（３０Ｋ）
、トリプシンインヒビター（２０゜１Ｋ）、そして、α
−ラクトアルブミン（１４゜４Ｋ）を用いた。

その結果、ＦＴＸは、分子量３８にダルトンの位置に単
一の蛋白バンドとして検出され、このバンドは、還元処
理を施しても変化しなかった（第４図）。

（ｃ）等電点バイオケミ力・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏ−ｃｈ
ｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、　）　　１９４．
３３５　　（１９６９）、アクタ・ケミカル・スカンジ
ナビア（Ａｃｔａ。

Ｃｈｅｍ、５ｃａｎｄ、）　、２０．８２０　　（１９
６６）によッテ焦点電気泳動法［Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖ
ｅ　ｆｌａｔ−ｂｅｄ　ｅｌ−ｅｃｔｒｏｆｏｃｕｓｉ
ｎｇ　（ＫＬＢ）　］によって等電点を求めたところ、
本発明ＦＴＸはｐＩ９．０〜９．４であった。

（ｄ）アミノ酸組成及びアミノ糖の確認本発明ＦＴＸの
５μｇについて、６Ｎ−塩酸２０時間処理により加水分
解後、Ｐ　ＩＣｏ−ＴＡＧＴＭｍｅｔｈｏｄによりアミ
ノ酸組成を決定した。

ｐｍｏｌ　　　　　　　％ＡＳｐ　　　　　　５０５３　　　　１０．８Ｇｌｕ　
　　　　　　４０８７　　　　’　　８．７Ｓｅｒ　　
　　　　　２９８７　　　　　６．４Ｇｌｙ　　　　　
　　３４２５　　　　　７．３Ｈｉｓ　　　　　　　１
５０２　　　　　３．２Ａｒｇ　　　　　　　１８９８
　　　　　４．０Ｔｈｒ　　　　　　　２５２２　　　
　　５．４Ａ　ｌ　ａ　　　　　　　３９５０　　　　
　８．４−　　Ｐｒｏ　　　　　　　３０１３　　　　
　６．４Ｔｙｒ　　　　　　　　　１５８４　　　　　
　　３．　４Ｖａｌ　　　　　　　　　２７３９　　　
　　　　５．８ｅｍｏ　！！　　　　　　　　　％Ｍｅｔ　　　　　　　　　　６２３　　　　　　　１．
３Ｃｙｓ　　　　　　　　　　　　ＮＤ　　　　　　　
　　−１１ｅ　　　　　　　　　２２３０　　　　　　
　４．　８Ｌｅｕ　　　　　　　　　５９０７　　　　
　　１２．　６Ｐｈｅ　　　　　　　　　１８９１　　
　　　　　４．　０Ｔｒｐ　　　　　　　　　　　ＮＤ
　　　　　　　　　−合　　　計　　　　　４６９１０
　　　　１００．ＯＮＤ：未同定また、同ＦＴＸの５μｇについて４Ｎ−塩酸４時間処理
により加水分解後、上記同様の方法によリアミノ糖の分
析を行ったところ、グルコサミンおよびガラクトサミン
が検出された。この結果から本発明のＦＴＸが糖蛋白質
であることを確認した。

ｐｍｏ　１　　　　　　　　　％ガラクトサミン　　　　４７１　　　　１３．７合　　
計　　　　　　　３４３８　　　　１００．０（ｅ）ア
ミノ酸配列の決定本発明ＦＴＸの１０μｇについて、還元・アルキル化機
アプライドバイオシステムズ社のＧａ５−Ｐｈａｓｅ　
Ｐｒｏｔｅｉｎ　５ｅｑｕｅｎｃｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　　
４７　Ｑ　Ａを使用した自動エドマン分解法によりＮ末
のアミノ酸配列を決定した。この結果、本発明は従来既
知の抗腫瘍物質とはその配列を異にする新規な物質を提
供するものであることを確認した。

Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−１１ｅ−Ａｒｇ−（配列中、
Ｘは未同定であることを意味する）（ｆ）生物活性本発明Ｆ　Ｔ　Ｘ　ハ、ＭＬ−１細胞（７）ＮＢＴ還元
能に影響を及ぼさなかったので、分化誘導能を示さない
。

ＦＬ−シンドビスウィルスの系でウィルス増殖を抑制せ
ず、Ｌ細胞に対する障害作用は示さなかった。

（ｇ）既知物質に対する抗体との反応性抗ＴＮＦモノク
ローナル抗体、抗ＩＦＮα、β。

γモノクローナル抗体によりＫＢ細胞に対する増殖抑制
作用は中和されなかった。

表１．ＦＴＸの既知リンホカイン抗体との反応性Ｕ／ｍ
　ＩＦＴＸ　＋　Ｍｅｄｉｕｍ　　　　　　　　　　　　４
５ＦＴＸ　＋　Ａｎｔｉ　ＩＦＮ−ａ、　　β、　　ｒ
本５１ＦＴＸ　＋　Ａｎｔｉ　ＴＮＦ（２８４）本＄　
　　　　　　　４３＊　Ａｎｔｉ　ＩＦＮ＋α（１０，
０ＯＯＮＩＪ／ｍｌ）＋　Ａｎｔｉ　ＩＦＮ−β（１０
゜００ＯＮＵ／ｍｌ）　＋　Ａｎｔｉ　ＩＦＮ−７（４
，００ＯＮＩＪ／ｍｌ）＊＊　　Ａｎｔｉ　　ＴＮＦ　
　（２Ｈ４，１０，０ＯＯＮＩＪ／ｍｌ）１）粗ＦＴＸＨＫＧ細胞（ヒト腎由来線維芽細胞）を０．０５％〜０
．１％ヒト血清アルブミン含有ｍｏｄｉｆｉ−ｅｄウェ
イマウス培地で３７℃２〜３日間培養し、ソノ培養上清
（ＦＴＸ活性５〜ＩＯＵ／ｍｊりに０．１２Ｍリン酸バ
ッファー（ｐＨ５，５）で平衡化したＣＭ−セファデッ
クスを添加して未吸着画分を粗ＦＴＸ　（ＦＴＸ活性？
、３Ｕ／ｍＪ、比活性１．６０／ｍｇ蛋白）とした。

２）ＦＴＸの精製 ■ＤＥＡＥセファロースクロマト粗ＦＴＸ　１００　ｆヲペリコンカセットシステム（限
外ろ過膜システム、分画分子量１万）を用いて５０ｍＭ
）リスーＨＣｊ！バッフｙ　−ｐ　Ｈ７に溶媒交換する
と共に１．７１０ｍｌ１にまで濃縮した。

そして予め同バッファーで平衡化したＤＥＡＥセファロ
ースＦＦ（ファルマシア製）カラム（１０Ｘ２０ｃｍ）
に添加し、通過してくる液を集めた（゛）。

活性回収率は１１９％、比活性は１６０倍に上昇した。

■クロマトフオーカシングＤＥＡＥ−セファロースクロマトステップから得られた
両分をペリコンカセットシステム及び２Ｍ１０膜（限外
ろ過膜、分画分子量１万）を用いて、５８ｍ１にまで濃
縮し、２５ｍＭ）リエチルアミンーＨＣβｐＨ１１に対
し透析した。そしてその半量を予め平衡化したパリバッ
ファー交換体ＰＢＥ１１８（ファルマシア製）カラネ（
２６Ｘ３５ｃｍ）に流速２００ｍβ／時間で流した。続
いてカラム体積の約１．５倍量の平衡化バッファーを用
いて洗浄後、吸着蛋白の溶出は、カラム体積の約１０倍
量の２．５％（Ｖ／Ｖ）ファルマライ）１０．５〜８　
（ファルマシア製）　　ｐＨ７（ＨＣｌで調整）を流す
ことにより形成される直線型ｐＨ勾配及びこれに続＜Ｉ
ＭＮａＣｊ！により行った。

分取は２０ｍｊｉ！／ｆｒ、で行い、各フラクションに
ついてＡ２８０　、　　ｐＨ及び活性の測定を行った。

ｐＨ１０，５から７．０までのｐＨ勾配で溶出したとこ
ろ、約６５％の活性がｐＨ９〜９．４の間に認められた
。このＦＴＸ画分の前ステップ（ＤＥＡＥ−セファロー
スカラマド）からの活性回収率は約２２％であった（第
１図）。

■ＴＳＫｇｅｌＧ３０００−２０００ＳＷゲルろ過ＨＰ
ＬＣクロマトフオーカシングステップから得られた活性フラ
クションプール液をＰＭＩＯ膜により濃縮し、予め０．
１５Ｍ塩化ナトリウム含有０．１Ｍ’ｌン酸バッファー
、ｐＨ７で平衡化したＴＳＫｇｅｌＧ−３０００−２０
００３ＷカラＡ　（７゜５ｍｍｘ６０　ｃｍ、２本、東
洋ソーダ製）に注入した。溶出は流速１ｍｊ！／ｍｉｎ
で行い、各フラクションは２ｍ１ｉ分取とした。また同
カラムは、グルタメート・デヒドロゲナーゼ（２９０ｋ
）。

ラクトース・デヒドロゲナーゼ（１４２ｋ）、　エノラ
ーゼ（６７ｋ）、アデニレート・キナーゼ（３２ｋ）及
びチトクロームＣ（１２，４ｋ）により分子量曲線を作
成した。溶出液はＡ　２　Ｂ　（３による蛋白吸収と活
性によりモニターした。その結果、活性は分子量約４万
付近に単一ピークとして検出された（第２図）。

■Ｃｏｓｍｏｓｉｌ　　５　Ｃ４−３００逆相ＨＰＬＣ
ＴＳＫｇｅｌＧ３０００−２０００ＳＷゲルろ過ＨＰＬ
Ｃステップから得られた活性フラクションプール液を予
め０．１％トリフルオロ酢酸、ｐＨ２で平衡化したＣｏ
ｓｍｏｓｉｌ　　５　Ｃ４−３００カラム（４，６Ｘ２
５０ｍｍ、半井化学製）に注入した。溶出は、０〜８０
％アセトニトリル含有０゜１％トリフルオロ酢酸、ｐＨ
２を用いた６０分間の直線型濃度勾配で行い、流速１ｒ
ｒｌ／分で１ｍ１分取した。溶出液は、Ａ２．６による
蛋白吸収でモニターすると共に各フラクションは、減圧
乾固後活性測定した。

その結果、リテンションタイム４８分の位置に活性と一
致するシャープな蛋白吸収ピークを得た。

■Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ　Ｗｉｄｅ　Ｐａｒｅ　Ｂｕｔｙ
ｌ　（ｃ４）逆相ＨＰＬＣＴＳＫｇ　ｅ　ＩＯ２０００’−２０００ＳＷゲルろ過
ＨＰＬＣステップから得られた活性フラクションプール
液を予め０．１％トリフルオロ酢酸、ｐＨ２で平衡化し
たＢａｋｅｒｂｏｎｄ　　ＷｉｄｅＰｏｒｅ　　Ｂｕｔ
ｙｌ　　（ｃ４，５μｍ、４，６ｘ２５０ｍｍ、Ｊ、Ｔ
、Ｂａｋｅｒ製）に注入した。

溶出は０〜８０％アセトニトリル含有０．１％トリフル
オロ酢酸、ｐＨ２を用いた６０分間の直線型濃度勾配で
行った。

流速は、１ｍ１１分とし、Ｌｍ１分取した。溶出液は、
Ａ　２１　Ｂによる蛋白吸収でモニターし、蛋白ピーク
を回収した（第３図）。

【図面の簡単な説明】

クロマトフオーカシングによる本発明ＦＴＸの溶出パタ
ーン。−〇−はＦＴＸ活性を、−一一一はＡ２１１！１
　　（蛋白質による吸収）を示す。第２図ＴＳＫゲル３０００〜２０００　ＳＷによるＦ’ｒＸの
ゲル濾過パターン。口はＦＴＸ活性パターンを示し、点
線は蛋白質による吸収を示す。第３図０４カラムを用いた逆相ＨＰＬＣパターン。ＦＴＸは、
本発明物質を示す。第４図ＦＴＸ□）ＳＤＳ／ＰＡＧＥ！、：よる１気泳動ハター
ンを示す。第　　１　　図Ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｎｏ、（１０１ｍ）／ｒＪ第　　２
　　図Ｒｅ＋ｅＪｉｏｎ　Ｔｉｍｅ　　（今）第　　３　　図第　　４　　図

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ヒト由来の線維芽細胞の培養上清から得られる糖
蛋白質であり、以下の性質を有する腫瘍細胞障害因子。（ａ）分子量：還元および非還元化におけるＳＤＳを含
むポリアクリルアミドゲルを用いる電気泳動法により３８，０００±２，０００ダルトンの単一バンド（ｂ）等電点：９．０〜９．４（ｃ）コンカナバリンＡとの結合性：吸着（ｄ）Ｎ末端アミノ酸配列：【遺伝子配列があります。】（Ｘは未同定）（ｅ）アミノ酸組成（５μｇ中） ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ＮＤ：未同定（ｆ）アミノ糖分析（５μｇ中） ▲数式、化学式、表等があります▼ （ｇ）生理活性：少なくともＫＢ細胞（鼻咽腔癌由来：
ＡＴＣＣＣＣＬ−１７）、ＨｅＬａ細胞（子宮頚部癌由来：ＡＴＣＣＣＣＬ−２）に対して増殖抑制作用を有する。（ｈ）交叉反応性：抗ＴＮＦモノクローナル抗体、抗イ
ンターフェロンのα、β、 γの各々モノクローナル抗体、によって中和されない。