JPH04200395A

JPH04200395A - ペルオキシダーゼ作用物質検出用試験片

Info

Publication number: JPH04200395A
Application number: JP32943290A
Authority: JP
Inventors: Toru Tanaka; 徹田中
Original assignee: GODO SHIYUSEI KK; Godo Shusei KK
Current assignee: GODO SHIYUSEI KK; Godo Shusei KK
Priority date: 1990-11-30
Filing date: 1990-11-30
Publication date: 1992-07-21
Anticipated expiration: 2014-09-13
Also published as: JP2948654B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、体液や排泄物などの、試料中のペルオキシダ
ーゼ作用物質の、検出用試験片に関するものである。

［従来の技術］体液や排泄物、例えば、尿、吐物、胃腸内容物、糞便な
どに混在する微量の血液等の検出は、潰瘍、腎炎等の炎
症、腫瘍、出血性素因等の疾病を、早急に発見する方法
の一つとして、診断上極めて重要であるが、通常、前記
疾病に起因する血液の量は、試料の絶対量に比べると掻
く微量であるために、肉眼的確認は事実上不可能に近い
。

それ故、これら試料中の血液の検出のためには、顕微鏡
観察による方法が取られてきたのであるが再現性に欠け
るだけでなく、操作も複雑であり、多数の検体を短時間
に処理するには、本質的に無理であった。

この欠点を克服するために、有機ヒドロペルオキシドと
酸化呈色指示薬とを、担体に担持させた試験片が考案さ
れた。これは、体液や排泄物中に血液が存在すれば、そ
の成分であるヘモグロビンの示すペルオキシダーゼ様活
性により、有機ヒドロペルオキシドは、分解されて酸素
を発生するので、この酸素によって、試験片中の酸化呈
色指示薬の色調を変化させて、検出しようとするもので
ある。

この方法によれば指示薬の呈色の変化を、肉眼的ないし
光学的に測定すると云う簡単な操作で、容易に試料中の
ペルオキシダーゼ作用物質の検出かて゛きる。

ペルオキシダーゼ作用は、白血球や細菌によっても発現
するので、この作用物質の検出は、腎または尿路の疾患
や、感染の診断にも有用である。

また、心筋梗塞時には尿中にミオグロビンが出現するが
、これもペルオキシダーゼ作用を有する物質であり、診
断に応用される。

これらの場合、ヒドロペルオキシドが分解して発生する
酸素の量と、酸化呈色指示薬の呈色の強度には、比例関
係が存在するので、標準の色調あるいは吸光標準曲線と
の対比により、ペルオキシダーゼ作用物質の、定量分析
も可能である。

前記の有機ヒドロペルオキシドと酸化呈色指示薬とが、
担体に担持されている形態の試験片においては、検体中
の微量のペルオキシダーゼ作用物質を、鋭敏に検出でき
るように、当該試験片の検出悪魔を向上させたり、劣化
防止や安定化を意図した各種の試験片が、考案されてい
る。

例えば、該試験片の検出感度を向上させる化合物として
は、特開昭４９−５４０９４号公報にはベンゾキノリン
誘導体が、特開昭５４−２４６９７号公報にはベンゾチ
アゾール誘導体が有効である旨の記載かある。

麟な、特公昭３９−１４７４７号公報にはマイクロカプ
セル化を利用して、有機ヒドロペルオキシドと酸化呈色
指示薬とを隔離して、安定性を向上させる方法が、さら
には、特開昭５１−６５６９４号公報にはポリビニルピ
ロリドンのようなフィルム形成性重合体を利用して、同
様に安定化を図る例が記載されている。

有機ヒドロペルオキシドと酸化呈色指示薬との間に、あ
る種の添加物質を安定化のため介入させる例としては、
特開昭４９−５４０９３号公報にはリン酸アミドが、ま
た、特開昭５３−１１５２８８号公報には　トリエタノ
ールアミンボレート等のホウ酸エステルが記載されてい
るが、いずれも、ペルオキシダーゼ作用物質の存在じな
い条件下で、有機ヒドロペルオキシドと酸化呈色指示薬
とが、反応することを防止しようとするものである。

［発明が解決しようとする問題点コベルオキシダーゼ作用物質検出のための試験片にあって
は、担持されている有機ヒドロペルオキシドと酸化呈色
指示薬とは、極めて反応性に富んでいて、前項で示した
如き方法では、保存中に両試薬間で起きる、酸化還元反
応による試験片の劣化は、ある程度の改善は見られても
、効果は限定的である。

試験片が保存される環境について言えば、過酸化物質を
分解する種々の因子、例えば紫外線等の光線、温度、湿
度などの物理化学的要因や、金属粒子、酸化道元性物質
の存在などにより、試験片は容易に変色や反応性の低下
を起こすのである。

前述の試験片の劣化は、製品品質のばらつきの原因とな
るだけでなく、誤判定の要因ともなり、さらには、試験
片の長期保存性の欠如となり、品質管理上の重大な問題
点として指摘されている。

本発明は、これらの問題点を克服して、種々の因子によ
る変色や反応性等の劣化を起さず、ペルオキシダーゼ作
用物質の検出を、長期間安定して可能にした試験片を、
提供するものである。

［問題点を解決するための手段］本発明の、ペルオキシダーゼ作用物質を検出する試験片
は、担体に少なくとも、有機ヒドロペルオキシド、酸化
呈色指示薬、および本発明の安定剤か１種、または２種
以上担持されたものであり、さらにこの種の試験片に一
般的に使用される、緩衝剤、湿潤剤、増感剤等を共存さ
せることを妨げない。

本発明の、ペルオキシダーゼ作用物質検出用の試験片は
、一般にＰ紙、綿、ガラス繊維等の吸収性を持つ担体に
、前記の有機ヒドロペルオキシド、酸化呈色指示薬およ
び安定剤、さらには、緩衝剤、湿潤剤、増感剤等を担持
させた構成となっている。

吸収性の担体に、これら薬剤を含有せしめた試験片は、
ポリスチレン、ポリエチレン等のプラスチック片の基材
上に、貼り付は等の方法で固定したものが、−船釣使用
形態である。

本発明において使用できる安定剤としては、水または有
機溶媒に可溶な物質であって、以下の化合物群、即ち［２，３−ジメチル−１−フェニル−３−ピラゾリン−
５−オン（アンチピリン）、４−アミノ−１，５−ジメ
チル−２−フェニル−３−ピラゾリン−３−オン（アミ
ノピリン）、４−ジメチルアミノ−１，５−ジメチル−
２−フェニル−３−ピラゾリン−３−オン、および３−
メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン］の
うちより選ばれた、１種または１種以上の化合物が使用
される。

本発明の安定剤を担持した試験片は、種々の因子による
変色や反応性の低下などの性能の劣化に対して安定であ
り、長期間にわたってその性能が維持される。

吸収性の担体に、本発明の安定剤を担持させる時の、含
浸漬の濃度は、０．００００１〜０．１重量％で有効で
あるが、好ましくは０．０００１〜０．０１重重量％特
に効果が大きい０本発明の安定剤を担持させることによ
る試験片の安定化は、−ｍに公知な試験片の製造工程で
利用が可能である。

試験片に担持させる有機ヒドロペルオキシドは常温で液
状ないし固体のものが用いられるが、−般にこの化合物
は、光や熱に対して不安定であり、安定性の高い有機ヒ
ドロペルオキシドを、選択して使用するのが望ましい。

安定な有機ヒドロペルオキシドとしては、ｔ−ブチルヒ
ドロペルオキシド、バラメタンヒドロペルオキシド、ク
メンヒドロペルオキシドなどから、１種あるいは２種以
上を選択するのがよい。

また、含浸液における、有機ヒドロペルオキシドの濃度
は、０．０５〜５．０重量ち、殊に０．２〜１．０重量
°≦で調製するのが好ましい。

有機ヒドロペルオキシドと酸化呈色指示薬を、隔離して
担持するのも、望ましい方法である０例えば、ゼラチン
、アラビアガム等の膠質物質を用いたマイクロカプセル
による方法や、ポリヴイニルビロリドン等の膜形成性重
合化合物による隔離が挙げられる。また、有機ヒドロペ
ルオキシドをサイクロデ護ストリンで包接することも、
安定性には有効である。

本発明に使用する酸化呈色指示薬は、有機ヒドロペルオ
キシド化合物が、ペルオキシダーゼ作用物質により分解
されて発生する酸素の酸化作用を受けて発色し、肉眼な
いし光学的に判定可能となるものであれば可く、具体的
にはｏ−）リジン、ペン・チジン、３．３°、５．５’
−テトラメチルベンチジン、オルトアニシジン、２．７
−ジアミツフルオレン等が、０．０５〜２．０重量シー
の濃度の含浸液として使用できる。

また、臨床医学上の要請から、極微量のペルオキシダー
ゼ作用物質を検出するため、試験片には種々の増悪剤が
使用される例が多くあり、増感効果を示す物質としては
、キノリン誘導体、ベンゾキノリン誘導体、ベンゾチア
ゾール誘導体、ピリジン誘導体等があるが、含浸液濃度
００５〜１．０重量−で使用できる。

試験片中への検体の浸透を促進し、反応を容易にし、ま
た、酸化呈色指示薬が酸化によって生ずるラジカルカチ
オンを安定化させるために、湿潤剤を用いる場合がある
が、ドデシル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルフオコハ
ク酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルフオン酸ナトリ
ウム等の陰イオン性界面活性剖が適している。

また緩衝剤は、ペルオキシダーゼ作用物質の検出を鋭敏
にするために使用されるが、含浸液のｐＨが４〜８にな
るように、リン酸塩、クエン酸塩、フタル酸塩、コハク
酸塩等の溶媒可溶性成分が用いられる。

試験片中に、多量の水溶性物質が担持されると、測定時
にそれらが検体中に流出するおそれがあるので、これを
防止するために、メチルセルロースやゼラチンなどの、
粘稠剤を添加することも可能である。

吸収性の担体に、前述の各種物質を担持させるには、２
つの工程に分けて実施するのが有利である。一般に溶剤
としては、低級アルコール等の有機溶媒と水との混合液
を使用し、溶剤中に所定量の有機ヒドロペルオキシド、
緩衝剤、湿潤剤等を溶解させ、この溶液にｔ紙等の吸収
性の担体を浸潰した後取り出して、５０〜９０°Ｃで一
旦乾燥する。

さらに、酸化呈色指示薬と本発明の化合物等が、溶解さ
れている含浸液に浸漬して取り出し、再度乾燥させる。

このようにして得られたペルオキシダーゼ作用物質に５
応する試験片は、適宜な大きさの小片に裁断し、プラス
チック片等に、貼着などの方法で固定して、測定に使用
する。

この測定用試験片は、血液の１００万倍希釈液に浸漬し
た後、過剰の浸漬液を除き、４５秒後の色調の変化を、
標準色調と比較することにより、血液の検出が可能であ
る。また、この感度を有する試験片は、ペルオキシダー
ゼ作用物質検出用として、臨床検査などに供用可能であ
る。

本発明による試験片は、最低１年以上の保存に耐えられ
、また、室内光縁下放置しても劣化や変色を生じない０
本発明による安定剤を含まない試験片は、放置あるいは
保存によって、経時的に発色乃至変色を生じ、検出感度
も著しく低下する。

［実施例］以下に、実施例を挙げて本発明と具体的に説明するが、
これによって本発明の範囲が限定されるものではない。

実施例１゜Ｐ紙（ワットマン３　Ｍ　Ｍ　）を次の組成の第１液に
浸漬する。

第１液ゼラチン　　　　　　　　　　　Ｕ・２ｇアラビアゴム
粉末　　　　　　　５．０ｇドデシル硫酸ナトリウム　
　　　０．３ｇクエン酸３ナトリウム２水和ｎ　　　９
．６ｇクエン酸１水和物　　　　　　　　１．７ｇクメ
ンヒドロペルオキシド　　　１．０ｍｌタートラジン　
　　　　　　　　００２ｇＥＤＴＡ・２Ｎａ　　　　　
　　　　　　　５．θｇ温薫蒸留水約６０℃＞　　　　
　　　　１００＋ｎｌ洪紙を取り出し、８０℃で５時間
乾燥する。この沢紙を次の第２液に浸漬する。

第２液ｏ−トリジン　　　　　　　　　　　　　０．５ｇ３−
アミノキノリン　　　　　　　　　０．３ｇポリビニル
ピロリドン　　　　　　　０．２ｇ４−ジメチルアミノ
−１，５−ジメチル−２−フェニル−３−ピラゾリン−
３−オン　０．０１ｇイソプロパツール　　　　　　　
　１００ｍ１第２液を含浸したＰ紙を取り出し、５０°
Ｃて１０分間乾乾燥た。

このようにして得られたペルオキシダーゼ作用物質検出
用試験片は、適当な大きさに裁断し、プラスチック製支
持体に、両面接着紙等を利用して貼りつけた。

また、対照として上記製造法における第２液より、４−
ジメチルアミノ−１，５−ジメチル−２−フェニル−３
−ピラゾリン−３−オンだけを除いて製造した、ペルオ
キシダーゼ作用物質検出用試験片を用意した。

２種の試験片は、血液の　１００万倍希釈液を検体とし
て、４５秒後の呈色を標準色調と対比した時、共に血−
液の検出が可能であった。

室内の照明下に２種の試験片を放置し、試験片の変色と
、検出感度を調べる試験金貨ったところ、放置２時間で
は、本発明の試験片は、変色は認め、られす、感度も放
置前と変わらないのに対し、対照の試験片は、１時間後
には既に褐変を生じ、検出感度も著しく低下していた。

この結果から、本発明の安定剤は、ペルオキシダーゼ作
用物質検出用試験片の、耐光安定性に著しい効果がある
ものと認められた。

次に上記２種の試験片を、乾燥剤の存在下で暗所に、室
温および３７°Ｃに保存して、劣化変色を経時的に試験
したところ、本発明の試験片については、暗所室温の条
件で、１年経過後でも変色は認められず、血液検出感度
にも劣化は、見られなかった。

苛酷試験である３７℃保存でも、３ケ月間にわたって試
験片の変色、および検出感度に劣化は観察されなかった
。

これに対し、対照の試験片は室温で１ケ月後、３７°Ｃ
では１昇後に既に試験紙に褐変が見られ、血液の検出感
度は、著しく低下し、実用に供し得ない状態であった。

以上の結果から、実用上の条件下においても、本発明の
安定剤は、ペルオキシダーゼ作用物質検出用試験片の保
存安定性向上に、極めて非著な効果があることか明かと
なった。

実施例２実施例１における、４−ジメチルアミノ−１，５−ジメ
チル−２−フェニルづ一ピラゾリンー３−オーンの代わ
りに、３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５
−オンを用いて、実施例１と同様の操作を行ない、目的
とするペルオキシダーゼ作用物質検出用試験片を得た。

この試験片についても、実施例１と同様の試験を行ない
、本発明の安定剤を使用したものは、検出感度、耐光安
定性、保存安定性の極めて優れた、ペルオキシダーゼ作
用物質検出用試験片であることが、確認された。

実施例３？実施例１における、４−ジメチルアミノ−１，５−ジメ
チル−２−フェニル−３−ピラゾリン−３−オンに代え
て２．３−ジメチル−１−フェニル−３−ピラゾリン−
５−オン（アンチピリン）用いて、実施例１と同様の操
作を行ない、目的とするペルオキシダーゼ作用物質検出
用試験片を得た。

実施例４実施例１における、４−ジメチルアミノ−１，５−ジメ
チル−２−フェニル−３−ピラゾリン−３−オンに代え
て４−アミノ−１，５−ジメチル−２−フェニル−３−
ピラゾリン−３−オン（アミノビリン）用いて、実施例
１と同様の操作を行ない、目的とするペルオキシダーゼ
作用物質検出用試験片を得た。

この試験片についても、実施例１と同様の試験を行ない
、本発明の安定剤を使用したものは、検出感度、耐光安
定性、保存安定性の極めて優れた、ペルオキシダーゼ作
用物質検出用試験片であることか、確認された。

［発明の効果コ本発明の安定剤の使用により、検出感度、耐光安定性、
保存安定性の極めて優れた、ベルオキシターセｆＶ用物
質検出用試験片の提供が、可能となった。

以上

Claims

【特許請求の範囲】

（１）有機ヒドロペルオキシド、酸化呈色指示薬、なら
びに以下の化合物群［２，３−ジメチル−１−フェニル−３−ピラゾリン−
５−オン（アンチピリン）、４−アミノ−１，５−ジメ
チル−２−フェニル−３−ピラゾリン−３−オン（アミ
ノピリン）、４−ジメチルアミノ−１，５−ジメチル−
２−フェニル−３−ピラゾリン−３−オン、および３−
メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン］の
うちより選ばれた、１種または１種以上の化合物を含有
することを特徴とするペルオキシダーゼ作用物質検出用
試験片。