JPH04194750A - 生体液中のアミノ酸分析方法および装置 - Google Patents
生体液中のアミノ酸分析方法および装置Info
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- JPH04194750A JPH04194750A JP2327659A JP32765990A JPH04194750A JP H04194750 A JPH04194750 A JP H04194750A JP 2327659 A JP2327659 A JP 2327659A JP 32765990 A JP32765990 A JP 32765990A JP H04194750 A JPH04194750 A JP H04194750A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、生体液中のアミノ酸の分析方法およびその装
置に関する。
置に関する。
［従来の技術］
尿、血清等の生体液中に含まれるアミノ酸を分析するア
ミノ酸分析装置は、特開昭５９−１０８４９号に述べら
れているように、アスパラギン（Ａ ｓ ｐ ＮＨ，）
、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グルタミン（Ｇ ｌ ｕ
ＮＨｚ）の３成分の分離向上を主体に努力が払われてい
た。すなわち、生体液中のアミノ酸約４０成分を分離す
るに当り、重要成分であり、かつ、分離が最も困難とさ
れている前記３成分の分離能を向上させるために、分離
カラム中の充填剤（イオン交換樹脂）を微細化したり、
分離液である緩衝液の組成を工夫したり、分離カラムの
温度を変えるなど様々な分離能向上の工夫がなされてき
た。しかし、これらの方法でも未だに十分とは云えない
のが現状である。
ミノ酸分析装置は、特開昭５９−１０８４９号に述べら
れているように、アスパラギン（Ａ ｓ ｐ ＮＨ，）
、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グルタミン（Ｇ ｌ ｕ
ＮＨｚ）の３成分の分離向上を主体に努力が払われてい
た。すなわち、生体液中のアミノ酸約４０成分を分離す
るに当り、重要成分であり、かつ、分離が最も困難とさ
れている前記３成分の分離能を向上させるために、分離
カラム中の充填剤（イオン交換樹脂）を微細化したり、
分離液である緩衝液の組成を工夫したり、分離カラムの
温度を変えるなど様々な分離能向上の工夫がなされてき
た。しかし、これらの方法でも未だに十分とは云えない
のが現状である。
その理由は第２図と第３図を比較すれば容易に理解でき
る。第２．３図はアミノ酸分析装置で分析した生体液中
の４２成分のアミノ酸に相当する混合標準液のクロマト
グラムである。
る。第２．３図はアミノ酸分析装置で分析した生体液中
の４２成分のアミノ酸に相当する混合標準液のクロマト
グラムである。
第２図は新しい分離カラムのクロマトグラムであり、第
３図は約５００検体の血清試料の測定に供したカラムに
よるクロマトグラムである。
３図は約５００検体の血清試料の測定に供したカラムに
よるクロマトグラムである。
第２図では、アスパラギン２１とグルタミン酸２２およ
びグルタミン２３は明瞭に分離されているが、第３図で
は、アスパラギン２１ａとグルタミン酸２２ｂは分離さ
れておらず、二つのピークの谷間が消失している。その
ため、ピーク面積の計算においては、両者が統合されて
演算されてしまい、アスパラギン２１ａは存在しないと
表示される。こうなると全体成分の定性並びに定量分析
の信頼性がなくなったと判断され、分離カラムは寿命が
きたものとして交換される。
びグルタミン２３は明瞭に分離されているが、第３図で
は、アスパラギン２１ａとグルタミン酸２２ｂは分離さ
れておらず、二つのピークの谷間が消失している。その
ため、ピーク面積の計算においては、両者が統合されて
演算されてしまい、アスパラギン２１ａは存在しないと
表示される。こうなると全体成分の定性並びに定量分析
の信頼性がなくなったと判断され、分離カラムは寿命が
きたものとして交換される。
［発明が解決しようとする課題］
しかし、前記３成分以外のピークについてよく検討して
みると十分に分離されており、該カラムは前記３成分以
外の成分に対してはまだまだ使用できる状態にある。こ
うした分離成分による分離能のアンバランスに基づ（分
離カラムの寿命の判定は、当該分析のランニングコスト
のアップにつながる。
みると十分に分離されており、該カラムは前記３成分以
外の成分に対してはまだまだ使用できる状態にある。こ
うした分離成分による分離能のアンバランスに基づ（分
離カラムの寿命の判定は、当該分析のランニングコスト
のアップにつながる。
本発明の目的は、分離能のバランスのよいアミノ酸分析
方法並びに該装置を提供することにある。
方法並びに該装置を提供することにある。
［課題を解決するための手段］
前記課題を解決するために本発明者らは、第２゜３図を
詳細に検討した結果、 （１）分離不能となる分析成分は、当該クロマトグラム
の１個所に集中しており、しかも全体の分析時間の初期
の１／４の部分に位置し、残りの３／４では各ピークの
分離能には問題がないこと。
詳細に検討した結果、 （１）分離不能となる分析成分は、当該クロマトグラム
の１個所に集中しており、しかも全体の分析時間の初期
の１／４の部分に位置し、残りの３／４では各ピークの
分離能には問題がないこと。
（２）全般的に分離能を向上する手段として、緩衝液の
流速を下げる、すなわち、ゆっくり分離させると分離能
がよくなること。
流速を下げる、すなわち、ゆっくり分離させると分離能
がよくなること。
（３）前記（１）において全体の分析時間の後期３／４
で分離される成分については分離能の改善は比較的容易
であること。
で分離される成分については分離能の改善は比較的容易
であること。
が分かった。
本発明は前記３点を踏まえてなされたもので、その要旨
は次のとおりである。
は次のとおりである。
未知分析成分を含む緩衝液をアミノ酸分離用の分離カラ
ムに送液して分離し、該緩衝液を反応装置内で反応後、
検出器によってアミノ酸を検出する生体液中のアミノ酸
分析方法において、前記緩衝液の流速を段階的またはリ
ニアグラジェントに変化させながら分析することを特徴
とする生体液中のアミノ酸分析方法にある。
ムに送液して分離し、該緩衝液を反応装置内で反応後、
検出器によってアミノ酸を検出する生体液中のアミノ酸
分析方法において、前記緩衝液の流速を段階的またはリ
ニアグラジェントに変化させながら分析することを特徴
とする生体液中のアミノ酸分析方法にある。
また、緩衝液、該緩衝液の送液手段、サンプラ、サンプ
ラの下流に設けられた分離カラム、反応装置および検出
器を備えた生体液中のアミノ酸分析装置において、 前記送液手段が前記緩衝液の流速を段階的またはリニア
グラジェントに変化させる手段を備えていることを特徴
とする生体液中のアミノ酸分析装置にある。
ラの下流に設けられた分離カラム、反応装置および検出
器を備えた生体液中のアミノ酸分析装置において、 前記送液手段が前記緩衝液の流速を段階的またはリニア
グラジェントに変化させる手段を備えていることを特徴
とする生体液中のアミノ酸分析装置にある。
以下、本発明を図を用いて詳細に説明する。
前記（１）は、第３図のクロマトグラムで分かるように
最も分離の困難な３成分、アスパラギン２１ａ、グルタ
ミン酸２２ｂおよびグルタミン２３ａは全分析時間１２
５分の中で分析開始から１８〜２３分の間に集中し、２
５分経過後はそれらの分析は完了している。この比率は
全分析時間の初期の約１１５の時間である。
最も分離の困難な３成分、アスパラギン２１ａ、グルタ
ミン酸２２ｂおよびグルタミン２３ａは全分析時間１２
５分の中で分析開始から１８〜２３分の間に集中し、２
５分経過後はそれらの分析は完了している。この比率は
全分析時間の初期の約１１５の時間である。
一方、前記（２）は、ゆっくりと時間をかけることによ
り、具体的には緩衝液の流速を約２／３に下げることに
よりカラムの線速度を下げて溶出させることで実現でき
る。それは第４図から明らかなように、分離時間を第３
図のそれの約１．５ 倍かけることにより、アスパラギ
ン２１ｂ、グルタミン酸２２ｂ、グルタミン２３ｂが十
分に分離されていることが分かる。
り、具体的には緩衝液の流速を約２／３に下げることに
よりカラムの線速度を下げて溶出させることで実現でき
る。それは第４図から明らかなように、分離時間を第３
図のそれの約１．５ 倍かけることにより、アスパラギ
ン２１ｂ、グルタミン酸２２ｂ、グルタミン２３ｂが十
分に分離されていることが分かる。
上記の方法でカラム寿命を延ばすことができるが全分析
時間がかかるので、多数の検体を処理しなければならな
い病院等におけるルーチンワークの点では問題がある。
時間がかかるので、多数の検体を処理しなければならな
い病院等におけるルーチンワークの点では問題がある。
これを解決する方法について次に説明する。
前記（３）を改善し分析したものが第５図に示すクロマ
トグラムである。該図においてトリプトファン２４とエ
タノールアミン２５の間でカラム温度を上昇することで
トリプトファン２４を前進させた。また、アンモニア２
６とハイドロオキシリジン２７の間は、緩衝液の組成を
変えることで分離をよくした。
トグラムである。該図においてトリプトファン２４とエ
タノールアミン２５の間でカラム温度を上昇することで
トリプトファン２４を前進させた。また、アンモニア２
６とハイドロオキシリジン２７の間は、緩衝液の組成を
変えることで分離をよくした。
前記のように成分２１ｃ、２２ｃ、２３ｃ以外の成分に
ついては、緩衝液の流速を変えずに別の方法、例えばカ
ラム温度または緩衝液の組成を変えることで、分離能を
よくすることができるので、逆に緩衝液の流速は早くす
ることができる。
ついては、緩衝液の流速を変えずに別の方法、例えばカ
ラム温度または緩衝液の組成を変えることで、分離能を
よくすることができるので、逆に緩衝液の流速は早くす
ることができる。
第５図は、第２図の場合よりも緩衝液の流速を約１，４
倍速めることで、全分析時間を９０分に短縮することが
できた。
倍速めることで、全分析時間を９０分に短縮することが
できた。
前記（１）〜（３）の特徴を総合した分析法によるクロ
マトグラムを第１図に示す。
マトグラムを第１図に示す。
まず、前記（１）に基づき分析全体を２つのグループに
分けた。スタートからα−アミノアジピン酸くα−ＡＡ
Ａ）までをグループＧ１、プロリン（Ｐｒｏ）以降をグ
ループＧ２に分けた。そして、前記（２）に基づきグル
ープＧｌの領域では緩衛液の流速を下げた。次に前記（
３）に基づき、グループＧ２の領域では緩衝液の流速を
高めた。
分けた。スタートからα−アミノアジピン酸くα−ＡＡ
Ａ）までをグループＧ１、プロリン（Ｐｒｏ）以降をグ
ループＧ２に分けた。そして、前記（２）に基づきグル
ープＧｌの領域では緩衛液の流速を下げた。次に前記（
３）に基づき、グループＧ２の領域では緩衝液の流速を
高めた。
前記緩衝液の流速を変えたグループＧ１とグループＧ２
の境目は、比較的分析成分のピークが隣接していない部
分を選択した。なお、流速の切換時には、その区間２８
においてベースラインが変動するが、この領域はピーク
が存在しないので定量のための面積計算にも影響がない
。
の境目は、比較的分析成分のピークが隣接していない部
分を選択した。なお、流速の切換時には、その区間２８
においてベースラインが変動するが、この領域はピーク
が存在しないので定量のための面積計算にも影響がない
。
［作用］
前記（１）で述べたように、３成分の分析時間が測定初
期の約１１５にあることは極めて意義のあることでる。
期の約１１５にあることは極めて意義のあることでる。
もしこの３成分のピークが後半に存在していた場合、ク
ロマトグラフィの一般的な特性として、分析の後部で流
速を低下させる方法では分離能をよ（することはできな
い。なぜならば、分離を促す要因は分析のスタート時点
から始まる。
ロマトグラフィの一般的な特性として、分析の後部で流
速を低下させる方法では分離能をよ（することはできな
い。なぜならば、分離を促す要因は分析のスタート時点
から始まる。
このように分離を促す要因の前歴があって、はじめて後
半で現われて（るからである。従ってこの前歴を考慮せ
ずに、後半で分離を促そうとして急に緩衝液の流速を変
えてみても分離能は改善できないのである。但し、該緩
衝液の流速変更以外の手段、例えば、カラム温度、緩衝
液のｐＨ１有機溶媒の濃度等を変えることは有効と考え
る。
半で現われて（るからである。従ってこの前歴を考慮せ
ずに、後半で分離を促そうとして急に緩衝液の流速を変
えてみても分離能は改善できないのである。但し、該緩
衝液の流速変更以外の手段、例えば、カラム温度、緩衝
液のｐＨ１有機溶媒の濃度等を変えることは有効と考え
る。
なお、前記アスパラギン、グルタミン酸、グルタミンの
３成分の分離能をよくするには、本発明の緩衝液流速を
下げる方法と、特開昭５９−１０８４９号で述べている
リチウムイオン濃度を下げる方法が現状では最も効果が
あると考える。
３成分の分離能をよくするには、本発明の緩衝液流速を
下げる方法と、特開昭５９−１０８４９号で述べている
リチウムイオン濃度を下げる方法が現状では最も効果が
あると考える。
［実施例］
以下本発明を実施例により説明する。
第６図はアミノ酸分析装置の流路説明図である。
緩衝液１〜４とカラム再生液５は、電磁弁シリーズ６に
よって１つの緩衝液が選択され、緩衝液ポンプ７によっ
てアンモニアフィルタカラム８゜オートサンプラ９を経
由して分離カラム１０に送られる。分離カラムで分離さ
れたアミノ酸は、ニンヒドリンポンプ１２によって送ら
れてきたニンヒドリン試薬１１とミキサー１３で混合さ
れ反応コイル１４で反応する。反応によって発色したア
ミノ酸は、光度計１５で連結的に検出され、データ処理
装置１６によってクロマトグラムとして出力される。
よって１つの緩衝液が選択され、緩衝液ポンプ７によっ
てアンモニアフィルタカラム８゜オートサンプラ９を経
由して分離カラム１０に送られる。分離カラムで分離さ
れたアミノ酸は、ニンヒドリンポンプ１２によって送ら
れてきたニンヒドリン試薬１１とミキサー１３で混合さ
れ反応コイル１４で反応する。反応によって発色したア
ミノ酸は、光度計１５で連結的に検出され、データ処理
装置１６によってクロマトグラムとして出力される。
上記分析装置としてはＬ−８５００形日立高速アミノ酸
分析装置を用いた。上記緩衝液１〜４および再生液５は
市販キットＬ−８５００−ＰＦ−ＫＩＴ （三菱化成（
株）製）を用いた。ニンヒドリン試薬はニンヒドリン試
液Ｌ−８５００セツト（和光純薬工業（株）製）を用い
た。分離カラムにはバツクドカラム２６２２８Ｃ（日立
製作新製）を用いた。
分析装置を用いた。上記緩衝液１〜４および再生液５は
市販キットＬ−８５００−ＰＦ−ＫＩＴ （三菱化成（
株）製）を用いた。ニンヒドリン試薬はニンヒドリン試
液Ｌ−８５００セツト（和光純薬工業（株）製）を用い
た。分離カラムにはバツクドカラム２６２２８Ｃ（日立
製作新製）を用いた。
次に本分析法に用いた分析プログラムのチャートの一例
をを第７図に示す。まずステップ３０の順に時間３１が
列記されている。その時間経過に従い、緩衝液３２の電
磁弁Ｖｌ−Ｖ５が切換えられて行（。
をを第７図に示す。まずステップ３０の順に時間３１が
列記されている。その時間経過に従い、緩衝液３２の電
磁弁Ｖｌ−Ｖ５が切換えられて行（。
図中１００とあるのは該当する電磁弁が１００％開くと
云う意味である。８０と２０は、２つの弁（Ｖｌ、Ｖ２
）が時間比で８０％と２０％開くと云う意味である。
云う意味である。８０と２０は、２つの弁（Ｖｌ、Ｖ２
）が時間比で８０％と２０％開くと云う意味である。
カラム温度３３はそのときの分離カラムの温度を示して
いる。鎖側では、分離条件を好適に保つために３８℃に
始まって３１℃〜７０℃間を上下させたことを示す。
いる。鎖側では、分離条件を好適に保つために３８℃に
始まって３１℃〜７０℃間を上下させたことを示す。
ＦＬＯＷ ＲＡＴＥ ３４ｔ’０．２０とあル１１７
）はＰｌ（緩衝液ポンプ１）の流速が０．２ｍｆｆ／分
であることを示す。
）はＰｌ（緩衝液ポンプ１）の流速が０．２ｍｆｆ／分
であることを示す。
以上の分析プログラムによって分析装置を動作させるこ
とにより、第１図に示すクロマトグラムを得ることがで
きる。すなわち、緩衝液はスタート時には０．２０ｍβ
／分でゆっくり送られ、α−ＡＡＡまでを分離する。次
に５２分経過後緩衝液の流速を０．４４ｍ１１分に上昇
させて後半の分析をする。なお、本実施例においては緩
衝液の流速の倍増に合わせて、チャートのスピードもデ
ータ処理装置により２倍に速めている。分析途中は、緩
衝液の選択やカラム温度の選択により、最適の分離条件
を選んでいる。
とにより、第１図に示すクロマトグラムを得ることがで
きる。すなわち、緩衝液はスタート時には０．２０ｍβ
／分でゆっくり送られ、α−ＡＡＡまでを分離する。次
に５２分経過後緩衝液の流速を０．４４ｍ１１分に上昇
させて後半の分析をする。なお、本実施例においては緩
衝液の流速の倍増に合わせて、チャートのスピードもデ
ータ処理装置により２倍に速めている。分析途中は、緩
衝液の選択やカラム温度の選択により、最適の分離条件
を選んでいる。
本実施例においては、１２０分で分析は完了するが、こ
の後、次の分析のためにカラムの再生や緩衝液の流速を
もと通りに戻す操作は自動的に行なわれる。
の後、次の分析のためにカラムの再生や緩衝液の流速を
もと通りに戻す操作は自動的に行なわれる。
上記を繰り返すことによって、多数の検体分析を連続し
て行なうことができる。
て行なうことができる。
前屈実施例によれば次の効果が得られる。
（１）最も分離が困難なアスパラギン、グルタミン酸、
グルタミンの３成分を高精度に分離することができる。
グルタミンの３成分を高精度に分離することができる。
（２）上記３成分を高精度に分離できるようにしたこと
によって、全成分の分離アンバランスがなくなり、カラ
ム寿命を従来より約２倍延長することができる。
によって、全成分の分離アンバランスがなくなり、カラ
ム寿命を従来より約２倍延長することができる。
（３）本実施例によりカラムの分離能が全体に向上し、
かつ、分離時間もそれほど変わらないので、多数の検体
処理にも影響が少ない。
かつ、分離時間もそれほど変わらないので、多数の検体
処理にも影響が少ない。
（４）第１図に示す流速切換区間２８のベースライン変
動は、なめらかに切換を行う（図の破線で示すグラジェ
ント法２９）ことで、少な（するができる。
動は、なめらかに切換を行う（図の破線で示すグラジェ
ント法２９）ことで、少な（するができる。
（５）流速の切換えにより、ニンヒドリンとの混合比変
化による反応時間９反応率の変化が伴うが、当該アミノ
酸分析装置においては、未知試料の分析前に既知試料（
導率試料）によりキャリブレーションするために、定量
値精度が低下することはない。
化による反応時間９反応率の変化が伴うが、当該アミノ
酸分析装置においては、未知試料の分析前に既知試料（
導率試料）によりキャリブレーションするために、定量
値精度が低下することはない。
本実施例の応用例として次のものが挙げられる。
本実施例第１図では、分析開始５２分後に流速を切換え
ているが、測定サンプルに応じて設定することができる
。
ているが、測定サンプルに応じて設定することができる
。
グルタミン（Ｇ ｌ ｕ ＮＨ，）とサルコシン（Ｓａ
ｒ）の間にも比較的ベースラインのフラットな部分があ
るが、この部分（約４１分）で流速を変換することによ
ってシャープなピークを得ることができる。流速切換も
前記グラジェント法を適用することにより、ベースライ
ンにも切換ショックが出現しない。そのために、切換区
間３０は第１図に例示するように、アスパラギン酸（Ａ
ｓｐＮＨ２）の前からでもよく、３２分〜６２分すなわ
ちα−ＡＢＡピークまでが好適な範囲とみられる。切換
時間があまり遅くなると全分析時間が長くなるので、全
分析時間をみて設定するのがよい。本実施例では分析時
間の目安を２時間以内とした。
ｒ）の間にも比較的ベースラインのフラットな部分があ
るが、この部分（約４１分）で流速を変換することによ
ってシャープなピークを得ることができる。流速切換も
前記グラジェント法を適用することにより、ベースライ
ンにも切換ショックが出現しない。そのために、切換区
間３０は第１図に例示するように、アスパラギン酸（Ａ
ｓｐＮＨ２）の前からでもよく、３２分〜６２分すなわ
ちα−ＡＢＡピークまでが好適な範囲とみられる。切換
時間があまり遅くなると全分析時間が長くなるので、全
分析時間をみて設定するのがよい。本実施例では分析時
間の目安を２時間以内とした。
次に、当然のことであるが流速が速くなると全体的にピ
ークの分離能が低下すると共に、カラムの負荷圧力が高
くなり、また反応時間が短くなって、ピーク高さく感度
）が低下し、カラム寿命にも影響するのであまり速くす
ることは好ましくない。
ークの分離能が低下すると共に、カラムの負荷圧力が高
くなり、また反応時間が短くなって、ピーク高さく感度
）が低下し、カラム寿命にも影響するのであまり速くす
ることは好ましくない。
次に流速の切換比率であるが、その領域に存在するピー
クの分離能の程度によって決められる。
クの分離能の程度によって決められる。
仮にピークのシャープさ（理論段数）が流速に反比例す
るとすれば、必要とするピークの分離能によって設定さ
れる。同時に分析時間とも関係するので本実施例では、
第１グループＧ１は０．１〜０．３、第２グループＧ２
は０．２〜０．６が好ましい。
るとすれば、必要とするピークの分離能によって設定さ
れる。同時に分析時間とも関係するので本実施例では、
第１グループＧ１は０．１〜０．３、第２グループＧ２
は０．２〜０．６が好ましい。
本実施例においては流速切換は１ケ所であるが必要に応
じて２力所以上とすることも可能である。
じて２力所以上とすることも可能である。
例えば、第１図においてオルニチン（Ｏｒｒ）〜アルギ
ニン（Ａｒｇ）間は極めて分離状態がよい。
ニン（Ａｒｇ）間は極めて分離状態がよい。
従って、オルニチンの前で第３のグループＧ３、例えば
０．５５ｍｇ／分を設定することも可能である。これに
よって、分析時間は、 ２５分ｘｏ、４４１０．５５＝２０分 となり約５分短縮することができる。
０．５５ｍｇ／分を設定することも可能である。これに
よって、分析時間は、 ２５分ｘｏ、４４１０．５５＝２０分 となり約５分短縮することができる。
［発明の効果］
本発明によれば、生体液中に含まれるアスパラギン、グ
ルタミン酸、グルタミンの３成分を良好に分離でき、か
つ、他の成分との分離能のアンバランスをなくすことが
できる。また、それによってカラムの寿命をこれまでの
約２倍に延長することができる。
ルタミン酸、グルタミンの３成分を良好に分離でき、か
つ、他の成分との分離能のアンバランスをなくすことが
できる。また、それによってカラムの寿命をこれまでの
約２倍に延長することができる。
第１図は本発明の一実施例を示すクロマトグラム、第２
図、第３図は従来のアミノ酸分析のクロマトグラム、第
４図は高分離能のクロマトグラム、第５図は高速分析の
クロマトグラム、第６図は本発明の一実施例を示すアミ
ノ酸分析装置の流路説明図、第７図は本発明の一実施例
の分析プログラムを示す図である。 １〜４ ・緩衝液、５・再生液、６・電磁弁シリーズ、
７・緩衝液ポンプ、１０・・・分離カラム、２１ アス
パラギン、２２・・グルタミン酸、２３グルタミン、２
８・流速切換区間、３４ ・緩衝液流速。 代理人 弁理士 高橋 明夫７″４ （ほか１名） ””パ 第６図 １〜４・・・緩衝液、５・・・再生液、６・・電磁弁／
リーズ、７・・・緩衝液ポンプ、８・・・フィルタ、９
・・・オートサンプラ、１０・・・分離カラム、１４・
・・反応コインＬ、１５・・・光度計。
図、第３図は従来のアミノ酸分析のクロマトグラム、第
４図は高分離能のクロマトグラム、第５図は高速分析の
クロマトグラム、第６図は本発明の一実施例を示すアミ
ノ酸分析装置の流路説明図、第７図は本発明の一実施例
の分析プログラムを示す図である。 １〜４ ・緩衝液、５・再生液、６・電磁弁シリーズ、
７・緩衝液ポンプ、１０・・・分離カラム、２１ アス
パラギン、２２・・グルタミン酸、２３グルタミン、２
８・流速切換区間、３４ ・緩衝液流速。 代理人 弁理士 高橋 明夫７″４ （ほか１名） ””パ 第６図 １〜４・・・緩衝液、５・・・再生液、６・・電磁弁／
リーズ、７・・・緩衝液ポンプ、８・・・フィルタ、９
・・・オートサンプラ、１０・・・分離カラム、１４・
・・反応コインＬ、１５・・・光度計。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、未知分析成分を含む緩衝液をアミノ酸分離用の分離
カラムに送液して分離し、該緩衝液を反応装置内で反応
後、検出器によってアミノ酸を検出する生体液中のアミ
ノ酸分析方法において、前記緩衝液の流速を段階的また
はリニアグラジエントに変化させながら分析することを
特徴とする生体液中のアミノ酸分析方法。 ２、未知分析成分を含む緩衝液をアミノ酸分離用の分離
カラムに送液して分離し、該緩衝液を反応装置内で反応
後、検出器によってアミノ酸を検出する生体液中のアミ
ノ酸分析方法において、アスパラギン、グルタミン酸お
よびグルタミンの３成分が分離カラムから分離溶出する
までは前記緩衝液の流速を一定とし、前記３成分が分離
カラムから分離溶出後に前記緩衝液の流速を段階的また
はリニアグラジエントに変化させながら分析することを
特徴とする生体液中のアミノ酸分析方法。 ３、緩衝液、該緩衝液の送液手段、サンプラ、サンプラ
の下流に設けられた分離カラム、反応装置および検出器
を備えた生体液中のアミノ酸分析装置において、 前記送液手段が前記緩衝液の流速を段階的またはリニア
グラジエントに変化させる手段を備えていることを特徴
とする生体液中のアミノ酸分析装置。 ４、緩衝液、該緩衝液の送液手段、サンプラ、サンプラ
の下流に設けられた分離カラム、反応装置および検出器
を備えた生体液中のアミノ酸分析装置において、 前記分離カラムにおけるアスパラギン、グルタミン酸お
よびグルタミンの分離溶出を検知する検知手段を備え、
前記送液手段が前記緩衝液の流速を段階的またはリニア
グラジエントに変化させる手段を備えていることを特徴
とする生体液中のアミノ酸分析装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2327659A JP3012685B2 (ja) | 1990-11-28 | 1990-11-28 | 生体液中のアミノ酸分析方法および装置 |
| US07/797,942 US5236847A (en) | 1990-11-28 | 1991-11-26 | Method for analyzing amino acids and apparatus therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2327659A JP3012685B2 (ja) | 1990-11-28 | 1990-11-28 | 生体液中のアミノ酸分析方法および装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04194750A true JPH04194750A (ja) | 1992-07-14 |
| JP3012685B2 JP3012685B2 (ja) | 2000-02-28 |
Family
ID=18201531
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2327659A Expired - Lifetime JP3012685B2 (ja) | 1990-11-28 | 1990-11-28 | 生体液中のアミノ酸分析方法および装置 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5236847A (ja) |
| JP (1) | JP3012685B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5827426A (en) * | 1995-09-14 | 1998-10-27 | Hitachi, Ltd. | Liquid chromatograph and liquid chromatography |
| JP2007017327A (ja) * | 2005-07-08 | 2007-01-25 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP2007504479A (ja) * | 2003-05-20 | 2007-03-01 | エクシジェント テクノロジーズ， エルエルシー | 流速制御 |
| JP2009085747A (ja) * | 2007-09-28 | 2009-04-23 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析方法およびアミノ酸分析装置 |
| JP2009168477A (ja) * | 2008-01-11 | 2009-07-30 | Hitachi High-Technologies Corp | 液体クロマトグラフ |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19725639A1 (de) * | 1997-06-18 | 1998-12-24 | Merck Patent Gmbh | Gradientenelutionsverfahren |
| JP3508710B2 (ja) * | 2000-09-01 | 2004-03-22 | 株式会社日立製作所 | アミノ酸分析方法および装置 |
| EP1938097A4 (en) * | 2005-09-09 | 2009-12-09 | Eksigent Technologies Llc | SYSTEM WITH CHANGING FLOW SPEED FOR COLUMN CHROMATOGRAPHY |
| US9370729B2 (en) * | 2008-02-06 | 2016-06-21 | Proxeon Biosystems A/S | Flow control in high performance liquid chromatography |
| DE112010001428B4 (de) * | 2009-03-31 | 2021-03-18 | Hitachi High-Tech Corporation | Flüssigkeitschromatograph |
| CN104407093B (zh) * | 2014-11-24 | 2016-01-20 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种快速检测发酵液中l-谷氨酰胺含量的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS594664B2 (ja) * | 1976-11-10 | 1984-01-31 | 株式会社日立製作所 | イオン交換クロマトグラフイ− |
-
1990
- 1990-11-28 JP JP2327659A patent/JP3012685B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-11-26 US US07/797,942 patent/US5236847A/en not_active Expired - Lifetime
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| US5827426A (en) * | 1995-09-14 | 1998-10-27 | Hitachi, Ltd. | Liquid chromatograph and liquid chromatography |
| EP0763734A3 (en) * | 1995-09-14 | 1999-04-21 | Hitachi, Ltd. | Liquid chromatograph and liquid chromatography |
| EP2098861A1 (en) | 1995-09-14 | 2009-09-09 | Hitachi, Ltd. | Liquid Chromatograph |
| JP2007504479A (ja) * | 2003-05-20 | 2007-03-01 | エクシジェント テクノロジーズ， エルエルシー | 流速制御 |
| JP4716998B2 (ja) * | 2003-05-20 | 2011-07-06 | エービー サイエックス エルエルシー | 流速制御 |
| JP2007017327A (ja) * | 2005-07-08 | 2007-01-25 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP4704824B2 (ja) * | 2005-07-08 | 2011-06-22 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP2009085747A (ja) * | 2007-09-28 | 2009-04-23 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析方法およびアミノ酸分析装置 |
| JP2009168477A (ja) * | 2008-01-11 | 2009-07-30 | Hitachi High-Technologies Corp | 液体クロマトグラフ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5236847A (en) | 1993-08-17 |
| JP3012685B2 (ja) | 2000-02-28 |
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