JPH04124166A - 両親媒性化合物及びそれを用いたリポソーム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、安定な単一膜リポソームを形成するように設
計されたコハク酸およびアミノ酸部分を含有する両親媒
性化合物、およびそれを膜構成成分とする負電荷を帯び
たリポソームに関するものである。

（従来の技術） リポソーム（Ｌｉｐｏｓｏｍｅ）は、脂質２分子膜から
なる閉鎖小胞体である。天然の生体膜は、脂質の２分子
構造をとっていると言われており、このリポソームは生
体膜のモデル膜としてその物理化学的性質の研究に広く
用いられている。また、リポソームは内部の水層や膜内
に種々の物質を閉じ込めることが出来、細胞と融合した
り、細胞に取り込まれたりするので、生体内へ物質を送
りこむキャリヤーとして利用される。

リポソームを利用した研究は、生物学、医学、薬学など
広範な分野にわたっており、酵素や制ガン剤を運ぶキャ
リヤーとしての利用、免疫学分野での利用、細胞との相
互作用、ドラッグデリバリ−システムとしての利用等が
研究されている。

リポソームは上述したように、極めて広範な利用分野を
有するが、その問題点として膜構造の脆弱性が指摘され
ている。

即ち、膜形成物質である脂質の化学的、または物理的変
化により膜の配向が乱れ、内包物の漏出、リボンーム同
志の会合、凝集が起こり、やがて沈殿を生成してしまう
現象である。

この欠点を克服する試みとして、例えば天然リン脂質を
模倣した人工両親媒性化合物によりベシクルを形成させ
る報告が多数あるが（例えば、野島、抄本、井上編［リ
ポソーム、１　（南江堂）第８章）、いずれもベシクル
の安定性や人体への毒性の点から薬物運搬体として満足
できるものではなかった。

オリゴペプチドを親水部に、２本の長鎖アルキル基を疎
水部に有する両親媒性化合物としては、伊原らの例（Ｐ
ｏｌｙｍ、Ｃｏｍｍｕｎ、、　２７　、　２８２　（１
９８６）；ＰｏｌｙｍｅｒＪ、、１８，１６３　（１９
８６）；Ｃｈｅｍ、Ｌｅｔｔ、、　　（１９８４）　、
　　１７１３　；日化誌（１９８７）、５４３）や、清
水らの例（Ｃｈｅｍ。

Ｌｅｔｔ、、　（１９８９）　　１３４１　；Ｔｈ１ｎ
　ＳｏｌｉｄＦｉｌｍｓ。

１８０　（１９８９）、１７９、特開平２−６９４９８
号、同２−７１８３６号）が知られている。

しかしいずれも単一膜ベシクルを形成しないか、あるい
は形成しても容易に他の構造に変化し、薬物運搬体とし
ては適当でない。またこれらの化合物が形成する分子集
合体はいずれも正電荷を帯び、ホスファチジルセリン、
ホスファチシリグリセロール等のアニオン性脂質を含む
生体膜の適当なモデルとはならない。

（発明の目的） 本発明の目的は、内包する薬物のもれが少く、かつ会合
、凝集、沈殿をおこしにくい安定な単一膜リポソームを
形成するように設計されたコハク酸およびアミノ酸部分
を含有する両親媒性化合物、およびそれを膜構成成分と
する負電荷を帯びたリポソームを提供することである。

（発明の構成） 本発明の目的は、−数式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）であられさ
れる化合物、およびそれを膜構成成分とするリポソーム
により達成された。

ＩＩ　　　　　ＩＩ　　　　　　ＩＩ （ＩＩＩ） Ｒ’　ＸＲ”はそれぞれ炭素数８〜２４、好ましくは１
２．１４．１６、または２０の直鎖または分枝のアルキ
ル基またはアシル基であり、置換基、不飽和基を有して
いても良い。置換基としてはアルキルカルボニル、アル
コキシカルボニル、ハロゲン原子、アリール基が挙げら
れる。不飽和基としては２重結合、３重結合であり、同
−鎖に２つ以上を有していても良い。またＲ１とＲ２は
同しであっても異っていてもよい。Ｒ’　、Ｒ’の具体
例としてはドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、ミ
リストイル、バルミトイルなどが挙げられる。

Ｒ３″、Ｒｊ１′°Ｉｌ、Ｒ１″′、ＲＸ　ｆｆｆｉ＋
Ｉ＋はそれぞれα−アミノ酸の側鎖残基をあられす。こ
れには、天然に存在するα−アミノ酸２０種類（例えば
ＣＲＥ　ｒＧＨＴＯＮ著”ＰＲＯＴＥＮＳ″（ＦＲＥＥ
ＭＡＮ社））の側鎖またはその類似体がすへて含まれる
。

中でも好ましい のは、 水素原子、 −ＣＨ，ＯＨ。

−ＣＨ，ＣＣＨ２ ＣＨ２ＣＯ，Ｈｌ −ＣＨ，ＣＨ２ＣＣＨ２ ＣＨ −ＣＨ２ＣＨ，ＣＯ，Ｈ，−ＣＨＣＨ３−ＣＨ，ＣＨ２
ＣＨ，ＣＨ，ＣＨ２、 ＣＨ＋ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ ＣＨ Ｉ ＣＣＨ２ 上に親水性のアミノ酸の側鎖残基である。Ｒ３＋“の（
ｎ、＋１）は１桁台の数字を表わす。例えばｎ＝５のと
きＲ””＋１′はＲ′６を表わす。またＲ３Ｒ３２・・
・、Ｒ３（”＋１はそれぞれ同じであっても異っていて
もよい。ｍについても同様である。

ｎは０から５の整数をあられすが、特に好ましいのは、
０．１．２．３である。ｍについでも同様である。

分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラセミ体、光学
活性体のいずれでもよい。また、分子末端のカルボキシ
ル基は適当なカチオン成分と塩を形成していてもよい。

この場合好ましいカチオン成分としては、Ｎａ”、Ｋ“
等のアルカリ金属イオン、アンモニウムイオン等が挙げ
られる。

次に一般式（Ｉ）〜（Ｉ［Ｉ）で示される化合物の具体
例を示すが本発明はこれに限られるものではない。

本発明の両親媒性化合物は、１位および２位か置換され
たグリセロール（−数式（■））を原料とし、アミノ酸
部およびコハク酸部を順次導入することにより合成され
る。アミノ酸部の導入には、アミノ基またはカルボキシ
ル基が保護されたアミノ酸を用い、適当な縮合剤で縮合
する通常の方法を用いることができる。保護基および縮
合剤としては、例えば、Ｍ、　Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ著“
ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ　０ＦＰＥＰＴＩＤＥ　５ＴＮＴ
ＨＥＳＩＳ”　（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ
ｅｗ　Ｙｏｒｋ。

１．９８４）及び“ＴＨＥ　ＰＲＡＣＴＩＣＥ　ＯＦ　
ＰＥＰＴＩＤＥ　５ＴＮＴＥＳＩＳ”（Ｓｐｒｉｎｇｅ
ｒ−Ｖｅｒｌａｇ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８４　
）に記載されているものをいずれも用いることができる
。コハク酸部の導入には、コハク酸を用いる方法がもっ
とも簡便でかつ有用である。

ＣＨ，−０Ｈ ＣＨ−ＯＲ”　　　　　　　（ＩＶ） ＨＩ−ＯＲ 一般式（ＩＶ）であられされる化合物は、例えばＪ、Ａ
ｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、）　６３．３２４４　（１９４
１）に記載されている方法によって合成でき、市販もさ
れている。

以下に本発明の化合物の合成例を記す。アミノ酸および
保護基の略号は、一般に用いられている略号（例えばＢ
ｏｄａｎｚｋｙ著による前記成書）をそのまま用いた。

合成例１．化合物３の合成 化合物３は、以下の合成ルートで合成した。

市販のＧｌｙＧＩｙを常法（泉屋ら編「ペプチド合成の
基礎と実験」　（丸善））に従いｔＢｏｃ−ＧｌｙＧｌ
ｙに変換した。

ｔＢｏｃ−ＧＩｙＧｌｙｌ、　　３９　ｇ　（６ｍｍｏ
ｌ）　、Ｉ、　　２０−ジテトラデノルー５ｎ−グリセ
ロール２，４２　ｇ　（５ｍｍｏｌ）　、Ｎ、　　Ｎ−
ジメチルアミノピリジン６０■をＤＭＦ２０ｄと塩化メ
チレン１０−に溶解した。この溶液を水冷、かくはんし
ながらＤＣＣｌ、３ｇを加え、室温で２４時間かくはん
した。析出したシンクロヘキシル尿素を濾別し、濾液か
ら塩化メチレンを減圧留去した。残留液に酢酸エチル５
０−を加え、１０％クエン酸水溶液、水、食塩水の順で
洗浄、分液した。酢酸エチル層に再び析出したジシクロ
ヘキシル尿素を濾別し、濾液を濃縮した後に残渣をシリ
カゲルクロマトグラフィーで精製（ｎ−ヘキサン／酢酸
エチル−２／１）して、化合物（３ａ）　３．　３７ｇ
　（４，８ｍｍｏｌ）を得た。収率９０％ この保護体３．３７ｇを塩化メチレン６０−に溶解し、
トリフルオロ酢酸３０−を加えて室温で３０分かくはん
した。溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチルとアセトニ
トリルの混合溶媒（１／１）より再結晶して、化合物（
３ｂ）２．８７ｇ（４゜０３１１１１１１０１）を得た
。収率８４％。液晶相転位点７９°ｃ。

（３ｂ）　２．　８５　ｇ　（４ｍｍｏｌ）を、塩化メ
ヂレン３０−、トリエチルアミン１．４−の混合溶媒に
溶解し、水冷かくはんしなから無水コハク酸０゜５　ｇ
　（５ｍｍｏｌ）を加えた。水冷下１時間、室温で２時
間かくはんした後、塩化メチレン溶液を１規定塩酸、水
、食塩水の順に洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥後、塩
化メチレンを減圧留去し、残渣を酢酸エチルで再結晶し
て化合物（３）２．４９ｇ（３，５６ｍｍｏｌ）を得た
。

収率８９％、液晶相転位点１０３°Ｃ （１ａ） 一一一→　−ｍ−→　　　　　　　　　（１）Ｂｏａ−
Ｇｌｙ　　５３０ｍｇ　（３ｍｍｏｌ）　、１．　２−
ｏ　−ジテトラデシルーｓｎ−グリセロール１．２１ｇ
（２，５ｍｒ１１ｏ１）　、Ｎ、　　Ｎ−ジメチルアミ
ノピリジン３７■を塩化メチレン１５−に溶解した。こ
の溶液を水冷、かくはんしながらＤＣＣ６００■を加え
、室温で２４時間かくはんした。析出したジシクロヘキ
シル尿素を濾別し、濾液から塩化メチレンを減圧留去し
た。残留液に酢酸エチル５ｏ１ｎｌを加え、１０％クエ
ン酸水溶液、水、食塩水の順で洗浄、分液した。酢酸エ
チル層に再び析出したジシクロヘキシル尿素を濾別し、
濾液を濃縮した後に残渣をシリカゲルクロマトグラフィ
ーで精製（ｎ−へキサン／酢酸エチル＝５／１）して、
無色油状の化合物（ｌａ）　　１．　５５ｇ　（２，４
ｍｍｏｌ）を得た。収率９７％。

この保護体１．５５ｇを塩化メチレン１０−に溶解し、
トリフルオロ酢酸５−を加えて３０分かくはんした。溶
媒を減圧留去した後、酢酸エチルと４％炭酸ナトリウム
水溶液を加え、抽出分液した。有機層を硫酸ナトリウム
で乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣を塩化メチレン１
５−に溶解し、水冷して無水コハク酸を２５０■加えた
。水冷下で３０分室温で１時間かくはんした後溶媒を減
圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ク
ロロホルム／メタノール−１０／１．）で精製した後酢
酸エチルで結晶化させて化合物１１゜１　ｇ　（１，６
８ｍｍｏｌ）を得た。収率７０％。（２段階）液晶相転
位点７１°Ｃ０ 合成伊３．化合物６の合成 合成例２において、１．　２−ｏ−ジテトラデ／ルーｓ
ｎ−グリセロールの代わりに１．２−ｏ−ジシリストイ
ルーｓｎ−グリセロールを用いて同様の操作を行い、化
合物６を得た。液晶相転位点７０℃。

合成例４．ヒ合物４の合成 合成例２において、１．　２−ｏ−ジテトラデンルーｓ
ｎ−クリセロールの代わりに、１．２−。

−ジパルミトイル−５ｎ−グリセロールを用いて同様の
操作を行い、化合物４を得た。液晶相転位点７８℃。

（１２ａ） ｄ−Ｃ １，２−ｏ−タテトラデシル−５ｎ−グリセロール３　
ｇ　（６，２ｍｍｏｌ）　、Ｎ、　　Ｎ−ジメチルアミ
ノピリジン８０■を含む塩化メチレン溶液（３〇−）に
無水コハク酸６８０ｍｇを加え、室温で３９時間かくは
んした。終了後溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製（ヘキサン／酢酸エチル−２／
１〜ｌ／１．）して、無色油状（４℃で固化）の化合物
（１２ａ）２．４ｇ（４，１ｍｍｏｌ）を得た。収率６
６％。

（１２ａ）ｌ、９５ｇ（２゜３ｍｍｏｌ）　、Ｇｌｙ−
ＯＢｉＡｐ−トルエンスルホン酸塩１．　２　ｇ　（３
，５５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン４９０μＩＸ　１
−ヒドロキシヘンシトリアゾールＩ水和物５４０■を、
塩化メチレン（１５ｍＺ）とＤＭＦ（５＋ｎ／）の混合
溶媒に溶解し、水冷かくはんしなからＤＣＣ７５０■を
加えた。水冷下２時間、室温で終夜かくはんを続けた後
、析出したジシクロヘキシル尿素を濾別し、濾液から塩
化メチレンを減圧留去した。残留液に酢酸エチルを加え
、１０％クエン酸水溶液、水、食塩水の順で洗浄、分液
した。酢酸エチル層に再び析出したジシクロヘキシル尿
素を濾別し、濾液を濃縮した後に残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝３／１
〜２／１）で精製して化合物（１２ｂ）２．Ｏｌｇ（２
，７５ｍｍｏｌ）を得た。収率８３％。

化合物（１２ｂ）　１．　９７ｇ　（２，６９ｍｍｏｌ
）をメタノール（２０ｄ）と酢酸エチル（２０ｄ）の混
合溶媒に溶解し、５％パラジウム炭素を２゜Ｏ■加えて
室温で３時間常圧水素添加をおこなった。触媒をセライ
トで濾別し、濾液を濃縮した後アセトニトリルから結晶
化させて化合物（１２）１．５４　ｇ　（２，４ｍｍｏ
ｌ）を得た。収率８９％。液晶相転位点６６℃。

ルエステル化を行い、酢酸エチルとアセトニトリルトノ
混合溶媒（５：　１）より結晶化させて化合物１５を得
た。液晶相転位点８６℃。

本発明の化合物（Ｉ）〜（ＩＩ［）を膜構成成分とする
リポソームは公知の方法によって調整される。

すなわちポルチクスイング法［Ａ、　Ｄ、　Ｂａｎｇｈ
ａｍ　Ｊ。

Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　、±３，２３８　（１９６５）
、ソニケーション法（Ｃ，Ｈｕａｎｇ、Ｂｉｏｃｈｅｍ
、、　　８．　３４４　　（１９６９）〕、プレベシク
ル法［Ｈ，Ｔｒａｕｂｌｅ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ。

Ｒｅｓ、Ｐｒｏｇ、Ｂｕｌｌ、、　　９．　２７３　　
（１９７１）　’Ｊ　　、エタノール注入法［Ｓ、　Ｂ
ａｔｚｒｉ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　
Ａｃｔａ、　。

２９８．１０１．５　（１９７３）：ｌ、フレンチプレ
ス押出法［Ｙ、Ｂａｒｅｎｈｏｌｌｚ、、ＦＥＢＳ、Ｌ
ｅｔｔ、、　　９９．　２１０　（１９７９））、：ｌ
−ル酸除去法［Ｙ、　Ｋａｇａｗａ。

Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　　２４６．　５４７７　
　（１９７１）］　　、］トリトンＸ−１００バッチ法
１：Ｗ　Ｊ、　Ｇｅｒｒｉｔｓｅｎ。

Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　　８５．　２５５　
　（１９７８）　］　、Ｃａ２″融合法ＣＤ、　ＰａＰ
ａｈａｄ　ｊｏｐｏｕ　Ｉｏｓ、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、　　３９４．　４８３　　
（１９７５）　］　　、エーテル注入法（Ｄ、　Ｄｅａ
ｍｅｒ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃ
ｔａ、　。

４．４３，６２９　（１９７６）：］、アニーリング法
［Ｒ，Ｌａｗａｃｚｅｃｋ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ、Ａｃｔａ、　　４４３゜３１３　（１９７６）
］、凍結融解融合法〔Ｍ、　Ｋａｓａｈａｒａ、Ｊ、Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２５２．　７３８４　　（１９７
７）］Ｗ１０／Ｗ工フルジョン法［Ｓ、　Ｍａｔｓｕｍ
ｏｔｏ、　Ｊ、　Ｃｏ１１ｏｉｄ　　Ｉｎｔｅｒｆａｃ
ｅ　　５ｉｃｉ、、　　　６２．　　１４９　　（１９
７７））　　、逆相蒸発法ＣＦ、　５ｚｏｋａ、　Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔ　１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＬＩＳ
Ａ。

７５．４１９４　（１９７８））、高圧乳化法［Ｅ。

Ｍａｙｈｅｗ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃ
ｔａ、　７７５．　１６９（１９８４））の他、特開昭
６０−７９３２、同６０−７９３３、同６０−７９３４
、同６０−１２１２７、同６２−１５２５３１に記載の
方法等、多くの方法が知られているが、本発明では上記
のいずれの調製法を用いてもよくまたこれらに限定され
るものではない。

本発明に使用される封入部材としては親水性薬物と親油
性薬物のいずれかあるいは両者を同時に用いることがで
きる。このような親水性薬物としては例えばアドリアマ
イシン、アドリアマイシン、マイトマイシン、■−β−
アラビノフラシアラトシン、プレオマイシン、シスプラ
チン等の抗がん剤、インターフェロン等の抗ウィルス剤
、アミノ酸糖体（例えば、ゲンタマイシン）、β−ラク
タム化合物（例えばスルペニシリン、セフォチアム、セ
フメツキシム）等の抗生物質、ＴＲＨ，リュウプロライ
ド、インスリン等のペプチドホルモン剤、リゾチーム、
アスパラギナーゼ、グリコシダーセ等の酵素剤、ムラミ
ルジペプチド、ムラミルトリペプチド等の免疫賦活剤、
イムノグロブリン、各種トキシン等の蛋白質かあげられ
る。

親油性薬物の例としては、アンサマイトシンのような抗
ガン剤や、ＴＭＤ　−６６（Ｇａｎｎ７４（２）　１９
２−１９５　（１９８３））、ＭＴＰ−ＰＥ　（特開昭
５９−１６３３８９）のような免疫賦活剤、リン脂質誘
導体（特開昭５９−１６３３８９）があげられる。

その他薬物以外のものでも、マーカー、あるいはプラス
ミド、ＤＮＡ、ＲＮＡ等生体内に投与して有用なもので
あれば特に制限されることはない。

次に封入液は水を媒体とし、これに適宜の水溶性物質を
溶解した水溶液が用いられる。場合によっては単に水に
薬物を溶解したものであってもよい。水溶性物質として
は、種々の緩衝液（例、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液
）、各種塩類（例、塩化ナトリウム、リン酸−ナトリウ
ム、リン酸二ナトリウム）、糖Ｍ（例、グルコース）、
アミノ酸類（例、ｌ−アルギニン）などを単独または混
合して用いることができる。

この封入液中には、必要に応じて、保存剤（例、パラベ
ン）等を加えておいてもよい。

未封入薬物とリポソームは、透析法、ろ過去（例、ゲル
濾過）、遠心分離法等で容易に分離できる。この際内水
相と外水相の浸透圧をできるだけ一致させることが望ま
しい。

本発明の化合物は、単独でもまた二種類以上混合して用
いてもよい。また他のリポソーム膜形成脂質と混合して
用いてもよい。各種リン脂質、スフィンゴ脂質、あるい
は合成脂質をこの目的のために用いることができる。

またさらに膜構造を強化するために、リン脂質リポソー
ムにおいて既知の様々の手段を併用することができる。

その代表例としては、ステロールまたはコレステロール
の混合、及び多糖ポリマーによる被覆（特開昭６１−６
９８０１号）が挙げられる。

本発明の化合物は、通常の二分子膜形成脂質のように水
和半径の大きい親水部をもたない。にもかかわらず安定
なリポソームを形成するのは、ペプチド部位の分子間水
素結合のためと考えられる。

以下に、本発明の化合物を膜構成成分とするリポソーム
の調整例について記す。

〔実施例１１ 化合物３３０■をクロロホルム１０−に溶解した後、ロ
ータリーエバポレーターを用いてクロロホルムを留去し
、さらに真空で乾燥して化合物３の薄膜を形成した。こ
れに１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含むトリス緩衝液（
６ｍＭ、ｐＨ７゜０）３ｄを加え、Ｖｏｒｔｅｘ分散を
行った。この際少しのｐＨ低下が認められたので、１Ｎ
ＮａＯＨを約２０μｌ加えｐＨを７に調整した。次いで
、バス型の超音波照射を５０℃で１０分行い、さらに８
０℃で１０分間加温した。分散液を、エクストルーダー
１０．２μポリ力−ボネートフイルター５５°Ｃ）を用
いて加圧濾過（約１１ｋｇ／ｃ−ｆ）を６回行った。Ｎ
ＩＣＯＭＰで粒径測定を行った結果１２０ｎｍを平均と
する単分散モードの粒径分布を得た。さらにリンタング
ステン酸による染色後ＴＥＭで観察した結果、−枚膜の
ベンクルであることが確認できた。

〔実施例２〕 実施例１と同様の方法で得たＶｏｒｔｅｘ分散液に、プ
ローブ型の超音波（３０Ｗ、５分）照射を行った。実施
例１と同様の方法で、平均粒径約８０ｎｍの一枚膜ヘシ
クルか調整できたことを確認した。

〔実施例３〕 本発明の化合物の、リン酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７，
０）中でのケル−液晶相転位点をＰｒ１ｖａｌｏｖ型Ｄ
ＳＣを用いて測定した。表１に結果を示す。

表１ 〔実施例４〕 化合物１３０■の薄膜を実施例１と同様にして調整した
後、５０ｍＭのカルボキシフルオレセイン（ＣＦ）を含
むリン酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７，０）３−を加えた
。次いで実施例１と同様にＶｏｒｔｅｘ分散、バス型超
音波、８０℃加温、エクストルーダーの順で処理を行っ
た。この場合は、実施例１で見られたｐＨ低下はおこら
なかった。

そして、分散液を、１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む
リン酸緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７，０）で平衡化したセ
ファデックスＧ−５０でゲル濾過を行い、未内包のＣＦ
を分離した。

ここで得られた脂質分画（平均粒径１２０ｎｍ）を３７
℃でインキュベートし、漏出するＣＦをケイ先決で定量
した。比較例として、化合物ｌの代わりに、ＤＰＰＣ（
ジパルシトイルホスファチジルコリン）を用いて同じ操
作でＣＦ内包のリポソーム（平均粒径１４０　ｎｍ）を
調整し、やはり３７℃でインキュベートしてＣＦの漏出
を定量した。

結果を表２に示す。

表２ 表２より、本発明の化合物ｌを膜構成成分とするリポソ
ームは天然のリン脂質であるＤＰＰＣと比較して、ＣＦ
に対して高いバリアー能を有することがわかった。

〔実施例５〕 化合物ｌの代わりに化合物３．４．６．１２．１５を用
いて実施例４と同様にＣＦを内包するリポソームを作製
し、３７℃での漏出を調べた。１時間後のＣＦ漏出率を
表３に記す。

表３ 表３より、本発明の化合物の多くは、天然リン脂質のＤ
ＰＰＣと比べ同等またはそれ以上のノくリアー能を有し
ていることがわかった。

また化合物（口の合成中間体である化合物（１２ａ）を
用いて、同様の方法でリポソーム形成を試みたが、ＣＦ
内包のリポソームは作製できなかった。（ゲル濾過段階
で、リポソームに相当するフラクションが存在しない。

）この結果より、本発明の化合物に含まれるペプチド結
合が、リポソームの安定化に寄与していることが推察さ
れる。

〔実施例６〕 実施例４において調整した、化合物１を用いたＣＦ内包
のリポソームを、４０℃でインキュベートした。ＤＰＰ
Ｃより調整したサフラニン−〇内包リポソームは、４℃
で保存すると２０日後には沈殿を生じたか、化合物Ｉを
用いたリポソームは４ケ月以上経ても安定な分散形態を
維持した。また６０日後におけるＣＦの漏出は、わずか
１．　１％であった。

〔実施例７〕 実施例４において、化合物１の代わりに化合物４を用い
て、ＣＦ内包のリポソームを調整した。

また、化合物４にモル比で２０％および５０％のコレス
テロールを加えて、同様にＣＦ内包のリポソームを調整
した。これらのリポソーム溶液を３７℃でインキュベー
トして、漏出するＣＦをケイ先広で定量した。１時間後
の漏出量を表４に記す。

表４ 表４より、コレステロール添加により、本発明の化合物
か形成するリポソームのバリヤー能が大幅に向上するこ
とがわかった。またコレステロールを５０％添加したリ
ポソームを４°Ｃでインキュベートしたが、２ケ月以上
安定な分散形態を維持し、６０日後のＣＦの漏出は１％
以下であった。

特許出願人　　富士写真フィルム株式会社手続補正書 ？ ／ 発明の名称 両親媒性化合物及びそれを用いた リポソーム ３゜ 補正をする者 事件との関係 住所

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式（ I ）〜（III）であらわされる化合
   物。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（III） 式中Ｒ＾１、Ｒ＾２は炭素数８〜２４の直鎖または分岐
   のアルキル基またはアシル基であり、置換基、不飽和基
   を有していても良い。 Ｒ＾３＾ｎ、Ｒ＾３＾（＾ｎ＾＋＾１＾）、Ｒ＾３＾ｍ
   、Ｒ＾３＾（＾ｍ＾＋＾１＾）はそれぞれα−アミノ酸
   の側鎖残基をあらわす。 ｎおよびｍは０から５の整数をあらわす。 また分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラセミ体、
   光学活性体のいずれでも良い。また分子末端のカルボキ
   シル基は、適当なカチオン成分と塩を形成していても良
   い。
2. （２）請求項（１）記載の一般式（ I ）〜（III）であ
   らわされる化合物を膜構成成分とするリポソーム。