JPH0398579A

JPH0398579A - アスナロ属植物の組織培養方法

Info

Publication number: JPH0398579A
Application number: JP1236360A
Authority: JP
Inventors: Yoshifumi Karizume; 慶文狩集; Koji Osada; 光司長田
Original assignee: Matsushita Electric Works Ltd
Current assignee: Panasonic Electric Works Co Ltd
Priority date: 1989-09-11
Filing date: 1989-09-11
Publication date: 1991-04-24
Anticipated expiration: 2010-05-10
Also published as: JPH0740930B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は、抗微生物剤や芳香剤等の原料となるアスナ
ロ属植物の組織培養方法に関する。

〔従来の技術〕

常緑高木針葉樹目ヒノキ科アスナロ属植物は、抗微生物
作用を有するヒノキチオール等のトロポロン化合物およ
びカルバクロール等のフェノール化合物や、芳香を有す
るツヨプセンなどを含有している。したがって、アスナ
ロ属植物のカルス組織を培養することができれば、その
カルス組織は、抗微生物剤や芳香剤等の原料に供するこ
とができる。

しかしながら、イネ、ニンジンなどの草本性植物や、ポ
プラなど一部の木本性植物の組織培養技術は、現在まで
に多数報告されているが、アスナロ属植物のカルス組織
を培養または継代培養した先行技術、培地組戒について
は、最近まで報告されていなかった。

このような事情から、発明者らは、アスナロ匡植物のカ
ルス組織を培養する方法を検討した結果、最近になって
、炭素源、無機成分および植物ホルモンを必須成分とす
る培地上でアスナロ属植物のカルス組織を効率良く培養
または継代培養することができることを見出し、すでに
特許出願を行っている（特願昭６３−３２７０８７号）
。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、上記方法では、初期細胞密度を低くした場合、
増殖効率が非常に悪いため、さらなる改善が求められて
いた。

以上の事情に鑑み、この発明は、アスナロ属植物のカル
ス組織を、従来法よりもさらに効率良く培養できるとと
もに、初期細胞密度が低い場合でも上記組織を効率良く
培養できる方法を提供することを課題とする。

〔課題を解決するための手段〕

上記課題を解決するため、この発明は、炭素源、無機或
分および植物ホルモンを必須威分とする培地上でアスナ
ロ属植物の組織を培養する方法であって、上記培地中の
炭素源のｌＯ重量％以上がブドウ糖であることを特徴と
する。

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法に適用
されるアスナロ属植物としては、ヒノキアスナロが好適
であるが、特にこれに限定されるものではない。

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法におい
て使用される培地（以下、単に「培地」と称する）の炭
素源としては、特に限定されないが、シヨ糖等の炭水化
物とその誘導体、脂肪酸等の有機酸およびエタノール等
の１級アルコールなどを例示できる。ただし、この発明
にかかるアスナロ属植物の組織培養方法においては、こ
れらの炭素源の１０重量％以上がブドウ糖であることが
必要であり、特に３０重量％以上がブドウ糖であること
が好ましい。

培地の無機戊分としては、特に限定されないが、たとえ
ば、窒素、リン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、
マグネシウム、鉄、マンガン、亜鉛、モリブデン、銅、
コバルト、硫黄、ホウ素、塩素、ヨウ素等の元素を含む
無機塩を挙げることができる。その具体例としては、硝
酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、塩化
カリウム、塩化カルシウム、リン酸２水素カリウム、リ
ン酸２水素ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸アンモ
ニウム、硫酸ナトリウム、硫酸第１鉄、硫酸第２鉄、硫
酸マンガン、硫酸銅、硫酸亜鉛、モリブデン酸ナトリウ
ム、ヨウ化カリウム、ホウ酸、塩化コバルト等の化合物
などを挙げることができる．この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法におい
ては、培地に、植物ホルモンとして、オーキシン類およ
びサイトカイニン類のうち少なくともオーキシン類が含
有されていることが必要である。そして、オーキシン類
の濃度が１０−６〜ＩＯ一モル／ｌの範囲、必要に応し
、サイトカイニン類の濃度が１０−’モル／ｌ以下、好
ましくはｌ０１モル／ｌ以下の範囲で培地中に含まれる
ようにする。オーキシン類の濃度が１０−５モル／ｌ、
サイトカイニン類の濃度が１０−７モル／ｌである培地
を用いると、特に効率良く組織培養が行えるが、特にこ
れに限定されない。

前記オーキシン類としては、たとえば、α−ナフタレン
酢酸（ＮＡＡ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）　、２．４
−ジクロロフエノキシ酢酸（２．４一Ｄ）、インドール
酪Ｍ（ＩＢＡ）およびこれらの誘導体などを、また、前
記サイトカイニン類としては、たとえば、カイネチン、
ペンジルアデニン（ＢＡ）、ゼアチンなどがそれぞれ挙
げられるが、特にこれらに限定されるものではない。こ
れらのうち、オーキシン類がα−ナフタレン酢酸または
２，４−ジクロロフエノキシ酢酸であり、サイトカイニ
ン類がカイネチンまたはペンジルアデニンであると、特
に効率良くアスナロ属植物の組織培養が行える。

なお、培地には、炭素源、無機成分および植物ホルモン
の必須成分の他に、必要に応じて、ビタミン類やアさノ
酸類等が含有されていてもよい。

上記ビタミン類としては、ビオチン、チアミン、ビリド
キシン、ビリドキサール、ピリドキサミン、バントテン
酸カルシウム、アスコルビン酸、イノシトール、ニコチ
ン酸、ニコチン酸アミドなどが例示できるが、特にこれ
らに限定されるものではない。

また、前記アξノ酸類としては、たとえば、グリシン、
アラニン、グルタさン酸、システインおよびフェニルア
ラニンなどが挙げられるが、特にこれらに限定されるも
のではない。

培地に含まれる前記各成分の濃度は、通常、炭素源が１
０ないし５０ｇ／β、無機底分が１０−６ないし０．　
１モル／ｌ、植物ホルモンが前記所定濃度、ビタ主ン類
が０．　１ないし１５０ｍｇ／Ｅ、アミノ酸類がＯない
しＩｇ／＃程度であることが望ましいが、炭素源および
植物ホルモン以外の成分の濃度は、特にこれらに限定さ
れない。

培地の調製法としては、従来より植物の組織培養に用い
られている培地、たとえば、ムラシゲ・スクーグ培地、
リンスマイヤー・スクーグ培地、ホワイト培地、ガンボ
ルグＢ−５培地、ニンチ・ニッチ培地などを基本培地と
して、炭素源、および植物ホルモンの他、必要に応じて
、ビタ文ン類やアミノ酸類等の前記各成分を添加して調
製する方法が例示できるが、特に限定されない。なお、
前記基本培地には元々前記無機成分が含まれているが、
必要に応じて、さらに無機成分を適宜添加するようにし
てもよい。前記基本培地のうち、この発明で特に望まし
いものは、ムラシゲ・スクーグ培地およびガンボルグＢ
−５培地である。

このように調製される培地は、液体培地として用いても
良いし、寒天などの多糖類を含有させた固体培地として
使用しても良い。多糖類は、通常、培地中に０．　Ｉ〜
１重量％程度含有されるようにするが、特にこれに限定
されるものではない。

組織培養は、上記のように調製された培地上で、アスナ
ロ属植物より切り取った外植片、特に葉柄部位や側芽か
ら良好に誘導されたカルス片を培養または継代培養する
ことによって行われる。前記のような培地上では、カル
ス組織を、壊死させることなく安定に増殖させて育成す
ることができる。継代培養も同様である。

〔作　　　用〕

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法におい
ては、炭素源、無機物および植物ホルモンを必須成分と
する培地上でアスナロＮ植物のカルス組織を培養するに
あたり、前記炭素源の１０重量％以上がブドウ糖である
ようにしているため、この方法によれば、前記アスナロ
属植物のカルス組織を、従来法に比べてさらに効率良く
培養することができるとともに、従来法では非常に増殖
効率の悪かった低い細胞密度からの培養を効率良く行う
ことができる。

〔実　施　例〕

以下に、この発明の具体例的な実施例および比較例を示
すが、この発明は、以下の実施例に限定されない。

以下の実施例および比較例における培養は、下記のよう
にして行った。すなわち、炭素源の濃度が３重量％、α
−ナフタレン酢酸の濃度が１０−５モル／１になるよう
にそれぞれをムラシゲ・スクーグの培地に添加して調製
した液体培地２０−と、ヒノキアスナロのカルス片を細
かく砕いたものを入れた１００一容の三角フラスコを回
転振盪（しんとう）機に設置し、１００ｒｐｍ、２５℃
、暗の条件下で培養を行った。

一実施例１〜４一炭素源として、後記第１表記載の量のブドウ糖およびシ
ヨ糖を含有する培地にヒノキアスナロのカルス片約０．
４ｇを入れ、７日間培養を行い、カルス組織の増殖率を
調べた。

一比較例１一炭素源として、後記第１表記載の量のショ糖のみを含有
する培地にヒノキアスナロのカルス片約０．４ｇを入れ
、７日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べた。

一実施例５〜８炭素源として、後記第１表記載の量のブドウ糖およびシ
ヨ糖を含有する培地にヒノキアスナロのカルス片約０．
４ｇを入れ、１４日間培養を行い、カルス組織の増殖率
を調べた。

一比較例２一炭素源として、後記第１表記載の量のシヨ糖のみを含有
する培地にヒノキアスナロのカルス片約０．４ｇを入れ
、■４日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べた。

−実施例９〜１２一炭素源として、後記第１表記載の量のブドウ糖およびシ
ヨ糖を含有する培地にヒノキアスナロのカルス片約０．
２ｇを入れ、７日間培養を行い、カルス組織の増殖率を
調べた。

一比較例３ー炭素源として、後記第１表記載の量のシヨ糖のみを含有
する培地にヒノキアスナロのカルス片約０．２ｇを入れ
、７日間培養を行い、カルス組織の増殖率を調べた。

それぞれの結果を第１表に示した。

第１表にみるように、１０重量％以上がブドウ糖である
炭素源を含有する培地上で培養されたヒノキアスナロの
カルス組織は、１００％がシヨ糖である炭素源を含有す
る培地上で培養されたものよりも効率良く増殖している
。また、カルス組織の初期細胞密度が低い（ｌｏｇ／ｆ
）場合、１０重量％以上がブドウ糖である炭素源を含有
する培地上で培養されたヒノキアスナロのカルス組織は
１００％がシヨ糖である炭素源を含有する培地上で培養
されたものに比べて非常に効率良く増殖している。

〔発明の効果〕

この発明にかかるアスナロ属植物の組織培養方法によれ
ば、抗微生物剤や芳香剤等の原料に供されるアスナロ属
植物のカルス組織を従来法に比べてさらに効率良く培養
することができる。また、従来法では非常に培養効率が
悪かった、低い細胞密度からのアスナロ属植物のカルス
組織の培養を効率良く行うことができる。

Claims

【特許請求の範囲】１　炭素源、無機成分および植物ホルモンを必須成分と
する培地上でアスナロ属植物の組織を培養する方法であ
って、上記培地中の炭素源の１０重量％以上がブドウ糖
であることを特徴とするアスナロ属植物の組織培養方法
。２　アスナロ属植物がヒノキアスナロである請求項１記
載のアスナロ属植物の組織培養方法。