JPH0374332B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はシート状分析要素を用い液体を試料と
し、その中の分析対象成分（アナライト）を定量
する方法に関するもので、更に詳しくは、透明支
持体の上に少なくとも試薬保持層が設けられた構
成を有するシート状化学分析要素に液体試料を点
着した後分析要素内の発色濃度（変化した色の濃
度も含む）または発色速度（色の濃度変化速度も
含む）を支持体側から光学的に測定すると共に、
更に、試料点着による同一要素の試料点着表面の
着色濃度や形状を試料点着面から、又は支持体側
から発色部の形状を併せて測定し、これらの変化
量から試料中のアナライトを定量することを特徴
とする液体試料中の化学成分定量方法に係る。 透明支持体の上に少なくとも一層の試薬層が設
けられてなるシート状分析要素は、特公昭49−
53888号、特開昭50−137192号、特開昭51−40191
号、特開昭52−3488号、特開昭53−131089号、特
開昭54−101398号、特開昭57−66359号、特開昭
55−164356号、実開昭57−42951号、特開昭57−
148250号、特開昭56−24576号、米国特許第
3298789号、米国特許3395082号、更にアメリカ臨
床化学会誌（Clinical Chemistry）24巻1335−
1350頁（1978）、同誌27巻1287−1290頁（1981）
等によつて公知である。 これらのシート状分析要素の代表例は第１図及
び第２図に断面模式図として例示した如く透明支
持体１の上に少くとも一層の試薬層２を有し、そ
の上に展開層４又は定面積パツチ５を有するもの
で、更に必要に応じて光遮へい層、光反射層３、
バリヤ層、検出層、その他多種の機能層を有する
ことができる構造のものである。 シート状分析要素を用いて液体試料中のアナラ
イトを定量する方法は、第１図の構造のものの場
合、試料を展開層４上に点着する（滴下または付
着させる）と、この層上で試料は急速に円状に展
延し、ついで試薬層中に浸入、そこに予め内蔵さ
れているアナライトとの選択的反応試薬によつて
色素が生成する。この色素量がアナライトの含有
量に比例するので、その発色量または発色速度を
支持体側から測定することによつてアナライト量
が定量できる方式である。 この方式は展開層の展延作用により応用した試
料が、試料容量にほぼ比例した面積で広がるよう
にしたものである。これに対し第２図の分析要素
は、定面積パツチの作用によりアナライトによる
発色反応が、その底面部位のみに限定されるよう
な構造のものである。 かゝるシート状分析要素は既に市販又は試用さ
れており、血液や尿の如き体液中の化学成分の定
量に特に有用なものである。 しかし、血漿、血清、全血などの血液試料は、
試料によつて有形成分量、蛋白濃度、粘度などに
差位があり、又、経時や添加物によつても流動そ
の他の性状に変化がおきる多様性の試料であるこ
とは周知のことである。 前述のシート状分析要素は、上述の試料の多様
性に充分に対応できるものではなく、例えば正常
域の血液については実用的な定量性能を発揮する
が、正常域をはずれた血液に関しては不満足なこ
とがわかつた。即ちかかるシート状分析要素を用
い、常法に従つた、試料点着後、要素内の発色濃
度または発色速度量を透明支持体側から測定して
えた、単に一つの変化量または変化速度量のみか
らアナライト量を算出する方式では、血液試料の
性状が正常域をはずれたもの即ち有形成分量、粘
度など正常範囲を逸脱したものについては満足す
べき結果をうることが困難であることが判明し
た。 そこで種々実験の結果、まず、シート状分析要
素に、全血や血清などの液体試料を点着し、要素
内の発色濃度または発色速度量を透明支持体側か
ら測定して得た常法通りの測定値を基本値とし、
次に、要素の試料点着面（展開層または定面積パ
ツチの表面）の試料点着に由来する着色の濃度や
形状（面積や径）を光学的測定、又は支持体側か
ら要素内の発色部分の形状を光学測定して得た値
を補助値とし、この補助値を例えば一つのパラメ
ーターにして基本値を補正すれば、同じシート状
分析要素を用いて正常域をはずれた血液試料につ
いても、充分良好な結果をうることができること
を見出し本発明に到達した。補助値が試料の性状
中の何れに対応しているかは詳細には不明である
が、全血試料の場合はそのヘマトリツト値や流動
性に、又血漿、血清試料の場合はその蛋白濃度又
は粘度に対応すると思われる。 本発明は液体試料が有する諸種の影響因子、特
に液体試料の展開に影響を与える因子に基づいて
出現する乾式のシート状化学分析要素に特有の測
定誤差を確実かつ容易に補正する方法を提供する
ものである。とくに本発明は液体試料が全血の場
合には重要な影響因子であるヘマトクリツトに基
づく測定誤差を確実かつ容易に補正する方法とし
て好ましい方法を提供するものであり、液体試料
が血漿または血清の場合には影響因子としての蛋
白に基づく測定誤差を確実かつ容易に補正する方
法として好ましい方法を提供するものである。ま
た本発明は影響因子として点着液量の変動または
誤差に基づく測定誤差を補正する方法として好ま
しい方法をも提供するものである。 本発明はまた、乾式シート状化学分析要素を用
いて定量する場合に必然的に伴つていた試料選択
範囲が限定されるという問題が解消され、試料の
選択範囲が大幅に拡大される測定方法を提供する
ものである。 本発明は、下記の二つの発明を提供するもので
ある。 １ 第一発明 透明支持体の上に試薬層が設けられ、かつその
上に展開層もしくは定面積パツチが配置されてな
るシート状分析要素の展開層もしくは定面積パツ
チの上に一定量の液体試料を点着し、前記要素の
透明支持体側に現われる色濃度の変化量または変
化速度量を前記透明支持体側から光学的に測定す
ることにより液体試料中の被検成分を定量する方
法において、 液体試料の点着により前記要素の透明支持体
側に現われる色濃度の変化量または変化速度量
を前記透明支持体側から光学的に測定して得ら
れた値を基本値とし、 そのシート状分析要素の展開層もしくは定面
積パツチの表面に現われる試料の展開円の色濃
度、面積もしくは径を光学的に測定して得られ
た値を補助値とし、 あらかじめ求められている補助値と分析誤差
影響因子との関係と上記の過程で得られた補
助値とから定められる補正値を用いて前記基本
値を補正する過程を含むことを特徴とするシー
ト状分析要素を用いる液体試料中の被検成分定
量方法。 ２ 第二発明 透明支持体の上に試薬層が設けられ、かつその
上に展開層もしくは定面積パツチが配置されてな
るシート状分析要素の展開層もしくは定面積パツ
チの上に一定量の液体試料を点着し、前記要素の
透明支持体側に現われる色濃度の変化量または変
化速度量を前記透明支持体側から光学的に測定す
ることにより液体試料中の被検成分を定量する方
法において、 液体試料の点着により前記要素の透明支持体
側に現われる色濃度の変化量または変化速度量
を前記透明支持体側から光学的に測定して得ら
れた値を基本値とし、 液体試料の点着により前記要素の透明支持体
側に現われる発色領域の面積もしくは径を光学
的に測定して得られた値を補助値とし、 あらかじめ求められている補助値を分析誤差
影響因子との関係と上記の過程で得られた補
助値とから定められる補正値を用いて前記基本
値を補正する過程を含むことを特徴とするシー
ト状分析要素を用いる液体試料中の被検成分定
量方法。 なお、本発明（特に断わらない限り第一発明お
よび第二発明の双方を意味する）で用いるシート
状分析要素は、試薬層（試薬保持層もしくは試薬
含有層ともいう）と展開層（もしくは定面積パツ
チ）との間に光遮蔽層を有することが好ましい。 また、上記の分析要素内での発色による色濃度
の変化量または変化速度量の測定工程（）、そ
の分析要素の展開層（もしくは定面積パツチ）の
試料展開状態の情報の入手、もしくは上記発色の
領域に関する情報の入手のための工程（）、お
よび補助値と分析誤差影響因子との関係の決定の
工程は、いずれを先に行なつてもよく、また同時
に行なつてもよい。 本発明の方法において、基本値をうるための測
定は光学的方法により行い、可視光、赤外光等を
用い、反射光、または発光等の光学濃度を測定す
る方法を採用することができ、これらの方法はい
ずれも前述の諸特許明細書や文献に開示されてい
る公知の方法のうちから適宜に選択して実施する
ことができる。基本値をうるための測定手順また
は測定操作は原則的には従来乾式のシート状化学
分析要素を用いて液体試料中のアナライトを定量
する際の測定手順または測定操作と同じく実施す
ることができる。基本値は、end point法で求め
られた変化量でも、reaction rate法で求めた変
化速度量または初変化速度量など、いずれの方法
により求められた測定値をも採用することができ
る。 本発明の方法において、 補助値をうるための測定は光学的方法により行
い可視光、赤外光、等を用いて、着色濃度、着色
部位の形状を一点法又は走査法等の既知の方法を
利用することができる。また電子ビーム、超音波
を用いて走査法等の公知の方法により補助値をう
ることもできる。 以下に補助値をうるための方法をさらに詳細に
説明し、ついで補助値と影響因子との関係から定
められる補正値を用いて基本値を補正する方法を
詳細に説明する。 本発明に於いて、補助値を求めるためのシート
状化学分析要素の液体試料点着面の反射光学濃度
を測定する具体例について以下に述べる。本発明
の方法に於いては、試料は液滴状でシート状分析
要素に点着（滴下または付着）されただちに展延
する。その展延の速度や面積は、液体試料の粘性
や有形成分の量（例えばヘマトクリツト値）ある
いは、脂質成分や蛋白成分の量の影響を受ける
が、全血液のような場合にはヘマトクリツト値に
よる影響が支配的となると推定される。また、シ
ート状分析要素の試料点着面（展開層、定面積パ
ツチ、または試薬保持層）の構造や表面状態も大
きな影響をおよぼす。以下、展開層を有するシー
ト状分析要素を代表例にとりあげて説明する。 前述の諸因子を総合した形で展開層に点着され
た液体試料は通常ほぼ円形又は楕円形に広がる
（これを展開円という。）。 このような展開円の反射光学濃度の測定法には
通常利用されている反射光学濃度計が利用される
が、精度よく反射光学濃度を測定するにはいくつ
かの注意が必要である。すなわち、試料の展開面
積は異なるのに対し測光面積は一定でなければ正
しいパラメーターにはなり得ないから、ビーム径
は測定しようとする試料による最少面積よりも小
さい必要がある。すなわち展開円の中心部（通常
１〜５mmφ）について測定することが好ましい。 本発明の方法における液体試料滴のシート状化
学分析要素の上での展開面積を測定する具体的方
法について以下に述べる。シート状分析要素上の
展開像はすでに述べたとおり円形又は円に近い楕
円形をしている。また試料が全血の如く強く着色
している場合にはその展開りんかくは明確なので
分析要素上での展開部分と非展開部分の光学濃度
差も大きい。かかる場合にはシート状分析要素を
一定速度で水平に移動させつつ、上面から細いビ
ームを照射しその反射率を測定していくいわゆる
スキヤニング操作により展開円の直径を測定しこ
の値から、展開面積を算出することができる。 この際用いるビームとしては、白色光あるいは
波長域の限定された光、電子ビーム、超音波、赤
外線など、通常スキヤニング操作に用いられる電
磁波を目的に合せて用いることができる。スキヤ
ニングに当つてはシート状分析要素を移動するか
わりにビームを動かす方法によつてもよいことは
勿論である。光を用いる場合、小型のアンプを内
蔵したビームセンサーやこれにオプテイカルフア
イバーを取り付けたフアイバー型のビームセンサ
ーを用いることは、装置を小型にできる点できわ
めて有利な方法である。 展開面積を測定する別の具体的手段としては、
直径方向に多数の細いビームのヘツドを直線状に
取りつけた形のビームセンサーを用いることもで
きる。この場合にはスキヤニングをする必要はな
く、ビームヘツド、センサー、シート状分析要素
とも定位置に固定しておくだけでよい。 スキヤニングによる方法であれ、多列ビームヘ
ツドを用いる方法であれ展開直径を測定する方法
である。これに対して展開面積全体を測る方法と
しては、測定しようとする展開物（全血なら赤血
球の色、発色像であれば発色の色濃度）の光学的
特性に合せた円状の均一露光を行いその反射率を
測定することによる方法もある。この場合発色光
学濃度が試料によつて一定していないので適当な
検出の為の閾値を設定しておく必要がある。 補助値をうる方法としてはend point法による
変化量を測定する方法とreaction rate法による
変化速度量または変化初速度量を測定する方法な
ど公知のいずれの方法でもさしつかえないが、多
くの場合、変化量を測定する方法で十分である。
補助値を測定する時期は、基本値を測定する後で
あつても、基本値の測定と実質的に同時（少なく
とも同時に両者が測定されている時期がある場合
を意味する。）であつても、基本値を測定する前
であつてもさしつかえない。補助値を得るための
測定方法は前述の一つの影響因子にもとづくパラ
メータとしての１個の測定値でふつうは充分であ
るが、必要により同種または異種の影響因子にも
とづく１個または２個以上のパラメータとしての
２個以上の測定値を求めることもできる。 影響因子としては、液体試料の粘度または流動
性、着色、点着される液体試料の量（量の変動ま
たは量の誤差）が一般にあげられる。液体試料が
全血の場合には影響因子としてヘマトクリツト、
流動性または粘度、蛋白、脂質などがあげられ、
血漿または血清の場合には流動性または粘度、蛋
白、脂質、保恒剤、着色などがあげられる。 本発明の方法を実施するに当つてはあらかじめ
補助値と影響因子との関係を求め、その関係から
補助値に対応して定められる補正値が必要であ
る。 これまでに述べてきた諸種の方法によりえられ
た測定値を補助値とし、補助値と影響因子との関
係から、えられた補助値に対応する補正値を定
め、その補正値により基本値を補正する方法を説
明する。一つの方法として、展開層の上の液体試
料の展開面積、または展開層、定面積パツチなど
の上の液体試料の層状の残留物の反射光学濃度と
液体試料に含まれる着色物質量との関係をあらか
じめ求めておき、相関図あるいは相関表を利用し
て補助値に対応する補正値を定め、それにより基
本値を補正する方法があげられる。また他の方法
として液体試料の展開面積または液体試料の残留
物の反射光学濃度の測定出力を別に測定されてい
るシート状化学分析要素の透明支持体側から透明
支持体を通しての発色領域の反射光学濃度の測定
値を基本値として保持または記憶している演算装
置または演算回路に入力し、補助値に対応する補
正値を演算装置または演算回路中で演算させ直接
基本値を補正する方法もあげられる。演算方法は
基本値に補正値を加算または減算する方法、基本
値に補正値を剰算または除算する方法など公知の
いずれの方法によつても実施できることはいうま
でもない。 実施例 １ ゼラチン下塗りが施されてある厚さ185μmの透
明ポリエチレンテレフタレート（PET）フイル
ムの上に、下記組成から成る血中グルコース濃度
定量用の試薬層を乾燥後の膜厚がおよそ15μmに
なるように塗布、乾燥した。 ペルオキシターゼ 25000IU １，７−ジヒドロキシナフタレン ５ ｇ ４−アミノアンチピリン ５ ｇ ゼラチン 200 ｇ ノニオンHS210（日本油脂(株)製 面活性剤；ポリオキシエチレン ノニルフエニルエーテル） ２ ｇ この上に、0.2gのノニオンHS210及びグルコー
スオキシダーゼ50000IUを含む二酸化チタン粉末
8gをゼラチン1gに混合分散したものより成る光
遮蔽層を乾燥膜厚がおよそ15μmになるように塗
布、乾燥した。 水100ml中にゼラチン4gとノニオンHS210の
0.2gを溶解させて接着層塗布液を調製し、これ
を、光遮蔽層の上に乾燥膜厚が4μmとなるように
塗布、乾燥し接着層を形成させた。次に、接着層
に30g／m²の割合で水を湿し水として供給、湿潤
させたのち、綿100％のブロード（東洋紡製100双
子ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥させて多
孔性展開層を設け、グルコース定量用の多層分析
フイルムを完成させた。 このフイルムを1.5cm×1.5cmの正方形のチツプ
としたのち、特開昭57−63452に開示のプラスチ
ツクマウントに収めてグルコース定量用化学分析
スライドを調製した。 ヒトより採血されたヘパリン含有新鮮血を
3000rpmで２分遠心分離し血漿成分および血球成
分にわけとり、ついで両者を種々の割合で混合し
て遠心ヘマトクリツト値が20％から70％の範囲の
血液（全血）試料を10種調製した。 この全血試料各々につき6μを前記のように
して作製した化学分析スライドの展開層に点着
し、37℃で６分インクベーシヨンした後その試薬
層の発色部分の光学濃度を透明支持体を通して反
射測光により測定した。ついで各々の化学分析ス
ライドは直ちに展開層の表面に被膜状に残留して
いる全血残渣の赤色濃度を展開層側から反射測光
により測定した（測定波長500nm）。 遠心ヘマトクリツト値の対数と展開層の全血残
渣の反射光学濃度値を直交座標のグラフにとつた
ところ、第３図のような一次の相関が認められ
た。この結果から、未知のヘマトクリツト値の血
液（全血）について、展開層の表面に被膜状に残
留している全血残渣の反射光学濃度値（以下、残
渣表面ODという。）からヘマトクリツト値（遠
心ヘマトクリツト値）を求められることがあきら
かになつた。 ヒトから採血したヘパリン含有新鮮全血82検体
について前述のようにして作製した化学分析スラ
イドの展開層にそれぞれマイクロピペツトで6μ
点着し、37℃で６分インクベーシヨンして後、
試薬層の発色部分の反射光学濃度を透明支持体を
通して反射測光し、ついであらかじめ求められて
いる検量線により血中グルコース濃度に換算し
た。えられたグルコース濃度値が基本値である。 別に上記の新鮮血についてそれぞれヘキソキナ
ーゼ法により血漿中のグルコース濃度を測定し
た。ヘキソキナーゼ法で測定された血漿中のグル
コース濃度値ｘ化学分析スライドを用いてえられ
た血中グルコース濃度値ｙとの相関を求めたとこ
ろ、第１表のとおりであつた。

【表】 一方、相関より著しくずれた検体は遠心ヘマト
クリツト法で遠心ヘマトクリツト値が約50％以上
の高ヘマトクリツト全血であることがわかつた。
しかるに前述のように展開層の上の全血の残渣表
面ODは遠心ヘマトクリツト値の対数と一次の相
関があるので、残渣表面ODからヘマトクリツト
値が大きい（または異常に大きい）ことが確認で
きるので、別にヘマトクリツト値を測定しないで
も残渣表面ODだけから相関からのはずれの大き
さ（ズレの度合い）を判定できることが明らかで
ある。 そこで試薬層の発色部分の反射光学濃度を測定
しおえた（この測定値またはこの測定値から換算
したグルコース濃度値が基本値である。）化学分
析スライドにつき、直ちに全血の残渣表面ODを
反射光学濃度計を用いて波長500nmで測定し、え
られた反射光学濃度値を補助値とした。ついで残
渣表面OD（補助値）を直交座標軸の横軸ｘに、
相関からの偏差、すなわち、化学分析スライドを
用いて測定されたグルコース濃度値（基本値）を
Ｆ、ヘキソキナーゼ法で測定されたグルコース濃
度値をＲとしてＦ−Ｒ／Ｒを縦軸Ｙにとりプロツト したところ、第４図のように弗化ナトリウム
（NaF）含有全血試料の場合（直線Ａ）、NaF不
含全血試料の場合（直線Ｂ）のふたつの良好な直
線関係がえられた。 第４図のグラフの直線関係を用い、相関からの
偏差−1.0以上の全血試料につき、化学分析スラ
イドの試薬層の発色部分の反射光学濃度値を透明
支持体を通して反射測光して得られた測定値から
換算されたグルコース濃度値（基本値）と全血の
残渣表面OD（補助値）から導いた補正値
１／ａ×（残渣表面OD）＋ｂ＋１を用い、次式によ り補正されたグルコース濃度値を次式により算出
した。 補正されたグルコース濃度値＝化学分析スライ
ドを用いて算出したグルコース濃度値（基本値）
×１／ａ×（残渣表面OD）＋ｂ＋１ ここでａ，ｂは補正定数で次の表のとおりの値
である。

【表】 補正されたグルコース濃度値（血漿グルコース
濃度値）ｙとヘキソキナーゼ法により測定された
グルコース濃度値ｘとの相関を求めたところ、第
２表のとおりであつた。

【表】 補正前の相関に比べて相関係数が１に近くな
り、回帰式からの分散が小さくなり、ヘマトクリ
ツト値が正常域からはずれた全血試料についてヘ
キソキナーゼ法により測定されたグルコース濃度
値との相関が著しく改善されたことが明らかであ
る。 実施例 ２ 解糖阻止剤としてフツ化ナトリウム（NaF）
25mg、ヘパリンナトリウム150U含有する採血管
に静脈血10mlを採取した。血中グルコース濃度は
118mg／ｄであつた。室温にて軽く遠心処理し、
血漿部分と血球部分とを分離したのち両者を再び
適当な比率で混ぜ合せ、同じ血漿グルコース濃度
を有しながらヘマトクリツト値が異なる血液を
各々５ml程度づつ６種類作製した（それぞれ全血
試料番号11ないし16と名づける。）。各々の試料に
ついてその１部をキヤピラリー管に採取し
3000g、５分間遠心して、ヘマトクリツト値を求
めた。同様にして血中グルコース濃度が254mg／
ｄである血液についてもヘマトクリツト値の異
なる試料を作製した。（それぞれに全血試料番号
21ないし26と名づける。） 一方、ゼラチン下塗りが施されてある厚さ
185μmの透明ポリエチレンテレフタレート
（PET）フイルムの上に、下記組成から成る血中
グルコース濃度定量用の試薬層を乾燥後の膜厚が
およそ15μmになるように塗布、乾燥した。 ペルオキシダーゼ 25000IU １，７−ジヒドロキシナフタレン ５ ｇ ４−アミノアンチピリン ５ ｇ ゼラチン 200 ｇ ノニオンHS210（日本油脂(株)製活面活性剤；ポ
リオキシエチレンノニルフエニルエーテル）
２ ｇ この上に、0.2gのノニオンHS210及びグルコー
スオキシダーゼ50000IUを含む二酸化チタン粉末
8gをゼラチン1gに混合分散したものより成る光
遮蔽層を乾燥膜厚がおよそ15μmになるように塗
布、乾燥した。 水100ml中にゼラチン4gとノニオンHS210の
0.2gを溶解させて接着層塗布液を調製し、これ
を、光遮蔽層の上に乾燥膜厚が4μmとなるように
塗布、乾燥し接着層を形成させた。次に、接着層
に30g／m²の割合で水を湿し水として供給、湿潤
させたのち、綿100％のブロード（東洋紡製100双
子ブロード）を圧着ラミネートし、乾燥させて多
孔性展開層を設け、グルコース定量用の多層分析
フイルムを完成させた。 このフイルムを1.5cm×1.5cmの正方形のチツプ
としたのち、特開昭57−63452に開示のプラスチ
ツクマウントに収めてグルコース定量用化学分析
スライドを調製した。 上記化学分析スライドの展開層に上記の全血試
料11〜16の各6μを点着し、２分後にその展開
面積を展開層の点着面の上から測定した。結果を
第５図に示す。 展開面積とヘマトクリツト値の間には、ほぼ一
定の相関があることが分つた。 上記の全血層に点着し、37℃で６分インクベー
シヨンした後の試薬層の発色光学濃度（基本値）
を透明支持体側から測定した。第３表第３欄に示
すように発色濃度はヘマトクリツト値に依存して
変化していた。 第４欄には第５図のヘマトクリツト値と展開面
積との関係を用いて補正値を求め、試薬層の発色
光学濃度を補正した値を示す。 点着面上の全血試料の展開面積とヘマトクリツ
ト値との相関を利用して発色光学濃度を補正する
ことにより、ヘマトクリツト値の影響による誤差
が補正された血糖値が求められることがわかる。
さらに特にヘマトクリツト値が正常な範囲からは
ずれた高ヘマトクリツト値の全血試料に対して本
発明の方法が有効であることもわかる。

【表】 実施例 ３ 実施例２と同様の実験に於いて、点着後７分後
の発色領域の面積を透明支持体を通して測定し
た。ヘマトクリツト値と発色領域の面積との関係
は第６図に示すとおりであつた。この関係を用い
実施例２と同様にして発色光学濃度の測定値（基
本値）の補正を行なつた。結果を第４表に示す。 透明支持体側からの発色領域の面積を用いた補
正によつてもヘマトクリツト値の影響による測定
値の誤差がよく補正できることがある。

【表】 実施例 ４ 実施例２と同様の実験に於いて点着面の展開面
積のかわりに点着した全血試料の展開円の直径を
測定したところヘマトクリツト値と展開直径の間
には第７図のような関係があることが分つた。 この関係を用いて、実施例３の測定値（基本
値）を補正したところ第４表に示すような結果を
得た。 展開直径によつてもヘマトクリツト値の影響に
よる測定値の誤差の補正が可能であることが分
る。 実施例 ５ 実施例４と同様の実験に於いて点着面側の展開
円の直径のかわりに円形の発色領域の直径を透明
支持体側から測定しヘマトクリツト値との関係を
調べたところ第６図と同様の結果が得られた。こ
の関係を用いて実施例３の結果を補正したところ
第４表のようになつた。 透明支持体側から測定した発色領域の直径を用
いてもヘマトクリツト値の影響による測定値の誤
差の補正が可能であることが分る。 実施例 ６ 実施例２〜５に用いたと同様のグルコース定量
用化学分析スライドを用い、展開層の展開円の上
の赤血球による着色を反射光学濃度計（富士フイ
ルム社製、プレスケール用濃度計）をアナライザ
ーに直接取り付け試料点着後２分後の点着面の反
射光学濃度を測定し実施例５と同様にしてあらか
じめ求めたヘマトクリツト値と反射光学濃度との
相関を利用して、実施例２と同様にして透明支持
体側から測定した試薬層の発色光学濃度値（基本
値）を補正した。 展開円の赤血球による着色を展開層側から反射
測光してその光学濃度をヘマトクリツト値の影響
による測定値の誤差はよく補正できることが分つ
た。 実施例 ７ 実施例２に記載したと同様にしてPETフイル
ムの上に試薬層、光遮蔽層および接着層をこの順
に設け、ついで実開昭57−42951明細書に記載の
方法に従つて直径９mmの円形に裁断したメンブラ
ンフイルター（平均孔径5μm、厚さ165μm）をラ
ミネート接着して定面積多孔性パツチを有するグ
ルコース定量用の多層分析フイルムを作製した。
この多層分析フイルムにおいては全血試料のヘマ
トクリツト値に依らず常に一定の展開面積、すな
わち定面積パツチの面積にほぼ等しい面積、にな
るような限定展開型の多層分析フイルムである。
ついでこの多層分析フイルムを定面積パツチが中
心に位置するようにして15mm×15mmの正方型のチ
ツプに裁断し、定面積パツチの中心が上部マウン
ト枠の円形の開口の中心に一致するようにして特
開昭57−63452明細書に開示のプラスチツクマウ
ント枠におさめてグルコース定量用化学分析スラ
イドを調製した。 この化学分析スライドについて、実施例２〜５
と同様にして調製したヘマトクリツト値の異なる
全血試料各8μを定面積パツチに点着し、37℃
で６分インベーシヨンし、試薬層の発色光学濃度
を透明支持体側から反射測光し、ついでそれぞれ
の試料について直ちに定面積パツチに残留してい
る主として赤血球からなる層の反射光学濃度を定
面積パツチ側から反射測光した。ヘマトクリツト
値と赤血球からなる層の反射光学濃度との間には
第８図に示すとおりの関係があつた。 この関係を用いて透明支持体側から測定して得
られた試薬層の発色光学濃度値を補正したとこ
ろ、ヘマトクリツト値の影響による誤差がよく補
正された。この結果により、定面積パツチに残留
している主として赤血球からなる被膜の反射光学
濃度値を測定することにより、ヘマトクリツト値
の影響による測定値の誤差の補正ができることが
わかる。 実施例 ８ 直径９mmの綿ブロード（厚さ約200μm）を定面
積多孔性パツチとして用いたほかは実施例７と同
様にしてグルコース定量分析スライドを作製し
た。 このスライドの定面積パツチにヘマトクリツト
値が42％、グルコース濃度が113mg／ｄの全血
試料を4μから12μまで液量をかえて点着し
た。 定面積パツチの点着面の上から実施例７と同様
にして反射光学濃度を測定したところ、点着液量
と反射光学濃度とは直線関係にあることが分つ
た。この関係を用いて透明支持体を通して測定し
た試薬層の発色部分の発色光学濃度値（基本値）
を補正したところ点着液量の影響による測定誤差
がよく補正されることが分つた。 実施例 ９ 実施例２と同様にして採血した血液を遠心分離
し、血漿試料を調製した。この血漿にヒトアルプ
ミンを加えて蛋白質量が２〜15g／ｄである血
漿試料を調製した。 特開昭55−164356明細書に開示のグルコース定
量用多層分析フイルムの展開層に上記血漿試料の
10μを点着し、試薬層の発色領域の面積を透明
支持体を通して測定したところ総蛋白質量と発色
領域面積の間には実施例３の場合と同様の結果が
得られた。実施例３と同様にして透明支持体を通
して測定した試薬層の発色部分の発色光学濃度値
（基本値）を透明支持体を通して測定した試薬層
の発色領域面積から求めた補正値により補正した
ところ、蛋白質量の影響による発色光学濃度値の
誤差がよく補正できることが分つた。 実施例 10 ゼラチン下塗りが施されている厚さ180μmの透
明PETフイルムの上に下記組成からなる試薬組
成物を乾燥膜厚が約20μmとなるように塗布、乾
燥した。 グルコースオキシダーゼ ２重量部 100U／mg ペルオキシダーゼ150U／mg １重量部 １，７−ジヒドロキシナフタレン ５重量部 ４−アミノアンチピリン ５重量部 ゼラチン 200重量部 界面活性剤ノニオンHS210 ２重量部 この上に平均孔径5μmのメンブランフイルター
（フジミクロフイルターFM500）を湿潤下に圧着
し均一にラミネートして、グルコース定量用多層
分析フイルムを作製した。 この多層分析フイルムを実施例１と同様にして
スライド枠に収め化学分析スライドを作製した。 この化学分析スライドを用い、実施例９に記載
したのと同様の蛋白質濃度が異なる血清試料の
10μを展開層に点着しその蛋白質量と展開直径
の関係を調べた。この関係を用いて種々の蛋白質
濃度の異なる血清試料について透明支持体を通し
て測定した試薬層の反射光学濃度値（基本値）を
補正したところ、血糖値と発色光学濃度との相関
は大幅に改善された。 実施例 11 次のようにして血中尿素窒素（BUN）定用一
体型多層分析フイルムを作製した。 厚さ180μmの無色透明PETフイルムの上に１
m²当り下記の塗布液量になるようにして各層を順
に設けた。 (1) 指示薬層 発色前駆体：４−〔ビス−（２， ４−ジニトロフエニ ル）メチル〕−Ｎ− ヘキサデシルピリジニ ウムペルクロレート 1.00g セルロースアセテート 8g アセトン 65ml メチルセロソルブ 35ml エタンスルホン酸 25μ の組成溶液を塗布した。 (2) 液体遮断層 シリコーン樹脂のヘキサン溶液に浸漬後、乾燥
することによりシリコーン撥水性処理したメンブ
ランフイルター（富士ミクロフイルター
FM500：厚さ140μm、空孔率75％、平均孔径
5μm）を(1)の指示薬層の溶剤が未乾燥のうちに
（ウエツト状態で）はりつけ接着し、乾燥させた。 (3) 試薬層 ゼラチン 10g 水 100ml ｐ−ノニルフエノキシポリグ リシドール（グリシードー ルサーフアクタント10G） 0.30g ウレアーゼ 0.8g エチレンジアミンテトラ酢酸・四 ナトリウム塩 0.4g オルト燐酸二ナトリウム及び水酸化ナトリウム
でpH8に調整した溶液をメンブランフイルター上
に塗布・乾燥させた。 (4) 光反射層 TiO₂微粉末 4g ゼラチン 4g ｐ−ノニルフエノキシポリグリ シドール 1.15g 水 40g 溶液を塗布乾燥させた。 この層の上に展開層を結合させるため、 (5) 接着層 ゼラチン 2.5g 水 50ml ｐ−ノニルフエノキシポリグリ シドール 0.15g の組成の溶液を塗布乾燥させた。 (6) 展開層 乾燥したものの表面を水で膨潤させ、展開層の
布（コツトンブロード100番）を圧着ラミネート
して接着させた。 このように作製された多層分析フイルムを実施
例２と同様にしてBUN定量用化学分析スライド
を作製した。 このBUN定量化学分析スライドを用いて実施
例２に用いたと同様の血液試料を用いてヘマトク
リツト値と透明支持体側から反射測光して得られ
た発色部分の反射光学濃度との相関を調たとこ
ろ、第９図下側に示すとおりであつた。次にヘマ
トクリツト値と透明支持体を通して測定した発色
領域の面積との相関を調べたところ、第９図上側
に示すとおりであつた。 この２組の相関にもとづいて求められた補正値
を用いて全血試料の発色光学濃度の測定値（基本
値）を補正したところヘマトクリツト値による影
響は±５％以下に抑えられることが分つた。 実施例 12 特開昭57−37262明細書実施例２に記載の方法
により血中ビリルビン定量用化学分析用スライド
を作製した。このものについて本明細書実施例２
に記載したと同様の方法によりヘマトクリツト値
の異なる血液試料を調製し、ビリルビン抽出層の
ビリルビンにもとづく反射光学濃度値を透明支持
体を通して反射測光した。また、展開層上の反射
光学濃度を別に測定してヘマトクリツト値と反射
光学濃度の関係を求めた。 この関係にもとづいて求めた補正値を用いて前
記の全血試料中のビリルビン濃度の測定値を補正
したところヘマトクリツト値による誤差はグルコ
ース定量用化学分析スライドの場合と同様よく補
正されることが分つた。 実施例 13 特開昭55−164356明細書の実施例１に記載の方
法に従つて血糖測定用多層分析フイルムを作製し
た。 一方本明細書の実施例２と同様の方法によつて
得たヘマトクリツト値が異なる血液試料を作成
し、更にこれに超音波を照射して溶血させヘモク
リロビン濃度の異なる溶血試料を作製した。 このものについて、実施例２の方法に従つて透
明支持体側より測定した発色光学濃度とヘマトク
リツト値の関係を求めた。 この関係にもとづいて求めた補正値を求めて血
糖値に対する基本値を補正したところ、種々の溶
血全血試料についてヘマトクリツト値に基づく誤
差をよく補正できることが分つた。

【図面の簡単な説明】

第１図は多孔性展開層を有する公知の多層分析
フイルムの断面模式図である。第２図は多孔性定
面積パツチを有する公知の多層分析フイルムの断
面模式図である。第１図および第２図においては
液体試料の点着および試薬層の発色部分の反射光
学濃度（本発明の方法における基本値に相当す
る。）を透明支持体を通して反射測光する方法を
模式化して示してある。試薬含有層２の一部に付
した破線ハツチを付した領域７は発色領域を、矢
印つきの破線は液体試料の移動を、それぞれ模式
化して示す。 １……透明支持体、２……試薬含有層、３……
光反射層、４……多孔性展開層、５……多孔性定
面積パツチ、６……液体試料滴、７……試薬含有
層の発色領域、８……反射測光用光源（図示せ
ず）、９……測光装置（図示せず）。 第３図は実施例１において求められた全血試料
の遠心ヘマトクリツト値の対数と展開層の全血残
渣の反射光学濃度値との相関を示すグラフであ
る。第４図は実施例１において求められた全血残
渣の表面反射光学濃度値と実施例１に定義されて
いる偏差との相関を示すグラフである。直線Ａは
NaF含有全血試料、直線ＢはNaF不含有全血試
料にかかわる相関を表わす。第５図は実施例２に
おいて求められたヘマトクリツト値と全血試料の
展開面積との相関を示すグラフである。○印はグ
ルコース濃度118mg／ｄ、△印はグルコース濃
度254mg／ｄの全血試料についての測定値を示
す。第６図は実施例３において求められたヘマト
クリツト値と試薬層の発色領域面積との相関を示
すグラフである。○印と△印については第５図と
同じグルコース濃度を示す。第７図は実施例４に
おいて求められたヘマトクリツト値と全血試料の
展開円の直径との相関を示すグラフである。第８
図は実施例７において求められたヘマトクリツト
値と定面積パツチの表面に残留している主として
赤血球からなる被膜の反射光学濃度値との相関を
示すグラフである。第９図は実施例11において求
められたヘマトクリツト値と透明支持体を通して
測定された発色部分の反射光学濃度値との相関
（下側）およびヘマトクリツト値と透明支持体を
通して測定された発色領域の面積との相関（上
側）を示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 透明支持体の上に試薬層が設けられ、かつそ
   の上に展開層もしくは定面積パツチが配置されて
   なるシート状分析要素の展開層もしくは定面積パ
   ツチの上に一定量の液体試料を点着し、前記要素
   の透明支持体側に現われる色濃度の変化量または
   変化速度量を前記透明支持体側から光学的に測定
   することにより液体試料中の被検成分を定量する
   方法において、 液体試料の点着により前記要素の透明支持体
   側に現われる色濃度の変化量または変化速度量
   を前記透明支持体側から光学的に測定して得ら
   れた値を基本値とし、 そのシート状分析要素の展開層もしくは定面
   積パツチの表面に現われる試料の展開円の色濃
   度、面積もしくは径を光学的に測定して得られ
   た値を補助値とし あらかじめ求められている補助値と分析誤差
   影響因子との関係と上記の過程で得られた補
   助値とから定められる補正値を用いて前記基本
   値を補正する過程を含むことを特徴とするシー
   ト状分析要素を用いる液体試料中の被検成分定
   量方法。 ２ 透明支持体の上に試薬層が設けられ、かつそ
   の上に展開層もしくは定面積パツチが配置されて
   なるシート状分析要素の展開層もしくは定面積パ
   ツチの上に一定量の液体試料を点着し、前記要素
   の透明支持体側に現われる色濃度の変化量または
   変化速度量を前記透明支持体側から光学的に測定
   することにより液体試料中の被検成分を定量する
   方法において、 液体試料の点着により前記要素の透明支持体
   側に現われる色濃度の変化量または変化速度量
   を前記透明支持体側から光学的に測定して得ら
   れた値を基本値とし、 液体試料の点着により前記要素の透明支持体
   側に現われる発色領域の面積もしくは径を光学
   的に測定して得られた値を補助値とし、 あらかじめ求められている補助値と分析誤差
   影響因子との関係と上記の過程で得られた補
   助値とから定められる補正値を用いて前記基本
   値を補正する過程を含むことを特徴とするシー
   ト状分析要素を用いる液体試料中の被検成分定
   量方法。