JPH0367599A - サルモネラ菌識別用の分離媒体 - Google Patents
サルモネラ菌識別用の分離媒体Info
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- JPH0367599A JPH0367599A JP2108966A JP10896690A JPH0367599A JP H0367599 A JPH0367599 A JP H0367599A JP 2108966 A JP2108966 A JP 2108966A JP 10896690 A JP10896690 A JP 10896690A JP H0367599 A JPH0367599 A JP H0367599A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
［産業上の利用分野〕
本発明は、サルモネラ種のバクテリアを識別できる分離
媒体に関する。
媒体に関する。
【従来の技術］
人間を発病させるサルモネラ菌を識別することは、医療
細菌学と農産物細菌モニタにおける主要問題である。 つまり、養鶏めんどりによって媒介された伝染病の場合
、細菌が腸管に寄生した家禽類は発病せず、サルモネラ
菌の保菌庫となってしまう。サルモネラ菌は、家禽類の
卵を通じて広がり、発病してからは食物連鎖によって拡
散してゆく。さらに、サルモネラ菌はその宣誓申告が義
務づけられている。 この菌による発病を防止するため、サルモネラ菌で汚染
された場所、とくに農場を広い範囲にわたって検査する
必要がある。 事実、サルモネラは共生種の大腸菌とプロテウス菌内に
も一般に認められる。 通常サルモネラの検出は、病源となる腸内細菌を区分け
したり、サルモネラのコロニーを検出できる、腸内細菌
を選別するための寒天などの分離媒体を用いて行なわれ
る。理想的な分離媒体は、腸内細菌を成長させ、存在す
る各種細菌種の識別に役立ち、その後に行なわれる各細
菌種のコロニーを識別して、サルモネラのコロニーを検
出スる作業を可能とするものでなくてはならない。 しかし、腸内細菌を分離するための従来技術による分離
媒体は、サルモネラの検出にはあまり役立たない。事実
、プロテウスミラビリス菌型の共生菌がしばじは見つか
ってしまうことがあり、検査結果が誤まってしまう。 上述の寒天の選択媒体の内、ヘクト−エン媒体は一般的
の望ましいが、高価な点が欠点である。 かくして、このヘクト−エン媒体上で、サルモネラ菌は
、中央が黒い青色コロニー（ｌａｃ ５ａｃｓａｌ
＋ ）（２ｓ＋ ）を形成し、同じ性質をもつミラビリ
ス菌も同様に、中央が黒い青いコロニーを形成する。し
たがって、かようなプラスの誤結果が得られるので、さ
らに作業が必要となり、費用もかかる。つまり、疑わし
い幾つかのコロニーをつづいて検査しなければならない
。もしかようなプラスの誤結果がなければ、手早く読み
とっても診断上のエラーをすることもない。 さらに、サルモネラについてのかような不確実さの故に
、コロニーの着色状態を容易に識別する場合に比べて、
より高度の且つ質の高い処置方法を用いてコロニーの再
分離と生化学的な差別作業をつづいて行う必要が生じる
。最後に、上記生化学的差別処理作業を行うことにより
、菌の識別が遅れ、作業全体が時間のかかるものとなる
。 【発明の開示】 本発明の目的は、コロニーを特定的に着色することによ
り、あいまいさの残らない方法でサルモネラ菌コロニー
を検出できる、上記欠点をもたない分離媒体を提供する
にある。事実、本発明は、プロテウスを誤ったプラスと
して可視的にしてしまう、従来技術によるサルモネラの
マーキング特性Ｈ２Ｓ” ｌａｅ −ｓａｃ −５ａｌ
−は用いない。 より特定的には、本発明はサルモネラ菌を確認するため
の分離媒体に関し、この媒体において、サルモネラによ
って代謝されるポリオールと、酸性化に反応するｐｉ指
示薬とが、ペプトンを含む培養サポートに添加される。 本発明の特定の具体例によると、サルモネラによって代
謝可能のこのポリオールは、くだけ易い物質に吸収され
る。 使用される物質は小さいサイズの粒状体、つまり約１０
０μ以下の粒子からできていて、上記ポリオールを確実
に吸収し、かくして得られた粉状体の流動性がよいもの
が望ましい。 この粉砕された物質は望ましくは、微細シリカ、特定的
にはシリカゲルがよい。しかし、セルロースなどの他の
種類の物質もまた、採用可能である。 使用されるポリオールのうち、よりくわしくは、エタネ
ジオールのような２〜１０個の炭素原子を含むダイオー
ル、プロパネジオール、ブタネジオール、特に１．２−
プロパネジオールなどのポリオールである。事実、これ
らのダイオールはサルモネラ環によって代謝され、中性
レッドのようなｐＨ指示薬を反応させうる酸性種を作る
。これに対して、大腸菌やプロテウス菌のような共生種
は、この種の反応は起さない。 この媒体は、食品中のサルモネラを検出するのに特に用
いうるが、すべてのサルモネラはこの媒体上で確実な結
果を生じさせる。このプロセスを実行する場合は、より
迅速にサルモネラ環のコロニーを確認しうるコロニー培
養に適した寒天培養媒体を用いるのが望ましい。 腸内細菌の成長を促進させる媒体のうち、たとえばデオ
キシコレートを含む媒体を用いることができる。検出精
度を向上させたい場合は、ベータ・ガラクトシダーゼ基
質を媒体に添加することもできる。上記基質は、ブロモ
クロロインドキシルガラクトシド、ブロモナフチルガラ
クトシド、あるいはハイドロキシキーノリネガラクトシ
ド型の上記基質の色原体基質であり、もし適切であるな
ら、誘導原たとえば１ＰＴＧの存在下において添加する
ことができる。事実、サルモネラ変種はベータガル−な
ので、この基質とは反応しない。 本発明によるポリオールの価は、上記２つの識別特性を
用いる場合、ポリオールが存在してもベータガル はマ
スクされない程度である。これに反し炭水化物の大部分
は、異化抑制により、ベータガル 特性をマスクしうる
。これらの２つの識別特性が色反応によって可視化され
たときは、各種タイプの菌、特にサルモネラ、プロテウ
ス、および大腸菌などが注意深い処置によって識別され
うる。かくして、ｐＨ指示薬としてのすんだ中性赤およ
びベータ・ガラクトシダーゼ基質としてのメガルによっ
て、サルモネラを大腸菌、シトロバクチル、プロテウス
から、これらを含む混合液内において識別することがで
きる。このメカニズムは以下の記載から明らかになる。 言うまでもなく、この種の媒体の場合は、他の種類の負
のサルモネラ特性、たとえば、ベータグルー−を用いる
こともできる。その場合は、ベータ・グルコシダーゼ基
が用いられる。 同様に、とくにシート状の寒天媒体を用いる代りに、紙
製の柱状サポートのような他の種類のサポートを用いて
、媒体それ自体内で検出することもできる。 本発明はまた、サルモネラ環の認識を行うためのプロセ
スにも関する。このプロセスにおいて試料は本発明によ
る媒体上で培養され、媒体の酸性化に対するｐＨ指示薬
の反応によってサルモネルの存在が検知される。 ［実施例］ 非限定的試料として以下に示す例により、本発明の他の
利点と特徴が明らかになる。 例１ サルモネラ環を検知できる分離媒体 以下の組成を有する媒体が生産される。 成 分 グラム／水土リットル１．２
−プロパネジオール ５ペプトン
５イースト抽出
２デオキシコレート
１ブロモクロロインドキシル ガラクトシド ０．１中性赤
０．０３寒天
１５各種タイプのエンテロバ
クテリアでこの媒体を４８時間培養し、その後接種する
ことによって次の結果が得られた。 サルモネラは、赤コロニーを示し、大腸菌は青・緑コロ
ニーを示し、シトロバクチルは青・紫コロニーを示し、
プロテウスは無色のコロニーを示した。 例２ 本発明による分離媒体により、ポリオールは粉末物質に
吸収される。 使用された混合物は以下の組成を示す。 成 分 グラム／水工リットル１．２−
プロパネジオール／シリカゲル（１０ｇ ／ｌｅｇ ）
２Ｂペプト
ン ５イースト抽出
２デオキシコレート
１ブロモクロロインドキシルガラクトシ
ド ０．１中性赤 ０
．０３寒天 １５各
種タイプのエンテロバクテリアでこの媒体を４８時間培
養し、その後接触することにより次の結果が得られた。 この結果は、例１の目的である培養媒体において観察さ
れたものに類似する。すなわち、サルモネラは赤コロニ
ーを示し、大腸菌は青・緑コロニーを示し、シトロバク
チルは青・紫コロニーを示し、プロテウスは無色コロニ
ーを示した。
細菌学と農産物細菌モニタにおける主要問題である。 つまり、養鶏めんどりによって媒介された伝染病の場合
、細菌が腸管に寄生した家禽類は発病せず、サルモネラ
菌の保菌庫となってしまう。サルモネラ菌は、家禽類の
卵を通じて広がり、発病してからは食物連鎖によって拡
散してゆく。さらに、サルモネラ菌はその宣誓申告が義
務づけられている。 この菌による発病を防止するため、サルモネラ菌で汚染
された場所、とくに農場を広い範囲にわたって検査する
必要がある。 事実、サルモネラは共生種の大腸菌とプロテウス菌内に
も一般に認められる。 通常サルモネラの検出は、病源となる腸内細菌を区分け
したり、サルモネラのコロニーを検出できる、腸内細菌
を選別するための寒天などの分離媒体を用いて行なわれ
る。理想的な分離媒体は、腸内細菌を成長させ、存在す
る各種細菌種の識別に役立ち、その後に行なわれる各細
菌種のコロニーを識別して、サルモネラのコロニーを検
出スる作業を可能とするものでなくてはならない。 しかし、腸内細菌を分離するための従来技術による分離
媒体は、サルモネラの検出にはあまり役立たない。事実
、プロテウスミラビリス菌型の共生菌がしばじは見つか
ってしまうことがあり、検査結果が誤まってしまう。 上述の寒天の選択媒体の内、ヘクト−エン媒体は一般的
の望ましいが、高価な点が欠点である。 かくして、このヘクト−エン媒体上で、サルモネラ菌は
、中央が黒い青色コロニー（ｌａｃ ５ａｃｓａｌ
＋ ）（２ｓ＋ ）を形成し、同じ性質をもつミラビリ
ス菌も同様に、中央が黒い青いコロニーを形成する。し
たがって、かようなプラスの誤結果が得られるので、さ
らに作業が必要となり、費用もかかる。つまり、疑わし
い幾つかのコロニーをつづいて検査しなければならない
。もしかようなプラスの誤結果がなければ、手早く読み
とっても診断上のエラーをすることもない。 さらに、サルモネラについてのかような不確実さの故に
、コロニーの着色状態を容易に識別する場合に比べて、
より高度の且つ質の高い処置方法を用いてコロニーの再
分離と生化学的な差別作業をつづいて行う必要が生じる
。最後に、上記生化学的差別処理作業を行うことにより
、菌の識別が遅れ、作業全体が時間のかかるものとなる
。 【発明の開示】 本発明の目的は、コロニーを特定的に着色することによ
り、あいまいさの残らない方法でサルモネラ菌コロニー
を検出できる、上記欠点をもたない分離媒体を提供する
にある。事実、本発明は、プロテウスを誤ったプラスと
して可視的にしてしまう、従来技術によるサルモネラの
マーキング特性Ｈ２Ｓ” ｌａｅ −ｓａｃ −５ａｌ
−は用いない。 より特定的には、本発明はサルモネラ菌を確認するため
の分離媒体に関し、この媒体において、サルモネラによ
って代謝されるポリオールと、酸性化に反応するｐｉ指
示薬とが、ペプトンを含む培養サポートに添加される。 本発明の特定の具体例によると、サルモネラによって代
謝可能のこのポリオールは、くだけ易い物質に吸収され
る。 使用される物質は小さいサイズの粒状体、つまり約１０
０μ以下の粒子からできていて、上記ポリオールを確実
に吸収し、かくして得られた粉状体の流動性がよいもの
が望ましい。 この粉砕された物質は望ましくは、微細シリカ、特定的
にはシリカゲルがよい。しかし、セルロースなどの他の
種類の物質もまた、採用可能である。 使用されるポリオールのうち、よりくわしくは、エタネ
ジオールのような２〜１０個の炭素原子を含むダイオー
ル、プロパネジオール、ブタネジオール、特に１．２−
プロパネジオールなどのポリオールである。事実、これ
らのダイオールはサルモネラ環によって代謝され、中性
レッドのようなｐＨ指示薬を反応させうる酸性種を作る
。これに対して、大腸菌やプロテウス菌のような共生種
は、この種の反応は起さない。 この媒体は、食品中のサルモネラを検出するのに特に用
いうるが、すべてのサルモネラはこの媒体上で確実な結
果を生じさせる。このプロセスを実行する場合は、より
迅速にサルモネラ環のコロニーを確認しうるコロニー培
養に適した寒天培養媒体を用いるのが望ましい。 腸内細菌の成長を促進させる媒体のうち、たとえばデオ
キシコレートを含む媒体を用いることができる。検出精
度を向上させたい場合は、ベータ・ガラクトシダーゼ基
質を媒体に添加することもできる。上記基質は、ブロモ
クロロインドキシルガラクトシド、ブロモナフチルガラ
クトシド、あるいはハイドロキシキーノリネガラクトシ
ド型の上記基質の色原体基質であり、もし適切であるな
ら、誘導原たとえば１ＰＴＧの存在下において添加する
ことができる。事実、サルモネラ変種はベータガル−な
ので、この基質とは反応しない。 本発明によるポリオールの価は、上記２つの識別特性を
用いる場合、ポリオールが存在してもベータガル はマ
スクされない程度である。これに反し炭水化物の大部分
は、異化抑制により、ベータガル 特性をマスクしうる
。これらの２つの識別特性が色反応によって可視化され
たときは、各種タイプの菌、特にサルモネラ、プロテウ
ス、および大腸菌などが注意深い処置によって識別され
うる。かくして、ｐＨ指示薬としてのすんだ中性赤およ
びベータ・ガラクトシダーゼ基質としてのメガルによっ
て、サルモネラを大腸菌、シトロバクチル、プロテウス
から、これらを含む混合液内において識別することがで
きる。このメカニズムは以下の記載から明らかになる。 言うまでもなく、この種の媒体の場合は、他の種類の負
のサルモネラ特性、たとえば、ベータグルー−を用いる
こともできる。その場合は、ベータ・グルコシダーゼ基
が用いられる。 同様に、とくにシート状の寒天媒体を用いる代りに、紙
製の柱状サポートのような他の種類のサポートを用いて
、媒体それ自体内で検出することもできる。 本発明はまた、サルモネラ環の認識を行うためのプロセ
スにも関する。このプロセスにおいて試料は本発明によ
る媒体上で培養され、媒体の酸性化に対するｐＨ指示薬
の反応によってサルモネルの存在が検知される。 ［実施例］ 非限定的試料として以下に示す例により、本発明の他の
利点と特徴が明らかになる。 例１ サルモネラ環を検知できる分離媒体 以下の組成を有する媒体が生産される。 成 分 グラム／水土リットル１．２
−プロパネジオール ５ペプトン
５イースト抽出
２デオキシコレート
１ブロモクロロインドキシル ガラクトシド ０．１中性赤
０．０３寒天
１５各種タイプのエンテロバ
クテリアでこの媒体を４８時間培養し、その後接種する
ことによって次の結果が得られた。 サルモネラは、赤コロニーを示し、大腸菌は青・緑コロ
ニーを示し、シトロバクチルは青・紫コロニーを示し、
プロテウスは無色のコロニーを示した。 例２ 本発明による分離媒体により、ポリオールは粉末物質に
吸収される。 使用された混合物は以下の組成を示す。 成 分 グラム／水工リットル１．２−
プロパネジオール／シリカゲル（１０ｇ ／ｌｅｇ ）
２Ｂペプト
ン ５イースト抽出
２デオキシコレート
１ブロモクロロインドキシルガラクトシ
ド ０．１中性赤 ０
．０３寒天 １５各
種タイプのエンテロバクテリアでこの媒体を４８時間培
養し、その後接触することにより次の結果が得られた。 この結果は、例１の目的である培養媒体において観察さ
れたものに類似する。すなわち、サルモネラは赤コロニ
ーを示し、大腸菌は青・緑コロニーを示し、シトロバク
チルは青・紫コロニーを示し、プロテウスは無色コロニ
ーを示した。
Claims (13)
- （１）サルモネラ菌によって代謝されうるポリオールと
、酸性化に対して反応するｐＨ指示薬が、ペプトンを含
む培養サポートに添加されるようになされた、サルモネ
ラ菌識別用の分離媒体。 - （２）サルモネラ菌によって代謝されうるポリオールが
粉末物質に吸収されることを特徴とする請求項１記載の
サルモネラ菌識別用の分離媒体。 - （３）該粉末物質の粒子サイズは約１００ミクロン以下
であることを特徴とする請求項２記載のサルモネラ菌識
別用の分離媒体。 - （４）該粉末物質は望ましくは微粉シリカ、シリカゲル
、セルロースのいずれであることを特徴とする請求項２
あるいは３記載のサルモネラ菌識別用の分離媒体。 - （５）該ポリオールは２から１０の炭素原子を含むダイ
オールであることを特徴とする請求項１乃至４のいずれ
か１項記載のサルモネラ菌識別用の分離媒体。 - （６）ポリオールは望ましくはエタネジオール、ブタネ
ジオール、プロパネジオールのいずれかであることを特
徴とする請求項５記載のサルモネラ菌識別用の分離媒体
。 - （７）選択されたポリオールが１，２プロパネジオール
であることを特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項
記載のサルモネラ菌識別用の分離媒体。 - （８）ｐＨ指示薬は中性赤であることを特徴とする請求
項１乃至７のいずれか１項記載のサルモネラ菌識別用の
分離媒体。 - （９）培養サポートはコロニーの培養に適した寒天媒体
であることを特徴とする請求項１乃至８のいずれか１項
記載のサルモネラ菌識別用の分離媒体。 - （１０）該媒体はデオキシコレートも含むことを特徴と
する請求項１乃至９のいずれか１項記載のサルモネラ菌
識別用の分離媒体。 - （１１）該媒体は発色性のベータ・ガラクトシダーゼ基
質も含むことを特徴とする請求項１乃至１０のいずれか
１項記載のサルモネラ菌識別用の分離媒体。 - （１２）該媒体はイソプロピル・ベータＤ・４オガル・
アクトピラノシデ（１ＰＴＧ）も含むことを特徴とする
請求項１乃至１０のいずれか１項記載のサルモネラ菌識
別用の分離媒体。 - （１３）請求項１乃至１２のいずれか１項記載の媒体上
で試料を培養し、該媒体の酸性化に対するｐＨ指示薬の
反応によってサルモネラ菌の存在を決める各段階より成
る、 試料中のサルモネラ菌の存在を識別するための方法。
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