JPH0361486A - 細胞間粘着分子―２およびその結合リガンド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 皇栗±坐剋里立互 本発明は、リンパ球の群が細胞基質を認識しそれに付着
して炎症部位に移動し炎症反応生細胞と相互作用する過
程に関与する細胞間粘着分子−２（“Ｉ　ＣＡＭ−２”
）に関する０本発明はさらにＩＣＡＭ−２細胞間粘着分
子に結合し得るリガンド分子、該細胞間粘着分子の利用
および該リガンド分子に関する。

丈来技歪 白血球はホストをバクテリアまたはウィルスのような外
敵に対して適切に防御するために細胞基質に付着し得な
ければならない。防御システムの優れた見解はＥｉｓｅ
ｎ、　Ｈ，７４，により′″敗址吐脛蝕Ｕ第３版、ペン
シルバニア州フィラデルフィア、Ｈａｒｐｅｒ　＆　Ｒ
ｏｗ社刊、（１９８０）、２９０−２９５および３８１
−４１８”に与えられている。白血球は内皮細胞に結合
できて循環系から進行中の炎症部位に移動できなければ
ならない。さらに、白血球は抗原提供細胞に付着して正
常な特異的免疫応答を起こし得るものでなければならず
、さらに、リンパ球は、適当なターゲット細胞に付着し
てウィルス感染または腫瘍細胞の分解を起こし得るもの
でなければならない。

最近、そのような付着の媒介に関与する白血球表面分子
がハイブリドーマ技術を用いて同定された。要するに、
ヒトＴ−細胞（Ｄａｖｉｇｎｏｎ＋　Ｄ、等、Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＩＪＳＡ＋　
　７８　：　４５３５−４５３９　（１９８１））とマ
ウスひ臓細胞（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、等、Ｉ！ｕｒ
、　Ｊ、　Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１．＋　９　：３０１−３０
６　（１９７９））に対して向けられた各モノクローナ
ル抗体は白血球表面に結合し、上述の付着関連機能を抑
制しているものと同定された（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ
、等、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、　　４４　：　２６６０
−２６６３　（１９８５））、これらの抗体により同定
された分子はＭａｃ−１およびリンパ球機能会合抗原１
　　（ＬＦＡ−１）と称される。Ｍａｃ−１はマクロフ
ァージ、顆粒球および顆粒状大リンパ球上に見い出され
るヘテロダイマーである。ＬＦＡ−１は大部分のリンパ
球に見い出されるヘテロダイマーであるＣＳｐｒｉｎｇ
ｅｒ、　Ｔ、　Ａ、等、Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１．　Ｒｅｖ、
。

６８：１１１−１３５　　（１９８２））。これらの２
つの分子、および第３分子ｐ１５０．９５　（これはＭ
ａｃ−１と同様な組織分布を有する）は細胞粘着におい
である役割を発揮する（Ｋｅｉｚｅｒ、　Ｇ、等、Ｂｕ
ｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、＋土５：１１４２−１１
４７（１９８５））。

上記の白血球分子は“ＣＤ−１８族′″糖たん白質と呼
ばれる、糖たん白質の関連群の構成員であることが見い
出された（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｔｄ、　Ｆ、等、
Ｊ、　Ｅｘ　ｅｒ、　Ｍｅｄ、、　　１５８　：　１７
８５−１８０３（１９８３）　　；Ｋｅｉｚｅｒ、　Ｇ
、　Ｄ、等、ｐｕｒ、　Ｊ、ｌｍ５ｕｎｏ１．。

１５：１１４２−１１４７　　（１９８５））、この垢
たん白質群は１つのアルファー鎖と１つのベータ鎖を有
するヘテロダイマーからなっている。抗原の各々のアル
ファー鎖は互いに異なるけれども、ベータ鎖はかなり一
定に保たれていることが判明している（Ｓａｎｃｈｅｚ
−Ｍａｄｒｉｄ、　Ｆ、等、Ｊ、　Ｅｘ　ｅｒ、　Ｍｅ
ｄ。

１５８　二　１７８５−１８０３　　（１９８３）Ｌ；
ｅｌｆたん白質群のベータ鎖（しばしばＣＤ１８”と称
される）は９５ＫＤの分子量を有することが見い出され
、一方アルファー鎖は１５０ＫＤ−１８０ＫＤで変化す
ることが見い出された（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｔ、等、
Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、＋土４　：　２６６０−２６６３
　（１９８５））。

膜たん白質のアルファサブユニットはベータサブユニッ
トの有する広い相同性を共有していないけれども、糖た
ん白質のアルファーサブユニットの近似分析は両者の間
に実質的な類似性があることを示している。ＬＦＡ−１
関連糖たん色質のアルファーおよびベータサブユニット
間の類似性の検討は５ａｎｃｈｅｚ　Ｍａｄｒｉｄ、　
Ｐ、等によりなされている（Ｊ、　Ｅｘ　ｅｒ、　　ｅ
ｄ、、、　　１５８　：　５８６　６０２（１９８３）
　　；Ｊ、　Ｅｘｅｒ、　Ｍｅｄ、＋　　１８５　：１
７８５−１８０３　　（１９８３））。

白血球表面上の上記粘着たん白質群のいずれの１員の正
常量をも表現できない１群の人々の存在が確認されてい
る（Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、　Ｃ，等、Ｆｅｄ。

Ｐｒｏｃｌ、４４：２６７１−２６７７　（１９８５）
；Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、　Ｃ，等、Ｊ、　Ｉｎｆｅ
ｃｔ、　Ｄｉｓ、、　１５２　：６６８　６８９　（１
９８５））。これらの患者からのリンパ球は、分子のＣ
Ｄ−１８族が抗体により中和されている健常者に類似す
るインビトロ欠陥を示していた。さらにまた、上記の患
者は、その細胞の細胞基質への粘着能力がないことによ
り、正常な免疫応答を備えることができない（Ａｎｄｅ
ｒｓｏｒ＋＋Ｄ、　Ｃ，等、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、　
　４４　：　２６７１−２６７７（１９８５）　　；　
Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、　Ｃ，等、Ｊ、　Ｉｎｆｅｃ
ｔ。

Ｄｉｓ、、１５２：６６８−６８９　（１９８５））。

これらのデータは、リンパ球がＣＤ−１８族の機能的粘
着分子の欠如により正常な形で付着できない場合には、
免疫反応が緩和されることを示している。

即ち、要約すれば、動物の健康および生命力を維持する
リンパ球の能力は、リンパ球が他の細胞（内皮細胞のよ
うな）に粘着できることを必要とする。この粘着はリン
パ球の細胞表面上に存在する特異的レセプター分子を含
む細胞−細胞接触を必要とすることが判明している。こ
れらのレセプターはリンパ球が他のリンパ球または内皮
および他の非血管細胞に粘着することを可能する。細胞
表面レセプター分子は相互に密接に関連することが判明
している。リンパ球が上記の細胞表面レセプター分子を
欠損している巳トは慢性で再発生の感染症、および不完
全抗体応答を含む他の臨床的症状を示す。

リンパ球粘着は、外来組織が認識され拒絶される過程に
関与しているので、この過程の理解は臓器移植、組織移
植、アレルギーおよび腫瘍学の分野において著しく価値
がある。

又貝見立麗 本発明は細胞間粘着分子−２（ＩＣＡＭ−２）およびそ
の機能性誘導体に関する。本発明はさらにＩ　ＣＡＭ−
２の機能を抑制し得る抗体および抗体フラグメント、お
よび他のＩ　ＣＡＭ−２機能の阻害剤に関する。本発明
はさらに上記分子すべての診断および治療上の利用にも
関する。

さらに詳細には、本発明は実質的に天然の異物を含まな
い細胞間粘着分子Ｉ　ＣＡＭ−２またはその機能性誘導
体を包含する。

本発明は、更に以下に挙げるものからなる群から選ばれ
る少なくとも一つのポリペプチドを含むＩＣＡＭ−２に
も係る。

（ａ）　−５−Ｓ−Ｆ−Ｇ−Ｙ−Ｒ−Ｔ−Ｌ−Ｔ−Ｖ−
＾−Ｌ−。

（ｂ）　−Ｄ−Ｅ−に−Ｖ−Ｆ−Ｅ−Ｖ−Ｈ−Ｖ−Ｒ−
Ｐ−に−。

（Ｃ）　−Ｇ−５−Ｌ−Ｅ−Ｖ−Ｎ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｔ−
Ｃ−Ｎ−。

（ｄ）　−Ｈ−Ｙ−Ｌ−Ｖ−５−Ｎ−１−Ｓ−Ｈ−Ｔ−
Ｄ−Ｖ−。

（ｅ）　−５−Ｍ−Ｎ−５−Ｎ−Ｖ−５−Ｖ４−Ｑ−Ｐ
−Ｐ−ＨＣｆ＞　−Ｆ−Ｔ−１−Ｅ−Ｃ−Ｒ−Ｖ−Ｐ−
Ｔ−Ｖ−Ｅ−Ｐ−。

（ｇ）　−Ｇ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｌ−Ｈ−Ｙ−Ｅ−Ｔ−Ｆ−
Ｇ−に−；（ｈ）　−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｐ−Ｎ−Ｓ−Ｔ−Ａ
−Ｄ−Ｒ−Ｅ−Ｄ−。

（ｉ）　−Ｈ−Ｒ−Ｎ−Ｐ−Ｓ−Ｃ−Ｌ−Ａ−Ｖ−Ｌ−
Ｄ−Ｌ−；（ｊ）　−Ｍ−Ｖ−１−１−Ｖ−Ｔ−Ｖ−Ｖ
−５−Ｖ−Ｌ−Ｌ−。

（ｋ）　−５−Ｌ−Ｆ−Ｖ−Ｔ−３−Ｖ−Ｌ−Ｌ−Ｃ−
Ｆ−Ｉ−、および（１）　−Ｍ−Ｇ−Ｔ−Ｙ−Ｇ−Ｖ−
Ｒ−Ａ−Ａ−Ｗ−Ｒ−Ｒ−。

本発明は、またＩ　ＣＡＭ−２またはその機能性誘導体
をコードもしくは表現し得る組換えまたは合ｔｃＤＮＡ
をも提供する。

本発明は更に、Ｉ　ＣＡＭ−２およびその機能性誘導体
からなる群から選ばれる分子に結合し得る抗体、特にモ
ノクローナル抗体をも提供する。

本発明は、また上記モノクローナル抗体を産生し得るハ
イブリドーマ細胞を提供する。

本発明はＩ　ＣＡＭ−２またはその機能性誘導体と結合
し得る抗体を産生ずる所定のハイブリドーマ細胞の樹立
法をも包含し、該方法は以下の工程を含む。

（ａ）ＩＣＡＭ−２表現細胞、Ｉ　ＣＡＭ−２表現細胞
の膜、ＩＣＡＭ−２、担体に結合したＩＣＡＭ−＝２、
ＩＣＡＭ−２のペプチドフラグメント、および担体に結
合したＩ　ＣＡＭ−２のペプチドフラグメントからなる
群から選ばれる免疫原で動物を免疫し、 （ｂ）該動物の肺細胞とミエローマ細胞系とを融合し、 （ｃ）該融合した肺細胞およびごエローマ細胞に抗体分
泌ハイブリドーマ細胞を形成せしめ、および （ｄ）該ハイブリドーマ細胞をスクリーニングして、Ｉ
　ＣＡＭ−２と結合し得る抗体を産生できる所定のハイ
プリドーマ細胞を得る。

本発明は、また哺乳類罹患体における特異的防御システ
ムの応答に起因する炎症の治療法をも提供する。この方
法は、かかる治療を要する罹患体に、該炎症を抑制する
に十分な量の抗炎症剤を投与することを含み、該抗炎症
剤がＩ　ＣＡＭ−２に結合し得る抗体、ＩＣＡＭ−２に
結合し得る抗体フラグメント、Ｉ　ＣＡＭ−２、ＩＣＡ
Ｍ−２の機能性誘導体、Ｉ　ＣＡＭ−１以外のＩＣＡＭ
−２の非−ＩｇアンタゴニストまたはＣＤ−１８族分子
の構成員からなる群から選ばれることを特徴とする。

また、本発明は移動のためにＣＤ−１８（特にＬＦＡ−
１）の−員をもつ造血性腫瘍細胞の転移を印材する方法
をも含み、該方法はこのような治療を必要とする患者に
該転移を抑制するのに十分な量の薬剤を投与することを
含み、該薬剤がＩＣＡＭ−２と結合し得る抗体、ＩＣＡ
Ｍ−２と結合し得る毒素−誘発性（ｔｏｘｉｎ−ｄｅｒ
ｉｖａｔｉｚｅｄ）抗体、ＩＣＡＭ−２と結合し得る抗
体フラグメント、Ｉ　ＣＡＭ−２と結合し得る毒素−誘
発性抗体フラグメント、Ｉ　ＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−２
の機能性誘導体、毒素−誘発性Ｉ　ＣＡＭ−２、および
毒素−誘発性ＩＣＡＭ−２の機能性誘導体、およびＩ　
ＣＡＭ−１以外のＩ　ＣＡＭ−２の非−Ｉｇアンタゴニ
ストまたはＣＤ−１８族分子の構成員からなる群から選
ばれることを特徴とする。

また、本発明はＩ　ＣＡＭ−２表現腫瘍細胞の成長を抑
制する方法をも含み、該方法はこのような治療を要する
患者に、該抑制に十分な量の薬剤を投与することを含み
、該薬剤がＩ　ＣＡＭ−２と結合し得る抗体、Ｉ　ＣＡ
Ｍ−２と結合し得る毒素−誘発性抗体、Ｉ　ＣＡＭ−２
と結合し得る抗体フラグメント、Ｉ　ＣＡＭ−２と結合
し得る毒素−誘発性抗体フラグメント、Ｉ　ＣＡＭ−２
、ＩＣＡＭ２の機能性誘導体、Ｉ　ＣＡＭ−１以外の、
ＩＣＡＭ　−−２の非−ＩｇアンタゴニストまたはＣＤ
−１８族分子の構成員、毒素−誘発性のＣＤ−１８族分
子の構成員、および毒素−誘発性の、ＣＤ−１８族分子
の構成員の機能性誘導体からなる群から選ばれることを
特徴とする特 本発明は、また以下の工程を含む、ＩＣＡＭ−２表現細
胞の存在を検出する方法をも提供する。

（ａ）ＩＣＡＭ−２ｍＲＮＡにハイブリッド化し得る核
酸分子の存在下で該細胞またはその抽出物をインキュベ
ートする工程、および （ｂ）該核酸分子が、該細胞またはその抽出物中に存在
する相補的核酸分子にハイプリントされたか否かを決定
する工程。

本発明は、更に以下の成分を含む薬理組成物をも提供す
る。

（ａ）ＩＣＡＭ−２と結合し得る抗体、Ｉ　ＣＡＭ−２
と結合し得る抗体フラグメント、Ｉ　ＣＡＭ−２、Ｉ　
ＣＡＭ−２の機能性誘導体、およびＩＣＡＭ−１以外の
Ｉ　ＣＡＭ−２の非−ＩｇアンタゴニストまたはＣＤ−
１８族分子の構成員からなる群から選ばれる抗−炎症剤
単独、または（ｂ）免疫抑制剤との組合せ。

本発明の第１の局面はＬＦＡ−１に対する天然結合リガ
ンドの発見に関連する。ｔａ胞粘着の過程に関与するＣ
Ｄ−１８族分子などの分子は“粘着分子（ａｄｈｅｓｉ
ｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）　”と呼ぶ。

Ｉ　　ＬＦＡ−１およびＩＣＡＭ−１ 白息球粘着分子ＬＦＡ−１は広範囲のリンパ球、単球、
ＮＫ細胞および顆粒球の免疫および炎症における他の細
胞との相互作用を媒介する。（ＳｐｒｉｎｇｅｒＴ、　
Ａ、等、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、＋　　
１９８　Ｌ　　５゜ｐｐ、　　２２３−２５２）。

ＬＦＡ−１は細胞間粘着分子１　　（ＩＣＡＭ−１）に
対するレセプタであり、表面分子は本質的にいくつかの
組織上で表現され、かつ他の炎症のある組織に誘起され
る（Ｍａｒｌｆｎ、　Ｓ、　Ｄ、等、Ｃｅ１ｌ。

１９８７．５１．ｐｐ、８１３−８１９　；Ｄｕｓｔｉ
ｎ。

Ｍ、　Ｌ、等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１９８６．
　１３７．　ｐｐ−２４５−２５４、ロｕｓｔＬｎ＋　
　Ｍ、　Ｌ、　等、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

Ｔｏｄａｙ、１９８８．　９．　ＰＩ）、　　２１３−
２１５　；米国特許出願第０７１０１９，４４０　（１
９８７年２月２６日付出願）および同第０７／２５０，
４４６（１９８８年９月２８日付出願）；これら特許出
願を本発明の参考文献とする〉。

ＬＦＡ−１は他の細胞と、抗原特異的および抗原独立細
胞毒素性Ｔ細胞、ヘルバＴ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球およ
び単球との相互作用において機能する（Ｓｐｒｉｒ＋ｇ
ｅｒ、　Ｔ、　Ａ、等＋Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｍａｉ
ｕｎｏｌ、。

１９８７、　５．　ｐ９．　２２３−２５２　；Ｋ１５
ｈｉ＋ｍｏｔｏ。

Ｔ、　Ｋ、等、Ａｄｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、＋　（１９
８８＋投稿中））＃Ｌ　Ｆ　Ａ　−１は非共有結合的に
結合した１８０および９５ＫＤのαおよびβ糖タンパク
質サブユニットをもつ白血球インテグリン（Ｉｅｕｋｏ
ｅｙｔｅ　ｉｎｔｅｇｒｉｎ）である。

Ｉ　ＣＡＭ−１は細胞の型の違いによって７６〜１１４
ＫＤで質量が変動する一本鎖糖タンパクであり、かつ５
個のＣ−状ドメインをもつＩｇスーパーファミリーの一
員である（Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｍ、　Ｌ、等、Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、　Ｔｏｄａｙ、　　１９８８．　９＋　ｐｐ、　
　２１３−２１５　；　５ｔａｕｎｔｏｎ、　ｏ、　Ｅ
、等、Ｃｅ１１．　１９８８゜５２、　ｐｐ、　９２５
−９３３　；Ｓｉｍｍｏｎｓ、　Ｄ、等、Ｎａｔｕｒｅ
、１９８８，３３１．ｐｐ、６２４　６２７）Ｉ　ＣＡ
Ｍ−１はＩＦＮ−γ、ＴＮＦおよびＩＬ−１を含むサイ
トカインにより様々な型の細胞上で高い誘発性を示す（
Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｍ、　Ｌ、等、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

↑ｏｄａｙ、１９８８．９．　ｐｐ、　２１３−２１５
）　、上皮細胞、内皮細胞および繊維芽細胞上でのＩＣ
ＡＭ−１の誘発はリンパ球のＬＦＡ−１依存性粘着を媒
介する（Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｌ　Ｌ、等、Ｊ、　Ｉｓｍｕ
ｎｏｌ、＋１９８６゜１３７、　ｐｐ２４５−２５４　
；Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｍ、　Ｌ、等、Ｊ、　ＩＩ！ｘｐ、
Ｍｅｄ、、　　１９８８．　１６７、　ｐｐ、　　１３
２３−１３４０）。付着はＬＦＡ−ＩＭＡｂでリンパ球
を前処理もしくはＩ　ＣＡＭ−ＩＭＡｂで他の細胞を前
処理することにより阻止される（Ｄｕｓｔｉｎ。

Ｈｏ　し、　等、Ｊ、　　Ｉｎｍｕｎｏｌ、、１　９　
８　６．　　１　３　７．　　ｐｐ。

２４５−２５４　；ＤｕｓＬｉｎ、　Ｍ、　Ｌ、等、Ｊ
、　Ｃｅ１ｌＢｉｏ１．．１９８８．１０？、ｐｐ、３
２１−３３１　；Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｍ、　Ｌ、等、Ｊ、
　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、　　１９８８　。

１６７、ｐｐ、１３２３−１３４０）。人工膜またはベ
トリ皿上での精製Ｉ　ＣＡＭ−１による等価な結果はＬ
ＦＡ−１およびＩ　ＣＡＭ−１が相互にレセプタである
ことを証明している（Ｍａｒｌｉｎ、　ｓ、　Ｄ。

等、Ｃｅ１ｌ、　　１９８７．　５１．　ｐｐ、　　８
１３−８１９；Ｍａｋｇｏｂａ、　Ｍ、　Ｗ、等、Ｎａ
ｔｕｒｅ、　　１９８８．　３３１゜ｐｐ、８６−８８
）。明確化のために、これらをここでは夫々“レセプタ
”および“リガンド”と呼ぶことにする。Ｉ　ＣＡＭ−
１については更に米国特許出願第０７１０４５，９６３
　、０７／１１５，７９８゜０７／１５５，９４３　；
　０７／１８９，８１５または０７／２５０．４４６に
与えられており、これらを本発明の参考文献とする。

ｎ　　ＩＣＡＭ−２ Ｉ　ＣＡＭ−１とは異る第２のＬＦＡ−１リガンドが提
示されている（Ｒｏｔｈｌｅｔｎ＋　Ｒ−等、Ｊ、Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ、。

１９８６．１３７．ｐｐ、１２７０−１２７４；Ｍａｋ
ｇｏｂａ、　Ｍ、　Ｗ、等Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ
ｏｆ、、　１９８８　。

工８．　ｐｐ、　６３７−６４０　；Ｄｕｓｔｉｎ、　
Ｍ、　Ｌ、等、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、１９Ｂ８
．　１０７．　ｐｐ、　　３２１−３３１）。本発明は
この第２のリガンド（“ＩＣＡＭ−２”と命名された“
細胞間粘着分子−２”）に関する。

Ｉ　ＣＡＭ−２は細胞内分布およびサイトカイニン誘発
性に乏しい点でＩ　ＣＡＭ−１と異っている。

Ｉ　ＣＡＭ−２は２つのＩｇ−様ドメインをもつ接合膜
タンパクであり、一方Ｉ　ＣＡＭ−１は５つのＩｇ−様
ドメインをもつ（Ｓｔａｕｎｔｏｎ、　ｏ、　Ｂ、等、
Ｃｅ１ｌ、１９８Ｂ、５２．ｊ）ｐ、９２５−９３３；
Ｓｉｍｍｏｎｓ、　Ｄ、等、Ｎａｔｕｒｅ＋　　１９８
８．　３３１．　ｐｐ。

６２４−６２７）。注目すべきことに、！　ＣＡＭ−２
は、Ｉ　ＣＡＭ−１またはＩ　ＣＡＭ−２のいずれかが
Ｉｇスス−−ファミリーの他の構成員と関連している以
上にずっとＩ　ＣＡＭ−１の２つの最もＮ−末端側のド
メインに密接に関係しており（３４％の同一性〉、この
ことは同一のインテグリン族レセプタに結合するＩｇ−
様リガントのサブフナミリであることを証拠付けている
。

ＩＩ　　ＩＣＡＭ−２のｃＤＮＡクローニング種々の手
順のいずれもＩＣＡＭ−２遺伝子のクローニングに用い
ることができる。このような方法の一つは、ＩＣＡＭ−
２遺伝子を含むインサートの存在に対して、ＩＣＡＭ−
２表現細胞由来のｃＤＮＡインサートのシャトルベクタ
ーライブラリーの解析を必要とする。このような解析は
、細胞を該ベクタで移入し、次いでＩ　ＣＡＭ−２の表
現について検定することにより行うことができる。

Ｉ　ＣＡＭ−２ｃＤＮＡは好ましくはアルフォムシード
（Ａｒｕｆｆｏ　ａｎｄ　５ｅｅｄ）の方法（Ｓｅｅｄ
、　Ｂ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓ
ｃｉ、　ＵＳＡ、　　１９８７．　８土。

ｐｐ、３３６５−３３６９）の新規な改良法を付着分子
のりガント同定に用いる際に同定される。この方法にお
いて、ｃＤＮＡライブラリーは、ＩＣＡＭ＝２を表現す
る細胞（例えば内皮細胞またはＲａｍｏｓ。

ＢＢＮ　　Ｂリンパ芽球様、Ｕ９３７単球または５ＫＷ
３リンパ芽球様細胞系）から調製される。

好ましくは、ｃＤＮＡライブラリーは内皮細胞から調製
される。このライブラリーは正常にＩＣＡＭ−２を表現
しない細胞（ＣＯ３細胞など）をトランスフェクション
するのに用いられる。この移入細胞は予めＬＦＡ−１で
被覆されたペトリ皿に導入される。Ｉ　ＣＡＭ−１また
はＩ　ＣＡＭ−２のいずれかをコードする配列でトラン
スフェクションされかつ細胞表面でこれらリガンドのい
ずれかを表現するＣＯ３細胞は該ペトリ皿上のＬＦＡ−
１に付着する。非付着細胞を洗い流し、次に付着細胞を
ペトリ皿から取出し、培養する。次に、これら細胞中の
組換えＩＣＡＭ−１またはＩ　ＣＡＭ−２表現配列を取
出し、かつ配列決定してＩＣＡＭ−１またはＩ　ＣＡＭ
−２をコードするか否かを決定する。

上記方法の好ましいＬｉ様において、抗−ＩＣＡＭ−１
抗体を該ベトリ皿に加えて、Ｉ　ＣＡＭ−１表現細胞の
付着を防止する。ＩＣＡＭ−２移入Ｃ０５ＩＩ胞のＬＦ
Ａ−１への結合はＥＤＴＡおよび抗−ＬＦＡ−１モノク
ロ一ナル抗体（“ＭＡｂ”）によって阻害されるが抗−
ＩＣＡＭ−ＩＭＡｂによっては阻害されない、かくして
、このＢ様においてはＩ　ＣＡＭ−１表現細胞はＩ　Ｃ
ＡＭ−１を介してペトリ皿に付着することができず、従
って他の非付着細胞のすべてと共に殆ど洗い流されてし
まう、結局、Ｉ　ＣＡＭ−２表現細胞のみが該ペトリ皿
に付着できる。

かくして、ｃＤＮＡクローンは、ＣＯＳ細胞中での表現
によって、かつ予めプラスチック製ペトリ皿に結合され
ていた機能的に活性な精製ＬＦＡ−ｌを用いた、リガン
ド担持ｃｏｓ、１胞のパンニングによってスクリーニン
グされる。バンニングの後、非付着細胞はＩＣＡＭ−２
”細胞を含まず、一方ＥＤＴＡによってＬＦＡ−１被覆
プラスチツクから遊離する付着細胞は殆ど完全にＩ　Ｃ
ＡＭ−２３である。Ｉ　ＣＡＭ−１”細胞のＬＦＡ−１
被覆プラスチツクへの付着はＲＲ１／１抗−ＩＣＡＭ　
−ＩＭＡｂにより阻害できる。

こうして、このＩ　ＣＡＭ−２のｃＤＮＡクローニング
法によれば、ｃＤＮＡライブラリーが内皮細胞から調製
され、このことは適当なプラスミド、例えばプラスミド
ベクタＣＤＭ８を用いるＬＦＡ−１依存付着のＩ　ＣＡ
Ｍ−１依存およびＩＣＡＭ−１独立成分両者の存在を明
らかにする（１）ｕｓｔｉｎ＋Ｍ、　ｌ７０等、Ｊ、　
Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、　１９８８．　１０　？、　ｐ
ｐ。

３２１−３３１）。移入ＣＯＳ細胞は、ＩＣＡＭｌｃＤ
ＮＡの単離の可能性を減じる目的で存在する抗−Ｉ　Ｃ
ＡＭ−ＩＭＡｂと共にＬＦＡ−１被覆ペトリ皿中でイン
キヱベートされる。付着細胞をＥＤＴＡで溶出し、プラ
スミドを単離し、Ｅ。

旦１中で増殖する。トランスフェクション、付着および
プラスミド単離の約３回の繰返し並びに−回のサイズ分
画の後、プラスミドは制限エンドヌクレアーゼ消化によ
り解析できる。トランスフェクションによりＣＯ８細胞
中に導入した場合、１、Ｏｋｂより大きなインサートを
もつプラスミドの約１／３がＬＦＡ−１への付着を生じ
た。

また、Ｉ　ＣＡＭ−２のｃＤＮＡクローンは遺伝子コー
ド（Ｗａｔｓｏｎ、　Ｊ、　Ｄ、、　Ｍｅｎｌｏ　Ｐａ
ｒｋ＋　ＣＡ＋１９７７ｐｐ、　　３５６−３５７）を
用いて得ることができ、Ｉ　ＣＡＭ−２タンパクをコー
ドし得るポリヌクレオチドの配列決定が可能である。

ｒ　ＣＡＭ−２ｃＤＮＡのクローンは、また該Ｉ　ＣＡ
Ｍ−２タンパクのペプチドフラグメントのアミノ酸配列
を同定し、次いで、該遺伝子コードを用いて該ＩＣＡＭ
−２ペプチドをコードし得るオリゴヌクレオチドプロー
ブ分子を構築することによっても得ることができる０次
に、このプローブを用いて、Ｉ　ＣＡＭ−２タンパクを
コードするｃＤＮＡライブラリーＣＩＣＡＭ−２表現細
胞のｃＤＮＡから調製）のこれら構成員を（ハイブリダ
イゼーションを介して）検出する。

上記の技術あるいはこれらに準じた技術は、ヒトアルデ
ヒドデヒドロゲナーゼ（Ｈｓｕ、　Ｌ、　Ｃ，等、Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｉ、　ＵＳＡ＋
　　１９８５１　８２゜ｐｐ、３７７１−３７７５）、
フィブロネクチン（Ｓｕｚｕｋｉ＋Ｓ１等、Ｅｕｒ、　
Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　Ｏｒｇａｎ、　Ｊ、、１９８５
＋土、ｐｐ、２５１９−２５２４）　、ヒトエストロゲ
ンレセプタ遺伝子（Ｗａｉｔｅｒ、　ｐ、等、Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ。

八ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ、　　　１９８５．
　　８２．　　ｐＩ）、　　　７８８９−７８９３）、
組織型プラスミノーゲン活性化因子（Ｐｅｎｎｉｃａ、
　Ｄ、等、Ｎａｔｕｒｅ、　　１９８３．　３０　Ｌｐ
ｐ、　　２１４−２２１）およびヒト胎盤アルカリホス
ファターゼｃ　ＤＮＡ　（Ｋａｍ、　Ｗ、等、Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ。

Ａｃｅｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、１９８５．　８２．　ｐ
ｐ、　　８７１５−８７１９）の遺伝子を首尾よくクロ
ーニングできる。

更に別のＩ　ＣＡＭ−２遺伝子のクローニング法では、
表現ベクタのライブラリーは、ＩＣＡＭ−２を表現でき
る細胞からのＤＮＡ、より好ましくはｃＤＮＡを表現ベ
クタ中にクローニングすることにより調製される。次い
で、このライブラリーを抗＝Ｉ　ＣＡＭ−２抗体に結合
し、かつＩ　ＣＡＭ−２またはそのフラグメントと同一
の酸配列をもつペプチドをコードできるヌクレオチド配
列をもつタンパクを表現できるものについてスクリーニ
ングする。

上記方法のいずれかを用いて得られたクローン化ＩＣＡ
Ｍ−２遺伝子は表現ベクタに機能発現できるように結合
でき、かつバクテリアまたは真核細胞に導入してＩ　Ｃ
ＡＭ−２タンパクを得ることができる。このような処理
法はＭａｎｉａｔｉｓ、　Ｔ、等（上記文献）により記
載され、当分野で周知である。

■０本発明の薬品：ＩＣＡＭ−２およびその機能性誘導
体、アゴニストおよび アンタゴニスト 本発明はＩＣＭＡ−２、その“機能性誘導体”並びにそ
の“アゴニスト”および“アンタゴニスト”を百的とす
る。

Ａ、ＩＣＡＭ−２の機能性誘導体 ＩＣＡＭ−２の“機能性誘導体”はＩＣＡＭ−２の生物
活性に実質的に類似する生物活性（機能並びに構造のい
ずれかもしくは両者）を有する化合物である。用語“機
能性誘導体”とは分子の“フラグメント”変異体”類似
体゛または“化学的誘導体”を含むものとする。

分子、例えばＩＣＡＭ−２の“フラグメント”は該分子
の任意のポリペプチドサブセットを言うものとする。Ｉ
　ＣＡＭ−２活性のあるしかも可溶性（即ち膜結合性の
ない）であるＩ　ＣＡＭ−２のフラグメントは特に好ま
しい。

ＩＣＡＭ−２などの分子の“変異体”とは完全な該分子
またはそのフラグメントのいずれかと構造並びに機能の
点で実質的に類似する分子をいうものとする。

ＩＣＡＭ−２などの分子の“類似体”とは完全な該分子
またはそのフラグメントのいずれかと機能の点で実質的
に類似する分子をいうものとする。

両分子が実質的に類似する構造をもつ場合あるいは両者
が同様な生物活性をもつ場合に、一方の分子が他方の分
子に“実質的に類似”するという。

かくして、２つの分子が同様な活性をもっていれば、こ
れらは変異体であると考える。この用語は、ここでは、
一方の分子の構造が他方中に見出されなくとも、あるい
はアミノ酸残基配列が同等でなくとも使用する。

ここでは、ある分子が通常他の分子の一部をなさない付
随的な化学的部分を含む場合に、該分子を該他の分子の
“化学的誘導体”という。かかる部分は該分子の溶解性
、吸収性、生物学的半減期などを改善できる。これら部
分は、また該分子の毒性を減じ、該分子の望ましからぬ
あらゆる副作用などを排除もしくは減衰できる。このよ
うな作用をになうことのできる部分はＲｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ″ＳＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ
ｓ＋　１９８０に開示されている。

“毒素−誘発性”分子は“化学的誘導体”の特定の組を
構成する。′毒素−誘発性”分子は毒素部分を含む分子
（例えばＩ　ＣＡＭ−２または抗体）である、このよう
な分子の細胞への結合は該毒素部分が該細胞近傍にもた
らされることになり、そのため細胞の死を早める。任意
の適当な毒素部分を用いることができるが、例えばりシ
ン毒素、コレラ毒素、ジフテリア毒素、放射性毒素、膜
−チャンネル−形成毒素などの毒素を用いることが好ま
しい。このような毒素部分と分子とのカップリング手順
は当分野で周知である。

約１００残基までをもつＩＣＡＭ−２の機能性誘導体が
インビトロ台底で有利に調製できる。必要ならば、かか
るフラグメントは、精製または粗製タンパクのターゲッ
トアミノ酸残基を選ばれた側鎖または末端残基と反応性
の有機誘導体形成剤と反応させることにより変性できる
。得られる共有結合性誘導体は生物活性に重要な残基の
同定のために用いることができる。

最も一般的に、システイニル残基をα−ハロアセテート
（および対応するアミン）、例えばクロル酢酸またはク
ロロアセタミドと反応させて、カルボキシメチルまたは
カルボキシアミドメチル誘導体とすることができる。シ
ステイニル残基も、プロモトリフルオロアセトン、α−
ブロモ−β−（５−イミドジイル）プロピオン酸、クロ
ロアセチル燐酸、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ
−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジス
ルフィド、ｐ−クロロメルクリ安息香酸、２−クロロノ
ルクリ−ニトロトロフェノールまたはクロロ−７−二ト
ロベン’／’−２−オー１−サー１゜３−ジアゾールと
の反応により誘導体化される。

ヒスチジル残基からは、ｐＨ５，５〜７．０にてジエチ
ルプロカーボネートとの反応により誘導体が得られる。

というのは、この試薬はヒスチジル側鎖に対して比較的
特異的であるからである。ｐ−ブロモフェナシルプロ稟
ドも使用でき、この反応は、好ましくはｐＨ６，０にて
０．１　Ｍナトリウムカコジレート中で行う。

リジニルおよびアミノ末端残基はコハク酸または他の無
水カルボン酸と反応される。これら試薬での誘導体形成
はリジニル残基の電荷を反転する効果をもつ。α−アミ
ノ−含有残基を誘導するのに適した他の反応体はイミド
エステル、例えばメチルピコリンイミデート、ビリドキ
サル燐酸エステル、ピリドキサル、クロロボロハイドラ
イド、トリニトロベンゼンスルホン酸、０−メチル−イ
スレア、２，４−ペンタンジオン、およびグリオキシレ
ートとのトランスアミナーゼ触媒反応を包含する。

アルギニル残基は−または数種の公知の反応体、特にフ
ェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２
−シクロヘキサンジオン、およびニンヒドリンとの反応
により変性できる。アルギニン残基の誘導体形成は、こ
の反応をアルカリ条件下で行うことを必要とする。とい
うのはグアニジン官能基が高いｐＫａ値をもつからであ
る。更に、これらの試薬はリジン並びにアルギニンε−
アミノ基と反応できる。

チロシル残基自体の特異的な修飾が広範に研究され、特
に芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタン
との反応によるチロシル基へのスペクトル標識の導入に
興味がもたれている。最も一般的に、Ｎ−アセチルイミ
ジゾールおよびテトラニトロメタンが夫々０−アセチル
チロシル種および３−ニトロ誘導体を形成するのに用い
られる。

チロシル基は＋２５１または＋３１１でヨウ素化されて
、ラジオイムノアッセイで用いる標識タンパク（タロラ
ミンＴ法が適している）が調製される。

カルボキシル側鎖（アスパルチルまたはグルタミル）は
カルボジイミド（Ｒ’−Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ’）、例えばｌ
−シクロへキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチ
ル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾ
ニア−４，４−ジメチルペンチル）−カルボジイミドな
どによって選択的に修飾される。更に、アスパルチルお
よびグルクミル残基はアンモニウムイオンとの反応によ
ってアスパラギニルおよびグルクミル残基に転化される
。

二官能性試薬による誘導体形成は、ＩＣＡＭ−２機能性
誘導体化合物を、水不溶性支持マトリクス、またはＩＣ
ＡＭ−２ｍ能性誘導体融合ポリペプチドを開裂して該開
裂ポリペブチ・ドを遊離し回収する方法で用いる表面に
架橋するのに利用される。一般に使われる架橋剤は、例
えば１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエ
タン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシサクシンイ
ミドエステル、例えば４−アジドサリチル酸とのエステ
ル、ホモ三官能性イミドエステル（３，３’−ジチオビ
ス（サクシンイξジルプロピオネート）などのジサクシ
ンイミジルエステルを包含する）、および二官能性マレ
イミド、例えばビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタ
ンなどを含む。メチル−３−（（ｐ−アジドフェニル）
ジチオ〕プロピオンイミデートなどの誘導体形成剤は光
の存在下で架橋形威し得る光活性化性の中間体を与える
。

また、反応性水−不溶性マトリックス、例えばシアノゲ
ンプロミドー活性化炭水化物および米国特許第３，９６
９，２８７号、同第３，６９１，０１６号、同第４．　
ｉ９５．１２８号、同４，２４７，６４２号、同第４，
２２９，５３７号および同第４．３３０，４４０号に記
載されている反応性基質がタンパクの固定化に用いられ
る。

グルタミニルおよびアスパラギニル残基はしばしば脱ア
ミド化されて、対応するグルタミルおよびアスパルチル
残基とされる。また、これらの残基は緩めな酸性条件下
で脱ア藁ド化される。これら残基のいずれの形状も本発
明の範囲内にはいる。

その他の修飾はプロリンおよびリジンのヒドロキシル化
、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル化のホス
ホリル化、リジン、アルギニンおよびヒスチジンの側鎖
にα−アミノ基のメチル化（Ｔ、　Ｅ。

Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：　５ｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌｅＰｒｏｐｅｒｔ
ｉｅｓ、　Ｗ、Ｈ，Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃｏ、、　Ｓ
ａｎ　Ｆｒａｒｉｃｉｓｃｏ。

１９８３、　ｐｐ、　　７９−８６）　、　Ｎ−末端ア
ミンのアセチル化、およびいくつかの例におけるＣ−末
端カルボキシル基のアミド化を包含する。

変更されたアミノ酸配列をもつＩ　ＣＡＭ−２の機能性
誘導体もＤＮＡの変異によって調製できる。

Ｉ　ＣＡＭ−２遺伝子をコードするヌクレオチド配列は
第２図に示されている。このような変異は、例えば第２
図に示されたアミノ酸配列内の残基の除去、挿入または
置換を含む。最終的な構築に到達するべく除去、挿入お
よび置換の任意の組合を行うことができる。但し、最終
的な構築体が所定の活性をもたなければならない。明ら
かに、この変異体をコードするＤＮＡにおいてなすこと
のできる変異は読取り枠取外にシーケンスを配置しては
ならず、かつ好ましくは二次的なｍＲＮＡ構造を生威し
得る相補的領域を形成してはならない（欧州特許出願公
開第７５．４４４号参照〉。

遺伝子レベルで、通常これらの機能性誘導体は、Ｉ　Ｃ
ＡＭ−２分子をコードするＤＮＡ中のヌクレオチドのサ
イト−特異的変異誘発によって調製され、それによって
該機能性誘導体をコードするＤＮＡを得、次いで組換え
細胞培養で該ＤＮＡを表現する。

これら機能性誘導体は、典型的には天然産の類似体と同
じ定性的生物活性を示す。しかし、これら正常に作られ
たＩ　ＣＡＭ−２分子に関するこのような特性とは全く
異っている。

アミノ酸配列変異を導入するためのサイトは予め決めら
れているが、変異自体は予め決める必要はない。例えば
、所定サイトの変異の性能を最適化するためには、無秩
序な変異誘発をターゲットコドンまたは領域にて行って
、表現されたＩＣＡＭ−２の機能性誘導体を所定の活性
の最適の組合せについてスクリーニングできる。既知配
列をもつＤＮＡ中の所定サイトで置換変異を行う技術は
周知であり、例えば部位特異的変異誘発法である。

本発明に従うＩＣＡＭ−２機能性誘導体分子の調製は、
初期に調製された機能性誘導体またはタンパクの非変異
バージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）をコードするＤＮＡの部
位特異的変異誘発により達成することが好ましい。部位
特異的変異誘発は、所定の変異体のＤＮＡ配列をコード
する特定のオリゴヌクレオチド配列並びに十分な数の隣
接ヌクレオチドを用いてＩ　ＣＡＭ−２機能性誘導体を
調節することを可能とし、十分なサイズのブライマー配
列および配列の複雑性を与え、ふさがれている除去接合
の両側に安定な二重螺締を形成できる。典型的には、長
さ約２０〜２５ヌクレオチドのブライマーは好ましくは
、変更された配列の接合部の両側に約５〜１０残基をも
つ。一般に、例えば＾ｄｅ１ｍａｎ等の、ＤＮＡ、１９
８３．２、ｐ、１８３（これを本発明の参考文献とする
）などの刊行物に例示されているように、部位特異的変
異誘発技術は当分野で周知である。

理解されるように、部位特異的変異誘発法は典型的に一
本鎖または二本鎖形で存在するファージベクタを用いる
。部位特異的変異誘発で有用な典型的なベクタは、ＮＢ
ファージ、例えばＭｅｓｓｉｎｇ等、Ｔｈ１ｒｄＣ１ｅ
ｖｅｌａｎｄ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｍａｃｒｏ
ｓ＋ｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　Ｒｅｃｏｍ−ｂｉｎａ
ｎｔ　ＤＮＡ、　Ａ、　Ｗａｌｔｏｎ　’９５、エルセ
ピア刊、アムステルダム、（１９８１）（これを本発明
の参考文献とする）に記載されているようなベクタを包
含する。

これらファージは市販品として容易に入手でき、その使
用は当業者には一般に周知である。また、複製の一本鎖
ファージ開始点を含むプラスミドベクタ（Ｖｅｉｒａ、
等、Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　１９８７．　１５
３．　ｐ。

３）を−末鎖ＤＮＡを得るのに用いることができる。

一般に、本発明による部位特異的変異誘発は、まず配列
内に関連タンパクを、コードするＤＮＡ配列を含む一本
鎖ベクタを得ることで行われる。所定の変位配列をもつ
オリゴヌクレオチドブライマーを、一般には例えばＣｒ
ｅａ等のＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　　１９７８．エエ、ｐ、５７６５
に記載の方法によって合成により調製される。次に、こ
のブライマーを一本鎖タンパクー配列−含有ベクタと共
にアニールし、ＤＮＡ重合酵素、例えばＥ。

コリボリメラーゼクレノウフラグメントの作用に付して
変異をもつストランドの合成を完了する。

かくして、変異配列および第２ストランドは所定の変異
をもつ。次に、このヘテロニ重鎖ベクタを用いて適当な
細胞を形質転換する。細胞としては、例えばＪＭＩ　０
１細胞が用いられ、変異配列配置をもつ組換えベクタを
含むクローンが選別される。

このクローンの選別後、変異を受けたタンパク領域を取
出し、タンパク生産のために適当なベクタ、一般には適
当なホストの形質転換に用いることのできる型の表現ベ
クタに入れることができる。

アミノ酸配列の除去は、一般に約１〜３０、より好まし
くは１〜１０残基でありおよび典型的には連続するもの
である。除去部はＩｇドメイン、例えばＩＣＡＭ−２の
ドメイン１または２を含んでいてもよい。アミノ酸配列
挿入は１残基から本質的には無限の長さのポリペプチド
のアミノおよび／またはカルボキシル−末端融合体、並
びに単一のまたは複数の７５ノ酸残基からなる配列内挿
入を包含する。配列内挿入（即ち、完全なＩＣＡＭ２分
子配列内の挿入）は、一般には約１〜１０、より好まし
くは１〜５残基の範囲であり得る。末端挿入の例は、ホ
スト細胞に対し異種であろうが同種であろうが、シグナ
ル配列を該分子のＮ−末端に融合して、組換えホストか
らのＩ　ＣＡＭ−２機能性誘導体の分泌を容易にするこ
とを含む。

機能性誘導体の第３の群は、少なくとも一つのＩ　ＣＡ
Ｍ−２分子中のアミノ酸残基、好ましくはその一つが除
かれ、かつ異る残基がその位置に挿入されたものである
。好ましくは、このような置換は、ＩＣＡＭ−２分子の
特性を精巧に変調しようとする場合には、以下の表に従
って行われる。

ｌａ ｇｌｙＨｓｅｒ ｒｇ ｙｓ Ａｓｎ　　　　　　　　　　　　　　ｇｉｎ；　　ｈｉ
ｓＡｓｐ　　　　　　　　　　　　　ｇｌｕＣｙｓ　　
　　　　　　　　　　　　５ｅｒＧｉｎ　　　　　　　
　　　　　　　　ａｓｎＧｌｕ　　　　　　　　　　　
　　ａｓｐＧｌｙ　　　　　　　　　　　　　ａｌａ；
ｐｒ。

旧ｓ　　　　　　　　　　ａｓｎ；ｇｌｎｌｌｅ　　　
　　　　　　　　　　　ｌｅｕ；ｖａｌＬｅｕ　　　　
　　　　　　　　　　１ｌｅＨｖａｌＬｙｓ　　　　　
　　　　　　　ａｒｇ；　ｇｉｎ；　ｇｌｕＭｅｔ　　
　　　　　　　　　　　ｌｅｕ；　　ｔｙｒ；　　１ｌ
ｅＰｈｅ　　　　　　　　　　　　ｍｅｔＨｌｅｕ；　
　ｔｙｒＳｅｒ　　　　　　　　　　　　　　　ｔｈｒ
Ｔｈｒ　　　　　　　　　　　　　　　５ｅｒＴｒｐ　
　　　　　　　　　　　　　ｔｙｒＴｙｒ　　　　　　
　　　　　　　ｔｒｐＨｐｈｅＶａｌ　　　　　　　　
　　　　　　ｔｉｅ；ｌｅｕ機能または免疫学的同等性
における大きな変化は、第１表に与えられたものよりも
保存性の低い置換を選択することにより、即ち（ａ）置
換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えばシート
またはヘリックス構造、わ）ターゲットサイトの分子の
電荷または疎水性、または（Ｃ）側鎖の嵩高さの維持に
及ぼす残基の効果の点でより大幅に異っている残基を選
択することにより行われる。一般に、期待される置換は
（ａ）グリシンおよび／またはプロリンが他のアミノ酸
で置換されるか、あるいは除去または挿入され、ら）親
水性残基、例えばセリルまたはスレオニルが疎水性残基
、例えばロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、
バリルまたはアラニルで置換され、（Ｃ）システィン残
基が任意の他の残基で置換され、（ｄ）電気的に正の側
鎖をもっ残基、例えばリシル、アルギニル、またはヒス
チジルが負電荷をもつ残基、例えばグルタミルまたはア
スパルチルで置換され、あるいは（ｅ）嵩高な側鎖、例
えばフェニルアラニンを有する残基が、このような側鎖
のないもの、例えばグリシンで置換されているものであ
る。

多くの除去および挿入、特に置換は１．ＣＡＭ−２分子
の特性の激しい変更を生じないものと期待される。しか
し、置換、除去または挿入の正確な効果を、これらの実
施前に予測することが困難である場合には、当業者は、
この効果が日常のスクリーニングアッセイにより評価さ
れることを理解するであろう。例えば、機能性誘導体は
典型的に元のＩＣＡＭ−２分子−コード核酸の部位特異
的変異誘発、組換え細胞培養での変異核酸の表現および
場合によっては細胞培養物からの精製、例えば抗−ＩＣ
ＡＭ−２分子抗体カラム（少なくとも一つの残留エピト
ープへの結合により機能性誘導体を吸収するためのもの
）上での免疫親和性吸着による精製によって行われる。

Ｉ　ＣＡＭ−２のアフィニティーを増すように工夫され
た変異は、Ｉ　ＣＡＭ−１における相同位置に存在する
アミノ酸残基の導入により導くことができる。同様に、
このような変異Ｉ　ＣＡＭ−２分子は、Ｉ　ＣＡＭ−１
との相同位置においてＮ−結合ＣＨ○が欠除するように
調製することもできる。

次いで、細胞溶解液または精製したＩ　ＣＡＭ−１分子
の機能性誘導体の活性を、所定の特性に関する適当なス
クリーニングアッセイでスクリーニングする。例えば、
機能性誘導体の免疫学的特徴、例えば所定の抗体に対す
る親和性における変化を拮抗型のイムノアッセイで測定
する。免疫修飾活性の変化は適当なアッセイで測定され
る。このようなタンパク特性、例えば酸化還元または熱
安定性、生物学的半ｆＩｉ期、疎水性、タンパク分解酵
素による分解に対する感受性またはキャリヤとの凝集傾
向もしくはマルチマーへの凝集傾向などの変更は当業者
には周知の方法で検定される。

Ｂ、ＩＣＡＭ−２のアゴニストおよびアンタゴニスト ＩＣＡＭ−２の１アゴニスト”はＩ　ＣＡＭ−２の生物
的機能のいずれかを発揮する能力を高める化合物である
。このようなアゴニストの一例は、Ｉ　ＣＡＭ−２が細
胞レセプタまたはウィルスタンパクに結合する能力を増
大するものである。

Ｉ　ＣＡＭ−２の“アンタゴニスト”は、ＩＣＡＭ−２
がその生物的機能のいずれかを発揮する能力を減衰もし
くは阻害する化合物である。このようなアンタゴニスト
の例はＩ　ＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体、
抗−Ｉ　ＣＡＭ−２抗体、抗−ＬＦＡ−１抗体などを包
含する。

米国特許出願第０７１０４５，９６３号、同第０７／１
１５．７９８号、同第０７　／１５５，９４３号、同第
０７／１Ｂ９．８１５号または同第０７　／２５０．４
４６　　（これらすべてを本発明の参考文献とする）に
記載されている細胞凝集アッセイは、ＬＦＡ−１依存性
凝集の測定を可能とし、かつＩＣＡＭ−２／ＬＦＡ−１
凝集の程度に影響を与える試薬を同定するのに用いるこ
とができる。即ち、このようなアッセイはＩ　ＣＡＭ−
２のアゴニストおよびアンタゴニストの同定に利用でき
る。アンタゴニストはＬＦＡ−１またはＩ　ＣＡＭ−２
の凝集媒介能を劣化するよう機能し得る。また、上記ア
ッセイを用いて、非Ｉｇ　（即ち、化学的）試薬を調べ
て、これらがＩＣＡ？１−２／ＬＦＡ−１凝集のアゴニ
ストであるか、あるいはアンタゴニストであるかを調べ
ることができる。

Ｃ６抗−ＩＣＡＭ−２抗体 本発明の好ましいＩｇアンタゴニストはＩＣＡＭ−２に
対する抗体である。適当な抗体は様々な方法のいずれに
よっても得ることができる。

抗原分子、例えばＩＣＡＭ−２は当然リンパ球の表面上
に表現される。従って、例えば腹腔内注射などにより適
当な動物にこのような細胞を導入することにより、ＩＣ
ＡＭ−２またはＣＤ−１８族分子の構成員に結合し得る
抗体が産生される。

必要ならば、このような動物の血清を取出して、これら
分子に結合し得るポリクローナル抗体の源として用いる
ことが可能である。

更に、抗−Ｉ　ＣＡＭ−２抗体は５ｅｌｄｅｎ、Ｒ，Ｆ
、の方法（欧州特許出願公開第２８９，０３４　）また
は５ｅｌｄｅｎ、　Ｒ，Ｆ、等の方法（Ｓｃｉｅｎｃｅ
、　１９　Ｂ　？　、２３６、ｐｐ、　　７１４−７１
８）の準用にまり生成できる。

この方法の準用により、適当な動物（例えばマウスなど
）の細胞を、完全なＩ　ＣＡＭ−２分子またはそのフラ
グメントのいずれかを表現し得るベクタでトランスフェ
クションする。該動物の移入細胞におけるＩ　ＣＡＭ−
２産生は該動物中の免疫応答を誘起し、かつ該動物によ
る抗−ＩＣＡＭ２抗体産生へと導く。

また、抗−ＩＣＡＭ−２抗体は、ＩＣＡＭ−２またはそ
のペプチドフラグメントを適当な動物に導入することに
よっても作ることができる。この免疫動物はこのような
曝露に応答してポリクローナル抗体を産生ずる。ＩＣＡ
Ｍ−２のペプチドフラグメントを使用することは、動物
を免疫するのに用いたペプチドフラグメントに含まれる
エピトープのみと反応する領域特異的抗体を得ることを
可能とする。

しかし、（上記のいずれかの方法で免疫された）動物か
ら肺細胞を取り出して、これをミエローマ細胞系と融合
し、かかる融合細胞にハイブリドーマ細胞（ＩＣＡＭ−
２と結合し得るモノクローナル抗体を分泌する）を形成
することが好ましい。

上記方法で得られるハイブリドーマ細胞を様々な方法で
スクリーニングして、Ｉ　ＣＡＭ−２と結合し得る抗体
を分泌する所定のハイブリドーマ細胞を同定できる。好
ましいスクリーニングアッセィにおいて、このような分
子はＩ　ＣＡＭ−２−表現、Ｉ　ＣＡＭ−１−非表現細
胞の凝集を阻害する能力によって同定される。次いで、
このような凝集を阻止し得る抗体を更にスクリーニング
して、これらがＩ　ＣＡＭ−２に、あるいはＣＤ−１８
族分子の構成員と結合してかかる凝集を阻害するか否か
を決定する。Ｉ　ＣＡＭ−２をＣＤ−１８族分子の構成
員から識別できる任意の手段がこのスクリーニングで利
用できる。即ち、例えばこの抗体により結合した抗原は
免疫沈殿法およびアクリルアミドゲル電気泳動法などに
より解析できる。

ＣＤ−１８族分子の構成員に結合する抗体と、Ｉ　ＣＡ
Ｍ−２に結合するものとの間の識別は、ＬＦＡ−１を表
現するがＩ　ＣＡＭ−２を表現しない（逆も同様）細胞
に対する結合能のある抗体につきスクリーニングするこ
とにより可能となる。

ＬＦＡ−１を表現するが、ＩＣＡＭ−２を表現しない細
胞に対する抗体の結合能は当業者により一般に用いられ
ている手段によって検出できる。このような手段はイム
ノアッセイ　（特に免疫螢光法を用いるもの）、細胞凝
集、フィルタ結合法、抗体沈殿法などを含む。

上記Ｉ　ＣＡＭ−２の機能性誘導体に加えて、ウィルス
感染または炎症の治療のために本発明に従って使用でき
る他の薬剤はＩＣＡＭ−２に対する抗体、抗−Ｉ　ＣＡ
Ｍ−２抗体に対する抗イデイオタイプ抗体、およびＩＣ
ＡＭ−２に結合し得るレセプタ分子、またはこのような
分子のフラグメントを包含する。

使用できるＩＣＡＭ−２（またはその機能性誘導体）に
対する抗体はポリクローナル、モノクローナルのいずれ
であってもよい。

本発明で興味ある抗−イディオタイプ抗体はＩ　ＣＡＭ
−２と拮抗的に（あるいは排他的に）結合し得る。この
ような抗体は、例えば抗−ＩＣＡＭ　−２抗体に対する
抗体を生成せしめ、次いでＩＣＡＭ２の天然結合リガン
ドに対する結合能につき該抗体をスクリーニングするこ
とにより得ることができる。

ＣＤ−１８族の分子はＩＣＡＭ−２に結合できるので、
かかる分子の投与（例えば、αおよびβサブユニツト両
者をもつヘテロダイマーとして、あるいはαまたはβサ
ブユニットのみからなる分子として、あるいはこれらサ
ブユニットのいずれかまたは両者のフラグメントをもつ
分子として）は細胞上にあるＩ　ＣＡＭ−２に結合する
ＨＲＶと拮抗しくあるいはこれを排除）することができ
る。

本発明の抗−凝集抗体は様々な方法で同定しかつ力価の
決定を行うことができる。例えば、ＩＣＡＭ−２表現細
胞（例えば活性化内皮細胞）に特異的に結合する抗体の
能力、およびＩ　ＣＡＭ−２を表現しない細胞に対する
非結合能を測定することができる。細胞凝集の適当なア
ッセイは米国特許出願第０７１０４５，９６３号、同第
０７　／１１５．７９８号、同第０７　／１５５，９４
３号、同第０７　／１８９．８１５号または同第０７　
／２５０，４４６　　（これらを本発明の参考文献とす
る）に記載されている。また、該抗体のＩ　ＣＡＭ−２
に対する結合容量あるいはＩ　ＣＡＭ２のペプチドフラ
グメントに対する結合容量を測定することもできる。当
業者には容易に理解されるように、上記アッセイは変更
でき、あるいは異る順序で行って様々な可能なスクリー
ニングを得ることができ、その各々はＩ　ＣＡＭ−１に
結合し得る抗体と、ＣＤ−１８族分子の構成員に対する
結合抗体とを同定し、かつ識別することができる。

より好ましい方法において、Ｉ　ＣＡＭ−２を表現する
ＣＯＳ細胞に対する結合能をもつが、ＩＣＡＭ−２を表
現しないＣＯ３細胞には結合しないことについて、抗体
を選別することができる。

Ｄ０本発明の薬剤の調製 本発明の薬剤は自然法（例えば、動物、植物、真菌、菌
などにＩ　ＣＡＭ−２の非−Ｉｇアンタゴニスト産生を
誘発することにより、あるいは動物にＩ　ＣＡＭ−２に
結合し得るポリクローナル抗体産生を誘起することによ
り）、合成法（例えば、ペプチド合成のメリフィールド
法を用いてＩ　ＣＡ　Ｍ−２、その機能性ｙ、誘導体る
いは（ｒｇまたは非−Ｉｇ型の＞ＩＣＡＭ−２のタンパ
クアンタゴニストを合成）、ハイブリドーマ法（例えば
、ＩＣＡＭ−２に結合し得るモノクローナル抗体産生用
の）、あるいは組換え技術（例えば、様々なホスト（即
ち、酵母、菌、真菌、培養哺乳動物細胞など）に本発明
の薬剤を産生させるか、あるいは組換えプラスミドもし
くはウィルスベクタからの産生）などによって得ること
ができる。いずれの方法を用いるかの選択は便利さ、所
定の収率などといったファクタに依存する。上記方法、
工程あるいは技術の一つだけを用いて特定の抗−炎症剤
を生成する必要はなく、特定の薬剤を得るべくこれらを
任意に組合せることが可能である。

Ｖ、ＩＣＡＭ−２、その機能性誘導体、アゴニストおよ
びアンタゴニストの使用 Ａ、炎症の抑制 本発明の一局面はＩ　ＣＡＭ−２およびその機能性誘導
体がＣＤ−１８族分子特にＬＦＡ−１のレセプタあるい
はウィルスタンパク（例えば、ライノウィルスなどのタ
ンパク）と相互作用する能力をもつことに由来する。Ｉ
ＣＡＭ−２の、糖タンパクのＣＤ−１８族の構成員との
相互作用能のために、炎症を抑制（即ち、阻止もしくは
減衰）するのにこれを用いることができる。

ここで使う“炎症（ｉｎｆ　ｌａｍｍａｔｉｏｎ）　　
”なる用語は特異的防御系の反応および非特異的防御系
の反応両者を含むものとする。

ここで用いる“特異的防御系”とは、特異的抗原の存在
に対して反応する免疫系のそのような成分をいうものと
する。炎症は、これが該特異的防御系によって、これを
媒介としであるいはこれに関連して引起こされる場合に
は、該特異的防御系の応答の結果であるといわれる。特
異的防御系の応答の結果生ずる炎症の例は風疹ウィルス
などの抗原に対する応答、自己免疫患者、遅延型のＴ−
細胞によって媒介される過敏性応答（例えばマン）　（
Ｍａｎｔａｕｘ　）テストで“正゛とみなされた患者に
みられる）などを含む。慢性炎症性疾患および移植臓器
および組織の拒絶も特異的防御系の炎症性反応の例であ
る。

本明細書で用いるような“非特異的防御系”の反応は、
免疫記憶の不可能な白血球により媒介される反応をいう
ものとする。このような細胞は顆粒球およびマクロファ
ージを含む、ここでいう炎症は、これが非特異的防御系
によって生じ、これによって媒介されもしくはこれに関
連して発生する場合、非特異的防御系の応答の結果とし
て生ずるといわれる。少なくとも部分的にこの非特異的
防御系の反応に起因する炎症の例は、成人呼吸困難症候
群（ＡＲＤＳ）　、敗血症または外傷にとって二次的な
多発性臓器傷害症候群、心筋または他の組織の再かん流
傷害、急性系球体腎炎、反応性関節炎、急性炎症性成分
を有する皮膚疾患、急性化膿性髄膜炎または他の中枢神
経系炎症性疾患、熱傷害、血液透析、白血球除去血輸血
、潰瘍性大腸炎、クローン疾患、壊死性全腸炎、顆粒球
輸液関連症候群およびサイトカイニン誘発毒性などの状
態に関連した炎症を包含する。

上記のように、ＩＣＡＭ−２分子のＣＤ−１８族分子の
構成員に対する結合は細胞付着にとって最も重要である
。付着過程を通して、リンパ球は外因性抗原の存在に対
して、常に動物を監視できる。これらの過程は通常は望
ましいが、これらは同様に臓器移植拒絶、組織移植拒絶
並びに多くの自己免疫疾患の原因となっている。従って
、細胞付着を減衰もしくは阻害できる何等かの手段が、
臓器移植（特に腎移植）、組織移植の受容者または自己
免疫疾患々者において切望されている。

ＣＤ−１８族の構成員に対するモノクローナル抗体は、
内皮への結合を含む白血球の多くの付着依存性機能（Ｈ
ａｓｋａｒｄ、　ｏ、等、Ｊ、Ｉｍｎ＋ｕｎｏ１．＋　
１９８６．１３７、ｐｐ、２９０１−２９０６）　、ホ
モタイプ付着（Ｒｏｔｈｌｅｔｎ、Ｒ，等、Ｊ、　Ｅｘ
ｐ、　Ｍｅｄ、、　　１９８６．１６３、ｐｐ、　　１
１３２−１１４９）　、リンパ球の抗原およびマイトジ
ェン誘起性増殖（Ｄａｖｉｇｎｏｎ＋Ｄ１等、Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　ＵＳＡ、　
　１９８１　。

■、ｐｐ、４５３５−４５３９）　、抗体形成（Ｐｉｓ
ｃｈｅｒ、　Ａ、等、Ｊ、Ｉｏ＋＋ｗｕｎｏ１．、　１
９８６．１３６、ｐｐ、３１９８−３２０３）および細
胞毒性Ｔ−細胞の溶解活性などのすべての白血球のエフ
ェクタ機能（Ｋｒｅｎｓｋｙ＋　Ａ、　Ｍ、等、Ｊ、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、＋　１９８４．１３２、ｐｐ、２１８０
−２１８２）、マクロファ−ジ（Ｓｔｒａｓｓｍａｎ、
　Ｇ、等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１９８６．１３
６、ｐｐ、４３２８−４３３３）並びに抗体−依存性細
胞毒性反応に関与するすべての細胞（Ｋｏｈｌ、　Ｓ、
等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１９８４．１３３、ｐ
ｐ、２９７２−２９７８）を阻害する。上記機能のすべ
てにおいて、抗体は白血球の適当な細胞基質に対する結
合能を阻害し、これは順次最終的な結果を阻害する。こ
れらがＩＣＡＭ−２／ＬＦＡ−１相互作用を含む限りに
おいて、かかる機能は抗−ＩＣＡＭ−２抗体により抑制
できる。

かくして、ＩＣＡＭ−２に結合し得るモノクローナル抗
体は晴乳類罹患体における抗−炎症剤として用いること
ができる。このような薬剤は、般的な抗−炎症剤と、該
薬剤が選択的に付着を阻害し、かつ従来の薬剤でみられ
た腎毒性などの他の副作用をもたらさないという点にお
いて著しく異る。

ｆＣＡＭ−２は、特に溶解型で、ＣＤ−１８族の構成員
に対して抗体と同様に作用できるので、炎症を抑制でき
る。その上、ＩＣＡＭ−２の機能性誘導体およびアンタ
ゴニストも炎症の抑制に使用できる。

１、遅延型過敏性反応のサプレッサー ＩＣＡＭ−２分子は、部分的に、遅延型過敏性反応など
の炎症反応の開始に必要な付着事象を媒介する。従って
、Ｉ　ＣＡＭ−２分子に結合し得る抗体（特にモノクロ
ーナル抗体）はこのような反応の減衰または排除におけ
る治療上の可能性をもつ。

また、Ｉ　ＣＡＭ−２はＩ　ＣＡＭ／ＬＦＡ−１相互作
用のアンタゴニストであるから、Ｉ　ＣＡＭ−２（特に
可溶化型のもの）またはその機能性誘導体は遅延型過敏
症反応を抑制し得る。

これらの有力な治療上の用途は２つの方法のいずれかで
実現できる。その第１は、ＩＣＡＭ−２に対するモノク
ローナル抗体含有組成物を遅延型過敏症反応に罹ってい
る患者に投与することである０例えば、このような組成
物を抗原、例えばキズタ毒、オーク毒などに接触してい
るヒトに与える。第２の態様では、Ｉ　ＣＡＭ−２に結
合し得るモノクローナル抗体を抗原乙共に患者に投与し
て、後の炎症反応を防止する。かくして、Ｉ　ＣＡＭ−
２結合モノクローナル抗体と共に付随的に抗原を投与す
ることにより、−時的に該抗原の後の発現に対し患者を
寛容化できる。

２、慢性炎症性疾患の治療 ＬＡＤ患者はＬＦＡ−１に乏しく炎症反応を開始しない
ので、ＬＦＡ−１の天然リガンドのアンタゴニスト、Ｉ
　ＣＡＭ−２も炎症応答を阻害するものと考えられる。

ＩＣＡＭ−２に対する抗体の炎症阻害能は、慢性炎症性
疾患および自己免疫疾患、例えば紅班性狼瘡、自己免疫
性甲状腺炎、実験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＡＥ）　
、多発性硬化症、糖尿病のいくつかの形態、レイノード
症候群、リウマチ性関節炎などの治療における基礎を与
える。このような抗体は乾磨の治療においても使用でき
る。一般に、ＩＯＡ、Ｍ−２に結合し得るモノクローナ
ル抗体はステロイド療法を介して従来治療し得た疾患の
治療にも使用できる。

本発明によれば、このような炎症および免疫拒絶応答を
、このような治療を要する患者に、炎症を抑制するのに
十分な量の抗−炎症剤を投与することにより抑制（即ち
阻止または減衰）できる。

適当な抗−炎症剤は、Ｉ　ＣＡＭ−２に結合し得る抗体
、ＩＣＡＭ−，２に結合し得る抗体フラグメント、Ｉ　
ＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−２の機能性誘導体、Ｉ　ＣＡＭ
−１以外のＩ　ＣＡＭ−２の非−Ｉｇアンタゴニストま
たはＬＦＡ−１以外のＩ　ＣＡＭ−２の非−Ｉｇアンタ
ゴニストを包含する。特に好ましいのは、可溶性Ｉ　Ｃ
ＡＭ−２機能性誘導体を含む抗−炎症剤である。このよ
うな抗−炎症治療は、ＬＦＡ−１に結合できる抗体、Ｌ
ＦＡ−１に結合し得る抗体の機能性誘導体およびＬ　Ｆ
　Ａ　−１の非−Ｉｇアンタゴニストからなる群から選
ばれる薬剤をも付随的に投与することをも含む。

本発明は、更に該特異的防御系の炎症性応答を抑制する
上記方法をも含み、そこでは患者に免疫抑制剤が更に投
与される。このような薬剤は通常必要とされるよりも低
い（即ち“準−最適（ｓｕｂｏｐｔｉｍａｌ　）　　”
投与量）で与えることが好ましい。

この準−最適投与量の使用は、本発明の薬剤の相乗効果
のために可能となる。適当な免疫抑制剤はデキサメチシ
ン（ｄｅｘａｍｅｔｈｅｓｏｎｅ　）　、アザチオプリ
ン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）　、Ｉ　ＣＡＭ　−１
、サイクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ　）　Ａ
などを含む。

３、非−特異的炎症の治療 本発明は、一部には、顆粒球−内皮細胞粘着が内皮とＣ
Ｄ−１８族の糖タンパクとの相互作用に起因するという
発見によるものである。細胞接着は白血球が炎症サイト
に移動できおよび／または炎症に寄与する様々なエフェ
クタ機能を行うために必要とされるので、細胞接着を阻
害する薬剤はこの炎症を減衰もしくは阻止する。このよ
うな炎症反応は、免疫記憶できない白血球により媒介さ
れる非−特異的防御系の反応によるものである。

このような細胞は顆粒球およびマクロファージを含む。

ここで使用するような炎症は、該炎症が非特異的防御系
により生じ、これによって媒介されもしくはこれに関連
する場合に、該非特異的防御系の応答に起因するものと
いわれる。少なくとも部分的に非−特異的防御系の反応
に起因する炎症の例は成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）
、敗血症または外傷に二次的な多発性臓器傷害症候群、
心筋または他の組織の再かん流傷害、急性糸球体腎炎、
反応性関節炎、急性炎症性成分を有する皮膚疾患、急性
化膿性髄膜炎または他の中枢神経系炎症性疾患、熱傷害
、血液透析、白血球除去血輸血、潰瘍性大腸炎、クロー
ン疾患、壊死性全腸炎、顆粒球輸液関連症候群およびサ
イトカイニン誘発毒性からなる群から選ばれる状態に関
連する炎症を含む。

本発明の抗−炎症剤は顆粒球上のＣＤ−１８複合体と内
皮細胞との相互作用と特異的に拮抗できる化合物である
。このようなアンタゴニストはＩＣＡＭ−２、Ｉ　ＣＡ
Ｍ−２の機能性誘導体およびＩ　ＣＡＭ−１以外のＩＣ
ＡＭ−２の非−ＩｇアンタゴニストまたはＣＤ−１８族
分子の構成員を含む。

Ｂ、ｌ１ｉＩ器および組織拒絶のサプレッサー特に可溶
性型のＩ　ＣＡＭ−２はＣＤ−１８族の構成員に対して
抗体と同様に作用することができるので、任意の細胞接
着−依存性機能によって生ずる臓器または組織拒絶を抑
制するのに用いることができる。更に、抗−ＩＣＡＭ−
２抗体およびその機能性誘導体およびアンタゴニストも
かかる拒絶を抑制できる。

ＩＣＡＭ−２およびＩＣＡＭ−２に結合し得る抗体は臓
器または組織拒絶を防止し、あるいは自己免疫応答の改
善に、哺乳動物罹患体において副作用の恐れなしに使用
することができる。

ＩＣＡＭ−２をＪｍし得るモノクローナル抗体の使用は
ＨＬＡ不適合の対象間での臓器移植の実施を可能とする
ので重要である。

Ｃ０治療または診断の目的で投与された抗原物質の導入
に対する付加剤 例えば牛インシュリン、インターフェロン、組織型プラ
スミノーゲン活性化剤または二十日ネズミのモノクロー
ナル抗体などの治療または診断剤に対する免疫応答は、
このような薬剤の治療または診断の価値を実質的に害し
、しかも実際上血清病などの疾病を起こす恐れがある。

このような状況は本発明の抗体の使用により改善できる
。この態様において、該抗体は該治療または診断薬と組
合せて投与される。この抗体の添加は受容者が該薬剤を
認識するのを防止し、かつその結果受容者がこれに対す
る免疫応答を開始することを阻止する。このような免疫
応答がないことは、患者が更に治療もしくは診断薬の投
与を受は付けることを可能とする。

ＩＣＡＭ−２（特にその可溶型のもの）またはその機能
性誘導体は、疾病の治療においてＩＣＡＭ　−１または
ＬＦＡ−１に結合し得る抗体と互換性をもって用いるこ
とができる。かくして、可溶型のかかる分子は臓器また
は組織移植における拒絶反応を阻止するのに使用できる
。ＩＣＡＭ−２またはその機能性誘導体は、治療または
診断薬の免疫原性を減じるために、抗−ＩＣＡＭ−２抗
体と同様に使用できる。

Ｄ、腫瘍転移のサプレッサー 本発明の薬剤は、また移動のためにＣＤ−１８族の機能
性構成員を必要とする造血器官の腫瘍細胞の転移を阻止
するのに用いることもできる。本発明のこの態様によれ
ば、このような治療を要する患者に、該転移を阻止する
のに十分な量の薬剤（例えば、Ｉ　ＣＡＭ−２に結合す
る抗体、ＩＣＡＭ−２に結合′し得る毒素−誘発性の抗
体、ＩＣＡＭ２に結合し得る抗体フラグメント、Ｉ　Ｃ
ＡＭ−２に結合し得る、毒素−誘発性の抗体フラグメン
ト、Ｉ　ＣＡＭ−２、Ｉ　ＣＡＭ−２の機能性誘導体、
およびＩ　ＣＡＭ−１以外のＩ　ＣＡＭ−２の非−ｒｇ
アンタゴニスト）を投与する。

本発明は、またＩＣＡＭ−２表現腫瘍細胞の成長抑制方
法をも提供し、該方法はそのような治療を要する患者に
該成長を抑制するのに十分な量の薬剤を投与することを
含む。適当な薬剤はＩＣＡＭ−２に結合し得る抗体、Ｉ
　ＣＡＭ−２に結合し得る毒素−誘発性抗体、ＩＣＡＭ
−２に結合し得る抗体フラグメント、ＩＣＡＭ−２に結
合し得る毒素−誘発性抗体フラグメント、ＩＣＡＭ７−
２、ＩＣＡＭ−２の機能性誘導体、Ｉ　ＣＡＭ−１以外
のＩＣＡＭ　−２の非−Ｉｇアンタゴニスト、毒素−誘
発性のＣＤ−１８族分子の構成員およびＣＤ−１８族分
子の構成員の毒素−誘発性機能性誘導体を包含する。

本発明は、またＬＦＡ−１表現腫瘍細胞の成長抑制法を
も提供し、該方法はこのような治療を要する患者に、該
成長を抑制するのに十分な量の毒素を投与することを含
む。適当な毒素は、毒素−誘発性ＩＣＡＭ−２または毒
素−誘発性のＩＣＡＭ　−２機能性誘導体を含む。

ｅ、ウィルス感染のサプレッサー Ｉ　ＣＡＭ−１は、最近ライノウィルスの大部分の群に
よりレセプタとして滅されることが示された（Ｇｒｅｖ
ｅ、　Ｊ、Ｍ、等、Ｃｅ１ｌ、１９８９．５６、ｐｐ。

８３９　８４７　；５ｔａｕｎｔｏｎ、　Ｄ、Ｅ、等、
Ｃｅ１ｌ、　１９８９．５６、、　ｐｐ、　　８４９−
８５３　；Ｔｏｍａｓｓｉｎｉ、Ｊ、Ｅ、等、Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ、　Ａｃｅｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ％　１
９８９．８６、ｐｐ、４９０７−４９１１；これらを本
発明の参考文献とする）、ライノウィルス、即ち小さな
、ＲＮＡ−含有タンパク−包封（Ｐｒｅｔｅｉｎ−ｅｎ
ｃａｐａｉｄａｔｅｄ）ピコルナウィルス科の一員は感
冒の４０〜５０％の原因となる（Ｒｕｅｃｋｅｒｔ、　
Ｒ，Ｒ，。

Ｆｉｅｌｄｓ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、　Ｆｉｅｌｄｓ、　
Ｂ、Ｎ、等線、Ｒａｖｏｎ社刊、ニューヨーク（１９８
５）　、ｐｐ、７０５−７３８　；　５ｐｅｒｂｅｒ　
Ｓ、Ｊ、等、Ａｎｔｉｍｉｃｒ、　ＡｇｅｎｔｓＣｈｅ
ｍｏ、、　　１９８８．３２、ｐｐ、４０９−４１９：
これらを本発明の参考文献とする）。１００以上の免疫
学的に非交叉反応性のライノウィルスが明らかにされ、
その９０％がＩ　ＣＡＭ−１に結合する。

Ｉ　ＣＡＭ−１以外に、細胞接着分子ＣＤ４および補体
レセプタＣＲ２は、最近夫々ＨＩ　ＶおよびＥＢＶウィ
ルスによってウィルスレセプタとして滅されることがわ
かった（Ｍａｄｄｏｎ、　Ｐ、Ｊ、、　Ｃｅ１１１９８
６、土工、ｐｐ、　３３３−３４８　；　Ｆｔｎｇｅｒ
ｏｔｈ。

Ｊ、Ｄ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃｅｄ、　Ｓｃ
ｉ、　ＵＳＡ％　１９８４、旦、ｐｐ、　　４５１　Ｑ
−４５１４：これらを本発明の参考文献とする）。また
、Ｉ　ＣＡＭ−１と類似のＩｇドメイン構造を有し、か
つ細胞接着において機能する分子がポリオウィルスレセ
プタであることがわかった（Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ、　
Ｃ，Ｌ、等、Ｃｅ１ｌ、　１９８９、」−七、ｐｐ。　
８５５−８６５）。

Ｉ　ＣＡＭ−２およびその機能性誘導体はウィルス（特
にライノウィルス、とりわけ小数の血清型ライノウィル
ス）の付着または感染に対するレセプタとしてし作用し
得る。従って、Ｉ　ＣＡＭ−２（またはそのフラグメン
ト）に対する抗体、ＩＣＡＭ−２、あるいはＩ　ＣＡＭ
〜２の機能性誘導体はこのような付着または感染を阻止
するのに使用でき、これによってウィルス感染を抑制で
きる。

Ｆ５診断および予後的用途 Ｉ　ＣＡＭ−２に結合し得るモノクローナル抗体は患者
中のＩ　ＣＡＭ７２表現および炎症サイトの造影または
可視化手段として使用できる。このような場合、モノク
ローナル抗体は放射性同位体、アフィニティ標識（例え
ばビオチン、アビジンなど）、螢光標識、常磁性原子、
標識抗−ＩＣＡＭ−２抗体などの使用により検出できる
ように標識される。このような標識を行う方法は当分野
で周知である。診断的造影での抗体の臨床的利用は、Ｇ
ｒｏｓｓｎ＋ａｎ＋　Ｈ，Ｂ、、　Ｕｒｏｌ、　Ｃｆ１
ｎ、　Ｎｏｒｔｈ、　Ａｍｅｒ、＋１９８６、ユ３．　
ｐｐ、　　４６５−４７４　；Ｕｎｇｅｒ。

Ｅ、Ｃ，等、Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｒａｄｉｏｌ、＋　１９
８５．２０、ｐｐ。

６９３−７００およびＫｈａｗ、　、Ｂ、Ａ、等、５ｃ
ｉｅｎｃｅ　５１９８０．２０９、ｐｐ、２９５−２９
７に概説されている。

Ｉ　ＣＡＭ−２表現の存在は、結合性リガンド、例えば
Ｉ　ＣＡＭ−２を表現する細胞のＩＣＡＭ−２遺伝手配
列またはＩ　ＣＡＭ−２ｍＲＮＡ配列に結合し得るｍＲ
ＮＡ、ｃＤＮＡまたはＤＮＡの使用によっても検出でき
る。このようなハイブリダイゼーションアッセイを実施
する技術はＭａｎｉａｔｉｓ。

Ｔｏ等のＭｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ＋　ａ　
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ＋コールドスプリ
ングハーバ−社刊、ＮＹ　（１９８２）およびＨａｙｍ
ｅｓ、　Ｂ、Ｄｏ等のＮｕｃｌｅｉｏ　Ａｃ１ｄ）１ｙ
ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、　ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　
Ａｐｐｒｏａｃｈ、　Ｉ　ＲＬ社刊、ワシントンＤＣ（
１９８５）（、これらを本発明の参考文献とする）に記
載されている。

このように検知できるように標識した抗体の集中部位の
検出は、ＩＣＡＭ−２表現または腫瘍発現サイトの指標
となる。−Ｂ様では、この表現の検査は、組織または血
液サンプルを採り、検出し得るように標識されたまたは
標識できる抗体の存在下で該サンプルをインキユベート
することにより実施される。好ましい態様では、この方
法は磁気的結像、螢光々魔法などを用いることによる非
侵攻性の様式で行われる。このような診断テストは起こ
り得る組織拒絶の初期シグナルにつき臓器移植受容者を
監視する際に使用できる。このようなアッセイは対象が
リウマチ性関節炎または他の慢性炎症性疾患に罹ってい
るか否かを調べるために行うこともできる。

例えば、放射能標識した抗体または抗体フラグメントを
用いて、ラジオイムノアッセイを利用して抗原を検出で
きる。ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）の優れた説明は
、Ｗｏｒｋ、　Ｔ、Ｓ、等のＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
　ｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、ノースホ
ランド出版、ＮＹ（１９７Ｂ）　　（特にＡｎ　Ｉｎｔ
ｒｏｄｕｃ、ｔｉｏｎ　ｔ。

Ｒａｄｉｏｉｕｍｍｎｏ　Ａｓ５ａｙ　ａｎｄ　Ｒｅ１
ａｔｅｄ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ（Ｃｈａｒｄ、　Ｔ、　
）と題する章：これを本発明の参考文献とする）に見出
すことができる。また、螢光、酵素またはその他の適当
な標識を用いることもできる。

本発明で使用できるラベルの型の例は、酵素ラベル、放
射性同位体ラベル、非放射性同位体ラベル、螢光ラベル
、毒素ラベルおよび化学発光ラベルを含むが、これらに
制限されない。

適当な酵素ラベルの例はリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ス
タフィロコッカスヌクレアーゼ、δ−５＝ステロイドア
イツメラーゼ、酵母−アルコールデヒドロゲナーゼ、α
−グリセロールホスフェートデヒドロゲナーゼ、トリオ
ースホスフヱートアイソメラーゼ、パーオキシダーゼ、
アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコー
スオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレア
ーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６＝ホス
フエートデヒドロゲナーゼ、グルコースアミラーゼ、ア
セチルコリンエステラーゼなどを包含する。

適当な放射性同位体ラベルの例は、３Ｈ１目＋Ｉｎ、Ｉ
ｔ％Ｉｓ’３１１１コ”　Ｐ　、、”　Ｓ　％目Ｃｓ　
”Ｃｒｓ　”Ｔｏ−”Ｃ０％　　”Ｆｅｓ　　フ’Ｓｅ
ｘ　　Ｉｓ”Ｅｕ　　％　　”Ｙｓ、　　”Ｃｕｓ　　
”’Ｃ１ｓ。

”　”　Ａ　ｔ　％　”　’　”Ｐ　ｂ　ｓ　”　Ｓｃ
　、”　’Ｐ　ｄ　’Ｌ　トラ含ム。ａ　当な非放射性
同位体ラベルの例は′Ｓ’Ｇｄｓ　”Ｍ１１％目”Ｄｙ
　％　”ＴｒＳ”Ｆｅなどを包含する。

適当な螢光ラベルは１ｓ！Ｅｕラベル、フルオレセイン
ラベル、ローダミンラベル、フィコシアニンラベル、フ
ィコシアニンラベル、アロフィコシアニンラベル、Ｏ−
フタルアルデヒドラベル、フルオレサミンラベルなどを
含む。

化学発光ラベルの例はルミナールラベル、イソルミナー
ルラベル、芳香族アクリジニウムエステルラベル、イミ
ダゾールラベル、アクリジニウム塩ラベル、オキサレー
トエステルラベル、ルシフェリンラベル、ルシフェラー
ゼラベル、アニコリン（ａｅｑｕｏｒｉｎ）ラベルなど
を含む。

■６本発明の組成物の投与 Ｉ　ＣＡＭ−２の治療効果は、患者に完全なＩＣＡＭ−
２分子またはその任意の治療上有効なペプチドフラグメ
ントを投与することにより得ることができる。特に興味
のあるのは可溶性の治療活性をもつＩＣＡＭ−２のペプ
チドフラグメントである。

Ｉ　ＣＡＭ−２およびその機能性誘導体は、合成、組換
えＤＮＡ技術、またはタンパク分解もしくはこれら方法
の任意の組合せによって得ることができる。Ｉ　ＣＡＭ
−２の治療上の利点は、キャリヤへの結合性を高めるた
め、もしくはＩＣＡＭ−２の活性を高めるために付加さ
れた付随的なアミノ酸残基をもつＩ　ＣＡＭ−２の機能
性誘導体の使用によって高めることができる。本発明の
範囲は、いくつかのアミノ酸残基の欠除した、あるいは
アミノ酸残基が変えられたＩ　ＣＡＭ−２の機能性誘導
体をも含むが、これらはＩＣＡＭ−２の生物的または薬
理的活性をもたなければならない。

ここに記載した本発明の抗体およびＩ　ＣＡＭ−２分子
両者は、これらを含有する処方物が通常かつ天然に見出
される物質を実質的に含まない場合に、“天然の異物を
実質的に含まない”といわれる。

本発明はＩ　ＣＡＭ−２に結合し得る抗体およびその生
物活性フラグメント（これらはモノクローナルでもポリ
クローナルでもよい）にも及ぶ、このような抗体は動物
により、Ｍｉ織培養によりあるいは組換えＤＮＡ手段に
より作ることができる。

患者にＩ　ＣＡＭ−２結合性の抗体またはそのフラグメ
ントを投与する場合、あるいはＩ　ＣＡＭ２　（または
そのフラグメント、変異体もしくは誘導体）を受容者（
１１！、臓器の〉としての患者に投与する場合、該投与
薬剤の投与量は、患者の年令、体重、身長、性別、−船
釣医学的状態、病歴などのファクタに依存して変化する
。一般に、抗体は受容者に約１ｐｇ／ｋｇ〜１０醜ｇ／
ｋｇ（患者の体重〉の投与量で投与することが望ましい
が、これ以下もしくはこれ以上の投与量でも勿論投与で
きる。ＩＣＡＭ−２分子またはその機能性誘導体を患者
に投与する場合、このような分子を同じく約ｌｐｇ／ｋ
ｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ　（患者の体重）の範囲の投与量で
投与することが好ましいが、これ以下もしくはこれ以上
で投与してもよい、以下で論議するように、この治療上
有効な投与量は、抗−ＩＣＡＭ　−２抗体を抗−ＬＦＡ
−１抗体と共に投与する場合には減らすことができる。

ここでは、一つの化合物は、２種の化合物が、これらを
患者の血清中に同時に検出し得る程に時間的に接近して
投与された場合に、第２の化合物と共に付随的に投与さ
れるという。

ＩＣＡＭ−２に結合できる抗体およびＩＣＡＭ＝２自体
のいずれも静脈内、筋肉内、皮下、腸管もしくは非経口
経路で患者に投与できる。注射によって抗体またはＩＣ
ＡＭ−２を投与する場合、連続注入または単一のもしく
は複数のポルス（ｂｏｌｕｓｅｓ　）で投与できる。

本発明の薬剤は炎症を抑制するのに十分な量で受容者と
しての対象に投与することが意図されている。この量は
、この薬剤の投与量、投与経路などが炎症を減衰しもし
くは阻止するのに十分である場合に、”抑制する”のに
十分であるといわれる。

抗−Ｉ　ＣＡＭ−２抗体またはそのフラグメントは単独
で、もしくは１または２以上の追加の免疫抑制剤（特に
臓器または組織移植した受容体に対して）と組合せて投
与することができる。このような化合物の投与は“予防
”または“治療”いずれの目的であってもよい。予防の
目的で投与する場合、該免疫抑制剤化合物は何等かの炎
症性応答または症状の前（例えば、臓器またはｍ織移植
時点の前、その時点あるいはその短時間後で、かつ臓器
拒絶反応の任意の症状のでる前）に投与される。これら
化合物の予防上の投与は任意の後にみられる炎症性応答
（Ｎえば、移植臓器またはＭｌ　４１の拒絶など）を阻
止もしくは減じるように作用する。治療の目的で投与す
る場合、該免疫抑制化合物は実際の炎症の症状（例えば
、臓器または線機の拒絶）が始った時点（もしくはその
短時間経過後）に投与される。これら化合物の治療を目
的とする投与は任意の実際の炎症（例えば、移植臓器も
しくはＭｌ織の拒絶）を減じるように作用する。

かくして、本発明の抗−炎症剤は（関連する炎症を抑制
するために）炎症の開始前に、あるいは炎症の開始後に
投与できる。

組成物は、その投与が受容体としての患者に許容され得
る場合に、“薬理的に許容”されるといわれる。投与量
が生理的に十分である場合に、かかる薬剤は“治療上有
効量”で投与されたといわれる。ある薬剤の存在が患者
の生理において検出可能な変化をもたらす場合には、該
薬剤は生理的に十分である。

本発明の抗体およびＩＣＡＭ−２分子は公知の方法に従
って処方して製薬上有用な組成物とすることができ、そ
れによってこれらの物質またはその機能性誘導体は製薬
上許容されるキャリヤビヒクルとの混合物として組合せ
られる。適当なビヒクルおよびその処方は他のヒトタン
パク、例えばヒト血清アルブミンを含めて、例えばＲｅ
ｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５
ｃｉｅｎｃｅｓ　％　１９８０　ｓ第１６版、０ｓｏｌ
＋　Ａ、Ｎ集、Ｍａｃｋ、　Ｅｎｓｔｏｎ　ＰＡに記載
されている。有効な投与に適した製薬上許容される組成
物を得るために、かかる組成物は有効量の抗−ＩＣＡＭ
−２抗体、Ｉ　ＣＡＭ−２分子、またはその機能性誘導
体を、適当量のキャリヤビヒクルと共に含有する。

更に、製薬法を用いて作用期間を調節できる。

制御放出処方物は、ポリマーを用いて抗−ＩＣＡＭ　−
２抗体またはＩ　ＣＡＭ−２またはこれらの機能性誘導
体と複合化またはこれらを吸収することにより得られる
。制御放出性（徐放性など）は適当な巨大分子（例えば
、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン
、エチレンビニルアセテートコポリマー、メチルセルロ
ース、カルボキシメチルセルロースまたはプロタミンサ
ルフェート）を、およびその濃度並びに配合法を適当に
選択して制御放出とすることができる。もう一つの可能
な、制御放出処方物による作用期間の調節法は抗−４Ｃ
ＡＭ−２抗体、ＩＣＡＭ−２分子またはこれらの機能性
誘導体を、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、
ポリ　（乳酸）またはエチレン−ビニルアセテートコポ
リマーなどのポリマー材料の粒子中に配合することであ
る。また、これら薬剤をポリマー粒子に配合する代りに
、例えばコアセルベーシッン法あるいは界面重合法で調
製されるマイクロカプセル、例えばメチルセルロースま
たはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ　（メチルメ
タクリレート）マイクロカプセル中に、もしくはコロイ
ド状薬剤放出系、例えばりボゾーム、アルブミンマイク
ロスフェア−、マイクロエマルション、ナノ粒子および
ナノカプセルあるいはマクロエマルション中に封入する
こともできる。このような技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’
ｓ　ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ　
（１９８０）に開示されている。

本発明は更に（ａ）抗−炎症剤（例えば、ＩＣＡＭ−２
に結合し得る抗体、ＩＣＡＭ−２に結合し得る抗体７−
７グメント、Ｉ　ＣＡＭ−２、Ｉ　ＣＡＭ−２の機能性
誘導体、およびＩ　ＣＡＭ−１以外のＩＣＡＭ−２の非
−Ｉｇアンタゴニスト）および（ｂ）少なくとも一種の
免疫抑制剤を含む薬理組成物をも包含する。適当な免疫
抑制剤の例はデクサメテゾン、アザチオプリンおよびサ
イクロスポリンＡを含む。

（実施例） これまで、本発明を一般的に記載してきたが、本発明は
以下の実施例を参照することにより、より一層容易に理
解されよう。但し、以下の実施例は本発明を例示するも
のであって、特に述べない限り何等これを制限するもの
ではない。

実施例１　；　Ｉ　ＣＡＭ　−２ｃ　ＤＮＡのクローニ
ングＩＣＡＭ−２をコードし得るｃ　ＤＮＡをクローニ
ングするために、ＣＯ３細胞中での表現によりｃＤＮＡ
を選別するためのＡｒｕｆｆｏ　＆　５ｅｅｄの方法て
、ベトリ皿に結合した機能的に活性な精製ＬＦＡ−１上
で、リガンド担持ＣＯ３，ＩＩ胞をパンニングした。

詳しくいえば、ＬＦＡ−１をＴＳ２／４ＬＦＡ−ＩＭＡ
ｂセファロースイムノアフィニティークロマトグラフィ
ーによってＳ　Ｋ　Ｗ　−３？Ｍ解液から精製し、２ｍ
ＭＭｇＣＩｇおよび１％オクチルグルコシドの存在下で
ｐＨ１１，５にて溶出した。Ｉ、ＦＡｌ　　（ｌｏｔＩ
ｇ／２００１ｊｌｌ／６ｃｍプレート）を、オクチルグ
ルコシドを２　ｍＭ　ＭｇＣ１２含有ＰＢＳ中にて０．
１％まで希釈し、４℃にて一夜インキユベートすること
により、微生物用べ２皿に結合した。プレートを１％Ｂ
ＳＡで遮断し、ＰＢＳ／２　ｍＭ　ＭｇＣＲ２／　０．
２％Ｂ５Ａ１０．０２５％アジド１５０μｇ７ｍｌゲン
タマイシン中で保存した。

Ｇｕｂｌｅｒ　＆　Ｈｏｆｆｍａｎの方法による、ＬＰ
Ｓ−刺激肺静脈内皮細胞からのｃＤＮＡライブラリの合
成を、５ｔａｌｌｎｔＯｎ等の方法（Ｃｅ１１．　　Ｉ
　９８８．　５２゜ｐｐ、　　９２５／９３３）に従っ
て行った。第２のストランド合成に引続いて、このｃＤ
ＮＡをＦ３ｓｔＸ１アダプターに結合（Ｓｅｅｄ、　Ｂ
、等、Ｐｒａｃ、　Ｎａｔｌ。

＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＩＳＡ、　　１９８７．　８
４．９ｐ、　　３３６５−３３６９）Ｌ、＞６００ｂｐ
のｃＤＮＡを、低融点（ＬＭＰ）アガロースゲル電気泳
動法で選別した。次に、このｃＤＮＡをＣＤ　Ｍ　８　
　（Ｓｅｅｄ、　Ｂ。

Ｎａｔｕｒｅ、　　　１　９８７．　　３２９．　　　
ｐｐ、８４０　〜８４２）に接合し、Ｅ、コリホストＭ
Ｃ１０６１／Ｐ３に導入し、培地に塗布して５Ｘ１Ω５
コロニーを得た。このコロニーをＬＢ培地に懸濁し、プ
ールし、４Ｍ？’Ｊ的アルカリ溶解法（Ｍａｎｉａｔｉ
ｓ、　Ｔ、等、Ｍｏ１ｅ−ｃｕＩａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ
：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、　Ｄ−
ルドスブリングハーバーラボラト！Ｊ−（１９８２））
によりプラスミドを調製した。、５０％密集性において
、ＣＯ８細胞の１０ｃｍプレートを、ＤＥＡＥ−デキス
トランを用いてプラスミドｃＤＮＡライブラリー１０μ
ｇ／プレートに移入した（Ｋｉｎｇｓｔｏｎ。

ＲｌＢ、、　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉ
ｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ。

１９８７、９．０．１．〜９．９．６．グリーンバブリ
ッシングアソシエーツ）。ＩＣＡＭ−２は内皮および５
ＫＷ−３細胞上でトリプシン耐性である。トランスフェ
クションの３日後のＣＯ８細胞を０．０２５％トリプシ
ン／　１ｍＭ　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ／　ＨＢ　Ｓ　Ｓ　（Ｇ
ｉｂｃｏ）で処理してｇ濁させ５１（：ｒ−標識ＣＯ８
細胞について以下に述べるように、ＬＦＡ−１被覆プレ
ート上でパンニングした（Ｓｅｅｄ、　Ｂ。等、　Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、１９８７，８４．、ｐｐ
、３３６５〜３３６９）、接着細胞を１０ｍＭまでＥＤ
ＴＡを加えて遊離させた。

プラスミドを、旧ｒｔ上澄中のＣＯ８細胞の接着集団か
ら回収した（Ｈｉｒｔ、　Ｂ、　Ｊ、、　Ｊ、　Ｍｏｌ
、　Ｂｉｏｌ、。

１９６７．２６．ｐｐ、３６５〜３６９）。次いで、Ｅ
、コリ菌株ＭＣ１０６１／Ｐ３をこのプラスミドで形質
転換し、プレート上のコロニーをＬＢ培地中に懸濁し、
プールし、プラスミドをアルカリ−溶解法で調製した。

ＬＦＡ−１−接着移入ＣＯ８細胞の選別およびプラスミ
ドの回収を更に２サイクル繰返した。第３回目のサイク
ル後に得られたプールしたコロニーを、１８μｇ　／　
ｍ　ｌのテトラサイタリンと２０μｇ　／　ｍ　ｌのア
ンピシリンとを含む１００ｍｊ７のＬＢ培地中で飽和に
至るまで成長させた。プラスミドを調製し、１％ＬＭＰ
−アガロースゲル電気泳動法で分画し、ＭＣ１０６１／
Ｐ、を別途９種のサイズの違う画分からのプラスミドで
形質転換した。ＣＯ５細胞のＬＦＡ−１に対する接着の
促進において最大の活性をもつ両分からの各プラスミド
を、Ｘｂａｌによる消化によりインサートのサイズにつ
き調べ、ｃｏｓｉ胞接着アッセイでテストした。これは
、１．１　ｋｂのＩＣＡＭ−２ｃＤＮＡインサートをも
つプラスミド、ｐＣＤＩＣ２，２７を与えた。

接着テストのために、００Ｍ８　（２μｇ／１０ｃ１１
＋プレート）中（７）ＩＣＡＭ−２ブラスミｔ’　ｐｃ
ＤＩｃ２．２７または１．８ｋｂ　Ｓａｌ　Ｉを含むｒ
ｃＡＭ−１構築体、Ｋｐｎｆフラグメント（Ｓｔａｕｎ
ｔｏｎ、　Ｄ、Ｅ。

等、　Ｃｅ１１．　１９８８．　５２．　ｐｐ、　９２
５〜９３３）を、ＤＥＡＥ−デキストランを用いてｃｏ
ｓ細胞中に導入した。トランスフェクションの３日後に
、ＣＯＳ細胞を０．０２５％トリプシン／　１　ｍＭ　
ＥＤＴＡ／ＨＢＳＳで懸濁し、！ＩＩｃ、で標識した。

５μｇ／ＩＩ／のＭＡｂ（表示通り）を含む２ｍＭのＰ
ＢＳ１５％Ｆ　ＣＳ／　２ｍＭ　ＭｇＣｊ！ｚ１０．０
２５％アンド（バッファー）中の約２　Ｘ　１０’　”
Ｃｒ−標識ＣＯＳ細胞を、ＬＦＡ−１被覆６ｃｍプレー
ト中で２５℃にて１時間インキュベートした。非−接着
細胞を緩かに揺することにより除き、パンファーで３回
洗浄した。接着細胞を１０ｍＭまでＥＤＴＡ添加して溶
出し、γ−計数に付した。

この方法の可能性は、予めクローニングしたＩ　ＣＡＭ
　−１ｃ　ＤＮＡ　　（Ｆｉｇ、　Ｉ　Ａ）でトランス
フェクションしたＣＯ３細胞を用いて立証された。

ＩＣＡＭ−１を２５％の移入ＣＯ３細胞上に表現させた
。バンニングの後、非−接着細胞はＩＣＡＭ−１１細胞
を含まず、一方ＥＤＴＡによりＬＦＡ−１被覆プラスチ
ツクから遊離した接着細胞は殆ど完全にＩＣＡＭ−１＋
であった。ＩＣＡＭ−１”細胞のＬＦＡ−１被覆プラス
チツクへの付着はＲＲＩ／Ｉ　　ＩＣＡＭ−Ｉ　　ＭＡ
ｂで阻止された。

ベトｖ皿上へのＬＦＡ−１の被覆はｃｏｓｍ胞接着およ
びＥＤＴＡでの溶出のサイクル５回以上に亘り安定であ
った。プレートは使用と使用との間の期間はＭｇ２＋と
共に４℃で保存した。

ＩＣＡＭ−２をクローニングするために、プラスミドベ
クタＣＤＭＢ中のｃＤＮＡライブラリを、ＩＦＡ−１依
存性接着のＩＣＡＭ−１−依存性およびＩＣＡＭ−１−
独立性成分両者を含むことが明らかにされている内皮細
胞から調製した（Ｄｕｓｔｉｎ。

Ｍ、　Ｌｏ等、Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、　１９８８
．　１０　？、　ｐｐ。

３２１〜３３１）。移入ＣＯ３細胞を、ＩＣＡＭ−１ｃ
ＤＮＡの単離を防止するために加えたＩＣＡＭ−Ｉ　　
ＭＡｂと共にＬＦＡ−１被覆ベトリ皿中でインキュベー
トした。接着細胞をＥＤＴＡで溶出し、プラスミドを単
離し、Ｅニー１」−中で増殖させた。

移入、接着およびプラスミド単離からなるサイクルを３
回行った後、かつ−回のサイズ分画後、３０プラスミド
を制限エンドヌクレアーゼ消化によって分析した。１．
Ｏｋｂを越えるインサートをもつ３種のうちの一つのプ
ラスミドを移入によりＣＯ８細胞に導入したが、これは
ＬＦＡ−１に対する接着を起こした。

この単離プラスミドは、Ｉ　ＣＡＭ−１移入についてみ
られた比率と同様に、移入細胞の高い割合がＬＦＡ−１
に接着性を示した〈第１Ｂ図）。接着はＬＦＡ−ＩＭＡ
ｂで阻止されたが、ＩＣＡＭ−１移入体とは対照的に、
Ｉ　ＣＡＭ−ＩＭＡｂでは阻止されなかった（第１Ｂ図
）。更に、このプラスミドで移入された細胞は４種のＩ
　ＣＡＭ−ＩＭＡｂパネルとは反応しなかった。かくし
て、第２のＬＦＡ−１リガンドをコードするｃＤＮＡに
対するすべての機能上の基準が満たされ、かっこのリガ
ンドは“ＩＣＡＭ−２”と命名された。

実施例２　：　ＩＣＡＭ−２ｃＤＮＡ配列のキャラクタ
リゼーション １０５２ｂｐをもつＩ　ＣＡＭ−２ｃＤＮＡ配列（第２
図〉は６２ｂｐの５′および１６７　ｂｐの３′未翻訳
領域を含む。位置１０１９のＡＡＴＡＣＡポリアデニル
化シグナルは、ＡＡＴＡＡＡとは対照的に、を椎動物の
ｍＲＮＡの約２％でみられ（Ｗｉｃｋｅｎｓ、　Ｍ、等
、５ｃｉｅｎｃｅ、　１９　Ｂ　４．　２２６゜ｐｐ、
１０４５〜１０５１）、その後に１０５８の位置におけ
るｐｏｌｙ（Ａ）要部をもつ１最長の読取り枠は６３の
位置の第１のＡＴＧで始まり、位置８８５におけるＴＡ
Ｇ終止コドンで終端している。

疎水性分析（Ｋｙｔｅ、　Ｊ、等、　Ｊ、　Ｍｏ１．　
Ｂｉｏｌ、＋　１９８２＋１５７、ｐｐ、１０５〜工３
２）および開裂部位近傍のアミノ酸の利用（ｖｏｎ　Ｈ
ｅｉｊｍｅ、　Ｇ、、　ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ　Ｒ
ｅ５ｅａｒｃｈ、　　１９８６．　１４．　ｐｐ、　　
４６８３〜４６９０）は２１残基のシグナルペプチドの
存在を予想している（第２図）。

この予想された成熟配列はアミノ酸１から２０１までの
推定細胞外ドメインを含み、その後には２６残基の疎水
性推定膜貫通ドメインおよび２６残基の細胞質ドメイン
がある。多分α−へリックス状膜貫通セグメントの４つ
のターン（ｔｕｒｎ３）は一方の側にあるスレオニンお
よびセリン残基をもつ両親媒性のものであり、このこと
は膜の面内での自己会合または他の膜タンパクとの会合
の可能性を示唆している。この細胞質ドメインは異常な
塩基性で、疎水性の多くの細胞質ドメインと対照的に平
均して疎水性のものである。成熟ポリペプチドの予想さ
れた質量は２８．１７５ダルトンであり、６つの予想さ
れたＮ−結合グリコシル化サイトを用いた場合には、こ
れは約４６．ｋｄのＩＣＡＭ−２糖タンパクを与えるで
あろう。

実施例３：ＤＮＡおよびＲＮＡハイブリダイゼーション
分析 単離したＩＣＡＭ−２ｃＤＮＡクローンをノーザンおよ
びサザンハイプリダイゼーション両者を用いて分析した
。ノーザンプロットでは変性され、１％アガロースホル
ムアルデヒドゲルで電気泳動しくＭａｎｉａｔｉｓ、　
Ｔ９等、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ３：　ＡＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、　１９８２．　　
Ｄ−ルドスブリングハーバーラボラトリ）、かつナイロ
ン膜に電気泳動転移（Ｚｅｔａ　Ｐｒｏｂｅ、　Ｂｉｏ
Ｒａｄ；　ｅｌｅｅｔｒｏＬｒａｎｓ　−ｆｅｒｒｅｄ
）　　シた６μｇのｐｏｌｙ（Ａ）”　ＲＮＡを用いた
。

転移の完了は、ゲルのＵＶ）ランス−イルミネーション
（ｔｒａｎｓ−ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ）によりまた
該プロットの蛍光光度法により確認した。

ゲノムＤＮＡを業者の推奨する量の５倍のＥｃｏＲＩお
よびＨｉｎｄＩＩＩエンドヌクレアーゼ（ＮｅｗＥｎｇ
ｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ）で消化した。０．８％アガ
ロースゲルでの電気泳動の後、Ｄ　Ｎ　ＡをＺｅｔａ　
Ｐｒｏｂｅに移した。ＲＮＡおよびＤＮＡプロットを、
ｒｃＡＭ−２またはＩ　ＣＡ？ｖｉ　−１ｃ　ＤＮＡ　
（ランダムプライミングでα〔３２Ｐ〕ｄｘＴＰで標識
されている；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ
）を用いて、標準的方法に従って（Ｍａｎ＋ａｔｉｓ、
　’ｒ、笠、Ｍｏ１ｅｃｕｉａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、　ｌ　９８２　
、　コールドスプリングハーバーラボラ）！Ｊ−）、予
備ハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーショ
ンした。

１．１ｋｂＩＣＡＭ−２ｃＤＮＡを１．４　ｋｂ　ｐｏ
ｌｙ（Ａ）”ｍＲＮＡにおよび弱＜　３ｋｂ　ｍＲＮＡ
　（第３Ａ図）にハイブリッド化し、３．３ｋｂおよび
２．４　ｋｂのＩＣＡＭ−１ｍＲＮＡ（第３Ｂ図）から
識別する。ｍＲＮＡを、機能的にｆ　ＣＡＭ−１−依存
性および第２リガンド−依存性のＬＦＡ−１への結合に
つき、キャラクタリゼーシンされている細胞中で調べた
。

ＩＣＡＭ−１ｍＲＮＡはＬＰＳによって内皮細胞中で強
く誘起された（第３Ｂ図、レーン２および３）。一方、
ＩＣＡＭ−２ｍＲＮＡは基本的に内皮細胞中で強く表現
され、かつＬＰＳにより更に誘発されることはなかった
（第３Ａ図、レーン２および３）。このことは、内皮細
胞におけるＬＦＡ−１＝依存、Ｉ　ＣＡＭ−１−独立バ
スウェイ（ｐａｔｈ　ｗａｙ）の強力な基本的かつ非−
誘発性表現およびＩＣＡＭ−１−依存バスウェイの誘発
性と相関関係にある（Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｍ、　Ｌ、等、
　Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、。

１９８８．１０７．ｐｐ、３２１〜３３１〉。

緩和なまたは長期のオートラジオグラム曝露によって示
されるよう１こ、丁ＣＡＭ−２ｍＲＮＡは、Ｒａｍｏｓ
およびＢＢＮＢリンパ芽球、Ｕ９３７単球および５ＫＷ
３１Ｊンバ芽球細胞系を含む広範な様々な型の細胞中に
存在する（第３Ａ、レーン１゜４．６および８）。勿論
、５ＫＷ３、Ｕ　９３　’／およびＢＢＮはＬＦＡ−１
＋細胞に対するＬＦＡ−１依存、ＩＣＡＭ−１−独立接
着性を示すことがわかっている（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　
Ｒ，等、Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

１９８６、　１３７．　ｐｐ、１２７０−１２７４　；
Ｍａｋｇｏｂａ。

Ｍ、Ｗ、等、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　
１９８８．　１８．　ｐｐ。

６３７−６４０）。また、ＬＦＡ−１−被覆プラスチッ
クに対する接着性も示すことがわかっている。Ｌ　Ｆ”
　Ａ　−１−依存性接着のＩＣＡＭ−１−依存成分のみ
示す（Ｍａｋｇｏｂａ、　Ｍ、　Ｗ、等、Ｂｕｒ、Ｊ。

［ｍｍｕｎｏｌ、、　　１９８８．　１８．　ｐｐ、６
３７−６４０）ｔ（ｅ　Ｌ　ａ上皮細胞系は、長いオー
トラジオグラム曝露後でさえもＩＣＡＭ−２ｍＲＮＡを
示さない（第３Ａ図、レーン５）。従って、ＩＣＡＭ−
２の細胞分布はＬＦＡ−１−依存接着のＩＣＡＭ−１独
立底分と一致する。

ＩＣＡＭ−２ｃＤＮＡでハイブリッド化したゲノムＤＮ
Ａのサザンプロット（第３Ｄ図）は単一の支紀的な８．
２　ｋ　ｂのＥｃｏＲｉフラグメントと１４ｋｂの旧ｎ
ｄｌＩ［フラグメントとを示した。このことはコード情
報の殆どをもつ単一の遺伝子が８ｋｂ中にあることを示
唆している。

実施例４：ＩＣＡＭ−１とＩＣＡＭ−２のアミノ酸配列
の比較 ＬＦＡ−１リガンドに関する機能上の類似がみられたの
で、Ｉ　ＣＡＭ−１とＪＣＡＭ−２のア稟）酸配列を比
較した。ＩＣ，ＡＭ−１はＩｇスーパーファミリの一員
であり、その細胞外ドメインは完全に５つのＣ−状ドメ
インからなっている。

Ｉ　ＣＡＭ−２の２０１アミノ酸細胞外ドメインは２つ
のＩｇＣ−状ドメインからなり、推定ドメイン間ジスル
フィドー結合したシスティンは４３〜５６残基離れ、か
つ予想されたβ−ストランド構造をもつ（第４図）。注
目すべきことに、ＩＣＡＭ　−２の２つのＩｇ−様ドメ
インはＩＣＡＭ’−１の最もＮ−末端側の２つのＩｇ−
様ドメインに対１，７（第４図）アミノ酸配列の点で３
４％の相同（平均よりもＡＬＩＧＮスコアが１５ｓ、ｄ
、高い）であり、またＩ　ＣＡＭ−１のドメイン３およ
び４との相同２７％（平均よりもＡＬＩＧＮスコア３　
ｓ、ｄ。

高い）を示す。

ＮＢＲＦおよびＳＷＩ　５Ｓ−ＰＲＯＴタンパクデータ
ベースの探索によれば、わずかにＴｇスーパーファξり
の他の構成員、主としてＨＬＡクラス■抗原との部分的
ドメイン相同性がみられたにすぎなかった。Ｉ　ＣＡＭ
−２は、Ｉ　ＣＡＭ−１よりも幾分低いｒｇ　ドメイン
の保存された残基特性を示す。ＩＣＡＭ−２は夫々接着
分子ＮＣＡＭ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ、　Ｂ、　Ａ、等
、　５ｃｉｅｎｃｅ、　１９８７　、２３６゜７９９−
８０６）およびＭ／’Ｇ（Ｓａｌｚｅｒ、、　Ｊ、Ｌ。

等、Ｊ、Ｃｅ１１Ｂｉｏ１．．１９Ｂ７，１０４，９５
７−９６５）の２つのＮ−末端ドメインに対して１７％
および１９％の類似性をもち、一方　Ｉ　ＣＡＭｌは夫
々１９％および２０％の類似性をもつ。

リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−ｉ）および細胞間
粘着分子−１（ＩＣＡＭ−１）はＭＡｂ選択により同定
され、夫々下リンパ球−媒介殺害およびホモ型接着で阻
害される（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，等Ｊ、Ｉｍｍｕｎ
ｏ１．．１９Ｂ６，１３７．ｐｐ、１２７０−１２７４
　；　Ｄａｖｉｇｎｏｎ、　Ｄ、等、　Ｐｒｏｃ、　Ｎ
ａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、１９８１，７８．　ｐｐ、４５３５
−４５３９）。

逆に、Ｉ　ＣＡＭ−２は、前もっての生化学的または免
疫学的方法によるタンパクの同定を必要としない、機能
性ｃＤＮＡ選択法を用いて規定された。

ＩＣＡＭ−２に対するｃＤＮＡＯ単離は想定したもう一
つのＬＦＡ−１リガンドの存在を確証している。ＬＦＡ
−１に対するＩ　ＣＡＭ−１−依存かつＩ　ＣＡＭ−１
−独立接着について特徴付けされた限られた数の細胞上
でのＩ　ＣＡＭ−２に対するｍＲＮＡの分布は、Ｉ　Ｃ
ＡＭ−２が観察されたＩ　ＣＡＭ−１独立ＬＦＡ−１＝
依存接着のすべてを説明できることを示唆している。

ＩＣＡＭ−２およびＩ　ＣＡＭ−１の２つのＮ−末端ド
メインは、Ｉｇスス−−ファミリーの他の構成員とより
も一層相互に類似している。このことは、ＬＦＡ−１に
結合するＩｇ−様分子のサブファミリーの存在を立証し
ている。Ｉ　ＣＡＭ−１のＬＦＡ−１結合領域は、ドメ
イン除去および系統的アミノ酸置換によってドメインｌ
および２にマツピングされている。従って、構造上およ
び機能上両方に相同性が存在する。Ｉ　ＣＡＭ−２はイ
ンテグリンに結合するＩｇ−族構成員の第２の例である
。細胞接着レセプタ中に、かつインテグリン中には殆ど
序列はないが、細胞外マトリックス成分に対するレセプ
タの数は多数のリガンドを認識することが示された（Ｈ
ｙｎｅｓ、　Ｒ，Ｏ，、Ｃｅ１ｌ。

１９８７＋　　４８．ｐｐ、５４９−５５４　；Ｒｕｏ
ｓｌａｈｔｔ。

Ｅ８等、　５ｃｉｅｎｃｅ、　１９８７　、　２３　Ｂ
　、　Ｉ）ｆ）、　　４９１−４９７）。

Ｉ　ＣＡＭ−１もＩ　ＣＡＭ−２もＲＧＤ配列を含まず
、従ってＬＦＡ−１による認識の態様は、細胞外マトリ
ックス成分を結合するインテグリンとは異っている可能
性がある（Ｄｙｎａｓ、上記文献；Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ
、上記文献）　、　Ｍａｃ　−１およびｐｔ５ｏ、’３
！５（ＬＦＡ−１に密接に関連した白血球インテグリン
）により認識される細胞リガンドは同一のＩｇサブファ
ξリーに属し得る。Ｉ　ＣＡＭ−１は、最近感冒の５０
％の原因となっているライノウィルスの大きな群に対す
るレセプタであることが明らかにされた。ＩＣＡＭ−２
もライノウィルスまたは他のピコルナウィルスに対する
レセプタとして機能し得る。かくして、Ｉ　ＣＡＭ−２
はこのようなウィルスによる感染を抑制（即ち阻止また
は低減）する治療において用いることができる。

ＬＦＡ−１に対する一層のりガントはこの認識法の重要
性を強調し、かつ精密な特異性および機能の多様化を付
与する機序となり得る。Ｉ　ＣＡＭ−１とＩ　ＣＡＭ−
２との間のいくつかの相違点は特に重要である。Ｉ　Ｃ
ＡＭ−１は殆どの細胞上で誘起し得るが、Ｉ　ＣＡＭ−
２表現はテストした限りにおいて細胞上のサイトカイニ
ンにより影響されない。Ｉ　ＣＡＭ−１上の更なる３つ
のドメインは細胞表面から、Ｉ　ＣＡＭ−２のものより
も遠方のＬＦＡ−１結合サイトの存在を反映するものと
期待される。このことは、より密接な細胞−細胞接触が
ＬＦＡ−１：　ＩＣＡＭ−１相互作用よりもＬＦＡ−１
：　ＩＣＡＭ−２相互作用に対して必要とされるであろ
うことを示唆している。ＩＣＡＭ−２を移入したＣ０３
Ｉ胞は、洗浄の剪断力を増すにつれて、ＬＦＡ−１被覆
プラスチツクから、Ｉ　ＣＡＭ−１を移入したＣＯＳ細
胞よりも一層容易に脱離する。これは、ＩＣＡＭ−２が
より小さな寸法をもつことに起因すると思われ、そのた
めに人工的基質上のＬＦＡ−１に受は入れられ難くして
いる。あるいはアフィニティの差異を与える配列の差異
に起因するのかも知れない。

ＩＣＡＭ−１および−２の明確な細胞質ドメインは異る
シグナルを付与でき、もしくは細胞表面での異った局在
化を生じる可能性がある。同様に、ＬＦＡ−１によるシ
グナル発生および細胞骨格との相互作用はＩ　ＣＡＭ−
１またはＩＣＡＭ−２のいずれが結合しているかに応じ
て異る可能性がある。

ＩＣＡＭ　　１および第２ＬＦＡ−１の対−レセプタ、
即ちＩＣＡＭ−２は、従ってＩｇスーパーファミリーの
一すブファより−をなす（Ｓ　ｔａｕｎ　ｔｏｎ　。

Ｄ、　Ｅ、等、　Ｃｅ１ｌ、　　１９８８．　５２．　
ｐｐｒ　　９２５−９３３：これを本発明の参考文献と
する）。ＩＣＡＭ−１は５つのｒｇ−様Ｃドメインを有
し、一方Ｉ　ＣＡＭ−２はこのようなドメインを２つも
ち、これらはＩ　ＣＡＭ−１のアミノ末端ドメインに最
も相同である。様々な型の細胞上に表現されたＩ　ＣＡ
Ｍ−１および−２は、免疫応答における誘発並びにエフ
ェクタ機能を包含する様々な白血球接着依存機能をもつ
。Ｉ　ＣＡＭ−１の表現はサイトカイニンにより強く誘
発し得、従ってＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１接着系は炎症
中に白血球の移動および局在化を誘導できる（Ｒｏｔｈ
ｌｅｉｎ、　Ｒ，＋　Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　１９８６．　１３７．　ｐｐ、
　　１２７０−１２７４　；Ｍａｒｌｉｎ、　Ｓ、　Ｄ
、等、Ｃｅ１ｌ、　１９８７゜５　Ｌ　ｐｐ、　　８１
３−８１９　；Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ、　Ｔ、　Ｋ、等。

Ａｄｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１９８９　、　４６　
、　ｐＬ　　１４９−１８２　；Ｄｕｓｔｉｎ、　Ｍ、
　Ｌ、等、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、↑ｏｄａｙ、　１９８８
゜９、ｐｐ、２１３−２１５　：これらを本発明の参考
文献とする）。

ＬＦＡ−１結合にとって重要なものとして上で定義した
Ｉ　ＣＡＭ−１残基は他のＩ　ＣＡＭに保存されている
（Ｓｔａｕｎｔｏｎ、　Ｄ、　Ｅ、等、Ｎａｔｕｒｅ、
　１９８９　。

３３９、ｐｐ、６１−６４：これを本発明の参考文献と
する）。ヒトＩ　ＣＡＭ−１は二十日ネズξのＩ　ＣＡ
Ｍ−１と５０％類似であり、かつヒトＩＣＡＭ−２とは
３５％類似である（Ｓｔａｕｎｔｏｎ、　Ｄ、　Ｅ、等
。

上記文献）。ＬＦＡ−１結合にとって最も決定的な残基
、Ｒ３４およびＣ７３はマウスＩＣＡＭ−１およびヒト
Ｉ　ＣＡＭ−２に保存されている。この点は、マウスＩ
　ＣＡＭ−１およびヒトＩＣＡＭ２のいずれもがヒトＬ
ＦＡ−１結合能をもつことと一致している（Ｓｔｓｕｎ
ｔｏｎ、　Ｄ、　Ｂ、＋上記文献）。

ＬＦＡ−１の結合に影響するＮ１５６における一つのＤ
２Ｎ−結合グリコシル化サイトもＩＣＡＭ−２に維持さ
れている。ライノウィルス−１４結合にとって重要な数
種の残基、Ｃ５８、Ｇ４６、Ｄ７１、Ｋ７７およびＲ１
６６はマウスＩＣＡＭ−１またはヒトＩＣＡＭ−２に保
存されていない（Ｓｔａｕｎｔｏｎ、　Ｄ、　Ｅ、等、
　Ｃｅ１１．　１９８９．　５６．　ｐｐ。

８４９−８５３：これを本発明の参考文献とする）この
ことは、マウス細胞（Ｃｏｌｏｎｎｏ、　Ｒ，Ｊ、等、
Ｊ。

Ｖｉｒｏｌ、、　　１９８６．　５７．　ｐｐ、　７−
１２）およびＩＣＡＭ−２のラインウィルス−１４に対
する見掛は上の非結合性と一致している。

以上、本発明をその特定の態様に関連して記載してきた
が、これは更に変更することが可能であり、かつ本願は
、一般に本発明の原理に従う本発明のあらゆる変更、利
用もしくは改作を含み、かつ本発明の関与する当技術の
範囲内で公知もしくは通常実施されるような本発明の開
示から逸脱したものをも、上記の特許請求の範囲に示し
た基本的特徴に通用できる限り包含するものと理解すべ
きである。

【図面の簡単な説明】

第１図はＬＦＡ−１で被覆したプラスチックに対する、
Ｉ　ＣＡＭ−１およびＩ　ＣＡＭ−２を表現する移入Ｃ
Ｏ３！［１胞の結合を示す。Ａ）ＩＣＡＭ−１ｃＤＮＡ
を移入したＣＯＳ細胞をＬＦＡ−１−被覆プレート上に
てパニングしくｐａｎｎｅｄ）　、ＩＣＡＭ−ｌの表現
を、−次ＭＡｂとして抗−ＩＣＡＭ−１モノクロ一ナル
抗体ＲＲＩ／１を用いた間接免疫螢光フローサイトメト
リーによって分析した。 点線、破線および実線は夫々パニングしなかった細胞、
付着しなかった細胞および付着細胞に対応する。Ｂ）”
Ｃｒ−標識移入ＣＯＳ細胞（ＩＣＡＭ＝１またはＩＣＡ
Ｍ−２を表現）はＭＡｂの存在下でＬＦＡ−１−被覆ブ
ラスチンクに結合した。 第２図はＩ　ＣＡＭ−２のヌクレオチドおよびアミノ酸
配列を示す。このアミノ酸配列は、シグナルペプチドの
予想開裂サイトに続く第１の残基から番号付けされてい
る。該疎水性の推定シグナルペプチドおよびトランスメ
ンプラン配列（ＴＭ）には下線が施されている。可能な
Ｎ−結合グリコシル化サイトを四角で囲んである。推定
ポリアデニル化シグナルＡＡＴＡＣＡには上に線を施し
た。 Ｉ　ＣＡＭ−２ｃＤＮＡの両ストランドは、製造業者の
推奨に従って（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅ＋　Ｕ、　Ｓ、　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）相補的オリゴヌクレオチドプラ
イマーの逐次合成およびジデオキシヌクレオチド鎖終止
シーケンシングによりＣＤＭＢ内で配列決定されている
（Ｓａｎｇｅｒ、　Ｆ、等＋Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　
Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、。 １９７７．７土、ｐｐ、５４６３−５４６７）。 第３図はＲＮＡおよびＤＮＡハイブリダイゼーション分
析の結果を示す。ノーザン（ＡおよびＢ）およびサザン
（Ｃ）プロットを１．ｌ　ｋ　ｂ”Ｐ−標識Ｉ　ＣＡＭ
　−２ｃ　ＤＮＡ　（ＡおよびＣ）に対しハイブリッド
化し、かつ３ｋｂ”Ｐ−標識ＩＣＡＭ−１ｃＤＮＡ　（
Ｂ）に対し再ハイブリッド化した。 （ＡおよびＢ）：レーン１＝バーキット（Ｂｕｒｋｉｔ
ｔ）リンパ腫細胞系、ラモス（Ｒａｍｏｓ）からのポリ
（＾）゛ＲＮＡ；レーン２＝内皮細胞；レーン３＝ＬＰ
Ｓで３時間刺激された内皮細胞；レーン４＝ＥＢＶ不死
化Ｂ　−ＩＪンパ芽球細胞系、ＢＢＮ；レーン５−上皮
癌細胞系、ＨｅＬａ　；レーン６およびレーン７＝Ｔリ
ンパ腫細胞系、Ｊｕｒｋａ　ｔおよび５ＫＷ−３；およ
びレーン８＝前単球細胞系、Ｕ９３７（いずれも６μｇ
）。（Ｃ）６μｇのＢ細胞系、ＢＬ−２からのゲノムＤ
ＮＡ　（レーン１および４）；ＥＲ−ＬＣＬ　（レーン
２および５）およびＲａｊｉ　（レーン３および６）、
レーン１〜３はＥｃｏＲＩでまたレーン４〜６はＨｉｎ
ｄｌｌｌで夫々消化した。ＩＣＡＭ−２およびＩ　ＣＡ
Ｍ−１のｍＲＮＡは矢印で示しである。 第４図はＩ　ＣＡＭ−１に対するＩＣＡＭ−２の相同を
示す。ＩＣＡＭ−２の全体で２０１の残基の細胞外配列
は、ＡＬＩＧＮプログラム（Ｄａｙｈｏｆｆ。 Ｍ、　０．等、Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、、　
　１９８３．　９上。 ｐｐ、５２４−５４５）を利用し、かつ検査によりＩ　
ＣＡＭ−１の残基１〜１８５とを一列に並べた。 ＩＣＡＭ−２残基に番号を付した。同等部は四角で囲ん
だ。ＤｌおよびＤｔはＩ　ＣＡＭ−２およびＩ　ＣＡＭ
−１のｒｇ状ドメインの環境を示す。 Ｉ’ＣＡＭ−２のβ−ストランド予想部（Ｃｈｏｕ、Ｐ
Ｊ。 等＋　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＋　　１９７４＋ユ、
ｐｐ、２１１−２４５）は上部に線を施し、かつＩ　Ｃ
ＡＭ−１のそれには下線を施した。 図面の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ、１ １Ｕ、ΔＭ−１ １［ΔＭ−２ ＦＩＧ、２゜ （その１） ＣＴＡＡＡＧＡＴＣＴ　　ＣＣＣＴＣＣＡＧＧＣＡＧＣ
ＣＣＴＴＧＧＣＴＧＧＴＣＣＣＴＧＣＧＡＧＣＣＣＧＴ
ＧＧＡＧＡＣＴＧＣＣＡＧ　　ＡＧ　　ＡＴＯＴＣＣＴ
ＣＴ　　ＴＴＣＧＧＴ　　ＴＡＣＡＧＧ　　ＡＣＣＣＴ
Ｇ　　ＡＣＴ　　ＧＴＧ　　ＧＣＣＣＴＣＴＴＣＡＣＣ
ＣＴＧ　ＡＴＣＴＣＣＴＧＴ　ＣＣＡ　ＧＧＡＴＣＧ　
ＯＡＴ　ＧＡＧ　ＡＡＧ　ＧＴＡ　　ＴＴＣＤＥＫＶＦ ＧＡＧ　ＧＴＡ　　ＣＡＣＧＴＧ　ＡＧＧ　ＣＣＡ　Ａ
ＡＧ　入＾Ｇ　　ＣＴＧ　ＧＣＧ　ＧＴｒ　ＡＧＣＣＡ
Ａ　ＡＧＧ　ＴＣＣＥＶＨＶＲＰＫＫＬＡＶＳＱＲ８ ＧＧＴ　　ＣＴＧ　　ＧＡＧ　　ＡＣＣＴＣＴ　　ＧＴ
Ａ　入ＡＴ　　ＡＡＧ　　ＡＴｒ　　ＣＴＣＣＴＧ　　
ＧＡＣＧＡＡ　　ＣＡＧ　　ＧＣＴＧＬＥＴＳＬＮＫ　
　　工　　Ｌｌ、ＤＥＱＡＣＴＧ　　ＣＡＡ　　ＣＣＣ
ＡＣＴ　　ＴＴＧ　　ＧＴＧ　　ＧＣＴ　　ＧＴＧ　　
ＧＧＣＡＡＧ　　ＴＣＣＴＴＣＡＣＣＡＴＴ　　ＧＡＧ
ＬＱＰＴＬＶＡＶＧＫＳＦＴ　　　工　　ＥＴＧＣＡＧ
Ｇ　　ＧＴＧ　　ＣＣＣＡＣＣＧＴＧ　ＧＡＧ　ＣＣＣ
ＣＴＧ　　ＧＡＣＡＧＣＣＴＣＡＣＣＣＴＣＴＴＣＣＩ
ＩＶＰＴＶＥＰＬＤＳＬＴＬＦ ＦＩＧ、２ （その２） ＣＴＧ　　Ｔ１’ＣＣＧＴ　　ＧＧＣＭＴ　　ＧＡＧ　
　ＡＣＴ　ＣＴＣＣＡＣＴＡＴ　　ＧＡＧ　　ＡＣＣＴ
ＴＣＧＧＧ　　ＡＡＧＬＦＲＧ　　Ｅ＝！＝ヨｒ、ＨＹ
ＥＴＦＧＫＣＴＧ　ＧＡＣＴＴＧ　ＡＴＧ　ＴＣＴ　Ｃ
ＧＣＧＧＴ　ＧＧＣＡＡＣＡＴＣＴＴｒ　ＣＡＣＡＡＡ
　ＣＡＣＴＣＡＬＤＬＭＳＲＧＧＮＩＦＨＫＨ５ ＧＣＣＣＣＧ　　入ＡＣ入子Ｇ　　ＴＴＧ　　ＧＡＧ　
　ＡＴＣＴＡＴ　　ＧＡＧ　　ＣＣＴ　　ＧＴＧ　　Ｔ
ＣＧ　　ＧＡＣＡＧＣＣＡＧＡＰＫＭＬＥＩＹＥＰＶＳ
ＤＳＱ ＡＴＣＧＴＣＡＴＣＡＴＡ　ＧＴＣＡＣＧ　ＧＴＧ　Ｃ
ＴＧ　ＴＣＧ　ＧＴＧ　ＴｒＧ　ＣｒＧ　ＴＣＣＣＴＧ
　ＴＴＣＧＴＧ　　ＡＣＡ　　ＴＣＴ　　ＧＴＣＣＴＧ
　　ＣＴＣＴＧＣＴｉｃ　　ＡＴＣＴｒＣＧＧＣＣＡＧ
　　ＣＡＣＴＴＧ　　ＣＧＣＨＬＲ ＣＡＣＣＡＧ　　ＣＧＧ　　ＡＴＧ　　ＧＧＣＡＣＣＴ
ＡＣＧＧＧ　　ＧＴＣＧＧＡ　　ＧＣＧ　　ＧＣＴ　　
ＴＧＧ　　ＡＧＧ　　八ＧＧＨＱＲＭＧＴＹＧＶＧＡＡ
ＷＲＲ ＣＴＣＣＣＣＣＡＧ　ＧＣＣＴＴＣＣＧＧ　ＣＣＡ　Ｔ
ＡＧ　ＣＡＡＣＣＡＴＧＡＧ　ＴＧＧＣＡＴＧＧＣＣＬ
ＰＱＡＦＲＰ　　　真 ＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＧ入ＡＴＡＣＡＡＡＣＡＣＣＴＧ
ＧＡＣＴｒ　入入〜リリーーＡＡＡＡＡＡＡＦＩＧ、、
。 （その１） ＦＩＧ、、Ａ （その２） 手 続 補 正 書 （方式） ％式％ １、事件の表示 平底２年特許願第５７８６９号 ３、補正をする者 事件との関係 出 願人 ４、代 理 人 ７、補正の内容 別紙のとおり

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. （１）天然の異物を実質的に含まないＩＣＡＭ−２また
   はその機能性誘導体。
2. （２）該ＩＣＡＭ−２が付随的に細胞またはウィルスの
   表面上に存在する分子に結合できる請求項１記載のＩＣ
   ＡＭ−２。
3. （３）該分子が以下のものからなる群から選ばれる少な
   くとも一種のポリペプチドを含む請求項２記載のＩＣＡ
   Ｍ−２分子。 （ａ）−Ｓ−Ｓ−Ｆ−Ｇ−Ｙ−Ｒ−Ｔ−Ｌ−Ｔ−Ｖ−Ａ
   −Ｌ−；（ｂ）−Ｄ−Ｅ−Ｋ−Ｖ−Ｆ−Ｅ−Ｖ−Ｈ−Ｖ
   −Ｒ−Ｐ−Ｋ−；（ｃ）−Ｇ−Ｓ−Ｌ−Ｅ−Ｖ−Ｎ−Ｃ
   −Ｓ−Ｙ−Ｔ−Ｃ−Ｎ−；（ｄ）−Ｈ−Ｙ−Ｌ−Ｖ−Ｓ
   −Ｎ−Ｉ−Ｓ−Ｈ−Ｔ−Ｄ−Ｖ−；（ｅ）−Ｓ−Ｍ−Ｎ
   −Ｓ−Ｎ−Ｖ−Ｓ−Ｖ−Ｙ−Ｑ−Ｐ−Ｐ−；（ｆ）−Ｆ
   −Ｔ−Ｉ−Ｅ−Ｃ−Ｒ−Ｖ−Ｐ−Ｙ−Ｖ−Ｅ−Ｐ−；（
   ｇ）−Ｇ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｌ−Ｈ−Ｙ−Ｅ−Ｔ−Ｆ−Ｇ−
   Ｋ−；（ｈ）−Ｔ−Ａ−Ｔ−Ｆ−Ｎ−Ｓ−Ｔ−Ａ−Ｄ−
   Ｒ−Ｅ−Ｄ−；（ｉ）−Ｈ−Ｒ−Ｎ−Ｆ−Ｓ−Ｃ−Ｌ−
   Ａ−Ｖ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−；（ｊ）−Ｍ−Ｖ−Ｉ−Ｉ−Ｖ−
   Ｙ−Ｖ−Ｖ−Ｓ−Ｖ−Ｌ−Ｌ−；（ｋ）−Ｓ−Ｌ−Ｆ−
   Ｖ−Ｙ−Ｓ−Ｖ−Ｌ−Ｌ−Ｃ−Ｆ−Ｉ−；および（ｌ）
   −Ｍ−Ｇ−Ｔ−Ｙ−Ｇ−Ｖ−Ｒ−Ａ−Ａ−Ｗ−Ｒ−Ｒ−
   Ｏ。
4. （４）ＩＣＡＭ−２またはその機能性誘導体をコードし
   得る組換えＤＮＡ分子。
5. （５）該ＩＣＡＭ−２またはその機能性誘導体が以下の
   ものからなる群から選ばれる少なくとも一種のポリペプ
   チドをコードし得る請求項４記載のＤＮＡ分子。 （ａ）−Ｓ−Ｓ−Ｆ−Ｇ−Ｙ−Ｒ−Ｙ−Ｌ−Ｙ−Ｖ−Ａ
   −Ｌ−；（ｂ）−Ｄ−Ｅ−Ｋ−Ｖ−Ｆ−Ｅ−Ｖ−Ｈ−Ｖ
   −Ｒ−Ｐ−Ｋ−；（ｃ）−Ｇ−Ｓ−Ｌ−Ｅ−Ｖ−Ｎ−Ｃ
   −Ｓ−Ｙ−Ｙ−Ｃ−Ｎ−；（ｄ）−Ｈ−Ｙ−Ｌ−Ｖ−Ｓ
   −Ｎ−Ｉ−Ｓ−Ｈ−Ｔ−Ｄ−Ｖ−；（ｅ）−Ｓ−Ｍ−Ｎ
   −Ｓ−Ｎ−Ｖ−Ｓ−Ｖ−Ｙ−Ｑ−Ｐ−Ｐ−；（ｆ）−Ｆ
   −Ｙ−Ｉ−Ｅ−Ｃ−Ｒ−Ｖ−Ｐ−Ｙ−Ｖ−Ｅ−Ｐ−；（
   ｇ）−Ｇ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｌ−Ｈ−Ｙ−Ｅ−Ｔ−Ｆ−Ｇ−
   Ｋ−；（ｈ）−Ｔ−Ａ−Ｙ−Ｆ−Ｎ−Ｓ−Ｙ−Ａ−Ｄ−
   Ｒ−Ｅ−Ｄ−；（ｉ）−Ｈ−Ｒ−Ｎ−Ｆ−Ｓ−Ｃ−Ｌ−
   Ａ−Ｖ−Ｌ−Ｄ−Ｌ−；（ｊ）−Ｍ−Ｖ−Ｉ−Ｉ−Ｖ−
   Ｔ−Ｖ−Ｖ−Ｓ−Ｖ−Ｌ−Ｌ−；（ｋ）−Ｓ−Ｌ−Ｆ−
   Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｖ−Ｌ−Ｌ−Ｃ−Ｆ−Ｉ−；および（ｌ）
   −Ｍ−Ｇ−Ｙ−Ｙ−Ｇ−Ｖ−Ｒ−Ａ−Ａ−Ｗ−Ｒ−Ｒ−
   。
6. （６）該分子が更に細胞中のＩＣＡＭ−２またはその機
   能性誘導体を表現できる請求項４記載の組換えＤＮＡ分
   子。
7. （７）ＩＣＡＭ−２およびその機能性誘導体からなる群
   から選ばれる分子に結合できる抗体または抗体フラグメ
   ント。
8. （８）該分子が細胞表面に存在する受容体に結合するこ
   とができ、かつ該抗体の該分子への結合が、該分子のも
   つ該細胞のレセプタ分子への結合能を減じる請求項７記
   載の抗体。
9. （９）請求項７記載のモノクローナル抗体産生ハイブリ
   ドーマ細胞。
10. （１０）ＩＣＡＭ−２またはその機能性誘導体に結合し
    得る抗体を産生する所定のハイブリドーマ細胞の樹立法
    であって、 （ａ）動物をＩＣＡＭ−２表現細胞で免疫し、 （ｂ）該動物の牌細胞とミエローマ細胞系とを融合し、 （ｃ）該融合された牌細胞およびミエローマ細胞に抗体
    分泌ハイブリドーマ細胞を形成せしめ、および （ｄ）ＩＣＡＭ−２に結合し得る抗体を産生する所定の
    ハイブリドーマ細胞を得るために該ハイブリドーマ細胞
    をスクリーニングする 各工程を含むことを特徴とする上記方法。
11. （１１）炎症の治療を要する哺乳類罹患体に、該炎症を
    抑制するのに十分な抗炎症剤を与えることを含む該炎症
    の治療法であって、該抗炎症剤が、ＩＣＡＭ−２に結合
    し得る抗体、ＩＣＡＭ−２に結合し得る抗体フラグメン
    ト、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−２の機能性誘導体、およ
    び分子のＣＤ−１８族の構成員またはＩＣＡＭ−１以外
    のＩＣＡＭ−２の非−Ｉｇアンタゴニストからなる群か
    ら選ばれることを特徴とする上記治療法。
12. （１２）該炎症が遅延型過敏反応、幹癬症状、自己免疫
    性疾患、臓器移植または組織移植拒絶反応からなる群か
    ら選ばれる一つの状態に対する応答の結果である請求項
    １１記載の方法。
13. （１３）該自己免疫疾患がレイノード症候群、自己免疫
    性甲状腺炎、ＥＡＥ、多発性硬化症、紅班性狼瘡および
    慢性関節リウマチからなる群から選ばれるものである請
    求項１２記載の方法。
14. （１４）上記炎症が、成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）
    、敗血症または外傷にとって二次的な多発臓器傷害症候
    群、心筋または他の組織の再かん流傷害、急性糸球体腎
    炎、反応性関節炎、急性炎症性成分を有する皮膚疾患、
    急性化膿性髄膜炎または他の中枢神経系炎症性疾患、熱
    傷害、血液透析、白血球除去血輸血、潰瘍性大腸炎、ク
    ローン疾患、壊死性全腸炎、顆粒球輸液関連症候群およ
    びサイトカイン誘発毒性からなる群から選ばれる状態に
    対する応答の結果である請求項１１記載の方法。
15. （１５）移動のためにＣＤ−１８族の機能性構成員を必
    要とする造血性腫瘍細胞の転移を抑制するに際し、この
    抑制治療を要する患者に該転移を抑制するのに十分な量
    の薬剤を与えることを含む該転移の抑制方法において、
    該薬剤がＩＣＡＭ−２に結合し得る抗体、ＩＣＡＭ−２
    に結合し得る毒素−誘発性抗体、ＩＣＡＭ−２に結合し
    得る抗体フラグメント、ＩＣＡＭ−２に結合し得る、毒
    素−誘発性抗体フラグメント、ＩＣＡＭ−２の機能性誘
    導体、およびＩＣＡＭ−１以外のＩＣＡＭ−２の非−Ｉ
    ｇアンタゴニストまたは分子のＣＤ−１８族の構成員か
    らなる群から選ばれることを特徴とする上記方法。
16. （１６）ＩＣＡＭ−２表現腫瘍細胞の成長を抑制する必
    要のある患者に、該成長の抑制に十分な量の薬剤を投与
    することを含み、該薬剤がＩＣＡＭ−２に結合し得る抗
    体、ＩＣＡＭ−２に結合し得る毒素−誘発性抗体、ＩＣ
    ＡＭ−２に結合し得る抗体フラグメント、ＩＣＡＭ−２
    に結合し得る毒素−誘発性抗体フラグメント、ＩＣＡＭ
    −２、ＩＣＡＭ−２の機能性誘導体、ＩＣＡＭ−１以外
    のＩＣＡＭ−２の非−Ｉｇアンタゴニストまたは分子の
    ＣＤ−１８族の構成員、毒素−誘発性の、ＣＤ−１８族
    分子の構成員、およびＣＤ−１８族分子の構成員の毒素
    −誘発性機能性誘導体からなる群から選ばれることを特
    徴とするＩＣＡＭ−２表現腫瘍細胞成長の抑制方法。
17. （１７）ＬＦＡ−１−表現腫瘍細胞の成長を抑制する必
    要のある患者に、該成長を抑制するのに十分な量の毒素
    を投与することを含み、該毒素が、毒素−誘発性ＩＣＡ
    Ｍ−２および毒素−誘発性の、ＩＣＡＭ−２の機能性誘
    導体からなる群から選ばれることを特徴とするＬＦＡ−
    １−表現腫瘍細胞の成長抑制方法。
18. （１８）ＩＣＡＭ−２に結合し得る抗体、ＩＣＡＭ−２
    に結合し得る抗体フラグメント、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡ
    Ｍ−２の機能性誘導体、およびＩＣＡＭ−１以外のＩＣ
    ＡＭ−２の非−ＩｇアンタゴニストまたはＣＤ−１８族
    の構成員からなる群から選ばれる薬剤を含むことを特徴
    とする薬理組成物。
19. （１９）更に免疫抑制剤を含む請求項１８記載の薬理組
    成物。
20. （２０）（ａ）ＩＣＡＭ−２ｍＲＮＡにハイブリッド化
    し得る核酸分子の存在下でＩＣＡＭ−２を表現する細胞
    または該細胞の抽出物をインキュベートする工程、およ
    び （ｂ）該核酸分子が該細胞またはその抽出物中に存在す
    る相補的核酸分子にハイブリッド化されたか否かを決定
    する工程、 を含むＩＣＡＭ−２を表現する細胞の存在を検出する方
    法。