JPH02306999A - Ｌｆａ―１のアルファーサブユニットから成る白血球付着レセプター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 又−叫（２）覆を多づ所 本発明は、白血球付着レセプター（Ｉｅｕｋｏｃｙ　ｔ
ｅａｄｈｅｓｉｏｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）　Ｌ　Ｆ　Ａ
　−１に関する。さらに、本発明は、この分子（ＬＦＡ
−１）をコードするＤ　Ｎ　Ａ配列をクローニングする
ことに関する。本発明は、部分的に政府の援助によって
なされたものであり、該政府はこの発明に関する特定の
権利を所有している。

ｌ鴇１挾止■内所 免疫系は、バクテリア、ウィルスなどの異物から動物を
防護する役割を果たす。アイゼン（Ｅｉｓｅｎ。

＋１．　Ｗ、）は、この防御系に関する優れた検討を行
なっている〔恒見並煎坏■＊第３版、米国ペンシルバニ
゛？州１１ａｒｐｅｒ　＆　Ｒｏｗ　（１９８０）　、
　　２９０〜２９５頁、３８１〜４１８頁参照〕。異物
に対して動物を防御する免疫系の能力は、白血球として
知られる血球の存在と機能に太き（依存する。白血球が
そのような防御能を発揮するためには、細胞隻質および
細胞外基質に白血球が付着することが必要であるという
ことが見出されている。

例えば、白血球は内皮細胞に付着しなければならず、こ
れによって、白血球が循環系から炎症の生じている部位
へと移動することができるのである。さらに、通常の免
疫応答が生じ得るように、白血球は抗原提示細胞に付着
しなければならない。

白血球はまた適当な標的細胞にも付着しなければならず
、かくして、ウィルス感染細胞（腫瘍細胞）の溶菌が起
こる。さらに、白血球は、各種の活性タンパク質（例え
ば１Ｃ３ｂ：補体の第三成分の活性型）に付着できる能
力を有することにより、微生物や細胞の残滓を効率的に
貧食し除去し得ることが必要である。このように、白血
球の付着は、通常の防御系が機能するための必要条件で
ある。

移植のような場合にはこの防御系を抑制することが望ま
れる。宿主が移植組織を異物とみなし該組織に対して免
疫応答が開始されるからである。したがって、白血球付
着は、移植されたＭｉ織や器官に対する拒絶反応にも関
与している。かくして、白血球付着を解明することによ
り、感染に対する動物の抵抗能を高めるか、あるいは移
植Ｍｉ織に対する動物の拒絶能力を抑制することができ
るであろう。

最近、白血球付着に関与する白血球の表面分子が、ハイ
ブリドーマ技術を用いて明らかにされた。

節単に言えば、ヒトＴ細胞（Ｄａｖｉｇｎｏｎ他、Φ１
゜Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、米国、７８　：
　４５３５〜４５３９四９８１）参照〕とマウス肺臓細
胞［Ｓｐｒｊｎｇｅｒ他−Ｅ−（Ｉｒ、Ｊ、−一息犯四
一シユ」−：　３０１〜３０６（１９７９）参照〕に対
するモノクローナル抗体が、白血球表面に結合し、−Ｆ
述したような付着に関連する機能を抑制することが見出
された（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、
　　４４　：　２６６０〜：？６６３　（１９８５））
。これらのモノクローナル抗体により認識された分子は
、付着レセプター分７′（ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｒｅｃｅ
ｐｔｏｒ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）の「リンパＨｉ能関連
抗原＝１群（Ｌｙ＋ｎｐｈｏｃｙｔｅ　ＦｕｎＣｔｉｏ
ｎ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　　Ａｎｔｉｇｅｎ　−Ｉ　
Ｆａ＠ｉｌｙ　　：　　Ｌ　　Ｆ　　Ａ　−１ｊｐ）　
　Ｊとして知られる一群の白血球付着レセプターから成
る。

付着レセプター分子のＬＦＡ−１群は、互いに関係の深
い３種類の細胞表面糖クンバク質（ｃｅｌｌｓｕｒｆａ
ｃｅ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）を含有する。これ
らの８）！タンパク質は、炎症において細胞／細胞間相
互作用を仲介することが見出されている。そして、これ
らの塘タンパク質は、ｒ　Ｌ　Ｆ　Ａ　−１（Ｉｙｍｐ
ｈｏｃｙＬｅｆｕｎｃｔｉｏｎ−ａｓｓｏｃｊａｔｅｄ
　ａｎｔｉｇｅｎ　−１：リンパ球機能関連抗原−１」
、ｒＭａｃ−１Ｊおよびｒｐ１５０，９５−ｉとそれぞ
れ称されている。ＬＦＡ−１は殆んどの白血球の表面に
見出される（Ｓｐｒｉｎｔｅｒ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ、−
血、、６８：１１１〜１３５　（１９８２））が、Ｍａ
ｃ−１およびｐ１５０．９５は、主として、マクロファ
ージ、顆粒球その他の大村リンパ球上に見出されている
〔伽償四ＬＬ他工」門Ｖが−」背、。

６８　：　１１１〜１３５　（１９８２）　　；Ｋｅｉ
ｚｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｏ＋ｕｎｏ１．、　１
５　：　Ｉ　Ｌ４２〜ｌ　１４７（１９８５））。

ＬＦＡ−１群の糖タンパク賞は、ヘテロダイマーから構
成されており、糖タンパクの各々は、アルファーサブユ
ニットと、該サブユニットが非共有結合的に結合したベ
ーターサブユニットとを含む。このＬＦＡ−１群のアル
ファーサブユニットは互いに異なることが見出されてお
り、それぞれ、ＣＤＩ　（ａ、ＣＤＩ　ｌ　ｂおよびＣ
Ｄ１１ｃと称されている。グリコジル化されたこれらの
アルファーサブユニットの概略の分子層は、それぞれ、
１８０．１７０および１５０Ｋｄである。これに対して
、付着レセプターのＬＦＡ−１群のベーターサブユニッ
トは互いに同一であり、９５Ｋｄの分子層を有すること
が見出されている（５１１ｃｈｅｚ・Ｍａｄｒｉｄ他、
訓皿１ｅｄ、、上５８：１７８５〜１８０３　　（１９
８３）；にｅｉｚｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ。

（１９８５）　　；　Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他
、Ｌ」狂肛。

呻、、１５８：５８６〜６０２　　（１９８３））。

ＬＦＡ−１群の塘タンパク質のアルファーサブユニット
は、ベーターサブユニットを共有することによる広範な
相同性を示さないが、該糖タンパク質のアルファーサブ
ユニットを詳細に分析してみると、それらの間にかなり
の近似性が存することが示された。付着分子である糖タ
ンパク質群のアルファーサブユニットとベーターサブユ
ニνＦ・の近似性に関する検討は５ａｎｃｈｅｚ・Ｍａ
ｄｒｉｄによって行なわれている〔ムーｍ−虹ユ」ゆ、
、上］立：５８５〜６０２　（１９８３）　　；ム」ｖ
ｅｒ、　Ｍｅｄ、。

１５８：１７８５〜１８０３　　（１９８３）　　：Ｍ
ｉｌｌｅｒ他、Ｊ、　ｒｍｍｕｎｏｌ、、　ｌユ８　：
　２３８１〜２３８３（１９８７））　　。

ＬＦＡ−１群の重要性は、当初、モノクローナル抗体（
特定のアルファーサブユニットか、または、共通のベー
ターサブユニットに対して結合化があるもの）が白血球
の機能（付着に依存する）を抑制する能力を有すること
を研究する過程で認識されたＣ５ａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄ
ｒｉｄ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、米盈ユ１工：　７４．８９〜７
４９３（１９８２）　　；　Ｂｅ１ｌｅｒ他、Ｊ、　Ｃ
９旦−Ｍｅｄ、　１５−Ｅｉ：１０００〜１００９　（
１９８２））。

最近、白血球の細胞表面に付着タンパク質Ｍａｃ−１を
通常の量で出現できない人が存在することが明らかにさ
れている。この病気は［白血球付着不全（１，ｅｕｋｏ
ｃｙｔｅ　Ａｄｈｅｓｉｏｎ　ＤｅｆｉｃｉｅｎｃｙＪ
すなわちｒＬＡＤＪと呼ばれており、その特徴は、慢性
的で再発性の感染が起こることであり、これにその他の
臨床症状が加わる（Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｆｅｄ、　Ｐ
ｒｏｃ、。

４４　　：　　２６７　１〜２６７７　　（１９８５）
　　：Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｊ。Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｄｉ
ｓ、、　１５２　：　６６８〜６８９（１９８５））。

ＬＡＤ患者からの白血球は、通常人の白血球がＬＦＡ−
１群に特異的なモノクローナル抗体により拮抗されたと
きに見られるのと類似したインビトロ欠陥を示す、ＬＡ
Ｄ患者は、通常の免疫応答を発揮することができないこ
とが見出された。しかして、この欠陥は、ＬＡＤ徴−ｉ
の白血球が細胞基質や細胞外基質に付着する能力を有し
ないことによることが見出されている（Ａｎｄｅｒｓｏ
ｎ他、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、　　４４　：　２６７１
〜２６７７　（１９８５）；＾ｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｊ、
　Ｉｎｆｅｃｔ。

Ｄｉ旦１上ＬＬ：６６８〜６８８　（１９８５））。

これらの研究によれば、白血球の細胞表面において機能
する付着分子を欠いているために白血球の通常の付着能
力がないときには、炎症反応は軽減されることが示され
ている。

総括すれば、白血球が動物の健康や生存を維持する能力
を発揮するには、白血球は、他の細胞（例えば、内皮細
胞）やタンパク質（例えばｉ　Ｃ：！　ｂ　）に付着で
きることが必要である。そして、この付着には、白血球
の表面に存在する特定のレセプター分子の仲介が必要で
ある。細胞表面のこれらのレセプター分子は互いに相関
関係が高いことが見出されている。このような細胞表面
のレセプター分子を欠いている人は、慢性的で再発性感
染などの臨床症状を呈する。

また、白血球付着は１．異′１ｙＪＭｉ織を認識しこれ
を拒絶するプロセスに関与しているので、このプロセス
を解明することは、臓器移植、Ｍｉ織移植、アレルギー
および腫瘍学の分野において非常に価値のあることであ
る。

光１図り」斐 本発明は、白血球細胞表面付着レセプター分子に関し、
特に、ｍ換えＤＮＡ技術を用いることによりレセプター
分子ＬＦＡ−１のアルファーサブユニットをクローニン
グし発現させることに関する。本発明は、付着分子その
もの、該分子の機能性断片、それらのレセプター分子を
コードすることのできる核酸（すなわち、ＤＮＡ、特に
ｃ　ＤＮＡ）、および、そのような核酸配列を含有する
プラスミドに関する。さらに、本発明は、組換えＤＮＡ
を技術を用いることによる当該レセプター分子の製造方
法にも及ぶ。

詳述すれば、本発明は、ＬＦＡ−１のアルファーサブユ
ニット、または、その機能性断片であって、天然の混在
物を実質的に含まないものに関する。

さらに、本発明は、上述のＬＦＡ−１アルフアーサブユ
ニントまたはその機能性誘導体であって、細胞の表面上
に存在する分子（例えば、Ｉ　ＣＡＭ−１、またはＬＦ
Ａ−１ベーターサブユニット）と結合する能力を有する
ものに関する。

さらに、本発明は、上述のＬＦＡ−１のアルファーサブ
ユニット分子であって、該分子は、次の群より選ばれる
少なくとも１種のポリペプチドを含有するものに関する
： ａ、　Ｐ−Ｐ−Ｒ−Ａ−Ｇ−Ｒ−Ｈ；ｂ、　　ｌ−１−
Ｔ、、Ｄ−Ｇ−Ｅ−八；ｃ、　Ｄ−一〜Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｆ
−Ｌ　。

ｄ、　５−Ｑ−Ｖ−Ｑ−Ｔ−１−Ｈ。

ｅ、　Ｒ−Ｈ−Ｇ−Ｇ−Ｌ−Ｓ−Ｐ； ｆ、　Ｆｌ−５−Ｃ−Ｔ−Ｄ−Ｆ−５゜ｇ、　Ｒ−Ｌ−
Ｌ−Ｓ−Ｒ−Ａ−１，；ｈ、　Ｇ−Ｖ−Ｄ−Ｖ−Ｄ−Ｇ
−Ｅ−１−［Ｅ　。

ｉ、　Ｄ−１−Ｎ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｄ−Ｖ；ｊ、
ｖ−に−Ｄ−Ｌ−Ｅ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ、−Ａ。

ｋ、　Ｔ−Ｙ−Ｌ−３−Ｇ−Ｌ。

１、　Ｙ−Ｉ−Ｉ−Ｇ−１−Ｇ−Ｋ。

ｔｓ、　Ｉ−Ｅ−Ｇ−Ｔ−Ｑ−Ｖ−１，−５−Ｑ：ｎ、
　Ｐ−３−１−Ｈ−Ｎ−１−Ｐ。

本発明は、さらに、ＬＦＡ−１アルファーサブユニット
またはその機能性誘導体を発現することのできる組換え
ＤＮＡ分子に関する。

さらに、本発明は、次の各工程から成り、ＬＦＡ−１ア
ルファーサブユニットを実質的に純粋な形で得ることの
できる方法を提供する： （ａ）ＬＦＡＬアルファサブユニットを産生ずる細胞の
膜からＬＦＡ−１アルフアサブユニツトを可溶化して、
可溶化ＬＦＡ−１アルファーサブユニット調製物を形成
し、 （ｂ）ＬＦＡ−１アルファーサブユニットに対して結合
能を有する固定化抗体を含有するアフィニティ基体（ア
フィニティーマトリックス）に、前記Ｌ　Ｆ　Ａ　　１
アルファーサブユニット調製物を導入し、 （ｃ）ＬＦＡ−１アルフアサブユニツトをアフィニティ
基体の抗体に結合させ、 （ｔＪ）アフィニティ基体から、該抗体に結合すること
のできない化合物を除去し、さらに （ｅ）　４体からＬＦＡ−１アルフアサブユニツトを溶
出させることにより、該Ｍａｃ　　ｌアルファサブユニ
ットを実質的に純粋な形で回収する。

本発明は、さらに、哺乳動物の被検体において非特異性
防御系の応答に起因する炎症（例えば、遅延型過敏症、
対宿主性移植片疾患、組織移植拒絶反応、臓器縮合拒絶
反応、自己免疫疾患（例えば、紅斑性狼疹、自己免疫甲
状腺炎、Ｅ　Ａ　Ｅ　（ｅｘ−ｐｅｒｉｓ＋ｅｎｔａｌ
　ａｌｌｅｒｇｉｃ　ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉＬ
ｔｓ：実験的アレルギー脳を０炎）、多発硬化症、ある
種の糖尿病、レノ−症候群（Ｒｅｙｎａｕｄ’ｓ　ｓｙ
ｎｄｒｏｍｅ）、慢性関節リウマチなど〕を治療するた
めの方法であって、当該治療を必要とする被検体に、当
該炎症を抑制するのに充分な量の抗炎症剤を投与し、こ
の時、該抗炎症剤が、ＬＦＡ−１アルフアサブユニツト
およびＬＦＡ−１アルファーサブユニットの機能性誘導
体より成る群から選ばれる方法を提供する。

さらに、本発明は、上述の方法において、ＬＦＡ−１ベ
ーターサフユニツトお、：ｌ；びＬＦＡ−１ベーターサ
ブユニットの機能性誘導体より成る群から選ばれる薬剤
を併用する工程を退官することにも関する。

さらに、本発明は、造血性腫瘍細胞の転移を抑制する方
法を提供する。このような細胞の移動にはＬＦＡ−１群
の機能性−員（ＬＦＡ−１１群に属する機能性化合物）
を必要としており、本発明の方法は、該転移を抑制する
のに充分な量の抗炎症剤を患者に提供することから成り
、該抗炎症剤が、ＬＦＡ−１アルファーサブユニット、
およびＬＦＡ−１アルファーサブユニットの機能性誘導
体から成る群より選ばれる。

また、本発明はＬＦＡ−１アルファーサブユニット産生
細胞の成長を抑制する方法であって、該成長を抑制する
のに充分な量のトキシン（毒素）を患者に提供すること
からなり、該トキシンが、トキシン誘導体化（ｔｏｘｉ
ｎ−ｄｅｒｉｖａｔｉｚｃｄ）　Ｌ　Ｆ　Ａ　−１アル
ファーサブユニット、および、ＬＦＡ−１アルファーサ
ブユニットのトキシン誘導体化機能性誘導体から成る群
より選ばれる方法を提供する。

さらに、本発明は、哺乳動物被検体における特異防御系
の応答に起因する炎症の存在と位置を診断する方法であ
って、 （ａｌ　　ＩＣＡＭ−１，またはＬＦＡ−１のその他の
天然リガンドを産生ずる細胞を同定することのできるラ
ベルした（標識した）ＬＦＡ−１アルファーサブユニッ
トを含有する組成物を前記被検体に投与し、 （ｂ）　　前記Ｌ　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニッ
トを検知することから成る方法にも関する。

本発明は、また、哺乳動物被１食体における特異的防御
系の応答に起因する炎症の存在と位置を診断する方法で
あって、 （ａｌ　　ｒｃＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他の
天然リガンドを産生ずる細胞を同定することのできるラ
ベルしたＬＦＡ−１アルファーサブユニットを含有する
組成物で、前記被検体の組織のサンプルをインキュベー
トし、 （ｂｌ　　前記ＬＦＡ−１アルファーサブユニットを検
知することから成る方法にも関する。

さらに、本発明は、哺乳動物被検体における特異的防御
系の応答に起因する炎症の存在と位］ηを診断する方法
であって、 Ｔａ）　　Ｌ　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブニー’−Ｙ
トのＤＮＡ配列、および、ＬＦＡ−１アルファーサブユ
ニット遺伝子のｍＲＮＡから成る群より選ばれる分子に
結合することのできる核酸分子を含有する組成物で、前
記被検体の組織のサンプルをインキュベートしくここで
、該結合は、ＩＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他
の天然りガンンドを産生ずる細胞を同定することができ
るものである）、さらに、 ｆｂｌ　　前記核酸分子を検知することから成る方法に
も関する。

さらに、本発明は、哺乳動物被検体における特異的防御
系の応答に起因する炎症の存在と位置を診断するための
方法であって、 ｆａｔ　　ｒｃＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他の
天然リガンドを発現する細胞を同定することのできるラ
ベルしたＬＦＡ−１アルファーサブユニットで、前記被
検体の組織をインキュベートし、 （ｂ）前記ＬＦＡ−１アルファーサブユニットを検知す
ることから成る方法にも関する。

本発明は、さらに、Ｉ　ＣＡＭ−１、またはその他のＬ
ＦＡ−１の他の天然リガンドを産生する腫瘍細胞の存在
と位置を診断する方法であって、（ａ）　　ＩＣＡＭ−
１、またはＬＦＡ−１の他の天然リガンドに結合するこ
とができ、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットおよびＬ
ＦＡ−１アルファーサブユニットの機能性誘導体から成
る群より選ばれるラベルした結合性リガン１を含有する
組成物を前記被検体に投与し、 （ｂ）　　前記結合性リガンドを検知することから成る
方法にも関する。

また、本発明は、ＩＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のそ
の他の天然リガンドを産生ずる腫瘍細胞を有すると予測
される被検体における該細胞の存在と位置を診断する方
法であって、 ｆａｔ　　ｌＣＡＭ−１，またはＬＦＡ−１のその他の
天然リガンドに結合することができ、ＬＦＡ−１アルフ
ァーサブユニットおよびＬＦＡ−１アルファーサブユニ
ットの機能性ｆａｔ体から成る群より選ばれるラベルし
た結合性リガンドを含有する組成物の存在下に前記被検
体の組織のすンブルをインキュベートし、 （ｂｉ　　前記組織サンプルに存在するＩ　ＣＡＭ−１
に結合した前記結合性リガンドを検知することから成る
方法にも関する。

３種類の白血球付着タンパク質Ｍａｃ　　１％　ｐ１５
０．９５、およびＬＦＡ−１は、それぞれの機能が異な
り、また、各種の白血球における出現（産生）の度合も
異なっている（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒ　　ｏｆ　Ｍａｃｒｏ　　ａ　ｅｓ　（ＣＩ　Ｂ
Ａシンポジウム１１８）、英国ロンドンＰ　ｉ　Ｌｍａ
ｎ発行、１０２〜１２６　　（１９８６））。血液単球
が組織マクロファージに分化する間に、ｐ１５０．９５
の出現は非常に増大し、また、Ｍａｃ　　ｌの出現は減
少する（Ｓｃｈｗａｒｔｉｎｇ他、旧ｏｏｄ、６５　：
　９７４〜９８３（１９８５）　　：Ｈｏｎｇ他、　Ｅ
ｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、。

±旦：２４０〜２４８　　（１９８６））。また、ｐ１
５０，９５は、特定のタイプの活性化Ｔリンパｆ７ｙお
よびＢリンパ球にも出現されるが、血液中ではこれらの
細胞上に出現しない（ＫａｌｉＨａｒｉｓ・Ｃａｐｐｉ
ｏ他、ＢＩｏｏｄ、６６　：　１０３５〜ｌ　０４２（
１９８５）　　；Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｇ＋ｕｎ
ｏ１．、上↓Ｌ：２８９１〜２９００　　（１９８６）
；にｅｉｚｅｒ他、ムＩｍｍｕｎｏ１．．　Ｉ　３８　
：　３１３０〜３１３６　（１９８７））。

Ｍａｃ−１とｐ１５０．９５は、循環している好中球と
単球の細胞内小胞区画に出現され、この小胞区画は炎症
媒介物質によって細胞表面に移動するＣＴｏｄｄ他、Ｊ
、　Ｃｌ１ｃ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　　７４　；　］　２
８０〜１２９０　　（１’９８４）　　；Ｓｐｒｉｎｇ
ｅｒ他、Ｂｉｏ−ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｍａｃｒ
ｏｐｈａｇｅｓ　（ＣＩ　Ｂ　Ａシンポジウム１１８　
）　、ＬｏｎｄｏｎのＰｉＬｍａｎ発行、１０２〜１２
Ｇ（１９８６）　　；Ｌａｎ１ｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、
　１ｍｎ＋ｕｎｏ１．−。

１５ニア１３〜７１８　（１９８５）；Ｙａｎｃｙ他、
Ｊ、［ｍｓ＋ｕｎｏ１．．１３５　；４６５〜４７０　
（２９８５））。

この移動は付着性の増大と相関している（Ａｎｄｅｒｓ
ｏｎ他、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｍｅｄ、　　３８　：　
１７５〜ｌ　９４（１９８７））。

Ｍａｃ−１またはｐ１５０．９５に対するモノクローナ
ル抗体は、内皮細胞、タンパク質被覆表面、バクテリア
、原生動物寄生虫、および菌類に対して好中球が凝集し
付着するのを抑制する（：Ｈａｒ（ａｎ池、Ｂｌｏｏｄ
。

６６．１６７〜ｌ　７８　（１９８５）　　；Ｓｐｒ＋
ｎｇｅｒ他、Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎ＋５ｔｒｙ　ｏｆ　Ｍａ
ｃｒｏｐｈａｇｅｓ　　（ＣＩ　ＢＡシンポジウム）　
ｌ　８　）　Ｐｉｔｍａｎ　’（英国１ｏｎｄｏｎ）発
行、１０２〜１２６　　　（１９８６）　　　；Ｄａｎ
ａ他、　Ｊ、　　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　　ｌ　　３　
７　　：３２５９　＜１９８６）；　Ｂｕｌｌｏｃｋ他
、Ｊ、　Ｅｘｐｅｒ、　！、４ｅｄ、。

１弓５；　１９５〜２１０　（１９８７）；Ｍｏｓｓｅ
ｒ池、Ｊ、　　　Ｉｍ＋ｎｕｎｏｌ、、　　１３５　　
：２７８５　〜１７８９　　　（１９８５）　　’Ｊ　
　。

Ｍａｃ−１は、補体成分１Ｃ３ｂに対するレセプターで
もある（Ｂｅｌｌｅｒ他、Ｊ、Ｅｘｐｅｒ、　Ｍｅｄ、
、　　１５６　：１０００〜１００９　、Ｎ９８２）　
〕。洗剤に溶解性の＞ｚｉａｃ−１およびｐ１５０．９
５は１Ｃ３ｂ／セフアローズに結合することができる旨
見出されている（号Ｊｉｃｋｌｅｍ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ
、Ｊ、、　２３１　：　２３３〜２３６（１９８５））
。

ＬＦＡ−１は、あらゆる白血球上に存在するが、但し、
ある種のマクロファージは例外である。モノタローナル
抗体のプロフキングに関する研究によれば、Ｌ、ＦＡ−
１は、■リンパ球キラー作用、ヘルパーＴ細胞応答、ナ
チュラルキラー作用、および抗体依存性キラー作用にお
いて重要であることが示されている（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ
他、Ａｎｎ、　Ｒ（！Ｖ。

Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１．、　５　：　２２３〜２５２　（１
９８７）　）。

標的細胞への付着は、ＬＦＡ−１に対する抗体によって
ブロックされる過程である。ＲｏｔｈＩｅｒｎらによる
機能性に関する研究によれば、１、ＦＡ−１は数種のリ
ガンドと相互作用し、該リガンドの１種がＩ　ＣＡＭ−
１であると考えられる［Ｒｏｔｈｌｅｉｎ他、ムＩｍｍ
ｕｎｏ１．，１３７　：　１２７（１〜１２７４（１９
８６））。

細胞障害性Ｔ細胞（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ　ｌｙｍｐ
ｈｏｃｙｊｅ：ＣＴＬ）のクローンには、はぼ同量のｐ
１５０．９５とＬＦＡ−１を出現させるものが見出され
ている。

ＬＦＡ−１とｐ１５０．９５のアルファーサブユニット
に対するモノクローナル抗体は、そのようなＣＴＬクロ
ーンによるキラー作用を抑制する（Ｋｅｉｚｅｒ他、Ｊ
、Ｉｍ哩旦、、　１３８　：　３１３０〜３１３６　（
１９８７））、さらに、ρ１５０．９５アルファーサブ
ユニットに対する抗体は、内皮への単球の付着を抑制す
ることも明らかにされている（Ｋｓｉｚｅｒ他．Ｉ１ｕ
ｒ、−ムＩｍｍｕｎｏ１．．　１７　：　ｌ　３１７〜
１３２２（１９８７））　　。

ＩＴ、ＬＦＡ−１のアルファーサブユニットのクローニ
ング Ｌ　Ｆ　Ａ　−１のアルファーサブユニットの遺伝子を
クローニングするには、各種の方法を用いることができ
る。１つの方法に従えば、（ＬＦＡ−１アルフアーザブ
ユニツトを産生ずる細胞から得られる）ｃＤＮＡインサ
ートのシャトルベクターライブラリーを分析して、Ｌ、
　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニット遺伝子を含有す
るインサートを求める。

そのような分析は、例えば、当該ベクターで細胞をトラ
ンスフェクトし、しかる後、Ｌ、　Ｆ　Ａ　−１アルフ
ァーサブユニットの産生を測定すればよい。

１、、　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニット遺伝子を
クローニングするための好ましい方法では、ＬＦＡ−１
アルフア一サブユニツト分子または該分子のトリブチン
ク（ｔｒｙｐｔｉｃ　）ペプチドのアミノ酸配列を測定
する。これを行なうためには、モノクローナル抗体アフ
ィニティクロマトグラフィにより産生細胞からＬＦＡ−
ｆアルファーサブユニット分子を精製し、ナトリウム・
ドデシル・サルフェート・ポリアクリルアミドゲル（Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥ）電気泳動と電気泳動溶出により単離す
ることが好ましい（Ｍｉ　ｌ　ｌｅｒ他、Ｊ、　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、＋１３．８：２３８１〜２３８３　　（１９
８７）参照）。当３亥アルファーサブユニット分子は、
シアノゲン・プロミド、または、パパイン、半モトリブ
シンもしくはトリプシンのごときプロテアーゼを用いて
分画されろ（Ｏｉｋｅ（（ｊｌ、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ
ｈｅｍ、、　　２５７　：　９７５１〜９７５８　（１
９８２）；Ｌｉｕ他、Ｉｎｔ、　Ｊ、　ＰｅｐＬ。

Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、、　　２１　：　２０９〜２
１５　（１９８３）　）。

好ましくは、このアルファーサブユニットはトリプシン
を用いるタンパク質加水分解により消化される。得られ
るペプチドは、逆相ＨＰ　Ｌ　Ｃによって分離され、ア
ミノ酸配列決定に供される。この作業を実施するには、
自動配列決定装置により当該タンパク質の分析を行なう
のが好ましい。１．ＦＡ−１アルファーサブユニットの
全アミノ酸配列を決定することも可能であるが、該分子
のペプチド断片の配列を求めることが好ましい、ＬＦＡ
−１アルファーサブユニットの好ましい人手源は、５Ｋ
Ｗ３セルラインである。

ペプチド中のアミノ酸残基の配列を示すために、本明細
書においては、一般に採用されている３文字表示法また
は１文字表示法を用いる。これらの３文字または１文字
表示法の一覧表は、例えば、ｒＢｉｏｃｈｅｍｉｓＬｒ
　、、　Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ著．Ｄｒｔｈ　Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｅｒｓ発行（米国一ニーヨーク州）、１９７０年１
のようなテキストに見出すことができる。ある配列を縦
方向にリストしているときは、アミノ末端残基は当該リ
ストの最上部にあるものとし、また、カルボキシ末端残
基はリストの最底部にあることを意味するものとする。

同様に、水平方向にリストしているときは、アミノ末端
は左端にあり、一方、カルボキシ末端は右端にあるもの
とする。

成るペプチドのアミノ酸残基は、ハイフンによって分け
ることができる。このハイフンは、アミノ酸配列の表示
を容易にする目的のためにのみ用いられるものである。

例えば、 −Ｇｌｙ−Ａ　７！ａ−３ｅｒ−Ｐｈｅ−によって表示
されるアミノ酸配列は、Ａｊ！ａ残仄がｃ＋ｙのカルボ
キシ基に結合されており、また、５ｅｒ９！Ｕ’ｌｓが
ＡＩ！ａのカルボキシ基に結合され、Ｐｈｅ残基の７ミ
ノ基に結合されていることを示す。

この表示は、さらに、該アミノ酸配列がテトラペプチド
Ｇｌｙ　−Ａ　ｌ　ａ　−５ｅｒ−Ｐｈｅ−を含むこと
を示す。この表示は、アミノ酸配列をこのような唯一の
テトラペプチドに限定されることを意味するものではな
く、（１）アミノ末端およびカルボキシ末端のいずれか
一方に１個またはそれ以上のアミノ酸が結合されている
テトラペプチド、（２）アミノ末端およびカルボキシ末
端の双方に１個またはそれ以上のアミノ酸残基が結合し
ているテトラペプチド、（３）アミノ酸残基を追打して
いないテトラペプチドを含むように意図するものである
。

１種またはそれ以上の適当なペプチド断片について配列
決定が行なわれると、それをコードすることのできるＤ
ＮＡ配列について検討する。遺伝子コードは縮重しでい
るので、特定のアミノ酸をコードするには１つ以上のコ
ドンを用いることがある（Ｗａｔｓｏｎ、　Ｊ、　Ｄ、
、Ｍｏ１ｅｃｕ（ａｒ　Ｂｉｏｌｏ　　ｏｆ　Ｌｂｅ江
憇、第３版、Ｗ、　Ａ、　Ｂｅｎｊａｍｉｎ発行（米国
カルフォルニア州Ｍｅｎｌｏ　Ｉ’ａｒｋ）　、１９７
７年、３５６〜３５７）。ペプチド断片を解析し、縮重
度の最も低いオリゴヌクレオチドによってコードされて
いると考えられるアミノ酸配列を明らかにする。これを
行なうには、華−のコドンによってのみコードされてい
るアミノ酸を含有する配列を明らかにするのが好ましい
。

ある特定のアミノ酸配列は、たまたま単一のオリゴヌク
レオチドによってのみコードされていることもあるが、
一連の類似するオリゴヌクレオチドによってコードされ
ていることが多い。重要なことは、この一連のオリゴヌ
クレオチドの全部が当８亥ペプチドをコードすることの
できるオリゴヌクレオチドを含有し、したがって、当該
ペプチド断片をコードする遺伝子と同一のオリゴヌクレ
オチド配列を含有する可能性があるが、その一連のオリ
ゴヌクレオチドの唯一が当該遺伝子のヌクレオチド配列
と同一のヌクレオチド配列を含有するということである
。この唯一のオリゴヌクレオチドは一連のオリゴヌクレ
オチドの中にあり、一連のオリゴヌクレオチド中の他の
オリゴヌクレオチドの存在下においてもＤＮＡとハイブ
リダイズするごとができるので、上述と同様の方法によ
り、一連の非分画オリゴヌクレオチドを採用して、単一
のオリゴヌクレオチドを用いて当該ペフ゛チドをコード
する遺伝子をクローニングすることもできる。

適当な１個のオリゴヌクレオチドまたは一群のオリゴヌ
クレオチド−ＬＦＡ−１アルフアサブユニツト遺伝子の
１断片をコードすることができるもの（または、そのよ
うなオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド群に
相補的であるもの）−を同定しく上述したような手法を
用いる）、合成し、且つ、当該技術分野においてよく知
られている方法により、ＤＮＡ、より好ましくはＬＦＡ
−１アルファーサブユニット遺伝子を産生させることの
できるヒト細胞に由来するｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ　ｊＪｌ製物
とハイブリダイズさせる。核酸ハイブリダイゼーション
の技術は、ＭａｎｉａＬｉｓ他（Ｍｏｌｅｃｕ（ａｒ　
Ｃ１ｎｉｎｇ＋Ａ　ＬａｂｏｒａＬｏｒ　　Ｍａｎｕａ
ｌ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　）Ｉａｒｂｏｒ　Ｌａ
ｂｏ−ｒａＬｏｒｉｅｓ＋　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　
ｌ１ａｒｂｏｒ、米国ニューヨーク（１９Ｂ　２Ｌ）　
、およびＩ（ａｙｍｅｓ他（Ｎｕｃｌｅｉｃ八ｃｉｄ　
　へｙｂｒｉｄｉｚａＬｉｏｎ、　　Ａ　　Ｐｒａｃｔ
ｉｃａｌ　　Δｐｐｒｏａｃｈ、　　ＩＲＬＰｒｅｓｓ
発行（米国ワシントンＤＣ）　、（１９８５））によっ
て開示されていることを参与のために言及しておく、Ｄ
ＮＡ５またはｃＤＮＡ源は、ＬＦＡ−１アルファーサブ
ユニットに関して？Ｍ　Ｈにしてお（ことが好ましい。

そのような？ＨＷ−化は、１．ＦＡ−１アルファーサブ
ユニットを高レベルで産生ずる細胞からのＲＮＡを抽出
することにより得られるｃＤＮＡから非常に節単に取得
できる。

上述したような技術またはこれに類似する技術は、ヒト
のアルデヒド・デヒドロゲナーゼの遺伝子（ｌｌｓｕ他
、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｌ
ｌ５Ａ、　　８２：３７７１〜３７７５　（１９８５）
）、ヒトのエストロゲンレセプター遺伝子（Ｗａｉｔｅ
ｒ他、ヒ匹。

Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ　、　８２　
：　７８８９〜７８９３（１９８５））、組織型プラス
ミノーゲン活性化因子（Ｐｅｎｎ　ｉｃａ他、Ｎａ　Ｌ
ｕｒｅ、３０１：２１４〜２２１　　（１９８３））、
ヒト胎盤アルカリフォスファターゼのｃＤＮＡ　（Ｋａ
ｍ他、Ｐｒｏｃ、Ｎ！ＬＬ。

Δｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ＾、８２：８７１５〜８７
１９（１９８５））をクローニングするのに成功してい
る。

遺伝子コードを用いると（ｌＩ（ａｔｓｏｎ、　Ｊ、　
Ｄ、　　：Ｍｏ１ｅｃｕ（ａｒ　Ｂｉｏｌｏ　　ｏｆ　
ｔｈｅ　Ｇｅｎｅ−１第３版、Ｗ、　Ａ。

Ｂｅｎｊａｍｊｎ　Ｉｎｃ、　　（米国カリフォルニア
化Ｍｅｎｌ。

Ｐａｒｋ）発行、（１９７７））、ＬＦＡ−１アルファ
ーサブユニットのトリブチツクペプチドをコードするこ
とができると考えられる１種またはそれ以上の互いに異
なるオリゴヌクレオチドを得ることができる。事実問題
として１つの特定のオリゴヌクレオチドが実際のＬＦＡ
−１アルフアサブユニツトをコードする配列を構成して
いるという可能性の予測は、真核細胞における、異常塩
基対合関係（ａｂｎｏｒｍａｌ　ｂａｓｅ　ｐａｉｒｉ
ｎｇ　ｒｅ（ａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　）と、（ある特定
のアミノ酸をコードするのに）ある特定のコドンが実際
に用いられている頻度とを考慮することにより行なうこ
とができる。そのような［コドン用法則（ｃｏｄｏｎ　
ｕｓａｇｅ　ｒｕｌｅｓ　ＪはＬａ　ｔｈｅらによって
開示されている（ＬａＬｈｅ他、ムＭｏ１ｅｃ、　Ｂｉ
ｏｌ、、１８３　：　ｌ〜ｌ　２　（１９８５）　）。

Ｌａ　ｔｈｅの「コドン用法則」を用いれば、ＬＦＡ−
１アルファーサブユニットのトリブチツクペプチドをコ
ードすることができると理論的に「最も可能性の高い」
ヌクレオチド配列を含有する単一のオリゴヌクレオチド
、またはオリゴヌクレオチド群を同定することができる
。

ＬＦＡ−１アルファサブユニット断片をコードすること
ができる理論的に「最も可能性の高い」配列を含有する
オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド群を用い
て、「最も可能性の高い」配列または配列群にハイブリ
ダイズすることのできる相補的オリゴヌクレオチドまた
はオリゴヌクレオチド群の配列を明らかにする。そのよ
うな相補的配列を含有するオリゴヌクレオチドは、ＬＦ
＾−１アルフアサブユニツト遺伝子を同定し単離するだ
めのプローブとして用いることができる（Ｍａｎｉａｔ
ｉｓ他、Ｍｏ１ｅｃｕ（ａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ　　Ａ　Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒＭａｎｕａｌ＋　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉ
ｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ　（米国ニューヨーク
州、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ）発行、（
１９８２））。

以上のことをまとめると、ＬＦＡ−１アルフアサブユニ
ツトのペプチド配列を実際に確認することにより、その
ようなペプチドをコードすることのできる理論的に［最
も可能性の高いＪ　ＤＮＡ配列または配列群を明らかに
することができる。この理論配列に相補的なオリゴヌク
レオチドを構成することにより　（または、「最も可能
性の高い」オリゴヌクレオチド群に相補的なオリゴヌク
レオチド群を構成することにより）、ＬＦＡ−１アルフ
アサブユニツト遺伝子を同定し単離するプローブとして
機能することのできるＤＮＡ分子（またはＤＮＡ分子群
）を得ることができる。

ＬＦＡ−１アルファーサブユニットのトリブチツクペプ
チドをコードする「最も可能性の高い」配列に相補的な
一本鎖オリゴヌクレオチド分子の合成は、当該分野の当
業者によく知られている手法を用いて行なった（独区江
他、Ｊ、　Ｂ１０１．Ｃｈ生。

２４５：５７６５〜５７８０　（１９７９）ｉＭａｎｉ
ａＬｉｓ他、Ｍｏ１ｅｃｕ（ａｒ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｓ　ｉｎ　ｔｈｅＣｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｅ
ｘ　ｒｅｓｓｉｏｎ、＾ｃａｄ、　Ｐｒｅｓｓ　　（米
国ニューヨーク）発行、（１９７６）、讐Ｕ他、Ｐｒｏ
　、　Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄ　−Ｒｅｓ、　Ｍｏ１ｅｃ
、　Ｂｉｏｌ、、　　２土：１０１〜ｌ　４１　　（１
９７８）　；Ｋｈｏｒａｎａ、　５ｃｉｅｎｃｅ。

２０３：６１４〜６２５　　（１９７９））。なお、Ｄ
ＮＡの合成は、自動合成装置を用いて行なうこともでき
る。

１、、ＦＡ−１アルファーサブユニット遺伝子を含有し
ていると考えられる真核細胞ＤＮＡ調製物から該遺伝子
をクローニングすることが可能である。

ＬＦＡ−１アルファーサブユニットタンパク質をコード
する遺伝子を同定しクローニングするためには、ＤＮＡ
ライブラリー、より好ましくはｃＤＮＡライブラリーの
スクリーニングを行なって上述したオリゴヌクレオチド
プローブとハイブリダイズする能力を調べる。好適なり
ＮＡ！ＰＩ製物（例えば、ヒトゲノムＤＮＡ）を酵素的
に切断またはランダムに切断し、組換えベクターに連結
する。しかる後、これらのベクターについて、上述した
オリゴヌクレオチドプローブに対してハイブリダイズす
る能力を測る。ハイブリダイゼーションの手法は、例え
ば、ＭａｎｉａｔｉｓによるｒＭｏｌｅｃｕ（ａｒ　Ｃ
１−カｕ１Ｌ」工Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　　Ｍａｎｕａｌ
、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　１（ａｒｂｏｒ　Ｐｒｅ
ｓｓ（米国ニューヨーク州Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈ
ａｒｂｏｒ）発行、（１９８２））や．Ｉ（ａｙｍｅｓ
他による［Ｎｕｃｌｅｉｃ八ｃｉｄ　　へ　　ｂｒｉｄ
ｉｚａｔｉｏｎ　　ａ　　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　　Ａ　
７ｒｏａｃｈ、　　ＩＲＬＰｒｅｓｓ　（英国オックス
フォード）発行、１９８５Ｊに開示されている。その後
、そのようなハイブリダイゼーションを行なうことがで
きるベクターを分析して、該ベクターが含有するＬＦＡ
−１アルフア一サブユニツト配列の度合と性質を求める
。

純粋に統計学的な考察に基づけば、僅か１８のヌクレオ
チドを有するオリゴヌクレオチドプローブを用い（ハイ
ブリダイゼーショススクリーニングを介して）ＬＦＡ−
１アルフア一サブユニツト分子をコードする遺伝子のよ
うなある遺伝子を明瞭に同定することができるはずであ
る。

上述の方法によって得られたクローン化ＬＦＡ−１アル
ファーサブユニット遺伝子は、発現ベクターに作動に結
合され、原核細胞または真核細胞に導かれてＬＦＡ−１
アルファーサブユニットタンパク質を産生ずる。そのよ
うな操作の技術は、上述したＭａｎｉａｔｉｓの著書に
開示されており、当該分野では周知である。

■、−履已八二へ」νに乙しニュ１箋肇ヒムＬ＠発現本
発明を導いた事実の一つは、ＬＦＡ−１分子のアルファ
ーサブユニントをコードするｃＤＮＡ配列を発見したこ
とである。この配列（またはこの配列の一断片）を機能
プロモータに作動的に結合する（ｏｐｅｒａｂｌｙ　ｌ
ｉｎｋｉｎｇ）ことにより、細胞または微生物の中でＬ
ＦＡ−１アルフアサブユニツト（またはその機能性誘導
体）を発現さゼることか可能である。

ＤＮＡのような核酸分子は、転写と翻訳の調節に関する
情報を含有するヌクレオチド配列を含有し、さらに、そ
のような配列が、ポリペプチドをコードするヌクレオチ
ド配列に作動的に結合されていると、当該ポリペプチド
を「発現する能力がある」と言われている。作動的な結
合とは、調節に関与するＤＮＡ配列と、発現しよう出す
るＤＮＡ配列とが遺伝子発現を可能にするように結合さ
れている結合である。遺伝子発現に必要な調節領域の厳
密な特性は微生物によって変化し得るが、一般的には、
プロモーター領域を含まなければならず、このプロモー
ター領域は、原核細胞においては、（ＲＮＡ転写の開始
を支配する）プロモーターと、ＲＮＡに転写されたとき
にタンパク質合成の開始に信号を与えるＤＮＡ配列との
両方を含有している。真核細胞における調節領域は、−
１１８に、ＲＮＡ合成の開始を支配するのに充分なプロ
モーター領域を含む。

２種類のＤＮＡ配列（例えば、プロモーター領域のＤＮ
Ａ配列とＬ　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニットをコ
ードするＤＮＡ配列）は、それらの２種類のＤＮＡ配列
の間の結合の性質が次のような場合でないならば、作動
的に結合されていると言われる：すなわち、（１）フレ
ームシフト変異を生しさせ、＋２）　Ｌ　Ｆ　Ａ　−１
アルファーサブユニットをコードする配列の転写を誘導
するプロモーター領域配列の能力を妨害し、または、＋
３）　Ｌ　Ｆ　Ａ−１アルファーサブユニットをコード
する配列の被転写能がプロモーター領域によって妨害さ
れる。したがって、プロモーター領域が、あるＤＮＡ配
列の転写を実施させることができるならば、ｔｇ　ｏ　
Ｎ　Ａ配列に対してプロモーター領域は作動的に結合さ
れているということになろう。

本発明は、原核細胞または真核細胞においてＬＦＡ−１
アルファーサブユニット（または、その機能性誘導体）
を発現させることを含む。原核細胞（例えば、Ｅ、ｃｏ
ｌｉ、　Ｂ．ＳｕｂＬｉｌｉｓ、　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ。

針匹閤叩凹など）においてＬＦＡ−１アルファーサブユ
ニット（またはその機能性誘導体）を発現させるために
は、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットをコードする配
列を原核細胞用プロモーターに作動的に結合させること
が必要である。そのようなプロモーターは、構成性（ｃ
ｏｎｓＬｉｔｕｔｉｖｅ）であってもよいが、より好ま
しくは調節性（ｒｅｇｕ−ＩａＬａｂｌｅ　）　、すな
わち、誘導性（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ）または脱抑制性（
ｄｅｒｅｐｒｅｓｓｉｂｌｅ）のものである。（１＋！
成性プロモーターの例としては、バクテリオファージλ
の＝けりプロモーター、ｐＢＲ３２２のβ−ラクタマー
ゼ遺伝子の町プロモーター、およびｐＢＲ３２５のクロ
ラムフェニコールアセナルトランスフェラーゼ遺伝子の
ＣＡＴプロモーター等が挙げられる。誘導性原核プロモ
ーターの例としては、バクテリオファージλの主要台部
ブＩ：Ｊモーターと左部プロモーター（ｐＬとＲ，）、
Ｅ。

９旦の夏肛囚、圓σ１月匹」および−８旦プロモーター
、α−アミラーゼ（Ｕ１ｍａｎｅｎ他、７＝ハ屡旦吐凡
１．．１６２：１７６〜１８２（１９８５））、Ｂ．Ｓ
ｕｂｔｉｌｉｓのσ−２８特異的プロモーター（Ｇｉ１
ｍａｎ他、銃軸、　　３２　：　ｌ　１〜２０（１９８
４））、Ｂａｃｉｌｌｕｓのバクテリオファージ類の各
種プロモーター（Ｇｒｙｃｚａｎ他、Ｔｈｅ　Ｍｏ１ｅ
ｃｕ（ａｒ　Ｂｉｏ１Ｍロー（ｔｈｅ　Ｂａｃｉｌｌｉ
　％　Ａｃａｄｅａ＋ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉｎｃ、　　
（米国一、ｚ−ヨーク）発行、（１９Ｂ　２　）　）　
、兆ｗハ叩ＦｅｓプロモーターＣＷａｒｄ他、Ｍｏ１．
　Ｇｅｎ、　Ｇｅｎｅｔ、、　２０３　：４６８〜４７
８　（１９８６））。原核プロモーターは、Ｇ１１ｃｋ
　　（Ｊ、　Ｉｎｄ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　　１
　：　２７７〜２８２　　（１９８２）　）　、Ｃｅｎ
ａｔｉｅｍｐｏ　（旧ｏｃｈｉｍｉｅ、。

６８：５０５〜５１６　（１９８６））、およびＧｏｔ
ｔｅｓｍａｎ　　（Ａｎｎ、　　Ｒｅｖ、　　Ｇｅｎｅ
Ｌ、＋　　１　８　　：　　４　１　５〜４４２　　（
１９８４））によってまとめられている。

原核細胞における発現には、遺伝子をコードする配列の
上流にリポソーム結合部位の存在が必要である。そのよ
うなリポソーム結合部位は、例えば、Ｇｏｌｄ等（Ａｎ
ｎ、　Ｒｅｖ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　　３５　：
３６５〜４０４　　（１９８１））によって開示されて
いる。

酵母、菌類、動物細胞または植物細胞のような真核細胞
における発現が所望されるときには、そのような真核細
胞宿主において転写を導くことができるプロモーターを
用いることが必要である。

好ましい真核プロモーターとしては、マウスのメタロチ
オネインＩ遺伝子のプロモーター〔１１ａ…ｅ「他、Ｌ
−互すュ」市ヱし一ル胡よ、上：２７３〜２８８（１９
８２））、ヘルペスウィルスのＴＫプロモーター　（Ｍ
ｃＫｎｉｇｈｔ、　　Ｃｅ１ｌ、　　３　１　　：　　
３５５〜３６５（１９８２））、ＳＶ４０初朋プロモー
ター（Ｂｅｎｏｉｓｔ他、Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏ
ｎ）　、２９０　：　３０４〜３１０　（１９８１））
、酵母の■巳」伝子プロモーター（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ他
、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ１１．八ｃａｄ。

Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）　　、７９　　：　　６９７　１〜
６９７５（１９８２）　　　；　　５ｉｌｖｅｒ他、　
Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　八ｃａｉ。

計ｉ、（ＵＳＡ）　、８１　：５９５１〜５９５５（１
９８４））が挙げられる。

広く知られているように、真核ｍＲＮＡの翻訳は、最初
のメチーオニンをコードしているコドンで開始される。

このため、真核プロモーターとＬＦＡ−１アルフアサブ
ユニツト（またはその機能性誘導体）との間の連結が、
メチオニンをコードすることできる介在コドン（すなわ
ち、ＡｔＪＧ）を含有しないようにしておくことが好ま
しい。そのようなコドンが存在していると、融合タンパ
クが形成される（ＬＦＡ−１をコードしているＤＮＡ配
列と同一の読取り枠内にＡＵＧコドンがある場合）か、
あるいはフレームシフト変異が生じる（ＬＦＡ−１をコ
ードする配列と同一の読取り枠内にＡＵＧコドンがない
場合）。

ＬＦＡ−１タンパク質（または、その機能性誘導体）を
コードするＤＮＡ配列は、プロモーターに作動的に結合
されると、各種の適当な手段（形質転換、トランスフェ
クション、接合、プロトプラスト融合、エレクトロポレ
ーションなど）により受容細胞に導入される。

Ｌ　Ｆ　Ａ−１アルファーサブユニットをコードする遺
伝子とこれに作動的に結合されたプロモーターとは、非
複製型ＤＮＡ　（またはＲＮＡ）分子として受容細胞に
導入することがあるが、このときには、該分子は、線状
分子か、または、より好ましくは、共有結合性の閉じら
れた環状分子となっているであろう。そのような分子は
自律複製をする能力がないので、ＬＦＡ−１アルファー
サブユニットの発現は、一過性の発現を通じて起こるこ
とになるであろう。この代わりに、導入配列を宿主染色
体に組込むと恒久的な発現が起こるであろう。

導入配列は、受容細胞において自律複製能のあるプラス
ミドまたはウィルスベクターに挿入することが好ましい
。この目的には、いろいろな種類のベクターを使用する
ことができる。プラスミドまたはウィルスベクターを選
択するに際して重要な因子は次のとおりである二当該ベ
クターを含有する受容細胞を認識し、そのベクターを含
有しない受容細胞かろ選別し易いこと；特定の宿主細胞
において所望されるベクターのコピー数；異なる種類の
宿主細り台間における「ンヤトル」ベクターとして機能
することが所望されているかということ。好ましい原核
ベクターとしては、Ｅ、　ｃｏｌｉ　中で複製すること
ができるようなプラスミド（例えば、ｐＢＲ３２２、Ｃ
ｏ１Ｅ１、ρ５ＣＩＯＩ、ｐＡＣＹＣｌ　８４、πＶＸ
）が挙げられる。そのようなプラスミドは、例えば、Ｍ
ａｎｉａｔｉｓ他によるｒＭｏｌｅｃｕ（ａｒ　Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ、　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　１Ａａｎｕａ
ｌ。

Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ　
（米国ニューヨーク州）発行、１９８２Ｊに開示されて
いる。Ｂａｃｉｌｌｕｓのプラスミドとしては、ρＣ１
９４、ｐｃ２２Ｌｐ７１２７等が挙げられる。そのよう
なプラスミドは、ＧｒｙｃｚａｎによるｒＴｈｅ　Ｍｏ
１ｅｃｕ（ａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙｏｒ　ｔｈｅ　Ｂａｃ
ｉｌｌｉ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　（米国ニ
ューヨーク州）発行、１９８２．３０７〜３２９頁」に
示されている。好適なＳＬｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓのプラ
スミドとしては、ｐ　Ｉ　Ｊ　１０１　（Ｋｅｎｄａｌ
ｌ他、Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、。

１６９：４１７７〜４１８３　（１９８７））、および
φＣ３１のようなストレプトマイセス・バクテリオファ
ージ（Ｃｈａｔｅｒ池．Ｓｉｘｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎ　−
ａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅｌｅｓ　Ｂｉｏｌｏｇｙ。

八ｋａｄｅｍｉａｉにａｉｄｏ　　（ハンガリー、ブタ
ペスト）発行、１９８６．４５〜５４頁〕が挙げられる
。

Ｐｒｅｕｄｏｍｏｎａｓプラスミドは、Ｊｏｈｎ他によ
る「態ムＩｎｆｅｃｔ、　　Ｄ＋ｓ、、８　　：６９３
〜７０４　　（１９８６）　　Ｊおよび１ｚａｋｌ　に
よる「Ｊｐｎ、　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏ１１３３　ニ
ア２９〜７４２　（１９７８）Ｊにまとめろれている。

好ましい真核プラスミドとしては、ＢＰＶ、ワタシニア
、ＳＶ４０．２−ミクロンサークル等、およびそれらの
誘導体がある。そのようなプラスミドは当該分野でよく
知られているｒＢｏｔｓｔｅｉｎ他、ＭｉａｍｉＷｎｔ
ｒ、Ｓｍ２．　１９：２６５〜２７４（１９８２）　　
；　Ｂｒｏａｃｈ、　Ｔｈｅ　Ｍｏ１ｅｃｕ（ａＬｌ舅
−ｏ３ｙ、−可」■し回ｙ±Ｊ赳ｃｈａ舷シ９狙工以力
り隊視−勉ａｎｃｌ−Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ、　　Ｃ
ｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　１（ａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ。

Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ｌ１ａｒｂｏｒ、米国ＮＹ、
４４５〜４７０（１９８１）　　；Ｂｒｏａｃｈ、　Ｃ
ｅ旦、２８：２０３〜２０４　（１９８２）　　；Ｂｏ
ｌｌｏｎ他、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｌｅｍａｔｏｌ。

０ｎｃｏ＋、、　　１０　：　３９〜４８（１９８０）
　；Ｍａｎｉａｔｉｓ。

Ｑ１０　：　Ａ　Ｃｏｎ　ｒｃｈｅｎｓｉｖｅ　Ｔ、ｒ
」ｐ月ｓｅ、−■９−１　。

３　、Ｇｅｎｅ　Ｅｘ　ｒｅｓｓｉｏｎ、　Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　　（米国ニューヨーク）発行．Ｓ
６３〜６０８　　（１９８０）参照〕。

ＩＶ、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットまたはそ曳肌
五匁皿瀘−−−−−−−−−−−−一本発明は、ＬＦＡ
−ルセプター分子のアルファーサブユニ・ノドの核酸配
列とアミノ酸配列を提供する。これを見出したことによ
り、組換えＩ）ＮＡ技術を利用してＬＦＡ−１アルフア
一サブユニツト分子を産生ずることができる。以下に述
べるように、本発明は、ＬＦＡ−１分子のアルファーサ
ブユニットそのものの抗炎症剤としての用途にも関する
。好ましい態様においては、Ｌ　Ｆ　Ａ−１分子のアル
ファーサブユニットをそのベーターサブユニットと組合
せて使用する。より好ましい態様では、ＬＦＡ−１のア
ルファーサブユニットとベーターサブユニットとからヘ
テロダイマーが形成されるような組合せで用いる。さら
に好ましくは、そのようなヘテロダイマーが、組換えに
よるＬＦＡ−１アルファーサブユニットまたはその機能
性誘導体を含有するものである。そのような組合せは各
種の方法を用いて得ることができる。例えば、ＬＦＡ−
１のベーターサブユニットをＭａｃ−１のアルファーサ
ブユニットとは独立して製造した後、２つの分子を混合
してもよい。しかしながら、ＬＦＡ−１のアルファーサ
ブユニットとベーターサブユニットの両方を同じ宿主細
胞で産生させて、それらが自己集合してＬＦＡ−１ヘテ
ロダイマ一レセプター分子を形成し易くすることが好ま
しい。

ＬＦＡ−１のベーターサブユニット（これは、Ｍａｃ−
１およびｐ１５０，９５にも共通している）は、化学合
成または組換えＤＮＡ技術のいずれによって製造しても
よい〔にｉｓｈｉｍｏｔｏ他、如」（。

土工：６８１〜６９０　（１９８７））。Ｌ　Ｆ　Ａ　
−１のベーターサブユニットのクローニングについては
、本出願人と同一人の出願に係る米国特許出願筒１９．
４４０号（１９８７年２月２６日出願）に開示されてい
ることを参考のために言及しておく。

本発明は、その−態様において、ＬＦＡ−ルセプター分
子のアルファーサブユニットの核酸配列とタンパク質配
列に関する。この発現により、組換えＤＮＡ技術を利用
して、細胞付着の拮抗剤として機能することのできるＬ
　ＦＡ　−１アルファーサブユニットの機能性誘導体を
産生させることができる。本明細書において用いる［細
胞付着の拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　ｏｆ　ｃｅｌ
ｌｕ（ａｒ　ａｄｈｅｓｉｏｎ）　Ｉとは、細胞／細胞
付着または細胞／基質付着の過程を抑制する能力を有す
る分子を意味する。ある特定の化合物が拮抗剤であるか
否かの決定は、内皮細胞への単球付着、好中球凝集、あ
るいは、好中球の１Ｃｂ３０セツト化を測定することに
より行なうことができる。細胞付着の好適な測定法は、
例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ他による［ジ、　ＩＩＩＩｍ
ｕｎｏｌ−、、１３７：１５〜２７　　（１９８６）Ｊ
やＫｅｒｚｅｒ他による［拡Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、
↓−″７　：１３１７〜１３２２　（１９８７）　Ｊに
おいて示されているので参考のために記しておく。細胞
付着の拮抗剤は、抗炎症剤として使うこともできる。

本明細書において用いるＬＦＡ−１アルファーサブユニ
ットの「機能性誘導体（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｅｒｉ
ｖａｔｉｖｅ）　Ｊとは、Ｍａｃ−１のアルファーサブ
ユニットの生物学的活性と実質的に同一の生物学的活性
（機能上または構造上のいずれかにおいて）を有してい
る化合物である。生物学的活性の例としては、ＩＣＡＭ
−１に結合する能力、ＬＦＡ−１分子の他の天然リガン
ドに結合する能力やＬＦＡ群塘タンパク質のβ−サブユ
ニットに結合する能力が含まれる。このような結合は、
内皮細胞、抗原提示細胞または標的細胞への白血球付着
のような付着に関連する現象を抑制すると考えられる。

２つの分子が実質的に同一の構造を有する場合、あるい
は、実質的に同一の生物学的活性を有する場合には、そ
れらの分子は「実質的に同一（ｓｕｂ−ｓＬａｎ目ａ１
１ｙ　ｓｕｍ目ａｒ）　Ｊと言う、Ｍａｃ−１のアルフ
ァーサブユニットの「機能性誘導体」とは、該ＬＦＡ−
１アルファーサブユニットの［断片（ｆｒａｇａ＋ｅｎ
ｔｓ　）　Ｊおよび「変異型（νａｒｉａｎｔｓ）　Ｊ
の両方を含むものとする。ｒＬＦＡ−１のアルファーサ
ブユニットの断片］とは、該分子を分断して得られる全
てのポリペプチドを意味する。

ｒＭａｃ−１のアルファーサブユニソ］・のｉ　異型Ｊ
とは、当該分子に全体または一部が構造において実質的
に同一な分子であって、該「変異型」が、ＬＦＡ−１の
アルファーサブユニ・ノドの活性に同じか、またはＬＦ
Ａ−１の活性を抑制するような少なくとも１＋ｉｌ！類
の生物学的活性を有しているものを意味する。すなわち
、ある分子が、ＬＦＡ−１の活性と同じか、またはその
ような活性を抑制するような少なくとも１種類の生物学
的活性を有していれば、当該分子はＬＦＡ−１アルファ
ーサブユニットの「変異型」と考え、ある分子が他の分
子において存在しない１個またはそれ以上のアミノ酸を
含有している場合や、あるいは、２つの分子におけるア
ミノ酸残基の配列が同一でない場合においても「変異型
」という語を使用するやしたがって、例えば、ＬＦＡ−
１のアルファーサブユニットに存在する（または存在し
ないＨ個またはそれ以上のアミノ酸残基を欠如している
（または含有している）化合物も、該化合物力月−Ｆ　
Ａ−１のアルファーサブユニットの生物学的活性に類似
する（あるいは該活性に抑制的な）生物学的活性を有し
ていれば、ＬＦＡ−１のアルファーサブユニットの変異
型とみなす。「生物学的活性（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　
ａｃｔｉｖｉｔｙ　）　Ｊという語は、「構造的（ｓｔ
ｒｕｃｔｕｒａｌ）　Ｊな活性に加えて［触媒的（ｃａ
ｔａｌｙｔｉｃ）　Ｊな活性等も含む（すなわち、ＩＣ
ＡＭ−１，ＬＦＡ分子の他の天然リガンド、ＬＦＡ−１
のベーターサブユニット、または抗ＬＦＡ−１アルファ
ーサブユニット抗体のような他の分子に結合する能力）
ものとする。

本発明は、ＬＦＡ−１分子のアルファーサブユニットの
機能性誘導体を製造するための方法を提供する。そのよ
うな誘導体を得るためには、しＦ＾−１アルファーサブ
ユニットをコードするＤＮＡ。

ＲＮＡ、または（より好ましくは）ｃＤＮ八に突然変異
誘発を起こさせればよい。突然変異誘発は、ランダムで
あってもよく、あるいは部位特異的であってもよい。さ
らに、突然変異誘発は、自発的なものもあるが、化学的
手法、放射性手法または組換え技術を用いて誘発させる
こともできる。

さらに、本発明は、特定のアミノ酸残基を欠いているか
、あるいは、別のアミノ酸残基を含有しているが、細胞
付着を増大させるか抑制させる能力を有する機能性誘導
体にも関する。

化学的変異誘発剤としては、塩基アナログ（例えば．Ｓ
−ブロモウラシル、または２−アミノプリン）：脱アミ
ノ化剤（例えば、亜硝酸、ヒドロキシルアミンなど）；
アルキル化剤（例えば、メチル・メタ・ンスルホネート
、ニトロソグアニジンなど）　：あるいはシフト型変異
剤（ｉｎｔｅｒｃｏ（ａｔｉｎｇａｇｅｎｔ）Ｃ例えば
、アクリジンオレンジ、エチジウムブロミド、ブソラレ
ンなど）が挙げられる。

放射線変異誘発は、紫外線、ガンマ線、Ｘ線などによっ
て引き起こすことができる。核酸分子の突然変異誘発に
関する技術は、ＭｉｌｌｅｒによるｒＥｘ　ｅｒｉｍｅ
ｎｔｓ　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕ（ａｒ　Ｂｉｏｌｏ　　、
　ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　ｔ（ａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ　（米国ニューヨーク）発行、１９７２Ｊや
５ｉｌｈａｖｙ他による［Ｅｘｐｅｒｉ−ｒｍｅｎｔｓ
　ｗｉｔｈ　Ｇｅｎｅ　Ｆｕｓｉｏｕｓ、　Ｃｏ１ｄ　
Ｓｐｒｉｎｇ　ｌ１ａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　
（米国一ニーヨーク）発行、１９８４Ｊを参考にすれば
よい。

ＬＦＡ−１アルファーサブユニットをコードする核酸の
所望の部位に特異的な突然変異を起こすには、部位特異
的突然変異誘発を用いることができる。簡単に言えば、
この方法は、一般に、確定した所望のＤＮＡ配列を有す
る合成オリゴヌクレオチドを合成することを含む。その
ようなオリゴヌクレオチドの合成法はＩｔａｋｕｒａ他
による「加工Ｒｅｖ、旧ｏｃｈｅｍ、、　５３　：　３
２３〜３５６　（１９８４）　Ｊに示されている。ＬＦ
Ａ−１アルファーサブユニットまたはその機能性誘導体
をコードする核酸は、一般に、Ｍ１３、φＸ１７４など
のような二本鎖ベクター上にサブクローニングされ、該
ベクターの一本鎖を互いに分離することになる。その後
、該ベクターの一本鎖は、前記合成オリゴヌクレオチド
の存在下に培養される。オリゴヌクレオチドのＤＮＡは
確定しているので、ＬＦＡ−１アルファーサブユニット
をコードする核酸の任意の領域と塩基対合することので
きるオリゴヌクレオチドを構成することが可能である。

該オリゴヌクレオチドと一本鎖ブラスミドとの間に塩基
対合が生しると、ＤＮＡポリメラーゼを用いてオリゴヌ
クレオチドを伸長させ二本鎖Ｄ　Ｎ　Ａ分子を作り、し
かる後、ＤＮＡリガーゼにより該分子をシールすること
ができる。この二本鎖ＤＮＡ分子を細胞にう、り入する
と、生保存的Ｄ　Ｎ　Ａ　複製の結果、ＬＦ、！−１ア
ルファーサブユニットをコードする配列にオリゴヌクレ
オチド断片のＤＮＡ配列が移入された子分子が生じる。

本発明のＬＦＡ−１アルファーサブユニットまたはその
機能性誘導体は、よく知られているＭｅｒｒｉｅｒ　１
ｅｌｄ法その他のペプチド合成法を用いて化学的方法に
より合成することもできる。別の方法として、化学合成
（例えば、ホスホジエステル合成法を用いる）により核
酸分子を得た後、発現させて所望の分子を製造すること
もできる。

このように、ＬＦＡ−１をコードする配列の特定の部位
に点突然変異を起こさせ外来性ＤＮＡ配列を導入しよう
とする場合、あるいは、そのような配列において通常は
存在するヌクレオチドを削除を起こさせようとする場合
には、当該突然変異ないしは配列を含有する（または欠
如する）ようなオリゴヌクレオチド断片を設計した後、
上述した手法を行なうことになる。ＬＦＡ−１アルファ
ーサブユニットをコードする核酸の特定の領域に突然変
異を起こしたり外来性ＤＮＡを導入するためには、突然
変異誘発を所望している領域のＤＮＡ配列に相補的なフ
ランキングＤＮＡ配列によって、当該突然変異の配列ま
たは外来性ＤＮＡの配列を囲むことが必要である（Ｊｅ
ｎｋｉｎｓ他、８ｉｏａｓｓ肚、５　：　２４４〜２４
７　　（１９８６）　　；ＤｃｅｒＨｅｒ。

Ａｎ　ｅｗ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｉｎｋ、　　Ｅｄ、　
　εｎｇ１．，２３　：　９１９〜９３　１　　（１９
８４）　　；Ｋａｉｎａ、　　Ｂｉｏｌ、　　Ｚｅｎｔ
ｒａｌｂｌ、。

９９：５１３〜５３１　　　（１９８０）　　；Ｋｕｎ
ｋｅｌ。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　　（
Ｕ　Ｓ　Ａ）、　　８２　：　４８８〜４　９　２　　
（１９８５）　　　ＨＮｉｓｂｅｔ他、　Ｇｅｎｅ　　
Ａｎａ＋。

匣、、２：２３〜２９　（１９８５）　　；１ｌｉｎｅ
ｓ他、Ｇｅｎｅ、　　１１：２０７〜２１８　　（１９
８０）　　；Ｍｅｓｓ　ｉｎｇ　　他、　Ｎｕｃｌ、　
　八ｃｉｄ、　　Ｒｅｓ、、　　　９　　：　　３　０
　９（１９８１））　　。

突然変異は、組換えＤＮＡ技術を応用することによって
も生じ得る。例えば、Ｌ　Ｆ　Ａ　−１”ｊ’ルファー
サブユニットをコードする核酸分子のヌクレオチド配列
を走査して、制限酵素エンドヌクレアーゼによって認識
され得るようなオリゴヌクレオチド部位を明らかにする
。その後、そのようなエンドヌクレアーゼを用いて、特
定の認識部位において核酸配列を特異的に切断すること
ができる。

ＬＦＡ−１をコードする配列の２つの位置を認識しく且
つその位置において切断する）制限酵素エンドヌクレア
ーゼを使用することにより、ＬＦＡ−１アルファーサブ
ユニットをコードする配列の１つの断片を切除すること
ができる。別の方法として、この目的のために２種類の
異なるエンドヌクレアーゼを用いることも可能である。

Ｄ　Ｎ　Ａ　ＩＪガーゼの存在下に切断分子を培養（イ
ンキユヘー日することにより、ＬＦＡ−１アルファーサ
ブユニットをコードする配列を再シールして、（切除断
片を欠く）単一の配列を形成させることができる。ＬＦ
Ａ−１アルファーサブユニットをコードする配列中に適
当な制限酵素エンドヌクレアーゼ認識部位が存在しない
場合には、上述したような部位特異的突然変異誘発法に
より、当該配列中にそのような部位を導入することがで
きる。

別の方法として、エキソヌクレアーゼを用いて、ＬＦＡ
−１アルファーサブユニットをコードする配列を切断し
自由末端を［かじるにブリング：　ｎ１ｂｂｌ　ｉｎｇ
）　Ｊことによっても突然変異を導くことができる。こ
のような処理によれば、欠失のみならず、フレームシフ
ト変異やその他の突然変異も導くことができる。さらに
、この方法は、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットをコ
ードする配列に新規な制限酵素エンドヌクレアーゼ部位
を導入することができる。エンドヌクレアーゼ、ＤＮＡ
リガーゼ、およびエキソヌクレアーゼの使用法は、例え
ば、Ｍａｎｉａｔｉｓ他によるｒ　Ｍｏ１ｅｃｕ（ａｒ
Ｃｌｏｎｉｎ　、Ａ　ＬａｂｏｒａＬｏｒｙ　Ｍａｎｕ
ａｌ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ！（ａｒｂｏｒ　Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ　（米国ニューヨーク州）発行、１９
８２Ｊに示されている。

組換えＤＮＡ技術は、また、ＬＦＡ−１アルファーサブ
ユニットタンパク質（またはその機能性誘導体）と新規
なポリペプチドとから構成される融合タンパク質を装造
するのにも用いられる。この新規なポリペプチドとは、
特定のポリペプチドに限定されるものではなく、単一の
アミノ酸または一連の複数のアミノ酸から構成されるも
のである。そのような融合分子は、フレームシフト変異
を導かなように、当該新規ポリペプチドをコートするＤ
ＮＡ配列を、ＬＦＡ、−１アルファーサブユニット（ま
たはその機能性誘導体）をコードするＤＮＡ配列に結合
することによって得られる。

Ｌ　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニット遺伝子に融合
され得る好ましいポリペプチドの例としては、真核生物
または原核生物のシグナル配列（ＧｉｌｂｅｒＬ他、米
国特許第４．４１１，９９４号；　Ｃａ５ａｄａｂａｎ
他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　
（Ｕ　Ｓ　Ａ）＋工６：４５３０〜４５３３　（１９７
９））、または、Ｍａｃ　　１アルファーサブユニット
（またはその機能性誘導体）の安定性、生物学的半減期
、または効能を増大（または減少）させるポリペプチド
がある。遺伝子融合の方法論に関する優れた総括は．Ｓ
ｉｌｈａｖｙ他（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　
Ｇｅｎｅ　Ｆｕｓｉｏｎｓ　ＸＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　
Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（米国ニューヨ
ーク）発行、（１９８４））によって与えられている。

Ｌ　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニットの各種断片あ
るいは組換えＭａｃ−１アルファーサブユニットを用い
る免疫に応答して抗体く特にモノクローナル抗体）を引
き出すことができる。そのような抗体は、内皮細胞に対
する幾つかの白血球の結合を妨げるのに使うことができ
、したがって、抗炎症剤として用いることができる。

上述したような各種の方法を用いて、ＬＦＡ−１アルフ
ァーサブユニットの断片を調製し、それらが細胞付着の
拮抗剤であるか否かを測定することができる。細胞付着
の拮抗剤であることが見出された断片は、本発明に従い
抗炎症剤として使用することができる。

本発明が導かれた一つの理由は、白血球／基質付着およ
び白血球／内皮細胞付着はＬ　Ｆ　Ａ　−ルセブター分
子の関与する相互作用に起因するということを発見した
ことである。そのような血球が炎症部位に移動しおよび
（または）炎症に寄与する各種のエフェクター作用を行
なうためには細胞付着が必要であるから、そのような細
胞付着を抑制する物質は炎症を弱めたり防止するであろ
う。

Ｌ　Ｆ　Ａ　−ルセブター分子は、白血球の細胞の表面
に存在する。これらの血球の内裏細胞単層への付着は、
部分的にＬＦＡ−ルセプター分子によって仲介されてい
る。

ＬＦＡ−１と、その天然リガンド（例えば、Ｉ　ＣＡＭ
−１など）との相互作用は９．細胞付着において非常に
重要である。付着過程を通じて、リンパ球は動物内に異
物抗原が存在していることを連続的に知ることができる
。この過程は通常は望ましいものであるが、臓器移植拒
絶反応、Ｍ１織移植拒絶反応、さらには多くの自己免疫
疾患の原因にもなる。したがって、臓器移植、組織移植
あるいは自己免疫疾患の患者においては細胞付着を弱め
たり阻害することが極めて望ましくなるであろう。

このような相互作用を拮抗することのできる薬剤は、哺
乳動物被検体における抗炎症剤としてきわめて適してい
る。重要なことは、そのような薬剤は、付着を選択的に
阻害することができ、しかも、従来の薬剤において見出
されるような腎毒性のごとき他の副作用を生じない点に
おいて、一般の抗炎症剤とは異なることである。かくし
て、ＬＦＡ−１のアルファーサブユニット、ＩＣＡＭ＝
１、またはＬＦＡ−１分子のその他の天然リガンドに結
合することのできる薬剤を用いることにより、臓器やＸ
ＪｌＶａの拒絶反応、対宿主性移植片疾患（骨髄または
その他のリンパ球を含有ないしは産生組織の移植片に起
因する宿主組織の拒絶反応）を防止したり、あるいは、
副作用（例えば、その細胞結合リガンドとの相互作用な
ど）の恐れなく細胞結合（ｃｅｌｉ−ｂｏｕｎｄ）　Ｌ
　Ｆ　Ａ　−１を妨げることにより自己免疫応答を変え
ることができる。

重要なことは、上述したような分子を認識することがで
きる薬剤を用いることにより、ＨＬＡが不適合の個体間
においても臓器移植を行なうことができるということで
ある。

このように、ＬＦＡ−ルセブクー分子が、その天然の結
合リガンドに結合する能力を妨げる薬剤は、前述したよ
うにＬＦＡ−１に依存性のあらゆる機能を弱めることが
できる。かくして、それらの薬剤は本発明に従い抗炎症
剤として作用することができるのである。そのような薬
剤としては、ＬＦＡ−１アルファーサフ゛ユニット、Ｌ
ＦＡ−１（アルファーサブユニットおよびベーターサブ
ユニット）、ならびに、ＬＦＡ−１アルファーサブユニ
ットまたは該サブユニットの断片に結合することができ
る抗体を挙げることができる。そのような薬剤はすべて
本発明に従い使用し得るものである。本発明の抗炎症剤
は、特異的防御系によって引き起こされた炎症を処置す
ることができる。

本発明において用いる「特異的防御系」とうい語は、防
御系のうち特定の抗原に反応する成分を指称する。その
ような細胞としては、リンパ球およびマクロファージを
挙げる。炎症が特異防御系の反応によって引き起こされ
たり、仲介されたり、あるいは該反応に関連している場
合には、炎症は特異的防御系の反応に起因すると言うも
のとする。

特異的防御系の反応に起因する炎症の例としては、はし
かウィルスような抗原に対する反応、自己免疫疾患、Ｔ
細胞による遅延型過敏症応答（例えば、ツベルクリン反
応陽性のヒトに見られる）、臓器または組織移植拒絶反
応、対宿主性移植片疾患（すなわち、骨髄またはその他
のリンパ球含有または産生組織の移植片によって引き起
こされる宿主細胞の拒絶反応）などがある。ＬＦＡ−１
アルファーサブユニットまたはその機能性誘導体がその
ような炎症反応を拮抗する能力を有することに基づき、
慢性炎症疾患や自己免疫疾患（例えば、紅斑性狼疹、自
己免疫甲状腺炎、ＥＡＥ　（実験アレルギー性脳を髄炎
：　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｌｌｅｇｉｃｅｎｃ
ｅｐｈａｌｏａ＋ｙｅｌｉｔｉｓ）、多発性硬化症、あ
る種の糖尿病、レノ−症候群、慢性関節リウマチなど）
の治療に用いることができる。

ＬＦＡ−１は、内皮組織に結合することのできる細胞上
に出現するので、患者にＬＦＡ−１アルファーサブユニ
ットまたはＬＦＡ−１（アルファーサブユニットとベー
ターサブユニット）を投与すると内皮組織をイメージン
グもしくは視覚化することができる。さらに、この手法
によって、視覚化組織上に存在するＬＦＡ−ルセブター
分子の結合リガンドの量と分布に関する診断情報が与え
られる。そのように使用する場合においては、ラジオア
イソトープ、アフィニティラベル（例えば、ビオチン、
アビジンなど）、螢光性ラベル、常磁性原子などを用い
ることにより、ＬＦＡ−１アルファーサブユニット（ま
たは、ＬＦＡ−１のアルファ／ベータレセプター分子）
に検知可能になるようにラベルを付する。そのようムラ
ベル化を行なう手法は当該波ａｉ分野においてはよく知
られている。ラジオアイソトープ、酵素ラベル、螢光ラ
ベル、常磁性ラベル、電子密度ラベル、トキシンラベル
などを用いることにより、抗体（またはその断片）を検
出可能にラベルすることもできる。好ましいトキシンラ
ベルには、ジフテリアトキシン、リシン、コレラトキシ
ンが含まれる。患者にそのようなラベル（標識）化分子
を投与すると炎症部位が明らかにされる。そのような検
出用ラベルは、また、患者の免疫系の状態を分析するの
に使うこともできる。診断用イメージング（画像化）に
おける抗体の臨床的利用についての総括はｓ　Ｇｒｏｓ
ｓｒａａｎ　ｒＵｒｏｌ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｎｏｒｔｈ　
Ａｎ＋ｅｒ、＋　１３　：４６５〜４７４（１９８６）
Ｊ　、　ＩＪｎｇｅｒ他ｒｌｎｖｅｓｌＲａｄｉｏｌ、
２０　：　６９３〜７００　（１９８５）Ｊ、およびＫ
ｈａ−他ｒＳｃｉｅｎｃｅ　、　２０９　：　２９５〜
２９７　（１９８０）Ｊによって行なわれている。

炎症部位に白血球が自発的に移動する能力はＬＦＡ−１
に依存する（Ｋｅｉｚｅｒ他、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍ−
ｍｕｎｏｌ、、土７　：１３１７〜１３２２（１９８７
））。

ＬＦＡ−１アルフアーサブユニントまたはＩ−Ｆ　Ａ−
１（アルファサブユニットとベータサブユニット）を投
与することによりそのような移動を抑制し得る。

同様に、内皮細胞に対する白血球の付着能力もＬＦＡ−
１に依存することが見出されている。本発明の抗炎症剤
はそのような活性を抑制するのに用いることができる。

ＩＣＡＭＨ（例えば、Ｉ　ＣＡＭ−１）は、特定のヒト
ウィルスによって認識される〔特に、主型（ｍａｊｏｒ
　ｔｙｐｅ）のライノウィルスはｌ　ＣＡＭ−１に結合
する）。このようなウィルスは、この認識によりヒト細
胞に結合し、この結果、ウィルス感染を仲介することに
なる。かくして、ウィルス感染の病因における中心的な
過程は、細胞レセプターとウィルスとの間の相互作用で
ある。

したがって、Ｉ　ＣＡＭ分子に結合するウィルスの能力
を抑制、競合または阻害する薬剤は、ウィルス感染（特
にライノウィルス感染）の処置に応用することができる
。

かくして、本発明は、Ｉ　ＣＡＭ−１と相互作用し、そ
れにより、細胞／ウィルス間結合およびウィルス感染を
防止したり、そのような感染の程度または期間を弱化ま
たは減少させることができるＬ　Ｆ　Ａ　−１アルファ
ーサブユニットまたはその機能性誘導体の能力にも基い
ている。

本発明にとって特に興味が深いのは、熔解化状態のしＦ
Ａ−１アルファーサブユニット、ＬＦＡ−１アルファー
サブユニットの断片等のようなＬ　Ｆ　Ａ　−１アルフ
ァーサブユニットのｉ脂性誘導体である。そのような薬
剤は、当該分子をＣＤ−１８群（ＣＤ−１８フアミリー
）のベーターサブユニットの分子と結合させたことから
成るヘテロダイマーとして患者に投与することが好まし
い。

上述したようなウィルス感染を治療するという目的を達
成するためには、単一の薬剤としてもよく、あるいは、
一種以上の薬剤の組合せとしてもよい。

ウィルス感染を処置するためには、本発明に従う上述の
薬剤を（例えば、経口投与により）、ウィルスがＩＣＡ
Ｎｉ分子に結合する能力を抑制し、競合または阻害する
のに充分な量で患者に投与する。そのような投与量は、
（各投与薬剤毎に）一般に、患者体重ｋｇ当り０．０１
ｐｇからｌ　ｍｇであるが、これよりも多い量あるいは
少量を用いることもできるユ ウィルス感染を処置するために、このような薬剤：ま、
′予防のために」投与するか、または「治療のために」
投与してもよい。予防のために投与するときには、感染
時に先行（すなわち、感染時の前または直後）するがウ
ィルス感染の症状の前に薬剤を投与する。薬剤の予防投
与は、後続の感染を防止するか弱める機能を果たす。治
療のために投与するときには、実際のウィルス感染の症
状（例えば、ウィルスによる鼻内うっ血等の出現、ある
いは、体液内でのウィルスの検出や感染患者の血清内で
の抗ウイルス抗体の検出など）の発生時（または発生直
後）に薬剤を投与する。薬剤の治療的投与は、実際の感
染を弱め、その感染の程度や！ＭＩ間を減少させる働き
をする。

Ｖ、ＬＦＡ二」二へルビ４１ニニ尤り７らヨノニ九ぷは
［ヂＬ　ＦＡ　−ルセブター分子（すなわち、αおよび
β−サブユニット）　、ＬＦＡ−１アルフアーサブユニ
・スト分子、または、治療上活性なその機能性３ｇ　４
７体を患者に投与することにより、ＬＦＡ−１アルファ
ーサブユニットの治療効果を明らかにすることができる
。これらの分子は、化学合成によるか、あるいは、組換
えＤＮＡ技術を用いるごとにより得ることができる。さ
らに、タンパクｎ加水分解により、ＬＰ．Ｉルセブター
の各種断片やそのアルファーサブユニットを得ることも
できる。キャリアへのカップリングを増大させたり活性
を向上させるために加えられた追加のアミノ酸残基を有
するようなａ脂性誘導体を使用することにより、分子の
治療効能を増大させることもできる。

本発明の分子は、当該分子の化合物に通常および天然で
は見出されるような物質を実質的に含まないときには「
天然の混在物を実質的に含まない」と言うことにする。

本発明の治療用分子を患者に投与するに際して、投与量
は、患者の年齢、体重、性別、一般的な健康状態、以前
の病歴などの因子に依存する。一般的には、約１ｐｇ／
ｋｇ（患者体重）から１０可／ｋｇ（患者体重）の範囲
の投与量で、Ｌ　Ｉ”　Ａ−１アルファーサブユニット
（またはその機能性誘導体）を投与することが望ましい
が、それより低い諺や高い量も投与され得る。

本発明の分子の患者への投与は１．静脈段１ｊ、筋肉内
投与、皮下投与、腸管的投与、または非経口投与などに
よって行なわれる。投与は連続注入でもよく、あるいは
、単一または多回の固形段ｊテなどによって行なわれる
。

本発明の抗炎症剤は、炎症を抑制するのに充分な量で患
者に与えられるものとする。当該薬剤の投与量、投与経
路などが炎症を弱めたり防止するのに充分であれば、そ
の量を炎症抑制に充分な量というものとする。本発明の
抗炎症剤は、炎症の発生前に投与して（予測される炎症
を抑制するため）もよく、あるいは、炎症の開始後に投
与してもよい。

、組成物の投与が患者に受は入れられるときには、該組
成物は［薬理学的に許容できる（ρｈａｒｍａ−ｃｏｌ
ｏｇｉｃａｌｌｙ　ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）　Ｊと言わ
れる。そのような薬剤の投与量が生理学的に意義がある
ときには、当該薬剤は「治療上の有効量で（Ｌｈｅｒａ
ｐｅｕｔｉ−ｒ、ａｌｌｙ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ａｍ
ｏｕｒ＋Ｌ）　　Ｊ投与されたと言う。

薬剤の存在により患者の生理に検出できるような変化が
生じた場合には、その薬剤は生理学的に意義がある。本
発明の分子は既知の方法に従って製剤化されて製薬的に
許容できる組成物に調製され、当該物質またはその機能
性誘導体は製薬的に許容できる担体と混合される。好適
な担体としては、例えば、ｒＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　
Ｐｈａｒｍａｅｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ（第１
６版）　０ｓｏｌｌ集、米国ペンシルバニア州Ｅａｓｔ
ｏｎ、　　（１９８０）　Ｊに記載されているようなヒ
トのタンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）が挙げ
られる。有効投与を発揮する製薬的に効果のある組成物
を調製するためには、好適量の担体とともに、製薬的に
有効な量のＬ　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニットま
たはその断片もしくは機能性誘導体を組成物に含有させ
るようにする。

製薬上の手段を追加して、作用期間を調節することもで
きる。放出を調節した製剤（ｃｏｎｔｒｏｌ　１ｅｄｒ
ｅｌｅａｓｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）を得るには
、例えば、ポリマーを用いて、ＬＦＡ−１アルフアーサ
ブユニント（またはその断片もしくは機能性誘導体）と
結合させたりまたはそれらの化合物を吸収する。

薬剤供給の調節（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｄｅｌｉｖｅ
ｒｙ）を行なうには、適当な巨大分子（例えば、ポリエ
ステル、ポリアミノ酸、ポリビニル、ピロリドン、エチ
レン酢酸ビニル、メチルセルロース、カルボキシメチル
セルロース、または硫酸プロタミン）を選択し、巨大分
子の濃度を選定するとともに、薬剤放出を行なうための
移入手段を定める。放出調節型の製剤により作用期間を
調節することのできる別の方法は、ＬＦＡ−１アルフア
一サブユニツト分子（またはその断片もしくは機能性誘
導体）をポリマー（例えば、ポリエステル、ポリアミノ
酸、ヒドロゲル、ポリ乳酸、またはエチレン／ビニルア
セテートコポリマー）の粒子に移入することである。別
の方法として、ポリマー粒子に当該薬剤を移入する代り
に、例えば、コアセルベーション法または界面重合のよ
うな方法で調製したマイクロカプセル（例えば、ヒドロ
キシメチルセルロースマイクロカプセル、ゼラチンマイ
クロカプセル、ポリメチルメタクリレートマイクロカプ
セル）、コロイド系薬剤放出剤（ｄｒｕｇ　ｄｅｌｉｖ
ｅｒｙ　ｓｙｓｔｅｍｓ　：例えば、リポソーム、アル
ブミンミクロスフイア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子
、マイロエマルジョンのナノ粒子）に当該分子を包括さ
せることもできる。これらの技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏ
ｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａ−ｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎ
ｃｅｓ　（１９８０）に示されている。

上述の一般的な説明に加えて、以下の実施例を参照する
ことにより本発明を一層理解することができるであろう
。以下の実施例は説明のためのものであり、特に言及し
ていない限り本発明を限定するためのものではない。

去財Ｉ鉗Ｌ ＬへＦ−１は．ＳＫＷ３リンパ球の表面で産生される。

モノクローナル抗体アフィニティクロマトグラフィによ
り、Ｍｉｌｌｅｒ他の方法を用いて５ＫＷ３細胞からＬ
ＦＡ−１アルファーサブユニットを精製した［ＭＮｌｅ
ｒ他、Ｊ、　ｂ＋＋ｍｕｎｏ１．＋土−３７：２８９１
〜２９００　（１９８７）参照］。ＬＦＡ−１のアルフ
ァーサブユニットに対するモノクローナル抗体ＴＳ　１
／２２は、精製後、（シアノゲンブロミトを用いて”）
ＣＬ−４Ｂセフアロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　：ファ
ルマシア社製）に、充填層ｍ１当りモノクローナル抗体
（ＭＡＢ）２ｍｇの割合で結合させた。

５ＫＷ３細胞（ＭＩＴ力ルチュアコレクションより入手
）４２．２ｇを３００ｍｌの溶菌バッファー（Ｋｕｒｚ
ｉｎｇｅｒ他、Ｊ、　Ｂｊｏｌ、　ＣｈｅＬｌｌ、、　
　２５７　：　１２４１２〜１２４１８　　（１９８２
））に溶菌し、ライセード（溶菌液）を１６，０００Ｘ
ｇで２時間遠心処理した。しかる後、上清液を、活性化
ＣＬ−４Ｂセファロースから成る予備カラムと、これに
直列のＴＳ　１／２２セフアロースカラムに通した。次
いで、ＴＳ　１／２２カラムを洗浄しくＫｕｒｚｊｎｇ
ｅｒ他、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　　２５７　
：　１２４１２〜１２４１８（１９８２））．Ｓ０ｍＭ
）リエチルアミン、０．５Ｍ　ＮａＣ１，０，１％Ｔｒ
ｉｔｏｎＸ　−１００，１ｍＭヨードアセトアミド、Ｉ
ＯＵ／ｍ／アプロチニンおよび０．０２５％Ｎａｐｓ　
（ｐＨ１１，５）を用いてＬＦＡ−ｉアルファーサブユ
ニットを）容出し、直ちにｐＨを中性にした。ＬＦＡ−
１アルファーサブユニットを含有する両分をプールし、
凍結乾燥し、さらに．Ｓ倍体積のエタノール中で一２０
°Ｃにおいて一晩かけて沈降させた。

精製後の当該タンパク質を還元しアルギル化しくＬａ−
他、ＥＭＢＯＪ、６：９１５〜９１９（１９８７））、
さらに．ＳＤＩＰＡＧＥ電気泳動にかけた。ＬＦＡ〜１
アルファーサブユニットに相当するバンドは、ＩＭＫＣ
Ｉで視覚化されるが、これを切除し、電気泳動溶出した
（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎ。

ｆ也、　Ｃ１ｉ　　、　　Ｉｍａ＋ｕｎｏ１．　　Ｉｍ
ａ＋ｕｎｏ　　ａｔｈ、＋　　　３　　：　　３　２　
４　〜３３３　（１９７５））。精製後のアルファーザ
ブユニットは凍結乾燥し、４倍体積のエタノール中に一
２０°Ｃで一晩かけて沈降させた。得られたベレットを
再懸濁させ、１％トリプシンで消化した（Ｗｏｎｇ他、
Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、（ＩＩ
ｓＡ）、　８２　ニア７１１〜？７１５　（１９８５）
）。次いで、Ｃ４逆相カラム（Ｖｙｄａｃ）のＨＰ　Ｌ
　Ｃ（Ｂｅｃｋｍａｎ製）によりトリブチツク断片を分
離した。得られるペプチド類は、１％トリフルオロ酢酸
中の０〜６０％アセトニトリル勾配上で溶出させた。幾
つかのピークが分離したが、理論的には、この時のアセ
トニトリルの濃度は次式で定められる： Ｆ＝　（０，９Ｂ）−２ ここでＦは、直線勾配中のＥパーセントにおいて溶出し
たペプチドに対するアセトニトリルの容積パーセントで
ある（Ｌａ　ｔｈｅ他、Ｊ、　Ｍｏ１ｅｃ、　Ｂｉｏ上
、。

１８３：１〜１２（１９８５））。ピークを１．５ｍｌ
のポリプロピレン管に集めて５０μｅ以下に濃縮した。

８個のピークについてミクロ配列決定（ｍｉｃｒｏｓｅ
ｑｕｅｎｃｆｎｇ）を行なった。一つのペプチド（Ｌ６
４）の配列を用い、Ｌａ　ｔｈｅ他による示唆（Ｊ、Ｍ
ｏ１ｅｃ、　Ｂｊｏｌ、、　」」Ｌ影：　１〜１２　　
（１９８５）　）に従って単一のオリゴヌクレオチドを
合成した：５　’　−ＧＧＧＡＴＧＴＴＧＴＧＧＴＣＡ
ＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＣＴＣＡＡＴ−３’次のことを
まとめると次のようになる。先ず、ＬＦＡ−１のα−サ
ブユニットに対する抗体を用いるモノクローナルアフィ
ニティにより．ＳＫＷ３　　（Ｔリンパ腫セルライン）
ライセードからＬＰＡ−１を単離した。５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ画分はα−サブユニットおよびβ−サブユニットの存
在を示した。α−サブユニットをさらに５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅで精製し、この精製後のα−サブユニットをトリプシ
ンで消化し、得られたペプチドを逆相１１ＰＬｃで分離
した。ミクロ配列決定（ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｊｎ
ｇ）により、９個のピークから成るペプチドの配列を求
めた。コドン縮重度も最も低いペプチド配列を用いて単
一のオリゴヌクレオチド配列を特定したが、このとき、
最も頻度の高いヒトコドンを参考にした（　Ｌａ　ｔｈ
ｅ他、Ｊ、　Ｍｏ１ｅｃ、　Ｂｊｏｌ、＋　１８３　：
　１〜１２　　（１９８５））、このＬ　Ｆ　Ａ　−１
アルファーサブユニットのトリブチツクペプチドの配列
を第１表に示す。

残基位置　　　　　　　　アミノ酸配列９ｓｆｔｏ７ｘ
　ｘ　ｏ　Ｑ　（Ｎ）　Ｔ　Ｙ　ｔ　ｓ　Ｇ　Ｌ　（Ｅ
）　Ｙ　Ｌ　ｐ１９９−２１０　　１１　Ｍ　Ｌ　Ｌ　
Ｌ　Ｔ　Ｎ　Ｔ　Ｆ　Ｇ　Ａ　１２５４−２６０　　　
Ｙ　Ｉ　Ｉ　Ｇ　Ｔ　Ｇ　Ｋ２Ｏ２−４１３Ｖ　Ｌ　Ｌ
　Ｆ　Ｑ　Ｅ　Ｘ　Ｑ　Ｇ４９４−５０３　　　Ｇ　Ｅ
　Ａ　Ｉ　Ｔ　Ａ　Ｌ　Ｔ　Ｘ　１５４１−５５４　　
１　Ｅ　Ｇ　Ｔ　Ｇ　Ｖ　Ｌ　Ｓ　Ｇ　Ｉ　Ｑ　Ｘ　Ｆ
　Ｇ５６４−５７６　　　　Ｘ　　（Ｌ）　　Ｅ　　（
Ｇ）　　Ｄ　　（Ｖ／Ｇ）　　Ｌ　　Ａ　　Ｄ　　Ｖ　
　Ａ　　Ｖ　　Ｇ　　Ａ　　Ｅ８０３−８１７　　　Ｋ
　Ｖ　Ｅ　Ｍ　Ｌ　Ｋ　Ｐ　Ｉｔ　Ｓ　Ｅ　Ｉ　Ｘ　Ｖ
　Ｓ　（Ｔ）９２９−９４６　　　　１　　（Ｅ／口）
ＰＳＩＨＮＩＰＸＬＥＡＶＸＧカッコは配列が定かでな
いことを示す。下線を施したアミノ酸残基は、オリゴヌ
クレオチドプローブを作成するために用いたものである
。

ＰＭＡ−誘導ＨＬ−６０細胞（Ｃｏｒｂｉ他、Ｅ？ＩＢ
ＯＪ、。

６　：　４０２３〜４０２８　（１９８７）参照）　（
ＰＭＡ：Ｐｈｏｒｂｏｌ　Ｍｙｒｉｓｔｉｃ　Ａｃ１ｄ
、ホルボールミリスチン酸）から産生され２Ｋｂよりも
大きいｃＤＮＡを選択したλｇｔｌＯライブラリーから
得た組換え体（５Ｘ１０’）を、１５０ｍプレート当り
の組換え体ｓｏ、ｏｏｏの密度でプレートに播いた。ラ
イブラリーを増幅しくＷｏｏ、　Ｍｅｔ、　Ｅｎｚ　ｍ
ｏｌ、、　　６８　：３８９〜３９５　（１９７９））
、さらに、ＢｅｎｔｏｎとＤａｖｉｅｓのガイドライン
（Ｂｅｎ　ｔｏｎ他．Ｓｃｉｅｎｃｅ。

１９６：１８０〜１８２　（１９７７））に沿ってニト
ロセルロースフィルターヲ処ＦＩＬ、り。６ＸＳＳＣ（
０，６Ｍ　ＮａＣ１，０，０６Ｍクエン酸ナトリウム）
、０．０５％リン酸ナトリウム＋ビロリン酸ナトリウム
．Ｄ．５％Ｓ　Ｄ　Ｓ　ｓ　　ｌ　ＸＤｅｎｈａｒｄｔ
’ｓおよび１００μｇ７７ａｌのサケ精子ＤＮＡで、４
２℃において一晩かけて前記フィルターを予備ハイブリ
ダイズした。単一配列オリゴヌクレオチド（上述した配
列のもの）をポリヌクレオチドキナーゼを用いてｒ−”
Ｐ−ＡＴＰでラベルした。予備フラッシュしたＸＡＲ−
５フイルムに６〜２０時間フィルターを露出した。複製
フィルターにシベナルを与えたファージをプラーク精製
し、そのｃＤＮＡインサーをアガロースゲル電気泳動に
よりサイズを定めた。

３２　　ｍｅｒ　　（３２１μ体）をオリゴヌクレオチ
ドを用いて、ＰＭＡ−刺激骨髄細胞（Ｃｏｒｂｉ他、Ｅ
ＭＢＯＪ、、６　：　４０２３〜４０２８　（１９８７
））から作成したサイズ選択λｇｔｌＯｃＤＮＡライブ
ラリーから２０個のクローンを分離した。なお、この細
胞は、以前に、ＬＦＡ−１αサブユニットを合成するも
のとして示したものである（Ｍｉｌｌｅｒ他、Ｊ、　ｆ
ｍｎ＋ｕｎｏ１．、１３９　：　８４２〜８４．７（１
９８７））。

インサートのサイズを測定し、最長のクローン（λ５Ｌ
５）について制限酵素マツピングを作成した（第２図）
。このクローンは、オリゴヌクレオチドプローブに対応
するヌクレオチド配列を有していた〔当該最良プローブ
（ｂｅｓｔ−ｇｕｅｓｓ　ｐｒｏｂｅ）に対する同一性
は８５％〕。また、このヌクレオチド配列は、ミクロ配
列決定によって明らかにされたトリブチツクペプチドを
コードするものであリ、オリゴヌクレオチドプローブを
含み且つそれよりも長いものであった。しかしながら、
このクローンは、トリブチツクペプチド配列のすべてが
、読取り枠に存在しているわけではないので、当該タン
パク質の全体をコードしてはいない。λ５Ｌ５の５′側
の１．０ＫｂＥｃｏＲＩ断片を用いて、さらに５Ｘ１０
’個の組換え体を再スクリーニングした。新しく１４の
クローンについて同定を行なったところ、クローンλ３
Ｒ１が重複領域において同一の制限マツプを有し、さら
に１．０Ｋｂ５’断片を含んでいた。この追加の１゜Ｏ
Ｋｂ断片のヌクレオチド配列を測定した（第２図）。

選択したクローンについて、ダブル／部分消化法（ｄｏ
ｕｂｌｅ　ａｎｄ　ｐａｒｔｉａｌ　ｄｉｇｅｓｔｓ）
　　（Ｍａｎｉａｔｉｓ他、Ｍｏ１ｅｃｕ（ａｒ　　Ｃ
１ｏｎｉｎ　　、　　Ａ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　　　
Ｍａｎｕａｌ、　　ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏ
ｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　（米国ニューヨーク州）発
行、１９８２）により、制限マツプ（制限地図）を求め
た。制限断片をＭｌ　３ｍｐ　１８とＭ１３＋ｐ１　９
　　　（Ｍｅｓｓｉｎｇ、　　Ｍｅｔ、　　Ｅｎｚ　　
ｍｏｌ、、　　　ｌ　　Ｏ１二　２　０　〜７８（１９
８３））か、または、ｐＧＥＭ−３２、−４２１もしく
は−７Ｚ　（Ｐｒｏｍｅｇａ）にサブクローニングした
。ｐＧＥＭの断片の欠失は、エクソヌクレアーゼ■とＳ
ｌを用いて行なった（１！ｅｎ　１ｋｏｆ　ｆ　。

洟、　２８：３５１〜３５９　（１９８４）］。配列決
定は、ジオキシ・ターミネーション法によった（Ｓａｎ
ｇｅｒ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ
ｉ、（ＵＳＡ）。

ユ」肝５４６３〜５４６７　（１９７７））。いずれの
方向においても、コード配列．Ｓ′側非翻訳領域および
３′側非翻訳領域は、それぞれ、１００％、８３．１％
および３３．７％であった。

重複ＣＤＮＡクローンは．Ｓ１３９個のヌクレオチドを
含有している（第３図）。３５１０個のヌクレオチドか
ら成る読取り枠（オーブンリーディングフレーム）、９
４個のヌクレオチドから成る５′側非翻訳領域および１
５３５個のヌクレオチドから成るの非翻訳領域〔ポリ　
（Ａ＋）テイルの前に１５個ヌクレオチドから成るポリ
アデニル化部位を含有する〕が存在している。３′側非
翻訳領域内には、２個のタンデム型配列であってそれぞ
れがＡの多い部分（Ａ−ｒｉｃｈ　ｓｅｇｍｅｎｔ）で
終止している配列から成る典型的なＡｌｕリピート（反
復構造）が存在する（Ｉ（ａｒｄｒ＠ａｎ、　Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、　Ｊｙ−２３４：　１−１１　（１９８６）　
）　、このＡｌｕ配列は、３０４個ヌクレオチドの長さ
であり、ＡＡ’ｕファミリー共通配列に対して７８．８
％同一である。

Ｃｏｒｂｉ他による方法に従ってサザンブロソトを行な
った（Ｊ、Ｅｘｅｒ、　Ｍｅｄ、、　　１６７　：　１
５９７〜１６０７　　（１９８８））。５ＫＷ３、Ｕ９
３７、ＩＢ４またはＥＪ細胞から分離された細胞ＲＮＡ
２０μｇ／ｌｓｌを、１．０％ホルムアルデヒドゲルに
電気泳動させ、ニトロセルロースに移した〔いｒｙｅｎ
　を力！謄剪旦」Ｌ珈セ剰μ」匡蛙虹ムＧｒｅｅｎＰｕ
ｂｌｉｓｈｉｎｇ　　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ　　ａｎｄ
　　Ｗｉｌｅｙ−１ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（米国ニュ
ーヨーク）発行参照〕。２ＸＳＳＣ１ｌ×デンハート（
Ｄｅｎｈａｒｄｔ）溶液、Ｏ，１％ＳＤＳおよび１０μ
ｇ／（ａｌのニシン精子ＤＮＡでナイロン膜〔ゼータプ
ローブ（Ｚｅｔａ　ｐｒｏｂｅ）（Ｂｉｏｒａｄ　’Ｍ
Ｊ）　］をプレハイブリダイズし、さらにハイブリダイ
ズした。ｃＤＮＡクローン（λ３Ｒ１）の５′末端から
得た１、　８　Ｋ　ｂのＥｃｏＲＩ断片をニック翻訳に
よってラベルしてプローブとして用いた。

ノーザンプロット分析では．ＳＫＷ３、Ｕ９３７および
ＩＢ４においては５．５　Ｋ　ｂのメソセージ（伝達信
号）が示されたが、ＥＪ細胞においてはシグナルは検知
されなかった。細胞分布は、ｃＤＮＡクローンのサイズ
およびＬＦＡ−１の細胞表面出現によく一致している。

クローンλ２Ｌ２から得た１、　２　Ｋ　ｂの５′側Ｅ
ｃｏＲＩ　−ＢａｍＨＩ断片を用いるサザンブロソトは
、１ＯＫｂおよび８Ｋｂから成る２つの断片にハイブリ
ダイズした（Ｃｏｒｂｉ他、Ｌ一旦独旦Ｌ−μ回、、１
．６７：１５９７〜１６０７（１９８８））。コスミド
ライブラーから分離したゲノムクローンは、同じ長さの
２つの断片を有している。これらの両断片は隣接してお
り、ＬＦＡ−１が単一のコピー遺伝子であることを示し
ている。

実脩例５ コンピュータ解析 Ｍｉｃｒｏｇｅｎｉｅ　Ｄ　Ｎ　Ａプログラム（Ｂｅｃ
ｋｒｎａｎ製）、ＮＢＲＦとＮ　Ｅ　Ｗデータベース〔
ＮａｔｉｏｎａｌＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　：　Ｎ　Ｂ　ＲＦ　（米
国ワシントンＤＣ）！！二ｊご基づ＜　ＦＡＳＴＰ（１
ｖｉｌｂｕｒ　＆　Ｓ＋ｇｍａｎｎ製）、および５ＷＩ
ＳＳ−ＰＲＯＴデータベース（Ｂｉｏｎｅｔ　９１）を
用いるＦＡＳＴＰを利用して、配列の相同性検討とアラ
インメントを行なった。次いで１．へＬＩＧＮ　（ＮＢ
ＲＦ）（５５８５）とＧ　Ｅ　Ｎ　Ａ　Ｌ　Ｉ　Ｇ　Ｎ
　（Ｂ＋ｏｎｅｔ）を利用してアラインメントを最適化
した。

ｊわｒｏｇｅｎＩｅ　ＤＮＡとＰＥＰ−ＰＬＯＴ　（５
７９２）（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　　ｏｆ　　ｔｌ＋ｓ
＋：ｏｎｓｉｎ　　Ｇｅｎｅｔｉｅｓ　　Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒＧｒｏｕｐ）を用いて疎水性を調べた。アミノ酸配
列の疎水性分析によれば、ＬＦＡ−１アルファーサブユ
ニットは、疎水性シグナル配列、細胞外ドメイン、単一
疎水性膜貫通領域、および細胞質短テール（尾部）を有
する典型的な膜貫通（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ）タ
ンパク質であることが示された。相同性の検討によれば
、と）ＬＦＡ−１のＮ末端残基は、ネズミＬＦＡ−１の
Ｎ−末端と同一であった。ヒトＬＦＡ−１は、最初の２
０個のアミノ酸について、ネズミＬＦＡ−１に対して５
５％の同一性を有していた。切断ペプチダーゼ用の共通
配列（Ａ　ｌ　ａ−Ｘ　−Ｓ　ｅｒ／　Ｐ　ｒｏ）を有
する古典的なシグナルペプチドが前記Ｎ−末端配列に先
行している。上流には３個の転写開始推定部位（ＡＴＧ
）が存在する。

−ｔａ的にはヌクレオチド位置８９における最初の開始
部位を使用することが好ましく　　（Ｋｏｚａｋ、）性
Ｓ−片Ａｃ１ｄ、Ｒｅｓ、、１２　：８５７〜８７２　
（１９８４））、これにより、シグナル配列で典型的に
見出されるように、Ｎ−末端残基近傍の数個の極性基を
有する２５個のアミノ酸残基から成るシグナル配列が得
られるＣｖｏｎ　Ｈｅ１ｊｎｅ、　Ｊ、　Ｍｏ１ｅｃ、
　Ｂｉｏ！、＋　１７３−　：２４３〜２５１　　（１
９８４））。トリブチツクペプチドのミクロ配列決定に
より明らかにされた１１７個のアミノ酸は全て、翻訳さ
れた読取り枠で見出され、該ｃＤＮＡクローンが真正で
あることが確認できた。これらの知見が示すように、Ｌ
Ｆ、１１−１は、Ｎ−末端の２９＋個のアミノ酸シグナ
ル配列、１０６３個の残基から成る細胞外ドメイン、２
９個のアミノ酸から成る膜貫通ドメインおよび５３個の
アミノ酸から成るＣ−末端細胞質テール（尾部）を有す
る。

細胞外ドメイン内には、４９〜６３個のアミノ酸から成
る７個の反復単位（反復構造：　ｒｅｐｅａｔｓ）があ
る。これらの内部反復単位間の内部量一度および統計的
有意性（ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　５１ｇｎ１ｆｉｃａ
ｎｃｅ）は、最後の３個の反復単位間において最も高く
、２４〜３３％およびＰ＜　ｌ　Ｏ−”−Ｐ＜　１０”
ｈである。

最後の３つの反復単位の中央領域は、幾つかのカヂオン
結合部位と相同性を有している（第４図）。

従来からの研究が示すように、該タンパク質の相同性に
は、Ｍｇ”　とＣａ”″が必要である（Ｒｏｔｈｌｅｉ
ｎ他、Ｊ、　Ｅｘｅｒ、　Ｍｅｄ、、　　１６３　：　
１１３２〜１１４９（１９８６））。二価カチオン結合
部位を有するそれらの３個のタンデム反復単位の相同性
は、ＬＦＡ−１が二価カチオンに結合することを示す。

反復単位Ｉ〜■は、共通の二価カチオン結合部位を欠い
ているが、保存型の側部領域（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄＨａ
ｎｋｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎｓ）を有している。これらが
構造的な類似性を有していることは、それらの反復単位
が複製により生じたという可能性を提供する。

成熟タンパク質はＭｒ＝　１２６．１９３であり、１２
個のＮ−リンクグリコジル化部位（Ａｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ
／　Ｓ　ｅｒ）は細胞外ドメインに存在している。

従来の研究によれば、これらの部位のうち少なくとも５
個が、グリコジル化されており、また、Ｎ−リンクカー
ボハイドレートにおいて典型的であるようにＭｒ＝５．
０００〜ＩＯ，０００のオリゴサツカライドを有してい
る（Ｄａｈｍｓ他、Ｌユ↓ｍｍｕｎｏ１．。

１３４：３９７８〜３９８６　（１９８５）　）。した
がって、これらのグリコジル化部位の５〜１０個を使用
すれば．Ｓｔ）Ｓ−ＰＡＧＥで測定される分子量に符合
するような分量計が得られることになる。

ネズミＬＦＡ−１ＯＮ−末端（Ｇｉｒｍａ他、影！旦＋
７０：６０５〜６１１　　（１９８７））：および、Ｌ
ＦＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐ１５０．９５に共通のβ−サ
ブユニットの一次構造の測定は、ＬＦＡ−１α−サブユ
ニットがインテグリン超科（ｉｎＬｅｇｒｉｎｓｕｐｅ
ｒｆａｎ＋ｉ　Ｉｙ）の−員であることを示唆している
。

ＬＦＡ−１サブユニツトは、ｐ１５０，９５α−サブユ
ニットとＭａｃ−１α−サブユニットに対してはかなり
の相同性を示す（同一性３５％）が、ＥＣＭレセプター
のα−サブユニットに対する相同性はそれよりも低い（
同一性２５％）。他方、ＦＮＲ，ＶＮＲおよびｎｂは、
互いに４０％の同一性を有する。さらに、当該白血球イ
ンテグリンはＮ−末端領域近傍に約２００個のアミノ酸
から成る挿入部（インサート）を有しているが、これは
３種類のＥＣＭの配列には存在しない（第５図）。

また、ＶＮＲ，ＦＮＲおよびｇｐＩＩｂ／ＩＩａにおい
てプロテアーゼ切断部位が生じる領域は、ＬＦＡ−１α
−サブユニット、ｐ１５０，９５α−サブユニットおよ
びＭａｃ−１α−サブユニットは存在しておらず、この
ことは、これらのしＦＡ−１群のα−サブユニットでは
タンパク質加水分解的な過程を欠いていることに相関し
ている。まとめると、これらの構造的な特徴から、α−
サブユニソトインテグリンには２つのサブファミリー、
すなわち、白血球インテグリンとＥＣＭインテグリンが
あることになる。

インテグリンファミリーのα−サブユニットは全て、二
価カチオン結合推定部位を含有するＬＦＡ−１に類似す
るタンデム型反復ｍ位を有する８４７６〜８４８２　（
１９８７）；５ｕｚｕｋｉ他、Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ
、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、（ＬＩＳＡ）、８　３　
　：　　８　　Ｇ　　１　４〜８６１８　（１９８６）
　　；Ａｒｇａｖｅｓ他、Ｊ、　Ｃｅ１ｌ虹旦、、ｉｏ
ｓ：ｔｔａ３〜１１９０　　（１９８７）；Ｒｕｏｓ（
ａｈｔｉ他．Ｓｃｉｅｎｃｅ、　２３８　：　４９１〜
４９７（１９８７））。しかしながら、Ｌ　Ｆ　Ａ　−
１およびｐ１５０．９５における反復単位の３個のみが
金属結合性推定部位を含み、これに対して、Ｅ　ＣＭレ
セプターにおいては反復単位の４個全てが金属結合部位
を含有する。ＬＦＡ−１およびその他のインテグリンの
二価カチオン結合推定部位は相互に関係はしているが、
ｎｊ述した膜タンパク質の二価カチオン結合部位と同一
ではない。カチオン結合部位には幾つかのタイプが存す
る。それらの最初のものは、交互するＤ−Ｘ−Ｄ（Ｎ）
−Ｘ−Ｄ（Ｎ）構造を有する。このような部位は、とり
わけ、トロボーンＣ２バルバルブミン（５２５６）、お
よびガラクトース結合タンパク質において見出される。

これらの部位は、ＥＦループ構造を形成し、６〜７個の
キレート化部位を有する。Ｌ　Ｆ　Ａ　−１およびその
他のインテグリン上の結合推定部位も、Ｄ　−Ｘ　−Ｄ
　（Ｎ）　−Ｘ　−Ｄ　（Ｎ）−次構造を有し、キレー
ト化残基間の多数のＧ残基は保存されている。

しかしながら、−２位における残基は疎水性残基によっ
て置換されている。さらに、カルシウム結合部位の前後
のα−へリックスはインテグリンの部位には存在してい
ないようである（Ｃｏｒｂｉ他ＥＭＢＯＪ、６：４０２
３〜４０２　Ｂ　（１９８７））。

このような変化の意義は不明であるが、それらの部位が
Ｍ　ｇ　ｔｏにとって好ましいことの説明になるかも知
れない。

ＮＢＲＦおよび５ｈｉｓｓ−Ｐｒｏｔｅｉｎデータバン
クの検討により、このＬＦＡ−１群に特異的なドメイン
（以下、ｒＩ−Ｊ　ドメインという）は、ヒトｖＷＦの
ＡＩドメイン、ヒト補体因子Ｂおよびニヮ］・リコラー
ゲン基質タンパク質に対して有意の相同性を有すること
を示した。この類似性は、Ｌドメインの全長にわたって
及んでいる。ｖＷＦは３個の反復Ａドメイン（ＡＩ、Ａ
２、Ａ３）（５７９０）を有し、補体因子Ｂのドメイン
は補体因子２　（Ｃ２）（５７８９）の同様のドメイン
に類似しており、さらに、ＣＭＰも２個の反復単位（５
７７８）を有していることにより、ＡＬＩＧＮプログラ
ムを用いてこれらの全てのドメインに対してＬ　Ｆ　Ａ
−１のしドメインの比較を行なった。Ｃ２を除いて、ア
ラインメントは全て統計的に有意であった。

これらの類似性は、Ｌ　Ｆ　Ａ、−１の機能性ドメイン
について示唆している。まず、ｖ　Ｗ　ＦのＡＩドメイ
ンは糖タンパクｌｒｂとヘパリン（５６４６）に結合し
、他方、Ａ１ドメインとＡ３ドメインはいずれもコラー
ゲンへの結合に関与している。第二に、因子Ｂにおける
相同ドメインは、因子Ｂが切断されて因子Ｂｂになる切
断部位のＣ−末端側、および、セリンプロテアーゼのＮ
−末端側に存在している（ｌＩｏｌｅ他、Ｊ、　Ｂｉｏ
ｌ、　Ｃｈｅｍ、＋　　２５９　：３４０７〜３４１２
　（１９８４）；Ｂｅｎｔｌｙ。

旧ａｃｈｅｓ、Ｊ、、２３９　：　３３９〜３４５　（
１９８６））。

すなわち、このドメインは、そのリガンド（Ｃ３ｂ）と
相互作用すると考えられる領域にある。コラーゲンマト
リックスタンパク’ｆ　（ＣＭＰ）の構造は、部分的に
明らかにされており、上皮細胞成長因子様配列によって
分離された２個の反復単位を有している〔へｒｇａｖｅ
ｓ他、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、　Ｓｃｉ。

旦呈）、８４．−：　４６４〜４６８　（１９８７））
。

ＣＭＰは、コラーゲン（Ａｒｇａｖｅｓ他、Ｐｒｏｃ、
　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　　Ｓｃ４．（ＵＳＡ）、８　４　　：　　
４　６　４　〜４　６　８（１９８７））および軟骨プ
ロテオグリカン（第７図参照）ＣＰａｕｌｓｓｏｎ他、
Ｃｏ１１ａ　ｅｎ　Ｒｅ１．　Ｒｅｓ、、　　４　：　
２１９〜２２９　（１９８４））のいずれにも相互作用
する。

最近、ＬＦＡ−１、Ｍａｃ−１およびｐｔｓｏ、ｑ５が
染色体１６ｐＨに局在化していることがわかっている（
Ｃｏｒｂｉ他、Ｊ、　Ｅｘ　ｅｒ、　Ｍｅｄ、、　　１
６７　：１５９７〜１６０７　（１９８８））。白血球
インテグリンのα−サブユニットをコードする遺伝子間
の構造的類似性と近縁関係は、初生遺伝子が複製し、少
なくとも２種類のインケグリンα−サブユニット（白血
球インテグリンとＥＣＭインテグリン）を発生したこと
を示唆している。１８０個のアミノ酸から成るドメイン
が、白血球インテグリンのα−サブユニットの初生遺伝
子として挿入形成され、しかる後、該遺伝子が複製され
、ＬＦＡ−１、Ｍａｃ　−１およびｐ１５０，９５を生
じたのであろう。これらのドメインがＬ　Ｆ　Ａ、　−
１群のしドメインに類似していることは、このＬドメイ
ンが機能性ドメインであることを示唆する。さらに、こ
れらの相同性により、初生ドメインが幾つかのタンパク
質に挿入形成され、その後、止血、補体活性化および免
疫応答における多様な認識機能を発生させたことが示唆
される。

上述の２つの群のインテグリンα−サブユニット間の構
造的違いは、それぞれの機能性ドメインの認識部位の相
違、すなわち、ＲＧＤ−含有ペプチドはＦＮＲとｇｐ［
ｂ／［［ａがそれぞれのリガンドに結合することをブロ
ックするのに対しＣＲｕｏｓ（ａｈｔｉ　　（也、　５
ｃｉｅｎｃｅ、　　２　３　８　　：　　４　９　　Ｌ
　　〜４９７（１９８７）’ｌ　、ＲＧＤＳペプチドは
ＩＣＡＭ−１へのＬＦＡ−１のＦ目星作用を抑制しない
こととト目関づｊすられる５ＥＣＭインテグリンのリガ
ンドとは異なり、ＩＣＡＭ−１そのものは、ＲＧＤペプ
チド配列を有せず、免疫グロブリン遺伝子超科（スーパ
ーファミリー）の−員である。構造上のデータおよび、
機能上のデータの両方が示唆していることは、インテグ
リン超科は、２つのサブファミリーのα−サブユニット
に分けられ得るということである。しかしながら、α−
サブユニットのこれらの構造的および機能上の性質は必
ずしもそれぞれのサブファミリーに固有のものではなく
、幾つかの他のインケグリンα−サブユニットがＬＦＡ
−１群に類似する構造的な特ｍ（例えば、タンパク質分
解切断部位の欠失）を有する場合もあるＣＣｈａｒｏ他
、Ｐｒｏｃ、　Ｎａ口、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、（ＵＳ
Ａ）。

８３：８３５１〜８３５５　　（１９８６））。

ＬＦＡ−１α−サブユニットの構造の解明は、各種のイ
ンテグリンα−サブユニット間の進化上の関係を明らか
にし、機能性ドメインの候補を示唆し、さらに、ＬＦＡ
−１α−サブユニットはインテグリン超科に属するが追
加のドメインを有することを示した。このＬドメインと
他の相同的ドメインは、機能上重要なタンパク質「ドメ
イン」群（ファミリー）を構成する。ＬＦＡ−１の認識
部位はＲＧＤではないので、このＬドメインは、ＬＦＡ
−１アルファーサブユニットおよび他の白血球インテグ
リン（Ｍａｃ−１とｐ１５０．９５＞において機能上有
意なものであろう。しかしながら、ＬＦＡ−１は、多数
の白血球機能に関与し、一つ以上のリガンドを有してい
ると考えられるので（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ他、Ｊ、　　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、、　１３７　：　１２７０〜１２７４　
（１９８６））、ＬＦＡ−１α−サブユニットには１個
より多い機能性ドメインが存在していることが可能であ
る。さらに、細胞骨格に対する細胞質テールの相互作用
、および、信号伝達における該相互作用の役割を検討す
ることも興味深い。α−サブユニットおよびβ−サブユ
ニットに対するｃＤＮＡが入手できることにより、これ
らの構造／機能関係を調べることが可能となった。

特定の態様に沿って本発明を説明したが、本発明は各種
の修正が可能であり、本発明の原理に従う各種の変更や
応用も本発明に包含されるものとする。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットのトリブ
チツクペプチドの逆相ＨＰＬＣ分離のプロフィルを示す
、、溶出は２８０ｎｍにおける光学密度（下方のプロフ
ィル）および２１４ｎｍにおける光学密度（上方のプロ
フィル）によって測定した。 ドツトを付けているペプチドはクンバク質ミクロ配列決
定に供したものである。プロフィルを横切っている点は
アセトニトリルのパーセントを示す。 第２図は、ＬＦＡ〜１アルファーサブユニットのｃＤＮ
Ａクローンの制限地図を示す。制限（酵素）部位は、Ｂ
ａｌ　Ｉ　　（Ｂ　１．）　、ＢａｍＨＩ　　（Ｂ）、
ＢｇｌＩＩ　　（Ｂｇ）　　、Ｃ１ａｌ　　（Ｃ）　　
、ＥｃｏＲｌ　　（Ｒ）　　、Ｈｉｎｃｆｆ　　（Ｈ）
　　、Ｎｒｕｌ　　（Ｎ）　　、Ｐｓｔｌ　　（Ｐ）　
　、５ｃａｌ　　（Ｓｃ）　、およびＳｍａｌ　　（Ｓ
）である。矢印は配列決定の具体的手順を示すためのも
のである。 第３Ａ、Ｂ図は、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットの
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を示す。トリブチ
ツクペプチドの配列および膜￥ｉ通領域の配列には、そ
れぞれ、実線および陰影付線で下線を施している。セリ
ンリン酸化推定部位には囲みを施している。下線を施し
た３′−非翻訳領域のヌクレオチドは、ＡＡ’ｕｌ配列
に対応する。 第４図は、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットの内部反
復単位のアラインメントを示す。アラインメントを行な
った反復単位の上方に、共通の側部配列（フランキング
配列）を示し、また、反復単位のアラインメントの下方
には二価カチオン結合部位および明細書中に説明したそ
の他の結合部位を示している。アステリスクはカチオン
結合に一つ以上の酸素が関与していることを示す。 第５図は、ヒｌ−Ｌ　Ｆ　Ａ　−１アルファーサブユニ
ット、他のインテグリン、およびネズミＬ　Ｆ　Ａ　−
１アルファーサブユニットのＮ−末端のアラインメント
を示す。ＬＦＡ−１と少なくとも１つのインテグリンの
共通配列には囲みを施している。また、白血球挿入部（
Ｌドメイン）も記している。 二価カチオン結合部位を含有する相同反復準位の境界に
は三角で表示している。ＥＣＭレセプターアルファーサ
ブユニットにおけるプロテアーゼ切断部位は矢印で示し
ている。さらに、膜貫通領域には下線を施している。 第６図は、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットのしドメ
インを、フォンビルブランド因子（ｖＷＦ）、因子Ｂお
よびＣＭＰにおける相同ドメインと比較するだめのアラ
インメントを示す。 第７図は、Ｌドメインと、それに相同性のドメインとの
間の発展過程の関係を図示したものである。 図面の浄書（内容に変更なし） ＦＩ６　、７ 時間扮）

Claims (35)

【特許請求の範囲】
1. （１）天然の混在物質を実質的に含まないＬＦＡ−１ア
   ルファーサブユニットまたはその機能性誘導体。
2. （２）ＬＦＡ−１アルファーサブユニットが、細胞の表
   面に存在する分子に結合する能力を有している請求項（
   １）に記載のＬＦＡ−１アルファーサブユニットまたは
   その機能性誘導体。
3. （３）細胞の表面に存在する前記分子が、ＩＣＡＭ−１
   、またはＬＦＡ−１のその他の天然リガンドである請求
   項（２）に記載のＬＦＡ−１アルファーサブユニット。
4. （４）前記分子が、ＬＦＡ−１ベーターサブユニットに
   結合してＬＦＡ−１ヘテロダイマーを形成することがで
   きる請求項（１）に記載のＬＦＡ−１アルファーサブユ
   ニット。
5. （５）前記ＬＦＡ−１ヘテロダイマーが、ＩＣＡＭ−１
   またはＬＦＡ−１のその他の天然リガンドに結合するこ
   とができる請求項（４）に記載のＬＦＡ−１アルファー
   サブユニット。
6. （６）前記分子が、 ａ．Ｐ−Ｐ−Ｒ−Ａ−Ｇ−Ｒ−Ｈ；ｈ．Ｇ−Ｖ−Ｄ−Ｖ
   −Ｑ−Ｄ−Ｇ−Ｅ−Ｉ−Ｅ；ｂ．Ｉ−Ｉ−Ｔ−Ｄ−Ｇ−
   Ｅ−Ａ；ｉ．Ｄ−Ｉ−Ｎ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｄ−Ｖ
   ；ｃ．Ｄ−Ｗ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｆ−Ｌ；ｊ．Ｖ−Ｋ−Ｄ−
   Ｌ−Ｅ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ａ；ｄ．Ｓ−Ｑ−Ｖ−Ｑ−Ｔ
   −Ｉ−Ｈ；ｋ．Ｔ−Ｙ−Ｌ−Ｓ−Ｇ−Ｌ；ｅ．Ｒ−Ｈ−
   Ｇ−Ｇ−Ｌ−Ｓ−Ｐ；ｌ．Ｙ−Ｉ−Ｉ−Ｇ−Ｉ−Ｇ−Ｋ
   ；ｆ、Ｍ−Ｓ−Ｃ−Ｔ−Ｄ−Ｆ−Ｓ；ｍ．Ｉ−Ｂ−Ｇ−
   Ｔ−Ｑ−Ｖ−Ｌ−Ｓ−Ｑ；ｇ、Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ｓ−Ｒ−Ａ
   −Ｌ；ｎ．Ｐ−Ｓ−Ｉ−Ｈ−Ｎ−Ｉ−Ｐ、より成る群か
   ら選ばれる少なくとも１つのポリペプチドを含有してい
   る請求項（２）に記載のＬＦＡ−１アルファーサブユニ
   ット。
7. （７）機能性誘導体が、ＬＦＡ−１アルファーサブユニ
   ットの断片である請求項（２）に記載のＬＦＡ−１アル
   ファーサブユニットの機能性誘導体。
8. （８）機能性誘導体が、ＬＦＡ−１アルファーサブユニ
   ットの変異型である請求項（２）に記載のＬＦＡ−１ア
   ルファーサブユニットの機能性誘導体。
9. （９）機能性誘導体が、ＬＦＡ−１アルファーサブユニ
   ットの類縁体（アナログ）である請求項（２）に記載の
   ＬＦＡ−１アルファーサブユニットの機能性誘導体。
10. （１０）機能性誘導体が、ＬＦＡ−１アルファーサブユ
    ニットの化学的誘導体である請求項（２）に記載のＬＦ
    Ａ−１アルファーサブユニットの機能性誘導体。
11. （１１）ＬＦＡ−１アルファーサブユニットまたはその
    機能性誘導体を発現することができる組換えＤＮＡ分子
    。
12. （１２）ＬＦＡ−１アルファーサブユニットまたはその
    機能性誘導体が、 ａ．Ｐ−Ｐ−Ｒ−Ａ−Ｇ−Ｒ−Ｈ；ｈ．Ｇ−Ｖ−Ｄ−Ｖ
    −Ｑ−Ｄ−Ｇ−Ｅ−Ｉ−Ｅ；ｂ．Ｉ−Ｉ−Ｙ−Ｄ−Ｇ−
    Ｅ−Ａ；ｉ．Ｄ−Ｉ−Ｎ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｄ−Ｖ
    ；ｃ．Ｄ−Ｗ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｆ−Ｌ；ｊ．Ｖ−Ｋ−Ｄ−
    Ｌ−Ｅ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ａ；ｄ．Ｓ−Ｑ−Ｖ−Ｑ−Ｔ
    −Ｉ−Ｈ；ｋ．Ｔ−Ｙ−Ｌ−Ｓ−Ｇ−Ｌ；ｅ．Ｒ−Ｈ−
    Ｇ−Ｇ−Ｌ−Ｓ−Ｐ；ｌ．Ｙ−Ｉ−Ｉ−Ｇ−Ｉ−Ｇ−Ｋ
    ；ｆ．Ｍ−Ｓ−Ｃ−Ｔ−Ｄ−Ｆ−Ｓ；ｍ．Ｉ−Ｅ−Ｇ−
    Ｔ−Ｑ−Ｖ−Ｌ−Ｓ−Ｑ；ｇ．Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ｓ−Ｒ−Ａ
    −Ｌ；ｎ．Ｐ−Ｓ−Ｉ−Ｈ−Ｎ−Ｉ−Ｐ．より成る群か
    ら選ばれる少なくとも１つのポリペプチドを含有する請
    求項（１１）に記載のＤＮＡ分子。
13. （１３）哺乳動物被検体における非特異的防御系の反応
    によって生じる炎症を治療するための方法であって、該
    炎症を抑制するのに充分な量の抗炎症剤で被検体を治療
    することから成り、該炎症剤が、ＬＦＡ−１アルファー
    サブユニットおよびＬＦＡ−１アルファーサブユニット
    の機能性誘導体より成る群から選ばれる方法。
14. （１４）ＬＦＡ−１ベーターサブユニットまたはしＦＡ
    −１ベーターサブユニットの機能性誘導体を投与するこ
    とを追有する請求項（１３）に記載の方法。
15. （１５）ＬＦＡ−１アルファーサブユニットが、組換え
    ＤＮＡ分子の発現により製造され、該ＬＦＡ−１アルフ
    ァーサブユニットがＬＦＡ−１ベーターサブユニットに
    結合されてＬＦＡ−１ヘテロダイマーを形成する請求項
    （１４）に記載の方法。
16. （１６）炎症が始まる前に被検体に抗炎症剤を投与する
    請求項（１３）に記載の方法。
17. （１７）腸内投与および非経口投与より成る群から選ば
    れる手段により抗炎症剤を投与する請求項（１３）に記
    載の方法。
18. （１８）非経口投与が、筋肉内投与、静脈投与および皮
    下投与より成る群から選ばれる請求項（１７）に記載の
    方法。
19. （１９）前記炎症が遅延型過敏症反応である請求項（１
    ３）に記載の方法。
20. （２０）前記炎症が乾癬症である請求項（１３）に記載
    の方法。
21. （２１）前記炎症が自己免疫疾患である請求項（１３）
    に記載の方法。
22. （２２）前記自己免疫疾患が、Ｌ１−症候群、自己免疫
    甲状腺炎、ＥＡＥ、多発硬化症、慢性関節リウマチおよ
    び紅斑性狼瘡から成る群より選ばれる請求項（２１）に
    記載の方法。
23. （２３）前記炎症が、臓器移植拒絶に対する反応である
    請求項（１３）に記載の方法。
24. （２４）前記炎症が、組織移植拒絶に対する反応である
    請求項（１３）に記載の方法。
25. （２５）前記炎症が、対宿主性移植片疾患に対する反応
    である請求項（１３）に記載の方法。
26. （２６）ＬＦＡ−１群に属する機能性化合物を必要とす
    る造血性腫瘍細胞の転移を抑制する方法であって、該転
    移を抑制するのに充分な量の抗炎症剤を患者に提供する
    ことから成り、該抗炎症剤が、ＬＦＡ−１アルファーサ
    ブユニット、およびＬＦＡ−１アルファーサブユニット
    の機能性誘導体から成る群より選ばれる方法。
27. （２７）ＬＦＡ−１アルファーサブユニット産生細胞の
    成長を抑制する方法であって、該成長を抑制するのに充
    分な量のトキシンを患者に提供することから成り、該ト
    キシンが、トキシン誘導体化ＬＦＡ−１アルファーサブ
    ユニットおよび、ＬＦＡ−１アルファーサブユニットの
    トキシン誘導体化機能性誘導体から成る群より選ばれる
    方法。
28. （２８）哺乳動物被検体における特異防御系の応答に起
    因する炎症の存在と位置を診断する方法であって、 （ａ）ＩＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他の天然
    リガンドを産生する細胞を同定することのできるラベル
    したＬＦＡ−１アルファーサブユニットを含有する組成
    物を前記被検体に投与し、 （ｂ）前記ＬＦＡ−１アルファーサブユニットを検知す
    ることから成る方法。
29. （２９）哺乳動物被検体における特異的防御系の応答に
    起因する炎症の存在と位置を診断する方法であって、 （ａ）ＬＦＡ−１アルファーサブユニットのＤＮＡ配列
    、および、ＬＦＡ−１アルファーサブユニット遺伝子の
    ｍＲＮＡから成る群より選ばれる分子に結合することの
    できる核酸分子を含有する組成物で、前記被検体の組織
    のサンプルをインキュベートし（ここで、該結合は、Ｉ
    ＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他の天然リガンド
    を産生する細胞を同定することができるものである）、
    さらに、 （ｂ）前記核酸分子を検知することから成る方法。
30. （３０）前記核酸分子が、 ａ．Ｐ−Ｐ−Ｒ−Ａ−Ｇ−Ｒ−Ｈ；ｈ．Ｇ−Ｖ−Ｄ−Ｖ
    −Ｑ−Ｄ−Ｇ−Ｅ−Ｉ−Ｅ；ｂ．Ｉ−Ｉ−Ｔ−Ｄ−Ｇ−
    Ｅ−Ａ；ｉ．Ｄ−Ｉ−Ｎ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ｖ−Ｄ−Ｖ
    ；ｃ．Ｄ−Ｗ−Ａ−Ｇ−Ｇ−Ｆ−Ｌ；ｊ．Ｖ−Ｋ−Ｄ−
    Ｌ−Ｅ−Ｇ−Ｄ−Ｇ−Ｌ−Ａ；ｄ．Ｓ−Ｑ−Ｖ−Ｑ−Ｔ
    −Ｉ−Ｈ；ｋ．Ｔ−Ｙ−Ｌ−Ｓ−Ｇ−Ｌ；ｅ．Ｒ−Ｈ−
    Ｇ−Ｇ−Ｌ−Ｓ−Ｐ；ｌ．Ｙ−Ｉ−Ｉ−Ｇ−Ｉ−Ｇ−Ｋ
    ；ｆ．Ｍ−Ｓ−Ｃ−Ｔ−Ｄ−Ｆ−Ｓ；ｍ．Ｉ−Ｅ−Ｇ−
    Ｔ−Ｑ−Ｖ−Ｌ−Ｓ−Ｑ；ｇ．Ｒ−Ｌ−Ｌ−Ｓ−Ｒ−Ａ
    −Ｌ；ｎ．Ｐ−Ｓ−Ｉ−Ｈ−Ｎ−Ｉ−Ｐ．から成る群か
    ら選ばれる少なくとも１つのポリペプチドをコードする
    請求項（２９）に記載の方法。
31. （３１）哺乳動物被検体における特異的防御系の応答に
    起因する炎症の存在と位置を診断する方法であって、 （ａ）ＩＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他の天然
    リガンドを産生する細胞を同定することのできるラベル
    したＬＦＡ−１アルファーサブユニットを含有する組成
    物で、前記被検体の組織のサンプルをインキュベートし
    、 （ｂ）前記ＬＦＡ−１アルファーサブユニットを検知す
    ることから成る方法。
32. （３２）前記ＬＦＡ−１アルファーサブユニットが前記
    組織サンプル中のＩＣＡＭ−１に結合されている請求項
    （３１）に記載の方法。
33. （３３）ＩＣＡＭ−１、またはその他のＬＦＡ−１の他
    の天然リガンドを産生する腫瘍細胞の存在と位置を診断
    する方法であって、 （ａ）ＩＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１の他の天然リガ
    ンドに結合することができ、ＬＦＡ−１アルファーサブ
    ユニットおよびＬＦＡ−１アルファーサブユニットの機
    能性誘導体から成る群より選ばれるラベルした結合性リ
    ガンドを含有する組成物を前記被検体に投与し、（ｂ）
    前記結合性リンガドを検知することからなる方法。
34. （３４）ＩＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他の天
    然リガンドを産生する腫瘍細胞を有すると予測される被
    検体における該細胞の存在と位置を診断する方法であっ
    て、 （ａ）ＩＣＡＭ−１、またはＬＦＡ−１のその他の天然
    リガンドに結合することができ、ＬＦＡ−１アルファー
    サブユニットおよびＬＦＡ−１アルファーサブユニット
    の機能性誘導体から成る群より選ばれるラベルした結合
    性リガントを含有する組成物の存在下に前記被検体の組
    織のサンプルをインキュベートし、 （ｂ）前記組織サンプルに存在するＩＣＡＭ−１に結合
    した前記結合性リガンドを検知することから成る方法。
35. （３５）ＬＦＡ−１のアルファーサブユニット、または
    その機能性誘導体を含有する組成物の有効量を被検体に
    投与することから成るウィルス感染を処置する方法。