JPH03504387A - 求心性知覚ｃ繊維と温度調節減感を引き起こすレジニフェラトキシンおよびその同族体の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 求心性知覚Ｃ繊維と温度ｌ１節減感を引き起こすレジエフェラトキシンおよびそ の同族体の使用発明の分野 本発明は、神経性炎症、化学的におよび熱的に誘発される疼痛、カブサイシンに 敏感な求心性知覚経路連累応答（ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ　５ ｅｎｓｏｒｙ　ａｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙｓ　）（例えば求心性知覚Ｃ 繊維）および視床下部温度制御領域連累応答（ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｉｎｖｏｌ ｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｌ＋ｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ　ｔｅ−ｍｐｅｒａｔｕｒｅ　 ｃｏｎｔｒｏｌ　ｒｅｇｉｏｎ）に対して被検動物を減感させるレジエフエラト キシン（ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ）の使用に関する。

発明の背景 構造的に関係のあるインダノール（ｊｎｇｅｎｏｌ）およびレジニフェロノール （ｒｅｓｆｎｉｆｅｒｏｎｏｌ）エステルを伴うフォルボールエステル類（ｐｂ ｏｒｂｏｌ　ｅｓｔｅｒｓ）は、ユーフォルビアセアｘ　（Ｂｕｐｈｏｒｂｉａ ｃｅａｅ）およびチメレアセア！　（Ｔｈｙ−ｍｅｌｅａｃｅａｅ）科の植物に 由来するジテルペン誘導体である〔エバンス、エフ、ジェイ、　（Ｂｖｉｎｓ、 　Ｐ、　Ｊ、　）およびティラー、ニス、イー、（Ｔａｙｌｏｒ、Ｓ、Ｂ、）　 （１９８３）　　ｒフォルトシュリッチ　デル　ヒエミー　オルガニラシェル　 ナチュルストツフｘ　（Ｐｏｒｔ８ｈｒ、　ｄ、　Ｃｂｅｏ＋、　ｏｒｇａｎ、 　Ｎａｔｕｒｓｔ、　）　Ｊ第４４＠ｔＪ１〜９９頁；ヘッカー、イー、　（Ｈ ｅｃｋｅｒ、Ｂ、）　　ｒカルシノジエネシス（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ）Ｊ中“メカニズム　オブチュモー　プロモーション　アンド　コカルシノジェ ネシス（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　Ｔｕｍｏｒ　Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ　ａｎ ｄ　Ｃｏｃａｒｃｉｎ。

−ｇｅｎｅｓｉｓ／癌化促進および共同発癌のメカニズム′　（ティー、ジェイ 、スラガ（Ｔｊ、Ｓｌａｇａ　）　、ニー、シヴアク（Ａ、　５ｉｖａｋ）およ びアール、チー。ボウトウエル（Ｒ，Ｋ、　Ｂｏｕ−ｔｗｅｌｌ）編）第２ｓ第 １１〜４８頁、シーベン　プレス（Ｒａｖ−ｅｎ　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク 〕。フォルボールエステル類はそれらの癌促進活性のために黙然な研究興味の対 象となってきた〔ヘツカー、イー、　（Ｈｅｃｋｅｒ、Ｂ、Ｘ１９６８）　　ｒ キャンサー　リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、）　Ｊ第２８巻第２２３８〜２ ３４９頁〕。最近、プロティンキナーゼの調節物としてのフォルボールエステル 類の役割の詳細が研究されてきた〔アシエンデル、シー、エル、　（Ａｓｈｅｎ ｄｅｌ、Ｃ，Ｌ、）　（１９８５）「パイオキミカ　エト　バイオフィジカ　ア クタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ）」第８２２巻第２１９〜２ ４２頁；ブルムバーグ、ビー、エム、　（Ｂｌｕｍｂｅｒｇ、Ｐ、Ｍ、）（１９ ８８）　　ｒキャンサー　リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、）第４８巻第１〜 ８頁）。これらの化合物はまた潜在的刺激剤であり、それらの天然起源からの単 離は、植物の有機抽出物のマウス耳発赤分析での活性が指標にされる〔ヘッカー 、イー、　（Ｈｅｃｋｅｒ　。

Ｂ、）、イミッヒ、エッチ（ｌｍｍ１ｃｈ　Ｈ，）ｗ　ブレシュ、エッチ（Ｂｒ ｅ−ｓｅｌｆ、　Ｈ，）およびシャイレル、エッチ、−、：Ｌ−９（Ｓｃｈａｉ ｒ−ｅｒ、　ｆｌ、　−Ｕ、　）（１９６６）　ｒツァイチュリフト　ケルブス フォルシュング（Ｚ、　Ｋｅｒｂｓｆｏｒｓｃｈ、　）　Ｊ第６８巻第３６６〜 ３７４頁〕。

この活性に基づいて、レジニフエロノールエステルであるレシエフェラトキシン （ＲＴＸ）は、ユーフォリビアレジエフェラ（８ｕｐｈｏｒｉｂｉａ　ｒｅｓｉ ｎｉｆｅｒａ）　、ユーフォリビア　ボイラソニー（Ｅ、　ｐａｊｓｓａｎＮ） およびユーフォリビア　ユニスピナ（Ｆｌ、　ｕｎｉｓｐｉｎａ＞から単離され る〔ヘルゲンハーン、エム、　（Ｈｅｒｇｅｎｂａｂｎ、　Ｍ、　）、　アドル フ、ヴｚ−，（Ａｄ−ｏｌｐｈ、　Ｗ、　）およびヘッカー、イー、　（Ｈｅｃ ｋｅｒ、Ｂ、）　　ｒテトラヘドロン　レターズ（Ｔｅｔ、Ｌｅｔｔ、）　Ｊ第 １９巻第１５９５〜１５９８頁；エバンス、エフ、ジェイ、　（Ｂｖａｎｓ、　 Ｐ、　Ｊ、　）およびシュミット　アール、ジェイ、）（１９７６）　ｒフィト ケミストリー　（Ｐｈｙｔｏｃｂｅｍｉｓｔｒｙ）ｊ第１５巻第３３３〜３３５ 頁）。

フォルボールエステル類にとって、Ｃ２０位の環外ヒドロキシル基のエステル化 は活性を著しく失わせる原因となる（ヘッカー、イー、　（Ｈｅｃｋｅｒ、Ｂ、 ）　　ｒカルシノジェネシス（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ）Ｊ　　”メカニ ズム　オブ　チュモー　プロモーション　アンド　コカルシノジエネシス（Ｍ− ｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　Ｔｕｍｏｒ　Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｃ ａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ／癌化促進および共同発癌のメカニズム°第２巻第 １１〜４８頁、シーベン　プレス（Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ）−ニューヨーク〕 。ＲＴＸは、この位置でエステル化されている癌化促進レシニフェロノール誘導 体とは異なっている。構造−活性分析は、この置換分４−ヒドロキシー３−メト キシ−フェニルアセテートが活性決定に本質的な役割を担っていることを示して いる〔アドルフ、ヴエー、（Ａｄｏｌ−ｐｈ、Ｗ、）　、　　ソルグ、ベー（Ｓ ｏｒｇ、　Ｂ）、　ヘルゲンハーン、エム、　（Ｈｅｒｇｅｎｈａｈｎ、　Ｍ、 　）およびヘツカー、イー、　（Ｈｅｃｋｅｒ。

Ｅ、）（１９８２）　　ｒジェイ、ナツト、プロット、　（Ｊ、　Ｎａｔ、　Ｐ ｒｏｄ、　）」第４５巻第３４７〜３５４頁；シュミット　アール、ジェイ、） およびエバンス、エフ、ジェイ、　（Ｂｖｉｎｓ、Ｐ、Ｊ、）（１９７９）［イ ンフラメーション（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）Ｊ第３巻第２７３〜２８０頁〕 。様々なトウガラシ種の実中の刺激成分であるカブサイシン（ｃａｐｓａｉｃｉ ｎ）もまた活性に決定的な４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル置換分を持っ ている〔スゾルクサニー、ジエイ、　（Ｓｚｏｌｃｓａｎｙｉ、　Ｊ、　）およ びヤンクソーガボー、　ｘ−、（Ｊａｎｃｓｏ−Ｇａｂｏｒ、Ａ、）（１９７５ ）　ｒアルツナイム−フォルシュ（Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｐｏｒｓｃｈ）Ｊ第２５巻 第１８７７〜１８８１頁）。

カブサイシンのかなり報告されている一作用は体温を劇的に低下させることであ る〔ヤンクソーガボー、ニー、　（Ｊａｎｃｓｏ−Ｇａｂｏｒ、　Ａ、　）　　 スゾルクサニー、ジエイ、　（Ｓｚｏｌ−ｃｓａｎｙｉ、　Ｊ、　）およびヤン クソ、エヌ、（Ｊａｎｃｓｏ、Ｎ、Ｘ１９７０）ｒジャーナル　オブ　フィジオ ロジ−（Ｊ、　Ｐｈｙｓｊｏｌ、　）Ｊ第２１１１巻第４４９〜４５９頁；スジ クスザイ、エム、　（Ｓｚｊｋｓｚａｙ、　Ｍ、　）、オーバル、エフ、シュー ア（Ｏｂａｌ、　Ｆ、　Ｊｒ、　）およびオーバル、エフ、（Ｏｂａｌ、Ｐ、Ｊ ｒ、Ｘ１９８２）　　ｒノイニンーシュミーデベルグス　アルヒ、ファルマコル （Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅ−ｂｅｒｇ’ｓ　Ａｒｃｈ、Ｐｈａｒｍａｃ ｏｌ）　Ｊ第３２０巻第９７〜１００頁〕。

本発明者等は、ＲＴＸが温度調節の役割を持っているかどうかを決定するために 、そしてこれらの効果をカブサイシンのそれと比較するために、これらの２種類 の刺激性化合物間の可能性ある相同（ｈｏｏ＋ｏｌｏｇｙ）を探究した。

ヘラカー等（Ｈｅｃｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ）による米国特許第４．７１６．１７９ 号には、無刺激性か僅かに刺激性のおよび／または癌化促進性のジテルペンアル コールおよびその誘導体の抗新生物剤（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ　ｐｒｅ ｐａｒａｔｉｏｎ）としての用途が開示されている。レジエンェラトキシンは癌 における治癒効果も有意な腫瘍抑制効果も持たないことが見出された。

本発明は、神経性炎症、化学的におよび熱的に誘発される疼痛、カブサイシンに 敏感な求心性知覚経路連累応答（例えば求心性知覚Ｃ繊維）および視床下部温度 制御領域連累応答に対して被検生体を減感させるための減感存効量のレジエンェ ラトキシンおよびそのための製薬学的に許容され得る担体を被検動物に投与する ことからなる被検動物を減感させる方法に関する。

なお、レジエンェラトキシンは局所、皮下、腹腔内または静脈に投与されてよい 。

図面の簡単な説明 図１はカブサイシンとレジエンェラトキシンの構造を対比している。

図２はラットにおけるＲＴＸまたはカブサイシンによる低温症の誘発を示す。

図３はＲＴＸ投与後の時間を関数としてラットの体温を示す。

図４は体温低下作用および工ヴアンスブルー管外流出に対する減感の投与量依存 を示す。

図５は局所ＲＴＸまたはカブサイシンにより誘発される工ヴアンスブルー管外流 出の投与量依存を示す。

図６はＲＴＸまたはカブサイシンの点滴注入に応じたラットにおける眼払拭の投 与量依存を示す。

図７はＲＴＸ処置後のラットの後足皮膚の水分量を示す。

図８はマウスの体温を示す。

図９はマウスにおける体温変化についての投与量応答曲線を示す。

図１０はマウス体温におけるＲＴＸまたはカブサイシンの反復処置の効果を示す 。

発明の詳細な説明 レジエフェラトキシン（ＲＴＸ）は自然にジテルペンを生じ、構造的にはポルボ ールエステルに関連し、そしてニーポルビア（ＢｕｐＨｏｒｂｉａ　）の３種の ラテックス〔イー、レジエフェラ（Ｂ、　ｒｅｓｉｎＨｅｒａ　）　、イー、ボ イラソニー（虹」虹Ｕ匹旦）及びイー、イニスピラ（虹ユ旦肚１ｒａ））（ヘル ゲンハーン（Ｈｅｒｇｅｎｈａｌｌｎ）他（１９７５）テトラヘドロン　レター （Ｔｅｔｒａｂｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、　）　１９．１５９５−１５９８及びシ ュミット（Ｓｃｔｏｏｉｄｔ　）他（１９７６）植物化学（Ｐｈｙｔｏｃｂｅｍ ｊｓｔｒｙ）　１５．１７７８−１７７９　）中に確認された。

ＲＴＸはマウス　イヤー　レッドニング　アッセイＣｍａｕｓｅ　ｅａｒ　ｒｅ ｄｄｅｎｉｎｇ　ａｓｓａｙ　）　　（ヘルゲンハーン他（１９７５）テトラヘ ドロン　レター１９．１５９５−１５９８　’）により驚くべき活性の元として 単離され、そしてそれは代表的なポルボールエステルであるポルボール１２−ミ リステート１３−アセテート（ＰＭＡ）（ヘッカー、イー（Ｈｅｃｈｅｒ。

Ｂ、）　　（１９７８）　　（発癌性に関して）、腫瘍増殖性及び発癌性の機構 （Ｍｅｃ１１ａｎｉｓｏ＋　ｏｆ　Ｔｕａ＋ｏｒ　Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ　ａｎｄ 　Ｃｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　）　＊編者スラガ、ティー、ジエイ（Ｓ ｌａｇａ、　Ｔ。

Ｊ、）、シヴｙ”ｙり、エイ（５ｊｖａｋ、　Ａ、　）及びボウトウエル。

シー、ケイ（Ｂｏｕｔｗｅｌｌ、　ｃ、に、）、（シーヴエン　プレス（Ｒａｖ ｅｎ　Ｐｒｅｓｓ　）　−ニューヨーク）　、　Ｖｏｌ、２．　ｐｐ、１１−４ ８及びアドルフ（Ａｄｏｌｐｈ）他（１９８２）　Ｊ、　Ｎａｔ、　Ｐｒｏｄ、 　４５゜３４７−３５４　）の最大の効能よりも強さが３桁大きな効能を示す。

ＲＴＸのキャラクタリゼーシタンにより、その第一の標的がポルボールエステル の標的とは異なるということが強く示唆された。ポルボールエステルによって誘 起される永続的な炎症とは異なり、ＲＴＸによって誘起される耳の赤化は一時的 であった〔アドルフ他（１９８２）Ｊ、　Ｎａｔ、　Ｐｒｏｄ、　４５．３４７ −３５４　、　シュミット他（Ｌ９７９）炎症（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）　 ３．２７３−２８０及びヘルゲンハーン他（１９８２）　　Ｊ、　　Ｃａｎｃｅ ｒ　　Ｒｅｓ、　　Ｃｌ１ｎ、　　０ｎｃｏ１．　１０４　　、　３１−３９　 　）　　。

ＲＴＸは腫瘍増殖性ではなかった【ハウゼン（Ｈａｕｓｅｎ）他、　　（１９７ ９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｔｌｓＡ　７６　、７ ８２−７８５による）；ＲＴＸは培養細胞系において代表的なポルボールエステ ル応答を誘起しなかった〔ハウゼン他、（１９７９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、 　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ　７６　、７８２−７８５及びドリートガ−（ Ｄｒｆｅｄｇｅｒ）他（１９８０）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、４０゜１４００− １４０４による〕　−及びＲＴＸはプロティンキナーゼＣに結合しているポルボ ールエステルに比べて有効ではなかった〔ドリートガ−他（１９８０）　Ｐｒｏ ｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｆ、　ＬＩＳＡ　７７　、５６７−５７１　）。

遊離の２０個のヒドロキシル基は、ポルボールエステル活性のために重要である 〔ヘッカー、イー（１９７８）　　（発癌性に関して）、Ｉｌｉ瘍増殖性及び発 癌性の機構９編者スラガ、ティー、ジェイ、シヴアック、エイ及びボウトウエル 、シー、ケイ、　（シーヴエン　プレス、ニューヨーク）　、　Ｖｏｌ、　２． 　ｐｐ、１１−４８３　、　ＲＴＸ＜ｔ、対照的に、この位置が４−ヒドロキシ −３−メトキシフェニルアセテートによりエステル化され、且つこの置換基はそ の異常な炎症誘起活性のために本質的なものであることが示された〔アドルフ他 （１９８２）　Ｊ、　Ｎａｔ、　Ｐｒｏｄ、　４５．３４７−３５４及びシュミ ット他（１９７９）炎症３．２７３−２８０　）　、　ＩＩ＜　ヘきことに、４ −ヒドロキシ−３−メトキシフェニル置換基は、カブサイシン〔レッドベラバー 及びカブシクム（Ｃａｐｓｉｃｕｍ）　ｌ！の他の植物の主要な刺激性成分）の 重要な特徴でもある〔ジャンクツ、エヌ（Ｊａｎｃｓｏ、　Ｎ、　）　（１９６ ８）痛みの薬理学（パーガモン　プレス（Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ。

オックスフォード）　、　Ｖｏｌ、　９．　ｌ１ｌ）、３３−５５より、及びス ゾルクサニ−（５ｚｏｌｃｓａｎｙｉ）他（１９７５）アルッナイムーフォルシ ｘ、　　（Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｐｏｒｓｃｈ、　）　　（Ｄｒａｇ　Ｒｅｓ、　） 　２５．１８７７−１８８１　）　　（図１参照）。カブサイシン同族体の構造 −活性分析は、更に、ＲＴＸ中に見出されるようなエステル結合はカブサイシン 中に反対に配向して存在するアミド結合による置換に充分に耐えられるというこ とを示している。

カブサイシンは、種々の生理学的効果（痛み、神経性浮腫、及び低温症は顕著な 例である）を生じさせる（ジャンクツ、エヌ（１９６８）痛みの薬理学（パーガ モン　プレス、オックスフォード）　、　Ｖｏｌ、　９　、　ｐｐ、３３−５５ より、スゾルクサニー他（１９７５）アルツナイム−フォルシュ、（Ｄｒｕｇ　 Ｒｅｓ、　）　２５．１８７７−１８８１及びバック（Ｂｕｃｋ）他（１９８６ ）　Ｐｂａｒｍａｃｏｌ、Ｒｅｖ、３８．１７９−２２６　）　ｏ激しい応答に 、永続的な脱感作が続く。仮定された細胞機構は、脱感作及び、幾つかの条件下 では、Ｃ−繊維感覚求心神経の変性により続かれる一時的活性化による〔ジャン クツ、エヌ（１９６８）痛みの薬理学（バーガモン　プレス、オックス７ｒ−ド ）　、　　Ｖｏｌ、　９　、　　Ｉ）ｐ、３３−５５より、バック他（１９８６ ）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、Ｒｅｖ、３８．１７９−２２６及びスキー？ッディング 、ジェイ、ダブリュ（Ｓｃａｄｄｉｎｇ、Ｊ、Ｗ、　）　　（１９８６）　Ｊ、 　Ａｎａｔ、　１３１、４７３−４８４　）。これらの神経は、物質Ｐ及び結合 したニューロペプチドを含む。Ｃ−繊維に関するこのカブサイシンの効果に対す る生化学的機構は知られていない。

本発明者は、ＲＴＸ及びカブサイシンの可能な同族関係を確立し〔即ち、両化合 物は交差耐性により続かれるマウスにおける体温の劇的な低下を起こした（デヴ リース（Ｄｅｖｒｉｅｓ　）他（１９８８）提起、生命科学（Ｌｉｆｅ　５ｃｉ ｅｎｃｅＳ）））、そして以下の本文中に記載の如く、ＲＴＸ及びカブサイシン の効能及びイン　ヴイヴｔ　（ｉｎ　ｖｉｖｏ　）活性を今や詳細に比較した。

したがって、本発明者は、市販されてはいるがしかし大きく未研究である天然生 成物、レジエフェラトキシンをキャラクタリゼーションした。ＲＴＸはその活性 に関しては定性的にカブサイシンに類似しているが、しかし活性（即ち、１０” −１０’倍より活性）及び作用の比較スペクトルに関しては異なる。それ故、レ ジエフエラトキシンは神経性の炎症、化学的及び温度的に誘起された痛み、並び にＣ−繊維及び視床下部の温度制御領域を包含する感覚求心径路を含む応答に対 する脱感作を起こす。誘起された脱感作は、関節炎の、喘息の、アレルギー性の 応答、発熱、癌又はヘルペスウィルス感染に伴う痛みに関する用途、並びに物質 Ｐ又はカブサイシン処理により減らされた他のニューロペプチドにより仲介され る生化学的方法に関する用途を有する。

上記の如く、レジエフエラトキシンはカブサイシンと同様の効果を有するが、し かしその非常に大きな活性（ｌＯ４まで）において異なり、このことは副効果を 著しく減少させ且つより簡単な適用（即ち、能率的でない径路を通るより少ない 容量及び吸収）を可能にするであろう。ＲＴＸは又幾分か異なる作用スペクトル を示し、与えられた全身的毒性水準におけるより大きな脱感作及び激しい痛みの 誘起に関するより大きな脱感作を起こすことができる。

更に、レジエフェラトキシンによる脱感作は、局所性の、静脈の、腹腔内の、及 び皮下の施薬により活性化させることができる。ＲＴＸは哺乳類（例えばマウス 、ラット又は人間）のような動物に施薬してよい。

更に、カブサイシンは試験した全ての哺乳類に関してその活性を発現するが、し かし鳥類及び低級を椎動物に関してはその活性を発現しないということは特記す べきである〔モンセリーナソーン（Ｍｏｎ５ｅｒｅｅｎｕｓｏｒｎ）他（１９８ ２）　ＣＲＣＣｒ１ｔ、　Ｒｅｖ、　Ｔｏｘｉｃｏｌ、　１０．３２１−３３９ 　）　ｏ本願において提供されたカブサイシン及びレジエフエラトキシンの活性 における類似を基礎として、我々はレジエフエラトキシンの効果はラット及びマ ウスに限定されず同様に人間に拡張されると推定する。

レジエフェラトキシンは、ニーポルビア（ｔ！ｕｐｈｏｂｉａ）属の幾つかの員 中に存在する著しく刺激性のジテルペンであり、２−２０μｇ　／　ｋ　ｇの範 囲内の有効投与量を用いることにより、マウスの直腸の温度を８℃低下させた。

構造的に関連した天然生成物であるカブサイシンは、１０００倍低い活性と共に 同様の強さの体温低下作用を生じさせた。両薬剤の体温低下効果に対する耐性は 容易に発現し、そして薬剤の間の交差耐性が観察された。レジエフェラトキシン の著しい活性は、この種の化合物の作用機構の生化学的分析を容易にするであろ う。

ＲＴＸはマウス　イヤー　レッドニング　アッセイにおいてその活性が顕著であ った。その５０％有効投与量（１，６Ｘ１０−”モル／耳）は、代表的なポルボ ールエステルであるポルボール１２−ミリステート１３−アセテートの最大活性 よりも１０００倍大きな活性を示した。〔アドルフ、ダブリ：ｚ　（Ａｄｏｌｐ ｌ＋、Ｗ、　）　＋　　ソルグ、、ビー（Ｓａｒｇ、　８．）　、　ヘルゲンハ ーン、エム、　　（Ｈｅｒｇｅｎｈａｈｎ、Ｍ、）及びヘツカー、イー、　　（ Ｈｅｃｈｅｒ、　Ｂ、）　　（１９８２）　Ｊ。

Ｎａｔ、　Ｐｒｏｄ、、Ｖｏ１４５　、　ｐｐ３４７−３５４　）。

ＲＴＸの作用機構は広範に研究されてはいなかったけれども、その機構は下記理 由によりポルボールエステルの機構とは明確に異なる。

（１ン　　ポルボールエステルは施薬３時間後及び２４時間後に類似の耳の赤化 を起こすが、ＲＴＸの刺激活性は初期の時点においてのみ見出される〔アドルフ 。

ダブリュ他（１９８２）　Ｊ、　Ｎａｔ、　Ｐｒｏｄ、、Ｖｏ１４５　、　ｐｐ ３４７−３５４；シュミット、アール、ジエイ（Ｓｃｈｍｉｄｔ、　Ｒ，Ｊ、　 ）他（１９７９）　表Ｍ、　Ｖｏｌ　３．　ｐｐ２７３−２８０　；　ヘルゲン ｌ＼−ン、エム、他（１９８２）　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　Ｃｌ１ｎ、 　０ｎｃｏ１．、Ｖｏｌ、１０４　、　Ｉ）ｌ）３１−３９　）（２）　　ＲＴ Ｘは腫瘍増殖性ではなく且つ培養細胞の範囲内における誘起応答において代表的 なポルボールエステルよりも非常に活性が小さい。〔）１ウゼン、エッチ（Ｈａ ｕｓｅｎ、Ｈ，）　＋　ボルンカム、ジー、ダブリュ（Ｂｏｒｎｋａｍｍ、Ｇ、 Ｗ、　）　＋　シュミット、アール、（Ｓｃｈｍｉｄｔ、　Ｒ，）及びヘッカー 、イー、　　（１９７９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、Ｖｏｌ、７６、　ｐｐ７８２−７８５　 ；ドリートガ−、ビー、イー、　　（Ｄｒｉｅｄｇｅｒ、　Ｐ、　Ｂ、　）及び ブラムベルク、ビー、エム、　　（Ｂｌｕｍｂｅｒｇ、　Ｐ、　Ｍ、　）　　（ １９８０）Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、Ｖｏｌ、４Ｇ、　ｐｐ１４００−１４０４ による）。

（３）　　ＲＴＸはプロティンキナーゼＣ上のサイトに結合しているポルボール エステルに比肩しない〔ドリートガ−、ビー、イー（Ｄｒｉｅｄｇｅｒ、Ｐ、Ｂ 、　）及びブラムベルク、ビー、エム、　　（１９８０）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、Ｖｏｌ、７７、　ｌｌＴ１５６７−５７１　）。

ＲＴＸ　（本発明の活性成分）は、適切な薬剤担体又は希釈剤と混合することに より薬剤組成物に形成することができる。例えば、ＲＴＸは油、プロピレングリ コール又は注射用溶液を製造するために通常使用される他の溶媒に溶解すること ができる。適する担体は生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、ゴ マ油、クレモボール（ｃｒｅｍｏｐＨｏｒ　）及びイソプロピルミリステートを 包含する。局処用途のためには、ＲＴＸは軟膏又はクリームとして製剤化するこ とができる。

下記方法及び賦形剤は単なる例示であり、そして本発明を何ら制限するものでは ない。

薬剤投与形態における本発明の化合物は、それらの薬学的に許容される塩の形態 で使用してもよいし、そして単独又は適切な混合物として、並びに他の薬学的に 活性な化合物と組み合わせて使用してもよい。

本発明の化合物は、水性溶媒例えば通常の塩類、５％デキストロースに、又は非 水性溶媒例えば植物油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸若しくはポリプロピ レングリコールのエステルに；そして所望により慣用の添加剤例えば可溶化剤、 等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤及び防腐剤と共にそれらを溶解、懸濁又は乳化 することにより、注射用製剤に加工し得る。

本発明の化合物は、所望の効果を有する他の化合物と混合してもよい。

本発明の化合物の望ましい投与量は、目的、投与形態、方法及び施薬期間に応じ て変わる。しかしながら、望ましい効果を得るためには、一般的に単独使用又は 複合使用においても本発明の化合物を体重当たり０．１Ｘ１０−”ないし５Ｘ　 １０−”ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．ｌＸｌ０−”ないし５ｘ　１０−”ｍｇ／ ｋｇ施薬することが必要である。

組成物の表現においては、化合物はｏ、ｏθ０１ないし１０重量％、好ましくは ０．０００１ないし１重量％存在すべきである。

したがって、下記実施例はレジエンエラトキシンはニーポルビア族の幾つかの貝 のラテックス中に存在する炎症誘起性のジテルペンであるということを具体的に 説明する。その作用機構は、構造的に関連するポルボールエステルの作用機構と は明確に異なる。ＲＴＸは４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル置換基を有す る（カブサイシンの主な特徴であり、カブシクム属の植物の主な刺激性成分）の で、代表的なカブサイシン応答を誘起するＲＴＸの能力を試験する。ＲＴＸを用 いたラットの処理（実施例１）、カブサイシンを用いた同様の処理は、低温症、 神経性炎症及び痛みを起こす。これらの応答には、神経性炎症に対する脱感作に より、並びに化学的及び熱的痛覚脱失により、ＲＴＸとカブサイシンの同の交差 耐性と共に温度調節の喪失が続く。ＲＴＸは温度調節及び神経性炎症に関する効 果については、カブサイシンよりも３−４桁強いより大きな効能を示す。ＲＴＸ はカブサイシンとは効能に関して類似するのみであり、激しい痛みの誘起及び激 しい痛みに対する脱間作に対する分析は、他の応答に対する脱感作を起こした量 よりもより少量のＲＴＸを必要とすることを示す。それ故、ＲＴＸは超効能カブ サイシン類似物として作用し、そしてカブサイシン応答の副群の間で特異的であ ろう。

下記実施例により、特許請求した発明の詳細な説明することを意図しており、そ して当業者は本発明をより完全に理解することができるであろう。しかしながら 、本発明はこれらの代表的な実施例のみに限定されているというように解釈すべ きではない。

実施例１ スプラグニードーリ−（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌ　ｅｙ）種ラット（メス、２ ５０−３００ｇ）をジヴイックーミラー　ラボラトリ−（Ｚｉｖｊｃ−Ｍｊｌｌ ｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から購入する。実験の間、動物は任意に食物 と水を取れる。種々の実験で使用される動物の数は表１−３と図１−１０の説明 に示す。ＲＴＸ　（分子量　６２８）はｒケミカルス　フオーカンサー　リサー チ」社（Ｃｈｅｎ＋１ｃａｌｓ　ｆｏｒ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　 　Ｉｎｃ、　）　　（シャン／’＋７セン　エムエヌ（ＣｈａｎｈａｓｓｅｎＭ Ｎ）　）から入手し、カブサイシン（ｃａｐｓａｆｃｉｎ）（分子量３０５）は ポリサイエンシース（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）（ワーリントン、ビーｊ−一 （Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、　ＰＡ））から購入する。これら化合物は、特に記載 のない限り、１０％エタノール／１０％トウィーン−８０／８０％生理食塩水に いれて投与する。

痛感誘発強度 化合物の痛感誘発強度は、ここでは参考文献に包含されるいる文献のジャンクツ 他〔参照：ジャンクソ他（１９６１）アクタ　フィジオロ、アカデ、サイ、ハン ガリー（Ａｃｔａ　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｈｕｎｇ、　） １９，１１３−１３１３により記述されているようにして検定した。餌単に述べ ると、生理食塩水中の１０倍づつに増やした濃度の化合物をラットの眼に滴下し 、防御動作（υ；Ｉ足による眼拭き）の回数を決める。催涙によって洗浄される 刺戟物を最少にするために滲み込ませは一回だけ繰り返す。薬剤の入っていない 溶液そのものは眼拭きを誘発しない。１ｏ回の眼拭き（適度の痛感−誘発強度） と同等の反応を誘発する濃度を薬量−反応曲線から計算する〔参照：スゾルクサ ンイ他（１９７５）アルッナイフォルシユング（Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｆｏｒｓｃｂ 、　（ＤｒｕｇＲｅｓ、　））２５．１８７７−１８８１　）。

これらの実験以外は、ＲＴＸとカブサイシンの両方は、不必要な痛みを避けるた めに軽いエーテル麻酔上投与血漿アルブミンに対する血管透過性はにおける変化 は、エバンス青技術を使用して解析する〔参照二ザリア他（１９８３）ジエイ、 ニューロサイ、　　メト、　（Ｊ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　Ｍｅｔｂ、）８．４ ｌ−４９）　ｏ各々の時点と薬量において、８−１２頭のラットをベンドパルビ トン（ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔｏｎｅ）（４ｏ■／ｋｇ）で麻酔し、右側頚動脈 を露出する。そして、２０　ｍｇ　／　ｋｇノｘバンス青（１００１υ／ＩＩＩ Ｉノヘバリンを含有する生理食塩水中の１％エバンス青溶液）を注射する〔参照 ：ザリア他（１９８３）ジエイ、ニューロサイ、　　メト、　（Ｊ、　Ｎｅｕｒ ｏｓｃｉ、　！Ｊｅｔｈ、）８．４ｌ−４９）　ｏ注射後の指示した時１！ｉ（ 特に記述がなければ、例えば、典型的には３０分）に、動物を殺し、組織（例え ば、皮膚、肺、卵巣、胃、腸）を取り出す。取り出した組織を過剰の液体を取る ために濾紙で乾かし、即座に重量を測定し、工しくンス青を抽出するために５０ ℃で２４時間にわたり４．０ｍｌのホルムアミド中に入れてお（。島原分光光度 計中で６２０ｎｍにおける吸光度を決める。

浮腫の程度 刺戟物または溶媒により後足を処理して浮腫の程度を測定する。指示した時間（ 例えば、３Ｇ９分）に動物を殺し、直径１ａｎの皮膚の切片を取り、速やかに秤 量し、そして５０℃で２４時間にわたり乾燥した後、皮膚の切片を再秤量する。

刺戟物で処理した動物と溶媒で処理した動物の間の水含有量の差異は浮腫の程度 を示している〔参照：フィシャー他（１９８８）カンサー　リサーチ（Ｃａｎｃ ｅｒ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　　、　　　４　８．　　６　５　９−６　６　４ ）　　。

観察した炎症の神経（原）性の起源の直接の証拠を得るために、１０−１４頭の 神経除去したラットをジヴイック　ミラー　ラボラトリ−から購入する。ＲＴＸ に反応する浮腫の程度の定量は、左側の伏在の神経を上腿部で切断してから３日 後に行う〔参照：ジャンクソ他（１９６７）ピーアール、ジェイ、ファーマコ口 、ヒエモテラピ（Ｂｒ、Ｊ、Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ、　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、）　 ３！、　　１３８−４５１）。

刺戟物を両後足に施用し；右側の無傷の後足は陽性の対照になる。

体温 ラットの体温は、スジクセイ他（１９８２）（参照：ナウニンシュミーデベルク ′ス　アーク、ファーマコロ、（Ｎａｕｎｙｎ−３ｃｌ＋ｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ ｓ　Ａｒｃｈ、Ｐｂａｒｍａｃｏｌ、）３２０．９７−ｆｏｏ）により記載され ているのと同じにして決められる。

処理の前に、ラットを室温（２０″Ｃ）と直腸より５ａｎの深さに導入した小動 物温度検体（コレパーマ−、シカゴ、アイエル（Ｃａｆｅ−Ｐａｒｍｅｒ、　Ｃ ｈｉｃａｇｏ、　　［Ｌ））に慣らす。

急性の化学的痛みに対する不感性化は眼拭き試験を使用して検査する。ＲＴＸを 皮下注射し、４時間後にカブサイシンを眼に滲み込ませる。慢性的痛感に対する 抗痛感受容効果は、ズブイイソン他（１９７７）（参照：ベイン（Ｐａｉｎ）４ ，１６１−１７４　）の方法により試験される。５％のホルマリン溶液を、ＲＴ Ｘまたはカブサイシンの局部的投与の後４時間後に右側の前足の足底の表面下に 注射する。動物の行動は、ズプイイソン他（１９７７）（参照：ベイン（Ｐａｉ ｎ）４．１６１−１７４　）に記載されているようにして、６０分間の観察時間 にわたり評点される。

熱感受容は、５０℃における尻尾浸漬試験で検査される（参照ニド′アムール他 （１９４１）ジャーナル　オフ　ファーマコロジカル、エックスベ、テラビ、　 （Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｂｘｐ、　Ｔｈｅｒ、）およびガムセ、アール （１９８２）ナウニンシュミーデベルク′ス　アーク、ファーマコロ、　（Ｎａ ｕｎｙｎ−８ｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ　Ａｒｃｈ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、 ）　３２０，２０５−２１６）。

炎症反応に対する不感性化は、神経性の炎症の有効な誘発剤であるキシレンで上 腿部を塗布した後の管外溢出したエバンス青を測定することにより決められる〔 参照：ジャンクソ他（１９６７）ピーアール、ジェイ、ファーｖコｏ、　　ヒエ モテラピ（Ｂｒ、Ｊ、Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ、　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、）３］、、 　１３８−１５１）　、不感性化は、デキストラン（５０μｌの体積中の２５μ ｇ）を後足に皮下注射した後の管外溢出したエバンス青を測定することによって も決められる；デキストランは神経性の炎症の原因にならない血管作動性の物質 を遊離する（参照：ジャンクソ他（１９６７）ピーアール、ジェイ、ファーマコ ロ、ヒエモテラピ（Ｂｒ、Ｊ、Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ、　Ｃｂｅｍｏｔｈｅｒ、） 　３１．１３８−１５１）。

結果 カブサイシンは、哺乳動物における体温調節に深遠な影響を与える〔参照：ジャ ンクソーガボール他（１９７０）ジャーナル　才ブ　フィジオロジ−（ロンドン ）（Ｊ、　Ｐｈ１ｓｆｏ１．　（Ｌａｎｄ、　））２０６．４９５−５０７．ウ ィルス他（１９７９）ライフサイエンス（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、　）２５．１２７ ３−１２８４．　　モンゼリーヌーソルン他（１９８２）シーアールシー　シー アールアイチー、レビュー、トキシコロジー、　（ＣＲＣＣｒ１ｔ、Ｒｅｖ、Ｔ ｏｘｉｃｏｌ。

）１０．３２１−３３９およびヤックシュ他（１９７９）サイエンス（Ｓｃｉｅ ｎｃｅ）ワシンントンＤ、　Ｃ，（Ｗａｓｈ、　ｏ、　ｃ、　）２０６．４８１ −４８３）、、　ＲＴＸも、カブサイシンと同様に、２０℃に保持したラットを 処理した１時間後に直腸内温度において２−３℃の低下を及ぼす（図２を参照） 。ＲＴＸのＥ　Ｄ　ｓ。は、カブサイシン（ＤＥＤｓｅ　　２ｘｌＯ−”ｇ／ｋ ｇと比較して、３×１０−１ｇ／ｋｇである。

カブサイシンで繰り返し処理すると、体温低下効果に対して全く不感性になる。

〔参照：ジャンクソ、エヌ。

（１９６８）フｙｖコロジー　オフ　ベイン（円＋ａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ 　ｐａｉｎ）　（バーガモン　プレス、オックスフォード）９巻、３３−５５頁 およびヤックシュ他（１９７９）サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）ワシンントンＤ 、　Ｃ，（Ｗａｓｈ、　Ｄ、　Ｃ，）２０６．４８１−４８３）。

同様にして、ＲＴＸを１　ｘ　１０−’　　ｇ／ｋｇで処理すると体温の急激な 低下を招（が３時間後には対照の水準に戻る（図３Ａを参照）。ＲＴＸによる２ 回目の処理は、限定した反応を招くだけであり、更に処理すると影響がでない。

不感性になった動物は、カブサイシンに対して交叉不感性（１０−”ｇ／ｋｇ） を示すが、一方対照の動物はカブサイシンに対して顕著な体温低下を示す。

カブサイシンで不感性にしたラットは、熱ストレスに対して適応する能力が無い ことを示す〔参照：ジャンクソ、エヌ、　　（１９６８）ファマコロジー　オフ 　ベイン（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｐａｉｎ）　（パーガモン　プレ ス、オックスフォード）９＠、３３−５５頁およびウィルス他（１９７９）ライ フサイエンス（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、）２５．１２７３−１２８４　）　、上昇す る環境温度下におくと、ＲＴＸで不感性にしたラットは、対照動物とは対照的に 、体温が着実に上昇するのを示し、最後には衰弱する（図３Ｂを参照）。

カブサイシンにより不感性化は、−回の大量投薬のまたは繰り返し増加する投薬 量の方法によりできる〔参照：ジャンク゛へエヌ、　　（１９６８）ファマコロ ジー　オフ　ベイ：ｚ（Ｐｌ＋ａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｐａｉｎ）　（バ ーガモン　プレス、オックスフォード）９巻、３３−５５頁およびブック他（１ ９８６）ファーマコロジカル　レビュウ（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇ、　Ｒｅｖ、 ）　　３８，１７９−２２６　）　、前者の手順は、量表現と比較のためにはよ り便利である。従って、薬量依存性は、ＲＴＸの一回の、皮下注射による前処理 に次ぐＲＴＸ−誘導体温低下に対する不感性で決められた（図４参照）。薬量感 応曲線は、極端に急勾配であり、　　５×１０−’ｇ／ｋｇ　　０）ＥＤｓ。に なった。この値は、大体、直接の体温低下効果のＥＤｓｅより大きい大きさの位 数であるが、最大の感応を与える値と同程度である。

神経性の炎症の誘導はカブサイシンの反応の２番目の顕著な特徴である〔参照： ジャンクソ他（１９６７）ピーアール、ジェイ、ファーマコロ、ヒエモテラビ（ Ｂｒ、　Ｊ。

Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ、　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、）　３１．１３８−１５１．ウィ ルス他（１９７９）ライフサイエンス（Ｌｉｆｅ　Ｓｅｔ、　）２５．１２７３ −１２８４およびモンゼリーヌーソルン他（１９８２）シーアールシー　シーア ールアイチー、レビュー、トキシコロジー、　（ＣＲＣＣｒ１ｔ、Ｒｅｖ、Ｔｏ ｘｉｃｏｌ、）１０，３２１−３３９　）　ｏ炎症は染料であるエバンス青の管 外濡出を測定することにより定量化される。カブサイシンと同様に、ラットの後 足に局部的に投与したＲＴＸは劇的な管外濡出を起こす。局部投与のＲＴＸのＥ Ｉ）ｉｏは、カブサイシンの３　ｘ　１０−”ｇ／後足のＥＤ、、と比較して、 ３Ｘ１０−″ｇ／後足である（図５参照）。浮腫形成の速度は、時間の函数とし て後足皮膚の水含有量から決められる。３０分までは、浮腫の形成は観察されな い；水の含有量は９０分後に最大に達する：そして浮腫は４時間で消失する（図 ７参照）。溶媒のアセトンそのものは何らの影響がない。

カブサイシンが原因になる炎症は、神経（原）性なので、それらの反応を無傷の 後足に於けるのと、ラットの間中の伏在的神経の横断により神経除去した後足に 於けるＲＴＸと比較する。神経除去は、下記の表１中に示したように、エバンス 青の管外濡出によるまたは水含有量における増加による測定のいずれかによって も全体的にＲＴＸに対する炎症反応を遮断する。

表　　　　１ ＲＴＸ−誘導の浮腫に与える神経除去の影響溶媒のみ　　　　　　　　　　　１ １．３１　　±　２．４９溶媒のみ　　　　　　　　　　　６５．１左側の伏在 的神経を試験の３日前に切断する。両方の後足上に、アセトン５０μｍ中の刺戟 物を局部的に与える；無傷の後足は陽性の対照になる。

値は、平均値±ＳＥＭ（２試験におけるｔｏ−１４頭の動物の平均値の標準誤差 ）である。

エバンス青の管外濡出は、ＲＴＸによる後足の局部的処理に続いてのみ定量化さ れるというものの、ＲＴＸの静脈内注射（０，１μｇ／ｋｇ）の後の浸透的管外 濡出の視覚による検査を行った。ＲＴＸはカブサイシンに就いて報告されたのと 同様の管外濡出のパターンを誘導する〔参照：ザリア他（１９８３）ナウニンシ ュミーデベルク′ス　アーク、ファーマコロ、　（Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅ ｄｅｂｅｒｇ’ｓ　Ａｒｃｈ、円］ａｒｍａｃｏ１．）　３２４，２１２−２１ ８）　　：皮膚、肺、卵巣および殆どの他の組織における管外濡出、しかし特異 的に胃と腸にはない。

カブサイシンの処理の後、神経性の炎症に対する不感性化が続く〔参照：ジャン クソ、エヌ、（１９６８）ファマコロジー　オフ　ベイン（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ｏｇｙ　ｏｆ　ｐａｉｎ）　（バーガモン　プレス、オックスフォード）９巻、 ３３−５５頁、ブック他（１９８６）ファーマコロジカル　レビュウ（Ｐｈａｒ ｍａｃｏｌａｇ、　Ｒｅｖ、）　　３８，２７９−２２６　、ウィルス他（１９ ７９）ライフサイエンス（Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、）２５．１２７３−１２８４およ びモンゼリーヌーソルン他（１９８２）シーアールシー　シーアールアイチー、 レビュー、トキシコロジー、　（ＣＲＣＣｒｉ　ｔ、　Ｒｅｖ、　Ｔｏｘｉｃｏ ｌ、　）ｔｏ、　３２１−３３９　）。

ＲＴＸの皮下注射は、同様に、下記の表２に示したように、ＲＴＸまたはカブサ イシンのいずれかによる４時間後の投与でのエバンス青の管外濡出を妨害する。

ＲＴＸの前処理は同様にキシレン、他の強い神経性の刺戟物に対する反応をブロ ックする〔参照：ジャンクソ他（１９６７）ピーアール、ジェイ、ファーマコロ 、ヒエモテラビ（Ｂｒ、Ｊ、Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ、　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、）　 ３１．１３８−１５１３が、非神経性の機作による強い刺戟物であるデキストラ ンに対する反応には影響が殆ど無い。

表　　　２ ＲＴＸ−不感性化に対する特異性 ＲＴ　Ｘ　（３００μｇ／ｋｌｉｌ）を、背中の皮膚下に注射する。

対照には賦形剤だけを注射する。４時間後に、キシレン、カブサイシン、または ＲＴＸを後足の皮膚上に塗るかまたはデキストランを皮膚下に注射する。エバン ス青の管外濡出を、キシレンまたはデキストランの処理の１０分後そしてカブサ イシンまたはＲＴＸ処理の３０分後に決める。値は、２試験における８−１０頭 の動物の平均値である。

ＲＴＸの皮膚下の注射により誘導される不感性化は早く発現し、長時間継続する 。神経性の炎症の抑制は、１時間後には７０％以上であり、４時間後には平原状 になり、これは続く４日間維持される。処理後７日間、反応性は一部分回復する のみである。

ＲＴＸの皮下注射による、キシレン−誘導のエバンス青の管外濡出の抑制のため のＥＤ、。は、５　ｘ　１０−＠ｇ／ｋｇ（図４を参照）である。同様に、カブ サイシンの皮下注射による、キシレン−誘導のエバンス青の管外濡出の抑制のた めのＥＤ、。は、ｌ　Ｏ−’ｇ／ｋｇ　Ｃ図４を参照）である。カブサイシンの 場合は、最高許容皮下薬量の一回の投与では部分的な不感化だけを与え、それに 対してＲＴＸでは完全な不感性化が与えられる。

カブサイシンは、化学原性の痛感受容器を強く刺戟し〔参照：ジャンクソ、エヌ 、（１９６８）ファマコロジー　オフ　ペイン（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏ ｆ　ｐａｉｎ）　（パーガモンプレス、オックスフォード）９巻、３３−５５頁 およびモンゼリーヌーソルン他（１９８２）シーアールシー　シーアールアイチ ー、レビュー。トキシコロジー、　（ＣＲＣＣｒｉｔ、Ｒｅｖ、Ｔｏｘｉｃｏｌ 、）１０，３２１−３３９　）　、そして眼に対する刺戟は定量的なカブサイシ ン構造−活性相関にかなり広く利用されて来た〔スゾルクサンイ他（１９７５） アルツナイフォルシユング（Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｆｏｒｓｃｈ、（Ｄｒｕｇ　Ｒｅ ｓ、））２５、１８７７−１８８１およびジャンクツ他（１９６１）アクタフィ ジオ口、アカデ、サイ、ハンガリー（Ａｃｔａ　Ｐｈｙｓｉｏｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　Ｈｕｎｇ、　）１９，１１３−１３１　）　ａ他の検定 におけるのと同様に（例えば、上述したもの）　、ＲＴＸはカブサイシンよりよ り薬効があることが証明された（図６Ａ参照）。しかし、この強さの差異は、体 温低下と炎症効果で観察される１０”−１０’−倍の差異より遥かに少ない。こ れに加えて、カブサイシン浸潤における即座の反応と比較して、ＲＴＸ処理は５ −１０秒の潜伏期間が観察され、そして反応の持続は長い。より高いレベルに対 する眼拭き反応（ｅｙｅ　ｗｉｐｉｎｇ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）のための薬量反応 曲線の延長は、過度の痛みを避けるために行っていない。

ＲＴＸの皮下注射は、カブサイシンに対する眼拭き反応の不感性化の原因になる 。ＲＴＸのＥＤｓｅは！×ｌ０−７ｇ／ｋｇであり、この薬量は体温低下と炎症 効果に対する不感性化のためのＥ　Ｄ　ｗ　＊より顕著に少ない。

この差異は１ｘ　ｌｏ　−＠ｇ／ｋｇ　　においてＲＴＸで処理した動物に於い て確認され、眼拭き反応とエバンス青の管外濡出の両方を評価した。

化学的または熱的痛感受容に対するＲＴＸの不感性化は、（ｊ）前足へのホルマ リンの注射に対する反応〔参照：ズブイイソン他（１９７７）ペイン（Ｐａ１ｎ ）４．１６１−１７４オヨヒハイエス他（１９８１）ニューロファーマコロ（Ｎ ｅｕｒｏｐｂａｒｍａｃｏｌ）　２０，５０５−５１１　）および（ｉｉ）５０ ℃の水への尻尾の浸漬〔参照ニド′アムール他（１９４１）ジャーナル　オフ　 ファーマコロジカル、エックスペ。

テラビ、　（Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｂｘｐ、　Ｔｈｅｒ、）およびガム セ、アール（１９８２）ナウニンシュミーデベルク′ス　アーク、ファーマコロ 、　（Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ　Ａｒｃｈ、　Ｐｈａｒｍ ａｃｏｌ、）　３２０，２０５−２１６）のような２種の他の標準検定法でも検 査される。ＲＴＸは、下記の表３に示しであるように両方の場合について、カブ サイシンがするよりはより強く痛感受容をブロックする。

表　　３ 感覚機能に関するＲＴＸ前処理の効果 ７Ｆｉ７処理“　　　　　痛み指数１　　潜在時間ゞ（秒） 溶媒のみ　　　　　　３．０　　　　　６．　ａ±１．３ＲＴＸ、　１　μｇ　 ７足　　　３．０　　　　　７．２＋１．３ＲＴＸ、　１０　ｕ　ｇ／足　　１ ．５　　　　　６．０＋１．０ＲＴＸ、　１００　μｇ　７足　　０．２　　　 　４２．０＋９．３カブすイシン、３Ｌ１１ｇ／足　　　　０．２　　　　　　 　　　１９．４±８．１ａ：カブサイシンおよびＲＴＸは示された投与量を５０ μＥの容量で前足の足裏面に注射する。

ｂ：前処理４時間後、５％ホルマリン溶液５０μｌを処理後の足に注射する。動 物の行動を注射１時間後に観察し、そして痛み応答を（Ｄｕｂｕｊｓｓｏｎ等（ １９７７）、　Ｐａ１ｎ　４，１６１−１７４）の記載に従って定量する。

Ｃ：同じ動物において前処理８時間後、尾引込みの潜在時間が決定される（　Ｄ ’　Ａｍｏｕｒ等（１９４１）、　Ｊ、　Ｐａｒｍａｃｏｌ、　Ｅｘｐ、　Ｔｈ ｅｒ、　７２．７４−７９およびＧａｍ５ｅ、　Ｒ，（１９８２）　Ｎａｕｎｙ ｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ　Ａｒｃｈ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３２ ０．２０５−２１６）　ｏ値は２つの試験において６−１０匹の動物に対して平 均値±ＳＥＭである。

論考 データはＲＴＸがカブサイシン類似体として作用することを強く示唆している。

ＲＴＸはカブサイシンに対して調べられている３つの特徴的な鋭敏な生理学的応 答、すなわち低体温、神経性炎症および痛みの各々を誘導する。ＲＴＸに対する 鋭敏な応答には、カブサイシンの典型的特徴であって非関連の刺激物の特徴では ない脱感作が続く。ＲＴＸ脱感作動物はさらにカブサイシンに対して交差許容性 を示す。

ＲＴＸは質的な作用においてカブサイシンに類似するが、量的にそれは効力にお いて顕著に異なっている。ＲＴＸは上記生理学的応答に対してカブサイシンに比 べより高い効力を示す：低体温の誘導に対して（７Ｘ１０”倍、皮下投与）、神 経性炎症の誘導に対して（ＩＸ１ｇｓ倍２局部塗布）、神経性炎症の脱感作に対 して（２×１０′倍、皮下投与）。マウスにおける研究において（下の実施例２ 参照）　、ＲＴＸはまた低体温の誘導に対して２Ｘ１０”倍のより高い効力であ ることが見出されている。

上記アッセイにより示されるようなカブサイシンより高い効力であることに加え て、ＲＴＸはまた作用の異なるスペクトルを示す。鋭い痛みの測定である眼払拭 アッセイにおけるＲＴＸの効力は、上記の１０”−１０″倍の差異とは異なり、 カブサイシンの効力の２のファクター内にある。神経性炎症の脱感作のために、 ＲＴＸの単一投与で完全な脱感作が得られ、一方力プサイシンの最大許容投与で は部分的な脱感作を引き起こすのみである。

この質的差異は皮下投与に関する異なる相対的毒性を反映するかもしれない。Ｒ ＴＸの最大許容投与量は神経性炎症の脱感作のためのＥＤ、、　　の約１００倍 であり、一方力プサイシンに対するＥ　Ｄ　ｓ。はその最大許容投与量である。

薬動力学における差異は相対的な効力の相違のい（つかを説明するが、それが観 察される１０５倍の差異を説明するとは考えられない。

眼払拭およびエバンスブルー管外遊出応答における脱感作に対するＲＴＸの効力 の比較はまた、作用の均一性を暗示する。ＲＴＸでの脱感作は両方の場合におい て同一の様式で行われ、そして実際の両方の応答は同一動物で評価され得るが、 眼払拭アッセイにおける脱感作は後者のアッセイにおけるよりもＲＴＸの１００ 倍低い投与量で達成される。

カブサイシンおよび同様の関連類似体の従来の研究は異なる同属動物に対する応 答が異なるパターンであることを示唆している。カブサイシンは鋭敏な刺激およ び長く持続する脱感作を引き起こす一方、ショウガ中の刺激成分であるジンゲロ ンは脱感作活性を欠いている（　Ｊａｎｃｓｏ、　Ｎ、（１９６８）、　　ｒ痛 みの薬学（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｐａ１ｎ）Ｊ（ベルガモン・プレ ス（Ｐｅｒｇａｍｏｎ　Ｐｒｅｓｓ）　ｒ　オックスフォード）、第９巻、３３ −５５頁）。カブサイシンに存在するがジンゲロンには存在しないアクリルアミ ド結合が脱感作に対して必須であるかもしれないということが示唆された（　Ｊ ａｎｃｓｏ、　Ｎ、　（ｆ９６８）、　　ｒ痛みの薬学Ｊ　（ペルガモン・プレ ス、オックスフォード）、第９巻、３３−５５頁）。ＲＴＸの高い脱感作効力は この示唆に反論するものである。

ＲＴＸは痛み、神経性炎症および体温制御の機構を追跡するための強力で新規な 道具であることを示す。その高い効力はレセプター分析を促進し；ホルボル関連 ジテルペンに対する構造的関係は誘導体の新規なファミリーを付与し、カブサイ シン薬剤運搬体（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｑｒｅ）を明らかにする。Ｃ繊維脱感作 の可能性のある治療的意味を与える際に、ＲＴＸの作用のユニークなスペクトル は特に興味深い。

実施例１の図面はより詳細に以下において論議されている。

図１はカブサイシンとレジエフエラトキシンの構造の比較を示す。

図２はＲＴＸまたはカブサイシンによるラットへの低体温の誘導を示す。直腸温 度の低下は示された投与量でＲＴＸ　（・）またはカブサイシン（○）の皮下注 射１時間後に測定される。各点は２回の実験での１０匹の動物に対する平均値を 示す。

図３はＲＴＸの投与後の時間の関数としてラットの体温を示す。

Ａ）動物は黒ヌリ矢印により示された時間にＲＴＸ　１００μｇ／ｋｇを注射さ れる（・）。交差許容性はカブサイシンｘｏｍｇ／ｋｇの注射により試験される （白ヌキ矢印）。ビヒクル対照は同じ投与量のカブサイシンを注射される（０） 。値は２回の実験における６−８匹の動物の平均値である。

Ｂ）ビヒクル対照（ム）またはＲＴＸ４００μｇ　／　ｋｇの累加投与量の注射 により脱感作された動物（１）を高い周囲温度（３８℃）に曝す。低体温はラッ トに虚脱状態をもたらす。値は２回の実験における８匹の動物の平均値である。

図４は低体温作用およびエバンスブルー管外遊出に対する脱感作の投与量依存性 を示す。ＲＴＸ　（ム）またはカブサイシン（Δ）を示された投与量で皮下注射 した４時間後にキシレン（５０μＩ！／足）により管外遊出は誘導される。値は ３回の実験における８−１２匹の動物に対する平均値上ＳＥＭである。■はビヒ クル対照におけるキシレン誘導されたエバンスブルー管外遊出を示す。

示された投与量でＲＴＸ前処理（・）１２時間後に最高の応答を与える投与量で あるＲＴＸ　１００　ｇ／ｋｇの注射により低体温は誘導される。時間間隔は前 処理と試験投与により得られる低体温の間になんら妨害を生じな（１ように選択 される。値は２回の実験における８−１０匹の動物の平均値である。

図５は局部的ＲＴＸまたはカブサイシンにより誘導されたエバンスブルー管外遊 出の投与依存性を示す。示された投与量でのＲＴＸ　（＊）またはカブサイシン （０）は５０μｌアセトン中で後ろ足の皮膚に塗布される。管外遊出は塗布３０ 分後に測定される。各点は２回の実験における１０匹の動物に対する平均値±Ｓ ＥＭである。

図６はＲ１’　Ｘまたはカブサイシンの滴下に対する応答における眼払拭の投与 量依存性を示す。

Ａ）示された濃度のＲＴＸ　（・）またはカブサイシン（０）溶液がラットの眼 の中に滴下される。各値は３回の実験における１２匹の動物に対する平均値±Ｓ ＥＭである。

Ｂ）動物は示された投与量でＲＴＸ　（ム）の皮下注射により処理され、そして １０−”ｇ／ｍＡカブサイシンに対する眼払拭応答が６時間後に決定される。値 は２回の実験における８−１０匹の動物に対する平均値±ＳＥＭである。

図７はＲＴＸ処理後にラットの後ろ足の皮膚の含水量を示す。レジエフエラトキ シン５０μｇをラットの後ろ足の皮膚に塗布し、そして皮膚の含水量を１０分と ４時間の間に及ぶ示された時間で測定する。各点は塗布後の各時間での５匹の動 物からの平均値を示す。実験をもう１回繰り返し、そして同様の結果を得た。

実施例２ 艷１」ヨ穎と マウスの体温はオバル（０ｂａｌ）及び共同研究者によって記載されたように本 質的に決定される（　５ｚｉｋｓｚａｙ、　Ｍ、　０ｂａ１．　Ｐ、　Ｊｒ、及 び０ｂａ１．Ｆ、氏著（１９８２）、Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ ’ｓ　Ａｒｃｈ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　Ｖｏｌ、３２０．ｐ、９７−１０ ０）。

１０−３６匹のメスＣＤ−１マウス２５−３０ｇを処理前に実験室Ｃ２２−２８ ℃）、及び２．５０ｍの深さまで直腸に導入される小動物用温度探針（Ｃａｆｅ −Ｐａｒｍｅｒ。

Ｃｈｉｃａｇｏ、　Ｉ　Ｌ）に慣らす。薬剤はｌＯ％エタノール／１０％Ｔｗｅ ｅｎ−８０／８０％リン酸緩衝食塩水で調製され、レジエフェラトキシンｏ、２ ２−４０ｕ／ｋｇまたはカブサイシン２−１５ｍｇ／ｋｇの指示された投与量で ０．１ｍｌ以下の容量で投与される。実験の途中にもかかわらず、動物は自由に 食物や水を取ることができる。

投与量応答曲線（Ｄｏｓｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｃｕｒｖｅｓ）は曲線適合プロ グラム（ｃｕｒｖｅ−ｆｉｔｔｉｎｇ　ｐｒｏｇｒａｍ）Ｋ　Ａによって分析さ れる（　ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ、　Ｇ、　Ａ、　、　Ｍｏ１ｅｎａａｒ、　Ｐ、　 、　Ｒａｐｅｒ、　Ｃ，及びＭａｌｔａ、Ｂ、氏著、　（１９８３）、　Ｊ、Ｐ ｈａｒｍａｃｏｉ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　Ｖｏｌ、１０．ｐ。

２３１−２４１）。

レジエフェラトキシン（分子量６２８）はＣａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ（Ｃ ｈａｎｈａｓｓｅｎ、　ＭＮ）のための化学物質から得られ、およびＰｏｌｙｓ ｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、　ＰＡ）からカブサイシン（分子量３ ０５）は得られる。

カブサイシン（１５ｍｇ／ｋｇ）は図８に見られるような皮下注射におけるマウ スの体温（直腸温度）での深い降下をつ（り出す。効果は１時間で最大であり、 ３時間までに基線に戻る。ＲＴＸ　（２０ｇ／ｋｇ）は体温で匹敵する降下を生 じる。しかし、、ＲＴＸの作用の持続時間は数倍長い。

カブサイシン及びＲ’ＴＸの相対的な有効性は、処理１時間後の体温の降下を測 定することによって決定される。

ＲＴＸは３　ｇ　／　ｋ　ｇの５０％有効投与量を持ち、カブサイシンは図９に 示されるように７　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの５０％有効投与量を示す。最大に許容 される投与量で両剤番こよって誘導された体温の降下は約８℃である。

腹膜内に投与されるとき、カブサイシンは一過性の効果のみを生じ、そのうえ、 皮下投与に必要な量より多（の投与量でのみ生じる。ＲＴＸで得られた結果は投 与経路とは無関係であることを示している（図８及び１０参照）。

カブサイシンの低体温の効果に対する著しい耐性（±、図１０に示されるように 処理２日後までに発現する。耐性は、ＲＴＸに対しても発現するが、より長期間 の後である１、どちらの薬剤に曝されても、約１．５℃の高熱の休息状Ｑ　（ｒ ｅｓｔｉｎｇ　５ｔａｔｅ）を作り出す。カブサイシンか、またはＲＴＸのどち らかで処理した４日後に、他のイし合物に対する動物の低体温の応答が試験され る（図１０）。

カブサイシンで予備処理された動物はＲＴＸ４二対して同等に耐性である。ＲＴ Ｘで予備処理された動物は部分的にカブサイシンに耐性である。

ｉ声 ＲＴＸ及びカブサイシンは、マウスの直腸温度の劇的な鎮圧効果を共存する。こ の効果は一部、熱放射を高めるのに貢献する再化合物の刺激／血管拡張作用のた めかもしれない。さらに、脳の思考領域に対するカブサイシンの適用は、この化 合物の体温調節作用の中枢であると強く論じられている（　Ｍｏｎ５ｅｒｅｅｎ ｕｓａｒｎ、　Ｙ、　、　Ｋｏｎｇｓａｍｕｔ、　Ｓ。

ＲＴＸにより誘導された体温低下の速度および程度はまた、作用の中枢７・・＾ Ｓ乙、倫じ”ｚｔよい。

カブサイシンは肝ミクロソーム薬物−代謝系と有効に相互に作用し、ミクロソー ムタンパク質と不可逆に結合すると報告されている（　Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｍ、　 Ｓ、　、　Ｂｒｅｎｄｅｌ、　Ｋ、　、　Ｂｕ生物変換（ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏ ｒｍａｔｆｏｎ）に対する感受性は、カブサイシンの作用の相対的に短い持続時 間と、腹膜内に投与されたときの有効性の欠如を説明しつる。

耐性がこれらの低体温剤の効果に対して発現するメカニズムはたぶん、高められ た代謝を分解する、特に上記の薬剤−代謝系とカブサイシンの相互作用と考えら れる幾つかの成分を含む。

ラットにおけるカブサイシンに関してここで記され、前に記載されている最初の 暴露に引続き、得られた温度での観察された高さく　（Ｊａｎｃｓｏ−Ｇａｂｏ ｒ、　Ａ、　、　５ｚｏｌｃｓａｎｙｉ。

Ｊ、及びＪａｎｃｓｏ、　Ｎ、氏、　（１９７０）、　Ｊ、Ｐｈｙｓｆｏｌ、、 　Ｖｏｌ、２０８．　ｐ、　４４９−４５９； ５ｚｉｋｓｚａｙ、　Ｍ、氏等、（１９８２）、Ｎａｕｎ　ｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄ ｎ−５ｃｈ’ｓ　Ａｒｃｈ。

Ｐｈａｒｍａｃａｌ、　Ｖｏｌ、　３２０．　ｐ、　９７−１００）　）は、低 体温のストレスに対する中枢応答の幾つかの形態を示し、観察された耐性および 交差耐性に寄与しうる。

刺激剤および低体温剤の両方としてＲＴＸの著しい有効性は、薬理的手段として その有効性を示す。カブサイシンの作用メカニズムの解明は、この薬剤の相対的 に適度な有効性によって妨げられる。種々の他のパラダイムにおけるＲＴＸとカ ブサイシンの作用間の比較は、これらの興味深い天然生成物のメカニズムを詳述 する際に有利に証明してもよい。

実施例２の図を、以下より詳細に説明する。

図８は、時間”Ｏ”に於いて媒体（■）、２０μｇ／ｋｇのＲＴＸ　（・）また は１５ｍｇ／ｋｇのカブサイシン（◆）を皮下に投与後の時間を関数として、マ ウスの体温を示す。それぞれのデータ点は４匹の動物±ｓ、ｅ。

ｍ、からの中間値である。

図９はＲＴＸ　（・）またはカブサイシン（◆）で処理１時間後の体温の変化の 投与量応答曲線を示す。ＲＴＸは腹膜内に投与され、カブサイシンは皮下に投与 される。

それぞれのデータ点は、５つの個々の実験において、２−４匹の動物に対する処 理前と処理後の平均値の差を示す。

図１０は体温に関してＲＴＸまたはカブサイシンの反復処理の効果を示す。値は 、皮下注射された４匹の動物から得られた平均値およびｓ、ｅ、ｍ値を示す。体 温は処理前（口、○、◇）及び処理１時間後（閣、・、◆）に測定された。媒体 の対照（ロ、園）。１日目および２日目に２０μｇ／ｋｇ、及び３日目および４ 日目に４０μｇ／ｋｇの割合によりＲＴＸで処理する。５日目に交差耐性は１５ ｍｇ／ｋｇのカブサイシン注射によって試験される。

１日目および２日目に１５μｇ　／　ｋ　ｇ　、及び３日目および４日目に３０ μｇ　／　ｋ　ｇの投与でカブサイシン（◇。

◆）で処理される。５日目に交差耐性は２０ｇ／ｋｇのＲＴＸ注射によって試験 される。

本発明はこのように記載され、同様に多くの方法で変化されうることは明らかで あろう。そのような変法は本発明の本質および範囲から逸脱したものと見るべき でない。当該分野の当業者に明らかである全ての改良は、以下のクレームの範囲 内に含まれることを意味する。

ＦＩＧ、１ 注射投与量　　９／に９ ＦＩＧ、　２ 結腸温度　　　　’ｃ 結腸温度　　０ｃ ＦＩＧ、４ 適用ｉｎ　　　　ｇ／足 ＦＩＧ、５ 眼払拭の数 眼払拭の数 水分量　　　　２ 温度　　　（ｏＣ） Δ　温度　　　　　　（０Ｃ） 温度　　　　（’Ｃ） 国際調査報告

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. １．神経性炎症、化学的および熱的に誘発される疼痛、カプサイシンに敏感な求 心性知覚経路連累応答および視床下部温度制御領域連累応答に対して被検生体を 減感させるための減感有効量のレジニフェラトキシンおよびそのための製薬学的 に許容され得る担体を被検動物に投与することからなる被検動物を減感させる方 法。
2. ２．レジニフェラトキシンが局所、皮下または腹腔内に投与される請求項１記載 の方法。
3. ３．レジニフェラトキシンが１×１０−５ｍｇ／ｋｇないし５×１０−２ｍｇ／ ｋｇの範囲内で投与される請求項１記載の方法。
4. ４．被検生体が哺乳動物である請求項１記載の方法。
5. ５．被検哺乳動物がマウス、ラット、家畜またはヒトである請求項４記載の方法 。
6. ６．家畜がイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、プタ、ヤギまたはヒツジである請求項５記 載の方法。
7. ７．レジニフェラトキシンが単一または重複適用で投与される請求項１記載の方 法。