JPH03504382A - 高比率活性剤：脂質複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 高比率活性剤：脂質複合体 本出願は、１９８８年５月２０日に出願した、共に係属中の米国特許出願番号第 １９６，９１３号の一部継続出哩である。

先ｉα立見 本発明は、高比率活性剤；脂ＩＲ複合体、その製造法及び用途に関するものであ る。特に、セファロスポリン・脂質複合体及びヨウ素化造影剤：ｍ質複合体につ いて述べている。更に詳しくは、硬質脂質とセファロスポリンを含む高比率セフ ァロスポリン・脂質複合体が記載されている。高比率活性剤＝脂質複合体の製造 方法も開示されている。更に、高比率セファロスポリン・脂ｔＲ複合体を動物に 投与する工程を含む、長期間にわたり該動物での細菌感染を防止する方法を含め て、細菌予防、特に菌血症予防にセファロスポリン、脂質複合体を使用すること が開示されている。一つの実施態様では、本発明は、少なくとも最小阻止濃度近 辺の有効薬剤水準を長期間にわたって維持することによるこのような予防を含む 。別の実８！態様は、高比率ヨウ素化造影剤・脂！ｌ複合体のＸ線用途への使用 である。

１１立１遣 治療実務の基本的要素は、活性剤を治療患者に投与することである。多くの状況 では、投与の問題は、活性剤を動車的なな方法で作用領域に十分に送る間開であ る。ある場合には、リポソームカプセル化が、活性剤の有効な供給を提供してい る。しかし、特定の活性剤は、有効に送られていないが、又は十分な高温度若し くは過剰のｌＩＩＭを投与することになる付ｔｉｎｔｓに比例した濃度で送られ ていない、このように、高比率活性剤−脂質複合体を形成する方法は、大いに興 味があ茗。

活性剤（生理活性剤と呼ぶこともある）は、例えば、薬剤、ホルモン、蛋白質、 色素、ビタミン又は作像剤である。活性剤という用語は、本発明で用いられる場 合、色素、ＸｖＡ作儂用陽性造影剤又は放射性造影剤（まとめて　“造影剤”） 、蛍光剤などの生物学的トレーサー物質を含むと共に、生理活性を有する任意の 化合物、例えば４Ｍ剤及びペプチド、ホルモン、　トキシン、ｎ素、神経伝達物 質、リポ蛋白、糖蛋白、免疫調節物置、免疫グロブリン、多糖類、細胞受容体、 結合分子、核酸、ポリヌクレオチド等のその池の治＃薬を含むものである。

抗微生物剤の予防的使用は、広く検討された医薬治療の方法である０例えば、　 ′成人患者での抗微生物剤の予防的使用″■Ｕ」ＬＬ」ｎＬ６ＪＬ、　１１３７ −０４１　（１９８７）−適当な場合、　リュウマチ熱、腺ペスト、マラリア及 びその他の病気が、予防的に治療される。

抗微生物、特に抗細菌予防の特によく知られた領域は、抗微生物剤（ａｎｔｉｍ ｉｅｒｏｂｉａｌ　ａｇ＠ｎｔ）の手術前使用である。一般に、手術中あるいは せいぜい手術前約３時間以内にだけ、抗微生物剤を投与するというのが、手術予 功に伴う状況であった。

予防薬剤治療の投与においては、特定の抗微生物剤の“最小阻止＄８”　（”Ｍ ｒ、ｃ”　＞がそれによって校定される能力及びその容易性、並びにそのような 水準が被検動物内で維持される期間が、中心に考察される。λ（ＩＣは、処理さ れている病原性生体の増殖を防止する特定の抗微生物剤（抗菌、抗感染、又はそ の他）の最低水準と定義される。ＭＩＣは、脳ｗａ液、血清、血賦等の生理的流 体中、又は組織中、特に感染部位のＵ織（例えば、播種性感染における細網内皮 系）において校定される。

従東　特定の生体についてのＭＩＣは、生体外系で測定され、薬剤が分散されて いる物質の量（通常容量）当りの薬剤の量（重量）によって表される。生体内で 治療又は予防効果を示す薬剤については、その薬剤の生体内での濃度が、通常、 生体外で測定されたＭＩＣと大体等しいか、あるいはそれよりも大きいことが必 要となろう、！！に、８１１１滴度がＭＩＣよりも大きければ大きいほど、また 生体内薬剤水準がＭＩＣを越える時間が長ければ長いほど、治療応答は大きくな る。

抗生物質の生体内直ｗｉ濃度が攻撃病原体のＭＭＣと等しいか、あるいはそれよ りも大きくなっている時間のパラメーターを表すために、ＭＩＣ，よりも大きい Ｔという言葉を使用し、Ｔ、と書き表す。

抗生物質の生体内組織濃度が攻撃病原体のＭＩＣと等しいか、あるいはそれより も大きくなっている時間のパラメーターを表すために、Ｍ　Ｉ　Ｃｔよりも大き いＴという言葉を使用し、Ｔｔと書き表す。

リポソームは、水性容積を取り込み、完全に閉鎖された脂質二分子膜膜状物であ る。リポソームは、単ラメラ小胞（ｌ個のＩＩ状二分子膜を有する）でありでも 、また多重ラメラ小胞（ｒＩ数の膜状二分子腓が、水性層により、それぞれ隣接 する膜から分離されていることを特徴とする玉葱状横道物）であってもよい、二 分子膜は、疎水性０尾”領域と親水性“Ｉａ″領域とを有する２つの単分子膜で 構成されている。ＩＩ状二分子膜の構造は、ｎ質草分子膜の疎水性（非極性）“ 尾”が二分子膜の中心に向かって配向し、一方、親水性Ｍ頭”は、水性相に向か って配向しているような構造である。

Ｂａｎｇｈａｍ等［Ｊ　　　　　　　ｌｊ、　２３８−２５２　（１９６５月に よる初期のリポソームのｒＩｉ製では、リン脂質を有機溶剤中に慰濁させ、次い でそれを蒸発乾固させて、反応容器上にリン脂質を残留させる。

次いで、適量の水性相を加えて、混合物を“膨潤”させ、多重ラメラ小胞（ＭＬ Ｖ）からなる生成リポソームを機械的手段により分散させる。この技術は、Ｐａ ｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ等［ｅ■。

Ｌ尤コ、ｌｊｊ、、　５２４−６３８（１９６１１）］が述べている音波処理し た小車ラメラ小胞及び大軍ラメラ小胞の開発の基礎を提供している。

単ラメラ小胞は、押出装置を使用して、ここで引用されているＣｕ１１１ｓ等、 ＰＣＴ出願番号ＷＯ３７７００２３ｇ、１９８６年１月１６日公開１名称“単ラ メラ小胞を製造する押出技術”に記載されている方法により製造することができ る。この技術により作られた小胞は、ＬＵＶＥＴと呼ばれ、加圧下で膜フィルタ ーから押し出される。ＬＵＶＥＴは、通常、直径が約５００ｎｍ以下であり、約 １１００ｎであることも多く、本発明の好ましいリポソームである。ＬＵＶＥＴ は、　′単うメラ小胞“に含まれるものである。

池の種類のリポソームは、実質的に均一なラメラ溶質分布を有することを特徴と するものである。この種のリポソームは、Ｌ＠ｎｋ等、米国特許第４．５２２， ８０３号で定義されてしするように、安定檀ラメラ小胞（ＳＰＬＶ）、Ｆｏｕｎ ｔａｉｎ等、米国特許第４，５５８．５７９号に記載されているように単相性小 胞、及びＢａ１ｌｙ等、ＰＣＴ公開番号８７７０００４３号、１９８７年１月１ ５日公開、名称“取り込み効率の改善された多重ラメラリポソーム”に記載され ている少なくとも１回の凍結解凍サイクルに付された凍結解凍した多重ラメラ小 胞（ＦＡＴＭＬＶ）と呼ばれる。リポソームの製造及び用途に関するこれらの引 例の教示は、参考としてここに引用されている。

直径が約５００ｎｍ以下のリポソームを“小リポソーム”と呼ぶ、同様に、本発 明のセファロスポリン：ｎｖｔｎ合体を、直径が約５００ｎｍ以下の場合、　“ 小”と呼ぶ、リポソーム又は小胞の固体群を述べる際の直径は、直径の範囲を示 すものである。

本発明のセファロスポリン９脂質覆台体は、脂質に対する薬剤の比率が低い場合 、リポソームの形をしている。脂質に対する薬剤の比率が高い場合は、複合体は リポソームの二分子膜構造を保持しているように見えるが、電子顕微鏡写真では 、完全に閉鎖されていないかもしれない、　“複合体”という用語は、リポソー ムと高比率セファロスポリン：脂質実体の両者を含み、該実体は、不完全番二閉 鎖された二分子膜又はその他の変則を有している点で、リポソームと異なってい てもよい。

本発明の１つの態様として、ヨウ素化造影剤も脂質と複合体を形成し、約２０　 ｕ　１　／　ｕ　ｍ　Ｏｌ　ｅ　Ｉｌｌ質までの高捕捉容量を示す。

これらは、リポソームの形をしているように見え、主に単ラメラであり、サイズ は均一で約０．５ミクロンである０本発明以前には。

非イオンヨウ素化造影剤については、約２．７＋１、負電荷ヨウ素化造影剤【例 えば、ジアドリゾエート１については、１；１の造影剤：ｎ買比が報告されてい た。

過去１０年にわたり、ＲＥ系の器官を特異的に不透明化する微粒子造影剤の開発 を、いくつかのグループが試みている。Ｓ、　Ｅ。

５ａｌｔｚｅｒ、　　　　ｏ＋＊ｅｓ　ａｓ　Ｄ　ｕ　　Ｃａ　　ｅ　ｓ、　Ｇ 、　Ｇｒｓｏｒｉａｄｉｓ、　＠ｄ、　ｐｐ５０９−５２５．　Ｊｏｈｎ　Ｗｉ ｌｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ　Ｌｔｄ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　（１９８８）。コノよ うな一つの応用として、Ｘ線コンピュータ一連動断層撮影（０丁）による肝臓内 の転移性病巣の検出が挙げられる。従来、患者には、ＣＴ走査前に水溶性造影剤 を投与しているが、造影剤が、正常組織と腫瘍組織の両方に、実質的に同等にア クセスするために、両組織間にコントラストがついたとしても、わずかなものと なる。

しかし、もし患者に微粒子造影剤を投与すれば、肝臓のクツパー細胞が造影剤を 食作用して、細胞を不透明化し、線傷細胞を黒くするであろう、いくつかの微粒 子剤が開発され、人に使用されているが、これらの造影剤は、組織への滞留時間 が長いことによると思われるいくつかの付關毒性を有している。微粒子造影剤は 、Ｚ、Ｃａｂｉｎ　等、　Ｊ、　ＯＩＩ　ｕｔ、＾５ｓｉｓｔ、　　τ　曹０１ ．　８４３−７　　（１９８１）ＨＤ、Ｌ、　　Ｍｉｌｌｅｒ　等、　υ’Ｒ１ １１，２３５−２４３（１９８４）；　　Ｈ，Ａ、　　Ｌｏｎｒｉｎｏ　等、Ｚ 、　７７５−９　（１９８３）；　Ｒ，Ｆ、　Ｍａｔｔｒｅｙ等、　ｉ直■佳ｕ １ｕ３Ｌ、７５５−８　　（１９ｇ３）：　　Ｌ　　Ｒ，Ｖｉａｌａｎｔａ　　 等、ｖｅ　　　　　　　ＩＪ、　４０−５　（１９８１）に報告されている。微 粒子造影剤を達成する他の手段は、造影剤をリポソームに取り込むことである。

　　Ｈ，Ａ、　Ｈａｖｒｏｎ等、ｎム互匡■１４０．５０７−１１　（１９８１ ）、　　これらの製剤が必要とする脂質投与量が、人に適用するにはあまりにも 高すぎる。Ｍも一般的に用いられる造影剤であるジアドリゾエートについて、文 献に報告されている最も高いヨウ素・８１１比は、約１：１（ｗｔ／ｗｔ）であ る。

いくつかの応用において、脂質をコレステロールと混合することにより、セファ ロスポリンの取り込みが減少する。これは、多特表千３−５０４３８２　（４） 分、コレステロールが脂質単分子膜に分散し、二分子膜の硬さを低減させた結果 であろう。膠質は、疎水性“尾”領域と親水性“頭″領域とを有することを特徴 とする。ＩＩ状二分子膜の構造は、脂質単分子膜の疎水性（非極性）尾”が二分 子膜の中心に向がって配向し、一方、親水性″！ｉ１１″は、水性相に向かって 配向しているような構造である。脂質の例としては、゛ホスファチジルコリン（ ＰＣ）（類ホスファチジルコリンは、ＥＰＣで表される）、ホスファチジルエタ ノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセ ロール（ＰＧ）、ホスフアチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（Ｐ Ｉ）、スフィンゴミエリン（ＳＰＭ）などのようなリン脂質の単独又は組合せ、 特に炭素鎖が水素化又は飽和された形態のものが挙げられる。リン脂質は、合成 でもよく、卵や大豆のような天然源由来でもよい。

合成リン脂質としては、シミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）及び シミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）が挙げられる０本発明 の好ましい脂質は、炭素単ｔｉ１１３以上の飽和炭素鎖を有するもの及びジガラ クトシルジグリセリドのような非リンＩ１１質である。これらには、コレステロ ールヘミスクシネート（ＣＨ３）などのようなステロールの有機酸誘導体も含ま れる。アルファトコフェロールヘミスクシネート（ＴＨ３）のようなトコフェロ ールの有機酸誘導体を、リポソーム形成成分として使用することもできる。ＣＩ （Ｓ、ＴＨ８含有リボゾーム及びそれらのトリス塩形態の両者は、一般に、これ らのステロールを含むリポソームを製造する任葱の公知方法で作ることができる 。

特に、Ｊａｎｏｆｆ等、米国特許第４，７２１，６１２号、１９８８年１月２６ 日発行、名称“ステロイドのリポソーム”及びＪａｎｏｆｆ等、ＰＣＴ公開番号 ８７１０２２１９．１９８７年４月２３日公開、名称“アルファトコフェロール を基体とした小胞”の方法をそれぞれ参照のこと。更に、公知の脂質として、糖 ＩＩＭがある。

」ｉ互亙且 広いＩ！１様において、本発明は、水相、水と混合しうる有ｍ溶剤及び脂質を含 む単相性溶剤系における脂質と活性剤の混合物を。

実質的に乾固させることなく蒸発させて単相とする工程を含む、脂質と活性剤か らなる高比率活性剤：Ｉｌ脂質複合体製造方法を提供する。

本発明は、脂質とセファロスポリンからなる高比率セファロスポリン；脂質複合 体を含み、一実施態様においては、脂質が、頭の基と炭素単位が約１６以上の長 さの２つの飽和炭素鎖とからなるｌｉ！ｍａｙである。一つの硬質ｎ′Ｍとして 、ジパルミトイルホスファチジルコリンがある。

高比率セファロスポリン・脂質複合体の特定の実施態様において、セファロスポ リンは、複合体の少なくとも２０％、３０％、４０％又は５０％を占める（　Ｗ 　／　Ｗ−全重量に対する成分の重量を示す）、−実１Ｍ態様では、脂質がジパ ルミトイルホスファチジルコリンであり、複合体の約８０％（Ｗ　／　Ｗ　）ま で可能である。高比率セファロスポリン：脂１１１合体の更に別の実施態様にお いては、脂質が、頭の基と炭素単位が約１６以上の長さの２つの飽和炭素鎖とか らなる。

特定の実施態様において、高比率セファロスポリン：１ｉｉｌｌ複合体のセファ ロスポリンは、セファゾリン、セファビリン、セファロチン、セファクロール、 セファロリジン、セフオキサゾール、セフオキシチン、セフラジン、セファレキ シン、セファログリシン、セフロキシム、セフメツキシム又はセファロニウムで あり、特にセファゾリンである。

本発明は、水相、水と混合しつる有機溶剤及び脂質を含む単相性溶剤系における 硬質脂質とセファロスポリンの混合物を、実質的に乾固させることなく蒸発させ て単相とする工程を含む、脂質とセファロスポリンからなる高比率セファロスポ リン：ｍ貿複合体の製造方法をも含むものである。この方法の一実施態様におい ては、単相性溶剤系が、略等量（ｖ　／　ｖ　）の（ａ）薬剤水相、　（ｂ）エ タノール及び（ｅ）クロロホルムと該脂質とからなる。

特定の実ａｒｇ＊において、この方法は、略等量（Ｖ　／　Ｖ　）の水相（Ｍ剤 及び脂＊＞：エタノール：クロロホルムを含む溶剤系における該脂質とセファロ スポリンの混合物を、実質的に乾固させることなく蒸発させて単相とする工程を 含み、約３０−約３７℃で正圧にて溶剤を蒸発させることを含む０本発明の一実 施態様を実施するに際し、この方法は、毎日約２回若しくはそれ以下の投与を行 うことを含む。更に、実ｎｍ様において、この方法は、動物内のセファロスポリ ンの最小阻止濃度（ＭＩＣ）以上の有効セファロスポリン水準を、長期間にわた って維持することを含み、特にその場合、セファロスポリン水準は、ＭＩＣの約 ４倍以上である。ある実施態様においては、血漿若しくは血清水準又は組織水準 として、ＭＩＣを測定する。ある実施態様においては、投与は、筋肉内、１１！ 腔内、静脈内又は皮下に行われる。この方法を実施するに際しては、セファロス ポリンは、セファゾリン、セファピリン、セファロチン、セファクロール、セフ ァロリジン、セフオキサゾール、セフオキシチン、セフラジン、セファレキシン 、セフアログリシン、セフロキシム、セフメツキシム又はセファロニウムのいず れを含んでもよいし、全てを含んでもよい。セファロスポリンがセファゾリンで ある方法の実１Ｍ態様において、この方法は、更に、該セファゾリンを、動物の 体重１ｋｇ当り毎日的２０〜１５０ｍｇの基剤重量の投与量、又は血Ｌ！１　ｍ ｌ当り少なくとも０．５．５若しくは５０ｕｇ　（基剤重量）あるいは組織（肝 臓若しくは膵臓のようなＲＥＳ組織）１ｍｇ当り少なくとも０．５ｕｇ（基剤重 量）のセファゾリンの維持有効セファロスポリン水準で、投与することを含む。

この方法の特定の実施態様においては、得られたセファロスポリン二脂質複合体 が、少なくとも約３０％、４０％又は５０％（Ｗ／Ｗ）のセファロスポリンを含 む、この方法のある実施態様においては、脂質が、頭の基と炭素単位が約１６以 上の長さの２つの飽和炭素鎖とからなり、あるいは、脂質が、複合体の約８０％ （Ｗ　／　Ｗ　）までのような、ジパルミトイルホスファチジルコリンである。

この方法を実施するに際し、特定の実施態様において、セファロスポリンは、セ ファゾリン、セファビリン、セファロチン、セファクロール、セファロリジン、 セフオキサゾール、セフオキシチン、セフラジン、セファレキシン、セファログ リシン、セフロキシム、セフメツキシム又はセファロニウムであり、特にセファ ゾリンである。

本発明の方法は、更に、細菌感染予防に有効な量のセファロスポリン、ｎｔｓ＊ 合体を動物に投与する工程を含む、人を含む動物の細菌感染を予防する方法を含 み、複合体が高比率セファロスポリン：脂質複合体である一実施態様では、脂質 が硬ｊ！脂質である。

本発明のこの予防方法の特定の実施態様は、回置症に対するものである０本発明 の一実施態様の実施に際し、この方法は、毎日約２回以下の投与を行うことを含 む、更に、実施態様において、この方法は、動物内のセファロスポリンの最小阻 止濃度（ＭＩＣ）以上の有効セファロスポリン水準を、長期間にわたって維持す ることを含み、特にその場合、セファロスポリン水準は１Ｍ工Ｃの約４倍以上で ある。ある実施態様においては、血漿若しくは血清水準又は組織水準として、Ｍ ＩＣを測定する。ある実＊ａ様においては、投与は、筋肉内、腹腔内、静脈内又 は皮下に行われる。

この方法を実施するに際しては、セファロスポリンは、セファゾリン、セファビ リン、セファロチン、セファクロール、セファロリジン、セフオキサゾール、セ フオキシチン、セフラジン、セファレキシン、セファログリシン、セフロキシム 、セフメツキシム又はセファロニウムのいずれを含んでもよいし、全てを含んで もよい、セファロスポリンがセファゾリンである方法の実！！１１様において、 この方法は、更に、該セファゾリンを、動物の体重１ｋｇ当り毎日的２０〜１５ ０１１ｇの基剤重量の投与量、又は血ｌｌｆｉ１ｍ１当り少なくとも０．５．５ 若しくは５０ｕｇ　（基剤重量）あるいは組織（肝臓若しくは膵臓のようなＲＥ Ｓ組織）１ｍｇ当り少なくとも０．５ｕｇ（基剤重量）のセファゾリンの維持有 効セファロスポリン水準で、投与することを含む。

この方法の特定の実ｙｉ態様においては、得られたセファロスポリン；脂質複合 体が、少なくとも約３０％、４０％又は５０％（Ｗ／Ｗ）のセファロスポリンを 含む、この方法のある実施態様においては、Ｉ１１質が、頭の基と炭素単位が約 １６以上の長さの２つの飽和炭素鎖とからなり、あるいは、脂質が、複合体の約 ８０％（Ｗ　／　Ｗ　）までのような、ジパルミトイルホスファチジルコリンで ある。この方法を実施するに際し、特定の実＊ａ様において、セファロスポリン は、セファゾリン、セファビリン、セファロチン、セファクロール、セファロリ ジン、セフオキサゾール、セフオキシチン、セフラジン、セファレキシン、セフ ァログリシン、セフロキシム、セフメツキシム又はセファロニウムであり、特に セファゾリンである。

本発明の予防方法の特定の実施態様は、細網内皮系を含む播種性細菌感染に対す るものである０本発明の一実施態様の実施に際し、この方法は、毎日約２回以下 の投与を行うことを含む。更に、実施態様において、この方法は、動物内のセフ ァロスポリンの最小阻止流度（ＭＩＣ）以上の有効セファロスポリン水準を、長 期間にわたって維持することを含み、特にその場合、セファロスポリン水準は、 ＭＩＣの約４倍以上である。ある実施態様においては、血漿若しくは血清水準又 は組織水準（例えば、肝臓又は１ｌＩＩのようなＲＥＳＭｉｌ）として、Ｍ　Ｍ 　Ｃを測定する。ある実ＩＮ態様においては、投与は、筋肉内、腹腔内、静脈内 又は皮下に行われる。この方法を実施するに際しては、セファロスポリンは、セ ファゾリン、セファビリン、セファロチン、セファクロール、セファロリジン、 セフオキサゾール、セフオキシチン、セフラジン、セファレキシン、セファログ リシン、セフロキシム、セフメツキシム又はセファロニウムのいずれを含んでも よいし、全てを含んでもよい、セファロスポリンがセファゾリンである方法の実 ｌ態様において、この方法は、更に、該セファゾリンを、動物の体重１ｋｇ当り 毎日的２０〜１５０ｍｇの基剤重量の投与量、又は血漿１ｍｇ当り少なくと埴０ ．５．５若しくは５０ｕｇ（基剤重量）あるいはａｌｌ（肝臓若しくはｉ＊ｍの ようなＲＥＳＩＩＩ織）１ｍｇ当り少なくとも０．５ｕｇ（基剤重量）のセファ ゾリンの維持有効セファロスポリン水準で、投与することを含む。

この方法の特定の実施態様においては、得られたセファロスポリン：脂質複合体 が、少なくとも約３０％、４０％又は５０％（Ｗ／Ｗ）のセファロスポリンを含 む、この方法のある実１Ｍ態様においては、１ｌｌｉｊｌが、頭の基と炭素単位 が約１６以上の長さの２つの飽和炭素鎖とからなり、あるいは、脂質が、複合体 の約８０％（Ｗ　／　Ｗ　）までのような、ジパルミトイルホスファチジルコリ ンである。この方法を実施するに際し、特定の実施態様において、セファロスポ リンは、セファゾリン、セファビリン、セファロチン、セファクロール、セファ ロリジン、セフオキサゾール、セフオキシチン、セフラジン、セファレキシン、 セファログリシン、セフロキシム、セフメツキシム又はセファロニウムであり、 特にセファゾリンである。特定の実施態様は、細菌■■江！匡ｄｌｕ、又は江江 ■社ｎｕ＝の予防を含むものである。更に、本発明の実施態様は、細菌性骨髄炎 に対する予防である。

本発明の重要な態様は、Ｕ質とヨウ素化造影剤を含む高比率ヨウ素化造影剤；脂 質複合体であり、この場合、特に、脂質は硬質脂質であり、ホスファチジルコリ ンのような不飽和脂質であってもよい、ある実施態様においては、造影剤が、少 なくとも約２：１（ヨウ素ｗ　／　ｗ　）、又は少なくとも約４：１（ヨウ素ｗ 　／　ｗ　）　、　　又は少なくとも約８：１（ヨウ素Ｗ　／　Ｗ　）である、 ある例では、脂質が、頭の基と炭素単位が約１６以上の長さの２つの飽和炭素鎖 を有し、例えば、複合体の約２０％−約７％（Ｗ／Ｗ）というわずかな割合を占 めるジパルミトイルホスファチジルコリンがある。有用な造影剤としては、ジア ドリゾエート、ヨーセタム酸、ヨーダミド、ヨードキシマート、ヨーヘキソール 、ヨーパミド、ヨーパミドール、ヨーパン酸、ヨーフェンジラート、ヨータラマ ート、ヨータラム酸、イボダート、メトリザマイド、チロバネート及びそれらの 塩が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

本発明は、水相、水と混合しうる有機溶剤及び脂質を含む単相性溶剤系？こおけ る硬ＩＩ脂質とセファロスポリンの混合物を、実質的に１２固させることなく蒸 発させて単相とする工程を含む、活性剤がヨウ素化造影剤である高比率活性剤二 脂質複合体の製造方法をも含むものである。この方法の一実施態様においては、 単相性溶剤系が、略等量（ｖ／ｖ）の（ａ）＠剤水相、　（ｂ）エタノール及び （Ｃ）クロロホルムと該脂質とからなる。また、任意に、約３０−約３７℃で正 圧にて溶剤を蒸発させることを更に含む。この方法により、得られた造影剤：ｌ １１１［合体の造影剤は、少なくとも約２・１（ヨウ素Ｗ　／　Ｗ　）、又は少 なくとも約４・１（ヨウ素Ｗ／Ｗ）、又は少なくとも約８：１（ヨウ素Ｗ　／　 Ｗ　）である。この方法では、頭の基と炭素単位が約１６以上の長さの２つの飽 和炭素鎖を有する脂質が用いられ、特に、該ジパルミトイルホスファチジルコリ ンは、複合体の約２０％−約７％（Ｗ／Ｗ）というわずかな割合を占める。脂質 が、卵ホスファチジルコリンや大豆ホスファチジルコリンのようなホスファチジ ルコリンである方法においても、有用である。この方法の具体的な造影剤は、ジ アドリゾエート、ヨーセタム酸、ヨーダミド、ヨードキシマート、ヨーヘキソー ル、ヨーバミド、ヨーバミドール、ヨーパン酸、ヨーフェンジラート、ヨータラ マート、ヨータラム肱　イボダート、メトリザマイド、チロバネート及びそれら の塩である。

本発明の他の態様は、Ｘ＃ｌ密度を増大させるのに有効な量のヨ持表千３−５０ ４３８２　（５） つ素化造影剤、詣買複合体を動物に投与する工程を含む、人を含む動物における Ｘ線密度を増大させる方法であり、例えば、脂質が硬質脂質であり、造影剤がジ アドリゾニー１・、ヨーセタム酸、ヨーダミド、ヨードキシマート、ヨーヘキソ ール、ヨーパミド、ヨーパミドール、ヨーパン酸、ヨーフェンジラート、ヨータ ラマート、ヨータラム縁　イボダート、メトリザ÷イド、チロバネート及びそれ らの塩である。ある用途では、造影剤がジアドリゾエートを含み、更に、該ジア ドリゾエートを、動物の体＠１ｋｇ当り毎日的５００ｍｇ−約１ｇのヨウ素投与 量で投与することを含む。

一実施態様では、Ｘ線密度の増大が肝臓に対するものである。

図面の簡単な説明 第１図は、薬剤濃度に対する卵ホスファチジルコリン複合体へのセファビリンナ トリウムの取り込み減少を示す。

第２図は、薬剤濃度に対する卵ホスファチジルコリン複合体へのセファビリンナ トリウムの取り込みを示す。

第３図は、硬！脂質を定義する際のＥＰＣ，Ｃ）ＴＳ及びアルファＴＩ（Ｓの可 撓性プロフィールを示す。

第４図は、高札＄ｌ：２（ｗ／ｗ）セファゾリン；ジパルミトイルファチジルコ リン複合体を電子Ｕ微鋺写真で示す。

第５図は、　（ａ）薬剤−脂質フィルムを見掛は上乾固した標準ＭＰＶ法、又は （ｂ）薬剤−脂質に初期水性成分を増大させ、残留水分を保持したーいくらかの 残留有機溶剤を含んでもよい一改変ＭＰＶ法のどちらかによって作られたセファ ビリン−卵ホスファチジルコリン禎合体のフリーズ・フラクチャー電子顕微鏡写 真第６図は、セファビリンのジパルミトイルホスファチジルコリンとの複合に及 ぼすセファロスポリン・脂質混合物における初期水性容積の影響を示′す。

第７図は、セファビリンのジパルミトイルホスファチジルコリンとの複合に及ぼ す脂質：セファロスボリンモル比増加の影響を示す。

第８図は、遊離のセファビリン又はセファロスポリン：１ｌｊｔ複合体セファビ リンを注射後間隔をおいてのマウスにおけるセファビリン活性の血清水準を示す 。

第９図は、遊離のセファビリン又はセファロスポリン：脂質複合体セファビリン を注射後間隔をおいてのマウスにおけるセファゾリン活性の血清水準を示す。

第１０図は、膿瘍サイズに及ぼすｉＩｌｍ又はセファロスポリン・脂質複合体内 のセファビリンの影響を示す。

第１１図は、江ｎ飢社口江吐朗旧」投与後のマウスの死亡率に及ぼす遊離又はセ ファロスポリン、ｎ＊複合体内のセファビリンの影響を示す。

第１２図は、遊離造影剤に対する高札′Ｓ複合体形態の造影剤の肝臓内貯溜を表 す。

リポソーム又はセファロスポリン・脂質複合体内ように、ｎｗｒと複合したセフ ァロスポリンは、体内のセファロスポリン分布及びその排出速度を劇的に変えつ ることが、動物実験によりわかっている。これらの薬物動力学的な違いは、他の ことと同様に、あまりよく知られていない効果であるが、セファロスポリンの予 防水準を長引かせ、毒性を低減させ、モして／又は脂質と複合されたセファロス ポリンの効率を高めることができる。

しかし、リポソームへのセファロスポリンの取り込み（即ち複合体）は、典型的 には、有効薬剤の割合が低い、第１図に示すように、脂質である卵ホスファチジ ルコリンのセファロスポリンであるセファビリンへの取り込みは、セファロスポ リンの量が多くなるにつれて減少する。この取り込みの減少ば、セファロスポリ ンの高湯度により取り込みに有害な影響を及ぼすことを示している。

”高比率セファロスポリン：ｍ＊複合体”は、脂質に対して、セファロスポリン が少なくとも約２０％（Ｗ　／　Ｗ　）である、セファロスポリンについてのあ る実施態様においては、セファロスポリンが少なくとも約３０％で、約５０％以 上（Ｗ　／　Ｗ　）までである。

高比率セファロスポリン：脂質は、いくつかの理由から、セファロスポリン治療 に特に有用である。第一に、従来の比率のセファロスポリン・脂質については、 単位脂質投薬量の物理的な塊が、投薬が禁じられていないとしても、投薬に不便 である０代表的なセファロスポリン投与量は、４ｇ／日である。従来卯告されて いる０、１４ｇ（セファロスポリン）・Ｉｇ（Ｐｓ貢）の比率において、成人に ついては、単位投薬量が、薬剤及び脂質量３２ｇとなろう。

通常の投薬方法では、製薬上許容可能な担体と混合する必要があり、その結果、 どう見ても取り扱いにくい単位投薬量となっていた。この巨丸剤を、約７５％ま で若しくはそれ以上の実質的量を減少させることが、本発明の特有な利点である 。第二に、大量の脂質の投与にともなって毒性が生じるが、これは投与脂質量を 減らすことにより減少する。第三に、脂質の必要量を減らすことにより、１縮投 薬量のコストがかなり引き下げられる０本発明の他の利点は、薬剤：脂＊＊合体 準備混合物で用いることのできる高割合の薬剤が、最終複合体に取り込まれるこ とができ、それが、最絆セファロスポリン：脂ｉｔｓ剤のコストを更に引き下げ ることである。

高比率造影剤：脂質複合体は、非イオン性造影剤については、約２．７＝１（ヨ ウ素ｗ　／　ｗ　）を越え、イオン性造影剤（負に帯ｔ）については、約１・１ （ヨウ素；脂質ｗ　ｔ　／　ｗ　ｔ　）を越えるであろう。

本発明において、硬１１１ＲＭ質という用語がここで用いられる場合、可撓性が 卵ホスファチジルコリンと略等しいが又はそれよりも小さいＩｌｌ賞を意味する ものとする。硬さは、公知の方法により、容易に測定される９例えば、第３図は 、ドキシルレポーター基による複合体内の脂質のスピンラベリングにおける硬さ を表す、第３図に示されるように、硬質脂質は、ＥＰＣのオーダーパラメーター と略等しいか又はそれよりも大きい、従って１のオーダーパラメーター（第３図 のＥＰＣＯ上）に近いオーダーパラメーターを有するものである。オーダーパラ メーターは、脂肪酸鎖に沿った異なる位置にドキシルレポーター基が存在する一 連のドキシルステアリン酸を有する小胞をスピンラベリングすることにより得ら れた。＃ＪＩられたスペクトルは、標識が導入されていないことの証拠を示さな かった。

特に、頭の基と炭素単位が約１６以上の長さの２つの飽和炭素鎖を有するものが 、硬質脂質として挙げられる。シバルミチルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ） 及びジステアロイルホスファチジルコリンのような脂質が、このグループに含ま れる。また、コレステロールヘミスクシネートトリス（ヒドロキシメチル）アミ ツメダン（ＣＨ５ｔｒｉｓ）なども硬Ｍ脂質である。

セファロスポリン又は造影剤のいずれかを有するような高比率活性剤：脂質複合 体の製造は、米国特許第４．　５８ａ、５７８号、名称“単相で製造された脂質 小胞”に記載の方法を改変することにより行うことができ、その教示は、ここに 引用されている。単相で製造された小胞は、単相性小胞又は“ＭＰＶ″と呼ばれ る。

単相性小胞は、１糺１１互五を用いる新規な準備方法から生じる。

単相性溶剤系は、３成分−（１）Ｉｌｌｊｌ、　（２）水と混合しろる有１１ｍ 、ｉｌ剤及び（３）水性成分からなる。新規な単相性小胞を製造するためには、 有機溶剤を除去する前に、これらの成分を混合して単相を形成する。有機溶剤を 除去後、水和により単相性小胞を形成する薬剤−脂質フィルムを形成する。

改変ＭＰＶ法は、水性活性剤（例えば、セファロスポリン）対有機溶剤の比が一 般に約８．１から約１：１（ｗ／ｗ）の比較的高い初期水性容積で、ＭＰＶ＆− を実施することを含む。

高比率造影剤二ｌｌ質を形成する方法を実施するに際しては、溶剤系が単相とし て作られようと作られまいと、単相性溶剤系の初期混合物は単相段階を経由しな ければならない、　“単相”という用語は、混合すると一定組成の透明な溶液と なる２つ以上の溶剤の組合せを意味するものとする。実際には、混合すると二相 性系を形成する２つの不混和性溶剤を、最初の溶剤の両方と混合しうる第３の溶 剤を添加することにより、単相に転換する６例えば、クロロホルムと水は、混合 すると、二相性系を形成するが、十分なエタノールを添加すると、単相を形成す る。

ＭＰＶ法の中心となる改変は、活性剤（例えば、セファロスポリン又は造影剤） と脂質とを、常に水和されるように保持する工程である。この水和物質が、医薬 単位投与形態に、より便利な湯度に有効に希釈されるこの発明の複合体である。

この物質を水和されるように保持する改変により、全ての水性成分を除去し、活 性剤；脂質フィルムを形成する通常の終点が国運される。単相が水和されること は、蒸発工程中の物質をＩＫｌＦすることにより、容易に、簡単に測定される。

ゲル状物質の存在は、水がまだ存在していることを示し、一方、全ての水が除去 されれば、この物質を含む容器上に、脂質−活性剤フィルムが形成される。上記 方法は、有効活性剤に比例して、取り込まれる活性剤の割合を顕著に増大させた 。この方法は、最終活性剤：脂質比を高める結果ともなり。

その結果、本発明の高比率活性剤：脂質接合体となった。上記方法及び脂質を利 用して、セファロスポリンのような原活性剤の約６０又は７０％までの取り込み 又は複合が行われ、これと比較して、本方法によらない場合は、その量の約半分 の取り込み又はｔＩ台になる。更に、セファビリンの場合の最終活性剤二Ｂ貢比 は、約１；７（ｗ／ｗ）（セファビリン、卵ホスファチジルコリン及びＭＰＶ法 ）から１．２：１を含む約１＝１よりも高い比率に上昇している。

造影剤についての最終ヨウ素；脂質比は、ヨールミドールに関して報告されてい る［Ｃ，にＵａＵ等、　　　　　　　　　往値此ムＤ１２６−１２９　（１９８ ８）］。

本発明の方法によれば、少なくとも約２：１（ヨウ素Ｗ　／　Ｗ　）又は約４： １（ヨウ素ｗ　／　ｗ　）、６：１（ヨウｍＷ／Ｗ）及び約８−１（ヨウ素Ｗ　 ／　Ｗ　）さえまでの比率が得られる。８・１のジアドリゾエート：ａ＊ｎ合体 を製造した。ヨウ素造影剤に関して、不飽和ホスファチジルコリンの使用のよう な、硬質脂質の使用が有利である。硬質脂質は、血清中でより安定な複合体を与 え、一方、不飽和ホスファチジルコリンは、複合体でより高いヨウ素・脂質比を 与えると信じられている。

ヨウ素化剤でｘｍコントラストを得ることの基準は、放出されるヨウ素の量であ る。ジアドリゾエート　に関し、ジアドリゾエート　に対するヨウ素の比は、ジ アドリゾエート　１．６２３ｇに対しヨウ素１ｇである。多くの用途において、 体重１ｋｇ当り約５゜Ｏから約１０００ｍｇのヨウ素の投与が必要である。しか し、作イ象部位におけるヨウ素酒度や生物的利用前の造影剤の排せつのような穆 々の要因に応じて、これらの範囲外の投薬量を用いてもよい、　　ＩＸＪｌ）ｉ Ｊなる理論にも束縛されれることなく、リポソーム及び本発明の複合体のような 微粒子が肝臓細胞により食作用されるので、細胞内間隙が、細胞組織間の間隙に 優先して標識される。以下に示されるように、本発明の複合体により構成された 造影剤は、特に肝ａｉｉ＊瘍の視覚化を容易にする。

第５図は、　（ａ）薬剤−脂質フィルムを見掛は上乾固した標準ＭＰＶ法、又＋ ｔ　（ｂ　）　ＷｌＩＰｉ−１１７１１１ニ初１１１７に性１ｔ、分ｔｒ増大サ セ、　　列留水分を保持した改変ＭＰＶ法のどちらかによって作られたセファビ リン−卯ホスファチジルコリン複合体のフリーズ・フラクチャー電子顕微鏡写真 である。　（ａ）での複合体は、不規則で、公知のセファロスポリン−脂質複合 体とは異なるように見え、一方、（ｂ）での複合体は、典型的なＥＰＣＭＰＶで あるように見える。

如何なる特定の理論にも束縛されることなく、従来のＭＰＶｆｉは全ての液体を 薬剤−脂質−有機ｍＭ＊溶液から＃去することを含むので、このような除去は避 けるべきであるように思われる。乾固するまで水分を除去すると、第５図Ａのよ うに、薬剤取り込みが低下し、低比率のセファロスポリン：脂質複合体となる。

残留水性相を維持することにより、取り込み又は複合が大体２倍になり、第５図 Ｂの複合体を形成する。

第６図は、セファロスポリン：脂質をｌ；３の一定に保ち、初期水性容積を増加 させることが、ＤＰＰＣ複合体へのセファビリンの取り込み又は複合に及ぼす影 響を示す、第６図は、初期水性容積が６倍高くなると、セファロスポリン：脂質 比が１：１から１２に上昇することを開示している。セファロスポリン二Ｎ買此 のこの上昇が、水性容積の増加によるだけでなく、薬剤濃度の低下にもよるとい う可能性を排除するために、この容積と８Ｍ量とを一定に保ちながら、第１図で テストした最高水性容積を用いる取り込みテストを行った。第７図は、容積と脂 質量とを一定に保っての取り込みテストの結果を示す、第７図は、初期セファロ スポリン；脂質比が増加しても、即ちより多くの薬剤が漂加されても、取り込み に劇的な変化はないことを開示している。

本発明の好ましい方法は、いくつかの点でＭＰＶ法と異なっている。まず、溶剤 系における薬剤と脂質との遇初の組合せは、単相から構成されていないかもしれ ない、しかし、高取り込み又は複合を達成し、高活性剤：脂質比とするために、 溶剤除去中のある点で、溶剤系が単相を経由する。使用される系とは無関係に、 活性剤（薬剤ともいう）とＮ＠貿の両者は、それらのそれぞれの相に完全に溶解 されるべきである。活性剤が造影剤で、ｎ質が硬質脂質である場合、脂質の転移 温度よりも約１０℃高い温度が有用である０次に、溶剤除去工程中の水の損失を 制限するために、真空回転蒸発よりも、むしろ正圧のような蒸発工程を使用すべ きである。この工程中、かい型混合機を使用することが好都合である。

好ましい方法では、速すぎてはっきりした単相が形成できないような溶剤除去を 避けるように、溶剤除去速度が監視される。この速度は、温度が高ければ溶剤除 去が速くなるという点で、温度と密接に関連している。最大量の水を保持しなが ら、最大量の有機ＭＰＶ法では、多数の有機溶剤を使用できるが、本方法では、 組み合わせた溶剤が、薬剤と脂質の両方を可溶化し、この方法の間に単相を形成 しなければならない。エタノールは、高取り込み又は複合及び高札″Ｊ活性剤； 脂ｊ！複合体のために、実質的に好ましμ水混和性有機溶剤である。水混和性有 機溶剤としてのエタノールの利点は、エタノールの生体内の高度な残留が、マウ スの靜麗内薬物動力学的実験から判断して、複合体に悪影響を及ぼさないように 思われることである。

本発明の−ｆｉ様は、長期間にわたって、少なくともセファロスポリンの略ＭＩ Ｃ水準の有効薬剤水準を動物内で維持することによる細菌感染予防であり、該動 物に、ｌｌ１ｉ　！！　：セファロスボリン複合体、好ましくは投与間隔の長い 養生における高札軍複合体を投与する工程を含むものである。

特定のセファロスポリン（又は他の抗菌又は抗感染）の予防水準（Ｔ、又はＴＩ ）の維持に関する“長期間”とは、薬剤水準が、遊離形態−即ち非複合−のその セファロスポリンの等量を１回投与することによって保持されるＭＩＣ［）又は ＭＩＣｔと略同等又はそれを越える期間の少なくとも約２倍を越える期間を意味 すると理解されるものとする。

セファロスポリン（又は他の抗菌又は抗感染）の予防的有効水準に関し、　′有 効”とは、生物学的に有効であるにと；　即ち、脳をｇａ液、血清、血漿のよう な生理的流体中又は組織中で、生体内に存在する病原体のような病原体にたいし て抗菌活性を示すセファロスポリン、を舅昧すると理解されるものとする。

”少なくとも最小阻止濃度の薬剤水準”とは、被検動物での生体の増殖を防止す るのに十分なセファロスポリン（又は抗菌又は抗感染）の細菌感染防止水準を意 味すると理解されるものとする。

この細菌感染防止水準は、少なくともおよそＭＩＣ水準であろう。

この水準は、当業者に良く知られているＭＩＣの多数の生体外テストにより、容 易に測定される。このような予防的に有効な水準を生体内に設定するための投与 量は、取得されるべき絶対薬剤水準、特定の薬剤、水準が設定されるべき部位及 び当業者に知られている他の要因により変わるであろう０人を含む動物に関し、 細菌感染の予防においては、処方薬剤師が、所定の被検動物に適当な投薬量を最 終的に決定し、これは、細菌接種の性質及び重症度と共に、動物の年齢、体重及 び応答並びに投与経路によって変わるものと期待される。予防水亀　従って、そ れによりリポソームカプセル化形態において必要とされる投薬量は、一般にａｍ の治療薬に用いられるもの程度であろう、しかし、ある場合には、目的とする生 体内薬剤水準を設定するためには、これらの範匠外の量を投与する必要があるか もしれない、回置症、即ち血液の細菌感染、の予防のような特定の用途では、セ ファロスポリンの予防水準とは、血液中での対象細面の増殖を防止する水準を意 味すると理解されるものとする。

セファロスポリンとは、セフオキサゾール、セフオキシチン、セファロリジン、 セフラジン、セフレキシン、セファログリシン、セフレキシン、セフメツキシム 及びセファロチン、並びにそれらの類似体及び誘導体を含むが、これらに限定さ れるものではないβ−ラクタム抗生物質のセファロスポリンクラスの任意の１員 を意味すると理解されるものとする。

“ヨウ素化造影剤”は、限定されることなく、ジアドリゾエート、ヨーセタム酸 、ヨーダミド、ヨードキシマート、ヨーヘキソール、ヨーバミド、ヨーパミドー ル、ヨーパン酸、ヨーフエンジラート、ヨータラマート、ヨータラム酸、イボダ ートカルシウム、イボダートナトリウム、メトリザマイド又はチロパネートのよ うな、識別できるＸ線不透明性を有するヨウ素化された製薬上許容可能な物質を 意味すると理解されるものとし、他の製薬上許容可能な塩、更にはそれらの類似 体及び誘導体と共に、メグルミン（例えば、ジアドリゾエートメグルミン、ヨー ダミドメグルミン、ヨードキシマートメグルミン、ヨーパミドメグルミン、ヨー タラマートメグルミン）のようなそれらの塩を含むと理解されよう。

遊離薬剤は、一般に、動物全体又は動物内のある部位において、動物にＭＩＣを 設定するのに十分な量で、動物に投与されてもよい、かかる薬剤のλ（ＩＣは、 各薬剤、動物及び他の公知の要因に対して特有の時間、存在するであろう、詩間 徨、薬剤濃度がＭＩＣよりも低下し、ＭＩＣを再設定するために、薬剤を再投与 しなければならない。このように、少なくともＭＩＣ前後の薬剤水準、あるいは 任官の所定薬剤水準を連続的に維持するために、薬剤をｍ　物＋：　縁り返して 投与しなければならない。

セファロスポリン・脂質複合体、特に高比率セファロスポリン゛１１ｆｔ　ｊ！ ｊ　７１合体は、遊離薬剤に比較して、薬剤を繰り返し投与することなく、少な くともＭＩＣの薬剤水準に連続的に維持するのに有用である。“セファロスポリ ン；ｎ質複合体”は、Ｉｉ＊、特に硬質脂質と複合されたセファロスポリンに関 する。薬剤は、複合体の外表面又は複合体の水性若しくは脂質部分に吸着される ことができる。セファロスポリンは、一般に親水性であるため、セファロスポリ ン・脂ｌｔｎ、合体の大部分のセファロスポリンは、複合体内にあるが、これは 決定的なものではない。

本発明を限定するものではないが、複合体を洗浄し、複合体から解離しつるセフ ァロスポリンのような活性剤を除去してもよい。

いくらかの外側のセファロスポリンは、動物への投与に陣して、複合体から容易 に分離するため、高比率セファロスポリン：脂質複合体よりも、遊離セファロス ポリンとして挙動するかもしれない。

解離しつるセファロスポリンからの不必要な活性を回避しながら、セファロスポ リンの複合投与量を最大にするために、好ましい実施態様においては、複合体を 洗浄して、解離しろるセファロスポリンの少なくとも約９０％を除去する。複合 体を洗浄する方法は良く知られており、クロマトグラフィーと共に遠心分離が挙 げも予防のための本発明の実施においては、同一の薬剤水準又は薬剤のＭＩＣを 維持するために同等の投与量で投与されなければならない遊離の薬剤と比較して 、複合薬剤のこのような投与の回数は減少する。所定の組織又は血液水準を維持 するために薬剤を投与しなければならない回数が減少するということは、このよ うな薬剤の投与間隔が長くなる結果となる。これは、江江並社ｎ上又はｕｍ　ｕ −特に■且お立１はｕＬＬｉＪＬ！江ｎＪ１■山」のような細網内皮系を含むｔ １種性感染を含む長期間の細胞内生存がある感染を予防するのに、特に好都合で ある０本発明の１投与間隔の長い養生”は、所定の薬剤水準を維持するために、 遊離の薬剤を再投与しなければならない（等量及び同一薬剤で）間隔の少なくと も２倍の薬剤投与間隔を有する投与養生を意味すると理解されるものとする。あ る治療状況においては、非複合薬剤の２回以上の投与に変えて、セファロスポリ ン、脂質複合体の１回だけの投与が必要となることがあろうが、これは、投与間 隔が無限に長くなったことであり、この定義内であると理解される。

細網内皮系を含む播種性細菌感染の治療において、セファロスポリン−脂ｔ！Ｉ 複合体の形で投与された後、セファロスポリンが残留することにより、従来、セ ファロスポリン療法では効果がなかった効能を可能にする。

“最小阻止濃度″（“ＭＩＣ”）は、治療剤の最小水準に関連し良く知られてい る用語であり、通常Ｗ　／　Ｗ又はｗ　／　ｖで表され、病原体−一ここでは細 菌−一の増殖を阻止するであろう、ここで用いられる場合、血漿又は血清中で検 出されたＭＩＣは、　”ＭＩＣ，”と名付けられ、攻撃生体について生体外で測 定された、血漿又は血清の容量当りの重量による医薬剤の最小阻止濃度と同じか 、あるいはそれよりも大きい血漿又は血清中の治療剤濃度を指すものと理解され る。セファゾリンに関し、多くの罹病性生体についてのＭＭＣ，は、約０．５υ ｇ（基剤）／ｍｌ（血漿又は血清）である、セファロスポリン；脂質複合体セフ ァゾリンは、この水準に達するまで投与されることができ、更に１０又は１００ υｇ／ｍ１以上の水準に達することができる。基剤重量は、対イオンを含まない 活性部分の重量を表すために泪いられるであろう。

ここで用いられる場合、組織中で検出されたＭＩＣは、　ＭＩＣ１″と名付けら れ、攻撃生体について生体外で測定された、重量当りの重量による医薬剤の最小 阻止１度と同じか、あるいはそれよりも大きいＭＨ＆中のｉｆｌｆ１Ｍｍ度を指 すものと理解される。セファゾリンに間し、多くの罹病性生体についてのＭＩＣ Ｉは、約０゜５υｇ（基剤ン／ｍ１（ＩＩ臓）である。薬剤；脂質複合体セファ ゾリンは、この水準に達するまで投与されることができ、更に１０又はＩ　ＯＯ ｕ　ｇ　／　ｍ　１以上の水準に達することができる。

病的状態の治療ｔ；おいて、組織内の医薬剤の予防水準の設定も、有効な治療選 択であることができる。最も信頼できる予防のためには、ＭＩＣの約４倍または 約８＠の水準が望まれることが多い。

本発明の方法ｔ；によって、このような水準が得られる。セファロスポリンのよ うな脂ｊｌｌｊＦ合体医薬剤を、靜脈内投与のような非経口投与することにより 、選択された組織内で医薬剤が長時間存在するようになり、明確な抗菌活性を示 す結果となる（第１表）。

実験は、セファロスポリンの組織水準が血漿水準の血清よりも長く持続し、長期 間ＴｔＯ間、最も敏感な生体のＭＩＣよりも高い。

例えば、約６０　ｔ＋　ｇ／ｇｍよりも高い水準が、ｍｉｉ内に少なくとも約２ ４時間、肝臓内に約２４時間存在する。

細菌感染の予防的治療を越えて、高比率セファロスポリン複合体の残留は、細網 内皮系を含む播種性細菌感染とも云われる条件的細菌細胞内感染（ｆａｃｕｌｔ ａｔｌｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　１ｎｔｒａｃａｌｌｕｌａｒ　１ｎｆｅｃｔ ｉｏｎ）の治療に特に重要である０条件的ということは、無細胞培地におけると 同様に、真核性細胞、特にＲＥＳのマクロファージ内で生存することのできる病 原体を意味する０条件的細胞内生体の例としては、はＵ扛ｎＩユ■ｍ讃、江肱ｔ Ｌｈ迄、Ｉ旺□ＬＬ１ｊ訓江Ｕｌ上、１ｌＬｙＯｂａｔｅｓｉＬ及び江謙組虹ｎ ｕ＝−がある。ｍｍ病原体の他のグループである絶対細胞内生体は、条件的生体 に入るであろう、Ｃｏｘｉｅｌｌａ　ｂｕｒｎｓｔｔｉのような絶対細胞内生体 は、細胞内でのみ生存することができる。

あるＩＩ！１ｍは、セファロスポリンの低毒性水準ではセファロスポリン耐性で あり、活性水準でのみセファロスポリンに感受性を有することが理解されよう、 同様な耐性が、他の抗菌剤又は抗感染剤について生ずるかも知れない０本発明が 、セファロスポリン又は他の抗菌剤若しくは抗感染剤に対して感受性を有する生 体に適用できるであろうことは、当業者の認識するところである。これは、生体 外テストにより決定することができる。セファロスポリンでは典型的に治療され ないが、生体外では感受性を有している担口４１１１１１１１１　ｓｐ、のよう な生体は、本方法によって有効に治療される。

細菌感染の予防治療は、高比率セファロスポリン・脂質複合体く又は他の抗菌剤 若しくは抗感染剤）の有効量を投与することにより行われる。細菌感染予防有効 量は、目的とする間隔にわたって予防応答を達成するのに十分な量を意味するも のと理解されよう。

所定のセファロスポリン（又は池の抗菌剤若しくは抗感染剤）の細菌感染予防有 効量は、投与の方法、受容体の特性、標的細菌の感受性及びその池の公知の要因 によって変わるであろう。

セファロスポリン、脂Ｍ１１合体（又は池の抗菌剤若しくは抗感染剤）の１回の 投与からの予防の期間は、特定の薬剤、治療される動物、攻撃生体及びその他の 当業者に知られている要因に応じて変わるであろう、一般に、薬剤の予防組織水 準は、薬剤の１回の投与から上昇し、　１回の投与からの動物組織内の遊離の薬 剤のＴ【よりも実質的に長く、かつ高＜ｍｉｉ及び肝臓内に維持されるであろう 、肝臓内では、複合体は、遊離の薬剤よりも少なくとも約２倍、そして約５倍以 上まで長く持続した。牌臓内では、遊離の薬剤は、検出できる水準よりも低かっ たが、これに対して、捏合体薬剤は、少なくとも約２４時間持続した。

予防治療に必要とする期間は、被検動物の状態によって変わるであろう、免疫無 防備状態の動物においては、免疫無防備の期間、予防が必要になる可能性がある 。このように、後天性免疫不全（ＡＩＤＳ）の被検体では、この期間は一生であ るかも知れないし、一方、化学療法に付随する好中球減少症にかかっているか又 は臓器移植処方のために免疫抑制されている被検体においては、予防の期間は、 もつと制限されるかもしれない、このような予防に必要な期間は、当業者に良く 知られている。

検出できる血清水準の存在しないＲＥＳの特定のｆｆｌ器内に抗生物質の少なく とも最小阻止濃度を維持させることは、危険状態の患者における回置症の防止及 び治療、又は特定の慢性感染（例えば、　骨制炎、　　Ｗｙｃｏｂａｃｔａｒｉ ｕｍ　ａｖｉｕｍ　　１ｎｔｒａｃｉｌｌｕｌａｒｅ　　ｇ染、　Ｓａｌｍａｎ ａｌｌａ　ｓｐ、　５染）の治療若しくは抑制に好都合である。

細網内皮系又はＲＥＳは、内皮及びＩＩＢＩ！４の両方の属性を有し、色票に対 する通常の食作用挙動を示す体の細胞を！昧するものと理解される。このような 細胞は、投与されたセファロスポリン・脂質複合体を取入れ易い、含まれる細胞 には、ｌＩ臓及びリンパ節の細胞、肝臓のクツパー細胞、肺臓の肺胞マクロファ ージ、骨髄の細網内皮細胞及び崩壊細胞がある０本発明の用語において、骨髄及 び硬組織はＲＥＳの範囲内であり、細菌性骨髄炎はＲＥＳの感染であると見なさ れるであろう。

セファロスポリン：脂ｊ！複合体で投与されたときのセファゾリンの生物学的利 用率を測定するために、いくつかの感染モデルを検討した。

第８図は、遊離セファピリンＶはセフテロスポリン・詣Ｉｉｌ帽合体一般に、遊 離又はカプセル化抗生物質の１回の投与を静脈注射で行い、その後、動物の血清 又は血漿及び選ばれた組織内の抗菌活性の量を間隔をおいて測定することにより 、抗生物質についての血清水準及び組織分布の検討をマウスで行った。

抗菌活性の他の測定法又は薬剤物質の化学的若しくは免疫的測定法が当業者に知 られているが、寒天ウェル拡散生物測定法により抗菌活性を測定した。簡単に云 うと、ここで用いた寒天ウェル拡散生物測定法は、江は■皿匹且ｕＢ　（ＡＴＣ Ｃ＃６６３３）のようなテスト細菌を予め蒔いたウェルを切って、ｒｒｙｐｔｔ ｃａｓｅ　Ｓｏｙ　Ａｇ１ｒ　ｆディフコ社（Ｄｉｆｃｏ）、デトロイト、ＭＩ Ｉのような寒天とすることにより行った。ウェルを少量のテスト物質、ここでは 約５０ｕｌのテストサンプルで満たし、寒天プレート・を培養しｔ−ａ　　証ホ 旦旦５ｕｂｔｉ１１ｓ培養は、約１６−２４時間、約３５℃で行われた。ウェル 周囲の細Ｍ′芝生”の成長を、テストサンプルから拡散して寒天中に存在する抗 生＊＊で抑制した。ウェル周囲の成長抑制帯域の直径は、テストサンプル中の抗 生物質の濃度に比例し、既知の標準抗生物Ｍ溶液との比較により測定された。動 物へのセファゾリンのような、セファロスポリン：脂質複合体抗生物質の動物へ の投与（非経口）によって、時間ゼロ（Ｃｐｏ）において血漿中の医薬剤の濃度 Ｃ；より浦定された場合、遊離形態での医薬剤について観察されたものよりも高 いピーク血清又は血漿水準になるという特徴的な結果となった。また、遊離形態 よりもセファロスポリン・ｎ寅複合体の形態で、より長い血清又は＊ａ半減期（ Ｔｌ／２）が観察され、曲線下面積（ＡＵＧ）と呼ぶ、時間に対する血清または 血Ｍ濃度のグラフの下の面積が、より大きいことがｌ１１１１！された。

セファビリン（各２００ｍｇ／ｋｇ）の注射後、間隔をおいて測定したマウスに おけるセファビリン活性の血清水準（各点は３〜５匹のマウスを示す）を示し、 一方、第９図は、従来の水溶液（丸）、又は薬剤の脂質に対する比率が１：５（ 重量比）のＤＰＰＣからなる捏合体（四角）で、セファゾリンを１回ＩＩＩＲ内 投与した徨のセファゾリン活性（各１００ｍｇ／ｋｇ）を示す、セファビリン、 セファゾリン共に、遊離薬剤に比較して、セファロスポリン：ｌｌ１ｊ［複合体 ｇｉ剤により血清中の活性が長く続き、活性の水準が高くなることを示している 。第８図及び第９図の両方において、セファビリン／セファゾリン水準、従って 血清又は血漿中の活性が、遊１ｌＩｌ薬剤と比較したとき、セファロスポリン− 脂質投与形態でより高く、より長く持続したことがわかる。血清中の予防活性の 延長は、セファロスポリン脂質複合体抗生物質を皮下投与することによっても達 成することができる。

遊離又は複合造影剤（ジアドリゾエート）を尾静脈からの１回の静脈注射で投与 することｌこより、マウスでテストした。９２４ｒｎｇ／ｋｇのヨウ素投与量で 、肝ＩＩ　Ｌ　ｇ当り１約２ｍｇよりも高い水準が達成された（第１２図）、第 １２図及び第３表に示すように、ＭＰＶにおける最終ヨウ素／朋貿比は４．３： １　（ｗ／ｗ）；ヨウ素濃度は３８．５ｍｇ／ｍｌ、膠質湯度は８．５ｍｇ／ｍ ｌであった。Ｓ量の比活性は、約１００００ｃ／ｍｇＩであった。

抗生物質の予防使用の効力は、当業者に良く知られている多数の方法でテストす ることができる０次ぎに、予防効力テストのいくつかのモデルを簡単に説明する 。

―――−ｖ ＋１−＋１−−１＋＋１−−−シ戴−た。」□−ピ、よ−Ｉ−１１鼻＼Ｉ−Ｉ〒 −４−よ１１４Ｕノ乞１１リプチカーゼソイプロＸ　（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ　 ｓａｙ　ｂｒｏｔｈ）中で３０”Ｃにて一晩増殖させた。この懸濁液の一部を一 ７０’Ｃで凍結した。この菌株についてのセファビリンナトリウムの生体外最小 阻止濃度（ＭＩＣ）は、マイクロタイター希釈法ＴＯ，０５〜０．１０ｕｇム製 剤は、静脈内に投与されたとき、薬剤を特定の器官に指向させる。これは、特に 細網内皮系を含み、更に詳しくは牌臓を含む。

Ｓａ　ｃａｎａｌ　ａ　ｔ　　ｈｉｍｕ　　ｕｓは、マウスに全身感染をもたら すことのできる条件的細胞内細菌である。自然発生マウスサルモネラ症は、生体 の摂取（汚染食物、敷わら又は糞便から）によって生ずる。感染は、結膜経路に よっても、又は実験的皮下、Ｍ腔内若しくはＩ？脈内接種羨にも生じうる。全て の場合、生体は体循環に接して敗血症を起こし、次いで主繻綱内皮系（ＫＩ［、 肝１　リンパ節）に局在化する。細菌は、マクロファージ内で生存及び増殖する ことができ、死が介在しなければ、慢性感染の原因となろう。

テスト動物に投与された高比率セファロスポリン複合体は、試験された全ての投 与量及び治療時間において、生存時間を延長し、遊離セファロスポリン投与を？ ｉ駕した。

セファロスポリン・Ｒ＊複合体は、顕著な予防活性、遊離の医薬剤のそれを越え る期間のＴ＋を与える。ｔＡらかに、高比率セファロスポリン複合体は、ｉｓの セファロスポリンよりも著しく長く作用していた。

セファロスポリンの組織水準の研究において、高比率セファロスポリン複合体の 投与に続くセファロスポリンのＭＩＲ水準が、薬剤濃度及び薬剤保持時間の長さ の両方において、血漿水準を越えるかもしれないことが知られている。セファロ スポリンは、細菌の増殖を停止させるのに生物学的に利用できるため、７日間ま で又はそれ以上の期間、医薬的に予防に有効である。従って、セファロスポリン を有する膵臓のようなＲＥＳ器官の負荷−高比率セファロスボリン複合体投与に 付随するもの−が、薬剤の検出できる血漿水準が存在しなくても、血液中の生体 （例えば、薗血症）を防ぐことができる。

本発明の方法は、ある実施態様においては、捏合体の大きさの影響を受ける。Ｒ ＥＳによる予防取り込みは、直径が０．５ｕよりも大きい複合体で、最も急速に 起こる。このように、セファロスポリンの血漿水準の期間延長が主目的であれば 、直径０．５ｕ未満の複合体を使用することによりこれが促進されるし、一方、 約０．５ｕ又はそれよりも大きい複合体の使用によりＲＥＳ負荷が促進される。

いずれの状態においても、ＲＥＳが、高比率セファロスポリン複合体の投与量の 多くを最終的に貯蔵することになろう。

Ｍ　Ｌ　Ｖ、　　超音波破砕された小さい単ラメラ小胞、大きい単ラメラ小胞、 ＬＵＶＥＴ、５ＰＬＶ、ＦＡＴＭＬＶ、ステロイトリホソーム又はアルファート コフェロールをペースにした小胞を含む従来のリポソームが、本発明の実施にお ける予防に有用であるが、高比率セファロスポリン；脂質複合体が好ましい。

ｎ１ｔをベースにした薬剤の搬送系においては、薬剤のような生理活性剤が、セ ファロスポリン二脂質単位におけるように、脂質に取り込まれるか又は脂質と複 合され、次いで治療されるべき患者に投与される０例えば、Ｒａｈ層ｉｎ等、米 国特許第３．　９９３．　７５４号；　５ｅａｒｓ、米国特許第４．　１４５． ４１０号ＨＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌＯｓ等、米国特許第４，２３５．８７１ 号；　５ｃｂｎｓｉｄｓｒ、米国特許第４，１１４，１７９号；　Ｌａｎｋ等、 米国特許第４．　５２２．　８０３号；及びＦｏｕｔａｉｎ等、米国特許第４， ５８８，５７８号を参照のこと。

活性剤二Ｎ質覆合体の投与方法によって、化合物が送られる生体の部位及び細胞 が決定されるかも知れない、セファロスポリン脂質複合体　（又は他の抗菌剤若 しくは抗感染１ｓ）は、単独で投与されることができるが、一般に、意図した投 薬経路及び標準製漏プラクティスに関して選択された製薬担体と混合して投与さ れるであろう、ヨウ素化造影剤複合体は、同様に投与することができよう、製剤 は、非経口で、例えば動脈内又は静脈内に注封してもよい０ｇｉ剤は、経口、皮 下若しくはＥ内向経路又は吸入によって投与されることもできる。非経口投与に ついては、それらを、例えば、溶液を等張性にするのに十分な塩又はグルコース のような池の溶質を含んでもよい無菌水溶液の形で使用することができる。

その他の使用法については、製剤の特性に応じて、当業者が想像できるものであ る。ある実＊！’ｌ！様においては、高比率セファロスポリン・脂ｊ０３！合体 セファロスポリンを、人を含む被検動物への投与が便利になるように適合させた 単位投与形態で用いてもよい。

“治療有効量”とは、身体的又は生理的応答を達成するのに十分な量を意味する ものと理解されるであろう、所定のセファロスポリンの治療有効量は、投与の方 法、受容体の特性、標的細菌の感受性及びその他の公知の要因によって変わるで あろう、造影剤の治療有効量は、作像されるべき対象の態様及びＸ線作偉装置の 特性によって変わるであろうが、当業者の経験的ｎｙｙにより容易に決めること ができよう。

病気状態の治療又は作造のための人への投与については、処方箋を書く医者が、 特定の被検者への適当な投与量を最終的に決めることになろう、そして、これは 、患者の病気の性質及び重さと共に、個人の年齢、体重及び応答によって変わる と期待されることができる。セファロスポリン、脂１！Ｉ複合体形態での又はヨ ウ素化造影剤：脂質複合体についての薬剤投与量は、−Ｓに、遊離活性剤に用い られるものと略同じであろう、しかし、ある場合には、これらのａｔ回外の量を 投与する必要があるかもしれない、裏」Ｌ出」− 高比率セファ口スポリン：脂質複合体の製造５０ｍ１九底フラスコ内で、１．９ ０８ｍ１のｄＨｉｏを加えることにより、９２ｕ１の３００ｍｇ／ｍｌセファゾ リンナトリウム原液を２ｍｌに希釈した（薬剤の合計２６．２ｍｇ）、２ｍｌの １００％エタノールを、２．５ｍｌの２０　ｍ　ｇ　／　ｍ　１脂＠　（ＤＰＰ Ｃ）原液と共に加えた（脂質の合計５０ｍｇ）、　　空気流を使って得られた混 合物を撹拌しながら、このフラスコを３７℃の循環水浴に浸漬した。空気流は、 溶剤除去中、混合物を完全に混合撹拌するのに十分な強さに調整した。１．５〜 ２分徨、混合物は、二相（濁った）から単相（透明な）に変わった。溶剤除去が 続くにつれて、混合物は不透明かつゼラチン状又はゲル状になった。ゲル状態は 、水和の継続を示した。パージングを５分間継続し、その間、極めて微かなエタ ノール臭が検出された。この時点で、セファロスポリン、脂Ｍ：水性混合物は濃 く、幾分ゼラチン状であった。

混合物が濠化するまで、短時間、混合物を５１℃の循環水浴中で加熱した。これ には、約１５秒を要した０次いで、混合物を２−１．５ｍｌのコニカＪレミクロ フユージチューブ（ｃｏｎｉｃａｌ　ｍ１ｃｒｏｆｕＨａ　ｔｕｂｅ）に移し、 ミクロフユージで１５００Ｏｒｐｍにて１０〜１５分間回転させて、セファロス ポリン：脂質複合体ベレットを作った。水相をベレット上から取り除き、１４５ ｍＭ食塩水を加えてチューブを満たした。ベレットが完全に再懸濁するまで、チ ューブを短時間回転させた。セファロスポリン・脂質複合体を、上述のように、 再遠心分離し、再懸濁させた。得られたセファロスポリン：脂質複合体を、上述 のように、あるいは後で洗浄するセファロスボリン脂１！複合体の他のバッチの ような他の物質と混合して、更に２回洗浄した。複数の複合体を混合する場合は 、最初の再懸濁後、それぞれを一本のコレックス（Ｃａｒａｔ、商標）チューブ （Ｃｏｒｎｉｎｇ　Ｇｌａｓｓ　Ｗｏｒｋｓ社、コーニング、ＮＹ）に移し、　 １００００ｇで１０〜１５分間回転させた。上述のように、ベレットから上澄み を除去し、ベレットを食塩水中に再！！！濁させた。洗浄ベレットについて１Ｍ 剤、脂質及び残留エタノールを測定した。このようなテストの結果は、薬剤が１ ８．ｔｍｇ／ｍｌ、脂質が３２．３ｍｇ／ｍ１．残留アルコールが２％であった 。

支息■ユ 高比率セファロスポリン二脂質複合体の製造５０ｍ１丸底フラスコ内で、１．７ ８３ｍ１のｄＨ２０を加えることにより、２１７ｕｌの３００　ｍ　ｇ　／　ｍ 　１セフアゾリンナトリウム原液を２　ｍ　１１：希釈した（薬剤の合計２６． ２ｍｇ）、２ｍｌの１００％エタノールを、２．５ｍｌの２０ｍｇ／ｍ１ｌｌ質 （ＤＰＰＣ）原液と共に加えた（脂質の合計５０ｍｇ）、　　空気流を使って得 られた混合物を撹拌しながら、このフラスコを３７℃の循環水浴に浸漬した。空 気流は、溶剤除去中、混合物を完全に混合撹拌するのに十分な強さに調整した。

ｌ、５〜２分後、混合物は、二相（濁った）から単相（透明な）に変わった。溶 剤除去が続くにつれて、混合物は不透明かつゼラチン状又はゲル状になった。ゲ ル状態は、水和の継続を示した。パージングを５分間継続し、その間、極めて微 かなエタノール臭が検出された。この時点で、セファロスポリン・脂ｊｔ：水性 混合物は濃く、幾分ゼラチン状であった。混合物が液化するまで、短時間、混合 物を５１゛Ｃの循環水浴中で加熱した。これには、約１５秒を要した０次いで、 混合物を２−１．５ｍｌのコニカルミクロフユージチューブに移し、ミクロフユ ージで１５００Ｏｒｐｍにて１０−１５分間回転させて、セファロスポリン：Ｉ ｉ貿複合体ベレットを作った。水相をベレット上から取り除き、１４５ｍＭ食塩 水を加えてチューブを満たした。

ベレットが完全に再懸濁するまで、チューブを短時間回転させた。

セファロスポリン：ＲＷ１４複合体を、上述のようｌこ、再遠心分離し、再懸濁 させた。ｆｌられたセファロスポリン：脂質複合体を、上述のように、あるいは 後で洗浄するセファロスポリン；脂ｊｌ複合体の他のバッチのような他の物質と 混合して、更に２０ｉ１洗浄した。複数の複合体を混合する場合は、最初の再懸 濁後、それぞれを一本のコレックス（Ｃｏｒｅｓ、商標）チューブ（Ｃｏｒｎｉ ｎｇ　Ｇｌａｓｓ　Ｗｏｒｋｓ社、コーニング、ＮＹ）！＝移し、１００００ｇ でｌｏ−１５分間回転させた。上述のように、ベレットから上澄みを除去し、ベ レットを食塩水中に再懸濁させた。洗浄ベレットについて、薬剤、ｖ４質及び残 留エタノールを測定した。このようなテストの結果は、薬剤が１１．５ｍｇ／ｍ ｌ、　　Ｗｉｌｌが１４．９ｍｇ／ｍｌ、残留アルコールが２％であった。セフ ァロスポリンの捕捉効率は７４％、最終セファロスポリン：Ｉ脂質比は０．７７ ：１であった。

見立■ユ 高比率セファロスボリン・脂Ｎ複合体の製造５０ｍ１丸底フラスコ内で、１．５ ６６ｍ１のｄＨ２０を加えること１；より、４３４ｕｌの３００ｍｇ／ｍｌセフ ァゾリンナトリウム原液を２ｍｌに希釈した（−１Ｉ剤の合計２６．２ｍｇ）、 ２ｍｌの１００％エタノールを、２．５　ｍ　ｌの２０　ｍ　ｇ　／　ＩＩＩ　 Ｉ　Ｉｌｌ　ｊｌ　（Ｄ　ＰＰＣ）原液と共に加えた（脂質の合計５０ｍｇ）、 　　空気流を使って得られた混合物を撹拌しながら、このフラスコを３７℃の循 環水浴に７！潰した。空気流は、溶剤除去中、混合物を完全に混合撹拌するのに 十分な強さに調整した。１．５〜２分後、混合物は、二相（濁った）から単相（ 透明な）に変わった。溶剤除去が続くにつれて、混合物は不透明かつゼラチン状 又はゲル状になっ力、ゲル状態は、水和の継続を示した。パージングを５分間１ １１統し、その間、極めて微かなエタノール臭が検出された。この時点で、セフ ァロスポリン：脂質；水性混合物は濃く、幾分ゼラチン状であった。混合物が液 化するまで、短時間、混合物を５１℃の循環水浴中で加熱した。これには、約１ ５秒を要した。次いで、混合物を２−１．５ｍｌのコニカルミクロフユージチュ ーブに移し、ミクロフユージで１５０００ｒｐｍにて１０〜１５分間回転させて 、セファロスポリン；脂質複合体ベレットを作った。水相をベレット上から取り 除き、　１４５ｍＭ食塩水を加えてチューブを満たした。

ベレットが完全に再懸濁するまで、チューブを短時間回転させた。

セファロスポリン：ＩＩＷｊ１１１合体を、上述のように、再遠心分離し、再懸 濁させた。得られたセファロスポリン・！ｌｌｉｌｌ白質を、上述のように、あ るいは浚で洗浄するセファロスポリン；脂質複合体の他のバッチのような他の物 質と混合して、更に２回洗浄した。複数の複合体を混合する場合は、最初の再懸 ｍ？Ｌ　　それぞれを一本のコレツクス（Ｃａｒａｘ、商標）チューブ（Ｃｏｒ ｎｔｎｇ　（ｉｌａｓｓ　Ｗｏｒｋｓ社、コーニング、ＮＹ）に移し、１０００ ０ｇＴ１０−１５分間回転させた。上述のように、ベレットから上澄みを除去し 、ベレットを食塩水中に再懸濁させ九　洗浄ベレットについて、薬剤、！！ｓＩ Ｒ及び残留エタノールを測定した。このようなテストの結果は、薬剤が１９ｍｇ ／ｍｌ、脂質が１３．９ｍｇ／ｍｌ、残留アルコールが２％であった。セファロ スポリンの捕捉効率は６０％、最終セファロスポリン；脂質比は１．４３：１で あフた。

支１医Ａ セファロスポリン：脂質−製造 ５０　ｍ　ｇ　／　ｍ　１セフアビリンナ］・リウム溶液２．５ｍｌを使用して 、機械的に撹拌しながら、ＣＨ３ｔｒｉｓ２００ｍｇを分１２ｋ。

水和させた。得られた！！！７１！液を工分間撹拌した陵、懸濁液を４℃で３時 間ロッカーに載せた。　Ｂ７ｉｉ液は、外観が均一であり、次いでｐ　Ｈ７，４ の燗酸１１衝生理食塩水（Ｍｇ２−及びＣａ”を含まず）で３ｍｌに希釈し九　 最終懸濁液は、寒天拡散法で測定した場合。

４０　ｒｎ　ｇ　／　ｍ　ｌのセファビリンを含んでいた。

寡」Ｕ孜」エ セファロスボリン：脂ｌ！複合体−製造２ｇのＣＨ８ｔ　ｒ　ｉ　ｓ及び１．． ０７５ｇのセファビリンナトリウムを秤！し、１２５ｍ１のエルシンマイヤーフ ラスコに移した。

蒸留水２０ｍ１をフラスコに加え、混合物を４°Ｃで一晩捩とぅした。この混合 物に、ｐ　Ｈ７，４の燗酸１１１ｍ生理食塩水（Ｍｇ２＃及びＣａ”を含まず） ３５ｍｌを加え、次いで２本の３０ｍ１コレツクス（商標）チューブに移し、１ ０，０００ｇで３０分間遠心分離した。上澄みをデカントし、セファロスポリン ：脂質複合体のベレットを、チューブ当り２０ｍ１の切＃Ｍ衝生理食塩水に再！ ！濁して、上記のよう仁チューブを再遠心分離した。最終ベレット容積は２２ｍ １であった。最軽薬剤濃度は、寒天拡散法で測定した場合、１７．１ｍｇ／ｍｌ であった。遇絆セファロスポリン；脂黄比は６；１であった。

支直■エ セファロスポリン・脂質権合体−製造 １度］、００ｍｇ／ｍｌのＥＰＣのＣＨＣｌ　ｒ溶液原Ｒ２０ｍ　ｌを、５００ ｍ１九底フラスコ内で、　１００％エタノールにより２００ｍ１に希釈した。Ｍ Ｎ容積が６ｍｌとなるのに十分な蒸留水に溶解したセファビリンナトリウム１． ０７５ｇを加えた。透明な黄色の単相となった。この単相を、単相が乾燥脂質／ 薬剤フィルムを呈し、エタノール臭が検出されなくなるまで、４０℃の水浴を備 え、圧力が７４０ｍｍＨＨの回転蒸発器にがけた０回転蓋発器は、３０±５分を 要した。フィルムを３０ｎｏｌの燗酸Ｉ！衛生理食塩水に再懸濁し、２本の３０ ｍＪコレックスマウス）チューブに移した。チューブを１０，０００ｇで１０分 間遠心分離した。上澄みをデカントし、ベレットをチューブ当り１０ｍ１のｇｅ ｓ、ｍｓ生理食塩水に再懸濁し、上記のように再遠心分離した。セファロスポリ ン・脂！！Ｉ複合体の最終ペレットは１２ｍ１であった。最終薬剤濃度は、寒天 拡散法で１５．７ｍｇ／ｍｌ、最終セファロスポリン脂質比は１１　：１　（Ｗ ／Ｗ）であった。

支ｍ セファロスポリン・脂質複合体−延長された血清活性マウスの血清におけるセフ ァビリン活性を、遊離又は複合薬剤の皮下又は静脈内投与後、間隔をおいて測定 した。第８図は、典型的な実験の結果を示す、最大活性は、調べた最も早い時点 （注射後半時間から１時間）において、遊離のセファビリンを投与した（いずれ の経路でも）マウスの血清に見いだされた。遊離薬剤の半減期は、静脈内及び皮 下投与共、約２０分と推定された。遊ｍａ＋剤に付いては、３時間又はそれ以降 、血清に活性は検出できなかった。未洗浄ＣＨ８−ｔｒｉｓセファビリン（投与 量の約３０％がカプセル化されている）を同等量皮下投与した動物は、注射後２ ４時間してもまだ約０．２ｕｇ／ｍｌ（最初の投与量の０゜０１％）の水準が存 在し、血清活性が延長されたことを示した。

静脈内経路で洗１９１ＩＥ　Ｐ　Ｃ複合体（投与量が１００％カプセル化されて いる）を投与したマウスも、血清活性が延長されたことを示した。２００ｍｇ／ ｋｇの投与量で、注射ｉ麦２４時間、血清水準は１０ｕｇ／ｍｌ若しくはそれ以 上であった。セファロスポリン・脂ＩＲ複合体の場合は両方とも、血清中の薬剤 の見掛は上の半減期が、４時間よりも長かった。

２００ｍｇ１ｋｇの遊離セファビリンを静脈内投与すると、注射後１時間で、肝 臓及び腎臓に活性を検出することができた（第１表）、３時間目又はそれ以降は 、活性が検出されなかった。ＥＰＣセファロスポリン、脂質複合体を投与された マウスは、注射後２４１！！間、腎臓に活性を示した。騨諜及び肝臓は、少なく とも２４時間持続する非常に高い活性を示した。

ＬｆＬｆｌ セファロスポリン、脂ｊｆ複合体−延長された血清活性１００ｍｇ／ｋｇの遊離 セファゾリンナトリウムをマウスに１回静脈内注射すると、投与後１時間で、８ 〜２０　ｕ　ｇ　／　ｍ　ｌの平均血清濃度となった（第９図）、２時間目に、 血清濃度は、約２ｕ　ｇ　／　ｍ　１に急速に下がり、投与後３時間では、検出 水準よりも低い、これに対して、同じ１００ｍｇ／ｋｇのセファゾリンを含むセ ファロスポリン・脂質複合体を投与した動物は、　１時間目に５５〜８０　ｕ　 ｇ　／　ｍ　ｌの血清濃度を示し、投与量１２時間ｇでもまだ２〜３ｕｇ／ｍｌ の水準を有していた。

１１■１ セファロスポリン；脂ｊｔ複合体 局在ブドウ球菌感染の予防 １瘍成長に及ぼす治療の影響を把握するために、注射前又は壕の種々の時期に、 　１回の遊離又は複合セファビリンの静脈内又は皮下注射をマウスに行った。第 １０口は、′１１！ｉＩｌセファビリンによる１回の投与（２００ｍｇ／ｋｇ） での治療（どちらの経路でも）では、感染の４＃間前に投与され力場合は、膿瘍 の大きさに何の影響も及ぼさないことを示している。感染１時間前の治療で、鎮 痛の大きさがわずかに小さくなり、一方、注射（＊１１時間目治療で、ｌｌ瘍の 成長が著しく低減又は阻止される。これに対して、セファロスポリン脂Ｍ複合体 セファビリンでの治！　（ＥＰＣｆｉ合体による静脈内投与又はＣＨ８，１合体 による皮下投与のいずれでも）によると、感染後１時間目に投与された場合と共 に、感染の４時間前までに投与された場合は、＆Ｉ瘍の成長が著しく防御される 。

更に研究を重ねたところ、静脈内投与された空のＥＰＣ又は皮下投与された空の ＣＨ３ｔリポソームは、膿瘍の大きさに何の影響も及ぼさず、空のＥＰＣリポソ ームに遊離の薬剤を加えた場合は、遊離の薬剤単独の場合と同様の結果となるこ とがわかった。

夷ｌコ１１」− セファロスポリン、脂ｊＩ複合体 全身ブドウ球菌感染の予防 １１１１１及びＣＨ８ｔ　ｒ　ｉ　ｓセファロスボリンニ脂質複合体セファビリ ン影響を、急性ブドウ球菌敗血症で比較した。第２表は、未治療動物の７０〜８ ０％が、感染の７２時間以内に死亡することを示している。ｇ染の１呼量前番二 、遊離又はセファロスポリン：脂質複合体で皮下に治療されたマウスは、実験の 絆り（１４日）まで生存していた。感染の４時間前に、セファロスポリン脂ｊ！ 複合体で治療すると、大部分のマウスが保護され、一方、その時に１ｆ１Ｍ薬剤 で治療しても、生存ｌ；は何の影響も及ぼさなかった。

実ＪＥｔＬｌ セファロスポリン；脂質複合体 全身サルモネラ症の治療 ７００ＣＦＵのＳ、　１田り月］を皮下接種し、治療を受けなかったマウス（１ ０のグループ）は、感染後６〜８日以内に死亡した（第１１１］）、　　接種徨 ２日目及び４日目に、皮下又は静脈内経路により遊離のセファビリンで治療した 場合は、生存は長引かなかった。ＥＰＣ複合体を含む未洗浄ステアリルアミン中 のセファビリンで皮下治療した場合は、生存が高められた。この場合、セファロ スポリン；脂質複合体製剤は、投与量の３０％がカプセル化されるように、洗浄 されなかった。

支！■ユニ 造影剤；脂質複合体−製造 ３７０ｍｇ／ｍｌでナトリウム及びメグルミン塩の形のジアドリゾエート［Ｒｅ ｎｏｇｒａｆｉｎ−７６（商ｍ＞、５ｑｕｉｂｂ社、Ｐｒ１ｎｃｅｔｏｎ、Ｎ、 Ｊ、］２２ｍを、１００ｍ１の丸底フラスコに入れた。これに、２ｍｌの無水ア ルコールを混合しながら加え、次いで、２．５ｍｌクロロホルム中の水素化ソイ ホスファチジルコリン（Ｓｏｙ　ｐｈｏｓｐｂａｔｉｄｙｌｃｂｏｌｉｎａ）　 ５０　ｍ　ｇを加えた。フラスコ内の物質を、フラスコ　を激しく渦巻かせるこ とにより混合し、エマルジョンを作った。約５〜Ｉ　Ｃ１ｒ、　ｐ　ｍの間の流 量で窒素流を用いることにより、クロロホルム有機溶剤相を除去し、フラスコを ３０℃の水浴に浸漬しながらこの物質を撹拌した。溶剤除去を１０分間続けた。

次いで、０．９％食塩水７ｍｌをフラスコに加え、渦巻かせることにより混合を 行っ九　次いで、この物質を１５ｍｃのコレマウス（商標）チューブに移し、約 １０．ＯＯＯＸｇ、２０’ＣＴ１５分間遠心分離した。上澄みを除去し、ペレッ トを０．９％食塩水１０ｍ１に懸濁させ、洗浄工程を更に２回繰り返した。得ら れた造影剤：！＋ｉ貢複合体は、５８．７ｍｇ／ｍｌのヨウ素（９４，７ｍｇ／ ｍｌのジアドリゾエート）及び２．８・１の最絆ヨウ素、ｆｆ！貿比において２ ０．８ｍｇ／ｍｌの慎脂質を含んでいることがわかった。

第１表　　　遊離もしくはＥＰＣ複合体製剤の静脈内投与後のセファビリン活性 の組織分布 Ｕ　　　■　　　よ　　　ｌ　　　工　　　烈　　　　…腎臓　　遊＄１　　４ ９±８　　　＜０．５　　＜０．５　　＜０．５　　＜０．５ＥＰＣ複合体１１ ８±１５４３±６２５±３１５±６２±１牌臓　　遊離　　＜０．５　　　＜０ ．５　　＜０．５　　＜０．５　　＜０．５ＥＰＣ複合体１２０２±１２１２４ ３±３０５１０３１±１８１５７０±９５６７±２肝臓　　遊離　　４６±１２ 　　＜０．５　　＜０．５　　＜０．５　　＜０．５ＥＰＣ複合体１７１±１２ 　２２８±３４　１４３±４８　１４９±２２６６±２２８）与えられた値は３ 〜５匹のマウスの平均値±Ｓ、Ｅ、Ｍ。

第２表　　急性ぶどう球菌性ステプティセミア（Ｓｔａｐｔｉｃａｍｉａ）にか かったマウスの生存に関する。遊離およびＣＨ３−トリス複合カプセル化セファ ビリンの効果−１時間　　２００　　　　　１００　　　　　　　９０−４時間 　　２００　　　　　　　０　　　　　　１００ａ　）　Ｓ　、　ａｕｒｅｕｓ の２Ｘ１０”ＣＦＵの腹腔的注射の１もしくは４時間前に、マウスを皮下的に処 理した。各群に１０匹のマウスがいた。

第３表　　急性ぶどう球菌性ステブティセミア（Ｓｔａｐｔｉｃａｍｉａ）にか かったマウスの生存に関する、遊離およびＣＨ３−トリス複合カプセル化セファ ビリンの効果取り込み％ 取り込み％ 第３図 鎖位置 第４図 第５図Ａ 第５図Ｂ 取り込み％ 取り込み％ 時間（時間） 第９図 時間（時間） 第１１図 感染後の日数 肝臓中の初期薬剤％ 国際調査報告 ｌｍ＆１１６１＋ＷｌＡ師−一’−’”０ＰＣＴ／Ｕ３８９１０２２２４＋ｍ− デー＋−−−＋　＾ｅｅ＋−ｂｏＡＮｏＰＣＴ１０５８９１０２２２４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．脂質および活性剤の混合物を、水性相、水混合性有機溶媒および脂質を包含 する単相性溶媒系中で、単一相となるまでであるが実質的に乾燥しない程度にま で蒸発を行なうことを包含する高比率活性剤：脂質複合体の調製方法。 ２．脂質が硬質脂質であり活性剤がセファロスポリンである請求の範囲１記載の 高比率活性剤：脂質複合体の調製方法。 ３．単一相溶媒系が約等量（Ｖ／Ｖ）の（ａ）薬剤および脂質水性相（ｂ）エタ ノールおよび（ｃ）クロロホルムであり、そして所望により更に約３０〜約３７ ℃において加圧して溶媒を蒸発することを包含する請求の範囲２記載の方法。 ４．得られたセファロスポリン：脂質複合体のセファロスポリンが少なくとも約 ３０％（Ｗ／Ｗ）および所望により少なくとも約４０％（Ｗ／Ｗ）および更に所 望により少なくとも約５０％（Ｗ／Ｗ）である、請求の範囲２記載の方法。 ５．該脂質が１つの頭部と２つの炭素鎖を含有し、該炭素鎖は飽和であって少な くとも約１６個の炭素単位の長さのもの、所望によりジバルミトイルホスファチ ジルコリンであり、および更に所望によりこのジバルミトイルホスファチジルコ リンが該複合体の約８０％（Ｗ／Ｗ）まで含有する、請求の範囲２記載の方法。 ６．セファロスポリンが、セファゾリン、セファピリン、セフアロチン、セファ クロール、セファロリジン、セフォキサゾール、セフォキシチン、セフラジン、 セファレキシン、セファログリシン、セフロキシム、セフメノキシムもしくはセ ファロニウムである請求の範囲２から５記載の方法。 ７．脂質およびセファロスポリンを含有し、所望によりこの脂質が固体脂質であ る高比率セファロスポリン：脂質複合体。 ８．セファロスポリンが少なくとも約３０％（Ｗ／Ｗ）および所望により少なく とも約４０％（Ｗ／Ｗ）および更に所望によリ少なくとも約５０％（Ｗ／Ｗ）で ある、請求の範囲７記載の複合体。９．該脂質が１つの頭部と２つの炭素鎖を含 有し、該炭素鎖は飽和であって少なくとも約１６個の炭素単位の長さのもの、所 望によりジバルミトイルホスファチジルコリンであり、および吏に所望によりこ のジバルミトイルホスファチジルコリンが該複合体の約８０％（Ｗ／Ｗ）まで含 有する、請求の範囲７もしくは８記載の複合体。 １０．セファロスポリンが、セファゾリン、セファピリン、セファロチン、セフ ァクロール、セファロリジン、セフォキサゾール、セフォキシチン、セフラジン 、セファレキシン、セファログリシン、セフロキシム、セフメノキシムもしくは セファロニウムである請求の範囲７から９記載の複合体。 １１．細菌感染予防に有効な量のセファロスポリン：脂質複合体を、人間を含め た動物に投与する工程を包含する、該動物における細菌感染予防法における使用 のための、セファロスポリン：脂質複合体の製造。 １２．複合体が高比率セファロスポリン：脂質複合体であり、脂質が硬質脂質で ある請求の範囲１１記載の方法。 １３．セファロスポリンが、セファゾリン、セファビリン、セファロチン、セフ ァクロール、セファロリジン、セフォキサゾール、セフォキシチン、セフラジン 、セファレキシン、セファログリシン、セフロキシム、セフメノキシムもしくは セファロニウムを包含する請求の範囲１１もしくは１２記載の方法。 １４．感染予防が菌血症に関するものである請求の範囲１１記載の製造方法。 １５．セファロスポリンが、セファゾリン、セファピリン、セファロチン、セフ ァクロール、セファロリジン、セフォキサゾール、セフォキシチン、セフラジン 、セファレキシン、セファログリシン、セフロキシム、セフメノキシムもしくは セファロニウムを包含する請求の範囲１４記載の方法。 １６．感染予防が、細網内細胞系を含む播種性細菌感染に対するものである請求 の範囲１１記載の方法。 １７．細菌感染予防が、細菌ミコバクテリウムスペシーズ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ ｒｉｕｍ　ｓｐ．）もしくはサルモネラスペシーズ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｓ ｐ．）に対するものである請求の範囲１１記載の方法。 １８．細菌感染予防が、骨髄炎に対するものである請求の範囲１１記載の方法。 １９．脂質およびヨウ素化造影剤を含有する高比率ヨウ素化造影剤：脂質複合体 。 ２０．該脂質が硬質脂質である請求の範囲１９記載の複合体。 ２１．造影剤が少なくとも約２：１（ヨウ素Ｗ／Ｗ）および所望により少なくと も約４：１（ヨウ素Ｗ／Ｗ）および更に所望により少なくとも約８：１（ヨウ素 Ｗ／Ｗ）である、請求の範囲１９もしくは２０記載の複合体。 ２２．該脂質が１つの頭部と２つの炭素鎖を含有し、該炭素鎖は飽和であって少 なくとも約１６個の炭素単位の長さのものであり、所望により該脂質がジパルミ トイルホスファチジルコリンでありこのものは該複合体の約２０ないし約７％（ Ｗ／Ｗ）までの少量を含有する、請求の範囲２０記載の複合体。 ２３．脂質がホスファチジルコリンである請求の範囲１９記載の複合体。 ２４．造影剤がジアトリゾエート、ジアトリゾン酸、ヨーセタム酸、ヨーダミド 、ヨードキシマート、ヨーヘキソール、ヨーパミド、ヨーパミドール、ヨーパン 酸、ヨーフェンジラート、ヨータラマート、ヨータラム酸、イポダート、メトリ ザマイドもしくはチロパネート及びそれらの塩である、請求の範囲１９から２３ 記載の複合体。 ２５．活性剤がヨウ素化造影剤である請求の範囲１記載の高比率活性剤：脂質複 合体を調製する方法。 ２６．単一相溶媒系が約等量（Ｖ／Ｖ）の（ａ）薬剤および脂質水性相（ｂ）エ タノールおよび（ｃ）クロロホルムであり、そして所望により更に約３０〜約７ ５℃において加圧して溶媒を蒸発することを包含する請求の範囲２５記載の方法 。 ２７．得られた造影剤：脂質複合体の造影剤が少なくとも約２：１（ヨウ素Ｗ／ Ｗ）および所望により少なくとも約４：１（ヨウ素Ｗ／Ｗ）および更に所望によ り少なくとも約８：１（ヨウ素Ｗ／Ｗ）である、請求の範囲２５記載の方法。 ２８．脂質が硬質脂質を包含し、所望により該脂質が１つの頭部と２つの炭素鎖 を有し、該炭素鎖は飽和であって少なくとも約１６個の炭素単位の長さのもので あり、所望により該脂質がジパルミトイルホスファチジルコリンでありこのもの は該複合体の約２０ないし約７％（Ｗ／Ｗ）までの少量を含有する、請求の範囲 ２５記載の方法。 ２９．脂質がホスファチジルコリンを含有する請求の範囲２５記載の方法。 ３０．造影剤がジアトリゾエート、ヨーセタム酸、ヨーダミド、ヨードキシマー ト、ヨーパミド、ヨーパミドール、ヨーバン酸、ヨーフェンジラート、ヨータラ マート、ヨータラム酸、イポダートカルシウム、イポダートナトリウム、メトリ ザマイドもしくはチロパネート及びそれらの塩である、請求の範囲２５から２９ 記載の方法。 ３１．Ｘ線密度増加に有効な量のヨウ素化造影剤：脂質複合体を、人間を含めた 動物に投与する工程を包含する、該動物のＸ線密度増加においての使用のための 、ヨウ素化造影剤：脂質複合体の製造方法。 ３２．該脂質が硬質脂質である請求の範囲３１記載の方法。 ３３．造影剤がジアトリゾエート、ヨーセタム酸、ヨーダミド、ヨードキシマー ト、ヨーパミド、ヨーパミドール、ヨーパン酸、ヨーフェンジラート、ヨータラ マート、ヨータラム酸、イポダートカルシウム、イポダートナトリウム、メトリ ザマイドもしくはチロパネート及びそれらの塩である、請求の範囲３１もしくは ３２記載の方法。