JPH0341783B2 - - Google Patents

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JPH0341783B2
JPH0341783B2 JP56164890A JP16489081A JPH0341783B2 JP H0341783 B2 JPH0341783 B2 JP H0341783B2 JP 56164890 A JP56164890 A JP 56164890A JP 16489081 A JP16489081 A JP 16489081A JP H0341783 B2 JPH0341783 B2 JP H0341783B2
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  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は液体試料中の粒子の分析法、特に分析
用の濃縮試料を物理的に作る必要性なしに、尿の
ような稀薄な生物学的液体試料を分析する方法に
関する。
従来の尿沈殿物の検査法は下記の段階を必要と
している。()試験管の中に尿を注入し遠心分
離機にかけて懸濁液から沈殿物を分離する。()
清浄化した懸濁液の大部分を流し出す。()残
りの液中に沈殿物を再び懸濁させる。()懸濁
液を顕微鏡スライドに移して拡げる。()スラ
イド上の懸濁液の上にカバースリツプをかぶせ
る。()スライドに顕微鏡の焦点を合わせる。
()幾つかの視野を検索して、病気の存在によ
り種々の割合で尿の沈殿物を構成する赤血球、白
血球、上皮細胞、脱落表皮、細菌、イースト菌、
粘液糸、結晶物などの存在を調べる。
液体試料が希薄であるから、()遠心分離、
()上澄流出、()再懸濁の段階が必要であ
る。これらの段階は現在すべて手で行われる。こ
れに伴う操作のため、しばしばこの方法はきたな
くて、不愉快なものになる。顕微鏡のスライド上
の沈殿物の懸濁液の拡がりが不均等となる。数多
くの沈殿物が見える場合、顕微鏡の接眼レンズを
長時間覗くのは疲れる。これらの要素はすべて不
正確さにつながる。
生物学的試料を取扱うその他の装置に、いわゆ
るクールタ・カウンタ(Coulter Counter)があ
る。このカウンタでは血球を1列にしてオリフイ
スへ通し、オリフイスにおいて電気特性が変化す
る態様により血球を検知し、計数する。しかし、
クールタ・カウンタからの情報は一種類の測定の
分析に限定される。複数要素の情報が望まれる場
合に、商業的な標準情報収集方法は映像面に細胞
を固定した顕微鏡スライドを作製し、人間または
模様認識機を使つて、顕微鏡を通してスライド上
の細胞を1個ずつ観察しながら、統計的に重要な
細胞の数を勘定させる方法である。
連続流として流れる粒子の光学的分析を行る、
他の幾つかの試みが最近なされている。たとえ
ば、1列に細胞を動かしてビジコンで細胞を拡大
させるクールタ式オリフイスが開示されている
(ジヤーナル・オブ・ヒストケミストリー・アン
ド・サイトケミストリー(Journal of
Histochemistry and Cytochemistry)、Vol.27、
329頁、1979年、キー(Key)他)。さらに顕微鏡
区域を通して1列に細胞を動かし、そこで写真を
とる装置もジヤーナル・オブ・ヒストケミストリ
ー(Journal of Histochemistry)、Vol.27、335
頁、カツケル(Kachel)他、および、フロー・
サイトケミストリー・アンド・ソーテイング、ジ
ヨンウイリー・アンド・サンズ(Flow
Cytochmistry and Sorting,John Wiley &
Sons)、1979年、第1章メイランド(Melaned)
他)。
粒子情報の定量分析のための装置および方法も
開示されている(米国特許願第146064号、1980年
5月2日出願)。
しかし上記の何れもが希薄液試料内の粒子を、
予め遠心分離、上澄排出、再懸濁により濃縮試料
とすることなしに、分析するという問題に対する
回答を教えることも示唆することもない。
本発明は、極微細な粒子を含む希薄な生物学的
液体試料から、電子点に濃縮した極微細な粒子を
表示する方法であつて、粒子と粒子とがほとんど
重なり合うことのないように、液体試料を広い区
域に分布させる段階と、各映像が区域の異なる箇
所をそれぞれ表わすように、区域の一面にわたつ
て試料の複数の光学的静止映像を形成する段階
と、光学的静止映像の各々をそれぞれ一つの電子
映像に変換する段階と、電子映像から異なる粒子
を表わす映像を合成して一つの合成電子映像を形
成する段階と、合成電子映像を処理する段階と、
処理した映像を表示する段階とを有し、処理され
た映像が電子的に濃縮された極微細な粒子を表わ
す映像であることを特徴とする。
以下に添付図面を参照しつつ本発明の詳細を記
載する。
本発明による方法は尿の如き液体試料を広い区
域に分布させること、たとえば顕微鏡のスライド
上に試料を塗布することを含む。試料の各光学静
止映像がスライドの異つた部分を表わすように複
数の映像をとる。すなわち、たとえば試料を塗布
したスライドを顕微鏡に取付け、スライドの各部
分が映像区域に来るようにスライドを動かす。各
映像はスライドの異つた部分を表わす。各光学映
像を電気映像に変換する。この複数の電子映像を
電子的に合成して一つの合成電子映像を作る。こ
の一つの合成電子映像をさらに処理する。
本発明による方法は第1図に示される装置5を
使つて実施される。本装置5は尿の如き極微細な
粒子を含む希薄な生物学的液体試料の入口12
と、出口14と、広い区域である検査区域18を
過ぎて両者の間に延在する通路16とを有する流
動室を含む本体10からなる。通路16は導管2
0のための入口を有し、導管20を介して或る容
積の塩水槽である容器22に接続される。第2図
および第3図に示されるように尿試料の入口12
は導管20の下流の通路16の中に細管24を有
し、細管24は分析すべき尿試料を入れるように
された容器26に接続される。尿試料は入口12
から出口14の方向へ流れる。
通路16が入口12から出口14へ延びるに従
い通路の断面積は漸進的に小さくなるが、同時に
通路16はずつと浅く、かつ幅広くなる。すなわ
ち、第2図および第3図に示されるように、通路
16は入口12において約5000μの幅と深さを有
し、中間点28において約500μの幅と深さを有
し、検査(映像)区域18にて100μの深さと
5000μを超える幅を有している。
検査区域18を通つて流れる液体試料は約20μ
の最大寸法を有する最大の細胞の数倍の深さを持
つているが、このような形状の流動通路によつ
て、入口12を通つて入る液体試料は検査区域1
8においてずれが最も少い安定な流路に押し込め
られ、流体試料中の粒子は該区域でその最大断面
が第2図の平面内に現われるような向きをとるこ
とが判る。この検査区域18によつて、試料を広
い区域に分布させる段階が達成できる。通路16
の流動特性は自動的にまたは静的高さを調整する
ことにより容器22,26の液体圧力を調節して
制御される。
検査区域18を流れる液体試料は粒子の最小断
面よりあまり大きくないずれが最も少い断面を持
つことが望ましい。すなわち粒子は検査区域18
を流れる液体試料に整合し、その最小断面の方向
は流れの方向に直角に延びる。ここで、「ずれが
最も少い」という語句は「速度勾配が最少」とい
う意味であり、川を浮動する丸太が勾配のある流
れの方向と整合するように、流れの中の粒子が流
れの方向と整合しようとする。
顕微鏡30は検査区域18に焦点を合わせら
れ、検査区域18はストロボライト32(米国サ
イエンテイフイツク・インスツルメント・コーポ
レーシヨン(Scientific Instrument
Corporation)、モデル 3018、2UP1.5ランプ付
きが望ましい)により下方から照明される。ライ
ト32は本体10の厚さ方向にほぼ平行な方向、
つまり、試料の流れ方向に直交する方向にある顕
微鏡30に向けて当てられる。ストロボライト3
2は1/16秒間隔で働き、顕微鏡30に一連の静止
光学映像を生ずることが望ましい。つまり、これ
によつて、試料の複数の光学的静止映像を形成す
る段階が達成される。顕微鏡30の出力はCCD
カメラ34(RCA社製モデルNo.TC1160BDが望
ましい)に焦点を合わせられる。CCDカメラ3
4は各光学映像を電子映像に変換する。CCDカ
メラ34はまた各電子映像を複数のピクセル
(pixel)に分析し、各ピクセルは各映像の1つず
つの特定箇所に対応している。つぎに複数の電子
映像(各光学映像が一つづつの電子映像に変換さ
れている)を合成して一つの合成電子映像を作製
する。これは、たとえば各映像の同一の特定箇所
に対応する全部のピクセルを集合することにより
行われる。一つの合成電子映像は見かけ上の濃縮
液体試料の映像を示すが、物理的に濃縮液体試料
を作る必要はない。さらに見かけ上の濃縮の度合
は合成する映像の数により制御される。すなわち
見かけ上の10倍の濃縮は10個の映像を合成して1
個の合成映像を作製することにより行われる。見
かけ上の濃縮度は電子的に制御されるから、本発
明の方法によれば、液体試料の見かけ上の濃縮を
表わす映像をかなり容易に変化させ得ることが明
らかである。
一つの合成電子映像はさらに電子的に処理さ
れ、デイスプレー(表示)される。その代りに、
一つの合成電子映像に合成される前に各電子映像
を電子的に処理することもできる。各電子映像ま
たは一つの合成映像の何れをも電子的に処理する
ために使用し得る処理装置は米国マサチユーセツ
ツ州ウオルサム、ハママツ・システムズ・インク
(Hamamatsu Systems,Inc.)よりImage
Analysis System(映像分析装置)モデルC−
1285として市販されているプロセツサである。し
かし第4図にもつとも詳細に図解され白黒テレビ
ジヨン・モニター38とCCDカメラ34により
覗いた主題の静止電子映像を貯蔵するフレームグ
ラバー40とを含んでいる電子プロセツサ36
に、CCDカメラ34の出力を接続することが望
ましい。フレームグラバー40はカナダのモント
リオール市、マトロクス・コーポレーシヨン
(Matrox Corporation)製のモデルFG08フレー
ムグラバーが望ましい。フレームグラバーの出力
はビデオ・リフレツシユメモリー42(マトロク
ス・コーポレーシヨン(Matrox Corporation)
製モデルRGB256)に供給され、両者とも中央処
理装置(CPU)46の多重母線44に結合され
る。中央処置装置はインテル(Intel)80/20コン
ピユータが望ましい。多重母線44はエレクトロ
ニツク・ソリユーシヨンズ・インク(Electronic
Solutions,Inc.)の48Kランドムアクセスメモリ
ー48とデータ・キユーブ・コーポレーシヨン
(Data Cube Corporation)モデルRM117の16K
デユアルポート・ランダムアクセスメモリーにも
結合されている。ビデオ・リフレツシユメモリー
42の出力はカラー・モニター52にも結合さ
れ、これは人が見るのに適したデジタル的に増強
させた個々の静止画面のビデオ映像を与えるのに
用いられる。
デユアルポート・ランドムアクセスメモリー5
0の第2の出力は多重母線54に接続される。多
重母線54はアプライド・マイクロ・デバイシー
ズ(Applied Micro Devices)の中央処理装置
56と、エレクトロニツク・ソリユーシヨンズ・
インクの48Kランドム・アクセス・メモリー58
と、アドバンスト・マイクロ・デバイシーズ
(Advanced Micro Devices)モデル8/8の如き
フロツピーデイスク・コントローラ60および2
組のシユガート(Shugart)フロツピーデイス
ク・ストーレジ62の形式をとる取外し自在のス
トーレジ(記憶装置)とに接続される。
第4図に示される装置を用いれば、一つの合成
電子映像を作るのに数多くの具体的方法が可能で
ある。
第1の方法として、尿の如き液体試料が入口1
2から入る。液体はストロボライト32により照
明され、試料の複数の光学静止映像が顕微鏡30
によりとられる。液体は半透明であり照明は下方
から行われるので、光学映像は明るい背景での暗
い粒子となる。光学映像は電子映像に変換され、
デジタル化されてメモリー48に記憶される。メ
モリー48に貯えられたデータにより各電子映像
のデジタル・データを集計して複数の電子映像の
合成、すなわち一つの合成電子映像を形成する。
上記の方法の変形として、デジタル化した映像
のデータをメモリー48に貯蔵する前に、先ず各
映像の背景データを電子的に除去する。各映像か
らの関係データを集めて、一つの合成電子映像と
して貯蔵する。
さらにもう一つの方法として、尿を前と同じく
入口12から注入する。尿はストロボライト32
により照明される。しかし、公知の暗視界照明ま
たは位相対照照明の技術を使うと、顕微鏡30に
生ずる光学映像は暗い背景に明るい粒子のものと
なる。各光学映像はCCDカメラ34により電子
映像に変換される。CCDカメラ34の性質によ
り、電子映像が読み出されない場合はカメラ内に
その電子映像を保存する。すなわち、以後の電子
映像(光学映像から変換された)はその前の電子
映像に合成される。従つて一つの合成電子映像が
CCDカメラ34において形成される。
使用者が欲する特定の仕事に応じて、第4図の
装置を用いて一つの合成電子映像をさらに処理す
るのに種々のプログラミングが用いられる。
尿の例で、従来の方法では、燐酸塩の如き化学
粒子が映像区域にあつて生物学的粒子の視界を妨
げる場合には、塩酸を添加して燐酸塩粒子を化学
的に除去する。しかし本発明の方法によれば、化
学的粒子は電子的に、すなわち映像処理技術によ
り除去される。特定の大きさ、色または形状の粒
子を視界から除去したいときは、試料をいちいち
再処理しなくても、電子的にそれが可能である。
その上、本発明の方法によれば、これまで化学的
に除去し得なかつた生物学粒子も同様に電子的に
映像から除去される。すなわち本発明により、大
幅な融通性が得られる。
本発明の方法には多くの利点があることが判
る。第1の最も大きな利点は、予め物理的に濃縮
試料を作ることなく、すなわちそれに伴う遠心分
離、上澄み除去および再懸濁の問題なしに希薄試
料の粒子の分析が可能であることである。従来技
術の再懸濁法によれば種々の粒子の重なり、また
は偏倚映像が生ずる。本発明の方法によれば、粒
子の重なりが生じ難くて、液体はより正しい粒子
の統計的な代表となり、映像の偏倚もない。次に
見かけの濃縮度を電子的に変え得ることを評価す
べきである。その上、手による操作段階がないた
め、時間節約と誤差原因の除去とが行われ、生物
学的な防護も得られる(感染性試料を最少限の人
為操作で分析することができる)。さらに試験管、
ピペツトおよび顕微鏡スライドの如き消耗品を使
用しないため経費の節約となる。最後に、映像が
電子形式であるため、化学的および生物学的粒子
を電子的に除去することを含めて映像をさらに処
理するのに数多くの映像技術を行使することもで
きる。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明の方法を実施することができる
装置の斜視図、第2図は第1図に示す本体の平面
図、第3図は第2図の装置の、線3−3が示す平
面による断面図、第4図は第1図の装置に用いら
れる電子処理装置の略式系統図である。 5……装置、10……本体、12……入口、1
4……出口、16……通路、18……検査(映
像)区域、20……導管、22……塩水槽、24
……細管、26……容器、28……中間点。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 極微細な粒子を含み静止状態にある希薄な生
    物学的液体試料から、電子的に濃縮した前記極微
    細な粒子を表示する方法であつて、 粒子と粒子とがほとんど重なり合うことのない
    ように、前記液体試料を広い区域に分布させる段
    階と、 前記区域の一面にわたつて前記試料の複数の光
    学的静止映像を形成し、該各映像が前記区域内の
    異なる箇所をそれぞれ表わすようにする段階と、 該光学的静止映像の各々をそれぞれ一つの電子
    映像に変換する段階と、 該電子映像から異なる粒子を表わす映像を合成
    して一つの合成電子映像を形成する段階と、 前記合成電子映像から無用な映像部分を除去す
    るか、又は有用な映像部分を抽出するよう前記合
    成電子映像を処理する段階と、 該処理した映像を表示する段階とを有し、該処
    理された映像が電子的に濃縮された極微細な粒子
    を表わす映像である方法。 2 特許請求の範囲第1項に記載の方法におい
    て、前記処理段階が、表示を望まない粒子の映像
    を電子的に除去する段階である方法。 3 特許請求の範囲第1項に記載の方法におい
    て、 前記合成電子映像を形成する段階が、 前記各電子映像を複数のピクセルに分断し、該
    各ピクセルを各映像の一つの特定箇所にそれぞれ
    対応させる段階と、 各映像の同一の特定箇所に対応するすべてのピ
    クセルを集合させる段階とを有する方法。 4 特許請求の範囲第1項に記載の方法におい
    て、前記合成段階がCCDカメラによつて行われ
    る方法。 5 特許請求の範囲第1項に記載の方法におい
    て、前記液体試料が尿であり、前記粒子が沈殿物
    である方法。 6 極微細な粒子を含み静止状態にある希薄な生
    物学的液体試料から、電子的に濃縮した前記極微
    細な粒子を表示する方法であつて、 粒子と粒子とがほとんど重なり合うことのない
    ように、前記液体試料を広い区域に分布させる段
    階と、 前記区域の一面にわたつて前記試料の複数の光
    学的静止映像を形成し、該各映像が前記区域内の
    異なる箇所をそれぞれ表わすようにする段階と、 該光学的静止映像の各々をそれぞれ一つの電子
    映像に変換する段階と、 前記各電子映像から無用な映像部分を除去する
    か、又は有用な映像部分を抽出するよう前記各電
    子映像を処理する段階と、 該電子映像から異なる粒子を表わす映像を合成
    して一つの合成電子映像を形成する段階と、 該一つの合成電子映像を表示する段階とを有
    し、該合成電子映像が電子的に濃縮された極微細
    な粒子を表わす映像である方法。 7 特許請求の範囲第6項に記載の方法におい
    て、前記処理段階が、表示を望まない粒子の映像
    を電子的に除去する段階である方法。 8 特許請求の範囲第6項に記載の方法におい
    て、前記合成電子映像を形成する段階が、 前記各電子映像を複数のピクセルに分断し、該
    各ピクセルを各映像の一つの特定箇所にそれぞれ
    対応させる段階と、 各映像の同一の特定箇所に対応するすべてのピ
    クセルを集合させる段階とを有する方法。 9 極微細な粒子を含む希薄な生物学的流動液体
    試料から、電子的に濃縮した前記極微細な粒子を
    表示する方法であつて、 流れの方向に前記試料を動かす段階と、 流れの方向に共に直角方向に測つて幅と厚さと
    を有し、幅が厚さの数倍である広い領域の一面
    に、粒子と粒子とがほとんど重ならないように前
    記液体試料を分布する段階と、 前記流れの方向の既定の位置において該流れの
    方向にほぼ直角の方向に向けて前記液体試料を照
    射する段階と、 前記既定の位置において、各光学的映像が前記
    試料の異なる箇所を表わすように前記試料の複数
    の光学的静止映像を形成する段階と、 該光学的静止映像の各々をそれぞれ一つの電子
    映像に変換する段階と、 該複数の電子映像から異なる粒子の映像を合成
    して一つの合成電子映像を形成する段階と、 前記一つの合成電子映像から無用な映像部分を
    除去するか、又は有用な映像部分を抽出するよう
    前記該一つの合成電子映像を処理する段階と、 該処理した映像を表示する段階とを有し、該処
    理された映像が電子的に濃縮された極微細な粒子
    を表わす映像である方法。 10 特許請求の範囲第9項に記載の方法におい
    て、前記流体試料が尿であり、前記粒子が沈殿物
    である方法。 11 特許請求の範囲第10項に記載の方法にお
    いて、前記照射段階がストロボ照射による方法。 12 極微細な粒子を含む希薄な生物学的流動液
    体試料から、電子的に濃縮した前記極微細な粒子
    を表示する方法であつて、 流れの方向に前記試料を動かす段階と、 流れの方向に共に直角方向に測つて幅と厚さと
    を有し、幅が厚さの数倍である広い領域の一面
    に、粒子と粒子とがほとんど重ならないように前
    記液体試料を分布する段階と、 前記流れの方向の既定の位置において該流れの
    方向にほぼ直角の方向に向けて前記液体試料を照
    射する段階と、 前記既定の位置において、各光学的映像が前記
    試料の異なる箇所を表わすように前記試料の複数
    の光学的静止映像を形成する段階と、 該光学的静止映像の各々をそれぞれ一つの電子
    映像に変換する手段と、 前記各電子映像部分から無用な映像部分を除去
    するか、又は有用な映像部分を抽出するように前
    記各電子映像を処理する段階と、 前記複数の電子映像から異なる粒子の映像を合
    成して一つの合成電子映像を形成する段階と、 該一つの合成電子映像を表示する段階とを有
    し、該合成電子映像が電子的に濃縮された極微細
    な粒子を表わす映像である方法。 13 特許請求の範囲第12項に記載の方法にお
    いて、前記流体試料が尿であり、前記粒子が沈殿
    物である方法。 14 特許請求の範囲第13項に記載の方法にお
    いて、前記照射段階がストロボ照射による方法。
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