JPH03294300A

JPH03294300A - アミラーゼ阻害物質及びその製造法

Info

Publication number: JPH03294300A
Application number: JP2095992A
Authority: JP
Inventors: Takayoshi Mori; 森　貴芳; Miki Tada; 多田　三樹; Mayumi Yamaguchi; 山口　真由美; Masaki Terada; 正樹寺田; Mitsumune Takatsu; 高津　光宗
Original assignee: Nissin Food Products Co Ltd
Current assignee: Nissin Food Products Co Ltd
Priority date: 1990-04-10
Filing date: 1990-04-10
Publication date: 1991-12-25
Anticipated expiration: 2013-05-20
Also published as: JP2753372B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、新規なアミラーゼ阻害物質及びその製造方法
に関する。

（従来技術及び発明が解決しようとする諜Ｍ）近年、糖
尿病、肥満症、高脂血症などの糖代謝と関連する疾患は
、増加の傾向にあり、動脈硬化、心筋梗塞などの病因と
もなっている。現在のところ、これらの疾患に対する効
果的な予防法はなく、唯一その予防法として、澱粉質な
どを制限した食事療法がなされている。しかしながら、
この食事療法では、疾患初期の予防としては、患者に苦
痛を与える結果となっている。

そこで、最近では、澱粉質の分解を抑制するアミラーゼ
阻害剤が、糖尿病や肥満症の予防剤、治療剤などとして
注目されている。このアミラーゼ阻害物質は、高等植物
、微生物など多くの起源から産生されることが知られて
いる。これらのアミラーゼ阻害物質を用いた治療剤、予
防剤が種々検討なされているが、その安全性あるいは有
効性の点で問題があり、はとんどが未だ実用化されてい
ないのが現状である。

すなわち、微生物により産生されるアミラーゼ阻害剤は
、微生物起源であるため、安全面において食品、飲料な
どに添加することは不適切である。また、実用化された
予防剤としては、食用に供されている高等植物の中でイ
ンゲン豆や小麦のアミラーゼ阻害物質を用いた肥満予防
剤が開発されているが、ヒトに対して効果がないことが
報告されており（”Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　ＥｎｇｌａｎｄＪ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　、　Ｖｏｌ、
　３０７＋　１９８２年）、食事療法にとって代わるほ
ど効果的なものではない。

一方、これらのアミラーゼ阻害剤は、消化管プロテアー
ゼに不活性化されるために、経口摂取には適さないこと
、また、その作用有効ｐＨがヒトα−アミラーゼの作用
ｐ）Ｉと異なることから体内において有効にアミラーゼ
の作用を阻害できないなどの問題がある。

また、コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）属植物にも、
アミラーゼ阻害物質が存在することが知られている。例
えば、ヒト唾液α−アミラーゼを阻害し、顕著な熱的安
定性を示すもの（“ＩｎｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　、　ｖｏｌ、　７．１９
７０年）や、哺乳類起源のα−アミラーゼを阻害し、タ
ンパク様物質であるが、ペプシン、トリプシンあるいは
キモトリプシンなどの消化管プロテアーゼにもほとんど
不活性化されないものじＩｎｄｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　、　ｖｏｌ。

１６、１９７９年）がある。

しかしながら、これらのアミラーゼ阻害物質においても
、膵臓α−アミラーゼを阻害し、消化管プロテアーゼに
対して不活性化されず経口投与が可能で、かつ調理が可
能な耐熱性があるなどの予防食に添加するためのアミラ
ーゼ阻害剤として必須の条件を満足するものは現在のと
ころ存在しない。従って、現在のところ、これらのアミ
ラーゼ阻害物質を用いた効果的な予防食、予防飲料なら
びに予防剤はない。

本発明は、上述した従来技術の課題に鑑み発明されたも
のであって、その目的とするところは、膵臓α−アミラ
ーゼを阻害し、消化管プロテアーゼに対して不活性化さ
れず、かつ耐熱性のある性質を有する新規なアミラーゼ
阻害物質及びその製造方法を提供することを目的として
いる。

（課題を解決するための手段）本発明の新規アミラーゼ阻害物質は、上述の従来技術の
課題及び目的に鑑み発明なされたものであって、その特
徴とするところは、コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）
属植物から抽出され、膵臓α−アミラーゼ及び唾液α−
アミラーゼ阻害性を有し、消化管プロテアーゼに対して
不活性化されず、かつ耐熱性を有することを特徴とする
新規アミラーゼ阻害物質である。

また、本発明のアミラーゼ阻害物質の製造方法は、コロ
カシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）属植物の塊茎を溶媒とと
もにホモジナイズし、その可溶性成分を必要によりゲル
濾過後、イオン交換カラム、疎水クロマトカラム、ゲル
濾過クロマトカラムまたはそれらの組み合わせにより、
アミラーゼ阻害物質を分離精製することを特徴とする。

本発明者等は、上述の目的に鑑み、種々の植物の中から
、所期の諸性質を満足する性質を有するアミラーゼ阻害
物質の抽出について鋭意研究した結果、コロカシア（Ｃ
ｏｌｏｃａｓｉａ）属植物から抽出した新規アミラーゼ
阻害物質が、膵臓α−アミラーゼ及び唾液α−アミラー
ゼ阻害性を有し、消化管プロテアーゼに対して不活性化
されず、かつ耐熱性を有することを見出し、本発明を完
成するに至ったものである。

（実施例）Ａ　アじ−ゼ　　　の具体的には、コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）属植物
の塊茎を溶媒とともにホモジナイズし、その可溶成分を
必要によりゲル濾過後、イオン交換カラム、疎水クロマ
トカラム、ゲル濾過クロマトカラムまたはそれらの組み
合わせにより、アミラーゼ阻害物質を分離精製すれば、
本発明の２種類の新規アミラーゼ阻害物質（以下、「Ｎ
５Ａｒ−ＩＪならびにｒＮＳＡＩ−ＩＩ　Ｊと言う。）
が得られる。

より詳細には、抽出に用いる溶媒は、含まれるアミラー
ゼ阻害物質が失活せず可溶なもの、例えば、酸、アルカ
リ溶液でも抽出可能であるが、好ましくは、低濃度の中
性塩水溶液を用いる。ゲル濾過に使用する樹脂としては
、例えばセファデックスＧ−５０（ファルマシア（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ）社製）、トヨバールＨＷ−５０（東ソ
ー■社製）、スーパーロース１２　　（ファルマシア（
Ｐｈａｒｓ＋ａｃｉａ）社製）などを用い、イオン交換
樹脂としては、例えば、ローセファロース　ファスト　
フロー（ファルマシア（Ｐｈａｒｓａｃｉａ）社製）　
、ＱＡＨ−トヨパール５５０　Ｃ（東ソー■社製）など
を用いる。また、疎水結合クロマト樹脂としては、フェ
ニル　セファロースＣＬ−４Ｂ　（ファルマシア（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ）社製）などを用いる。

そして、上記の抽出およびゲル濾過、イオン交換、疎水
結合クロマトグラフィーの方法は常法に従えばよい、ま
た、必要に応じて、他の１製方法、例えば、エタノール
などを用いた沈−分画法、又はメンブレンフィルターな
どを用（た分子量分画法を適宜付加してもよい。

サラニ、Ｎ５Ａｒ−１トＮ５ＡＩ−１１）抽出、分離端
１の具体的な方法としては、コロカシア（Ｃｏｌｏｃａ
ｉａ）属植物の塊茎を、５０　ｗＭ食塩溶液ととももホ
モジナイズし、３７℃で１時間抽出後、遠心う離により
固形成分を除去する。必要により、（の抽出液をセファ
デックスＧ−５０カラムなどのうル濾過に通した後、陰
イオン交換クロマトグラフィーを行い、次いで、疎水ま
たはゲル濾過ンロマトグラフィーを行えばＩＳＡ　！−
１およびＮ５ＡＩ−■が得られる。

コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）漠に属するサトイモ
（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ　ｅｓｃｕｌｅｎｔａ　（Ｌｉｎ
ｎ、）　５ｃｈｏｔｔ）の墳墓１．Ｏｋｇと５０　ｍ８
食塩溶液０．５ｉ７をホモジナイズし、３７゛Ｃで１時
間保温後、遠心分離により、上清を分取した。得られた
上清を分子量カット１０．０００のメンブレンフィルタ
ーを用いて１００ｄに濃縮し、５０　ｄ食塩溶液で平衡
化したセファデックスＧ−５０カラム　（ファルマシア
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製）を用いたゲル濾過クロマ
トグラフィーを行った。その溶出パターンを第１１図に
示した。

次に、アミラーゼ阻害活性を示す両分について、２０　
ｍＭグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０）で
平衡化したＱ−セファロースファストフローカラム（フ
ァルマシア（Ｐｈａｒｗａｃｉａ）社製）を用いた陰イ
オン交換クロマトグラフィーを行った。カラムからの溶
出は、０．１〜０．３Ｍの食塩を含む２０　ｍＭグリシ
ン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０）による濃度勾
配溶出法で行った。その溶出パターンを第１２図に示し
た。

さらに、アミラーゼ阻害活性を示す両分について、ＰＰ
ＬＣ（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製）を用
い５０　ｍＭ食塩溶液で平衡化したスーパーロース１２
（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製）によるゲ
ル濾過クロマトグラフィーを行った。その溶出パターン
を第１３図に示した。図中の百分ｌをＮ５ＡＩ−１、画
分２をＮＳＡ　Ｉ−■とし、それぞれの百分を蒸留水を
外液として透析後、凍結乾燥を行ったところ、Ｎ５ＡＩ
−１およびＮＳＡ　Ｉ−■の白色の場末がそれぞれ、約
１３０　Ｂ、約３０　ｔａｇが得られた。

上記実施例１で得られたＮ５ＡＩ−Ｉ及びＮ５ＡＩ−Ｉ
Ｉについてそれぞれ、理化学的性状・生理学的性質につ
いて検査した結果を下記に示す。

■　外観：　Ｎ５ＡＩ−Ｉ　Ｎ５ＡＩ−ｎともに白色粉
末■　分子量：Ｎ５ＡＩ−１１５，０００±１　、００ＯＮＳＡＩ−Ｉ
Ｉ　１４，０００±ｉ　、　ｏｏ。

本物質の分子量は、スーパーロース１２（ファルマシア
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）社製）を用いたゲル濾過法によ
り算出した。

分子量マーカーとしては、リボヌクレアーゼＡ、ミオグ
ロビン、β−ラクトグロブリンを用いた（第１図参照）
。

■　紫外線吸収スペクトル：紫外線吸収スペクトルをそれぞれ、第２図（ＮＳＡＩ−
１）及び第３図（ＮＳＡＩ−ｆｆ　）　ニ示した、とも
に２７６　ｎｔｓ付近に極大吸収、２５Ｏｎｒａ付近に
極小吸収を有し、蛋白質特有のスペクトルを示す。

■　アミノ酸組成：Ｎ５ＡＩ−１およびＮ５ＡＩ−ＩＩをそれぞれ、６Ｎ塩
酸溶液中、１１０℃で一定時間（２０〜７２時間）加水
分解後、アミノ酸自動分析機４３１Ａ　　（ベック７　
ン（Ｂｅｃｋｍａｎ）　社製）により、構成アミノ酸を
測定した。以下に、ＭＳＡＩ−１およびＮ５ＡＩ−ｆｆ
のアミノ酸組成（％）を示す。

Ｎ５ＡＩ−ｒのアミノアスパラギン酸　　　　１０．２±０．３グルタミン酸
　　　　　８．２±０．２セリン　　　　　　　１２．
１±０．５スレオニン　　　　　　８．９±０．３グリ
シンアラニンシスティンバリンメチオニンイソロイシンロイシンチロシンフェニルアラニンプロリンリジンアルギニンＮＳＡ　Ｉ−のアミアスパラギン酸グルタミン酸１３．５２．７３．５５．１１．０４．９６．８１１．３６．７１．３２．７１．３ ±０．６ ±０．２ ±０．２ ±０．５ ±０．１ ±０，２ ±０．２ ±０．３ ±０．１ ±０．１ ±０．２ ±０．１セリンスレオニングリシンアラニンシスティン１０．０８．２１３．１９．０１３．７２．７３．３ ±０．２ ±０．３ ±０．３ ±０．４ ±０．８ ±０．１ ±０．６バリン　　　　　　　５．１±０．３メチオニン　　　　　　１．１±０．２イソロイシン　
　　　　５．０±０．４ロイシン　　　　　　　６．７
±０２チロシン　　　　　　１０．３±０．５フェニルアラニ
ン　　　６．６±０．３プロリン　　　　　　　　１．
３±０．１リジン　　　　　　　　２．６±０６１アル
ギニン　　　　　　１．３±０．１■　元素分析：Ｎ５ＡＩ−Ｉ　　Ｃ：約４５．３％、Ｈ：約６．３％、
Ｎ：約１２．１％、Ｎ５ＡＩ−ＩＩ　　Ｃ：約４１．０％、Ｈ：約５．６％
、Ｎ：約１１．７％、 ■　糖含量：フェノール硫酸法により糖含量を測定した、　Ｎ５ＡＩ
−Ｉは、約６％の糖を含有する糖蛋白質である。　Ｎ５
ＡＩ−Ｉｆは、糖は検出されなかった。

■Ｈ’−ＮＭＲスペクトル：４００　ＭＨｚのＨ’−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ、
第４図（ＮＳＡＩ−１）および第５図（ＮＳＡＩ−ＩＩ
）に示した。

■ＩＲスペクトル：ＫＢｒ法によるＩＲスー°クトルをそれぞれ、第６図（
ＮＳＡＩ−Ｉ）および第７図（ＮＳＡＩ−ＩＩ）に示し
た。

■　アミラーゼに対する阻害の特異性：Ｎ５ＡＩ−１，
、Ｎ５ＡＩ−Ｉ［ともに、ヒト、う、２ト、ブタの膵臓
α−アミラーゼを阻害し、ヒト唾液α−アミラーゼを阻
害するが、微生物及び植物由来のアミラーゼは阻害しな
い。

［相］　作用至適ｐＨ：ＮＳＡ　Ｉ　−１およびＮ５ＡＩ−ＩＩのヒト唾液α−
アミラーゼに対する活性のｐ）ｌ依存性をそれぞれ、第
８図および第９図に示した。Ｎ５ＡＩ−１の作用至適ｐ
）１は、７．０〜１０．０であり、Ｎ５ＡＩ−Ｉ［では
６．０〜１０．０である。

■　熱安定性：Ｎ５ＡＩ−Ｉ、Ｎ５ＡＩ−ＩＩともに、ｐＨ７，０にお
いて、８０℃、２０分間処理をしても活性の低下は認め
られなかった。また、ｐＨ７，０において、１００℃、
１０分間の加熱処理を行うと、Ｎ５ＡＩ−Ｉでは約ｌＯ
％、Ｎ５ＡＩ−ＩＩでは約２０％活性が低下する　（第
１０図参照）。

■　プロテアーゼに対する安定性：Ｎ５ＡＩ−Ｉ、Ｎ５ＡＩ−ＩＩともに、消化管内で分泌
されるペプシン、トリプシンおよびα−キモトリプシン
を、１０倍量加えて処理をしても活性の低下は認められ
なかった。

■　生体内における効果：ラットを用いた動物実験により、Ｎ５ＡＩ−Ｉの生体内
における有効性が確認された。すなわち、体重約１５０
ｇのＳＤ系雄性ラットを２４時時間量させ、その後、煮
沸したコーンスターチ７５０　ｍｇ／ｋｇを経口投与し
た。これと同時にＮ５ＡＩ−１とＮ５ＡＩ−Ｉｆの混合
物であるＮ５ＡＩを３０ｍｇ経口投与した。投与２０分
後に、ラットｎ部下行大動脈より採血し、常法により血
糖値を測定した。その結果、ＮＳＡ　Ｉ投与群は、コー
ンスターチのみを投与した対象群と比較すると、血糖上
昇が３８％抑制された（詳細についは後述する試験例２
参照）。

次に、上記実施例１で得られたＭＳＡＩ−ＩおよびＮ５
ＡＩ−ＩＩのアミラーゼ阻害活性、生体内効果、ならび
に熱安定性を確認するために、下記の種々の試験を実施
した。

なお、アミラーゼ活性・阻害活性の測定は下記のような
方法に基づいて実施した。

ア礎−−ゼ　　′ アミラーゼ溶液１ＯＯｕＩｌに水１００ｕｌを加え、４
０℃で１０分間保温後、１重量％可溶性澱粉、５１１Ｍ
　　塩化カルシウムおよび５　ｓＭ　　塩化ナトリウム
を含有する２０ｍＭ）リス−塩酸緩衝液（ｐ！（７，２
）　３００μｌを加え、４０℃で１０分間反応させた、
その後、この反応液５００ｐｌ中の還元糖をソモジ・ネ
ルラン法により定量し、１分間に１００μｇのグルコー
スを遊離する酵素力価を１単位（１ｕ）とした。

ア々−−ゼ０．５単位／ｄ　　アミラーゼ溶液１００μｌにアミラ
ーゼ阻害物質溶液１００μｌを加え、４０℃で１０分間
保温後、１重量％可溶性澱粉、５−　塩化カルシウムお
よび５　ｍＭ　　塩化ナトリウムを含有する２０ｍＭ）
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，２）　３００μｌを加え、
４０℃で１０分間反応させた。その後、上述したアミラ
ーゼ活性測定法と同様に、反応液中の還元糖を定量し、
１単位のアミラーゼ活性を５０％阻害する阻害物質の活
性を０．５阻害単位（０，５１ｔｌ）とした。

の　　の　　じ−ゼヒト膵臓、ラット膵臓、ブタ膵臓α−アミラーゼについ
ては、上記のヒト唾液α−アミラーゼと同様な方法で阻
害活性を測定した。

Ｒｈ１ｚｏ　ｕｓ　ｎ１ｖｅ１Ｌｓ起源のグルコアミラ
ーゼ、Ａｓ　ｅｒ　１ＬＬｕｓ　ｏｒ　ｚａｅ起源のα
−アミラーゼ、およびサツマイモ起源のβ−アミラーゼ
については、上記の５　ｓＭ　　塩化カルシウムおよび
５　ｍＷ　　塩化ナトリウムを含有する２０ＩＩＭトリ
スー塩酸緩衝液（ｐＨ７，２）の代わりに、５０　ｗ＋
Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，０）を用いて測定し
た。

Ｎ５ＡＩ４およびＭＳＡＩ−ＩＩの各種アミラーゼに対
する阻害活性を上述した方法により測定した。

その結果を、蛋白１　ｗａｇ当たりの阻害活性単位（１
０／ｍｇ蛋白）として下記の第１表に示した。

この表より明らかなように、ＮＳＡ　Ｉ　−１、Ｎ５Ａ
Ｉ−ＩＩともに、ヒトのα−アミラーゼに対して高い特
異性を有することが理解できる。

なお、Ｒｈ１ｚｏ　ｕｓ　ｎ１ｖｅｕｓ起源のグルコア
ミラーゼ、Ａｓ　ｅｒ　１ｔＬｕｓ　ｏｒ　ｚａｅ起源
のα−アミラーゼ、およびサツマイモ起源のβ−アミラ
ーゼに対しては、阻害活性を示さなかった。

α−アミ−−ゼに２４時間絶食させた体重的１５０　ｇのＳＤ系雄性ラッ
トを１群４匹とし、検体として３群用意し、澱粉として
煮沸コーンスターチ、アミラーゼ阻害物質としてＮＳＡ
　Ｉ　−１とＮ５ＡＩ−ＩＩの混合物（約４：１の割合
）を用い、澱粉投与後の血糖上昇に対する抑制効果を検
討した。

第１群には水、第２群には煮沸したコーンスターチ７５
Ｑ　Ｂ／ｋｇ、第３群には煮沸したコーンスターチ７５
０−ｇ／ｋｇと上記のアミラーゼ阻害物質３０１ｇを経
口投与した。投与２０分後に、検体の腹部下行大動脈よ
り採血し、検体血清中のグルコース量（ｗｇ／１ＯＱｓ
ｉ　１　）を、ロッジｓ　（Ｒｏｃｈｅ）社製’Ｃ０Ｂ
ＡＳ　ＦＡｌ？Ａ”により測定した。その結果を、平均
血中グルコース量として下記第２表に示した。

表から明らかなように、ＮＳＡ　Ｉ投与群（第３群）は
、コーンスターチのみを投与した対象群（第２群）と比
較すると、血糖上昇が３８％抑制されている。

１」１医ＮＳＡ　Ｉ−ＩおよびＮ５ＡＩ−ＩＩの熱に対する安定
性を検討するため、２０ｗＭ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７，０）中、Ｎ５ＡＩ４蛋白濃度が３７．Ｏｕ　ｇ／ａ
ｅ　ｌ、：：なるように調製し、このＮ５ＡＩ−１溶液
を１００　”Ｃで加熱処理し、経時的にヒト唾液α−ア
ミラーゼに対する阻害活性を測定した。Ｎ５ＡＩ−１１
についても同様な方法で測定した。この結果を第１０図
に示した。

図より明らかなように、ｐＨ７，０において、１００℃
、１０分間の加熱処理を行うと、Ｎ５ＡＩ−１では約１
０％、Ｎ５ＡＩ−ｕでは約２０％活性が低下する（第１
Ｏ図参照）。

（作用・効果）本発明の新規アミラーゼ阻害物質、特に、Ｎ５ＡＩ−１
ならびにＮ５ＡＩ−■は、食後の血糖上昇抑制作用を有
し、また、安全面からも日常に食用に供されている植物
、すなわち、コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）属植物
、特にサトイモから抽出、分離精製された物質であるの
で、高い安全性を存したアミラーゼ阻害物質である。従
って、糖尿病、肥満症、高脂血症などの糖代謝機能と関
連する疾患や動脈硬化、心筋梗塞などの予防・治療に利
用することが可能である０例えば、消化管内のプロテア
ーゼに対して不活性化されないため、経口的に投与が可
能であり、錠剤、カプセルなどに成形し、予防剤・治療
剤として投与することも可能である。

さらには、本発明の新規アミラーゼ阻害物質は、優れた
耐熱性（熱安定性）を有するので、熱を加える調理も可
能であり、また、予防飲料及び予防食に添加してもその
アミラーゼ阻害物質の効能が発揮できるなど幾多の作用
効果を奏する優れた物質である。

また、本発明の新規アミラーゼ阻害物質の製造方法によ
れば、上述の如き作用効果を有するアミラーゼ阻害物質
をコロカシア（ＣｏＬｏｃａｓｌａ）属植物から容易に
抽出し分離精製することが可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、スーパーロース１２を用いｔ、−ケア１／濾
過クロマトグラフイーにおけるＮＳＡ　ｌ〜【及びＮ５
ＡＩ−ＩＩのＶｅ／Ｖｏ（Ｖｅ；溶出容積＋　Ｖｏ：ボ
イド容積）と分子量の関係を示すグラフ、第２図は、Ｎ
５ＡＩ４の紫外線吸収スペクトルを示すグラフ、第３図
は、Ｎ５ＡＩ−［の紫外線吸収スペクトルを示すグラフ
、第４図は、Ｎ５ＡＩ−ＩのＮＭＲスペクトルを示すグ
ラフ、第５図は、Ｎ５ＡＩ−ｎのＮＭＲスペクトルを示
すグラフ、第６図は、ＮＳＡ　［−ｒのＩｔ？スペクト
ルを示すグラフ、第７図は、Ｎ５ＡＩ−ＩＩの［Ｒスペ
クトルを示すグラフ、第８図は、Ｎ５ＡＩ−１のヒト唾
液α〜アミラーゼに対する活性のｐＦ４依存性を示すグ
ラフ、第９図は、Ｎ５ＡＩ−ＩＩのヒト唾液α−アミラ
ーゼに対する活性のｐＨ依存性を示すグラフ、第１Ｏ図
は、Ｎ５Ａｒ−ｒ及びＮ５ＡＩ−Ｕのｐ）Ｉ　７．０．
１００℃におけるヒトα−アミラーゼに対する活性の安
定性を示すグラフ、第１１＠は、セファッデクスＧ−５
０カラムからの溶出パターンを示すグラフ、第１２図は
、Ｑセファロースファストフローカラムからの溶出パタ
ーンを示すグラフ、第１３図は、スーパーロース１２カ
ラムからの溶出パターンを示すグラフである。１４０００１６．０００８０００分子量第１図４０８０第２図４０８０２０波長（ｎｍ）２０波長（ｎｍ）第４図第５図第６図第７図ｐＨ第８図ｐＨ１゜００時間第１０図（ｍｉｎ）フラクンヨン番号

Claims

【特許請求の範囲】

（１）コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）属植物から抽
出され、膵臓α−アミラーゼ及び唾液α−アミラーゼ阻
害性を有し、消化管プロテアーゼに対して不活性化され
ず、かつ耐熱性を有することを特徴とする新規アミラー
ゼ阻害物質。
（２）前記膵臓α−アミラーゼがヒト膵臓α−アミラー
ゼで、唾液α−アミラーゼがヒト唾液α−アミラーゼで
あることを特徴とする請求項１に記載の新規アミラーゼ
阻害物質。
（３）前記消化管プロテアーゼが、ペプシン、トリプシ
ン及びα−キモトリプシンであることを特徴とする請求
項１から請求項２のいずれか１項に記載の新規アミラー
ゼ阻害物質。
（４）前記コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）属植物が
、サトイモ（￥Ｃｏｌｏｃａｓｉａ　ｅｓｃｕｌｅｎｔ
ａ￥（Ｌｉｎｎ．）Ｓｃｈｏｔｔ）であることを特徴と
する請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の新規
アミラーゼ阻害物質。
（５）下記の理化学的性質を有することを特徴とする請
求項１から請求項４のいずれか１項に記載の新規アミラ
ーゼ阻害物質。［１］分子量：１５，０００±１，０００（ゲル濾過法
）［２］性状：蛋白質の性状［３］元素分析値：Ｃ：約４５．３％、Ｈ：約６．３％、Ｎ：約１２．１％
、［４］アミノ酸組成（％）：アスパラギン酸１０．２±０．３グルタミン酸８．２±０．２セリン１２．１±０．５スレオニン８．９±０．３グリシン１３．５±０．６アラニン２．７±０．２システイン３．５±０．２バリン５．１±０．５メチオニン１．０±０．１イソロイシン４．９±０．２ロイシン６．８±０．２チロシン１１．３±０．３フェニルアラニン６．７±０．１プロリン１．３±０．１リジン２．７±０．２アルギニン１．３±０．１［５］融点：２２０℃以上で分解［６］糖含量：約６％（フェノール硫酸法）の糖を含む
糖蛋白質
（６）下記の理化学的性質を有することを特徴とする請
求項１から請求項４のいずれか１項に記載の新規アミラ
ーゼ阻害物質。［１］分子量：１４，０００±１，０００（ゲル濾過法
）［２］性状：蛋白質の性状［３］元素分析値：Ｃ：約４１．０％、Ｈ：約５．６％、Ｎ：約１１．７％
、［４］アミノ酸組成（％）：アスパラギン酸１０．０±０．２グルタミン酸８．２±０．３セリン１３．１±０．３スレオニン９．０±０．４グリシン１３．７±０．８アラニン２．７±０．１システイン３．３±０．６バリン５．１±０．３メチオニン１．１±０．２イソロイシン５．０±０．４ロイシン６．７±０．２チロシン１０．３±０．５フェニルアラニン６．６±０．３プロリン１．３±０．１リジン２．６±０．１アルギニン１．３±０．１［５］融点：２００℃以上で分解
（７）コロカシア（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ）属植物の塊茎
を溶媒とともにホモジナイズし、その可溶性成分を必要
によりゲル濾過後、イオン交換カラム、疎水クロマトカ
ラム、ゲル濾過クロマトカラムまたはそれらの組み合わ
せにより、アミラーゼ阻害物質を分離精製することを特
徴とするアミラーゼ阻害物質の製造方法。