JPH03244696A - ２型エンドグリコシダーゼを使用する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、細菌などの微生物を単独または他の酵素およ
び／または洗剤との組み合わせての■型エンドグリコシ
ダーゼての処理によって表面から除去するための方法に
関する。

発明の背景 酵素を各種の洗剤と併用してタンパク質および／または
炭水化物からなるじみを除去することは、洗剤処方物の
技術で周知である。かかる酵素処方物は、各種のじみを
布などの軟質表面および磁器、金属などの硬質表面から
除去しようとする。かくて、例えば、トリプシン、パン
クレアチン、パパイン、プロメラインなどのプロテアー
ゼは、タンパク質じみを不定の成功度で除去するために
洗剤処方物で使用されることが報告されている。一方、
セルラーゼ、リゾチーム、アミラーゼ、グルカナーゼな
どの特異性グリコシダーゼは、成る炭水化物じみの除去
のために各種の洗剤と共に処方されている。他の洗剤処
方物は、しみ処理のためにプロテアーゼとグリコシダー
ゼとを組み合わせている。

洗剤処方物で使用されているグリコシダーゼの若干、例
えば、β−アミラーゼ、α−ガラクトシダーゼおよびβ
−ガラクトシダーゼは、１個以上の末端残基をオリゴ糖
または多糖から切断するエキソグリコシダーゼである。

他のグリコシダーゼ、例えば、セルラーゼおよびα−ア
ミラーゼは、オリゴ糖または多糖基質内の特異性内部結
合と反応性であるエンドグリコシダーゼである。かかる
エンドグリコシダーゼは、ここでＩ型エンドグリコシダ
ーゼと称する。１種以上のプロテアーゼおよび／または
グリコシダーゼ（Ｉ型エンドグリコシダーゼを含めて）
を有する洗剤の処方物は、しみ抜きを大幅に改善したが
、多くのしみ、例えば、血腫、糞便および体の汚れしみ
は、しばしば、処理後に残留しみを残す。

コンタクトレンズクリーニングの技術においては、同様
の酵素／洗剤処方物は、硬質および軟質コンタクトレン
ズをクリーニングし且つ滅菌するために使用されている
。多くの場合には、これらの処方物は、コンタクトレン
ズの表面上に形成し且つかかるレンズに付着するために
緑膿菌ＣＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓ
ａ）　、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ　ｅｐｉｄｅｒＩＩｌｉｄｉｓ）などの各種の目の病
原体によって使用されているバイオフィルムを分解する
ために使用されている。例えば、Ｊ。

Ａ、デユラン等（１９８７）　、Ａｒｃｈ、　Ｏｐｈｔ
ｈａｌｍｏｌ。

１０５　１０６−１０９；Ｇ、Ａ、　　スターン等（１
９８７）　、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、９４．　１
１５−１１９（シュードモナス付着を抑制するためにム
シン被覆コンタクトレンズをパンクレアチン、パパイン
、トリプシン、ノイラミニダーゼなどの各種の酵素で処
理ことを報告）；およびＭ、Ｍ、スルチャー等（１９８
７）　、　Ａｒｃｈ、　Ｏｐｈｔｈａｌｇｏｌ。

１０５．１１０−１１５参照。

微生物付着用バイオフィルムの使用は、コンタクトレン
ズには限定されない。かくて、ストレプトコッカス・ミ
ュータンズ（ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓＩＩＩｕｔａ
ｎｓ）は、歯エナメル質に付着するために細胞外多糖類
を使用することを報告している。ＥＰＯ刊行物第０１９
５６７２号明細書は、歯のエナメル質に付着するために
ストレプトコッカス◆ミュータンズによって使用される
細胞外多糖類を切断するためにα−１，３−グルカナー
ゼまたはα−１，６−グルカナーゼを使用することを報
告している。

ガラス表面に付着された細胞に対する成る酵素の効果も
、Ａ、ダニールソン等（１９７７）。

Ｂｏｔａｎｊｃａ　Ｍａｒｊｎａ　、　　２０．　１３
−１７に報告されている。そこに報告のように、海水か
ら単離されたシュードモナス種は、ガラススライドに付
着した。その後、スライドは、プロナーゼ、トリプシン
、α−アミラーゼ（Ｉ型エンドグリコシダーゼ）、また
はリゾチーム（またＩ型エンドグリコンダーゼ）で処理
した。この報告においては、タンパク分解酵素プロナー
ゼおよびトリプシンでの処理は、付着された細菌の個体
群の一部分の放出を生しる一方、細胞分解用酵素リゾチ
ームは、タンパク分解酵素と比較して減少された活性を
示した。

α−アミラーセは、全く効果を有してい・ないと報告さ
れた。微生物のコンタクトレンズ、歯エナメル質および
ガラス表面への結合に加えて、多くの他の表面は、微生
物結合を受けやすい。例えば、Ｔ、Ｊ、７り−等（１９
８４）　、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　　１９．　９９１−９１
４　（心臓ペスメーカーリートおよびパワーバックへの
細菌結ｇ＞　　；Ｎ、　　Ｂ、フレイマー等（１９７８
）　、　ＡｃｔａＰａｔｈ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　
５ｃａｎｄ、　５ｅｃｔｂ、、　８６　５３５７（微生
物のマクロファージへの結合）；およびミレルマン等（
１９８２）　、　Ｔｏｋａｉ　Ｊ　Ｅｘｐ、Ｃｌ１ｎ。

Ｍｃｄ、、　７．　７７−１８３　（哺乳動物粘膜表面
への微生物付８）磐照。各種の機構は、細菌などの微生
物の無生物固体表面への付着を説明するために提案され
ている。例えば、Ｍ、フレッチャ（１９８７）　、　Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｌｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　　
４１３３−１３６、およびＪ、　　Ｅ、ダドリッジ等（
１９８３）　、　Ｆａｃｔｏｒｓ　Ａｆｆ’ｅｃｔｉｎ
ｇ　ｔｈｅ　ＡｄｈｅｓｉｏｎｏｒＢａｃｔｅｒｉａ　
ｔｏ　５ｕｒｆａｃｅｓ　ｉｎ　ＭｉｃｒｏｂｉａｌＣ
ｏｒｒｏｓｉｏｎ　、グルコ・プリンティング・カンパ
ニー・リミテッド、ｐｐ、２８−３５参照。これらの文
献は各種の表面への微生物付着およびかかる結合に包含
されることがある因子を諭しているが、かかる表面上の
微生物増殖の制御またはそれらからの除去を諭していな
い。

ここで使用する■型エンドグリコンダーゼは、糖タンパ
ク質で見出された特異性内部グリコシド結合を切断する
ことができるエンドグリコシダーゼのカテゴリーである
。これらのエンドグリコシダーゼは、糖タンパク質中の
反応性グリコシド結合の位置に応じて糖タンパク質から
炭水化物部分のすべてまたは一部分を切断する。例とし
ては、エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（
エンド−Ｄ１エンド−Ｈ１エンド−Ｌ１エンドＣＩ、エ
ンド−Ｃ■、エンド−Ｆ−ＧａＩ型およびエンド−Ｆ）
、エンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼおよ
びエンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼか挙げらている。

例えば、Ａ、Ｌ。

タレ〉チノ等（１９８５）　、　Ｂｉｏｃｈｅｎ＋　、
　　２４゜４６６５−４６７１・Ｍ、アラカワ等（１９
７４）Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、７６、　３０７−３１
７　；Ｔ、　Ｈ。

プルマー等（１９８４）　、　Ｊ、　ＢｉｏｃｈｅＩｌ
ｌ、　　２５９゜１、０７００−１０７０４．Ａ、Ｌ、
　タレンチノ等（］　９７５　）　、　Ｂｉｏｃｈｅｍ
、　ａｎｄ　Ｂｊｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｍｍ、、６７．４５５−４６２　；およびＲ，Ｂ、
　　）Ｊレブル等（Ｉ　Ｑ　８４）　、　Ａｎａｌ、　
Ｂｊｏｃｈｅｍ、。

１４１　５１５−５２２；およびＪ、　Ｇ、　　ビーレ
イによる「糖タンパク質およσプロテオグリカン技術Ｊ
　　（１９８５）　、第６章、ｐｐ、１５３３００（エ
ルスビール、アムステルダム、ニューヨーク、オツクス
フォート）参照。糖タンパク質の内部グリコシド結合に
対する特異性を有することに加えて、少むくとも１種の
エンドグリコシダーゼ（エンド−，５−Ｎ−アセチルグ
ルコサミニダセＨ）は、脂質結合オリゴ糖類の切断を生
ずる特異性も実証し［Ｒ，Ｊ、チャリフオア等（１９８
３）、＾ｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｌｏｃｈｅｍ、　ａ
ｎｄＢｊｏｐｈｙｓ、、　２２９．　３８６−３９４）
且つオリゴ糖類および糖タンパク質中のジ−Ｎ−アセチ
ルキトビオース結合の切断を生ずる特異性も実証してい
ると報告されている（Ａ、　　Ｌ、　　タレンチノ等（
１９７４）　、　Ｊ、　Ｂｊｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２
４９．８１１８１７〕。

かかる■型エンドグリコシダーゼは、一般に、主として
分析目的、例えば、特異性糖タンパク質のタンペク質ま
たは炭水化物配列および／または構造および機能の測定
に使用されている。例えば、Ｐ、ヒシー等（１９８２）
　、　Ｊ、　Ｂｉｏｌｃｈｅｍ、。

２５８．２５５５−２５６１、およびＲ，ゲイヤー等（
１９８４）　、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、
　１４３゜５３１−５３９参照。最近の報告においては
、■型エンドグリコシダーゼは、リーシュマニア・メキ
シカーナ・アマシネンシス（Ｌｅｊｓｈｎ＋ａｎｉａｗ
ｅｘｉｃａｎａ　ａｍａｚｏｎｅｎｓｉｓ）からの糖タ
ンパク質抗原を分析するために使用されると報告された
。チン・ジエン・チャング等（１９８６）　、Ｍｏｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ　　１８．１９
７−２１０．この糖タンパク質抗原は、先ず、免疫ビー
ズに免疫学的に結合した。免疫学的に結合された糖タン
パク質を分析量のエンド−Ｈと反応させた後、免疫ビー
ズは、洗浄し、ポリアクリルアミドゲル電気体動用製剤
中のＳＤ３　１％を含有する緩衝液中で沸騰した。この
分析は、免疫学的に結合された糖タンパク質抗原からの
炭水化物の切断に起因する分子量の減少を示した。

しかしながら、■型エンドグリコシダーゼは、糖タンパ
ク質および糖脂質を含めた物質を布帛、コンタクトレン
ズ、金属、セラミックス、細胞、組織などの物質の表面
から除去するために使用されていない。それらは、懸濁
酸中またはかかる表面上での微生物増殖を制御するため
にも使用されていない。

グリコンダーゼは、各種の物質の除去のために他の酵素
と併用されている。β−グリコシダーゼは、アンダーソ
ン等（１９６４）　、Ｂｉｏｃｈｅａ＋。

Ｊ、、９０．３０に炭水化物代謝性酵素として記載され
ている。ノイラミニダーゼ（Ｎ−アセチルノイラミニエ
ートグリコヒドロラーゼ）抑制剤は、コーワン等（１９
７９）　、　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　　８゜１７
；およびハスケル等（１９７０）　、　Ｊ、　Ｍｅｄ。

Ｃｈｅｗ、、　１３．４８において可能な抗ウイルス抗
菌剤として検討されている。デキストラナーゼは、チャ
イエット等（１９７０）、＾ｐｐ１．　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、。

２０．４２１においてイソマルトース残基に対する細菌
多糖デキストラン（α〜１．６−グルカン）の加水分解
を触媒すると記載されている。リゾチーム（ムラミダー
ゼ）は、チップマン等（１９６９）　、　５ｃｅｉｎｃ
ｅ　、　　１６５．４５４およびモンターグ（１９６４
）　、　Ｂｉｏｃｎｅｍ、　Ｂｌｏｐｈｙｓ。

Ａｃｔａ、、８６，５８８において各種の微生物のムコ
多糖細胞壁構造中のグリコシド結合を加水分解すると記
載されている。最後に、Ｄ−グルコサミン誘導体による
リゾチームの抑制は、ノイベルガー等（１９６７）　、
　Ｎａｔｕｒｅ、　　２１５．　５２４に記載されてい
る。

しかしながら、■型エンドグリコシダーゼ、例えば、エ
ンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＨＳＤ、Ｆ
および／またはＰＮＧａｓｅ　　Ｆは、従来、抗菌組成
物を調製するために抗菌剤と組み合わされていない。

前記文献は、本件の出願日前の開示のためのみに与えら
れ且つかかる文献が従来技術であることまたは本発明者
等が先行発明または先願に基づく優先権によってかかる
開示に先んじるために権利を与えるのではないという承
認とは解釈すべきではない。

発明の！要 本発明の目的は、布帛、コンタクトレンズ、金属、セラ
ミックス、細胞、組織などの物質の表面からの細菌など
の微生物の除去を容易にするために■型エンドグリコシ
ダーゼを単独または他の酵素、洗剤、界面活性剤および
／またはジスルフィド切断試薬との組み合わせて利用す
る方法を提供することにある。

この目的によれば、本発明は、微生物が結合された表面
から微生物の少なくとも一部分を放出する方法を包含す
る。微生物は、一部分、■型エンドグリコシダーゼと反
応性の結合によって表面に結合されている。方法は、こ
の結合を■型エンドグリコシダーゼで切断して、微生物
の少なくとも一部分を表面から放出するからなる。第二
酵素、洗剤および／または界面活性剤は、表面から微生
物の切断部分を除去するために本性との組み合わせて使
用してもよい。

前記方法においては、ジスルフィド切断試薬は、微生物
と関連づけられたタンパク質を変性することによって■
型エンドグリコシダーゼまたは第二酵素による切断また
は洗剤および／または界面活性剤による除去を容易にす
るために使用してもよい。

発明の詳細な説明 ■型エンドグリコシダーゼおよびかかるエンドグリコシ
ダーゼを使用した処方物は、■型エンドグリコシダーゼ
と反応性の物質を表面から放出しｆｌつ／または除去す
るために本発明の方法で使用される。この反応性の機構
は、確実には既知ではない。若干の場合には、かかる物
質は、■型エンドグリコシダーゼ用の既知の切断部位で
あるグリコント結合またはかかる切断部位に厳密に関連
される結合を有すると信じられるグリコシドまたはグリ
コシド含有物質である。

ここで使用する「■型エンドグリコシダーゼ」は、糖タ
ンパク質のタンパク質単位と炭水化物単位との接合点ま
たはその付近の結合を切断することができる酵素である
。好ましくは、かかる■型エンドグリコンダーゼは、タ
ンパク質−炭水化物単位接合点の約３個のグリコシド結
合（タンパク質−炭水化物単位接合点からなるグリコシ
ド結合を含めて）内の少なくとも１個のグリコシド結合
を切断することができる。最も好ましくは、かかるグリ
コンド結合は、タンパク質−炭水化物単位接合点の約２
個のグリコシド結合内にある（第１図、第２図および第
３図参照）。

また、■型エンドグリコシダーゼは、Ｎ−および〇−結
合糖タンパク質の既知のコア構造の場合には第１図で示
す特定のグリコシド結合に対する特異性によって定義さ
れる。これらは、アミノ酸セリン、トレオニンまたはア
スパラギンと第一炭水化物残基とのグリコシド結合およ
び少なくとも第一、第二および第三炭水化物残基間のグ
リコシド結合に対応する。このコア構造は既知のコア構
造に存在する特異性グリコシド結合によって以下に詳述
するであろうが、かかる特異性結合は、■型エンドグリ
コシダーゼのこの定義を限定するものとは解釈すべきで
はない。従って、これらのアミノ酸と炭水化物残基との
間のすべての可能なグリコシド結合は、■型エンドグリ
コシダーゼを同定するために使用するＮ−および〇−結
合糖タンパク質のコア構造を規定する。

■型エンドグリコシダーゼは、糖タンパク質コア構造の
現在の知識およびかかるコア構造に対する既知のエンド
グリコシダーゼの特異性によっては限定されない。第１
図中のコア構造と第２図中の■型エンドグリコシダーゼ
の場合の既知の基質との比較は、第１図中のコア構造中
の可能な切断部位の各々の場合の■型エンドグリコシダ
ーゼが、存在するならば、まだ同定されていないことを
示す。更に、また同定されていない他のコア構造も、存
在することかある。かかるまた未知のコア構造中の結合
と反応性のエンドグリコシダーゼも、■型エンドグリコ
シダーゼである。従って、■型エンドグリコシダーゼを
規定する糖タンパク質中のグリコシド結合は、糖タンパ
ク質のタンパク質単位に最も近い最初の３個のグリコン
ド結合内に配置されたものには限定されないが、コア構
造中のより離れたグリコンド結合、例えば、同定される
コア構造に応してタンパク質単位から第四または第１ｉ
グリコシド結合に拡張してもよい。

糖タンパク質のコア構造に対する特異性は、■型エシト
グリコシダーセを■型エンドグリコシダーセと区別する
■型エンドグリコシダーゼの好都合な定義を与える。Ｉ
型エンドグリコシダーゼは、オリゴ糖類または多糖類中
の特異性結合を切断するが、一般に■型エンドグリコシ
ダーゼを規定する糖タンパク質中のコア構造グリコシド
結合と反応性ではない。Ｉ型エンドグリコシダーゼおよ
びＩ型エンドグリコシダーゼが反応性である結合の例を
表１に示す。

■型エンドグリコシダーゼを規定し且つ好ましい■型エ
ンドグリコシダーゼを同定する糖タンパク質中の特異性
グリコシド結合を第２図に示す。

切断部位は、垂直の矢印によって同定される。第２図の
タンパク質アミノ酸、炭水化物残基および切断部位の一
般的提示を第３図に示す。わかるように、■型エンドグ
リコシダーゼは、好ましくは、Ｎ−または〇−結合糖タ
ンパク質中の第一、第二または第三グリコシド結合を切
断する。これらの結合は、それぞれタンパク質単位中の
アスパラギン、セリンまたはトレオニンと第一炭水化物
残基との間のグリコシド結合（１）、炭水化物残基１．
２間のグリコシド結合（２）および炭水化物残基２．３
間のグリコシド結合（３）からなる。この特異性は、主
として糖タンパク質の炭水化物配列によって規定され、
特異性および反応性は若干程度糖タンパク質のタンパク
質単位によって影響される。かくて、グリコンド結合２
および３（炭水化物残基間のグリコシド結合のみからな
る）に関しては、■型エンドグリコシダーゼは、糖タン
パク質のタンパク質単位と炭水化物単位との接合点から
多分全く離れた糖タンパク質の他の領域に配置された同
一または同様のグリコシド結合と反応性であってもよい
。

前記定義の特定の糖タンパク質への適用は、実例となる
。ウシチログロブリンは、エンド−β−Ｎ−アセチルグ
ルコサミニダーゼ−Ｈ（エンド−Ｈ）、α−マンノシダ
ーゼおよびβ−マンノシダーゼを使用して分析した。Ａ
、　　Ｌ、　　トレンチノ等（１９７３）Ｊ、Ｂｉｏｌ
、Ｃｈｅａｐ、、２１８，５５４７゜エンド−Ｈは、２
つのＮ−アセチルＤ−グルコサミン間のグリコシド結合
を加水分解した（それらの一方はチログロブリンのタン
パク質単位中のアスパラギンにＮ−結合した）。エンド
−Ｈでの処理時に放出されたチログロブリンのオリゴ糖
または炭水化物部分も、α−およびβ−マンノシダーゼ
で処理した。これらの酵素のいずれも第１図、第２図ま
たは第３図に示すものに対応する基質に対して特異性を
有していないので、■型エンドグリコシダーゼではなく
且つエキソグリコンダーゼまたはＩ型エンドグリコシダ
ーゼのいずれかと特徴づけることができる。エンド−Ｈ
の特異性は、第２図でエンド−Ｈの場合に示したものと
同じであり、それゆえ、エンド−Ｈは、■型エンドグリ
コシダーゼである。このことは、勿論、自明な応用であ
る。しかし、この特異性または第１図、第２図または第
３図中の他の特異性の１以上も実証する新しいエンドグ
リコシダーゼ（例えば、エンド−Ｘ）が発見されるなら
ば、そのエンド−Ｘも、■型エンドグリコシダーゼであ
ろう。

しかしながら、糖タンパク質に対する特異性をベースと
する■型エンドグリコシダーセのこの定義は、物質を表
面から放出し且つ／または除去するために■型エンドグ
リコシダーゼによって利用される機構に対する限定とは
解釈すべきではない。

若干の場合には、■型エンドグリコシダーゼは、グリコ
シド中のグリコシド結合と反応させることによってグリ
コシドの少なくとも一部分を表面から切断することが仮
定されるであろうが、本発明は、かかる切断には限定さ
れない。むしろ、■型エンドグリコシダーゼの作用は、
■型エンドグリコシダーゼと反応性の物質の少なくとも
一部分を表面から切断する能力によって機能的に定義さ
れる。

ここで使用する「エンドグリコシダーゼ」なる用語は、
Ｉ型および■型エンドグリコシダーゼからなる。

ここで使用する「グリコシド」は、グリコシド結合を通
して「アグリコン部分」に共有結合された１種以上の「
炭水化物部分」を有する重合体を意味する。グリコンド
のこの定義は、加水分解時に糖およびアグリコン（アグ
リコンはかかる加水分解から生ずる非糖化合物である）
を生成する化合物を意味するグリコシドの普通の定義に
由来する。ここで使用するグリコシドは、■型エンドグ
リコンダーゼによって切断する時にアグリコンおよびオ
リゴ糖または多糖炭水化物部分を生ずる。

しかしながら、■型エンドグリコシダーゼはグリコシド
を加水分解して■型エンドグリコシダーゼの切断部位に
応して１個以上の糖残基を含有するアグリコン部分を生
ずることがあるので、アグリコン単位は、非糖化合物に
は限定されない。更に、アグリコン部分は、架橋ペプチ
ドが炭水化物のマトリックスに結合された状態で見出さ
れることがあるペプチドグリカンの場合のように全く複
雑であることがある。かくて、グリコシドとしては、■
型エンドグリコシダーゼでの処理時に炭水化物部分およ
びアグリコン部分（炭水化物部分およびアグリコン部分
は■型エンドグリコシダーゼの切断部位によって規定さ
れる）を生ずる糖タンパク質、糖脂質、ペプチドグリカ
ンなどが挙げられる。

グリコンドのこの定義は、下記議論から明らかであろう
。

ここで使用する「糖タンパク質」は、ペプチドまたはタ
ンパク質に共有結合された１種以上のオリゴ糖または多
糖を有するグリコシドを意味する。

オリゴ糖および多糖は、時々、ここで「炭水化物単位」
と称する。しかしながら、かかる炭水化物単位は、グリ
コシドの「炭水化物部分」と異なっていてもよい。第４
図に示すように、炭水化物単位は、第二種類の分子、例
えば、糖タンパク質におけるようなタンパク質またはペ
プチド、または糖脂質におけるような脂質に結合された
全オリゴ糖または多糖からなる。Ｕ型エンドグリコシダ
ーセが、例えば、タンパク質との接合点における炭水化
物単位を切断するならば、炭水化物単位は、グリコント
の炭水化物と同義である。しかしながら、■型エンドグ
リコシダーゼが炭水化物単位内のグリコシド結合におけ
る炭水化物単位を切断す乙ならば、かかる切断によって
生成するグリコシドの炭水化物部分は、全炭水化物単位
よりも少ないであろう。この差は、矢印によって示す■
型工□トグリコンダーゼ切断部位の場合に第４図に示す
。

糖タンパク質の炭水化物単位は、１〜１０個の炭水化物
（糖）残基を含有するオリゴ糖類または通常１０〜２５
個の炭水化物残基を含有する短い多糖類であってもよい
。多くの糖タンパク質は、高等生物、例えば、真核生物
、例えば、酵母および踊乳動物細胞によって産生ずる。

炭水化物単位と糖タンパク質のペプチド単位またはタン
パク質単位との間の結合は、タンパク質単位のアミノ酸
側鎖と炭水化物単位の第一残基上のアノマー炭素との縮
合反応から生ずるグリコシド結合である。

哺乳動物糖タンパク質中のかかるグリコシド結合は、Ｎ
−グリコンド結合（アスパラギンのアミド窒素に結合さ
れた炭水化物）またはＯ−グリコシド結合（セリンまた
はトレオニンのヒドロキン酸素に結合された炭水化物）
のいずれかである。

炭水化物単位（オリゴ糖類または多糖類）の炭水化物残
基（単糖類）は、多くの異なる方法で一緒に接合しても
よい。かくて、かかる炭水化物単位は、非分枝、線状構
造であってもよく、または複雑な分枝構造であってもよ
い。しかしながら、一般に、炭水化物単位中の炭水化物
残基の各々は、１つの炭水化物残基のアノマー炭素が別
の炭水化物残基中のヒドロキン酸素と縮合したグリコシ
ド結合を介して結合される。かかるグリコシド結合は、
アノマー炭素の配置に応じてαまたはβのいずれてあっ
てもよい。１つの残基のアノマー炭素は、別の炭水化物
残基中のヒドロキシル炭素のいずれかと結合してもよい
。かくて、多くの糖タンパク質の複雑さは、かかる分子
の炭水化物単位に見出される多くの異なるグリコシド結
合に由来する。

多くの膜糖タパク質は、アスパラギン結合炭水化物単位
（Ｎ−グリコシド結合を介してペプチド中のアスパラギ
ンに結合された炭水化物単位）を担持する。かかるアス
パラギン結合筒タンパク質の構造は、全く複雑であるこ
とがある。例えば、シャチテル（１９８４）　Ｃ１１ｎ
ｉｃａｌ　ＢＩｏｃｈｅｔｘＩｓｔｒｙ１７．３−１４
参照。各種の源（例えば、赤血球血漿膜粧タンパク質、
ウィルスエンベロープ糖タンパク質）からのこれらのア
スパラギン結合膜状糖タンパク質の多くの構造並びに非
膜状可溶性糖タンパク質の構造は、２種の糖タンパク質
が多くの構造上の特徴を共有することを示す。３で同定
。

かかるアスパラギン結合筒タンパク質の普通のコア構造
を第１図および第４図に示す。

（ＧｌｃＮＡＣはＮ−アセチルＤ−グルコサミンであり
、Ｍａｎはマンノースである）。Ｃ１−６、Ｃ１−３お
よびβ１−４の呼称は、各種の炭水化物残基間のグリコ
シド結合の種類を説明する。このコア結合は、コアに結
合された多数の炭水化物残基のいずれかを有する多数の
炭水化物の基準を構成する。５で同定。

〇−結合糖タンパク質は、糖タンパク質のタンパク質単
位かセリンまたはトレオニンのいずれかのヒドロキシル
基を通して炭水化物単位にカップリングされたコア構造
を含む。このコア構造の普通の特徴は、セリンまたはト
レオニンに結合されたＮ−アセチルＤ−ガラクトサミン （Ｇ　ａ　１．ＮＡ　ｃ　）の存在である。かかる糖タ
ンパク質の他の詳細を第１図に示す（ＮｅｕＡｃはＮ−
アセチルノイラミン酸であり、ＧａＩはガラクトースで
あり、Ｌ−ＦｕｃはＬ−フコースである）。ＧａＩが第
二炭水化物残基である時には、Ｇａ１ＮＡｃとＧａＩと
の間のグリコシド結合は、通常、β１−３である。Ｎ−
および〇−結合糖タンパク質を含めた糖タンパク質の構
造生合成および機能のレビューに関しては、Ｅ、　Ｇ、
ベルガー等（１９ｇ２）　ＥｘｐｅｒｌＩＩｅｎｔｌａ
、　３８．１２２９−１２５８参照。

下等生物、例えば、原核生物、例えば、細菌大腸菌、シ
ュードモナス種、バチルス種などは、糖タンパク質より
もむしろペプチドグリカンを産生する。ペプチドグリカ
ンは、細菌細胞壁に見出され且つ典型的には交互のＮ−
アセチルグルコサミンとＮ−アセチルムラミン酸との多
糖主鎖を有する。ペプチド側鎖は、時々、Ｎ−アセチル
ムラミン酸残基と関連づけられ、架橋ペプチドブリッジ
はしばしばペプチド側鎖間に介在されている。ダラム陽
性菌の細胞壁は、典型的には、ペプチドグリカン約１０
％を含む一方、ダラム陰性菌の細胞壁は、典型的にはペ
プチドグリカン含量的５０％を有する。

しかしながら、ペプチドグリカンは、少なくとも糖タン
パク質中の特異性グリコシド結合が■型エンドグリコシ
ダーゼの種類を定義するために使用される程度には、糖
タンパク質ではない。かくて、エンド−Ｈは、Ｎ−結合
オリゴ糖類を含有する若干の糖タンパク質で見出される
２個のＮ−アセチルグルコサミン糖残基間のグリコシド
結合を切断するので、■型エンドグリコシダーゼである
。

第４図参照。しかしながら、エンド−Ｈは、布見本など
の表面からの糞便の除去を容易にすることができるので
、ペプチドグリカンとのまだ不確定の反応性も有するこ
とがある。かかる糞便は、腸内細菌と関連づけられたペ
プチドグリカンを含有することが既知である。リゾチー
ムは、ペプチドグリカンと反応性である酵素である。し
かしながら、鶏卵白リゾチーム、Ｔ４リゾチーム、ムタ
ノリシンなどのりゾチーム〔グツドマン等（１９８１）
　、　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　　１４６．　７５
５）は、■型エンドグリコシダーゼではない。このこと
は、それらか■型エンドグリコシダーゼを定義するため
に使用するＮ−および〇−結合糖タンパク質て見出され
る独特のグリコシド結合との実質的な反応性を有してい
ないからである。しかしながら、それらは、ペプチドグ
リカンと反応性であって、結合ペプチド側鎖を含有する
Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＮ−アセチルムラミン
酸の三糖類を生成する。そのままで、リゾチームは、よ
り適当には、■型エンドグリコシダーゼと特徴づけられ
る。かくて、リゾチームおよびエンド−Ｈがペプチドグ
リカンとの反応性においてオーバーラツプを有すること
があるとしても、■型エンドグリコシダーセを規定する
糖タンパク質中のグリコンド結合に対するエンド−Ｈの
特異性およびグリコンド結合との反応性のりゾチームの
実質的欠如に関しては大部分相互に排他的である。

ここで使用する「グリコシド含有物質」または「糖タン
パク質含有物質」は、グリコシドまたは糖タンパク質単
独または別の成分と組み合わされたグリコシドまたは糖
タンパク質である。かくて、グリコンド含有物質として
は、グリコシド、例えば、糖タンパク質酵素、例えば、
アルカリ性ホスファターゼ、プロメライン、カルボキシ
ペブチダセーＹ；糖タンパク質ホルモン、例えば、絨毛
性性腺刺激ホルモン、エリトロポイエチン；レシチン、
例えば、ジャガイモおよび大豆に由来するもの：血清糖
タンパク質、例えば、ＩｇＧ免疫グロブリン、チログロ
ブリン、プロトロンビンなどおよび雑多な糖タンパク質
、例えば、ヘモグロビンおよびインターフェロン；およ
び複雑な炭水化物か挙げられる。別の成分と組み合わさ
れるグリコシドの例としては、膜成分からなる糖タンパ
ク質、例えば、ヒトの赤血球によって含有されるグリコ
ホリン、インフルエンザウィルスによって含有される赤
血球凝集素、ウシ網膜に含有されるロドプシン、および
繊維芽細胞によって含有されるコラーゲンが挙げられる
。更に他のグリコシド含有物質としては、ウィルスエン
ベロープ糖タンパク質および腸内細胞と関連づけられる
ペプチドグリカンを一部分含有する糞便が挙げられる。

かくて、ウィルス、繊維芽細胞、糞便などは、グリコシ
ド含有物質とみなされる。

ここで使用する「微生物」　（時々グリコシド含有微生
物と称する）は、微生物が結合された物質の表面から■
型エンドグリコシダーゼによって切断することができる
ものである。例としては、糞便で見出される腸内細菌お
よびコンタクトレンズを通常汚染する細菌が挙げられる
。他の例としては、■型エンドグリコシダーゼによって
表面から切断できる真菌類および藻類が挙げられる。

ここで使用する「生体外」なる用語は、本発明のプロセ
スおよび方法を実施する環境を意味する。

それは、■型エンドグリコシダーゼが自然に見出され、
例えば、■型エンドグリコシダーゼを自然に産生ずる生
物内で見出される環境を説明する「生体内」なる用語と
区別するためにだけ使用される。従って、■型エンドグ
リコシダーゼを使用する生体外法は、自然には生じない
方法またはプロセスである。しかしながら、生体外なる
用語は、「ガラス中」へのかかる方法の限定とは解釈す
べきてはなく、またはかかる方法か生きている生物上ま
たは生物中で実施することを排除すべきではない。本発
明の方法は、ガラス以外の各種の表面、例えば、布帛、
コンタクトレンズ、金属表面、セラミック表面、細胞表
面、プラスチック表面、組織などの上で実施してもよい
。更に、かかる生体外法は、例えば、以下に詳述のよう
なヒトの口腔中で実施してもよい。

若干の既知の■型エンドグリコシダーゼをかかる酵素の
自然の生物学的源と一緒に表■に表示する。若干の■型
エンドグリコシダーゼの場合の切断部位を第２図に示す
。Ｊ、　Ｇ、　　ビーレイによる「糖タンパク質および
プロテオグリカン技術」（１９８５）、第６章、ｐｐ、
１５３−３００（エルスビール、アムステルダム、ニュ
ーヨーク、オックスフォード）参照。表■に表示してい
ない■型エンドグリコシダーゼは、時々ＰＮＧａ　ｓ　
ｅＦとも称するグリコペプチダーゼＦである。

ＰＮＧａｓｅ　　Ｆは、フラボバクテリウム・メニンゴ
セブチカム（ＦＩａＶＯｂａＣ１ｅｒｉｕ＋＋ｍｅｎｉ
ｎｇｏｓｅｐＨｃｕｍ）から得られることがある。また
、それは、インデイアナ州インデイアナポリスのベーリ
ンガー・マンハイム・バイオケミカルから市販されてい
る。

わかるように、エンド−Ｈ，Ｆ、Ｄ、ＣＩおよびエンド
−〇−ＧａＩ型は、すべて糖タンパク質中の第二グリコ
シド結合を切断する。エンド−Ｆ−ＧａＩ型の場合には
、このグリコシド結合は、ＧｌｃＮＡｃとＧａＩとの間
にある。エンド−ＨｌＦ、Ｄ、およびＣＩの場合には、
切断は、ＧｌｃＮＡｃからなる２個の残基間にあり、特
異性は置換基Ｕ、Ｖ、Ｗ、ＸＳＹおよびＺによって規定
される。

エンド−Ｈは、高マンノース含量を有するＮ−結合糖タ
ンパク質を切断する。かくて、第２図中、Ｗは２〜１５
０個のマンノース残基からなり、Ｙは１〜２個のマンノ
ース残基からなり、Ｘ、ｚ、■およびＵはＨ（水素）で
ある。エンド−Ｈは、Ｗが１〜２個のマンノース残基か
らなり且つＹおよび／またはＺが ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　１−ＧｌｃＮＡｃまたは同様の構
造からなり且つＶがＨまたはＧｌｃＮＡｃからなるハイ
ブリッド構造も切断する。エンド−Ｈは、本発明の処方
物および方法で使用する好ましい■型エンドグリコシダ
ーゼである。

エンド−Ｄおよびエンド−ＣＩは、異なる源に由来する
が、同様の反応性を有する。エンド−Ｄおよびエンド−
ＣＩは、糖タンパク質のＮ−結合オリゴ糖類に対して活
性であり且つ１個よりも多い５−マンノース炭水化物残
基を含有する高マンノース構造（この場合には、第２図
中、Ｘはα１３グリコシド結合を介してコア構造に結合
され・たマンノースからなり、Ｗはα１−６グリコシド
結合を介してコア構造に結合されたマンノースからなり
且つ残りの置換基はＨである）を切断する。

また、エンド−Ｄは、エキソグリコシダーゼでの最も触
角状残基の除去後に複合またはハイブリッド構造のコア
部分を切断する（この場合には、第２図中、ＹはＨまた
はＧｌｃＮＡｃからなり、ＵはＨまたはフコースからな
る）。

エンドグリコシダーゼエンド−Ｆは、第２図中Ｘおよび
Ｙか１個以上のマンノース残基てあり且つ残りの置換基
がＨである高マンノース含量を有するＮ−結合糖タンパ
ク質に対して活性である。

また、エンド−Ｆは、ＸおよびＷがα１−３およびα１
−６グリコシド結合を介してコア構造に結合されたマン
ノースからなり且つＹが ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　１−Ｇ　ｌ　ｃＮＡｃまたは同様
の構造からなり且つＵがＨまたはフコースからなる二触
角状ハイブリッド構造を切断する。二触角状複合構造も
、エンド−Ｆによって切断される。

かかる構造は、ＸおよびＹが ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　１−ＧｌｃＮＡｃまたは同様の構
造からなり且つＵがＨまたはフコースからなる第２図中
のエンド−Ｆの場合の基質コア構造からなる。

エンド−Ｌは、Ｎ−結合糖タンパク質中の第二グリコシ
ド結合を切断する際に同様の反応性を有する。エンド−
Ｌは、 Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎからなる
低分子量基質に対して特異性である。エンド−Ｃｎは、
エンド−Ｈと同様の特異性を示す。

エンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼは、Ｇ
ｌｃＮＡｃおよびＧａＩが最初の２個の炭氷化物残基で
あるセリンまたはトレオリンに０−結合されたオリゴ糖
類を含有する糖タンパク質を加水分解する。Ｒ１が炭水
化物単位中のアンテナを与えることがあるマンノースの
１つであるエンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼの特異性
も、第２図に示す。

■型グリコシダーゼグリコペプチダーゼＦ（ＰＮＧａ　
ｓ　ｅ　　Ｆ）は、アスパラギンとＧｌｃＮＡｃとの間
のＮ−結合糖タンパク質中の第一グリコンド結合を切断
する。それは、ｗｌＸおよびＹか１個以上のマンノース
残基からなり且つＶおよびＺかＨからなる高マンノース
構造（フコースは第一炭水化物残基ＧＩｃＮＡｃから不
在である）を切断する。それは、ＷおよびＸがマンノー
スからなり、Ｙおよび／またはＺがＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ
　］−ＧｌｃＮＡｃまたは同様の構造からなり、ＶがＨ
またはＧｌｃＮＡｃからなる層成構造（フコースは典型
的には第一炭水化物残基から不在である）も切断する。

複合構造も、グリコペプチダーゼＦによって切断する。

かかる構造は、ＹおよびＷが ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　１−Ｇｌ　ｃＮＡｃまたは同様の
構造からなり、ＸおよびＺがＨｌ ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　１−ＧｌｃＮＡｃまたは同様の構
造からなり、ＶがＨまたはＧｌｃＮＡｃからなり且つフ
コースか時々第一炭水化物残基上に存在する第２図に示
すコア構造からなる。

エンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼは、糖タンパク質ま
たは糖脂質上のオリゴ糖類内のグリコシド結合を切断す
ることが既知である。エンド−βＮ−ガラクトシダーゼ
の場合の切断部位と一緒に典型的な糖タンパク質基質を
第２図に示す（Ｒ２はタンパク質、脂質または炭水化物
であり、Ｒｏは糖残基または水素である）。

勿論、本発明は、エンドグリコシダーゼの現在既知の特
異性によっては限定されない。最近まで、市販されてい
るエンドグリコシダーゼは、天然産源中の比較的少量の
発現のため高価であった。従って、かかる酵素の反応性
は、広くは研究されていない。しかしながら、分子クロ
ーニングの出現につれて、多量のエンドグリコシダーゼ
が人手でき、または人手可能にされるであろう。別の反
応性および特異性がこれらのエンドグリコシダーゼまた
は他のエンドグリコシダーゼの場合に発見される程度で
、かかる反応性は、本発明の範囲内であることを意図す
る。

従って、ここで使用する「■型エンドグリコシダーゼ反
応性物質」　（「■型−反応性物質」または「■型反応
性結合」を含有する物質とも称する）は、■型エンドグ
リコンダーゼと反応性である物質である。勿論、■型反
応性物質内には、グリコシド含有物質および糖タンパク
質が包含される。

しかしながら、（１）グリコシド結合以外で■型エンド
グリコンダーゼと反応性の他のまた未知の物質、および
（２）■型反応性結合を有する成分を含ａする多成分凝
集体も包含される。

例えば、細菌などの微生物は、エンド−Ｈでの処理によ
って表面から除去できる。この結果がどのように生ずる
かは、現在既知ではない。細菌は、エンド−Ｈと通常反
応性である結合を含有することは既知ではなく且つ表面
、他の微生物および他の物質への結合の詳細は、よくは
理解されていない。しかし、エンド−Ｈによる細菌除去
は、観察された。

更に、他のしみは、物質の複合凝集体（それらの若干ま
たはすべては■型エンドグリコシダーゼと反応性である
）を包含することがある。■型反応性物質なる用語は、
すべてのかかる状況をカバーする。かくて、■型エンド
グリコシダーゼの用途としては、（１）■型−反応性物
質を含有する表面をクリーニングすること、（２）■型
−反応性物質を処理して表面への結合を防止すること、
（３）微生物などの■型−反応性物質を処理して抗菌効
果を生ずることか挙げられる。

本発明で使用する■型エンドグリコシダーゼは、当業者
に既知の方性に従って表Ｈに表示の生物から得ることが
できる。表■中の■型エンドグリコシダーゼの若干、例
えば、ストレプトミセス・ブリカフス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ａ＋ｙｃｅｓ　ｐｌｉｃａｔｕｓ　）　　Ｃ初期にはス
トレプトミセス・グリセウス（Ｓｔ　ｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓｇｒｉｓｅｕｓ）と分類〕からのエンド〜Ｈおよび
Ｓ、ブリカフスまたはＳ、リビダンス（ｌ　Ｉｖｌｄａ
ｎｓ）中で産生ずるエンド−Ｈおよび肺炎双球菌 （Ｄｌｐｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｌａｅ）か
らのエンド−Ｄは、インデイアナ州インデイアナポリス
のベーリンガー・マンハイム・バイオケミカルから市販
されている。市販の製剤に加えて、エンド−Ｈは、大腸
菌中のストレプトミセス・ブリカフスからのエンド−Ｈ
のクローニングおよび表現の場合に報告した方法〔ロビ
ンズ等（１９８１）　、　Ｊ、　　Ｂｉｏｌ。

ＣｈｅＩｌｌ、　２５６　；　１０６４０）と同様の方
法によってストレプトミセス・ブリカフスからのエンド
Ｈ遺伝子およびアルカリ性ホスファターゼからのプロモ
ーターを符号化するプラスミドで形質転換された大腸菌
に由来することがある［Ｔ、才力等（１９８５）　Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａ１１．　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ、
　８２７２１２−７２１６）。また、Ｒ，Ｊ、　　トラ
ンブリー等（１９８５）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　ＣｈｅＩ
ｌｌ、、　　２６０゜５６３８参照。また、エンド−Ｈ
は、ストレプトミセス・ブリカフスに由来するエンド−
Ｈを表現するために工学的に産生されたストレプトミセ
ス細胞に由来してもよい（ＥＰＯ刊行物第０１７９４４
９号明細書）。或いは、エンド−Ｈは、当業者に周知の
技術を使用して、枯草菌（ＢａｃｌｌｌｕＳｓｕｂｔｉ
ｌｌｓ）などの適当な宿主細胞によって産生じてもよい
。Ｓ、ブリカフス（Ｓ、グリセウス）の場合のエンド−
Ｈのアミノ酸およびＤＮＡ配列は、公表されている。ｐ
、ｗ、　ロビンズ等（１９８４）Ｊ、　　Ｂｉｏｌ、　
　Ｃｈｅｗ、、　　　２５９．　　７５７７−７５８３
゜ここの例で使用するエンド−Ｈは、商業上得るかＳ、
ブリカフスからエンド−Ｈを表現するために形質転換さ
れた大腸菌または枯草菌宿主から得た。

エンド−Ｈ活性の１単位は、 （３Ｈ）−ｄａｎｓｙｌ−＾５ｎ−ＧＩｃＮＡｃ　　１
　μモルをｐＨ５，５で３７℃において１分で （Ｈ）−ｄａｎｓｙｌ−＾５ｎ−（ＧＩｃＮＡｃ）　　
（Ｍａｎ）　６から放出するために必要とされる酵素の
量である。Ａ。

タレンチノ等（１９７８）　Ｍｅｈｔｏｄｓ　ｉｎＥｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ、　　５０　、　５７４　ｏ他の■型
エンドグリコシダーゼの単位活性は、適当な基質によっ
て同様に定義される。

勿論、まだ同定されていない他の■型エンドグリコシダ
ーゼは、存在してもよい。かかる■型エンドグリコシダ
ーゼ並びにここに記載のもの、例えば、かかるエンドグ
リコシダーゼの対立遺伝子変異および遺伝子工学的修正
は、本発明の範囲内である。

グリコシドおよびグリコシド含有物質は、しばしば、各
種の表面に結合するようになる。かくて、例えば、糖タ
ンパク質、例えば、血戒に関連づけられるもの（例えば
、グリコジル化へ、モグロビン）は、布、リネンなどに
使用する布帛の表面を汚すことがある。かかるしみは、
従来、洗剤または本発明で利用するエンドグリコシダー
ゼではない各種の酵素との組み合わせでの洗剤での処理
による完全な除去に高度に抵抗性であった。布帛などの
表面を汚し且つ既知の技術によって除去することか困難
でもある更に他のグリコシド含有物質は、糞便からなる
。かかる糞便じみとしては、各種のグリコシドおよび腸
内細菌と関連づけられるグリコシド含有物質（例えば、
ペプチドグリカン）、異化排出物、例えば、糖タンパク
質、および非吸収栄養素などが挙げられる。

グリコシドまたはグリコシド含有物質が結合されること
がある他の表面としては、硬質および軟質コンタクトレ
ンズの表面が挙げられる。軟質コンタクトレンズは、典
型的には、ヒドロゲル構造を有する親水性架橋重合体で
あるが、シリコーン重合体から作る。例えば、米国特許
第３，４０３゜３９３号明細書および第２，９７６．５
７６号明細書参照。一方、硬質コンタクトレンズは、典
型的には、メタクリレートまたはメタクリル酸メチル重
合体から作る。他の表面としては、天然産バイオフィル
ム、心臓ペースメーカーリードおよびパワーパック、細
胞表面および粘膜表面、歯エナメル質、食品を加工する
際に細菌および粒状物質を除去するために使用する濾過
器；化学薬品など；空気調和濾過器；水性環境にさらさ
れる各種の構造部品、例えば、ボート、防波堤などの表
面；ブラスチックおよび複合体、例えば、フォーマイカ
。

および金属または金属合金、例えば、鋼、アルミニウム
などが挙げられる。

以下に詳細に示すように、■型エンドグリコシダーゼ単
独またはズブチリシンなどの第二酵素との組み合わせ（
洗剤有無）は、布見本からの血族および糞便じみの除去
を有効に増大する。かかるしみかどのようにかかる見本
に付着するかは正確には知られていない。しかしながら
、単独または他の薬剤との組み合わせでの■型エンドグ
リコシダーセによってこれらの見本からのかかる物質の
除去が高められることは、少なくとも１個のグリコンド
結合が布帛としみの部分との間に介在し、このしみか■
型エンドグリコシダーゼでの処理時に放出されることを
示唆する。これらの結果に基づいて、グリコシド含有物
質の表面への結合および■型エンドグリコンダーゼによ
るかかる物質の放出および／または除去の機構か提案さ
れる。しかしながら、これらの提案された機構は、本発
明の範囲の限定とは解釈すべきではない。

かくて、第５Ａ図に示すように、グリコシド含有物質は
、免疫結合以外によって表面に結合してもよい。この点
で、「免疫結合」は、抗原と抗体との間に存在するもの
（その抗原に特異性）（ポリクローナルまたはモノクロ
ーナル）である。第５Ａ図に示すように、グリコシド含
有物質は、表面に結合された近位部分および近位部分か
ら外方こ延出する遠位部分を有する。近位部分および遠
位部分は、グリコシド結合（このグリコシド結合と■型
エンドグリコシダーゼは反応性である）によって結合さ
れる。第５Ａ図に更に示すように、■型エンドグリコシ
ダーゼでの処・理時に、グリコシド含有物質の遠位部分
は、グリコシド含有物質の近位部分から「放出」される
。この遠位部分が他の手段によって表面に結合されない
程度で、遠位部分は、表面から容易に「除去」され且つ
流体で洗い流されることかある。

第５Ｂ図中、グリコンド含有物質、この場合には、炭水
化物単位とタンパク質単位とを含有する糖タンパク質は
、表面に結合された状態で示す。

このグリコンド含有物質は、■型エンドグリコシダーゼ
と反応性であるグリコシド結合によって結合された炭水
化物部分とアグリコン部分とを更に含有する。この特定
の場合には、グリコシド含有物質（糖タンパク質）は、
グリコシド含有物質の炭水化物部分を通して表面に結合
されている。■型エレドグリコシダーゼでの処理時に、
アグリコン部分は、グリコンド含有物質の炭水化物部分
から放出される。第５Ａ図と同様に、アグリコン部分か
他の手段によって表面に更に結合されない程度で、アグ
リコン部分も、表面から除去される。

第５Ｃ図は、グリコンド含有物質か少なくとも２個の結
全点を介して表面に結合されている状況を示す。示すよ
うに、グリコシド第一結合は、表面とグリコシド含有物
質との間に存在する。更に、第二酵素と反応性の第二結
合も、表面と除去すべきグリコシド含有物質の部分との
間に存在する。

■型エンドグリコシダーゼのみで処理するならば、第一
グリコシド結合から遠位のグリコシド含有物質の部分は
、少なくとも第一グリコシド含有結合を通して結合され
た程度で表面から放出される。

示す第二結合と反応性の第二酵素と接触するならば、第
一グリコシド結合および第二結合から遠位のグリコシド
含有物質の部分は、表面から放出される。この遠位部分
が表面に他の方性で結合されていない程度で、即ち、他
の酵素と反応性であるか洗剤および／または界面活性剤
に感受性であることかある他の接点によって結合されて
いない程度で、この遠位部分は、表面から有効に除去さ
れる。

第５Ｄ図は、微生物のグリコシド部分の少なくとも一部
分を通して表面に結合された微生物を示す。グリコシド
部分は、■型エンドグリコシダーゼと反応性のグリコシ
ド結合を含有する。グリコシド結合から遠位の微生物の
切断部分は、■型エンドグリコシダーゼでの処理時に表
面から放出される。この切断部分が他の方法で表面に結
合されていない程度で、切断部分も、表面から除去され
る。しかしながら、多数の接点が、他の酵素および／ま
たは洗剤または界面活性剤での更に他の処理を必要とす
ることがある表面の場合には存在してもよい。

第５Ｅ図中、■型エンドグリコシダーゼ反応性物質は、
表面に結合した状態で示す。この■型反応性物質は、表
面に結合された近位部分および近位部分から外方に延出
する遠位部分を有する。近位部分および遠位部分は、■
型エンドグリコシダーゼと反応性の結合を意味する■型
反応性結合によって結合されている。■型エンドグリコ
シダーゼての処理時に、■型反応性物質の遠位部分は、
■型反応性物質の近位部分から「放出」される。

■型反応性物質は、表面に結合するようになってもよい
各種の成分の分子、微生物または凝集体からなってもよ
いことを理解すべきである。■型反応性物質の遠位部分
が他の手段によって表面に結合されない程度で、遠位部
分は、表面から容易に「除去」され且つ流体で洗い流さ
れることかある。

図示の物質の除去を生ずるために使用する■型エンドグ
リコシダーゼの量は、表面からの特定の物質の除去に「
有効な量」と機能的に定義される。

この量は、物質および被処理表面に応じて変化してもよ
い。典型的な量は、開示の特定の態様に関連してここに
詳述する。

第二酵素 「第二酵素」としては、プロテアーゼ、リパーゼ、グリ
コシダーゼ、例えば、リゾチームおよびそれらの組み合
わせが挙げられる。■型エンドグリコシダーゼと組み合
わせてもよい各種のプロテアーゼとしては、ズブチリシ
ン、プロメライン、パパイン、トリプシン、キモトリプ
シン、バンクレアチン、リゾチームおよびそれらの組み
合わせが挙げられる。かかる酵素は、天然物に由来して
もよく、例えば、枯草菌または遺伝子工学で産生された
クローンからのズブチリシン、例えば、ＥＰＯ刊行物第
０１３０７５６号明細書に記載のようなズブチリシンお
よび突然変異ズブチリシンであってもよい。Ｊ、Ａ、　
ウェルズ等（１９８３）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅ
ｓ、、　１１．　７９１１−７９１５　；Ｍ、ヤング等
（１９８４）　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　。

１６０．１５−２１　、Ｄ、Ａ、ニステール等（１９８
５）　　Ｊ、　　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ＣｈｅＩＩｉ
ｓｔｒｙ　、　　２６０゜６５１８＝６５２１も参照。

多くのかかる酵素は、勿論、商業的源から入手できる。

更に、■型エンドグリコシダーゼは、リパーゼ、例えば
、細菌、喘乳動物および真菌類のリパーゼおよびそれら
の組み合わせと組み合わせてもよい。

第二酵素として使用してもよいグリコシダーゼとしては
、エキソグリコシダーゼ、第二■型エンドグリコシダー
ゼおよびｌ型エンドグリコシダーゼが挙げられる。例と
しては、α−およびβ−アミラーゼ、セルラーゼ、ペク
チナーゼ、ヘミセルラーセ、デキストラナーゼ、各種の
グルカナーゼなとおよびそれらの組み合わせか挙げられ
る。

更に、■型エンドグリコシダーゼは、表面からのグリコ
シド含有物質の除去を容易にするために前記種類の第二
酵素の１よりも多くと組み合わせてもよい。

■型エンドグリコシダーゼを１８以上の第二酵素と組み
占わせる時には、■型エンドグリコシダーゼ対第二酵素
の比率は、好ましくは約０．０１〜１００、最も好まし
くはｌ：ｌである。

ジスルフィド切断試薬 また、■型エンドグリコシダーゼは、単独または洗剤処
方物を調製するための１種以上の第二酵素および／また
はジスルフィド切断試薬との組み合わせでの洗剤と併用
してもよい。ジスルフィド結合を切断することができる
物質は、変化するが、一般に３つのカテゴリー二酸化剤
、還元剤、および雑多な付加物質、例えば、フマル酸お
よび亜硫酸ナトリウムによって例証されるものに入る。

好適な酸化剤としては、過酸化水素、過ギ酸、過ホウ酸
ナトリウム、および酸化漂白剤が挙げられる。

有効な還元剤としては、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）
　、β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、水素化ホウ
素ナトリウムなどが挙げられる。

容易には分類されない別のジスルフィド切断試薬として
は、塩化第二水銀、ニトロプルシド、トリブチルホスフ
ィン、およびホスホチオレートが挙げられる。特に有用
な切断試薬は、亜硫酸ナトリウムである（これは下記反
応に従ってジスルフィドの亜硫酸分解を生ずる：Ｒ−Ｓ
−５−Ｒ＋Ｓｏ　　　　Ｒ−５−５○　−２＋　　ＳＲ
）。この反３ 応の平衡は、重金属イオンまたは酸化剤を使用してチオ
ール陰イオンの除去によってシフトしてもよい。酸化能
は、曝気またはＣｕＳＯ４、過ホウ酸ナトリウムなどの
酸化剤によって与えてもよい。

ジスルフィドを切断することができる物質の前記リスト
は、包括的であることを意味せず、逆に商品に有効では
あるか必すしも適当ではない物質を包含する。商業上成
功するためには、添加物質は、比較的安価でなければな
らす且つ所期用途に望ましくない性質を有していてはな
らない。かくて、例えば、塩化第二水銀の使用は本発明
の方法を実施する際に作動可能であるが、塩化第二水銀
は、商業的使用を意図する通常の洗濯製品には好適では
ない。β−メルカプトエタノールおよびＤＴＴは、温和
な不快臭を有する以外は商業上使用可能である。それゆ
え、商業的処方物に特に好ましい物質は、亜硫酸ナトリ
ウム（好ましくは酸化剤との組み合わせ）または安価で
あり且つ比較的安全である過酸化水素である。ジスルフ
ィド結合の切断で有用である物質のレビューは、例えば
、Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｒ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　％　Ｇ、　　Ｅ。

ミーンズ等編（１９７１）、ホールデンーデイ・インコ
ーホレーテッド、カリフォルニア州すンフランシスコ、
第８章：およびＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅａｇｅｎｔｓｒ
ｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍｏｄｉｆ’１ｃａｔｉｏｎ、
　　Ｒ，Ｌ、　　ラントノくルド等編（１９８４）　、
ＣＲＣプレス・インコーホレーテッド、フロリダ州バコ
・ラドン、第７章に見出される。

典型的には、単独または１種以上の第二酵素との組み合
わせての■型エンドグリコシダーゼは、本発明の洗剤組
成物の０，０１〜３％ｖｔ／ｗｔを構成し且つその約１
０〜４０％ｖｔ／ｖｔのジスルフィド切断試薬を包含し
てもよい。存在量は、勿論、エンドグリコシダーゼ（そ
して、使用するならば、第二酵素）およびジスルフィド
切断試薬の性状、洗浄酸中の洗剤の希釈度、および洗浄
条件に依存する。しかしながら、前記範囲は、一般に典
型的である。

本発明の１態様においては、結合された物質を含有する
糖タンパク質を有する表面は、好適なｐＨＳ温度におい
てジスルフィド切断試薬と■型エンドグリコシダーゼと
第二酵素との組み合わせ（同時または逐次）で適当な時
間処理する。これらの条件は、勿＝、便宜に応じて変化
でき、且つ■型エンドグリコシダーゼ、プロテアーゼお
よび７・スルフィドを切断する物質の選択は、成る程度
、二の選択に依存する。しかしながら、しばしば遭遇す
る好都占な条件は、ｐＨ値５〜１２である。

温度２０〜５５℃、特に約４０〜５５℃および時間２０
分まで、通常約１０〜１５分は、典型的であり、好まし
い。商業上実用的であるためには、プロセスは使用者に
通常人手可能な条件下で実施することが必要であるので
、好ましい時間および温度は、一般に家庭洗濯機、近所
のコインランドリーおよび専門の洗濯サービスで利用さ
れているものである。

本発明の別の態様においては、市販の洗剤を使用する通
常の洗浄法は、使用され且つ■型エンドグリコシダーゼ
、第二酵素およびジスルフィド切断物質は、漂白剤を使
用する方法とほぼ同じ方式で添加剤として別個または一
緒に与える。かくて、これらは、洗浄サイクルの開始ま
たは若干の中間点、例えば、洗浄サイクルの大体半分が
完了した後に洗剤と一緒に添加してもよい。このように
取り扱うならば、固体または液体洗剤組成物の約１：５
００希釈度（固体約２ｇ／ｍｌ）を仮定すると、■型エ
ンドグリコシダーゼ、第二酵素およびジスルフィド切断
試薬の任意量は、この希釈度によって課される上限なし
に添加してもよい（■型エンドグリコシダーゼ、第二酵
素およびジスルフィド切断試薬を最初に洗剤組成物に加
え且つ例えば、ジスルフィド切断試薬が組成物の５０％
を構成したならば、ｌｌｌ１ｇ／ｍｌのみが最終洗浄酸
中で生ずるてあろう。しかしながら、これらの物質を別
個に加えるならば、特定の■型エンドグリコシダーゼ、
ジスルフィド切断試薬および第二酵素に最も有効な量は
、添加してもよい）。

■型エンドグリコシダーゼおよび第二酵素に関しては、
非常に少量で通常すむ。典型的には、■型エンドグリコ
シダーゼおよび第二酵素は、各酵素の場合に洗浄液の最
終濃度的１〜５００μｇ／ｍ１に加える。しかしながら
、ジスルフィド切断試薬の場合には、洗剤の希釈によっ
て許容されてあろう量よりも多い量が、望ましいことが
ある。例えば、水素化ホウ素ナトリウムを使用してジス
ルフィド結合を切断することは、好都合には同様の量の
緩衝剤の存在下で０．２Ｍ程度の試薬の濃度実施しても
よい（Ｒ，Ｌ、ランドバルド等の前記ＣｈｅＩｌｉｃａ
ｌ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍｏ
ｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）。

かかる多量は通常であるが、必ずしも必要とされず、よ
り低い濃度が使用可能である。濃度０、ＯＩＭ程度また
はそれ以下も使用できるが、亜硫酸分解は、通例、亜硫
酸ナトリウム濃度０．１Ｍ程度で実施する。ＤＴＴは、
濃度０．０２〜０．１Ｍ程度で供給する時に有効である
。簡単には、ジスルフィド切断試薬濃度は、これらの試
薬および維持する有効性のために広範囲にわたって変化
できる。特定の応用に最適の濃度は、勿論、じみの性状
および試薬の性状、並びに洗浄法の条件、例えば、時間
、温度およびｐＨに依存するであろう。

別のより好都合なアプローチにおいては、■型エンドグ
リコシダーゼ、第二酵素およびジスルフィド切断物質は
、元の洗剤組成物に加え且つプロセスはこれらの変性洗
剤を使用して標準洗浄法として実施する。これらの状況
下では、洗剤組成物は、前記のものに対応するであろう
が、組成物の量も、再度、洗浄液および洗浄法の条件お
よび洗剤成分の溶解度に応して洗浄液の約０．　５■／
　ｍ１〜１０■／ｍｌまたはそれ以上の範囲にわたって
変化できる。いかなる場合にも、■型エンドグリコシダ
ーゼ、ジスルフィド切断試薬および第二酵素の洗剤への
配合は、洗剤の希釈度に応じてこれらの成分の濃度を限
定する。かくて、１　：　１００希釈度を使用しく１０
■／　ｍｌ　）且つジスルフィド切断試薬を例えば洗剤
組成物の５０％に限定するとしても、得られた洗浄液中
のジスルフィド切断試薬の最適濃度５■／ｍｌが、上限
である。典型的には、勿論、洗剤中のジスルフィド切断
試薬の濃度は、ジスルフィド切断試薬の一層低い濃度が
必須であるならば、５０％未満であろう。

本発明の洗剤組成物は、大抵の洗剤活性物質、比較的多
量のジスルフィド切断試薬（使用するならば）、および
極少量の■型エンドグリコシダーゼおよび第二酵素（使
用するならば；酵素成分のコストに鑑みて特に望ましい
）を含有する。かくて、一般に、製剤は、界面活性剤、
ビルダー、増白剤などの通常の市販の洗剤添加剤を含め
た洗剤活性物質６０〜９０％、■型エンドグリコシダー
ゼ＋第二酵素０．０１〜３％、およびジスルフィド切断
試薬的１０〜４０％を含有するであろう。

勿論、これらの３ＦＡの添加剤の１つのみを元の洗剤に
加え、他のものを洗浄液に別個に供給することも可能で
ある。特に、■型エンドグリコシダーゼは、予備洗浄液
に加えた後、第二酵素を含有する洗剤を加えてもよく、
またはエンドグリコシダーゼを含有する洗剤の添加は、
第二酵素での処理の前または後に実施してもよい。

クリーニング組成物 エンドＤ、ＦおよびＨは、クリーニング組成物で使用す
るのに好ましい■型エンドグリコシダーゼである。エン
ド−Ｈが、最も好ましい。

グリセリド含有物質の除去のためには、本組成物は、好
ましくは、組成物の種類に応じて、■型エンドグリコシ
ダーゼ約０．１ｐｐｍ（１００万当たりの部）〜１２０
０ｐｐｍ、より好ましくは約１　ｐｐｍ　〜１１０００
ｐｐ、最も好ましくは約２０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍを
含む。クリーニング組成物が好ましい。洗濯洗剤組成物
が、ここで使用するのに最も好ましく、好ましくは■型
エンドグリコシダーゼ約０．ｌｐｐｍ〜１２００ｐｐｍ
％好ましくはエンドＤ、ＦまたはＨ約２０ｐｐｍ〜２０
０ｐｐｍ、最も好ましくはエンドＨ約５０ｐｐｍ〜１２
５ｐｐｍを含む。

微生物を防除または除去するために使用する時には、組
成物は、好ましくは、■型エンドグリコシダーゼ、好ま
しくはエンド−Ｈ約０．１ｐｐｍ〜１２００ｐｐｍ、よ
り好ましくは約ｌｐｐｍ〜１ｏｏｏｐｐｍ、最も好まし
くは約２０ｐｐｍ〜４００ｐｐｍを含む。クリーニング
組成物が好ましく、且つ好ましくは同量の■型エンドグ
リコシダーゼ、好ましくはエンド−Ｈを含む。

グリコント含有物質および／または微生物の除去のため
に■型エンドグリコシダーゼを含む提案される種類の組
成物を以下に述べる。組成物は、酵素活性を破壊しない
方法て調製し、使用することかできる。それらは、酵素
の１８性を不当に妨げない成分で調製できる。組成物は
、洗濯洗剤、皿洗い洗剤、硬質表面クリーナー、歯エナ
メル質クリーナー、成体石鹸および固形石鹸、抗アクネ
組成物、制ｔＦ剤、シャンプー、フェースクリーム、果
物／野菜表面随腐剤、または布帛柔軟剤であることかで
きる。

洗濯機中での普通のサイクルを使用した布帛のクリーニ
ングに加えて、本発明のクリーニング組成物は、他の表
面、例えば、外科機器、パイプライン、金属容器なとで
見出されるような金属および金属合金、およびプラスチ
ックおよび複合材料、例えば、フォーマイカ（Ｆｏｒａ
＋ｊｃａ）およびボート、防波堤などの表面からグリコ
シド含有物質および／または微生物を除去するためにも
使用してもよい。特定の応用に応じて、組成物は、■型
エンドグリコシダーゼを単独またはジスルフィド切断試
蘂、第二酵素および／または洗剤界面活性剤との組み合
わせて含んでいてもよい。

■型エンドグリコシダーゼは、皮膚、皮膚孔、ヘア、毛
包、組織の表面などの「生物学的表面」から酵母、真菌
類、藻類および細菌を含めてグリコシド含有物質および
／または微生物を除去するための組成物に処方してもよ
い。かくて、シャンプー処方物、コンディショナー処方
物、石鹸処方物および医薬技術の当業者は、■型エンド
グリコシダーゼをかかる応用で使用するために洗剤処方
物の場合の前記開示を容易に適応できる。このように処
方する時には、かかる組成物は、かかる表面に付着する
ことかあるグリコシド含有物質を除去する際に有用であ
る。

また、■型エンドグリコンダーゼは、果物、野菜なとの
埴物の表面からグリコンド含有物質および／または微生
物、特に酵母および真菌類を除去するための組成物に処
方してもよい。かかる組成物は、奸ましくは、非イオン
界面活性剤を含有する。

央に、■型エンドグリコシダーゼは、望ましくないにお
いに応答するグリコンド含有物質および／または微生物
を除去するためにエンドグリコシダーゼ活性を与えるよ
うに当業者に既知の方法で制臭剤組成物に処方してもよ
い。■型エンドグリコシダーセを使用したかかる制臭剤
処方物は、当業者に既知のスティック、クリームおよび
エアゾル制臭剤用処方物の修正を包含してもよい。

更に、■型エンドグリコシダーゼは、少なくとも炎症に
応答するか包含されるグリコシド含有物質および／また
は微生物が表面に結合される程度こ、炎症から通常型ず
るアクネの治療のために処方してもよい。前記処方物と
同様に、当業者は、既知のアクネ処方物を修正して■型
エンドグリコシダーゼを単独または他の酵素、洗剤およ
び／または界面活性剤との組み合わせて配合することが
できる。

コンタクトレンズを処理するために使用する時には、■
型エンドグリコシダーゼは、好適には、クリーニング組
成物中で濃度約０．　１〜２０μｇ／ｍｌで供給し且つ
プロテアーゼなどの第二酵素の遍度は、かかる第二酵素
を利用するならば同じ範囲内である。処理時間は、約５
分〜約１５時間で変化できるが、標準の好都合なりリー
ニング時間は、−晩生であり、それゆえ、着用者は寝て
いる際にレンズをソーキングさせることができる。各種
のプロトコールは、好適であるが、特に好ましいものは
、室温で１０分〜２時間または一晩生実施された■型エ
ンドグリコシダーゼおよび第二酵素（使用するならば）
を含有する単一溶液の使用であるが、■型エンドグリコ
シダーゼ溶液の存在下で１０分〜２時間予備ソーキング
した後第二酔素を含有する溶液で同様に一晩生処理する
ことである。

コンタクトレンズ処方物に好ましい一般目的第二酵素と
しては、パパイン、パンクレアチン、ズブチリシンなど
のプロテアーゼが挙げられる。好ましい■型エンドグリ
コシダーゼ酵素は、ストレプトミセス・ブリ力タスから
のエンド−Ｈである。

単一の第二酵素プロテアーゼは、使用してもよく、また
は組成物は、第二酵素の混合物を含有してもよい。

更に、コンタクトレンズ組成物は、全体の酵素分解を助
長する追加成分を含有してもよい。これらのうち２−メ
ルカプトエタノール、塩酸システィン、ジチオトレイト
ール、ジチオエリトリトール、重硫酸ナトリウム、メタ
重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素などのジスルフィド切断
試薬が特に有用である（一般に約０．０１〜５重量％、
好ましくは０，０５〜１重量％）。更に、洗剤は、酵素
含有溶液でのレンズの濡れを助長するために組成物に配
合してもよい。好適な洗剤としては、ドデシル硫酸ナト
リウム、モノラウリン酸ナトリウム、非イオン界面活性
剤、例えば、アルコールエトキシレート（例えば、ポリ
エト午ジェタノール）、陰イオン界面活性剤、例えば、
エーテルスルホネート、線状アルキルベンゼンスルホネ
ート、ラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。

コンタクトレンズクリーニングに好適な緩衝剤および安
定剤も、使用してもよく、それらの例としてはクエン酸
ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸、ホウ酸、Ｅ
ＤＴＡナトリウム、各種の混合ホスフェート緩衝剤およ
びＮ　ａ　ＨＣＯ３が挙げられる。一般に、緩衝剤およ
び安定剤は、約０．００１〜約２．５重量％、好ましく
は約０．１〜１重量％の量で使用してもよい。コンタク
トレンズをクリーニングするために本発明で使用しても
よい各種の成分の量の前記説明は、溶液中の成分の％（
ｗｔ／ｖｏｌ）で述べることを理解すべきである。処方
物は、所定量の水などの好適な溶媒中で使用するのに好
適な錠剤などの１以上の通常の固体剤形の形態を取って
もよい。固体剤形の組成％は、特定の容量の水に溶解す
る時に、溶液が明細書に記載の範囲内の組成％を有する
ようなものである。固体剤形を使用するならば、処方物
は、通常の潤滑剤、結合剤、および賦形剤を含有しても
よく、これらの例としてはグリセロール、ソルビトール
、ホウ酸、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ
ール、デキストラン、メチルセルロース、ヒドロキシエ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロースの水溶性
塩、または天然産親水性物質、例えば、ゼラチン、アル
ギネート、トラガカント、ペクチン、アラビアゴムおよ
び可溶性デンプンか挙げられる。

コンタクトレンズをクリーニングする際に有用な典型的
な組成物およびプロトコールとしては、下記のものが挙
げられる。

１、　組成物は、■型エンドグリコシダーゼ１〜１００
μｇ　／　ｍｌを含有する。レンズは、取り外し、２２
℃で溶液との接触状態に１２時間置く。

レンズは、クリーニング溶液から取り出し、すすぐ。

２、　溶液Ａは■型エンドグリコシダーゼ１０μｇ　／
　ｍｌを含有し、溶液Ｂはズブチリシン５μｇ／ｍｌを
含有する。レンズは２５℃で溶液Ａに３０分間ソーキン
グし、取り出し、２５℃で溶液Ｂに１０時間浸漬する。

３、　　クリーニング溶液は、プロテアーゼペプシン１
０μｇ　／　ｍｌおよび■型エンドグリコシダーゼ１０
μｇ　／　ｍｌを含有する。レンズは、２０℃でこの溶
液Ａに５時間ソーキングする。

４、　　クリーニング溶液は、ズブチリシン５μｇ　／
　ｍｌ、■型エンドグリコシダーゼ５μｇ　／　ｍｌお
よび１０ｍＭ　２−メルカプトエタノールを含有する。

レンズは、３０℃でこの溶液に５時間浸漬する。

５、　　クリーニング溶液は、ズブチリシン７μｇ／ｍ
ＬＩＩ型エンドグリコシダーゼ３μｇ　／　ｍｌ　。

１０ｍＭ　　２−メルカプトエタノールおよびドデシル
硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）２％を含有する。

レンズは、２０℃でこの溶液に３時間ソーキングする。

６、　　クリーニング溶液は、ズブチリシン４μｇ／ｍ
Ｌ　　トリプシン２μｇ／ｍＬＩＩ型エンドグリコンダ
ーセ１０μｇ／ｍｌ、およびＳＤＳ　　２％を含有する
。レンズは、２０℃てこの溶液に７時間ソーキングする
。

７、　　溶ＭＡは、ＳＤＳ　　２％中にズブチリシン４
μｇ　／　ｍｌおよびトリプシン２μｇ／ｍｌを含有す
る。溶ｄＢは、■型エンドグリコシダーゼ１０μｇ　／
　ｍｌプラス１０ｍＭ２−メルカプトエタノルを含ｈ゛
する。レンズは、３０℃で溶ｄＢに２０分間ｄ漬し、次
いて、２５°Ｃて溶液Ａに６時間とこ眉する。

すべての前記例において、レンズは、着用者の１１に戻
す前に食塩水中で十分にすすく。

本組成物は、液体、ゲル、ペーストおよび粉末、粒状物
なとの固体粒子を含めて各種の物理的形態に処方できる
。組成物は、洗濯洗剤、例えば、米国特許箱４，５０７
．２１９号明細書、第４．３１８，８１８号明細書、第
４，６０５，５０９号明細書および第４，４１２，９３
４号明細書に開示のもの１皿洗い洗剤、例えば、米国特
許箱４．７１４．５６２号明細書、第３，６３０，９２
３号明細書、第４，１３３，７７９号明細書、第４．３
１６，８２４号明細書および第４，５５５，３６０号明
細書に開示のもの；硬質表面クリーナー、例えば、米国
特許箱４，４１４，１２８号明細書、第３．６７９，６
０８号明細書、第３，９８５，６６８号明細書および第
４，００５，０２７号明細書に開示のもの：布帛柔軟剤
、例えば、米国特許箱３．９４４，６９４号明細書、第
４，０７３，９９６号明細書、第４，４２４，１３４号
明細書および第４．６６１，２６９号明細書に開示のも
の；固形石鹸、例えば、米国特許箱３，９９３，７２２
号明細書および第３，０７０，５４７号明細書に開示の
もの；シャンプー、例えば、米国特許箱４．３４５，０
８０号明細書、第４，７０４，２７２号明細書および第
４，７４１，８５５号明細書に開示のもの、制汗剤、例
えば、米国特許箱４．７２５．４３２号明細書に開示の
もの；抗アクネ製品、例えば、米国特許箱４，３１８，
９０７号明細書および第４，６０８，３７０号明細書に
開示のもの：および口腔用組成物、例えば、米国特許箱
４　６８４．５１８号明細書に開示のものとして処方で
きる。

組成物は、好ましくは、良好な酵素性能のためにｐＨ約
４〜１０、より好ましくは約５〜約８をｈ゛する。

微生物除去に関する実験室研究は、有効な除去を得るた
めには、若干の場合に微生物を保持する表面の水ｌ谷か
微生物を除去するために物理的または化学的作用を必要
とすることを示した。試験した微生物としては、下記の
ものか挙げられる：タイプ１および３フインブリエを含
めた大腸菌黄色ブドウ球菌 表皮ブドウ球菌 セラチア◆マルセセンズ ストレプトコッカス・ミュタンズ ストレプトコッカス・サンダイス バチルスｓｐ。

カンジダｓｐ。

アスペルギルスｓｐ。

例えば、大腸菌などの細菌の除去の場合には、表面結合
微生物は、エンド−Ｈで処理し、次いで、化学的作用に
より、例えば、抗菌剤での処理により、または物理的作
用、例えば、水でのすすぎまたは手拭きにより除去して
もよい。肢体および固形石鹸、歯エナメル質クリーナー
、制汗剤、制臭剤布帛柔軟剤および抗アクネ組成物の場
合には、組成物はエンド−Ｈに加えて、イルガサン（Ｉ
ｒｇａｓａｎ　　）　　（チハーカイキー）、クロルヘ
キシジンなどの抗菌剤を含有することが好ましい。抗菌
剤は、水すすぎ、手による拭き取りなどの物理的作用か
生ずる時には、組成物（例えば、硬質表面クリーナー）
で必要とされない。

洗剤クリーニング組成物、特に粒状および肢体洗濯洗剤
組成物が、ここで好ましい。これらの洗剤クリーニング
組成物は、好ましくは、洗剤界面活性剤約１〜９０重量
％、より好ましくは約５〜５０重量％、最も好ましくは
約１０〜４０重量％を含む。

本発明の洗剤組成物で有用な界面活性剤としては、周知
の合成陰イオン界面活性剤、合成非イオン界面活性剤、
合成両性界面活性剤、合成双性界面活性剤が挙げられる
。洗浄技術から既知であるアルキルベンゼンスルホネー
ト、アルキルサルフェートおよびアルキルエーテルサル
フェート、パラフィンスルホネート、オレフィンスルホ
ネート、アルコキシ化（特にエトキシ化）アルコールお
よびアルキルフェノール、アミンオキシド、脂肪酸のα
−スルホネートおよび脂肪酸エステルのαスルホネート
、アルキルベタインなどが、これらを代表している。一
般に、かかる洗剤界面活性剤は、０９〜Ｃ１８範囲内の
アルキル基を含有する。

陰イオン洗剤界面活性剤は、ナトリウム塩、カリウム塩
またはトリエタノールアンモニウム塩の形態で使用でき
る。非イオン界面活性剤は、一般に、約５〜約１７個の
エチレンオキシド基を含有する。

Ｃ−Ｃアルキルベンゼンスルホネート、Ｃ１２１１１６ 〜Ｃ１８パラフィンスルホネートおよびアルキルサルフ
ェートが、本発明の組成物で特に好ましい。

本組成物に好適な界面活性剤の詳細なリストは、米国特
許第３，９３６，５３７号明細書に見出すことができる
。かかる界面活性剤の商業的源は、マツカーチエオンの
乳化剤および洗剤（ノース・アメリカン編、１９８４年
、マツ力テエオン・デイビジョン、ＭＣパブリッシング
・カンパニー）に見出すことができる。

本発明の洗剤組成物に有用な洗浄性ビルダーとしては、
通常の無機および有機水溶性ビルダー塩のいずれが、並
びに各種の水不溶性のいわゆる１種入り」ビルダーが挙
げられる。本発明の洗濯洗剤組成物は、好ましくは、洗
浄性ビルダー約１〜７５重量％、より好ましくは約５〜
４０重量％、最も好ましくは約１０〜２０重量％を含む
。これらの組成物は、好ましくは、ｐＨ約６〜１０を有
する。

好適な水溶性無機アルカリ性洗浄性ビルダー塩の非限定
例としては、アルカリ金属の炭酸塩、ホウ酸塩、リン酸
塩、ポリリン酸塩、トリポリリン酸塩、重炭酸塩、ケイ
酸塩および硫酸塩が挙げられる。かかる塩の特定例とし
ては、ナトリウムおよびカリウムの四ホウ酸塩、重炭酸
塩、炭酸塩、トリポリリン酸塩、ビロリン酸塩、および
ヘキサメタリン酸塩が挙げられる。

好適な有機アルカリ性洗浄性ビルダー塩の例は、（１）
水溶性アミノポリ酢酸塩、例えば、ナトリウムおよびカ
リウムのエチレンジアミン四酢酸塩、ニトリロ三酢酸塩
、およびＮ−（２−ヒドロキシエチル）ニトリロ三酢酸
塩；　（２）フィチン酸の水溶性塩、例えば、フィチン
酸ナトリウムおよびフィチン酸カリウム；　（３）水溶
性ポリホスホン酸塩、例えば、エタン−１−ヒドロキシ
−１，１−ジホスホン酸のナト、リウム塩、カリウム塩
およびリチウム塩、メチレンジホスホン酸、のナトリウ
ム塩、カリウム塩およびリチウム塩などである。

種入りビルダーとしては、炭酸カルシウム、硫酸バリウ
ムが種として入れられた炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリ
ウムなどの物質が挙げられる。粒径約５μ以下を有する
水和ナトリウムゼオライトＡが、特に望ましい。

好適な洗浄性ビルダーの詳細なリストは、米国特許第３
，９３６，５３７号明細書に見出すことができる。好ま
しいビルダーは、脂肪酸、ポリカルボキシレート、ポリ
ホスフェートおよびそれらのｄ合物である。

任意の洗剤組成物成分としては、酵素（例えば、プロテ
アーゼおよびアミラーゼ）、過酸素漂白剤および漂白活
性剤、ハロゲン漂白剤（例えば、ジクロロイソシアヌル
酸ナトリウムおよびジクロロイソシアヌル酸カリウム）
、汚れ放出剤（例えば、メチルセルロース）、汚れ沈殿
防止剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウ
ム）、布帛増白剤、酵素安定剤、着色斑点防止剤（ｃｏ
　ｌ　６ｒｓｐｅｃｋｌｅｓ）　、泡立て増進剤または
抑泡剤、耐食剤、染料、充填剤、殺菌剤、ｐＨ調整剤、
非ビルダーアルカリ性源などが挙げられる。

エンドグリコシダーゼプラス抗菌剤 ■型エンドグリコシダーゼのうち、エンド−βＮ−アセ
チルグルコサミニダーゼＨ，ＤＳＦおよび／またはＰＮ
Ｇａｓｅ　　Ｆが、抗菌組成物を処方するのに且つ本発
明の抗菌法で使用するのに好ましい。エンド−Ｈが、最
も好ましい。

■型エンドグリコシダーゼを単独で使用する時には、■
型エンドグリコシダーゼは、その濃度が抗１カ効果を生
ずるように処方する。抗菌組成物が少なくとも２種の異
なる成分、即ち、■型エンドグリコンダーゼおよび１種
以上の抗菌剤からなる時には、成分の各々は、抗菌効果
を生ずるのに十分な濃度で存在する。前記組成物中の少
なくとも１種の成分の量は、一般に、同様の組成物で単
独で使用するならば、成分が同じ抗菌効果を生ずるのに
必便とされる量よりも少ない。

ここで使用する「抗菌効果」は、単独または抗菌剤から
なる第二成分との組み合わせてのＨ型エンドグリコンダ
ーゼと接触する時に微生物の除去、殺すこと、増殖抑制
、全体の形態の変化、プロトプラスト形成および／また
は細胞壁の分解を包含する。

ここで使用する「抗菌ｌ去」は、抗菌効果を生ずる方法
を意味する。本発明の１アスペクトにおいては、抗菌ｌ
去は、微生物を殺すこと、微生物増殖の抑制、および／
または微生物の全体の形態の変化を生ずる。本発明の別
のアスペクトにおいては、抗菌法は、表面からの微生物
の除去を生ずる。表面から微生物を除去するための抗菌
法においては、表面は、■型エンドグリコシダーゼで処
理した直後に追加の抗菌剤で処理するよりもむしろ、抗
菌剤および■型エンドグリコシダーゼで同時に処理する
ことか好ましい。抗菌法の若干の応用においては、組み
合わされた抗菌効果は生ずることがあり、例えば、殺す
ことおよび／または増殖抑制は、表面からの微生物除去
との組み合わせて生ずることかある。

ここで使用する「抗菌組成物」は、少なくとも２種の成
分：■型エンドグリコシダーゼ、および抗菌剤からなる
異なる成分を含有する組成物を意味する。かかる抗菌組
成物は、■型エンドグリコシダーゼおよび抗菌剤の星お
よび選択に応じて可変の抗菌効果を有する。観察された
抗菌効果は、微生物を殺すことおよび／または微生物増
殖の抑制、表面からの微生物の除去および表面への微生
物付着の防止を包含する。

ここで使用する■型エンドグリコンダーゼの「抗菌上有
効な濃度」は、一般に、抗菌効果を生ずるように微生物
と接触させるために単独で使用する■型エンドグリコン
ダーゼの最終濃度を意味する。

ここで使用する「抗菌剤」は、抗菌組成物の第二のｙ！
なる成分である。かかる抗菌剤は、一般に、抗生物質で
あり且つその例としては微生物を殺す薬剤および微生物
増殖を抑制するものか挙げられる。かかる抗菌剤の例と
しては、殺細菌剤、殺真菌剤および殺藻薬（それらの各
々はそれぞれ細菌、！！閑頃または藻類を殺すかそれら
のす曽殖を抑制することかできる）か挙げられる。殺細
菌剤としてよ、クロル・＼キンシン、２．４．４′　−
トリクロロ−２′−ヒドロキシジフェニルエーテル、ト
リクロカルパン（Ｔｒｉｃｌｏｃａｒｂａｎｏ）　、ペ
ニシリン、テトラサイクリン、パンドラシン（Ｂａｃｊ
ｔｒａｃｉｎ　　）なとの化含物か挙げられる。殺真菌
剤としては、ナイスタチン（〜ν５ｔａｔｉｎｏ）　、
アンホテリシンＢ（八ｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ　　Ｂ＠
）　、ヘノミル（Ｂｅｎｏｍｙ　ｌ　＠　）、カプタン
（Ｃａｐｔａｎｏ）およびジクロラン（Ｄｉｃｈｌｏｒ
ａｎｏ）が挙げられる。抗菌剤の他の例としては、界面
活性剤安定性β−１，３−グルカナーセ、リゾチーム、
プロテアーゼ、キチナーゼなとの界面活性剤安定性抗菌
酵素、当業者に既知の陰イオン界面活性剤、非イオン界
面活性剤、双性界面活性剤、両性界面活性剤、陽イオン
界面活性剤などの洗剤界面活性剤が挙げられる。後者は
、抗菌効果を生ずるのに十分な量で使用すべきである。

一般名称または商標によって同定される前記抗菌剤は、
メルク・インデックス、第１０版（１９８３）（メルク
・エンド・カンパニー・インコーポレーテット、ニュー
シャーン−州う−ウエイ）に同定のような組成物である
。

抗菌組成物の第一成分と異なる■型エンドグリコシダー
セは、抗菌剤としても使用してよい。かくて、■型エン
ドグリコシダーゼかそれら自体抗菌剤である程度で（例
えば、形態変化、プロトプラスト形成などの抗菌効果を
生ずることかできる）、■型エンドグリコンダーゼは、
抗菌組成物を調製するために異なる■型エンドグリコシ
ダーゼと組み合わせてもよい。それゆえ、抗菌組成物は
、■型エンドグリコシダーゼを含まない１種以上の抗菌
剤の有無で１種以上の異なる■型エンドグリコンダーゼ
を含んでもよい。

ここで使用するのに好ましい抗菌剤は、クロルヘキン〉
ン、２，４，４′　−トリクロロ−２′ヒドロキンジフ
エニルエーテル、トリクロカルパン０、ナイスタチン■
、アンホテリノンＢｏ、抗生物質、陰イオン洗剤界面活
性剤および非イオン洗剤Ｗｍ活性剤である。界面活性剤
安定性抗菌リゾチームは、本願と同日出願の同時係属米
国特許出加「成るリゾチームおよびエンドグリコシダー
セを使用する古注および組成物」に開示されている。他
のりゾチーム、例えば、鶏卵白りゾチームは、より低い
程度であるか抗菌効果を生するためにエンド−Ｈと併用
された（得られた結果は変動する）。

本発明の抗菌組成物および方性は、グラム陽性菌、グラ
ム陰性菌、真菌類、藻類を含めた広範囲の微生物に対す
る抗菌効果を生することができる。

かかる細菌としては、大腸菌、ストレプトコッカス・ミ
ュータンズ、表皮ブドウ球菌、および黄色ブドウ球菌か
挙げられる。かかる真菌類としては、カンジダ、サツカ
ロミセスなどの酵母、および種および糸状菌、例えば、
麹カビ（＾ｓｐｅｒｇｉ　ｌ　１ｕｓ）、スポロボミセ
ス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ）、バシデイオポラ
ス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）　　エントモフトラ（
Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ）か挙げられる。

■型エンドグリコンダーゼ（例えば、エンドＨＳＤ、Ｆ
および／またはＰＮＧａ　ｓ　ｅ　　Ｆ）を抗菌剤と組
み合わせる特定の利点は、抗菌効果を生ずるのに抗菌剤
か少なくてすむことである。本発明の若干のアスペクト
においては、■型エンドグリコシダーゼと併用する時の
抗菌剤は、表面に結合された微生物の除去またはかかる
表面への結合の防止からなる抗菌効果を生ずる。他のア
スペクトにおいては、微生物生存度または微生物形態に
対する否定的効果がある。

■型エンドグリコシダーゼおよび抗菌剤での１回以上の
表面処理は、処理にさらされた表面への微生物の更なる
増殖または結合または付着を防止するために定期的に行
うことかできる。

■型エンドグリコシダーゼのうち、エンド−Ｈ１Ｄ％Ｆ
および／またはＰＮＧａｓｅ　　Ｆが、好ましい。これ
らのうち、エンド−Ｈが最も好ましい。

一般に、抗菌剤と併用するのに抗菌上有効な量の■型エ
ンドグリコシダーゼは、エンド−Ｈ，Ｄ。

Ｆおよび７／またはＰＮＧａｓｅ　　Ｆ約１〜１２００
ｐｐｍ、好ましくはエンド−Ｈ約１〜１２００ｐｐｍ、
より好ましくはエンド−Ｈ約２０〜１１０００ｐｐ、最
も好ましくはエンド−Ｈ約５０〜４００ｐｐｍである。

使用量は、処理の種類および処理すべき表面または微生
物への露出量に依存する。一般に、使用する抗菌剤の種
類に依存する有効量の抗菌剤は、クロルヘキシジンまた
は２．４．４′−）ジクロロ−２フーヒトロキンンフエ
ニルエーテル ｐｐｍ，好ましくは２〜１２００ｐｐｍ，最も好ましく
は約５〜３５０ｐｐｍ、またはナイスタチンｏＯ，５〜
１００ｐｐｍである。

■型エンドグリコシダーゼが微生物を殺し且っ／または
抑制するために単独で使用する時には、実質上より多く
の■型エンドグリコシダーゼの使用が、一般に必要とさ
れる。例えば、エンド−Ｈ約１００ｐｐｍ　〜１０００
ｐｐｍは、かかる濃度にさらされた酵母細胞の生存度を
実質上減少することを示した。しかしながら、酵母をエ
ンド−Ｈ１００ｐｐｍ未満にさらした時には、生存度の
有意な減少が観察されなかった。酵母生存度に悪影響を
及はすのに必要なエンド−Ｈの下限はまた確認されてい
ないが、抗菌上有効な濃度の下限は、１０〜１００ｐｐ
ｍであると信しられる。同様の量のエンド−Ｈは、藻類
、真菌類なとの他の微生物を殺し且つ／または抑制する
のに有用であると信じられる。抗菌剤と併用しない時に
、これらの生物および他のもの、例えば、細菌に対する
エンド−Ｈおよび他の■型エンドグリコシダーゼの正確
な効果は、また確認されていない。しかしながら、かか
る生物に対して使用するための■型エントグリコシダー
ゼの抗菌上有効な濃度の範囲は、普通に確認できる。

本発明の抗菌広および組成物は、広い応用性を有し且つ
パーソナルケア、健康ケアおよび家庭クリーニングおよ
び工業クリーニング用抗菌法および組成物を包含する。

かくて、かかる方法および組成物は、抗菌洗口料、歯み
がきまたは義歯クリナー、並びに抗菌肢体または固体ハ
ンドまたはボディー石鹸、抗アクネ薬、制臭剤、シャン
プーおよびフェースクリームおよび傷を洗浄するか感染
を抑１りするための組成物を処方し且つ使用するために
使用してもよい。典型的家庭応用としては、肢体石鹸、
硬質表面クリーナー、液体洗液洗剤、粒状洗濯洗剤なと
の抗菌クリーニング製品が挙げられる。また、ヘビーデ
ユーティ−抗菌洗剤組成物は、工業用途のために処方し
てもよい。

クロルヘキシジンは、有効な口腔抗菌剤であり且つ両市
用で使用するのに好ましい。２４４′　−トリクロロ−
２′　−ヒドロキンジフェニルエーテルは、チバーガイ
ギーからイルガサン■ＤＰ３００として人手でき且つパ
ーソナルケアおよび洗濯応用で有効な広スペクトル抗菌
剤である。

センサントからのトリクロカルパン■は、固形石鹸で有
用な静菌薬である。伝統的抗生物質も、ここで追加の抗
菌剤として使用できる。最後に、界面活性剤安定性抗菌
酵素は、両市用およびシャンプーおよび他の界面活性剤
含有処方物の保存のために使用できる。好ましい界面活
性剤安定性抗菌酵素は、前記の同時係属の米国特許出願
に開示のリゾチームである。抗菌酵素の界面活性剤安定
性は、例えば、代表量のアルキルエーテルサルフェトま
たは線状アルキルベンセンサルフェートの存在下での保
持活性によって、ここでは評価できる。

抗菌組成物は、抗菌洗口料、歯みかきまたは義歯クリー
ナーとして処方してもよい。抗菌効果を生するための（
例えば、口腔中の天然または合成軟質および／または硬
質表面への微生物結合を除去するか防止し、または口腔
中で微生物を殺すか増殖を抑制するための）微生物の処
理は、本質上抗菌洗口料ですすぎ、歯を抗菌歯みがきで
クリーニングし、且つ／または義歯を抗菌義歯クリーナ
ーでクリーニングすることからなる。本発明の抗閑洗口
事４、南みかきまたは義歯クリーナーは、好ましくはエ
ンド−Ｈｌおよび抗菌剤としてのクロルヘキシジンおよ
び／または界面活性剤安定性抗菌酵素を含む。クロルヘ
キシジンを使用する場合には、抗菌虎口料、歯みがきま
たは義歯クリーナは、好ましくはエンド−Ｈ約５０〜１
２００ｐｐｍおよびクロルヘキシジン約５０〜３５０ｐ
　ｐ　ｍを含む。界面活性剤安定性抗菌酵素を使用する
場合には、抗菌洗口料、南みかきまたは義歯クリーナー
は、好ましくはエンド−Ｈ約５０〜１５　Ｃ〕ｐ　ｐ　
ｍおよび界面活性剤安定性抗菌酵素約５０−１，０００
ｐｐｍを含む。

また、抗菌組成物は、抗菌パーソナルケアまたは家庭ク
リーニング製品として処方してもよい。

かかる製品においては、エンド−Ｈは、好ましくはｉＨ
＆Ｈｌ〜１２００ｐｐｍで使用される。これらの製品で
使用するための抗菌剤は、好ましくはクロルヘキシジン
、最も好ましくはＬ農度約１５０〜１２００ｐｐｍのク
ロロへキシジン、または２゜４．４′　−トリクロロ−
２′−ヒドロキシジフェニルエーテル、最も好ましくは
濃度的２〜５００ｐｐｍの２．４．４’　−トリクロロ
−２′−ヒドロキシジフェニルエーテルである。好まし
いパーソナルケアまたは家庭クリーニング製品は、液体
ハンド石鹸、硬質表面クリーナー、洗濯洗剤およびシャ
ンプー（後述）である。

好ましい抗菌液体ハンド石鹸は、エンド−Ｈ約５０〜４
００ｐｐｍ、２，４．４’　−トリクロロ２′　−ヒド
ロキシジフェニルエーテル約５〜１１００ｐｐ、および
好ましくは洗剤界面活性剤約１〜４０重量％を含む。好
ましくは洗剤界面活性剤（好ましくは陰イオン界面活性
剤、非イオン界面活性剤、双性界面活性剤、両性界面活
性剤および陽イオン界面活性剤からなる群から選ばれる
）約２〜２０重量％、最も好ましくは約３〜１０重量９
゜か使用される。肢体ハンド石鹸は、エモリエント（約
３０重量％まで）および微量の香料、着色剤、溶媒、お
よび乳白剤を更に含むことができる。

本発明の抗菌硬質表面クリーナーは、ガラスクリーナー
、研磨硬質表面クリーナー、磨きクレンザ−１または便
器クリーナーであることができる。

これらは、ハイポクロライド発生漂白剤および他のエン
ドグリコシダーゼ不相容性成分を実質上含むべきてはな
い。好ましい硬質表面クリーナーは、約１００〜１１０
００ｐｐのエンド−Ｈおよび抗菌剤、および洗剤界面活
性剤約０．１〜２０重量％を含む。洗剤界面活性剤（好
ましくは陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、双
性界面活性剤、両性界面活性剤および陽イオン界面活性
剤からなる群から選ばれる）約２〜１０重量％が最も好
ましい。本発明の抗菌硬質表面クリーナーは、場合によ
って、研磨剤、ビルダー、希釈剤、溶媒、沈殿防止剤（
例えば、粘土、カルボキシメチルセルロース、およびポ
リアクリレート）、香料および／または着色剤を更に含
む。

本発明の抗菌洗濯洗剤は、■型エンドグリコシダーゼお
よび抗菌剤に加えて、好ましくは洗剤界面活性剤（好ま
しくは陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、双性
界面活性剤、両性界面活性剤および陽イオン界面活性剤
からなる群から選ばれる）約１〜９９重量％、より好ま
しくは約５〜６０重量％、最も好ましくは約１０〜４０
重量％を含む。好ましい肢体または粒状抗菌洗濯洗剤は
、エンド−Ｈ約２〜１０重量ｍ、２，４．４’トリクロ
ロ−２′−ヒドロキシジフェニルエーテル約２．５〜４
０ｐｐｍ、および洗剤界面活性剤約１〜９９重量％、好
ましくは約５〜６０重量％を含む。本発明の抗菌洗濯洗
剤は、場合によって、ビルダー、香料、漂白剤、希釈剤
、抑泡剤、着色剤、増白剤、汚れ沈殿防止剤、再付着防
止助剤、柔軟剤、および／または汚れ放出剤を更に含む
。

ここで使用するための抗菌シャンプーは、好ましくは、
エンド−Ｈ１抗菌剤、および洗剤界面活性剤（好ましく
はラウリルサルフェート、イソエチオネート、アシルア
ミドベタイン、アルキルグリセリルエーテルスルホネー
ト、およびアルキルエーテルサルフェートからなる群か
ら選ばれる）約５〜６０重量？６を含む。任意成分は、
泡立て増進剤、コンディショナー、染料、着色剤、香料
および／またはふけとり剤である。

また、本発明の抗菌組成物は、植物表面の処理用防腐剤
または微生物防除剤の形態であってもよい。果物または
野菜の表面用防腐剤または微生物防除用作物上に適用す
べき抗菌製品が、好ましい。

後者は、好ましくは、微生物増殖の防除および防止のた
めにトウモロコシ、柑橘類、小麦、夕ノくコ、大豆、ト
マト、イチゴなどの作物上に噴霧すべき溶７夜の形態で
ある。

下記のものは、例として提示するものであって、本発明
の範囲を限定するものとは解釈すべきではない。

例１ 布帛からの血液および糞便の除去 加瓜（約３７℃）洗浄サイクルを使用して、血液および
糞便で汚れた別個の（綿布帛）見本を自動洗濯機中で市
販の洗剤で洗浄した。次いで、見本をすすぎ、風乾した
。次いで、見本を試験管中で３７℃において５０　ｍ　
Ｍ　トリス−ＨＣＩ（ｐＨ７，０）０．７５ｍ１中の各
種の量および種類のエンドグリコシダーゼ〔（エンド−
Ｄ（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカル）０．
００５Ｕ。

またはエンド−Ｈ（ベーリンガー・マンＩ＼イム・バイ
オケミカル、カタログＮｏ、　７５２　９６７のＳ。

グリセウスから）およびＮ−グリカナーゼ（ＰＮＧａｓ
ｅ　　ＦまたはペプチドエンドグリコシダーゼＦ）ゲン
ザイム０．２５Ｕ、マサチュセッツ州ボストン〕と共に
３０分間インキュベートした。コントロールは、緩衝戒
を含有するが、エンドグリコシダーゼを含有しなかった
。インキュベーション期間の終わりに、ズブチリシンＢ
ＰＮ’　　８０μｇ／ｍｌを含有する洗剤溶液〔１Ｍト
リス−ＨＣｌ　（ｐＨ７，５）中に染料、香料、酵素ま
たは増白剤を含有しない市販の液体洗剤組成物の希釈度
１　：　１２５１０．２５ｍ１をコントロールおよび酵
素含有試料に加え、追加の２０分間インキュベートした
。この処理の終わりに、試験管を遠心分離し、上澄み液
中のタンパク質含量は２８０　ｎｍでの吸光度を測定す
ることによって求めた。各処理の場合に、検定時に見本
を含有しない反応ブランクを調製した。ブランク値を処
理試料の吸光度から引いて、インキュベーション時の２
８０ｒ＋ｍ吸収物質の放出を求めた。より高い吸光度は
、繊維からのタンパク質の増大された放出を表わす。結
果を表■に示す。

表■ コントロール　　　　０．　７９　２．　０７エンドー
Ｄ　　　　　　　Ｏ，８４２，１４エンド−ＨＯ，８３
２，１２ Ｎ−グリカナーゼ　　０．　７８　２．　１０これらの
結果は、第二酵素ズブチリシンとの組み合わせのエンド
グリコシダーゼ、エンド−Ｄおよびエンド〜Ｈかコント
ロールと比較して血液で汚れた見本からの２８ＯｎＩ１
１吸収物質の放出を増大することを示唆した。更に、エ
ンド−Ｄ１エンドＨおよびＮ−グリカナーゼは、すべて
糞便で汚れた見本からの２８０　ｎｍ吸収物質の放出の
増大を示した。

例２ 糞便じみの除去に対するエンド−Ｈの効果糞便で汚れた
ナイロン布帛製見本を使用することによって行った以外
は、本例は例１゛と同様である。見本を洗剤溶酸中で洗
浄し、すすぎ、乾燥した。洗剤は、酵素、増白剤、染料
または香料を含有しない市販の液体洗剤からなっていた
。１組の見本を別にし、「未処理コントロール」と称し
た。

これらの見本をエンド−Ｈで処理しない以外は、試料見
本と同し方法で処理した。試料見本を３７℃で緩衝酸（
１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６，０）中のエンド〜Ｈ
（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカル、カタロ
グＮｏ、　７５２９６７　）０．０１Ｕと共に１５分間
インキュベートした。

次いで、洗剤溶成（１，０Ｍトリス−ＨＣＩ（ｐＨ７，
５）中の希釈度１：１２５）０．２５ｍ１を加え、追加
の１５分間インキュベトした。終わりに、管を遠心分離
し、上澄み戒を吸引によって除去した。見本を風乾した
。見本からの繊維を走査電子顕微鏡測定によって調べた
後、臨界点乾燥した。糞便で汚れた洗剤洗浄見本の電子
顕微鏡写真を第６Ａ図に示す。わかるように、棒秋則閑
および粒状物が、布帛の表面上に見出される。第６Ｂ図
は、エンド−Ｈおよび洗剤で処理された見本を示す。こ
の図は、エンド−Ｈおよび洗剤か粒状物および細菌デブ
リの除去を容易にすることを実証する平滑な清浄布帛を
示す。

例３ 糞便しみに対するエンド−Ｆの効果 糞便で汚れた見本〔直径１インチ（約２．５４ｃｍ）：
ｌを洗剤溶成中て洗浄し、すすぎ、乾燥した。

見本を四半力に切断し、下記実験で使用した。

Ａ、　見本を３７℃において１０ｒｎＭ酢酸ナトノウム
緩衝戚（ｐＨ５，５）１ｍｌ中でエンド−Ｆ（ヘーリン
ガー・マンハイム・バイオケミカル）（０，１５単位）
の有無で３０分間インキュベートした。次いて、管を８
分間遠心分離した。上澄み岐を除去し、各々の吸光度を
２８０　ｎｍて測定した。Ａ２８０の変化は、適当なブ
ランク（例１参照）を引くことによって求めた。より高
い吸光度は、見本から放出された２　８　Ｏｒ＋ｍで吸
収するタンパク質または物質の量の増大を包含する。コ
ントロールの場合には、Ａ２８０の平均変化は、０．９
３てあった。エンド−Ｆで処理された見本の場合には、
Ａ２８０の平均変化は、１．０５であった。このことは
、エンド−Ｆか糞便しみ抜き効率を増大することを示し
た。

Ｂ、　見本を３７°Ｃにおいて１０ｍＭ酢酸ナトリウム
緩衝Ｈ（ｐＨ５，５）０．７５ｍ１中でエンド−Ｆ（０
，１５単位）の有無で１５分間インキュベートした。こ
の処理の終わりに、プロテアーゼズブチリシンＢＰＮ’
　　　１０Ｕｇを含有する洗剤溶酸ＣＯ，ＩＭトリス−
ＨＣｌ　　（ｐＨ７，５）中］０．２５ｍ１を加え、管
を３７℃において別の１５分間インキュベートした。終
わりに、管を遠心分離し、上澄み液を除去し、２８０ｎ
ＩＩｌでの吸光度を測定した。コントロール（エンド−
Ｆなし）の場合には、Ａ２８０−の平均変化は、１．０
８である一方、エンド−Ｆで処理された試料は、Ａ２８
０の変化１．３６を示した。このことは、エンド−Ｆの
効果が洗剤の存在によって高められることを示した。

Ｃ０洗剤溶液がズブチリシンの代わりに１０ｍＭ　　２
−メルカプトエタノールを含有する以外は、ｒＢＪと同
様の実験を行った。コントロールの場合のＡ２８０の平
均変化は１．０５である一方、エンド−Ｆで処理された
試料は、Ａ２８０の変化１．２４を生した。これらの結
果は、糞便じみを除去する、ジスルフィド切断試薬の存
在下におけるエンド−Ｆの能力を実証した。

Ｄ、　洗剤溶液か１０ｍＭ　　２−メルカプトエタノー
ルおよびズブチリシンＢＰＮ’　　　１０μｇを含有す
る以外は、ｒＢＪと同様の実験を行った。

コントロールの場合のＡ２８０の平均変化は１．１４で
ある一方、エンド−Ｆ処理試料は、Ａ２８０の変化１．
２９を有していた。これらの結果は、エンド−Ｆか糞便
じみを洗剤、プロテアーゼおよびジスルフィド切断試薬
（２−メルカプトエタノール）の存在下において除去す
ることができることを示す。

例４ エンド−Ｈと他の酵素との比較 ズブチリシンなどのプロテアーゼを使用しない以外は、
エンド−Ｈ（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカ
ル、カタログＮＱ、１００　１１９）および他のカルボ
ヒドラーゼ酵素を使用して例３のパートＢに記載の実験
と同様の実験を繰り返した。Ａ２８０の変化を監視し、
繊維を走査電子顕微鏡測定によって調べた。布帛からの
粒状および細菌デブリの除去は、エンド−Ｈおよび「溶
解酵素」　（シグマ・ケミカル・カンパニーから得られ
るプロテアーゼとグリコナーゼとの混合物）の場合には
見られた。しかしながら、酵素、リゾチーム、α−グリ
コシダーゼ、β−グルコシダーゼおよびβ−グルコリナ
ダーゼは、はとんどまたは何の利益も示さなかった（結
果を示さず）。前記酵素の有無での処理の場合のこの実
験の電子顕微鏡Ａｐｌ定の話果を第７Ａ図〜第７Ｈ図に
示す。第７Ａ図は、エンドグリコシダーゼで処理しなか
ったコントロールである。第７Ｂ図は、リゾチームて処
理された見本の電子顕微鏡写真である。第７Ｃ図は、エ
ンＦ’　−Ｈて処理された見本の電子顕微鏡写真である
。第７Ｄ図は、α−グルコシダーゼで処理された見本の
電子顕微鏡写真である。第７Ｅ図は、Ｓ−グルコシダー
ゼで処理された見本の電子顕微鏡写真である。第７Ｆ図
は、「溶解酵素」て処理された繊維の電子顕微鏡写真で
ある。第７Ｇ図は、５−グルコシダーゼで処理された見
本の電子顕微鏡写真である。第７Ｈ図は、キチナーゼて
処理された見本の電子顕微鏡写真である。わかるように
、エンド−Ｈで処理された見本（第７Ｃ図）は、糞便り
みを十分に取り除いた。同様の結果は、第７Ｆ図に示す
ように「溶解酵素」で処理された見本の場合に得られた
。

例５ 固体表面からの細菌の除去 固体表面（ガラス）からの細菌の除去に対するエンド−
Ｈの効果を試験するために、下記プロトコールを使用し
た。トリプトカーゼ大豆ブイヨン（ＴＳＢ）（１０ｍｌ
）にストック斜面培養からの微生物種（黄色ブドウ球菌
ＡＴＣＣ培養＃６５３８または大腸菌ＡＴＣＣ培養＃１
０５３６）を接種し、３７℃で一晩生インキユベートし
た。

ＴＳＢ約１０８個の細胞／ｍｌの懸濁液を調製し、この
懸濁液１００μＤをガラススライド上の食刻リング内に
入れた。各スライドを３７℃で乾燥インキュベーターオ
ーブン中でインキュベートした後、過剰の微生物溶液を
注ぎ出した。次いで、スライドを滅菌蒸留水１００μｇ
ですすいた。次いで、過剰の溶液および緩い生物を注ぎ
出した。

細菌をガラススライドに付着した後（３７℃で２時間以
上）、下記溶液１００μｇを別個のスライドに適用した
：　　（ａ）１０ｍＭアセテート緩衝ｄ（ｐＨ５，５）
、（ｂ）１０ｍ、Ｍアセテート緩衝液（ｐＨ５，５）十
エンド−Ｈ（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカ
ル、カタログＮｏ。

１００　　Ｃ１９）１ｐｐｍ、（ｃ）洗剤溶液、（ｄ）
洗剤溶酸＋エンド−Ｈｌｐｐｍ、一連のスライドを未処
理コントロールとして別にし、いかなる溶液ても処理し
なかった。次いて、非コントロールスライドを３７℃で
１５分間インキュベトした。インキュベーションの終わ
りに、溶液を注ぎ出した。次いて、スライドを滅菌蒸留
水１００μｇですすぎ、室温で風乾した。この処理後に
残る細菌を熱固定し、標準ダラム染色広によって染色し
た。次いて、スライドを光学顕微鏡（明段野イルミネー
ション、倍率１２５Ｘ）によって調へ、生物／視野の数
を求めた。２ｏ視野を各スライドの場合に計数し、それ
から平均生物／視野を計算した。

下記結果が、得られた。

Ａ、黄色ブドウ球菌の場合 （ｉ）処理なし く１１）緩衝液 （ｉｉｉ）緩衝酸＋エンド−Ｈ （Ｊν）洗剤溶液 （Ｖ）洗剤中エンド−Ｈ 〉１００生物／視野 〉１００生物／視野 ＜１０生物／視野 〉」００生物／視野 ＜１０生物／視野 これらの結果は、単独または洗剤との組み合わせでのエ
ンド−Ｈ緩衝液が洗剤単独での処理と比較してガラスス
ライド上に保持された黄色ブドウ球菌細菌の数を１０倍
減少したことを示す。

Ｂ、大腸菌の場合 （ｉ）処理なし　　　　　　＞１００生物／視野（ｊｉ
）緩衝液　　　　　　　＞　１００生物／視野（ｉｉｉ
）緩衝液＋エンド−Ｈ＞ｔｏｏ生物／視野（ｉｖ）洗剤
　　　　　　　　〉１００生物／視野（Ｖ）洗剤＋エン
ド−Ｈ＜１０生物／視野これらの結果は、洗剤との組み
合わせのエンドＨか洗剤単独での処理と比較してガラス
スライド上に保持された大腸菌の数を１０倍減少したこ
とを示す。

例６ 固体表面からの細菌の除去 ２種の結成産生黄色ブドウ球菌培養を使用して、例５と
同様の実験を行った（ポリスチレン管に結合する能力に
よって測定）。顕微鏡スライドは、ネールポリッシュを
有する２個のリング（直径１．７ｃｍ）を成形すること
によって修正した。生物の一晩の培養を１％ペプトン溶
液で１：１０に希釈した。希釈された培養（１００μＤ
）をリングに入れた。スライドを１５０ｃｍのペトリ皿
に入れ、３７℃でインキュベートした。２時間インキュ
ヘーンヨン後、スライドを蒸留水ですすぎ、例５と同様
に３種の異なる条件（Ａ、酢酸ナトリウム緩衝液、Ｂ　
洗剤、Ｃ１洗剤プラスエンド−Ｈ１μｇ　／　ｍｌ　）
で処理した。エンド−Ｈは、Ｓ、ブリカタスからエンド
−Ｈを産生ずるために形質転換された大腸菌から得られ
た。１５分の終わりに、インキュヘーションスライドを
蒸留水ですすぎ、ダラム染色した。細菌の数を２０視野
の場合に顕微鏡／１００Ｘ視野下で計数した。結果を細
胞／視野の平均数として表現する。

条件　　　　　　　培養Ｉ　　培養■ Ａ、コントロール　　　　　２３　　２０２Ｂ、洗剤　
　　　　　　　　　９　　５８Ｃ１洗剤＋エンド−Ｈ２
３３ 例７ 布表面からの細菌の除去 布表面からの細菌の除去に対するエンド＝Ｈの効果を試
験するために、下記プロトコールを使用した。黄色ブド
ウ球菌（ＡＴＣＣ６５３８）および表皮ブドウ球菌（Ａ
ＴＣＣ１５５）をルリアのブイヨン５ｍｌ中で別個に培
養し、３７℃で１２時間増殖した。次いて、培養を２個
の振とうフラスコ中の０．２Ｍクエン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ５，５）緩衝液３０ｍ１に細胞約１０３個／ｍｌで加
えた。接種後に、１２個の布見本Ｃｏ、５Ｘ０．５イン
チ（約１２．７Ｘ１２．７ｍｍ）の綿見本〕もフラスコ
に加えた。３７℃で穏やかな回転下に（１５０ｒｐｍ）
２時間インキュベーション後、見本を滅菌管に移し、０
．２２μ濾過によって予め滅菌された２００ｍＭクエン
酸ナトリウム（ｐＨ５，５）からなる緩衝液で３回洗浄
した。次いて、６個の見本をサイトレート緩衝Ｗｃ　３
０　ｍｌ中にエンド−ＨＯ，５ｍｇ／ｍｌを含有する振
とうフラスコに加え、６個の見本をコントロールとして
サイトレート緩衝液のみを含有する振とうフラスコに加
えた。エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスエンドーＨを産生
ずる大腸菌から得られた。３７℃で穏やかな回転下に（
１００ｒｐｍ）１．５時間インキュベーション後、見本
を滅菌管に移し、前記のように洗浄した。次いて、見本
をトリブチカーゼ大豆寒天プレート上に注意法く塗布し
、見本を覆うのに十分な肢体トリピチカーゼ大豆寒天を
上に置いた。プレートを乾燥した後、３７℃で１８時間
インキユヘートし、切開スコープを使用して、布表面上
の黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌とのコロニーを計数
した。

下記結果が、得られた。

Ａ、黄色ブドウ球菌の場合 コントロール　見本当たりコロニー　１０３＋／−２４
エンド−Ｈ見本当たりコロニー　５３＋／−１８エンド
−Ｈ処理による細菌コロニーの減少率４９９６゜ Ｂ１表皮ブドウ球菌の場合 コントロール　見本当たりコロニー　５７＋／−１１エ
ンド−Ｈ見本当たりコロニー　１Ｂ４／−１０エンド−
Ｈ処理による細菌コロニーの減少率７２％。

これらの結果は、エンド−Ｈ処理が布表面に付着した細
菌の数を顕著に減少させることを示す。

例８ エンド−Ｈの細菌への結合 下記実験は、■型エンドグリコシダーゼ、エンド−Ｈが
細菌黄色ブドウ球菌およびストレプトコッカス・ミュー
タンズ上の表面成分と相互作用するかどうかを確認する
ために実施した。かかる相互作用は、検出された。ここ
では完全には特徴づけられないが、この相互作用は、既
知ではなく且つ表面からかかる細菌を除去するエンド−
Ｈの前記能力の基準を構成することがある。

Ｒ，Ｊ、　　ｌ−リンプル等（１９８５）　、　Ｊ、　
Ｂｊｏｌ。

ＣｈｅＩｌｌ、、２６０．５６３８−５６９０に記載の
方法を修正することによって精製された形質転換大腸菌
からのエンド−ＨをＴ、Ｖ、アップダイクおよびＧ、　
Ｌ、ニコルソン（１９８６）　、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉ
ｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　　１２１　、　７１７−７
２５に記載の方法に従ってビオチンで標識した。かかる
標識後、エンド−Ｈは、糖タンパク質オボアルブミンと
の反応性の大部分を保持した。

ルリアのブイヨン中で増殖した黄色ブドウ球菌（ＡＴＣ
Ｃ６５３８）およびデイフコ・プレイン・ハート・イン
ヒユージョン培地（Ｄｉｒｃｏ　ＢｒａｉｎＨｅａｒｔ
　Ｉｎｆｕｓｉｏｎ　ｍｅｄｉａ）中て増殖したストレ
プトコッカス・ミュータンズ（ＡＴＣＣ２７６０７）の
−晩培養を遠心分離し、２００ｍＭ、クエン酸ナトリウ
ム（ｐＨ５，５）緩衝戒て３回洗浄し、同し緩衝液中で
細胞約１０９個／ｍｌの濃度に懸濁した。アリコート０
．５ｍｌを３１．５ｍｌのエソベントルフ（Ｅｐｐｅｎ
ｄｏｒｒ）管に入れ、各種の条件および時間下でイノキ
ュベートした。

管　　細胞 ０．２Ｍ ２％ＢＳＡ　　ビオチン化　クエン酸 エンド−Ｈナトリウム ｐＨ５，５ インキュベーション 時間（分） 遅速ロッカーを使用して、インキュベーションを室温で
２分または３０分間行った。トリス緩衝化食塩水中で希
釈されたＢＳＡ　（ウシ血清アルブミン）をコントロー
ル溶酸として使用して、細胞に結合する非特異性タンパ
ク質を防止した。インキュベーション後、管を遠心分離
し、上澄み肢を捨てた。２％ＢＳＡ溶液での２回の細胞
洗浄は、ＢＳＡ　　１、Ｏｍｌを細胞に加え、よく渦巻
き、遠心分離し、上澄み液を捨てることによって行った
。

洗浄された細胞にストレブタビジンーＨＲＰ　（ストレ
ブタビジン標識ホースラデイシュペルオキシダーゼ、カ
ーケガード・エンド・ぺり−・ラボラトリーズ・インコ
ーホレーテッド）０．５ｍｌを使用し、室温で３０分間
インキュベートした。管を再度遠心分離し、前記のよう
に洗浄した。細菌細胞に結合するエンド−Ｈの検出は、
ＨＲＰ−ストレブタビジン（これは細胞に結合されたビ
オチン化エンド−Ｈに非常に堅く結合するであろう）の
検出によって確認した。ＨＲＰ検出は、過酸化水素を含
Ｈするサイトレートホスフェート緩衝酸中て希釈された
ＨＲＰ基質ＯＰＤ　（ｏ−フエニレノンアミン）０．５
ｍｌを加えることによって確認した。ＯＰＤを加えてか
ら１分後に、色原体発生を２Ｍ　Ｈ２ＳＯ４て消した。

細胞を遠心分離腰上澄み戚を４９０ｎｍて読んた。

下記結果か得られた。

茶色ブドウ球菌の場合 コントロール エンド−Ｈ，２分 エンド−Ｈ１３０分 ＯＤ４９０ｎｍ Ｏ９１３ １、８９ １，９０ ストレプトコッカス・ミュータンズの場合０Ｄ４９０ｎ
ＩＢ コントロール　　　　　　　　　０．１８エンド−Ｈ，
２分　　　　　　　３．７６工ンドーＨ１３０分　　　
　　　３，８０これらの結果は、細菌黄色ブドウ球菌お
よびストレプトコッカス・ミュータンズへのエンド−Ｈ
の結合があることを示す。データは、結合するエンド−
Ｈの大部分が細胞との接触後最初の２分以内で生ずるこ
とを示す。ストレプトコッカス・ミュータンズの場合に
得られたより高い吸光度は、より高い水準のエンド−Ｈ
結合を示すことかある。

例９ 本発明のへビーデユーティ−液体洗濯洗剤組成物は、次
の通りである。

７エチレントリアミン五酢酸ナトリウム０．３０ 前記成分を単一攪拌機を有するｌ見合タンクに現われる
順序で加える。プロテアーゼ酵素、染料および香料を加
える前に、混合物のｐＨは、２０℃の水中の１０重量％
溶液がｐＨ約８．５を有するように調整する。

この組成物は、プロテアーゼ含有洗剤および／またはア
ミラーゼ含有洗剤と比較してさえ、炭水化物含有しみの
優れたクリーニングを与える。

水酸化カリウム 水酸化ナトリウム １．８０ ３．８５ キ酸カルシウム キ酸ナトリウム Ｃ１２アルキルトリメチルアンモニウムクロリトテトラ
エチレンベンタアミンエトキンレート＜１５−１８）水 東ｔ４ 香料 プロテアーゼ★★ エンドグリコンダーゼＨ ０，１２ ０，８６ ０，５０ ２，００ ５１２ ０，０８ ０，２５ ０，１２５ ２０００ｐ叩 註 例１０ 本発明のヘビーデユーティ−成体洗濯洗剤組成物は、次
の通りである。

ジエチレントリアミン五酢酸ナトリウム０．３０ 水酸化カリウム 水酸化ナトリウム １．８０ ３．８５ ギ酸カルシウム ギ酸ナトリウム ０．１２ ０．８６ 前記成分を単一攪拌機を有する混合タンクに現われる順
序で加える。プロテアーゼ酵素、染料および香料を加え
る前に、混合物のｐＨは、２０℃の水中ρ１０重量％溶
肢がｐＨ約８．５を有するように調整する。

この組成物は、炭水化物含有しみ、特に糞便じみの優れ
たクリーニングを与える。

エンド重量を０．４０■／ｍｌに減少し、水を３５．７
２に減少し且つ１％イルガサン（チバーガイギー製の抗
菌剤）を加える時に、本発明の他の組成物か得られる。

水 染料 ３７．１２ ０．０８ エンドグリコンダーゼＨ ２５ｐｐｍ 註 （★）アルコールおよびモノエトキシ化アルコールを除
去（★★）ｌ占性酵詣ｍｇ／ｇ（属性酵素３４　ｍｇ／
ストックｇ）例１１ 本発明の肢体石鹸組成物は、次の通りである。

成分　　　　　　　　　　　　　活性成分重量％ラウリ
ル硫酸アンモニウム　　　　　６．０ラウリルサルコシ
ン酸ナトリウム　　　５．７ココアミドブロビルベタイ
ン　　　　　６，３ココナツツ脂肪酸　　　　　　　　
　１．０第四級アミン　　　　　　　　　　　　０．３
エチレニジアミン四酢酸　　　　　　０．２硫酸アンモ
ニウム　　　　　　　　　　０．４香料　　　　　　　
　　　　　　　　　０２５カトン　　　　　　　　　　
　　　５ｐｐｍ水　　　　　　　　　　　　　　７２．
０エニドグリコシダーセＨ１０００ｐｐｉトリクロカル
パン　　　　　　　　　　１．５０前記成分を単一攪拌
機を有する混合タンクに上に現われる順序で加える。

この組成物は、グリコシダーゼを含有しない抗菌石鹸と
比較した時にさえ、普通の皮膚フローラの除去用抗開作
用を与える。

例１２ 本発明の硬質表面磨きクレンザ−は、次の通りである。

成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％偽稠度流
体相（比重１．　１）　　　　　　　９３．５バラサム
ＮＡＳ−１００４，２５ （ナトリウムサポナイト粘土） ピロリン酸四カリウム　　　　　　　　　　６．００リ
ン酸三カリウム　　　　　　　　　　　　２．００次亜
塩素酸ナトリウム漂白剤　　　　　　０．９０ラウリル
アルキル硫酸ナトリウム　　　　　０．２５界面活性剤 染料および香料　　　　　　　　　　　　０．２６エン
ドグリコシダーゼＨｌｏ００ｐｐｍ軟水　　　　　　　
　　　　　　　　　　７１１１．８６研磨剤（膨張パー
ライト、比重２．０、平　５．０均粒径５０μ） ヘルツフラット１３５充填剤（粉末状ポリ　　１，５０
プロピレン、比重０，９、平均粒径３５μ）研磨剤／充
填剤の平均粒径の比率＝Ｌ４３・ｌ組成物は、次の通り
調製する。偽稠度流体相を形成するのに必要な程度で比
較的高い剪断攪拌を使用して、ピロリン酸四カリウム、
リン酸三カリウム、ナトリウムサポナイト粘土、染料、
香料および脱イオン水を混合する。次いで、アルキルサ
ルフェート界面活性剤をこの混合物にブレンドした後、
ポリプロピレン充項剤物質をブレンドする。

次亜塩素酸ナトリウムとパーライト研磨剤との別個の水
性スラリーを調製し、次いで、中位の剪断攪ＦＰ−下に
酸化しながら、偽稠度流体相にブレンドする。得られた
磨き組成物は、偽稠度であり、即ち、静止状態でケル状
であるが、剪断応力の適用によって容易に流動する。か
かる組成物は、硬質表面からのしみおよび汚れの除去に
特に有効である。

例１３ 本発明のシャンプー組成物は、 成分 アルキル硫酸アンモニウム （２９％水溶岐） 米国特許第４，３４５，０８０号明細書の例Ｉのジンク
ピリジンチオン結晶 ココナツツモノエタノールアミド エチレングリコールジステアレート クエン酸ナトリウム クエン酸 着色剤溶液 香料 エンドグリコシダーゼＨ 水 次の通りである。

量 ５５．２５％ ２．０ ３．０ ０ ５ ２ ０、Ｉ Ｏ１５ １０００ｐｐｍ 残部 １００．００％ 例１４ 本発明の制を干割スティックは、 して調製する。

成分 シクロメチコン 流体ＡＰ ステアリルアルコール ヒマンロウ タルク フルコニウム／アルミニウム／グリシ ジ複合体 芳香マスキンク剤 Ｃ２ｏアルコール ビリトキサールホスフェート エンドグリコシダーゼＨ 下記成分を利用 量 ４２．５５ ９９ １１．４９ ４９９ ６．９９ ６６７ ０．８０ ０．１２ １．００ ００ｐｐｍ 例１５ 本発明の液体石鹸組成物は、次の通りである。

活性成分 成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％ラウリル
硫酸アンモニウム　　　　　　　６，０アルキルサルコ
シン酸ナトリウム　　　　５．７ココアミドプロピルベ
タイン　　　　　　６．３ココナツツ脂肪酸　　　　　
　　　　　　１．０工チレンジアミン四酢ｍ　　　　　
　　　　Ｏ，２硫酸アンモニウム　　　　　　　　　　
　０．４香料　　　　　　　　　　　　　　　　　０，
２５染料　　　　　　　　　　　　　　　　　５ｐｐｍ
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　８０．１５エンド−Ｈ５０ｐｐｍ ２．４．４’　−１−ジクロロ−２′−ヒ　ｌ１００ｐ
ｐドロキシジフエニルエーテル 前記成分を単一攪拌機を有する混合タンクに上に現われ
る順序で加える。染料および香料を加える前に、混合物
のｐＨは、２０℃の水中の１０重λ％／３戚がｐＨ約６
．５を有するように調整する。

この組成物は、普通の皮膚フローラの除去用抗菌作用を
与える。

例１６ 本発明の硬質表面クレンザ−は、次の通りである。

活性成分 成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％ラウリル
アルキル硫酸ナトリウム　　　　０．５アルキル硫酸ナ
トリウム　　　　　　　　（１，５ブチルカルピトール
　　　　　　　　　　４．０重炭酸ナトリウム　　　　
　　　　　　　０．５クエン酸　　　　　　　　　　　
　　　　　０．０４ホルムアルデヒド　　　　　　　　
　　　０．０３香料　　　　　　　　　　　　　　　　
　　０．０５タルトレートモノ／ジスクンネート５．０
エンド−Ｈｌｏ００ｐｐｍ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
８８．４前記成分を単一攪拌機を有する混合タンクに上
に現われる順序で加える。香料を加える前に、混合物の
ｐＨは、２０℃の水中の１０重量％溶溶液ｐＨ約７を有
するように調整する。

この組成物は、硬質表面からの石鹸スカムおよびカビの
除去に有効であり且つエンドグリコシダーゼなしのクレ
ンザ−よりも効能がある。

例１７ 全果物、野菜または他の植物表面のクリーニングおよび
／または保存のために使用する組成物は、次の通りであ
る。

活性成分 成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％水　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９６，４
Ｃアルコールポリエトキシ　　　　０．１１２〜１３ レート（６，５） エンド−Ｈ３５００ｐｐｍ この組成物は、次の通り調製する。アルコールポリエト
キシレートおよびエンド−Ｈをそれぞれの量で水に混入
し、最終ｐＨを６〜７に調整する。

最終組成物は、全果物、野菜などの植物表面上に噴霧す
る時に、前記表面上の微生物増殖を防止する際に有用で
ある。

例１８ エンド−Ｈによる抗菌剤の殺細菌効果の増強大腸菌の一
晩培養を新鮮な栄養ブイヨンに希釈し、３７℃て４時間
増殖した。細胞を遠心分離によって得、０．２Ｍクエン
酸ナトリウム緩衝液（ＳＣＢ、ｐＨ５，５）中で洗浄し
た。遠心分離後、細胞をＳＣＢに再懸濁した。下記管（
２回の実験）を調製した。

クロルヘキシジ〉　　０μ、＊　　　　’ｔｏμｇ２０
０μｇ　ｌＯμｇエンド−Ｈ２００μｇ　　　　　　Ｏ
Ｈ２，０μｇ　１０μｐエンド−Ｈは、Ｓ、プリカタス
エンドーＨを産生ずる大腸菌からであった。容管に細胞
懸濁液７９０μＤを加え（最終容量は今や１ｍ１）、試
料１０μ２を０分コントロールとして取り出した。

管を３７℃で回転振とう機上でインキュベートし、工事
↓１０μｇを１時間および３時間で除去した。

アリコート１０μｇをＰＢＳ　（ホスフェート緩衝化食
塩水）９９０μＤと混合しく希釈度１Ｏ−２）、逐次Ｐ
ＢＳ中に更に希釈した（１：１０）（ＰＢＳ　　９００
μρ中１００μｇ）。各希釈溶液１０μｐをルリアーベ
ルタニ寒天プレート上に塗布した。プレートを３７℃で
一晩中インキユベートし、コロニーを計数した。管中の
コロニー形成細菌の数を施された希釈度に従って計算し
、この数の対数を更なるグラフおよび計算のために使用
した。

エンド−Ｈ ００ｐｐｍ クロルヘキシジン ０ｐｐｍ エンド−Ｈ＋ クロルヘキシジン ００ｐｐｍ ８．６４　　　８．５５（０，０９）　　８．５５（０
，０９）８．８０　　　４．４２（４，１５）　　２．
４４（６，５９）８．６１ ２．４０（６，１７）　　２．００　ＤＢ、５３）これ
らの結果を第８図にプロットする。わかるように、エン
ド−Ｈ２００ｐｐｍは、クロルヘキシジン５０ｐｐｍの
殺細菌効果を高める。

同様の結果は、１時間の期間にわたって測定した時にク
ロルヘキシジンおよびエンド−Ｈのわずかに累なる濃度
の場合に得られた。これらの結果を第９図に示す。わか
るように、エンド−Ｈ１４０ｐｐｍは、クロルヘキシジ
ン４０ｐｐｍの効能を高める。

この効果を更に研究するために、エンド−Ｈの濃度を変
えながら、クロルヘキシジン２０ｐｐｍ（最終濃度）を
使用して、同様の実験を実施した。

結果を第１０Ａ図および第１０Ｂ図に示す。これらのプ
ロットは、コロニー形成単位（ＣＦ　Ｕ）のｌｏｇの変
化を表わす。わかるように、比較的線形の関係は、エン
ｌ”−Ｈ約２８０ｐｐｍを通して加えられるエンド−Ｈ
の足間に存在する。エンドＨｉＱ度の更なる堆大は、ク
ロルヘキシジン２０ｐｐｍとの組み合わせてエンド−Ｈ
少なくとも１、０００　ｐ　ｐ　ｍを通して細菌生存度
に対する悪影響を高める。

例１９ 真菌類の生存度に対する単独および抗菌剤との矧み合わ
せてのエンド−Ｈの効果カンジダ・アルビカンス（Ｃａ
ｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）の対数期培養を増殖し
、新鮮な増殖培地中に希釈し、３７℃で攪拌下にインキ
ュベートしながら、エンド−Ｈｏ、１．１０．１００お
よび１ｏｏｏｐｐｍ　（最終濃度）で４時間処理した。

エンド−Ｈは、Ｓ、ブリカタスからエンド−Ｈを産生ず
るために形質転換された枯草菌からであった。希釈度１
倍、１０倍および１００倍を調製し、塗布して生存可能
な細胞計数を与えた。１つの場合には、エンド−Ｈ１０
ｐｐｍはインキュベーン５７１８時間後に生存度を約３
６％たけ減少したが、エンド−ＨＯ〜１０ｐｐｍは、細
胞生存度を有意には減少しなかった。しかしながら、エ
ンド−Ｈ１００ｐｐｒｒ＋〜１１０００ｐｐは、４時間
処理した時に、エンド−Ｈで処理しないコントロールと
比較して、回収された生存可能な細胞の数をそれぞれ約
５０％〜８８％たけ減少した。

別個の大騒においては、カンジダ・アルビカンスの培養
を増殖し、新鮮な培地中に希釈し、３７℃で攪ｒＰ下に
インキュベートしながら、エンドＨ０，１，１０，１０
０または１０１０００ｐｐ　Ｍｔ　Ｉ！　ｉａ度）に加
えてナイスタチン■２．５μｇ／ｍｌで１８時間処理し
た。希釈度１倍、１０倍］、００倍および１．０００倍
を調製し、塗布して生存可能な細胞計数を与えた。エン
ド−Ｈは、ナイスクチン　単独で得られたものと比較し
て次の通り回収される生存可能な細胞を減少した。

エレトーＨｐｐｍ　　　　　　　　減少率０　　　　　
　　　　　　　０％ ｌｐｐｍ　　　　　　　　　　６９％ １、０　ｐ　ｐ　ｍ　　　　　　　　　　９３％１１０
０ｐｐ　　　　　　　　　　　　　９９％わかるように
、エンド−Ｈｌｐｐｍ程度でもナイスクチン　の殺菌効
果を有意に高める一方、エンド−Ｈ１０ｐｐｍおよび１
１００ｐｐは、ティスタチン０処理単独を生き延びる真
菌類のはとんとすべてを殺す。

ｌａ度０．５μｇ／ｍｌのアンホテリシンＢｏを使用し
て、同様の実験を３時間実施した。結果は、次の通りで
あった。

エンド−Ｈｐｐｍ　　　　　生存度の減少率０ １　　　　　　　　１７％ １０　　　　　　　　　　５％ １００　　　　　　　　９６％ １０００　　　　　　　　　９４％ わかるように、エンド−Ｈ１１００ｐｐは、アンホテリ
ノンＢ　の殺菌効果を高める。

例２０ 単独またはリゾチームとの組み 合わせてのエンド−Ｈの抗菌効果 大腸菌の４８時時間状培養（ＡＴＣＣ ３１６１７）を使用して単独または洗剤および／または
エンド−Ｈとの組み合わせでのりゾチームムタノリシン
（シグマ・ケミカル・カンパニー）の効果を試験した。

エンド−Ｈは、Ｓ、プリカタスからエンド−Ｈを産生ず
るために”形質転換された大腸菌からであった。下記プ
ロトコールおよび結果が、３７℃で２時間処理した後に
得られた。

−（ト）巾寸いψトω０ わかるように、洗剤の有無で各種のｐＨでエンド−Ｈお
よびムタノリシンにさらされた細菌の全体の形態は、有
意に修正された。エンド−Ｈを単独または洗剤との組み
合わせで使用する時に、最も劇的な効果がｐＨ７で生じ
た。しかしながら、細胞生存度は、明らかには影響され
なかった。エニドーＨおよびムタノリシンは、緩衝液コ
ントロールと比較して塗布実験で得られたコロニーの数
を城少しなかった。

例２１ エンド−ＨおよびＰＮＧａｓｅ　　Ｆ によるガラス表面からの細菌除去 大腸菌（ＡＴＣＣ３１６１７）および表皮ブドウ球菌（
ＡＴＣＣ１５５）を使用してガラススライドに接種した
。各スライドは、２個の食刻円を含み且つ各々に大腸菌
または表皮ブドウ球菌を接種した。細菌を３７℃で２時
間インキュベートさせた。

蒸留水ですすいだ後、スライドを（１）ＰＢＳ緩衝戒、
（２）ＰＢＳ緩衝液中のエンド−Ｈ（１００ｐｐｍ）、
または（３）ＰＢＳ緩衝液中のＰＮＧａｓｅ　　Ｆ　（
１００ｐｐｍ）で処理した。

エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスエンドーＨを産生ずる大
腸菌に由来した。３７℃で３０分後、スライドを蒸留水
中ですすいだ。グラム染色後、スライドを光学顕微鏡で
ブライト視野オプティックスて読んだ。

緩衝液コントロールの場合には、スライドに残る細菌の
数は、１００個／視野よりも多かった。

エンド−Ｈで処理されたスライドは、はるかに少ない細
菌を含有していた。表皮ブドウ球菌の場合には、約１〜
３個の細菌のみが視野当たり観察された。大腸菌の場合
には、約５〜１０個が視野当たり観察された。ＰＮＧａ
ｓｅ　　Ｆで処理されたスライドの場合には、細菌の中
位の数が表皮ブドウ球菌と大腸菌との両方の場合に観察
された（約２０個／視野）。

これらの結果は、ＰＮＧａｓｅ　　Ｆがエンド−Ｈ程効
率的ではないかガラス表面から細菌を除去することがで
きることを示した。

例２２ エンド−Ｈを有する錠剤義歯クリーナー重炭酸ナトリウ
ム、過ホウ酸ナトリウム１水和物、潤石酸、トリポリリ
ン酸ナトリウム、スルファミン酸、ポリエチレングリコ
ール（分子量２０　０００）およびエチレンジアミン四
アセテートは、執風床中て６０〜６５℃において３０分
間流動化することによって別個に造粒する。次いて、か
かる粒状物は、他の成分とタンブル混合して「第−層」
混合物および「第二層」混合物を調製する。そして、「
第−層」混合物は、下記組成を有する。

重炭酸ナトリウム 酒石酸 一過硫酸カリウム スルファミン酸 ピロリン酸二ナトリウム 炭酸ナトリウム ポリエチレングリコール 硫酸ナトリウム ペパーミント粉末 二酸化ケイ素 ドデシルヘンセンスルホン酸す 重量％ ３０．００ ２３．００ １６．００ １００ ８．２０ ３．９０ １２．６０ ２．００ ２．５０ １．３０ トリウム　０５０ 「第二層」混合物は、下記組成を有する。

重量％ 過ホウ酸ナトリウム１水和物　　　　　３０．００−過
硫酸カリウム　　　　　　　　　　２８．００重炭酸ナ
トリウム　　　　　　　　　　　１３．３４トリポリリ
ン酸ナトリウム　　　　　　　１０．００重炭酸ナトリ
ウム／着色剤　　　　　　　４．００トリロン８　　　
　　　　　　　　　　　　３．００炭酸ナトリウム　　
　　　　　　　　　　３．００ポリエチレングリコール
　　　　　　　　２．５０二酸化ケイ素　　　　　　　
　　　　　　２００ペパーミント粉末　　　　　　　　
　　　１．５０ワサグエステル７　　　　　　　　　　
　０．７０ワサグエステル１５　　　　　　　　　　０
．７０硬化トリグリセリド　　　　　　　　　　０．５
０トデンルヘンゼンスルホン酸ナトリウム　０．４０ス
クシネート洗剤　　　　　　　　　　　０．３０ブルー
レークＮｏ、１　　　　　　　　　　　　０．０６エン
ドーＨ１，ＯＯｐｐｍ 錠剤は、次の通り調製する。３９個のステージヨシのホ
ーン（ＨＯＲＮ）回転錠剤化プレス中で圧縮する。圧縮
は、２段である。最初に、「第二層」、４色’ＩＩＡ　
Ａ物を充填によって非常に低い圧力（１０ｋＮ／錠剤）
に圧縮する。次いて、「第−層」、白色７昆ａ物を滴下
し、７０　ｋ　Ｎ／錠剤にプレスする。二のようにして
、錠剤４ｇを調製する（２．７ｇか青色、１．３ｇか白
色）。

錠剤を消費者によって水に溶解して、水中に入れられた
ＡＭを清浄化する。

例２３ 工；トーＨを有するライトクリーム ・Ｌ中油型［」やけどめ乳濁肢ヘースを化学名またはコ
スメテイック、トイツレトリー・エンド・フラグレ；ス
・アソシエーション（ＣＴＦＡ）名でりくされるド記成
分からＡ製する。

成分　　　　　　　　　　　　　重量９６水相 メチルパラベン（防腐剤）　　　　　　　０．２０パン
テチン（モイスチャライザー）Ｏ１Ｏカルボマー９３４
（増粘剤）　　　　　　０．０８水酸化ナトリウム、１
０％（中和剤）　　１．、ＯＯエンド−Ｈｌｏｏｐｐ［
ｌ 精製水　　　　　　　　　　　　　　残部１００％ 油相 重鉱油　　　　　　　　　　　　　　　　４．００ステ
アリン酸、２回プレス　　　　　　　３．００（陰イオ
ン乳化剤） コレステロール（補助乳化剤）　　　　　　１．　ｏ　
。

セチルアルコール（補助乳化剤）　　　　　１．８０ヒ
マシ／［ｔｌ（エモリエント）　　　　　　　　↓、０
０パルミチン酸セチル（エモリエント）　　　１．２０
オクチルジメチルＰＡＢＡ　（紫外線吸収剤）　　１．
４０プロピルバラヘン（防腐剤）Ｏ１Ｏ 機械的攪拌機を備えた混合容器において、水酸化ナトリ
ウムおよびエンド−Ｈ水溶液以外の水および水相成分を
加え、約７５〜８０℃に加熱しながら混合して均一な水
性分散液を調製する。次いて、水酸化ナトリウム溶成を
水相に加え、混入して酸性カルボマー増粘剤を中和する
。

別個の混合容器において、約８０〜８２℃に加熱しなが
ら、鉱油および油相成分を加え、混合して均一な油相を
調製する。高速機械的分散装置を使用して、加熱された
油相を加熱された水相にゆっくりと加える。均一な浦／
水乳濁戚が得られるまで、混合を続ける。乳濁液を室温
に冷却する。

所望ならば、水溶性染料などの任意の着色剤を好ましく
は約４５〜５０℃で乳濁液に混入し、芳香油を好ましく
は約３５〜４０℃で加える。エンドＨを約３５〜４０℃
て乳濁ｌ夜にｄ人する。

例２４ 豚の皮膚からの黄色ブドウ球菌の除去 培養０．１ｃｃを皮膚表面上に広げることによって、豚
の皮膚に黄色ブドウ球菌（コロニ１．２Ｘ１０７個／ｍ
１）を接種した。生物を室温で皮膚上に２時間セットさ
せた。次いて、皮膚の２片を下記のもので３０秒間処理
した。

（１）未処理コントロール （２）水単独 （３）１０％石鹸戚 （４）＃３千エンドーＨ（２０ｐｐｍ）（５）緩衝酸中
のエンド−Ｈ２０ｐｐｍエンドーＨは、Ｓ、ブリ力タス
からエンド−Ｈを産生ずるために形質転換された大腸菌
から得られた。処理後、試料を蒸留水中ですすぎ、２％
四酸化オスミウムに入れた後、ライター−ケレンベルガ
ー固定戒中で固定した。次いで、試料をオスミウムおよ
びチオセミ力ルビゾン中で交互に加工した。臨界点乾燥
後、すべての試料をＳＥＭで調べた。顕微鏡写真を撮影
した。

黄色ブドウ球菌コロニーは、未処理試料、水処理試料、
またはブレーン石鹸処理試料上で豊富に見出された。例
えば、液体ハンド石鹸での処理の効果を実証する第１１
図参照。エンド−Ｈ処理試料は、生物の有意な損失を実
証した。例えば、液体ハンド石鹸プラスエンド−Ｈて処
理した時の豚の皮膚からの黄色ブドウ球菌の除去を実証
する第１２図参照。

例２５ シャワーカーテンからのカビ除去 プラスチックシャワーカーテンを水道水で戊らし、暗所
に３週装置いた。その時間の終わりに、カビで覆われた
カーテンの小さい試料を下記のもので処理した。

（１）蒸留水 （２）＋ジョイ（Ｊｏｙ）洗剤２０００ｐｐｍ（３）−
エンド−Ｈ１１０００ｐｐ。

（４）未処理 エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスからエンド−Ｈを産生ず
るために形質転換された大腸菌から得られた。処理は、
室温で１０〜１５秒続けた。綿モツプでの処理後、シャ
ワーカーテンを拭き取った。

第１３図は、得られた結果を示す。未処理コントロール
（右下の写真−中心の写真の右下部）は、巨視的と共に
微視的に豊富なカビおよびべと病粒子を示した。

蒸留水コントロール（右上の写真−中心の写真の右上部
）は、粒子が依然として残り且つ変色が明らかであるが
、より少ない生物を示した。

ジョイ処理コントロール（左下の写真−中心の写真の左
下部）は、水処理試料よりも少ない生物を示したが、変
色は依然として明らかであった。

エンド−Ｈ処理試料（左上の写真−中心の写真の左上部
）は、生物と変色との両方を含まなかった。

例２６ 布帛からの細菌除去 布帛見本をペトリ皿の大きさに切断した。追加の布帛を
加えて５％布帛ロード（接種せず）に達した。見本をオ
ートクレーブ中で１５　１ｂｓ１２１℃で１５分間滅菌
した。１つの布帛ロードが、各処理に必要である。ガラ
スピーズ（４０ｇ）および０．２Ｍサイトレート緩衝液 （ｐＨ７，０）１００ｍｌを２５０ｍ１の三角フラスコ
に入れた。フラスコにゴム栓およびアルミニラム箔で栓
をし、オートクレーブ中で滅菌した。

大腸菌を新鮮な栄養ブイヨンに継代培養し、３７℃で４
８時間インキュベートさせた。半強度トリブチカーゼ犬
豆寒天プレー’Ｐ　（１０ｇ１５００ｍｌ）を調製し、
滅菌した。伶却後、テトラゾリウム（１ｍｌ／、Ｑ）を
加えた。

寒天プレートに次の通り接種した。

（１）４８時間培養からの系列希釈酸を調製した（１１
０、ペプトン水中で更に３個の管を通して１０倍の希釈
度）。

（２）その後、各見本に最終希釈Ｇ　２　ｍｌ（１０４
）を接種した。

（３）次いで、見本を３７℃で２峙間インキユヘートし
た（２個の見本／処理）。

インキュヘーンヨン後、見本を次の通り洗濯した。

洗浄 ２５０ｍ１の三角フラスコ（滅菌）中の滅菌０．２Ｍサ
イトレート緩衝戒（ｐＨ７，０）１００ｍｌ＋ガラスピ
ーズ４０ｇ＋第１４図に記載の処理剤（ＡＷＡはＳ、ブ
リ力タスからエンド−Ｈを産生ずるために形質転換され
た大腸菌からのエンド−Ｈである）。振とうしながら、
２個の接種見本＋５％布帛ロードを作るための滅菌見本
を９５°Ｆ（約３５．０℃）で１２分間洗浄した。

すすぎ 洗浄後、見本は、振とうしながら、滅菌２回蒸留／脱イ
オン水１００ｍ１＋ガラスピーズ４０ｇを２５Ｏｎ＋１
の三角フラスコ（滅菌）に室温で２時間加えることによ
ってすすいだ。

次いて、布帛見本をベトリ皿に入れ、テトラゾリウムを
有する１／２強度トリブチカーゼ大豆寒天３ｍｌを上に
置いた。４８時間インキュベーション後、コロニーを計
数した。

結果を第１５図に示す。これらの結果は、イルガサン＋
液体タイド２％がタイド単独と比較して細餉増殖の２１
０ｇ減少を与えることを示す。

しかしながら、エンド−Ｈ４０ｐｐｍの添加は、細菌増
殖の別のｌｏｇ単位を減少する。

例２７ 酵母に対するエンド−Ｈの効果 カンジダ・アルビカンズおよびサツカロミセス・セレビ
シアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ）のブイヨン培養（１８時間）を下記のもので処
理した。

（１）０．２〜１クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，
５） （２，Ｍ：１プラスエンド−Ｈ（Ｓ、ブリ力タスエンド
ーＨを産生ずる大腸菌から）２００ｐｐｍ処理は、３７
℃で２時間続けた。

処理後、各々のアリコートをホルムバー（ｆｏｒＩＩｌ
〜ａｒ）彼１２００メツシュ銅グリッド上に塗酊し、Ｔ
　Ｅ　Ｍによって調べた。検査の顕微鏡写真を撮影し、
第１５図および第１６図に提示する。

第１５Ａ図かられかるように、緩衝液単独で処理された
カンジダは、良好な形態状態であった。

第１５Ｂ図に示すように、エンド−Ｈで処理されたカン
ジダは、物質を迅速な速度で漏出し、構造体性を失った
。

緩面岐単独で処理されたサツカロミセスは、第１６Ａ図
かられかるように良好な形態状態であった。しかしなが
ら、エンド−Ｈで処理した時には、残るすべては、非常
に限定された膜状物質片であった。第１６Ｂ図参照。

例２８ 大腸菌の生存度に対するエン ド−Ｈとりゾチームとの効果 ラウリーブイヨン（Ｌ　Ｂ）中で一晩生増殖された大腸
菌に１２の培養をＬＢ中で１　：　１０００で希釈し、
３７℃で４時間再増殖した。細胞を遠心分離し、洗浄し
、０．１Ｍ酢酸ナトリウム（ＮＡ）緩衝液（ｐＨ５，５
）に再懸濁した。８個の管を次の通り設置した。

管番号　　　　１．２３．４５．６７．８細胞μｍ　　
　　　ｇｏｏ　　　８００　　８００　　８０ＯＮＡ緩
而戚μｐ　　　２００　　　−　　　−　　　２００エ
ンド−Ｈμ、ｐ　　　−２００２００（１ｍｇ／ｍｌ） エンド−Ｈは、Ｓ、ブリカタスからエンド−Ｈを産生す
るために形質転換された枯草菌がらであった。管を３７
℃で１時間インキュベートした。

管を遠心分離し、洗浄し、０．１Ｍ　　ＥＤＴＡを含有
するＯ’、１Ｍリン酸ナトリウム（ＮＰ）緩衝液（ｐＨ
７，２）８．００μｇに再懸濁した。緩衝液または鶏卵
白リゾチーム溶成を次の通り管に加えた。

管番号　　　　１．２３．４５．６７．８ＮＰ緩漸戚μ
ｌ　　　２００　　２００リゾチームμｊ７　　−　　
　　　　　２００　　２００（１ｍｇ／ｍ＋） ７１：ｌ−１４この時点て採取して、コロニー形成単位
（ＣＦ　Ｕ）　　（Ａ欄）を求めた。３７℃で１峙間イ
ンキュベーション後、アリコートを使用してＣＦＵを求
めた（Ｂ欄）。コロニー形成単位のｌｏｇを計算した。

１ｏｇＣＦＵの減少は、ＡからＢを引くことによって求
めた。結果を以下に示す。

ｏｇＣＦＵ 条件　　　　　Ａ　　　Ｂ　　　１ｏｇＣＦＵの変化コ
ントロール　７．８９　７．９０　　　　　＋Ｑ、旧エ
ンドーＨ８，２１７，９２−０，２９（２００ｐｐｍ） リゾチーム　　７，８７　７．６８　　　　−０．１９
（２０口ｐｐｍ） エンド−Ｈ＋　　８．１７　７．５３　　　　−０．６
４リゾチーム これらの結果は、エンド−Ｈとリゾチームとの組み合わ
せがエンド−Ｈまたはりゾチーム単独と比較して大腸菌
の生存度を減少することを示す。

鯉ヱ旦 大腸菌の生存度に対するエンド−ＨとＴ４または鶏卵白
リゾチームとの比較 大腸菌細胞を洗浄し、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝戒（
ｐＨ５，５）中に懸濁した。細胞を２個の管に分割した
（１０ｍｌ）。１つの管に緩衝液のみを加え（コントロ
ール）、別の管にエンド−Ｈを加えた（処理）。エンド
〜Ｈは、Ｓ７　ブリカタスからエンド−Ｈを産生ずるた
めに形質転換された枯草菌からであった。細胞を３７℃
で１時間インキュベートした。細胞を遠心分離し、洗浄
し、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，２）に
再懸濁した。細胞を等分割し、緩衝液またはりゾチーム
のいずれかと共にインキュベートした。

鶏卵白（ＨＬ）およびＴ４　（ＴＬ）リゾチームをこの
実験で比較した。管を１．５時間インキュベートした。

試料を希釈し、インキュベーション前（Ａ）およびイン
キュベーション後（Ｂ）のＣＦＵ７１１Ｊ定のために塗
布した。ＣＦＵのｌｏｇを求めた。下記結果が、得られ
た。

これらの結果は、Ｔ−４リゾチームもエンドＨとの組み
合わせで大腸菌の生存度を減少する際に有効であること
を示す。

例３０ エンド−Ｈでの汚れたおむつ材料の処理試料を汚れたお
むつから得た。各試料を分Ｃすた。

試料の左側をタイド２０００ｐｐｍおよびＢＰＮ’　　
Ｃバチルス・アミロリフライファシェンス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｉｆａｃｉｅｎｓ）からの
ズブチリシンプロテアーゼ）ｐｐｍ中で洗浄した。右側
をタイド２０００ｐｐｍ、ＢＰＮ’　　　ｌｐｐｍおよ
びエンド−Ｈ４０ｐｐｍ　（ベーリンガー・マンハイム
・バイオケミカル、カタログＮｏ。

１００　１１９）中で洗浄した。各試料を９５°Ｆ（３
５，０℃）で１２分間洗浄した。２つの実験の結果を第
１７図および第１８図に示す。わかるように、第１７図
および第１８図の右側上のおむつ材料は、第１７図およ
び第１８図の左に示すタイド−プロテアーゼ処理おむつ
と比較して実質上少ない糞便じみを含む。

本発明の好ましい態様を説明したが、各種の修正を施す
ことができること、およびかかる修正は本発明の範囲内
であることを意図することは当業者に明らかであろう。

例中のエンド−Ｈの代わりにエンド−ＤまたはＦまたは
ＰＮＧａｓｅ　　Ｆを使用する時に、本発明の他の組成
物は、得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＮ−粘合および〇−結合糖タンパク質の普通の
コア構造を示す図、第２図は各種の■型エンドグリコン
ダーゼの場合の基質および既知の切断部位を示す図、第
３図は第２図のタンパク質アミノ酸、炭水化物残基およ
び切断部位の一般図、第４図はＮ−結合糖タンパク質の
コア構造、■型エンドグリコンダーゼの切断部位および
タンパク質および炭水化物単位と■型エンドグリコンダ
セての切断時に生成するアグリコンおよび炭水化物部分
との間の関係を示す図、第５Ａ図〜第５Ｅ図はグリコン
ド含有物質、微生物または■型エントグリコシダーセと
反応性の物質が単独または第二酵素との組み合わせでの
■型エンドグリコシダゼでの処理によって表面から放出
されることがある各種の機構を示す図、第６Ａ図および
第６Ｂ図は糞便で汚され且つエンド−Ｈで処理されるか
処理されないナイロン見本の繊維の形状を示す電子顕微
鏡写真（８１００Ｘ）、第７Ａ図〜第７Ｈ図は糞便で汚
された綿見本に対するエンド−Ｈおよび他のカルボヒド
ラーゼ酵素の効果を示すための綿繊維の形状を示す電子
顕微鏡写真 （５０００Ｘ）　、第８図、第９図、第１０Ａ図および
第１０Ｂ図は大腸菌の生存度に対する各種の濃度のエン
ド〜Ｈおよびクロルヘキシジン単独または組み合わせの
効果を実証するグラフ、第１１図および第１２図はエン
ド−Ｈを含有する洗剤組成物か豚の皮膚からの黄色ブド
ウ球菌の除去においてエンド−Ｈを含有しない洗剤ａａ
物よりも有効であることを実証するための生物の形態を
示す顕微鏡写真、第１３図はエンド−Ｈがシャワーカー
テンからカビを除去する際に水または洗剤組成物よりも
有効であることを実証するための前記カ１駅厩 一テン母管の形状を示す顕微鏡写真（中心の写真はシャ
ワーカーテンの一部分のものであり、他の４つの写真は
中心の写真の対応四分円の拡大図である）、第１４図は
異なる抗菌剤との組み合わせてのエンド−Ｈの抗菌効果
を実証するグラフ、第１５Ａ図〜第１５Ｂ図および第１
６Ａ図〜第１６Ｂ図は異なる種の酵母に対するエンド−
Ｈの効果を実証するための繊維の形状を示す顕微鏡写真
、第１７図および第１８図はエンド−Ｈを含有する洗剤
組成物によるおむつ材料からの糞便の高められた除去を
実証するための繊維の形状を示す顕微鏡写真である。 ｆｆＺと■とユ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、微生物が少なくとも一部分II型反応性結合によって
   結合された表面から微生物の少なくとも一部分を放出す
   るにあたり、前記II型反応性結合をII型エンドグリコシ
   ダーゼと接触させて、前記微生物の少なくとも一部分を
   前記表面から放出することを特徴とする方法。 ２、前記微生物が、原核生物である、請求項１に記載の
   方法。 ３、前記原核生物が、細菌である、請求項２に記載の方
   法。 ４、前記微生物が、真核生物である、請求項１に記載の
   方法。 ５、前記真核生物が、真菌類である、請求項４に記載の
   方法。 ６、前記表面から放出された前記微生物の部分を洗浄液
   と接触させて、前記部分を前記洗浄液中で前記表面から
   除去する、請求項１に記載の方法。 ７、前記表面から放出された前記微生物の部分を洗剤を
   含有する流体と接触させて、前記部分を前記流体中で前
   記表面から除去する、請求項１に記載の方法。 ８、前記II型エンドグリコシダーゼが、エンド−β−Ｎ
   −アセチルグルコサミニダーゼ、エンド−α−Ｎ−アセ
   チルガラクトサミニダーゼおよびエンド−β−Ｎ−ガラ
   クトシダーゼからなる群から選ばれる、請求項１に記載
   の方法。 ９、前記II型エンドグリコシダーゼが、エンド−Ｄ、エ
   ンド−Ｈ、エンド−Ｌ、エンド−Ｃエンド−Ｃ＿II、エ
   ンド−Ｆ−Ｇａ I 型、エンド−ＦおよびＰＮＧａｓｅ
   Ｆからなる群から選ばれる、請求項１に記載の方法。 １０、前記II型エンドグリコシダーゼが、エンド−Ｈで
   ある、請求項７に記載の方法。 １１、前記微生物の前記表面を前記II型エンドグリコシ
   ダーゼを含まない第二酵素と接触させることを更に含む
   、請求項１に記載の方法。 １２、前記第二酵素が、プロテアーゼである、請求項１
   １に記載の方法。