JPH03193736A - ヒトインターロイキン２の活性を有するポリペプチドからなることを特徴とする白血病を治療するための医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ヒトインターロイキン２の活性を４１するポ
リペプチドか、らなる白面病を治療するための医薬組成
物に関するものである。

［従来の技術°１ 粘性化された■−リンパ球により産で１されるすシボ−
１−ンζあるインターフェロン２（１１−２＞は、たと
えばＭ、ルツヂャー等［リンホキン・リリーチ、第６巻
（１９８７）　、第４７・〜５７頁］に記載されたよう
な免疫調節活性及び抗腫瘍？ｉＩｉ牲、並びに特にＴ−
リンパ球の増殖及びＮＫ（天然：１ニラ−）細胞とＬＡ
Ｋ　（リンポキン活廿化キラー）細胞との誘発を開始さ
せる能力を包含する活性を有する。

高投与量にて単独で或いはＬ　Ａ　Ｋ細胞と絹合ぜた投
与は、たとえば黒色腫のような転移病、腎臓癌、直腸癌
又は非ボジキンンン氏リンパ１φなどを有するネズミ或
いは患者における成る種の確認された癌の退行を生ぜし
めうろことが観察されているＩｓ、Ａ、　ローゼンベル
ク等、Ｎ、Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｈｅｄ。

（１９８７）　、第３１６巻、第８８９〜８９７頁］。

臨床成績は、杆々の公λ０の慢ＰＬ若しくは急性白血病
、￥ｈに急ｔｉｔ骨け：６白面病（ＡＭＩ−）においで
Ｉｈ２甲独又は適用される免疫治療と絹合Ｕた治療の効
果を示していない１、白面結ｌ細１泡の増９めをらたら
り調口ｉＪ異常の規やは複卸（・必る。一般に、イの調
節はトＦ々５“シなる分化因子の絹合せ使用、′ｌ：＋
に１し２とたとえばＢ１際特ＷＦ出願Ｗ０　８８１０６
９９１号に慢ｆ１リンパ師白面病につぎ記載されたよう
なインターフェロン、すなわら腫瘍壊死因子、他のイン
ターロイキン又は他の分化因子との併用を必要とするこ
とが認められている。

さらに１１−２はＡＭＩ−に罹患した患者の芽細胞の増
殖をインビトロにて顕著に刺戟することも示唆されてい
るｆＪ、Ａ、カロン及びＪ、Ｃ，カラレイ、ブリティッ
シュ・ジャーナル・ヘマトロジ、第７１（１）巻（１９
８９）　、第１６８頁１゜今回、本出願人は、Ｉｈ２が
単独でＡＭＬに対する治療活性を有することを示す予想
外の結果を得た。

［発明の要点］ したがって本発明は、ヒトインターロイキン２の活性を
イ１りるポリペプチドからなることを特徴と１６白面病
の治療を目的とした医薬組成物を提供（Ｊる。［ヒ！〜
１１２活竹をｈするボリペゾヂド１という用Ａｔ口１、
天然ヒｌ”　Ｉ　ｌ−２、組換ヒトｌｌ−２［１」なわ
ら、たとえば１．タニグブ等により記載されたような組
換ＤＮＡ技術（ネイブｔ’　−（１９８３）第３０２巻
、第３（）５〜３１０自）又は玉１−１」ツバ１ぜ１許
１巳１）　９１５３０４３月に記載されたにうイに組換
１フＮＡ技術により得られる組換ヒｌ〜ｌｌ−２］、７
はたとえばＣ，シュ等［ジャーナル・バイＡ［１ジカル
・グミストリー（１９８７）　、第２６２巻、第５７ン
３〜５７３１頁］により記載されたこれら生成物の苅＼
ン形質若しくは誘導体を意味する。本発明に関１する白
血病は慢性骨髄若しくはリンパ白血病及び急性リンパ若
しくは非リンパ芽球白血病、たとえばＭ細胞の増殖を特
徴とする一般的な骨髄性白血病を包含する。

特に本発明の課題は、白血病が通常の組織学的、細胞学
的及び生物学的検査によって診断された急性骨髄白面病
であることを特徴とする医薬組成物に関するものである
。本発明による医薬組成物はＡＭｌ、、の治療、その再
発の治療又は１１発の予防処置を１；１的とりる。本発
明は、期用の化学療法に耐ｆ１であるか或いは化学療法
後ｔ；シクは骨髄移植（野の再発にａ連プるＡＭＬに１
ｊ１゛患した患者（こＣ約２０％の陵応率Ｃホされるよ
う’、−ｉ　１１２の治療す１宋をＩｈ　ｕ １−、’＋　Ｌｍ本発明の課題は、じ！〜１１２が純粋
な組換１１、２　’Ｔ、：°あることを特徴とヅる医薬
組成物である。

本発明により製ｊ告される医薬組成物は、たとえば上記
したようなＩ［ｌ換ヒト［（−２、対立形質若しくは誘
導体を含有し、その精製には当業者に公知の技術か用い
られて純粋生産物の製造を可能にする。

よりへ■細には本発明の課題は、Ｉｈ２が還元型におけ
る非グリコジル化組換ＩＬ２であることを特徴とする医
薬組成物である。使用する非グリ］シル化ＩＬ２は、特
に天然１１−２配列をイｉする−５のであって必要に応
じ相補的Ｎ−末端メチオニンを有する１３３個のアミノ
酸で構成され、位置５８．１０５及び１２５にＪｊける
３個のシスティンは還元型にあって、位置５８〜１０５
にジスルフィド架橋を右ηる同じ配列を持った酸化型１
１−２と匹敵する生物学的検査を示覆。ｆｉ、Ｃ０１ｉ
菌株を用いで出発Ｊる還元ＩＬ２の製造例は、復配の実
験の部にさらに示１．．運九（１りという用Ａ？ｉは、
１１，２が含イＩＭるシス７−イン残部がその測定をた
とえば１−Ａ−ルの試薬としてジヂΔジピリジンを用い
る分光光陽測定により行なわれるような遊離スルノイド
リル塁を４１覆ること（！−息味する。生物学的粘性は
、テトラゾリウ１１塩を用いる比色試験によるＩＬ２、
ＣＴｌｌ−２に依存したネズミの白血病細胞ラインの増
殖の測定により決定される［Ｔ、’Ｅスマン、ジャーナ
ル・イミュノロジー・メソッズ（１９８３）、第６５巻
、第５５〜６３頁］。本発明に使用されるＫｌ換１１−
２の比活性は少なくとも０．５ｘ１０６　ｔＪＢＲＭＰ
／ｍｇ１好ましくは１ｘ１０７　Ｕ　　ＢＲＭＰ／ｍｇ
に等しい。ＩＬ２活性の単位は、試験に゛（最大反応の
５０％をもたらす吊として規定される。ナショナル・キ
ャンザー・インスティヂュー１〜（ＮＣ！＞により供給
される［バイアｉ　ＬＴＩジカル・レスポンス・モディ
フ１イヤ・プログラム（ＨＲＭ　Ｐ　’）基準剤ヒ＋−
ＩＬ−２（ジュルカット）Ｊを標／１（とじて用いる。

特に本発明の課題は、１１−２を性用１回当り２へ・２
０ｘ１０６　ＬＪ／Ｍ２の竿にて投句覆ることを特徴と
り６１λ桑絹成物である。

本発明の組成物は、たとえばスローポルス（ｓｌｏｗｂ
ｏ口ｌ５）（口面５内ルートににり或いは連続演″流、
筋肉ルート又は皮トルー１〜にＪ、って投与することが
できる。

より詳細には本発明の課題は、ＩＬ２をスローポルスに
よる静脈ｌ〜シル−〜により汀：射１回当り８ｘ１０６
Ｕ／Ｍ２の損にて投〜することを特徴とする組成物であ
る。特に本発明の課題は、ＩＬ２を１週間当り数日間の
サイクルで少なくと・ｂ毎日２回反復投与することを特
徴とし、さらにＩＬ２を少なくとも非連続的な３週間に
わたり反復投与することを特徴とＪる区部組成物である
。投与量、注射の頻度及び処置期間は、恣者の状態（応
じて変化する。１日投与吊は一般に、成人又は子供につ
き数日間のサイクルにて２ｘ１０６〜３０ｘ１０６Ｕ／
Ｍ２　／２４ｈ　、好ましくは２０Ｘ１０６　ＬＪ／Ｍ
２７２４１１の稈麿である。１１２は医桑組成物中に好
ましくは（）、１〜２ｍｇの活性成分を含イ’ｌ　’ｌ
る小出し壜に凍結しく含有８れ、これを注０４用の蒸溜
水Ｃ再編成するｕ　ｉ：Ｉられる溶液は、ス目−ボルス
を投句するため溶解’Ｉｆ　（たとえば０．９％の塩化
すトリウム若し・（は５Ｌ）（ｌのグルコース）で直ち
に希釈される。ス目−ボルスという用語は、たとえば１
５分間のＪ、うな短時間の清流８Ｍ味する。本発明の好
適具体例によれば、ｌＬ２は還元組換１１２であり、そ
の’！ｊＵ造についてはざらに医薬製造の例につき説明
し、投、ｔ−５嵐は注ｏＡ１回当り８ｘ１０６　ｔＪ／
Ｍ２　テあり、注射の頻度は８時間毎（３回／ＩＩＥＪ
）又は１２１１５　問１ｒ３　（２回／１日）であって
連続５日間の４ノーイクルにしたがい、投与の期間は非
連続的な３週間であって１５分間のスローポルスによる
静脈ルートで成人につき全部で約３６０Ｘ１０６　ｔＪ
／Ｍ２及び３６ｍｇの投−りを示す。

上記に引用した全ての刊行物を参考のため本明細古中に
引用する。

以上、限定はしないが実施例により本発明をさらに説明
する。

［実施例］ 還元型組換ヒトｆ　Ｉ−２（ｒ−ｈ　Ｉ　ｌ−２）　（
１）製造：たとえば王、リド−等［ジャーナル・バイＡ
クミス１−リー（１９８７）　、第１ｆ）１巻、７Ａ５
２５〜５３４貞１にＪ：り記載されたＪ−うに、天然Ｉ
Ｌ２の＝１−ド化配列を右しかつ細胞の内部にその形態
（ｌＬ２を蓄積しうるプラスミドを用いて変換されたＥ
、Ｃ０１ｉ菌株の培・荷物を遠心分離してｉＱられた顆
粒から出発してｌＬ２を作成した。１０ｅの醗酵装置か
らこのようにして１ｑられた細胞を、マントン・ガラリ
ン型ホモゲナイザにて破壊した。分離されかつ洗浄され
た細胞残ｒＰＡ（湿潤型吊り（）〜１７０（］）から出
発し、ＩＬ２を８Ｍのグアニジン塩酸塩（Ｇｕ、ＨＣｊ
）とジヂオスレイトール（１）Ｔ王）１００ｍＭとを含
有するトリスＨＣｅの２０１１１８　（ｐ　ｌ−１８）
緩衝液の２．５容最に溶解させた。溶解させたＩ　Ｌ２
　（ＤＩＮ　（１，５〜２．５（］　）　ヲｃ４　　Ｖ
ＹＤＡＣ（０，４６ｘ１５ｃｍ）カラム３００△（５塵
）における分析ＲＰ−ＨＰＬ（Ｊ：より２ｃｍ２　／ｍ
ｉｎの速１爽で推定し、その際０．１％のＴ−Ｆ　Ａを
Ｓイｊするアセトニトリルの直線的濃度勾配（１０分間
にねｌこり３０〜・７（）％）を用いると共に２８０ｎ
ｍ若しくは２１０ｎｍ　（、：ａ＞ける分光光度検出を
用い、ここで２８Ｏｎｌｎ　ｌこお（〕るピークの表面
を］Ｌ２標１（で検品した後に評価したく第１１８図及
び第１ｂ図）。次いで、ＧＬＪ、１−Ｉ　Ｃ（ｌの濃度
をＤ　ｌ−Ｔの存在下にて２Ｍまで低下８ぜることによ
りＩ［，２を沈澱させた。０．１％ＩＦへの水溶液を用
いて５．０未満の上澄液のｐＨが４Ｆｌられるまで沈澱
物を洗浄した襖、ＩＬ２を２０％）７ヒＩ−二トリル及
び０．１％１−ＦＡの水溶液に溶解させた。分析ＲＰ−
１−ＩＰＬ、Ｃ（第２図）にしたがい８５％より多い還
元型ＩＬ２含有量を有する［再溶解、１物が得られ、こ
れは０．０１　ｘ１０７　Ｕ／ｍｇ未渦の還元型１１−
２の生物学的活性と２．８５Ｓ　ｌ−１／七ル還元型Ｉ
Ｌ２のスルフィドリル基の含１１最とを有した。分析Ｒ
Ｐ　−１１Ｐ　Ｌ　Ｃにより推定された約２　（１０Ｉ
ｌｌ　ＣＩの１１−２に相当する得られた溶液のノラク
ショ１ンを、０．１％Ｔ　Ｆ　Ａにおける１０％未満ま
でアｔ　ｌ−二トリルの濃度を調整づるＪ、う希釈し、
次イテＣ／１ＶＹＤＡＣ（５，７ｘ３０ｃｍ）　ｈ−ｙ
ムに施し・Ｉこ、　　０．１％’ｒ　Ｆ　Ａを含イ１す
る７セト二トリル を用い（１１２を１０（１ｃｍ　：ｌ　／ｍｉｎの速石
Ｃ溶出ざｔ！，ＪＥピークにおける約６０％の７セトニ
１−リルの淵（ｆＡで２８０ｎｍにで分光光ｍ測定によ
り検出づると共にＦ＜　Ｐ−Ｈ　Ｐ　ｔ−　Ｃにより分
析した。還元型１１２を含有する回収した「主フラクシ
ョン」を的ちに２容ωの５％クエン酸の水溶液で希釈す
ると共に、Ｃ４　　ＶＹＤＡＣ　（　５−７ｘ３０ｃｍ
）カラムに施し、これを０．５％クエン酸を含有する直
ＦＡ溢磨勾配のイソプロパツール（４０分間にわたり２
０〜７０％）により５０ｃｍ３　／ｍｉｎの速度で展開
させた。

溶出液は２８０ｎｍにおける分光光度測定により約４８
％のイソプロパツールの濃度における小ピーク（フラク
ション１４８Ｊ）と約５９％のイソプロパツールの濃度
における主ピーク（フラクション１５月）との順次の溶
出を示した（第３図）。

「５９Ｊフラクシ」ンを回収した。これは、空気から遮
断して０℃で少なくと・５２４時間にわたり安定に保存
される。

減１ｆ下での共沸蒸溜１こＪ、リイソブ【］パノールを
除去した後、［５９１フラクシヨンを分析Ｒ　Ｐ）−Ｉ
　Ｐ　Ｉ−　ＣにＪ、リラ）伍し、約６０％のアセトニ
トリルにて溶出された均質ピーク（第４図）をケえるの
に対し、比較の酸化型１［２は約５７％アセトニＩ・リ
ルで溶出した（第１ｂ図）。イソプＥ１１パノールの除
去後に１ｍＭｃｍ３より高いＩＩ−２のＩＢｆと３±０
．５のｐｌ−１とを有する「５９」フラクションは、空
気から遮断しながら＋４℃にて少なくとも１週間にわた
り保持することができ、或いは医薬組成物を得るため直
ちに凍結乾燥し又は処方することができる。凍結乾燥し
た「５９」フラクションを、Ｃ　Ｔ　Ｌ　Ｌ　−　２細
胞の増殖に関するインビトロ試験にしたがって生物活性
につき測定し、天然ＩＬ２に匹敵する１．３±０．５ｘ
１０７　（）／ｍ（Ｉの比活性を有した。

ジチオピリジンを用いる比色法で測定した凍結乾燥ｒ５
９Ｊフラクションの遊Ｎｔスルフィドリル阜の含イｊ吊
は、比較酸化型ＩＬ２の０．　７６　Ｓ　Ｈ　／’　°
Ｌルと苅比して２．９４３Ｈ／１モルであった。

生物学的活性によりＲ］）・−１−ＩＰＩｃ：に′（均
質に３個のＳＨ阜を右する還元型ｒ　−　ｔｉ　ｌ　ｌ
　２の分析１’＜　Ｐ　−　ｔ−Ｉ　Ｐ　Ｉ　Ｃにより
測定された１５０−３００ｍｇが、１【）での醗り子装
置で゛出発した［５１月ノンクションにて得られた。

実施例　１：清流用の１欠桑組成物 潅流による静脈内ルートで性用するための次の組成をイ
ｊりる調製物を作成した： 還元型１１ー２　　　　　　　　　　０．５町り」−ン
酸　　　　　　　　　　　　５ｍｃ＋マニ１〜−ル　　
　　　　　　　５０ｍａ無菌水　　　　　　　　　　　
　１ｒｎ１５％グルコース　　　　　　　５０ｄ 実施例　２：ＡＭＬの処置におりる臨床試験この試験は
、化学療法に続く化学療法の維持又は自家骨髄移植（い
わゆるＡ　Ｂ　Ｍ　１−　）のいずれかを行なった組織
学的診断を有しかつ事前の診断が少なくとも１週間間隔
（たとえば２週間間隔）で行なった骨髄の２つの試料に
て１０％以上の芽細胞の存在（こＪ、り評（ＩＩｌされ
た再発よ１しくは化学療法に。

λ・１りる耐ｆ【を確認した組織学的診断（　Ｆ　Ａ　
８分類によるＭｌ−Ｍ！ｊ＞の−次ＡＭＩ−４！：イ］
ηる患者をａむ。

本発明にＪ、り製造された１１−２の組成物は、注ＩＪ
Ｊ　１回当り８Ｘ１０６ｔノ／Ｍ２　（すなわち０．８
ｍｇ／Ｍ２　＞の吊のｔ−ｔ　Ｏ・Ｊを第１週間にわた
り連続５　Ｅ１間につき８時間毎の注射の割合で可能に
し、次いで第３週及び第５週にわたり連続す日間につき
１２１１．’１間毎の注射の割合にて上記と同車の注射
を１５分間のス［１−ポルスでの静脈ルー１〜による注
射を可能にした。

患者の評価は、貴簡の試料に対するｌｌ−２による処隋
の前後で行ない、その際芽細胞の比率の測定と髄質先駆
体の分化状態の評価とを行イにっだ。

１１人の再評価された患者につき、次の反応が得これら
の結宋は、２つの完全反応（ＣＡ＜＞、−＝Ｊ４メわら
２０％の反応比率を示している。失格のうり２名の患名
（Ｎｏ、　３及びＮｏ、　７　＞は骨髄情芽細胞の比率
にａ３ける！＃’６な減少を示し、１１−．２の所定の
効宋を示唆している。

析ＲＰ　−ＨＰ　Ｌ　Ｃクロントグラ゛〕の狛性曲線図
でおる。

【図面の簡単な説明】

第１ａ図は調製物における８Ｍグアニジンの相仙出物の
分析ＲＰ　−ＨＰ　Ｌ−Ｃクロントゲラフの狛性曲線図
であり、 第１ｂ図は還元型及び酸化型ＩＬ２標準の分析ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣり【コマトゲラフの特性曲線図であり、 第２図は調製物における「再可溶化」の分析Ｆ＜１）−
ｌＩＰｌｃクロア１−グラフの特性曲線図Ｃあり、第３
図は調製物にＪ３ける［主ノラクシ］ン−１の１λ１）
−ＩＩ　ｌ）　Ｉ　にり［１７１〜グラ゛）の１１情曲
線図（゛あり、 第１図は調製物にお（〕るツノクシ］ン［；ｌ旧の分手
続補正書（旗） 平成３年２月４日 薬組成物 名 称 ルセルーユクラフ 補正命令通知の日付 平成３年１月２２日

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒトインターロイキン２の活性を有するポリペプ
   チドからなることを特徴とする白血病を治療するための
   医薬組成物。
2. （２）白血病が急性骨髄白血病であることを特徴とする
   請求項１記載の医薬組成物。
3. （３）ヒトＩＬ＿２が純粋な組換ＩＬ＿２であることを
   特徴とする請求項２記載の医薬組成物。
4. （４）ＩＬ＿２が還元型における非グリコシル化組換Ｉ
   Ｌ＿２であることを特徴とする請求項３記載の医薬組成
   物。
5. （５）ＩＬ＿２が１回の注射当り２〜２０×１０＾６Ｕ
   ／Ｍ＾２の量にて投与されることを特徴とする請求項３
   又は４記載の医薬組成物。
6. （６）ＩＬ＿２が１回の注射当り８×１０＾６Ｕ／Ｍ＾
   ２の量にて静脈内ルートによりスローボルスとして投与
   されることを特徴とする請求項５記載の医薬組成物。
7. （７）ＩＬ＿２が、１週間当り数日間のサイクルにわた
   り毎日少なくとも２回の割合で反復的に投与されること
   を特徴とする請求項６記載の医薬組成物。
8. （８）ＩＬ＿２が非連続的な少なくとも３週間にわたり
   反復的に投与されることを特徴とする請求項７記載の医
   薬組成物。