JPH03157338A - ヒト腫瘍造影用注射組成物 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
主光里Ω宵景
がん胎児性抗原（ＣＥＡ）に対する放射性標識抗体は腫
瘍の位置測定に使用できることが知られている。ハンセ
ンらの米国特許３，９２７．１９３号はそのような方法
を開示するが、しかしその動物への使用の実施例を提供
するに過ぎない。この特許に記載されている方法は、腫
瘍部位に関連した放射能の精密な識別を妨害し得る放射
能が血液、その他の体液およびある種のｍ織、特に心臓
および肝臓のような他の体内部位にも存在する状況にお
いて、どのように腫瘍が可視化され得るのか説明してい
ない、Ｒｅ１ｆ ｅｔ ａｌ、 Ｓｕｒｇ、 ０ｎｃｏ
１．６＋１３３（１９７４）およびＭａｃｈ ｅｔ ａ
ｌ、 Ｅｕｒｏｐ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ、 ５ｕｐｐ
ｌ。
瘍の位置測定に使用できることが知られている。ハンセ
ンらの米国特許３，９２７．１９３号はそのような方法
を開示するが、しかしその動物への使用の実施例を提供
するに過ぎない。この特許に記載されている方法は、腫
瘍部位に関連した放射能の精密な識別を妨害し得る放射
能が血液、その他の体液およびある種のｍ織、特に心臓
および肝臓のような他の体内部位にも存在する状況にお
いて、どのように腫瘍が可視化され得るのか説明してい
ない、Ｒｅ１ｆ ｅｔ ａｌ、 Ｓｕｒｇ、 ０ｎｃｏ
１．６＋１３３（１９７４）およびＭａｃｈ ｅｔ ａ
ｌ、 Ｅｕｒｏｐ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ、 ５ｕｐｐ
ｌ。
１．１１３（１９７８）に報告されている初期の臨床的
研究は、放射性抗ＣＥＡ抗体をもってヒトの腫瘍の位置
測定に失敗した。
研究は、放射性抗ＣＥＡ抗体をもってヒトの腫瘍の位置
測定に失敗した。
Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ、 Ｎｅｗ Ｅｎｇ
ｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ、
２９８．１３８４（１９７Ｂ）はＣＥＡに対する放射性
標識抗体を投与されている患者のシンチレーション走査
によって腫瘍の発見および位置測定の臨床実験に成功し
たことを報告した。この文献では、血液プールバックグ
ラウンド放射能から特定の放射性抗体活性を区別するこ
とが動物およびヒトの両方の研究において問題であり、
そして他の放射性核種による特別のスキャナー減法技術
がこの方法を用いるあいまいでない腫瘍位置測定に必須
であると考えられることを記している。この文献におい
て使用された抗体製剤はＣＥＡと７０％免疫反応性であ
った。この文献はさらに正常なハムスター組織中のＣＥ
Ａの不存在は、該抗原が通常がん患者には増加したレベ
ルで循環しており、そしである正常な組織中には少量し
た存在しないヒトへ補外を阻害することを記している。
ｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ、
２９８．１３８４（１９７Ｂ）はＣＥＡに対する放射性
標識抗体を投与されている患者のシンチレーション走査
によって腫瘍の発見および位置測定の臨床実験に成功し
たことを報告した。この文献では、血液プールバックグ
ラウンド放射能から特定の放射性抗体活性を区別するこ
とが動物およびヒトの両方の研究において問題であり、
そして他の放射性核種による特別のスキャナー減法技術
がこの方法を用いるあいまいでない腫瘍位置測定に必須
であると考えられることを記している。この文献におい
て使用された抗体製剤はＣＥＡと７０％免疫反応性であ
った。この文献はさらに正常なハムスター組織中のＣＥ
Ａの不存在は、該抗原が通常がん患者には増加したレベ
ルで循環しており、そしである正常な組織中には少量し
た存在しないヒトへ補外を阻害することを記している。
このシンチグラフ方法を使用する位置測定を可能とする
ために使用される減法技術は、各造影スキャンの前にＴ
ｅ−９９ｍ過テクネチウム酸塩およびＴｃ−９９ｍ標識
ヒト血清アルブミンの注射を含む。得られたデータは標
識抗体単独、Ｔｃ−９９ｍ標識種との合計、およびこれ
ら各種の値の和および差のデジタルイメージを発生する
ことができるミニコンピユータに記憶される。
ために使用される減法技術は、各造影スキャンの前にＴ
ｅ−９９ｍ過テクネチウム酸塩およびＴｃ−９９ｍ標識
ヒト血清アルブミンの注射を含む。得られたデータは標
識抗体単独、Ｔｃ−９９ｍ標識種との合計、およびこれ
ら各種の値の和および差のデジタルイメージを発生する
ことができるミニコンピユータに記憶される。
ＣＥＡはｆｔｉｙｄｅｒｍａｎ、 ５ｃａｎｄ、 Ｊ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、、８゜５ｕｐｐ１．８．１１９（１
，９７８）およびその他多数によッテ報告されているよ
うに主として細胞表面抗原である。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、、８゜５ｕｐｐ１．８．１１９（１
，９７８）およびその他多数によッテ報告されているよ
うに主として細胞表面抗原である。
５ｐａｒ、 Ｓｅｍｊｎａｒｓ Ｉｎ Ｎｕｃｌ、 Ｍ
ｅｄ、、６，３７９（１９７６）およびＥｍｒｊｃｈ、
Ｄｅｕｔｓｈｅ Ｍｅｄ、 Ｗｏｃｈ、 ５ｃｈｒ、
、１０４，１５３（１９７９）により、ヒトの腫瘍位置
測定は腫瘍細胞の表面に存在する抗原に特異性な抗体を
必要とすると考えていた。前出１１ｅｙｄｅｒｍａｎ、
Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ、 Ｇｕｉｌｌｏｕｚ。
ｅｄ、、６，３７９（１９７６）およびＥｍｒｊｃｈ、
Ｄｅｕｔｓｈｅ Ｍｅｄ、 Ｗｏｃｈ、 ５ｃｈｒ、
、１０４，１５３（１９７９）により、ヒトの腫瘍位置
測定は腫瘍細胞の表面に存在する抗原に特異性な抗体を
必要とすると考えていた。前出１１ｅｙｄｅｒｍａｎ、
Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ、 Ｇｕｉｌｌｏｕｚ。
ｅｔ ａｌ、 Ａｌｂｒｅｃｈｔｓｅｎ ｅｔ ａｌお
よびＲｕｏｓｌａｈｔｉ ｅｔ ａｌによるそれぞれ５
ｃａｎｄ、 Ｊ、 ｒｍｍｕｎｏｌ、」、５ｕｐｐ１．
８゜ｐｐ、 ４８５ ｆｆ、２８９ｆｆ、１６５ｆｆ、
３ｆｆの報告により、ヒト絨毛膜ゴナンドトロピン（Ｆ
（ＣＧ ）およびアルファフェトタンパク（ＡＦＰ）の
両方が細胞質性細胞内腫瘍関連物質であることが知られ
ている。
よびＲｕｏｓｌａｈｔｉ ｅｔ ａｌによるそれぞれ５
ｃａｎｄ、 Ｊ、 ｒｍｍｕｎｏｌ、」、５ｕｐｐ１．
８゜ｐｐ、 ４８５ ｆｆ、２８９ｆｆ、１６５ｆｆ、
３ｆｆの報告により、ヒト絨毛膜ゴナンドトロピン（Ｆ
（ＣＧ ）およびアルファフェトタンパク（ＡＦＰ）の
両方が細胞質性細胞内腫瘍関連物質であることが知られ
ている。
Ｑｕｉｎｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、Ｎｕｃｌ、Ｍｅ
ｄ、、１２．６９（１９７１）はハムスターに育成させ
たヒト絨毛膜がんは腫瘍中において動物の肝臓中に比較
して２．８倍の増加した放射性標識抗ＨＣＧ抗体の摂取
を示すことを報告した。しかしながら標識した正常１ｇ
Ｇによる対照研究は第２日の後注射により同様の増加し
た腫瘍摂取を示した。さらに著者は特に第３日および第
４日における組織分析により見られる、標識正常１ｇＧ
を上潮る放射性抗体の摂取量の差は全身写真スキャニン
グでは観察されなかったと述べている。平井ら八ｂｓｔ
ｒａｅｔｓ ６ｔｈ Ｉｎｔ、 Ｒｅｓ、 Ｇｒｏｕｐ
ｆｏｒ Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｏｙｏｎｉｃ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ、 Ｍａｒｂｅｒｇ／Ｌａｈｎ西ドイツ
は移植したヒトへパトーマを持った、およびラットおよ
びヒト卵黄のう腫瘍を持つネズミへ放射性標識抗ＡＦＰ
を投与すると、ＩＩ！瘍組織組織抗体のホームインは見
られないことを報告した。
ｄ、、１２．６９（１９７１）はハムスターに育成させ
たヒト絨毛膜がんは腫瘍中において動物の肝臓中に比較
して２．８倍の増加した放射性標識抗ＨＣＧ抗体の摂取
を示すことを報告した。しかしながら標識した正常１ｇ
Ｇによる対照研究は第２日の後注射により同様の増加し
た腫瘍摂取を示した。さらに著者は特に第３日および第
４日における組織分析により見られる、標識正常１ｇＧ
を上潮る放射性抗体の摂取量の差は全身写真スキャニン
グでは観察されなかったと述べている。平井ら八ｂｓｔ
ｒａｅｔｓ ６ｔｈ Ｉｎｔ、 Ｒｅｓ、 Ｇｒｏｕｐ
ｆｏｒ Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｏｙｏｎｉｃ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ、 Ｍａｒｂｅｒｇ／Ｌａｈｎ西ドイツ
は移植したヒトへパトーマを持った、およびラットおよ
びヒト卵黄のう腫瘍を持つネズミへ放射性標識抗ＡＦＰ
を投与すると、ＩＩ！瘍組織組織抗体のホームインは見
られないことを報告した。
心臓ミオシンへ特異性の抗体の開裂によって得られる放
射性標識フラグメントは、ハーバ−の米国特許第４．０
３６，９４５号において心筋梗塞の位置および寸法の決
定に使用されている。
射性標識フラグメントは、ハーバ−の米国特許第４．０
３６，９４５号において心筋梗塞の位置および寸法の決
定に使用されている。
抗体を用いる放射療法は多数の人により提案され、１例
の多モード治療的ｆｉｎ床使用におけるその成功の徴候
が０ｒｄｅｒ、 Ｒａｄｉｏｌ、 １１８，２１９（１
９７６）に報告されている。治療へのホウ素標識抗体の
使用は＋１ａｗｔｈｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ、、Ｊ、Ｍｅ
ｄ、 Ｃｈｅｍ、、１５．４４９（１９７２）に報告さ
れているが、しかし治療のためホウ素とそして位置測定
のためラジオアイソトープの組み合わせ使用は示されて
いない。
の多モード治療的ｆｉｎ床使用におけるその成功の徴候
が０ｒｄｅｒ、 Ｒａｄｉｏｌ、 １１８，２１９（１
９７６）に報告されている。治療へのホウ素標識抗体の
使用は＋１ａｗｔｈｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ、、Ｊ、Ｍｅ
ｄ、 Ｃｈｅｍ、、１５．４４９（１９７２）に報告さ
れているが、しかし治療のためホウ素とそして位置測定
のためラジオアイソトープの組み合わせ使用は示されて
いない。
前出Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇらによる最近の成功した腫瘍
位置測定および検出方法といえども、その解像力、効率
および実用性を制限するいくつかの欠点を有する。米国
特許第３．９２７，１９３号は、上で論じた後の参考で
は疑問とされなかった制限である、抗ＣＥＡ抗体はその
特異性を妨害する程度まで標識してはならないことを教
える。しかしながらこれはこの方法の鋳像力を制限し、
そして像検出のために多量の抗体を必要とする。
位置測定および検出方法といえども、その解像力、効率
および実用性を制限するいくつかの欠点を有する。米国
特許第３．９２７，１９３号は、上で論じた後の参考で
は疑問とされなかった制限である、抗ＣＥＡ抗体はその
特異性を妨害する程度まで標識してはならないことを教
える。しかしながらこれはこの方法の鋳像力を制限し、
そして像検出のために多量の抗体を必要とする。
標識した抗体は非常に大きい分子であり、そして交差反
応性の抗原性定量分を含むことがあり、そのため交差反
応性を１５％以下に減らし、そして７０％より高い特定
抗原に対する特異性を得ることは非常に困難である。Ｇ
ｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌによって使用された減
算法は、標識特異抗体とは異なる移動および分布動力学
を有する担体へ結合した異なる放射性核種の使用を含む
。加えて、バックグラウンド補償材料は各写真走査毎に
事前に注射されなければならず、これは患者を増大した
レベルの放射能および不快さへ暴露する。先行技術方法
のさらに別の制限は抗体分子が血液−脳障壁を通過でき
ないことであり、これは静脈注射した抗体が頭蓋内腫瘍
の位置測定に使用できないことを意味する。
応性の抗原性定量分を含むことがあり、そのため交差反
応性を１５％以下に減らし、そして７０％より高い特定
抗原に対する特異性を得ることは非常に困難である。Ｇ
ｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌによって使用された減
算法は、標識特異抗体とは異なる移動および分布動力学
を有する担体へ結合した異なる放射性核種の使用を含む
。加えて、バックグラウンド補償材料は各写真走査毎に
事前に注射されなければならず、これは患者を増大した
レベルの放射能および不快さへ暴露する。先行技術方法
のさらに別の制限は抗体分子が血液−脳障壁を通過でき
ないことであり、これは静脈注射した抗体が頭蓋内腫瘍
の位置測定に使用できないことを意味する。
さらに細胞表面抗原に対する抗体の使用に限定されず、
減算性技術のためバックグラウンド補償材料の反復注射
を必要とせず、診断および治療に適応でき、高度の信軌
性と高い解像力を有し、単−回の注射を使用して理想的
には腫瘍または腫瘍細胞の二基上のタイプを検出し、そ
して位置測定することができる腫瘍検出および位置測定
方法に対する需要が存在し続ける。
減算性技術のためバックグラウンド補償材料の反復注射
を必要とせず、診断および治療に適応でき、高度の信軌
性と高い解像力を有し、単−回の注射を使用して理想的
には腫瘍または腫瘍細胞の二基上のタイプを検出し、そ
して位置測定することができる腫瘍検出および位置測定
方法に対する需要が存在し続ける。
木光凱皇且眞
従って本発明の目的は、バックグラウンド活性のコンピ
ューターを使用した減算法のため他の放射性物質の反復
注射の必要なしに、高い解像度が得られる腫瘍位置測定
および検出方法を提供することである。
ューターを使用した減算法のため他の放射性物質の反復
注射の必要なしに、高い解像度が得られる腫瘍位置測定
および検出方法を提供することである。
本発明の他の目的は、高い特異活性およびＣＥＡに対す
る高い特異性を有し、それによりシンチグラフ法による
腫瘍位置測定および検出方法の解像度を改善するｌ１ｉ
ＩＧ検出および位置測定用抗体を提供することである。
る高い特異性を有し、それによりシンチグラフ法による
腫瘍位置測定および検出方法の解像度を改善するｌ１ｉ
ＩＧ検出および位置測定用抗体を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、高い解像度が得られ、そし
て細胞内腫瘍関連マーカー物質を使用する腫瘍位置測定
および検出方法を提供することである。
て細胞内腫瘍関連マーカー物質を使用する腫瘍位置測定
および検出方法を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、高い特異活性および高い腫
瘍マーカーに対する特異性を有し、それによりシンチグ
ラフ法による腫瘍位置測定および検出方法の解像を改善
する腫瘍検出および位置測定用抗体フラグメントを提供
することである。
瘍マーカーに対する特異性を有し、それによりシンチグ
ラフ法による腫瘍位置測定および検出方法の解像を改善
する腫瘍検出および位置測定用抗体フラグメントを提供
することである。
本発明のなお他の目的は、腫瘍関連抗原またはマーカー
の２タイプ以上に対する特異性を有するフラグメントを
化学的組合せにおいて含有する多価抗体フラグメントを
提供することである。
の２タイプ以上に対する特異性を有するフラグメントを
化学的組合せにおいて含有する多価抗体フラグメントを
提供することである。
本発明の他の目的は、放射線治療的に有効なラジオアイ
ソトープがそれが腫瘍関連マーカーに高度に特異性の抗
体もしくは抗体フラグメントへ結合することによって腫
瘍生育部位へ集中される腫瘍放射線療法を提供すること
である。
ソトープがそれが腫瘍関連マーカーに高度に特異性の抗
体もしくは抗体フラグメントへ結合することによって腫
瘍生育部位へ集中される腫瘍放射線療法を提供すること
である。
本発明のさらに別の目的は、結合したラジオアイソトー
プ標識の検出によって位置測定されたホウ素−１０アイ
ソト一プ含有抗体もしくは抗体フラグメントが熱中性子
によって励起される腫瘍治療方法を提供することである
。
プ標識の検出によって位置測定されたホウ素−１０アイ
ソト一プ含有抗体もしくは抗体フラグメントが熱中性子
によって励起される腫瘍治療方法を提供することである
。
本明細書および請求の範囲をさらに検討するとき、当業
者には本発明のその他の目的および利益が明らかになる
であろう。
者には本発明のその他の目的および利益が明らかになる
であろう。
本光皿Ω盟要
前記の諸口的は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）を産生ずる
かまたはそれに関連するＩＩ！１！ＪＪ＆の位置を決定
する方法であって、ＣＥＡに特異であり、そして写真走
査装置を使用して検出し得る薬理学的に不活性なラジオ
アイソトープで標識した抗体を被検者に被経口的に注射
することと、そして前記腫瘍による前記抗体の発生する
摂取の位置を決定するように前記装置によりその後被検
者を走査することよりなる前記方法において、前記特異
抗体の製造に使用された種と同一または異なる種からの
正常免疫グロブリンを前記被検者に同時に注射すること
よりなり、前記免疫グロブリンは前記特異抗体を標識す
るために使用した同じ元素の異なるラジオアイソトープ
で放射標識されそして前記写真走査装置を使用して独自
検知可能なエネルギーにおいて放射するものであり、標
識した正常免疫グロブリンは目標を指向しない特異抗体
によるバツクグラウンド活性の分布を測定するために使
用され、前記分布は特異抗体の全活性より成算されそれ
により実質上目標を指向した腫瘍関連抗体だけの活性が
測定されることよりなる改良の提供によって達成される
。
かまたはそれに関連するＩＩ！１！ＪＪ＆の位置を決定
する方法であって、ＣＥＡに特異であり、そして写真走
査装置を使用して検出し得る薬理学的に不活性なラジオ
アイソトープで標識した抗体を被検者に被経口的に注射
することと、そして前記腫瘍による前記抗体の発生する
摂取の位置を決定するように前記装置によりその後被検
者を走査することよりなる前記方法において、前記特異
抗体の製造に使用された種と同一または異なる種からの
正常免疫グロブリンを前記被検者に同時に注射すること
よりなり、前記免疫グロブリンは前記特異抗体を標識す
るために使用した同じ元素の異なるラジオアイソトープ
で放射標識されそして前記写真走査装置を使用して独自
検知可能なエネルギーにおいて放射するものであり、標
識した正常免疫グロブリンは目標を指向しない特異抗体
によるバツクグラウンド活性の分布を測定するために使
用され、前記分布は特異抗体の全活性より成算されそれ
により実質上目標を指向した腫瘍関連抗体だけの活性が
測定されることよりなる改良の提供によって達成される
。
本発明はさらに、前記抗ＣＥＡ抗体として標識前のＣＥ
Ａ−特異免疫反応性を少なくとも７０％、および他の抗
体に対する交差反応性を１５％以下有する実質上単一特
異性抗体であって、そのＣＥ八へ異免疫反応性を５ない
し３３％減少するに充分な程度に放射標識した該抗体を
使用することを含む前記−船方法の改良を提供する。
Ａ−特異免疫反応性を少なくとも７０％、および他の抗
体に対する交差反応性を１５％以下有する実質上単一特
異性抗体であって、そのＣＥ八へ異免疫反応性を５ない
し３３％減少するに充分な程度に放射標識した該抗体を
使用することを含む前記−船方法の改良を提供する。
加えて、本発明は、細胞内マーカー物質を産生ずるかま
たはそれに関連する腫瘍の検出および位置測定方法であ
って、前記マーカー物質に特異性でそして写真走査装置
を使用して検出し得る薬理学的に不活性なラジオアイソ
トープによって標識した抗体を被検者に非経口的に注射
し、そしてその後前記腫瘍による前記標識抗体の摂取部
位を検出し位置測定するため前記装置により前記被検者
を走査することよりなる前記方法を提供する。
たはそれに関連する腫瘍の検出および位置測定方法であ
って、前記マーカー物質に特異性でそして写真走査装置
を使用して検出し得る薬理学的に不活性なラジオアイソ
トープによって標識した抗体を被検者に非経口的に注射
し、そしてその後前記腫瘍による前記標識抗体の摂取部
位を検出し位置測定するため前記装置により前記被検者
を走査することよりなる前記方法を提供する。
細胞質、細胞内または細胞表面マーカー物質を産生じま
たはそれに関連する腫瘍を検出し、そして位置測定する
方法であって、前記マーカー物質に特異性な抗体の開裂
によって得られ、そして写真走査装置を使用して検出し
得る薬理学的に不活性なラジオアイソトープによって標
識した少なくとも１種のマーカー特異フラグメントを被
検者に非経口的に注射し、そしてその後前記腫瘍による
前記標識抗体フラグメントの摂取部位を検出し位置測定
するため前記装置により前記被検者を走査することより
なる前記方法が提供される。
たはそれに関連する腫瘍を検出し、そして位置測定する
方法であって、前記マーカー物質に特異性な抗体の開裂
によって得られ、そして写真走査装置を使用して検出し
得る薬理学的に不活性なラジオアイソトープによって標
識した少なくとも１種のマーカー特異フラグメントを被
検者に非経口的に注射し、そしてその後前記腫瘍による
前記標識抗体フラグメントの摂取部位を検出し位置測定
するため前記装置により前記被検者を走査することより
なる前記方法が提供される。
本発明はまた少なくとも１種の細胞質、細胞内または細
胞表面マーカー物質を産生または関連する少なくとも１
タイプの腫瘍の検出および位置測定方法であって、第１
の腫瘍関連マーカーに対し特異性の抗体の開裂によって
得られる少なくとも１種のマーカー特異フラグメントと
、そして同一または異なる腫瘍関連マーカーに対し特異
性の抗体の開裂によって得られる少なくとも第２の異な
るマーカー特異フラグメントとを化学的組合せにおいて
含有する多価ハイブリッドにして、写真走査装置を使用
して検出し得る薬理学的に不活性なラジオアイソトープ
で放射標識した該ハイブリッドを被検者に非経口的に注
射することと、そしてその後前記少なくとも１タイプの
腫瘍による前記標識ハイブリッドの摂取の部位を前記装
置により検出し、位置測定するため被検者を走査するこ
とよりなる前記方法を提供する。
胞表面マーカー物質を産生または関連する少なくとも１
タイプの腫瘍の検出および位置測定方法であって、第１
の腫瘍関連マーカーに対し特異性の抗体の開裂によって
得られる少なくとも１種のマーカー特異フラグメントと
、そして同一または異なる腫瘍関連マーカーに対し特異
性の抗体の開裂によって得られる少なくとも第２の異な
るマーカー特異フラグメントとを化学的組合せにおいて
含有する多価ハイブリッドにして、写真走査装置を使用
して検出し得る薬理学的に不活性なラジオアイソトープ
で放射標識した該ハイブリッドを被検者に非経口的に注
射することと、そしてその後前記少なくとも１タイプの
腫瘍による前記標識ハイブリッドの摂取の部位を前記装
置により検出し、位置測定するため被検者を走査するこ
とよりなる前記方法を提供する。
前記方法に使用するために好適な抗体および注射し得る
組成物と、そして放射能標識したマーカー特異性腫瘍関
連抗体または抗体フラグメントが提供される。
組成物と、そして放射能標識したマーカー特異性腫瘍関
連抗体または抗体フラグメントが提供される。
詳亘左蛋俯
本発明に使用される抗体は各種の腫瘍関連抗原またはマ
ーカー物質に特異性であり、他方本発明方法に使用され
るマーカー特異抗体フラグメントはそのような特異抗体
の開裂によって製造される。
ーカー物質に特異性であり、他方本発明方法に使用され
るマーカー特異抗体フラグメントはそのような特異抗体
の開裂によって製造される。
該マーカーは、！！ｌｆ１！によって産生される物質、
細胞質内であれ、核内であれ、各種の機能質的であれ腫
瘍細胞内に蓄積する物質、または腫瘍細胞の上もしくは
まわりに蓄積する物質でよい。それらは細胞内または細
胞表面または細胞質マーカーでよい。このような腫瘍関
連マーカーのうちには、Ｈｅｂｅｒｍａｍによる。 ”
Ｌｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ
″Ｆｌｅｉｓｈｅｒ Ｅｄ、および”Ｔｈｅ Ｃ１１ｎ
ｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆ Ｃａｎｃ
ｅｒ 、 ｐａｇｅ ３４７ （八ｍ、 Ａ
ｓ５ｎ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ。
細胞質内であれ、核内であれ、各種の機能質的であれ腫
瘍細胞内に蓄積する物質、または腫瘍細胞の上もしくは
まわりに蓄積する物質でよい。それらは細胞内または細
胞表面または細胞質マーカーでよい。このような腫瘍関
連マーカーのうちには、Ｈｅｂｅｒｍａｍによる。 ”
Ｌｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ
″Ｆｌｅｉｓｈｅｒ Ｅｄ、および”Ｔｈｅ Ｃ１１ｎ
ｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆ Ｃａｎｃ
ｅｒ 、 ｐａｇｅ ３４７ （八ｍ、 Ａ
ｓ５ｎ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ。
１９７９） 、および−ｏＨｓｅｎ ｅｔ ａｌの米国
特許第４．１５０１４９に記載のものがある。
特許第４．１５０１４９に記載のものがある。
腫瘍関連マーカーは前出Ｈｅｒｂｅｒｎ＋ａｎにより、
腫瘍胎児抗原、胎盤抗原、腫瘍形成または腫瘍ビールス
関連抗原、ｍ織関連抗原、臓器関連抗原、適所ホルモン
および通常の抗原またはその変種を含む多数のカテゴリ
ーに分類されている。しばしば腫瘍関連マーカーのサブ
ユニットが高い腫瘍特異性を有する抗体を上昇させるた
めに有利に使用される。例えばヒト絨毛ゴナンドトロビ
ン（ＨＣＣ；）のベーターサブユニ・ントは、非腫瘍物
質への大きく減少された交差反応性を有する抗体の産生
を促進する。本発明において有用な、それに対する特異
抗体を上昇させ得るこのような好適なマーカーは、これ
らに限定されるものではないが、アルファ胎児タンパク
（ＡＦＰ）、ヒト絨毛ゴナントロビン（ＨＣＧ）および
そのベーターサブユニーット、結腸特異抗原−ｐ （Ｃ
３Ａｐ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ） 、前立腺酸性フ
ォスファターゼ、すい臓腫瘍胎児性抗原、胎盤アルカリ
性フォスファターゼ、妊婦ベーター１−グロブリン、上
皮小体ホルモン、カルシトニン、ｍ織ポリペプチド抗原
、Ｔ−抗原、ベーター２−ミクログロブリン、乳房腫瘍
関連糖タンパク（ＭＴＧＰ） 、ガラクイジルトランス
フェラーゼ−Ｉｆ （ＧＴ−ＩＩ）、ｇｐ−！５２ビー
ルス関連抗原、卵巣のう腫がん関連抗原（ＯＣＡＡ）
、乾燥腫瘍特異抗原（ＯＣＡ） 、子宮頚骨がん抗原（
ＣＡ−５８、ＣＣＡ、ＴＡ−４）塩基性胎児性タンパク
（ＢＦＰ）、末端デオキシヌクレオチジルトランスフエ
ラーゼ（ＴｄＴ）。
腫瘍胎児抗原、胎盤抗原、腫瘍形成または腫瘍ビールス
関連抗原、ｍ織関連抗原、臓器関連抗原、適所ホルモン
および通常の抗原またはその変種を含む多数のカテゴリ
ーに分類されている。しばしば腫瘍関連マーカーのサブ
ユニットが高い腫瘍特異性を有する抗体を上昇させるた
めに有利に使用される。例えばヒト絨毛ゴナンドトロビ
ン（ＨＣＣ；）のベーターサブユニ・ントは、非腫瘍物
質への大きく減少された交差反応性を有する抗体の産生
を促進する。本発明において有用な、それに対する特異
抗体を上昇させ得るこのような好適なマーカーは、これ
らに限定されるものではないが、アルファ胎児タンパク
（ＡＦＰ）、ヒト絨毛ゴナントロビン（ＨＣＧ）および
そのベーターサブユニーット、結腸特異抗原−ｐ （Ｃ
３Ａｐ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ） 、前立腺酸性フ
ォスファターゼ、すい臓腫瘍胎児性抗原、胎盤アルカリ
性フォスファターゼ、妊婦ベーター１−グロブリン、上
皮小体ホルモン、カルシトニン、ｍ織ポリペプチド抗原
、Ｔ−抗原、ベーター２−ミクログロブリン、乳房腫瘍
関連糖タンパク（ＭＴＧＰ） 、ガラクイジルトランス
フェラーゼ−Ｉｆ （ＧＴ−ＩＩ）、ｇｐ−！５２ビー
ルス関連抗原、卵巣のう腫がん関連抗原（ＯＣＡＡ）
、乾燥腫瘍特異抗原（ＯＣＡ） 、子宮頚骨がん抗原（
ＣＡ−５８、ＣＣＡ、ＴＡ−４）塩基性胎児性タンパク
（ＢＦＰ）、末端デオキシヌクレオチジルトランスフエ
ラーゼ（ＴｄＴ）。
細胞質黒色腫関連抗原、ヒト星状細胞腫関連抗原（ＨＡ
ＡＡ）、通常グリオーマ抗原（ＣＧＡ）。
ＡＡ）、通常グリオーマ抗原（ＣＧＡ）。
膠芽胎児性抗原（ＧＥＡ）、神経膠原線維酸性タンパク
（ＧＦＡ）、通常髄膜腫抗原（ＣＭＡ）。
（ＧＦＡ）、通常髄膜腫抗原（ＣＭＡ）。
および腫瘍脈管形成因子（ＴＡＦ）を含む。
マーカー特異抗体はこの分野でよく知られた慣用方法に
よって製造することができる。通常動物、好ましくはネ
ズミ、ウサギ、さらに好ましくはヤギまたは霊長類に腫
瘍関連マーカー物質を挑戦させ、それに対しその免疫系
をこれらマーカーに特異性の抗体を産生ずることによっ
て反応させる。
よって製造することができる。通常動物、好ましくはネ
ズミ、ウサギ、さらに好ましくはヤギまたは霊長類に腫
瘍関連マーカー物質を挑戦させ、それに対しその免疫系
をこれらマーカーに特異性の抗体を産生ずることによっ
て反応させる。
動物を出血させ、血液の免疫グロブリン分画を単離し、
そして好ましくは１回または２回以上のアフィニティー
クロマトグラフィーを含む各種の慣用分離技術により特
異性免疫グロブリンを単離する。腫瘍関連マーカー物質
に特異な抗体を上昇させるための好適なこのような一般
法は、特に“。
そして好ましくは１回または２回以上のアフィニティー
クロマトグラフィーを含む各種の慣用分離技術により特
異性免疫グロブリンを単離する。腫瘍関連マーカー物質
に特異な抗体を上昇させるための好適なこのような一般
法は、特に“。
ＩｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏＳｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ
、 ｌｌｅｒｂｅｒｍａｎ ｅｔ ａＬＥｄｓ、 （
Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、 Ｉｎｃ、、 ＮｅｗＹ
ｏｒｋ ａｎｄ Ｂａ５ｅｌ＋１９７９）および”Ｔｒ
ｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒｓ”、５ｅ１１．Ｅｄ、（Ｈｕｍ
ａｎａＰｅｒｓｓ、 Ｃ１１ｆｔｏｎ、 Ｎ、Ｊ、 １
９８）に記載されている。
、 ｌｌｅｒｂｅｒｍａｎ ｅｔ ａＬＥｄｓ、 （
Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、 Ｉｎｃ、、 ＮｅｗＹ
ｏｒｋ ａｎｄ Ｂａ５ｅｌ＋１９７９）および”Ｔｒ
ｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒｓ”、５ｅ１１．Ｅｄ、（Ｈｕｍ
ａｎａＰｅｒｓｓ、 Ｃ１１ｆｔｏｎ、 Ｎ、Ｊ、 １
９８）に記載されている。
ＣＥＡ特異抗体は、とりわけＰｒｉｍｕｓ ｅｔ ａｌ
、 Ｊ。
、 Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 １１８．５５（１９７７）；
Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ、５ｕｐｒａ：
Ｐｒ１ｎ＋ｕｓ ｅｔ ａｌ、 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ、、３７．１５４４（１９７７）；Ｇｏｌｄｅｎｂｅ
ｒｇ ｅｔ ａｌ、’ Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓ
ｉｓ ｏｆ ＣａｎｃｅｒＰａｒｔ Ｉ’、 Ｆｌｅ
ｒｂｅｍａｎ ｅｔ ａｌ、 εｄｓ、、ｐａｇｅｓ
２６５−３０６（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、
Ｉｎｃ、＋Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ＆ Ｂａ５ｅｌ １
９７９）に報告されている当分野で公知の各種の方法で
製造することができる。
Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ、５ｕｐｒａ：
Ｐｒ１ｎ＋ｕｓ ｅｔ ａｌ、 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ、、３７．１５４４（１９７７）；Ｇｏｌｄｅｎｂｅ
ｒｇ ｅｔ ａｌ、’ Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓ
ｉｓ ｏｆ ＣａｎｃｅｒＰａｒｔ Ｉ’、 Ｆｌｅ
ｒｂｅｍａｎ ｅｔ ａｌ、 εｄｓ、、ｐａｇｅｓ
２６５−３０６（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、
Ｉｎｃ、＋Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ＆ Ｂａ５ｅｌ １
９７９）に報告されている当分野で公知の各種の方法で
製造することができる。
前記の慣用技術によって製造した抗体は通常抗体の混合
物であり、その一定割合が特異性であるが、しかし一般
に非腫瘍関連または他の抗原に交差反応性の抗体を可変
割合で含有している。抗体混合物のいくつかの成分がそ
れに対し交差反応性である結合抗原を使用する繰り返し
アフィニティークロマトグラフィーおよび結合した精製
抗原を含むカラムの通過によって精製した抗体は、高い
特異免疫反応性を有し、しばしば７０％近くまたはそれ
以上へ達し、そして非腫瘍関連抗原または他の抗原に対
する交差反応性が１５％以下となる。
物であり、その一定割合が特異性であるが、しかし一般
に非腫瘍関連または他の抗原に交差反応性の抗体を可変
割合で含有している。抗体混合物のいくつかの成分がそ
れに対し交差反応性である結合抗原を使用する繰り返し
アフィニティークロマトグラフィーおよび結合した精製
抗原を含むカラムの通過によって精製した抗体は、高い
特異免疫反応性を有し、しばしば７０％近くまたはそれ
以上へ達し、そして非腫瘍関連抗原または他の抗原に対
する交差反応性が１５％以下となる。
これら抗体はそれらが上昇された抗原に対して実質上モ
ノ特異性であると考えられ、そして本発明において好適
に使用される。
ノ特異性であると考えられ、そして本発明において好適
に使用される。
腫瘍位置測定のため、高いマーカー特異免疫反応性を有
する抗体を使用することは特に有利である。高い特異性
は、標識抗体の高割合が腫瘍部位を標的とし、小割合が
非標的態様で分布されることを意味する。それ故標識抗
体の少量を使用することができ、患者の被曝量を減らし
、そして標的へ向わない抗体によるバックグラウンド放
射の低いレベルは解像度を改善するであろう。このこと
はさらに他のどの方法でもしばしば困難または不可能で
あるより小さい腫瘍を検出し得ることを意味する。高度
に特異なモノクローン性抗体は雑種形成技術によって製
造することができる。このような抗体は通常精製を殆ん
どまたは全く必要とせず、そして通常少なくとも７５％
の特異免疫反応性を持ち、ある場合には９５％以上の特
異性を有する。このようなモノクローン性のハイブリド
ーマ誘導抗体もまた本発明において使用するのに好適で
ある。好適な具体例において、モノクローン性抗体は、
サルに精製した腫瘍関連マーカーを挑戦させ、抗体産生
サルリンパもしくはひ臓細胞をヒトもしくはマウス骨髄
腫細胞と融合して雑種細胞をつくり、次にこれを分離し
、クローン化し、前ＥＥママ−−物質に特異なモノクロ
ーン性抗体を生成するそれらの能力について選定する。
する抗体を使用することは特に有利である。高い特異性
は、標識抗体の高割合が腫瘍部位を標的とし、小割合が
非標的態様で分布されることを意味する。それ故標識抗
体の少量を使用することができ、患者の被曝量を減らし
、そして標的へ向わない抗体によるバックグラウンド放
射の低いレベルは解像度を改善するであろう。このこと
はさらに他のどの方法でもしばしば困難または不可能で
あるより小さい腫瘍を検出し得ることを意味する。高度
に特異なモノクローン性抗体は雑種形成技術によって製
造することができる。このような抗体は通常精製を殆ん
どまたは全く必要とせず、そして通常少なくとも７５％
の特異免疫反応性を持ち、ある場合には９５％以上の特
異性を有する。このようなモノクローン性のハイブリド
ーマ誘導抗体もまた本発明において使用するのに好適で
ある。好適な具体例において、モノクローン性抗体は、
サルに精製した腫瘍関連マーカーを挑戦させ、抗体産生
サルリンパもしくはひ臓細胞をヒトもしくはマウス骨髄
腫細胞と融合して雑種細胞をつくり、次にこれを分離し
、クローン化し、前ＥＥママ−−物質に特異なモノクロ
ーン性抗体を生成するそれらの能力について選定する。
免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分画からのモノクローン性
抗体はこの方法で得られ、そして本発明による腫瘍検出
、位置測定および治療のため使用されるフラグメントを
製造するために使用される。
抗体はこの方法で得られ、そして本発明による腫瘍検出
、位置測定および治療のため使用されるフラグメントを
製造するために使用される。
Ｋｏｐｒｏｗｓｋ ｉの米国特許第４．１７２，１２４
号のＩ ｇ Ｍモノクローン性抗体はこの方法に使用す
るために適していない。
号のＩ ｇ Ｍモノクローン性抗体はこの方法に使用す
るために適していない。
抗体フラグメントはＦ（ａｂ’）ｚと呼ばれる５Ｓフラ
グメントを与えるように抗体をペプシンで酵素分解する
ことによって製造し得ることが知られている。このフラ
グメントはさらにチオール還元剤と、場合によってジサ
ルファイド結合の開裂から生ずるスルフヒドリル基のブ
ロッキング基を使用して開裂し、３．５ＳＦａｂ“ １
価フラグメントを生成させることができる。その代りに
、パパインを使用する酵素分解は直接２個の１価Ｆａｂ
フラグメントおよび１個のＦｃフラグメントを生成する
。これらの方法は特に米国特許第４゜０３６、９４５号
およびその引用文献に、そしてＮ１５ｏｎｏｆｆｅｔ
ａｌ、 Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｔｏｐｈｙ
Ｓ、、 ８９．３２０（１９６０）；Ｐｏｒｔｅｒ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、＋ ７３，１１９（１９５９）；
Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔａｌ、 ”Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ。
グメントを与えるように抗体をペプシンで酵素分解する
ことによって製造し得ることが知られている。このフラ
グメントはさらにチオール還元剤と、場合によってジサ
ルファイド結合の開裂から生ずるスルフヒドリル基のブ
ロッキング基を使用して開裂し、３．５ＳＦａｂ“ １
価フラグメントを生成させることができる。その代りに
、パパインを使用する酵素分解は直接２個の１価Ｆａｂ
フラグメントおよび１個のＦｃフラグメントを生成する
。これらの方法は特に米国特許第４゜０３６、９４５号
およびその引用文献に、そしてＮ１５ｏｎｏｆｆｅｔ
ａｌ、 Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｔｏｐｈｙ
Ｓ、、 ８９．３２０（１９６０）；Ｐｏｒｔｅｒ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、＋ ７３，１１９（１９５９）；
Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔａｌ、 ”Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ。
Ｖｏｌ、 １，４２２（Ａｅａｄ、 Ｐｒｅｓｓ、 １
９６７）に記載されている。
９６７）に記載されている。
抗体を開裂する他の方法、例えばＦａｂフラグメントの
それ以上の開裂または他の酵素もしくは化学的手法の使
用も使用することができる。それらの親杭体がそれに対
して１−昇された紳瘍関連マーカーに対して特異性を保
持しているフラグメントだけがこの方法に使用される。
それ以上の開裂または他の酵素もしくは化学的手法の使
用も使用することができる。それらの親杭体がそれに対
して１−昇された紳瘍関連マーカーに対して特異性を保
持しているフラグメントだけがこの方法に使用される。
混成抗体フラグメントは異なる抗体の還元的開裂から生
ずるＦａｂ”フラグメントの酸化的結合によって製造さ
れた。これらの一部分はもとの抗体がそれに対して上昇
された抗原の両方へ特異性のフラグメントを含有するで
あろう。これは二つの異なる抗体のペプシン分解によっ
て製造された二つの異なるＦ （ａｂ’ ）ｚフラグメ
ントを混合し、Ｆａｂ’ フラグメントの混合物を生成
するように還元的に開裂し、次にもとの抗原のそれぞれ
へ特異なＦａｂ’部分を含む混成フラグメントを含むＦ
（ａｂ”）２フラグメント混合物を生成するように酸化
してジサルファイド結合を再生成させることによって有
利に実施することができる。
ずるＦａｂ”フラグメントの酸化的結合によって製造さ
れた。これらの一部分はもとの抗体がそれに対して上昇
された抗原の両方へ特異性のフラグメントを含有するで
あろう。これは二つの異なる抗体のペプシン分解によっ
て製造された二つの異なるＦ （ａｂ’ ）ｚフラグメ
ントを混合し、Ｆａｂ’ フラグメントの混合物を生成
するように還元的に開裂し、次にもとの抗原のそれぞれ
へ特異なＦａｂ’部分を含む混成フラグメントを含むＦ
（ａｂ”）２フラグメント混合物を生成するように酸化
してジサルファイド結合を再生成させることによって有
利に実施することができる。
このように混成抗体フラグメントの製造法は、Ｆｅｔｅ
ａｎｕ、 ”Ｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ門ｅｄｉｃｉｎｅ ｐ
ａｇｅｓ ３２１−３２３（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ
Ｉｎｔ、 Ｂｋ。
ａｎｕ、 ”Ｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ門ｅｄｉｃｉｎｅ ｐ
ａｇｅｓ ３２１−３２３（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ
Ｉｎｔ、 Ｂｋ。
Ｃｏ、、 Ｎｏｗ Ｙｏｒｋ ｅｔ ａｌ、 １９７８
）・Ｎ１５ｏｎｏｆｆ ｅｔ ａｔへｒｃｈ、 Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、 １３ｉｏｐｈｙｓ、、９３．４７０（
１９６１）；ｔｌａｍｍｃｒｌｉｎ６ｓｔ ａｈ Ｊ、
Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、、１２８．１４６１（１９６８）
に記載されている。
）・Ｎ１５ｏｎｏｆｆ ｅｔ ａｔへｒｃｈ、 Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、 １３ｉｏｐｈｙｓ、、９３．４７０（
１９６１）；ｔｌａｍｍｃｒｌｉｎ６ｓｔ ａｈ Ｊ、
Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、、１２８．１４６１（１９６８）
に記載されている。
以下の議論において、「抗体」なる語は断わりのない限
りこれまで記載したような抗体および抗体フラグメント
を包含する。
りこれまで記載したような抗体および抗体フラグメント
を包含する。
抗体は当分野で公知のいくつかの手法のいずれによって
も標識することができる。標識技術の広い範囲がＦｅｔ
ｅａｎｕ、“Ｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 、
ｐａｇｅｓ ２１４−３０９（？ｌｃＧｒａｗ−）
ｆｉｌｌ １ｎＬ。
も標識することができる。標識技術の広い範囲がＦｅｔ
ｅａｎｕ、“Ｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 、
ｐａｇｅｓ ２１４−３０９（？ｌｃＧｒａｗ−）
ｆｉｌｌ １ｎＬ。
Ｂｏｏｋ Ｃｏ、、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ｅｔ ａｉ、
１９７８）に記載されている種々の金属ラジオアイソ
トープの導入は、Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、
Ｎｕｃｌ、 Ｍｅｄ、、 ２０，４２８（１９７９）
。
１９７８）に記載されている種々の金属ラジオアイソ
トープの導入は、Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、
Ｎｕｃｌ、 Ｍｅｄ、、 ２０，４２８（１９７９）
。
５ｕｎｄｂｅｒｙ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｍｅｄ、 Ｃ
ｈｅｍ、、１７．１３０４（１９７４）；５ａｈａ ｅ
ｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｎｕｃｌ、 Ｍｅｄ、、６，５４２
（１９７６）の方法によって達成することができる。以
上に当分野で公知のタンパクを放射標識するための多数
の方法の数例に過ぎない。
ｈｅｍ、、１７．１３０４（１９７４）；５ａｈａ ｅ
ｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｎｕｃｌ、 Ｍｅｄ、、６，５４２
（１９７６）の方法によって達成することができる。以
上に当分野で公知のタンパクを放射標識するための多数
の方法の数例に過ぎない。
使用するラジオアイソトープのうち、ガンマ放射体、陽
電子放射体、Ｘ線放射体、および螢光発光体が位置測定
および／または治療用に好適であり、一方ベーター放射
体およびアルファ放射体も治療に使用することができる
。抗体を標識するため好適なラジオアイソトープはヨウ
素−１３１ヨー素−１２３，ヨー素１２６．ヨー素１３
３臭素−７７，インジウム−１１１，インジウム１１３
ｍ、ガリウム−６７、ガリウム−６８，ルテニウム−９
５，ルテニウム−９７，ルテニウム−１０３，ルテニウ
ム−１０５，水銀−１９７水銀−２０３，レニウム−９
９ｍ、レニウム−１０５，レニウム−１０１，テルル−
１２１ｍ、テルル−１１２ｍ、テルル−１２５ｍ、ツリ
ウム−１６５、ツリウム−１６７、ツリウム−１６８−
テクネチウム−９９ｍ、およびフン素−１８を含む。ハ
ロゲン標識抗体もしくはフラグメントおよび／または正
常免疫グロブリンもしくは対応するフラグメントは、実
質上同一の運動性および分布と、そして類似の代謝を持
つであろうから、ハロゲンは標識として多かれ少なかれ
互換性を持って使用することができる。
電子放射体、Ｘ線放射体、および螢光発光体が位置測定
および／または治療用に好適であり、一方ベーター放射
体およびアルファ放射体も治療に使用することができる
。抗体を標識するため好適なラジオアイソトープはヨウ
素−１３１ヨー素−１２３，ヨー素１２６．ヨー素１３
３臭素−７７，インジウム−１１１，インジウム１１３
ｍ、ガリウム−６７、ガリウム−６８，ルテニウム−９
５，ルテニウム−９７，ルテニウム−１０３，ルテニウ
ム−１０５，水銀−１９７水銀−２０３，レニウム−９
９ｍ、レニウム−１０５，レニウム−１０１，テルル−
１２１ｍ、テルル−１１２ｍ、テルル−１２５ｍ、ツリ
ウム−１６５、ツリウム−１６７、ツリウム−１６８−
テクネチウム−９９ｍ、およびフン素−１８を含む。ハ
ロゲン標識抗体もしくはフラグメントおよび／または正
常免疫グロブリンもしくは対応するフラグメントは、実
質上同一の運動性および分布と、そして類似の代謝を持
つであろうから、ハロゲンは標識として多かれ少なかれ
互換性を持って使用することができる。
抗体標識のために好適な技術は、Ｇｒｅｅｎｉｖｏｏｄ
ｅｔａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、８９，１１４
（１９６３）によって報告され、ＭｃＣｏｎａｈｅｙ
ａｔ ａｌ、 Ｉｎｔ、 ＾ｒｃｈ、 ＡＩ
ｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌｎ。
ｅｔａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、８９，１１４
（１９６３）によって報告され、ＭｃＣｏｎａｈｅｙ
ａｔ ａｌ、 Ｉｎｔ、 ＾ｒｃｈ、 ＡＩ
ｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌｎ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 ２９，１８５（１９６９）によっ
て修正されたように、放射性ヨー化カリウムまたはナト
リウムと抗体との混合物をクロラミン−Ｔで処理する酸
化法を用いて、ヨー素−１３１（Ｉ−１３１）またはヨ
ー素−１２３（ｆ−１２３）で標識することを含む。こ
れは試薬の割合および反応条件に依存して、抗体分子上
の、恐らくチロシン残基上の、多分トリプトファンおよ
びフェニルアラニン残基上の水素原子をヨー素原子で直
接置換する結果を生ずる。
て修正されたように、放射性ヨー化カリウムまたはナト
リウムと抗体との混合物をクロラミン−Ｔで処理する酸
化法を用いて、ヨー素−１３１（Ｉ−１３１）またはヨ
ー素−１２３（ｆ−１２３）で標識することを含む。こ
れは試薬の割合および反応条件に依存して、抗体分子上
の、恐らくチロシン残基上の、多分トリプトファンおよ
びフェニルアラニン残基上の水素原子をヨー素原子で直
接置換する結果を生ずる。
一般に、抗体へその免疫特異性を破壊することなくでき
るだけ高い割合の放射性標識を導入するのが望ましい。
るだけ高い割合の放射性標識を導入するのが望ましい。
非常に多数の研究者は抗体１分子当りヨー素原子１．５
ないし２個以上の直接置換による投入は不利であると考
えていたが、今や抗体１分子当りヨー素を少なくとも２
．５および好ましくは平均５ないし１０原子直接置換し
て導入することは、特に抗体が標識面高度にマーカー特
異性である場合有利であることが判明した。この場合、
高度の標識化の結果として５ないし３３％の抗体特異性
の低下さえも高い活性の方が上廻り、実質上より少量の
標識抗体の使用を許容する。前記したように、高活性の
高い特異性抗体の使用は効率的な位置測定および増大し
た解像性を結果する。
ないし２個以上の直接置換による投入は不利であると考
えていたが、今や抗体１分子当りヨー素を少なくとも２
．５および好ましくは平均５ないし１０原子直接置換し
て導入することは、特に抗体が標識面高度にマーカー特
異性である場合有利であることが判明した。この場合、
高度の標識化の結果として５ないし３３％の抗体特異性
の低下さえも高い活性の方が上廻り、実質上より少量の
標識抗体の使用を許容する。前記したように、高活性の
高い特異性抗体の使用は効率的な位置測定および増大し
た解像性を結果する。
この増加した活性と減少した特異性とのバランスは抗体
１分子当り平均ヨー素１０原子まで有利で、その後は特
異性の減少が高活性の利益を上廻る。
１分子当り平均ヨー素１０原子まで有利で、その後は特
異性の減少が高活性の利益を上廻る。
放射性標識を導入するための他の方法を使用することに
より、減少した免疫特異性に受容できない価格を支払う
ことなしに抗体フラグメントに対する標識の割合をさら
に′増加することが可能であろう。それ以上の改良は、
抗体上の抗原結合部位が保護されることを確実にするた
め、放射性標識化を特異抗原の存在下において実施する
ことによって達成することができる。該抗原は標識死後
分離される。
より、減少した免疫特異性に受容できない価格を支払う
ことなしに抗体フラグメントに対する標識の割合をさら
に′増加することが可能であろう。それ以上の改良は、
抗体上の抗原結合部位が保護されることを確実にするた
め、放射性標識化を特異抗原の存在下において実施する
ことによって達成することができる。該抗原は標識死後
分離される。
２価混成抗体フラグメントの実例、例えば２つの異なる
腫瘍特異抗体のそれぞれからＦａｂ’ フラグメントの
化学的結合によって得られるＦ（ａｂ゛）２抗体フラグ
メントを以下に示す。表１は、検出および治療の両方に
対しそれらが有利に使用される好適なそのような２価混
成体および腫瘍タイプの例示リストを与える。１番目の
カラムは混成体の二つのＦａｂ’成分がそれに対して特
異性である二つの抗原を示し、各混成体はそれぞれの抗
原性決定因子に対し特異性の一つのフラグメントを有す
る。いくつかの場合において抗体は特異性を増加させる
ため腫瘍関連抗原のより小さいフラグメントに対して上
昇されるであろう。例えばＨＣＧのベーターサブユニッ
トに対して上昇された抗体はＨＣＧ自体に対して上昇さ
せた抗原より好ましい。２番目のカラムは各ハイブリッ
ドタイプを優先的に濃縮する腫瘍タイプを示す９表１ Ｆ （ａｂ’ ）２混成抗体フラグメントおよび関連！
ｌ！ＩＩ瘍タイプ 胃腸例えば結腸、こう門、胃 すい臓、肺 肺、卵巣、胃腸 肝臓、胃腸、卵巣、こう丸 大部分 ＣＥＡ／Ｃ３Ａｐ ＣＥＡ／ＰＯＡ ＣＥＡ／ＨＣＧ ＣＥＡ／ＡＦＰ ＣＥＡ／ＴＡＰ ＣＥＡ／フェリチン ＣＥＡ／カルシトニン ＣＥＡ／ＰＡＰ 固形、造血、肝臓 甲状腺 前立腺 ＣＥＡ／上皮小体ホルモ ＨＣＧ／ＰＢＧ ＣＧ Ａ／Ｇ Ｅ Ａ ＧＦＡ／ＣＭＡ 凡例： ＥＡ がん胎児性抗原 ン 上皮小体、肺 顆粒性原形質 脳 脳 ＳＡｐ ＯＡ ＦＰ ＰＡ ＡＰ ＢＧ ＧＡ ＥＡ ＦＡ ＭＡ 結腸特異抗原−ｐ すい臓腫瘍胎児性抗原 アルファ胎児性タンパク 組織ペプチド抗原 前立腺酸性フォスファターゼ 妊婦ベーター１−グロブリン 通常グリオーマ抗原 膠芽胎児性抗原 神経膠原線維酸性タンパク 通常髄膜腫抗原 表１に示したような混成フラグメントは多数腫瘍タイプ
または細胞の検出および位置測定のため単一ラジオアイ
ソトープで標識するか、または治療のため単数もしくは
複数のラジオアイソトープで標識することができる。さ
らにこのような混成体は検出のためあるラジオアイソト
ープで、そして治療のため１種またはそれ以上のアイソ
トープで、例えばあるラジオアイソトープおよび／また
はホウ素含有フラグメントで標識することができ、その
ため位置測定された腫瘍は以下記載の態様で熱中性子で
照射されることができる。
腫瘍特異抗体のそれぞれからＦａｂ’ フラグメントの
化学的結合によって得られるＦ（ａｂ゛）２抗体フラグ
メントを以下に示す。表１は、検出および治療の両方に
対しそれらが有利に使用される好適なそのような２価混
成体および腫瘍タイプの例示リストを与える。１番目の
カラムは混成体の二つのＦａｂ’成分がそれに対して特
異性である二つの抗原を示し、各混成体はそれぞれの抗
原性決定因子に対し特異性の一つのフラグメントを有す
る。いくつかの場合において抗体は特異性を増加させる
ため腫瘍関連抗原のより小さいフラグメントに対して上
昇されるであろう。例えばＨＣＧのベーターサブユニッ
トに対して上昇された抗体はＨＣＧ自体に対して上昇さ
せた抗原より好ましい。２番目のカラムは各ハイブリッ
ドタイプを優先的に濃縮する腫瘍タイプを示す９表１ Ｆ （ａｂ’ ）２混成抗体フラグメントおよび関連！
ｌ！ＩＩ瘍タイプ 胃腸例えば結腸、こう門、胃 すい臓、肺 肺、卵巣、胃腸 肝臓、胃腸、卵巣、こう丸 大部分 ＣＥＡ／Ｃ３Ａｐ ＣＥＡ／ＰＯＡ ＣＥＡ／ＨＣＧ ＣＥＡ／ＡＦＰ ＣＥＡ／ＴＡＰ ＣＥＡ／フェリチン ＣＥＡ／カルシトニン ＣＥＡ／ＰＡＰ 固形、造血、肝臓 甲状腺 前立腺 ＣＥＡ／上皮小体ホルモ ＨＣＧ／ＰＢＧ ＣＧ Ａ／Ｇ Ｅ Ａ ＧＦＡ／ＣＭＡ 凡例： ＥＡ がん胎児性抗原 ン 上皮小体、肺 顆粒性原形質 脳 脳 ＳＡｐ ＯＡ ＦＰ ＰＡ ＡＰ ＢＧ ＧＡ ＥＡ ＦＡ ＭＡ 結腸特異抗原−ｐ すい臓腫瘍胎児性抗原 アルファ胎児性タンパク 組織ペプチド抗原 前立腺酸性フォスファターゼ 妊婦ベーター１−グロブリン 通常グリオーマ抗原 膠芽胎児性抗原 神経膠原線維酸性タンパク 通常髄膜腫抗原 表１に示したような混成フラグメントは多数腫瘍タイプ
または細胞の検出および位置測定のため単一ラジオアイ
ソトープで標識するか、または治療のため単数もしくは
複数のラジオアイソトープで標識することができる。さ
らにこのような混成体は検出のためあるラジオアイソト
ープで、そして治療のため１種またはそれ以上のアイソ
トープで、例えばあるラジオアイソトープおよび／また
はホウ素含有フラグメントで標識することができ、その
ため位置測定された腫瘍は以下記載の態様で熱中性子で
照射されることができる。
より小さいマーカー特異性フラグメントを生成するよう
に抗体からＦｃフラグメントを除去することは、フラグ
メントの移動度およびその血液−脳障壁通過能力を容易
にするより小さい分子量を有する分子を生成するという
利益を有する。加えて、Ｆｃフラグメントは抗体の主な
過アレルゲン性および非特異的結合の大部分に責任があ
る。従ってその開裂は抗体の注射、特に多数の腫瘍の造
影または腫瘍放射線療法のための反復注射に対するアレ
ルギー反応の危険を減らす。抗体フラグメントの連動性
は全天然免疫グロブリンよりももっと速く、そして腫瘍
にもっと特異的に結合するので、減算性技術は省略する
か、または特定の状況で使用するため修正することがで
きる。加えて、特定の動脈によって供給された腫瘍への
標識した検知剤のもっと直接的な動脈内通用のための標
識抗体の使用は、腫瘍検出および腫瘍放射線療法の両方
のため、このプロセスの重要な機会を提供する。
に抗体からＦｃフラグメントを除去することは、フラグ
メントの移動度およびその血液−脳障壁通過能力を容易
にするより小さい分子量を有する分子を生成するという
利益を有する。加えて、Ｆｃフラグメントは抗体の主な
過アレルゲン性および非特異的結合の大部分に責任があ
る。従ってその開裂は抗体の注射、特に多数の腫瘍の造
影または腫瘍放射線療法のための反復注射に対するアレ
ルギー反応の危険を減らす。抗体フラグメントの連動性
は全天然免疫グロブリンよりももっと速く、そして腫瘍
にもっと特異的に結合するので、減算性技術は省略する
か、または特定の状況で使用するため修正することがで
きる。加えて、特定の動脈によって供給された腫瘍への
標識した検知剤のもっと直接的な動脈内通用のための標
識抗体の使用は、腫瘍検出および腫瘍放射線療法の両方
のため、このプロセスの重要な機会を提供する。
腫瘍位置測定、検出および治療のための単一製剤に標識
抗体フラグメントの混合物を使用することができる。該
混合物は、位置測定および解像度を向上させるため同一
腫瘍タイプに関連する異なる抗原に特異なフラグメント
を使用することができる。この代りに広い腫瘍特異性を
有するフラグメントの混合物を使用して、種々の腫瘍タ
イプの広範囲スクリーニングを実施することができる。
抗体フラグメントの混合物を使用することができる。該
混合物は、位置測定および解像度を向上させるため同一
腫瘍タイプに関連する異なる抗原に特異なフラグメント
を使用することができる。この代りに広い腫瘍特異性を
有するフラグメントの混合物を使用して、種々の腫瘍タ
イプの広範囲スクリーニングを実施することができる。
混成フラグメントの使用に同様に、同一もしくは異なる
腫瘍または腫瘍細胞タイプに関連する抗原に対し特異な
標識抗体の混合物を使用してもよい。これはある場合に
検出、位置測定および／または治療を向上させることが
でき、そしてまた２種以上の腫瘍または腫瘍細胞タイプ
についての広いスクリーンの範囲を増加することができ
る。
腫瘍または腫瘍細胞タイプに関連する抗原に対し特異な
標識抗体の混合物を使用してもよい。これはある場合に
検出、位置測定および／または治療を向上させることが
でき、そしてまた２種以上の腫瘍または腫瘍細胞タイプ
についての広いスクリーンの範囲を増加することができ
る。
放射性標識特異抗体の投与後２４時間後においてのみ通
常腫瘍位置測定を可能とする以前公知の方法とは対照的
に、この改良された減算技術は、放射性標識特異抗体お
よび放射性標識正常免疫グロブリンの同時投与後２４時
間以内に腫瘍検出および位置測定を可能とする。腫瘍位
置測定は、抗体／免疫グロブリン対の注射後２時間で、
投与後６．１２．１８および２４時間において改良され
た解像度をもって達成することができる。抗体フラグメ
ントは大変速く組織中に拡散しそして一層速く局在化さ
れるので、腫瘍検出および位置測定は標識フラグメント
の注射後短時間で達成することができる。
常腫瘍位置測定を可能とする以前公知の方法とは対照的
に、この改良された減算技術は、放射性標識特異抗体お
よび放射性標識正常免疫グロブリンの同時投与後２４時
間以内に腫瘍検出および位置測定を可能とする。腫瘍位
置測定は、抗体／免疫グロブリン対の注射後２時間で、
投与後６．１２．１８および２４時間において改良され
た解像度をもって達成することができる。抗体フラグメ
ントは大変速く組織中に拡散しそして一層速く局在化さ
れるので、腫瘍検出および位置測定は標識フラグメント
の注射後短時間で達成することができる。
血液プールまたは間質性体液中に標識フラグメントまた
はそれらの代謝物が蓄積することによる放射能は、腫瘍
関連マーカーへ特異性の標識抗体フラグメントを使用す
る腫瘍位置測定の解像度を著しく減少させることがあり
得る。そのような場合には、フォト走査前に被検者へ参
照物質を注射するのが有利である。参照物質はマーカー
特異抗体フラグメント標識と異なるエネルギーで放射し
、そしてフォト走査装置で独立に検出し得るラジオアイ
ソトープで放射標識される。参照物質の活性のレベルは
非標的指向特異抗体フラグメントによるバックグラウン
ド活性の測定に使用され、このバックグラウンド活性は
次に特異抗体の全活性から減算され、実質上標的指向腫
瘍関連抗体のみの活性の測定を許容する。
はそれらの代謝物が蓄積することによる放射能は、腫瘍
関連マーカーへ特異性の標識抗体フラグメントを使用す
る腫瘍位置測定の解像度を著しく減少させることがあり
得る。そのような場合には、フォト走査前に被検者へ参
照物質を注射するのが有利である。参照物質はマーカー
特異抗体フラグメント標識と異なるエネルギーで放射し
、そしてフォト走査装置で独立に検出し得るラジオアイ
ソトープで放射標識される。参照物質の活性のレベルは
非標的指向特異抗体フラグメントによるバックグラウン
ド活性の測定に使用され、このバックグラウンド活性は
次に特異抗体の全活性から減算され、実質上標的指向腫
瘍関連抗体のみの活性の測定を許容する。
Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ、 Ｎ、 Ｅｎｇ、
Ｊ、 Ｍｅｄ、、 ２９８＋ １３８４（１９７Ｂ）
に報告された成功したヒトがんの非侵人的ラジオ免疫検
知法においては、減算技術が成功的位置測定のために必
要であることを示した。しかしながら使用された減算技
術は本発明のそれと実質的に相違する。参照方法では、
放射性ヨード化した抗ＣＥＡ抗体が注射され、そしてテ
クネチチウムー９９ｍ標識ヒト血清アルブミンおよび過
テクネチウム酸テクネチウム−９９ｍが各造影走査前に
静注された。像はガンマシンチレーションカメラで得ら
れ、得られたデータはミニコンビ１−ターに記憶される
。非標的区域におけるＴｃ−９９活性に対するｌ−１３
１活性の比はバックグラウンド非局在抗体活性のための
比較標準を与えた。これは他の位置における非標的指向
特異抗体活性の測定を許容し、これは全特異抗体活性か
ら減算され、局在化された標的指向抗体の活性値が得ら
れた。
Ｊ、 Ｍｅｄ、、 ２９８＋ １３８４（１９７Ｂ）
に報告された成功したヒトがんの非侵人的ラジオ免疫検
知法においては、減算技術が成功的位置測定のために必
要であることを示した。しかしながら使用された減算技
術は本発明のそれと実質的に相違する。参照方法では、
放射性ヨード化した抗ＣＥＡ抗体が注射され、そしてテ
クネチチウムー９９ｍ標識ヒト血清アルブミンおよび過
テクネチウム酸テクネチウム−９９ｍが各造影走査前に
静注された。像はガンマシンチレーションカメラで得ら
れ、得られたデータはミニコンビ１−ターに記憶される
。非標的区域におけるＴｃ−９９活性に対するｌ−１３
１活性の比はバックグラウンド非局在抗体活性のための
比較標準を与えた。これは他の位置における非標的指向
特異抗体活性の測定を許容し、これは全特異抗体活性か
ら減算され、局在化された標的指向抗体の活性値が得ら
れた。
本発明は適当な参照物質のうちで、Ｔｃ−９９ｍ標識正
常免疫グロブリンＧまたはそのフラグメントおよびＴｃ
−９９ｍ標識イオウコロイドの使用を含む。しかしなが
ら好ましくは参照物質は、対応する正常な無関係な免疫
グロブリンＧ（ＩｇＧ）か、または腫瘍位置測定剤とし
て使用した特異抗体フラグメントを製造するために使用
したものと同一もしくは異なる種からの対応するフラグ
メントである。この正常免疫グロブリンＧは、好ましく
は特異抗体を標識するために使用した同じ元素の異なる
アイソトープで放射標識され、そして好ましくは放射標
識されたマーカー特異抗体と同時に注射される。これは
参照物質として標識特異抗体と実質上同じ結合、分布お
よび代謝動力学性を有する分子種を使用するという利益
を有する。
常免疫グロブリンＧまたはそのフラグメントおよびＴｃ
−９９ｍ標識イオウコロイドの使用を含む。しかしなが
ら好ましくは参照物質は、対応する正常な無関係な免疫
グロブリンＧ（ＩｇＧ）か、または腫瘍位置測定剤とし
て使用した特異抗体フラグメントを製造するために使用
したものと同一もしくは異なる種からの対応するフラグ
メントである。この正常免疫グロブリンＧは、好ましく
は特異抗体を標識するために使用した同じ元素の異なる
アイソトープで放射標識され、そして好ましくは放射標
識されたマーカー特異抗体と同時に注射される。これは
参照物質として標識特異抗体と実質上同じ結合、分布お
よび代謝動力学性を有する分子種を使用するという利益
を有する。
その結果−回だけの参照物質の注射が必要で、そして増
加した解像度が得られる。正常１ｇＧはそれが対応する
特異抗体と同じ方法で製造され、標識される。
加した解像度が得られる。正常１ｇＧはそれが対応する
特異抗体と同じ方法で製造され、標識される。
一方は特異抗体を標識するために使用することができ、
他方は正常免疫グロブリンを標識するために使用される
ラジオアイソトープの適当な対は、ヨー素−１３１とヨ
ー素１２３、インジウム−１１１とインジウム−１１３
ｍ、ガリウム−６７とガリウム−６８、ルテニウム−９
７とルテニウム−１０３、または水銀−１９７と７に恨
−２０３を含む。ヨー素は化学的置換反応により直接導
入し得るため、そして放射性でそしてフォト走査装置を
使用して検出し得る少なくとも５種類のアイソトープを
有するので、ヨー素は、本発明方法に使用するため特異
抗体フラグメントおよび正常免疫グロブリンＧ参照物質
の両方を放射標識するのに好適である。有利には、ヨー
素−１３１が特異抗体を標識するために使用され、ヨー
素−１２３が正常免疫グロブリンを標識するために使用
される。
他方は正常免疫グロブリンを標識するために使用される
ラジオアイソトープの適当な対は、ヨー素−１３１とヨ
ー素１２３、インジウム−１１１とインジウム−１１３
ｍ、ガリウム−６７とガリウム−６８、ルテニウム−９
７とルテニウム−１０３、または水銀−１９７と７に恨
−２０３を含む。ヨー素は化学的置換反応により直接導
入し得るため、そして放射性でそしてフォト走査装置を
使用して検出し得る少なくとも５種類のアイソトープを
有するので、ヨー素は、本発明方法に使用するため特異
抗体フラグメントおよび正常免疫グロブリンＧ参照物質
の両方を放射標識するのに好適である。有利には、ヨー
素−１３１が特異抗体を標識するために使用され、ヨー
素−１２３が正常免疫グロブリンを標識するために使用
される。
発生する放射はガンマ−シンチレーション検出器の２つ
の異なるチャンネル上に別々に検出される。
の異なるチャンネル上に別々に検出される。
得られる走査データはミニコンピユータ−に好都合に記
憶され、そしてその非標的区域における標識参照免疫グ
ロブリンに対する比を上潮る、放射標識特異抗体の過剰
蓄積区域を決定するため前述の減算法が実施される。こ
れらの値は関連した出力信号、有利にはカラービデオス
クリーン上のカラーの変化を発生させるために使用する
こ七ができる。フォト走査装置はコンピューター断層放
射線写真能力を備えることができる。高い活性と許容し
得る免疫特異性との間に最大のバランスを与えるように
標識した高度にモノ特異性で、好ましくはモノクローン
性の抗体を使用するこの高度に能率的な減算技術は、著
しく改良された解像度の腫瘍位置測定および検出方法を
提供する。
憶され、そしてその非標的区域における標識参照免疫グ
ロブリンに対する比を上潮る、放射標識特異抗体の過剰
蓄積区域を決定するため前述の減算法が実施される。こ
れらの値は関連した出力信号、有利にはカラービデオス
クリーン上のカラーの変化を発生させるために使用する
こ七ができる。フォト走査装置はコンピューター断層放
射線写真能力を備えることができる。高い活性と許容し
得る免疫特異性との間に最大のバランスを与えるように
標識した高度にモノ特異性で、好ましくはモノクローン
性の抗体を使用するこの高度に能率的な減算技術は、著
しく改良された解像度の腫瘍位置測定および検出方法を
提供する。
勿論、高度に標識した、高度に特異性抗体と本発明の改
良された減算技術の組合せはもっと高い解像度を導びく
。好適な具体例において、実質上モノ特異性抗体が抗体
１分子あたりヨー素が平均少なくとも２．５原子、好ま
しくは５ないし１０原子導入されるように１−１３１ま
たはｌ−１２３で放射標識され、そして生成した高度に
標識されたモノ特異性抗体は本発明に従って注射される
。
良された減算技術の組合せはもっと高い解像度を導びく
。好適な具体例において、実質上モノ特異性抗体が抗体
１分子あたりヨー素が平均少なくとも２．５原子、好ま
しくは５ないし１０原子導入されるように１−１３１ま
たはｌ−１２３で放射標識され、そして生成した高度に
標識されたモノ特異性抗体は本発明に従って注射される
。
抗体１分子当り少なくとも２．５および好ましくは５な
いし１０原子の平均ヨー素含撥へ！−１３１またはｌ−
１２３で放射標識されたモノクローン性特異抗体の使用
も好適である。
いし１０原子の平均ヨー素含撥へ！−１３１またはｌ−
１２３で放射標識されたモノクローン性特異抗体の使用
も好適である。
さらに改善された解像度は、減算技術において参照物質
として、放射標識された情調正常免疫グロブリンを使用
することによって得られる。正常グロブリンはグロブリ
ンの混合物であり、そのあるものは放射性抗体がそれへ
向けられる特異抗原へ結合されることができる。従って
問題のマーカーに対する反応性を除去するため、減算剤
として使用すべき正常グロブリンを精製することが望ま
しく、そのような−精製法は正常免疫グロブリンを好ま
しくは固体吸着剤上の特異抗原で吸着し、抗原と反応す
るグロブリンをカラム上に残し、そして通過する物質は
非特異性減算剤として標識するためにもっと好適となる
であろう。モノクローン性非特異免疫グロブリンまたは
骨髄腫タンパン自体は、標識および減算剤として使用の
ために所望の純度を持つであろう。
として、放射標識された情調正常免疫グロブリンを使用
することによって得られる。正常グロブリンはグロブリ
ンの混合物であり、そのあるものは放射性抗体がそれへ
向けられる特異抗原へ結合されることができる。従って
問題のマーカーに対する反応性を除去するため、減算剤
として使用すべき正常グロブリンを精製することが望ま
しく、そのような−精製法は正常免疫グロブリンを好ま
しくは固体吸着剤上の特異抗原で吸着し、抗原と反応す
るグロブリンをカラム上に残し、そして通過する物質は
非特異性減算剤として標識するためにもっと好適となる
であろう。モノクローン性非特異免疫グロブリンまたは
骨髄腫タンパン自体は、標識および減算剤として使用の
ために所望の純度を持つであろう。
本発明の減算技術を使用するとき、高い放射活性と高い
特異性とのバランスは、抗体の対応して高いマーカー特
異免疫反応性をもって、放射性標識のいくらか低い程度
の側においてもっと破壊される。再びマーカー特異免疫
反応性が高い程、標識化は高くなるが、抗体性質の有益
なバランスはなお維持される。このように少なくとも７
０％、好ましくは少なくとも８０％のマーカー特異免疫
反応性と、１５％以下、好ましくは１０％以下の交差反
応性を有する実質上モノ特異性の抗体は、高度に効果的
な位置測定を許容するように標識後もなお充分な特異性
を保有する一方、抗体１分子当り２．５、好ましくは５
ないし１０ヨ一ド原子程度へ、ｌ−１３１またはｒ−１
２３で標識することができる。
特異性とのバランスは、抗体の対応して高いマーカー特
異免疫反応性をもって、放射性標識のいくらか低い程度
の側においてもっと破壊される。再びマーカー特異免疫
反応性が高い程、標識化は高くなるが、抗体性質の有益
なバランスはなお維持される。このように少なくとも７
０％、好ましくは少なくとも８０％のマーカー特異免疫
反応性と、１５％以下、好ましくは１０％以下の交差反
応性を有する実質上モノ特異性の抗体は、高度に効果的
な位置測定を許容するように標識後もなお充分な特異性
を保有する一方、抗体１分子当り２．５、好ましくは５
ないし１０ヨ一ド原子程度へ、ｌ−１３１またはｒ−１
２３で標識することができる。
改良された減算技術を使用しない、しかし好ましくは使
用する本性の使用は、腫瘍位置の連続的、反復的、また
は随時的監視を許容する。これは特に手術前に腫瘍の診
断および期決定との組合せに利益を有する。加えて、こ
の方法はどの程度完全な腫瘍除去が達成されたかの徴候
として、手術中または手術後に有用である。転移の場合
、特に小さい拡散転移の増殖が認められた場合、この方
法の高い解像度は術後療法のための標的区域の同定を許
容する。これは本発明の治療方法または他の技術、例え
ば化学療法、照射処置もしくは多モード療法を使用して
実施することができる。
用する本性の使用は、腫瘍位置の連続的、反復的、また
は随時的監視を許容する。これは特に手術前に腫瘍の診
断および期決定との組合せに利益を有する。加えて、こ
の方法はどの程度完全な腫瘍除去が達成されたかの徴候
として、手術中または手術後に有用である。転移の場合
、特に小さい拡散転移の増殖が認められた場合、この方
法の高い解像度は術後療法のための標的区域の同定を許
容する。これは本発明の治療方法または他の技術、例え
ば化学療法、照射処置もしくは多モード療法を使用して
実施することができる。
放射性標識したマーカー特異抗体またはフラグメントは
腫瘍治療に有効である。標識された抗体が被検者の腫瘍
部位に局在化されることが決定された後、一般に投与当
り２５ないし２５０ｍＣｉ好ましくは５０ないし１５０
ｍＣ１の標識された抗体の高投与量が注射される。注射
は静脈内、動脈内、リンパ管内、包成内、または体腔で
よく、そして反復することができる。
腫瘍治療に有効である。標識された抗体が被検者の腫瘍
部位に局在化されることが決定された後、一般に投与当
り２５ないし２５０ｍＣｉ好ましくは５０ないし１５０
ｍＣ１の標識された抗体の高投与量が注射される。注射
は静脈内、動脈内、リンパ管内、包成内、または体腔で
よく、そして反復することができる。
種々の放射性核種が治療のために有用であり、そしてそ
れらは前に論じた標識化技術によって特異抗体中に取り
入れることができる。好ましい治療的に有効な核種は！
−１３１である。
れらは前に論じた標識化技術によって特異抗体中に取り
入れることができる。好ましい治療的に有効な核種は！
−１３１である。
本発明の治療方法は、有利には高度にマーカー特異抗体
、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも
８０％のマーカー特異免疫反応性と、１５％以下、好ま
しくは１０％以下の他の抗原に対する交差反応性を有す
る抗体を使用する。
、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも
８０％のマーカー特異免疫反応性と、１５％以下、好ま
しくは１０％以下の他の抗原に対する交差反応性を有す
る抗体を使用する。
モノクローン性抗体はそれらの高い特異性のために好ま
しい。
しい。
放射標識したマーカー特異抗体またはフラグメントを使
用する療法は、他の療法例えば照ＲＪおよび化学療法と
組合せて一次的治療処置として、そして外科手術の補助
法として有利に使用される。
用する療法は、他の療法例えば照ＲＪおよび化学療法と
組合せて一次的治療処置として、そして外科手術の補助
法として有利に使用される。
外科的に除去できない、または検出をのがれることので
きる小さい転移がある場合には、本発明の放射療法はこ
れらの腫瘍を発見しそして破壊する有力な武器を提供す
る。
きる小さい転移がある場合には、本発明の放射療法はこ
れらの腫瘍を発見しそして破壊する有力な武器を提供す
る。
抗体フラグメントはしばしばいくらか低い免疫反応性を
持ち、そしてその時低い放射性核種含量で、例えばフラ
グメント１分子当り、例えばｌ−１３１を０．１ないし
１．０原子で標識するのが有利である。これは治療のた
め、そしてもし必要ならば検出のため、ｌ−１３１比活
性２．５ないし５２Ｃｉ／μｇを有するフラグメントを
生成させる。
持ち、そしてその時低い放射性核種含量で、例えばフラ
グメント１分子当り、例えばｌ−１３１を０．１ないし
１．０原子で標識するのが有利である。これは治療のた
め、そしてもし必要ならば検出のため、ｌ−１３１比活
性２．５ないし５２Ｃｉ／μｇを有するフラグメントを
生成させる。
本発明のさらに別の局面は、ラジオアイソトープ標識と
、ホウ素−１０アイソトープの天然存在比を少なくとも
２０％有する著しい多数のホウ素原子を含む付加物の両
方を含有する抗体またはフラグメントの使用に関する。
、ホウ素−１０アイソトープの天然存在比を少なくとも
２０％有する著しい多数のホウ素原子を含む付加物の両
方を含有する抗体またはフラグメントの使用に関する。
ホウ素含有付加物は各種の方法により、好ましくは抗体
に、ｔｌａｗｔｈｏｒｎｅｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｍｅｄ
、 Ｃｈｅｍ６．１５，４４９（１９７２）の方法によ
り、１−（４−アミノフェニル）−１，２−ジカルハク
ロソドデカボラン（１２）から誘導されたジアゾニウム
イオンのようなホウ素リッチなカップリング剤をカップ
リングすることによって導入することができる。ホウ素
−１０含有抗体は次に、腫瘍位置測定および／または治
療のため１種またはそれ以上の放射性標識と、そして熱
中性子の吸収のためホウ素−１０原子の高含量の両方を
含有する抗体を製造するため、上述の方法の一つまたは
それ以上に従って放射標識される。放射標識されそして
ホウ素標識された抗体を注射した後、放射性標識を用い
て腫瘍の位置測定をする。腫瘍は次によくコリメートさ
れた熱中性子のビームで照射され、それらはホウ素含有
付加物中のホウ素ｌＯ核によって優先的に吸収され、そ
して活性化された核は急速にリチウム−７およびアルフ
ァ粒子に崩壊する。これら生成するアルファ粒子は細胞
毒性で、そしてそれらの腫瘍細胞内での生成は細胞を殺
し、そして腫瘍の減少をもたらす。
に、ｔｌａｗｔｈｏｒｎｅｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｍｅｄ
、 Ｃｈｅｍ６．１５，４４９（１９７２）の方法によ
り、１−（４−アミノフェニル）−１，２−ジカルハク
ロソドデカボラン（１２）から誘導されたジアゾニウム
イオンのようなホウ素リッチなカップリング剤をカップ
リングすることによって導入することができる。ホウ素
−１０含有抗体は次に、腫瘍位置測定および／または治
療のため１種またはそれ以上の放射性標識と、そして熱
中性子の吸収のためホウ素−１０原子の高含量の両方を
含有する抗体を製造するため、上述の方法の一つまたは
それ以上に従って放射標識される。放射標識されそして
ホウ素標識された抗体を注射した後、放射性標識を用い
て腫瘍の位置測定をする。腫瘍は次によくコリメートさ
れた熱中性子のビームで照射され、それらはホウ素含有
付加物中のホウ素ｌＯ核によって優先的に吸収され、そ
して活性化された核は急速にリチウム−７およびアルフ
ァ粒子に崩壊する。これら生成するアルファ粒子は細胞
毒性で、そしてそれらの腫瘍細胞内での生成は細胞を殺
し、そして腫瘍の減少をもたらす。
高度にマーカー特異性の抗体上のホウ素付加物と１種ま
たはそれ以上の放射性標識との結合は、はじめて多モー
ド腫瘍治療剤として作用する単一の試薬を提供する。腫
瘍部位におけるこれら二重に標識された抗体の急速なそ
して特異的な局在化は、中性子照射を集中すべき区域の
速いそして精密な区切りを許容する。さらに、腫瘍細胞
は放射性標識からの放射と中性子で活性化され７たホウ
素−１０放射との結合効果によって破壊され、そして殺
された腫瘍細胞は除去されるので、放射線治療的処理は
局在化された放射標識された抗体の測定または他の腫瘍
検出法によって監視することができる。
たはそれ以上の放射性標識との結合は、はじめて多モー
ド腫瘍治療剤として作用する単一の試薬を提供する。腫
瘍部位におけるこれら二重に標識された抗体の急速なそ
して特異的な局在化は、中性子照射を集中すべき区域の
速いそして精密な区切りを許容する。さらに、腫瘍細胞
は放射性標識からの放射と中性子で活性化され７たホウ
素−１０放射との結合効果によって破壊され、そして殺
された腫瘍細胞は除去されるので、放射線治療的処理は
局在化された放射標識された抗体の測定または他の腫瘍
検出法によって監視することができる。
本発明の抗体は注射組成物の形で有利に投与される。−
船釣スクリーニングのため、そして位置測定および治療
の多数のタイプのため、注射は静脈内、動脈内または包
成内注射であろう。注射し得る抗体溶液は静脈、動脈ま
たはを髄液中に２分ないし約１時間のコースにわたり、
好ましくは静脈内または動脈内注入のため１０分ないし
２０分にわたって投与されるであろう。ある場合には、
皮下、粘膜上組織、または体腔内投与が有利である。腫
瘍が既知の接近し得る動脈から供給される場合は、動脈
内投与が治療のために好ましい。動脈内ルートは製剤の
長い注入時間、例えば２４時間またはそれ以上を使用し
得る。加えて包成内投与または頚動扉中へのフラグメン
トの注射は脳内に所在する腫瘍に使用することができる
。皮下、粘膜下組職または体腔内投与は皮膚の特定区域
および／または特定の体腔へ近い区域に限られた腫瘍に
有益である。
船釣スクリーニングのため、そして位置測定および治療
の多数のタイプのため、注射は静脈内、動脈内または包
成内注射であろう。注射し得る抗体溶液は静脈、動脈ま
たはを髄液中に２分ないし約１時間のコースにわたり、
好ましくは静脈内または動脈内注入のため１０分ないし
２０分にわたって投与されるであろう。ある場合には、
皮下、粘膜上組織、または体腔内投与が有利である。腫
瘍が既知の接近し得る動脈から供給される場合は、動脈
内投与が治療のために好ましい。動脈内ルートは製剤の
長い注入時間、例えば２４時間またはそれ以上を使用し
得る。加えて包成内投与または頚動扉中へのフラグメン
トの注射は脳内に所在する腫瘍に使用することができる
。皮下、粘膜下組職または体腔内投与は皮膚の特定区域
および／または特定の体腔へ近い区域に限られた腫瘍に
有益である。
本発明による典型的な注射組成物は、ヒト血清アルブミ
ン３４■（１％米国局方：パークデビス社）と、０．９
％ＮａＣｌ含有０．０４ Ｍリン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，
４、バイオウェア社）１ｄ当り放射標識された抗体１な
いし５００μｇを含有する。本発明の減算性技術が使用
される場合は、特異抗体の重量にほぼ等しい放射標識し
た正常イムノグロブリンの量を含有する。他の慣用の薬
剤学的に許容し得る注射用担体も、包成内、皮下、粘膜
上組織または体腔内注射のため、および静脈内または動
脈内注射のためのように指示された場合に使用すること
ができる。
ン３４■（１％米国局方：パークデビス社）と、０．９
％ＮａＣｌ含有０．０４ Ｍリン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，
４、バイオウェア社）１ｄ当り放射標識された抗体１な
いし５００μｇを含有する。本発明の減算性技術が使用
される場合は、特異抗体の重量にほぼ等しい放射標識し
た正常イムノグロブリンの量を含有する。他の慣用の薬
剤学的に許容し得る注射用担体も、包成内、皮下、粘膜
上組織または体腔内注射のため、および静脈内または動
脈内注射のためのように指示された場合に使用すること
ができる。
当業者はさらに熟考することなく、前記説明を用いて本
発明をその全範囲に利用することができるものと信ぜら
れる。従って以下の特定の好ましい具体例は単に例示で
あり、開示の残余の部分を限定するものではないと解す
べきである。以下の実施例において、すべての温度は未
補正の摂氏度であり、断わりのない限りすべての部およ
び％は重量による。
発明をその全範囲に利用することができるものと信ぜら
れる。従って以下の特定の好ましい具体例は単に例示で
あり、開示の残余の部分を限定するものではないと解す
べきである。以下の実施例において、すべての温度は未
補正の摂氏度であり、断わりのない限りすべての部およ
び％は重量による。
これら実施例で使用される抗体は高度に特異性で、そし
て慣用の免疫化の後、補体を不活性し、血球凝固成分を
除去するため吸着し、そして交差反応性抗原および特異
抗原に対してアフィニティー情調して調製するか、また
はハイブリドーマ誘導モノクローン性抗体のどちらかで
ある。
て慣用の免疫化の後、補体を不活性し、血球凝固成分を
除去するため吸着し、そして交差反応性抗原および特異
抗原に対してアフィニティー情調して調製するか、また
はハイブリドーマ誘導モノクローン性抗体のどちらかで
ある。
実施例１
”Ｉ Ｔ−ＣＥＡ Ｉ Ｇ ヤギ の（ａ）Ｃ
ＥＡはＮｅｔｍｍａｎ ｅｔ ａｌ＋ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ、、 ３４＋２１２５（１９７４）の方法により
、結腸がんの肝転移から高純度で得られる。
ＥＡはＮｅｔｍｍａｎ ｅｔ ａｌ＋ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ、、 ３４＋２１２５（１９７４）の方法により
、結腸がんの肝転移から高純度で得られる。
（ｂ） 精製ＣＥＡ乾燥重量０．５ ｍｇをメチル化
ウシ血清アルブミン（シグマ社）２ｍｇを含む水２ ｒ
ａｇ中に溶解し、ＣＥＡ溶液を完全なフロインドアジュ
バント（デイフコ社）の等容積で乳化する。
ウシ血清アルブミン（シグマ社）２ｍｇを含む水２ ｒ
ａｇ中に溶解し、ＣＥＡ溶液を完全なフロインドアジュ
バント（デイフコ社）の等容積で乳化する。
ＣＥＡ接種物の等量を健康ヤギの首の別々の２部位に皮
下性１・！する。注射は２週間置きに最後の注射後１４
日後に採集した抗血清のラジオイムノ７ツセイ（ＲｒＡ
）が抗ＣＥＡ力価１：１０６以上を示すまで投与される
。
下性１・！する。注射は２週間置きに最後の注射後１４
日後に採集した抗血清のラジオイムノ７ツセイ（ＲｒＡ
）が抗ＣＥＡ力価１：１０６以上を示すまで投与される
。
次にヤギから血液を無菌的に採取し、パイロ−ジエンを
含有しない遠心試験管へ移し、そして遠心する。抗ＣＥ
Ａは一２０°Ｃで貯蔵する。
含有しない遠心試験管へ移し、そして遠心する。抗ＣＥ
Ａは一２０°Ｃで貯蔵する。
ヤギ抗ＣＥＡの補体は５６°Ｃで１時間インキュベート
することによって不活化し、そしてそれ以上血球凝固活
性が検出できなくなるまで、洗浄レバツクしたＡＢ型ヒ
ト赤血球（ＲＢＣ）と、血球凝固活性定量から計算した
血清／ＲＢＣ比で繰り返して混合することにより、抗血
液グループを除去する。吸収した抗ＣＥＡ血清は次に０
．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７，０（ＰＯ，）の数容積に対
して透析される。
することによって不活化し、そしてそれ以上血球凝固活
性が検出できなくなるまで、洗浄レバツクしたＡＢ型ヒ
ト赤血球（ＲＢＣ）と、血球凝固活性定量から計算した
血清／ＲＢＣ比で繰り返して混合することにより、抗血
液グループを除去する。吸収した抗ＣＥＡ血清は次に０
．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７，０（ＰＯ，）の数容積に対
して透析される。
（Ｃ） 結腸がん抗原ＩＩＩ （ＣＣＡ−［［）免疫
吸着体は、正常肺の過塩素酸抽出物の６０，０００分子
景分画を慣用の技術を用いて臭化シアン活性化セファロ
ーズ４Ｂ（ファルマシア社）へ結合させることにより調
製される。結合は４°Ｃでゆるやかにかきまぜながら一
夜進行を許容される。ＣＣＡ−ＩＩＩ−免疫吸着体は０
．０５ Ｍホウ酸緩衝液ｐ Ｈ８，４で洗浄され、０．
１ＭＭホウ酸緩衝液ｐＨ８，０中の１Ｍ２−アミノエタ
ノールの４容積中に再懸濁される。スラリーは室温で１
時間混合され、口過され、ＰＯ，で洗浄される。
吸着体は、正常肺の過塩素酸抽出物の６０，０００分子
景分画を慣用の技術を用いて臭化シアン活性化セファロ
ーズ４Ｂ（ファルマシア社）へ結合させることにより調
製される。結合は４°Ｃでゆるやかにかきまぜながら一
夜進行を許容される。ＣＣＡ−ＩＩＩ−免疫吸着体は０
．０５ Ｍホウ酸緩衝液ｐ Ｈ８，４で洗浄され、０．
１ＭＭホウ酸緩衝液ｐＨ８，０中の１Ｍ２−アミノエタ
ノールの４容積中に再懸濁される。スラリーは室温で１
時間混合され、口過され、ＰＯ，で洗浄される。
ＣＣＡ−ＩＩ［免疫吸着体カラムが調製され、１０％（
Ｖ／Ｖ）正常ヤギ血液（ギブコ社）２Ｉｎ１．、次いで
３Ｍチオシアン酸アンモニウムの約１カラム容積を前循
環し、そして０．１ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で再
平衡化される。
Ｖ／Ｖ）正常ヤギ血液（ギブコ社）２Ｉｎ１．、次いで
３Ｍチオシアン酸アンモニウムの約１カラム容積を前循
環し、そして０．１ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０で再
平衡化される。
ＣＣＡ−ＩＩＩ−免疫吸着体は自動クロマトグラフィー
システムへ挿入され、そして全体のシステムが非発熱原
性の無菌ＰＯ，で完全に洗浄される。
システムへ挿入され、そして全体のシステムが非発熱原
性の無菌ＰＯ，で完全に洗浄される。
緩衝液容器は千オシアン酸アンモニウムおよび透析物を
含む容器で取り替えられる。
含む容器で取り替えられる。
吸着された抗ＣＥＡ血清はカラムの空隙容積の２／３の
容積へＰＯ４で希釈され、そしてカラムを通る１サイク
ル毎に抗血′清の適当量を含有する。
容積へＰＯ４で希釈され、そしてカラムを通る１サイク
ル毎に抗血′清の適当量を含有する。
この希釈した抗血清の体積はカラム中へ適用され、そし
てＩカラム空隙体積の全容を与えるのに充分なＰＯ，で
洗浄される。抗血清は室温で２０分間インキュベートす
ることが許され、次に吸着されない分画である特異抗Ｃ
ＥＡ血清がカラムからＰＯ４で溶離される。システムは
抗ＣＥＡ血清の第２の部分標本を適用することにより、
自動的に次のサイクルを開始する。サイクルの回数は抗
血清の全ロフトを処理するようにセントされる。
てＩカラム空隙体積の全容を与えるのに充分なＰＯ，で
洗浄される。抗血清は室温で２０分間インキュベートす
ることが許され、次に吸着されない分画である特異抗Ｃ
ＥＡ血清がカラムからＰＯ４で溶離される。システムは
抗ＣＥＡ血清の第２の部分標本を適用することにより、
自動的に次のサイクルを開始する。サイクルの回数は抗
血清の全ロフトを処理するようにセントされる。
抗ＣＥＡ血清の部分標本が抗血液のもとの容積へ濃縮さ
れ、そして免疫拡散によって再テストされる。抗血清は
参照ＣＥＡ、ＣＣＡ−ＩＩＩ製剤、正常ヒト組織抽出物
および血漿に対してテストされる。もし抗血清がＣＣＡ
−Ｉｌｌ製剤、血漿または正常ヒト組織抽出物に陽性反
応を有するならば、それはＣＣＡ−１免疫吸着体カラム
にリサイクルされる。
れ、そして免疫拡散によって再テストされる。抗血清は
参照ＣＥＡ、ＣＣＡ−ＩＩＩ製剤、正常ヒト組織抽出物
および血漿に対してテストされる。もし抗血清がＣＣＡ
−Ｉｌｌ製剤、血漿または正常ヒト組織抽出物に陽性反
応を有するならば、それはＣＣＡ−１免疫吸着体カラム
にリサイクルされる。
（ｄ）ＣＥＡ−免疫吸着体カラムは、ＣＣＡ−Ｉ［［免
疫吸着体と同じ結合操作により、精製ＣＥＡを臭化シア
ン活性化セファローズ４Ｂへ結合し、前記（Ｃ）のよう
にカラムを調製し、前循環し、平衡化することによって
調製される。
疫吸着体と同じ結合操作により、精製ＣＥＡを臭化シア
ン活性化セファローズ４Ｂへ結合し、前記（Ｃ）のよう
にカラムを調製し、前循環し、平衡化することによって
調製される。
ＣＥＡ吸着体カラムは自動化されたクロマトグラフィー
システムへ導入され、そして非発熱原性のＰＯ，で完全
に洗浄される。各サイクル毎に適用すべき抗ＣＥＡ血液
の量はラジオイムノアッセイ定量をもとに計算され、抗
血清のサンプルが希釈され、適用され、そしてＣＣＡ−
ｍ免疫吸着体カラムと同様にインキュベートされる。す
べての非反応性免疫グロブリンを含んでいる血清タンパ
クはカラムからＰＯ４で溶離され、そして吸着されない
分画として採取される。
システムへ導入され、そして非発熱原性のＰＯ，で完全
に洗浄される。各サイクル毎に適用すべき抗ＣＥＡ血液
の量はラジオイムノアッセイ定量をもとに計算され、抗
血清のサンプルが希釈され、適用され、そしてＣＣＡ−
ｍ免疫吸着体カラムと同様にインキュベートされる。す
べての非反応性免疫グロブリンを含んでいる血清タンパ
クはカラムからＰＯ４で溶離され、そして吸着されない
分画として採取される。
特異抗ＣＥＡ ＩｇＧは解離されそしてＰＯ。
中３Ｍチオシアン酸アンモニウムでカラムから溶離され
、そして吸着された分画として採集される。
、そして吸着された分画として採集される。
チオシアン酸アンモニウムの微量のすべてを除去するた
め、吸着された分画はＰＯ，中１Ｍ尿素および１０％グ
リセロールに対し、中空繊維透析ユニット（アミコン社
またはビオラッド社）の使用によってインライン透析に
かけられる。特異抗体の解離のための別法は、混乱剤と
してグアニジン塩酸塩と、脱塩のためセファデックスＧ
２５ゲルロ過クロマトグラフイーを使用する。
め、吸着された分画はＰＯ，中１Ｍ尿素および１０％グ
リセロールに対し、中空繊維透析ユニット（アミコン社
またはビオラッド社）の使用によってインライン透析に
かけられる。特異抗体の解離のための別法は、混乱剤と
してグアニジン塩酸塩と、脱塩のためセファデックスＧ
２５ゲルロ過クロマトグラフイーを使用する。
吸着された分画は４°ＣでＰＭ３０膜（アミコン社）に
よる限外口過により、ゲル口過クロマトグラフィーを容
易にする体積まで濃縮される。例えば抗ＣＥＡ血清の１
００ｄの０７トは約２０ｍ１へ濃縮される。ｃｍ液は５
０ｍＭリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７，５の１００
容で４回、各４時間透析される。抗ＣＥＡ ＩｇＧ製
剤は無菌のパイロ−ジエン不含血清バイアル中へ無菌口
過される。
よる限外口過により、ゲル口過クロマトグラフィーを容
易にする体積まで濃縮される。例えば抗ＣＥＡ血清の１
００ｄの０７トは約２０ｍ１へ濃縮される。ｃｍ液は５
０ｍＭリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７，５の１００
容で４回、各４時間透析される。抗ＣＥＡ ＩｇＧ製
剤は無菌のパイロ−ジエン不含血清バイアル中へ無菌口
過される。
部品標本がＲＩＡおよび免疫拡散による品質管理試験の
ために保存される。
ために保存される。
（ｅ） セファクリルＳ−２００（ファルマシア社）
カラムがゲルを無菌のパイロ−ジエン不含５０ｍＭ。
カラムがゲルを無菌のパイロ−ジエン不含５０ｍＭ。
ＰＢＳ、ｐＨ７，５で５回洗浄することによって調製さ
れる。カラムは１８０°Ｃで３時間乾燥滅菌される。使
用カラム寸法は抗体のロフトサイズに応して２．６ Ｘ
９０ ｃｍか、または５．０ Ｘ ９０ ｃｍである
。
れる。カラムは１８０°Ｃで３時間乾燥滅菌される。使
用カラム寸法は抗体のロフトサイズに応して２．６ Ｘ
９０ ｃｍか、または５．０ Ｘ ９０ ｃｍである
。
次にカラムはカラムの３倍容のＰＢＳで洗浄される。
ヤギ抗ＣＥＡ ｒｇＧのロットはカラムに適用され、
そしてＰＢＳで６ｍ／Ｃｄ／時間の流量において溶離さ
れる。ＩｇＧタンパクを含有する分画がプールされ、そ
して約５■ ＩｇＧタンパク／ＢＳに対して透析され、
０．２ミクロンＭｉｌｌｅｘユニット（ミリポア社）で
無菌口過され、そして保存剤としてアジ化ナトリウムを
添加して約５１１１ｇＩｇＧタンパク／戚のｌｄ部分標
本の形で冷蔵される。
そしてＰＢＳで６ｍ／Ｃｄ／時間の流量において溶離さ
れる。ＩｇＧタンパクを含有する分画がプールされ、そ
して約５■ ＩｇＧタンパク／ＢＳに対して透析され、
０．２ミクロンＭｉｌｌｅｘユニット（ミリポア社）で
無菌口過され、そして保存剤としてアジ化ナトリウムを
添加して約５１１１ｇＩｇＧタンパク／戚のｌｄ部分標
本の形で冷蔵される。
（ｆ） ＋３１ １の１ｍＣ１当り７．２ないし１６
．８ ｔｔ ｇＩｇＧのヤギ抗ＣＥＡ ［ｇＧを１３
１ ｌ （アマーシャムーサール社）を含む放射性核
種バイアル中へ注入する。
．８ ｔｔ ｇＩｇＧのヤギ抗ＣＥＡ ［ｇＧを１３
１ ｌ （アマーシャムーサール社）を含む放射性核
種バイアル中へ注入する。
クロラミンＴおよびメタ重亜硫酸ナトリウム溶液は、そ
れぞれクロラミンＴＩＯ■および重亜硫酸塩５０■を含
む２個のバイアルのそれぞれへ、無菌のパイロ−ジエン
不合０．０４ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，４の５ｄを注
入することによって調製された。クロラミンＴは１０μ
ｇ／ｍＣｉ’″１ ■の割合で放射性核種バイアル中へ
注入された。クロラミンＴの５倍量のメタ重亜硫酸ナト
リウム溶液は、クロラミンＴの注入後正確に９０秒後に
バイアル中へ注入される。混合物は無菌注射器で反応バ
イアルから除去され、反応バイアルは１％正常ヒト血清
アルブミンでリンスされ、リンス液は反応混合物と合併
された。
れぞれクロラミンＴＩＯ■および重亜硫酸塩５０■を含
む２個のバイアルのそれぞれへ、無菌のパイロ−ジエン
不合０．０４ Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，４の５ｄを注
入することによって調製された。クロラミンＴは１０μ
ｇ／ｍＣｉ’″１ ■の割合で放射性核種バイアル中へ
注入された。クロラミンＴの５倍量のメタ重亜硫酸ナト
リウム溶液は、クロラミンＴの注入後正確に９０秒後に
バイアル中へ注入される。混合物は無菌注射器で反応バ
イアルから除去され、反応バイアルは１％正常ヒト血清
アルブミンでリンスされ、リンス液は反応混合物と合併
された。
１３１１抗ＣＥＡ ＩｇＧのサンプルが事前にＰＢＳ
中１％正常ヒト血清アルブミンで平衡化されたＰＤ−１
０セファデックスＧ−２５カラムに適用され、ＰＢＳ中
１％正常ヒト血清アルブミン約４゜５ＩＩ！１で溶離さ
れ、シールドされたガンマ検出器（Ｅｂｅｒｌｉｎｅ社
）でモニターされ、貯蔵および使用のため採集され、あ
らかじめ定めた濃度に希釈される。
中１％正常ヒト血清アルブミンで平衡化されたＰＤ−１
０セファデックスＧ−２５カラムに適用され、ＰＢＳ中
１％正常ヒト血清アルブミン約４゜５ＩＩ！１で溶離さ
れ、シールドされたガンマ検出器（Ｅｂｅｒｌｉｎｅ社
）でモニターされ、貯蔵および使用のため採集され、あ
らかじめ定めた濃度に希釈される。
生成する１コ１ ■−抗ＣＥＡ ＩｇＧは抗体１分子
当り平均ヨー素３ないし７原子を有する。各バッチから
の無作為部分標本が無菌性、発熱原性、毒性およびその
他の品質管理変動について別々にテストされる。
当り平均ヨー素３ないし７原子を有する。各バッチから
の無作為部分標本が無菌性、発熱原性、毒性およびその
他の品質管理変動について別々にテストされる。
実施例２
モ／りｏ−７”’ ｒ−ＣＥＡ Ｉ ＧＯ）
’−雌６月令のＢａ１ｂ／Ｃマウスに、がん胎児性抗原
１０ないし１００ ／／ ｇを腹腔内注射する。その場
合ＣＥＡは等容積（１０−１００μＰ）の不完全フロイ
ドアジュバント中に混合される。これは１週間後とそし
て２週間後に繰り返されるが、最後はアジュバントなし
で静脈内ルートが用いられる。３日ないし４日後、マウ
スは頚部脱臼により殺される。与えられた抗原に対する
抗体を得るための最適時期は、抗原、投与ルート、免疫
化のタイミング、それに最終の増強注射とひ臓細胞除去
の間の間隔によって変化する。
’−雌６月令のＢａ１ｂ／Ｃマウスに、がん胎児性抗原
１０ないし１００ ／／ ｇを腹腔内注射する。その場
合ＣＥＡは等容積（１０−１００μＰ）の不完全フロイ
ドアジュバント中に混合される。これは１週間後とそし
て２週間後に繰り返されるが、最後はアジュバントなし
で静脈内ルートが用いられる。３日ないし４日後、マウ
スは頚部脱臼により殺される。与えられた抗原に対する
抗体を得るための最適時期は、抗原、投与ルート、免疫
化のタイミング、それに最終の増強注射とひ臓細胞除去
の間の間隔によって変化する。
ひ臓を除去し、そして室温で、血清不合培地か、または
２０％ウシ胎児血清を加えたダルベツコの修正イーグル
培地（ＤＭＥＭ）を収容する６０ｍｍペトリ皿中に入れ
、そして細胞を分散するためはさみでミンチする。細胞
はＶｏｒｔｅｘ ミキサー上で１−２分かきまぜること
によりさらに遊離される。
２０％ウシ胎児血清を加えたダルベツコの修正イーグル
培地（ＤＭＥＭ）を収容する６０ｍｍペトリ皿中に入れ
、そして細胞を分散するためはさみでミンチする。細胞
はＶｏｒｔｅｘ ミキサー上で１−２分かきまぜること
によりさらに遊離される。
ひ臓細胞は円錐形遠心試験管へ移され、ｒＥＣ−ＭＳ２
遠心機中で１．ＯＯＯｒｐｍにおいてへレット化され、
上清が除去され、ベレットをたたいてほぐし、そして赤
血球を溶解するため１０分間冷たい０．１ Ｎ Ｈ４Ｃ
１５ｍｌ中に再懸濁する。２０％ウシ胎児血清添加の冷
却したＤＭＥＭを加え、そして細胞をベレット化し、そ
して再び２０％ウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ１０ｚ
ｌ中に懸濁する。
遠心機中で１．ＯＯＯｒｐｍにおいてへレット化され、
上清が除去され、ベレットをたたいてほぐし、そして赤
血球を溶解するため１０分間冷たい０．１ Ｎ Ｈ４Ｃ
１５ｍｌ中に再懸濁する。２０％ウシ胎児血清添加の冷
却したＤＭＥＭを加え、そして細胞をベレット化し、そ
して再び２０％ウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ１０ｚ
ｌ中に懸濁する。
融合のために使用した骨髄腫細胞系統は、高グルコース
（４，５ｇ／／りおよび２０％ウシ胎児血清添加ＤＭＥ
Ｍ中の静止懸濁培養物に、５ないし１０％ＣＯｔ中、１
００．０００ないし１ 、０００．０００／、７！ｉ！
の細胞濃度において保存される。骨髄腫（形質細胞腫）
細胞系統は、５ｖａｓｔｉおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ。
（４，５ｇ／／りおよび２０％ウシ胎児血清添加ＤＭＥ
Ｍ中の静止懸濁培養物に、５ないし１０％ＣＯｔ中、１
００．０００ないし１ 、０００．０００／、７！ｉ！
の細胞濃度において保存される。骨髄腫（形質細胞腫）
細胞系統は、５ｖａｓｔｉおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ。
Ｊ、、旦紅４２７−４４４ （１９７２）により報告さ
れた、ＭＯＰ（、−２１から誘導されたＢａ１ｂ／Ｃ形
’ｆｆ Ｉｌｌ胞胛であるＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８か、Ｆ
ａｚｅｋａｓ ｄｅ Ｓｔ。
れた、ＭＯＰ（、−２１から誘導されたＢａ１ｂ／Ｃ形
’ｆｆ Ｉｌｌ胞胛であるＰ３−Ｘ６３−Ａｇ８か、Ｆ
ａｚｅｋａｓ ｄｅ Ｓｔ。
Ｇｒｏｔｈ ＆ Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒ、 Ｂ
ａ５ｌｅ Ｔｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＩｍｍｕｎｏ
ｌｇｙによるＦＯとして知られるその誘導体か、または
門ａｒｇｕｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ、 Ｃｅ１ｌ、 ８．
４０５（１９７６）によって報告された、ＭＰＣ−１１
から誘導されたＢａ１ｂ／Ｃ系統である４ ５．６ Ｔ
Ｇ １．７であることができる。これら系統のすべて
は酵素ヒボキサンチンフォスフオリボシルトランスフエ
ラーゼ（ＨＰＲＴ、Ｅ、Ｃ，２，４，２，８）を欠き、
そしてそのためＬｉｔｔｌｅｆｉｅｌｄ、 ５ｃｉｅｎ
ｃｅ＋ １４５＋７０９−７１０（１９６４）に記載さ
れているように、ヒボキサンチン アミノプテリンおよ
びチミジンを含有する選択培地中で死滅する。
ａ５ｌｅ Ｔｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＩｍｍｕｎｏ
ｌｇｙによるＦＯとして知られるその誘導体か、または
門ａｒｇｕｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ、 Ｃｅ１ｌ、 ８．
４０５（１９７６）によって報告された、ＭＰＣ−１１
から誘導されたＢａ１ｂ／Ｃ系統である４ ５．６ Ｔ
Ｇ １．７であることができる。これら系統のすべて
は酵素ヒボキサンチンフォスフオリボシルトランスフエ
ラーゼ（ＨＰＲＴ、Ｅ、Ｃ，２，４，２，８）を欠き、
そしてそのためＬｉｔｔｌｅｆｉｅｌｄ、 ５ｃｉｅｎ
ｃｅ＋ １４５＋７０９−７１０（１９６４）に記載さ
れているように、ヒボキサンチン アミノプテリンおよ
びチミジンを含有する選択培地中で死滅する。
免疫化した動物から得られるひ臓細胞は、次にＧｅ１ｆ
ｅｒｅｔ ａｌ、 Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅ１ｌ Ｇｉｎ
ｅｔｉｃ、＋ ３，２３１−２３６（１９７７）の方法
の採用によるポリエチレングリコールを使用することに
より、形質細胞種細胞と融合される。例えば３０％ポリ
エチレングリコール溶液は、無菌ポリエチレングリコー
ル４０００ （メルク社、分子単約４．０００）（ポリ
エチレングリコール０゜５ｇ＋ジメチルスルホキシド（
ＤＭＳｏ）０．０５ｄ＋蒸留水０．５ｄ）と、血清なし
のＤＭＥＭとを４１°Ｃへ加熱し、そしてポリエチレン
グリコール３戒を血清なしのＤＭＥＭ ｐＨ７゜４−
７．６の７−と混合することにより３ＦＲ’ＪＪされ、
そして使用まで３７゛Ｃで保存される。融合は室温で行
われる。骨髄腫細胞（１０６−１０’ ）は血清を含ま
ない培地で２回洗浄され、５０ｍ１円錐底円錐形遠心試
験管シヨン２０７０）中のひ臓細胞１−３Ｘ１０’−１
−３Ｘ１０１′と混合される。
ｅｒｅｔ ａｌ、 Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅ１ｌ Ｇｉｎ
ｅｔｉｃ、＋ ３，２３１−２３６（１９７７）の方法
の採用によるポリエチレングリコールを使用することに
より、形質細胞種細胞と融合される。例えば３０％ポリ
エチレングリコール溶液は、無菌ポリエチレングリコー
ル４０００ （メルク社、分子単約４．０００）（ポリ
エチレングリコール０゜５ｇ＋ジメチルスルホキシド（
ＤＭＳｏ）０．０５ｄ＋蒸留水０．５ｄ）と、血清なし
のＤＭＥＭとを４１°Ｃへ加熱し、そしてポリエチレン
グリコール３戒を血清なしのＤＭＥＭ ｐＨ７゜４−
７．６の７−と混合することにより３ＦＲ’ＪＪされ、
そして使用まで３７゛Ｃで保存される。融合は室温で行
われる。骨髄腫細胞（１０６−１０’ ）は血清を含ま
ない培地で２回洗浄され、５０ｍ１円錐底円錐形遠心試
験管シヨン２０７０）中のひ臓細胞１−３Ｘ１０’−１
−３Ｘ１０１′と混合される。
細胞は２５０Ｘｇで５分間遠心され、そして上清液は注
意深く吸引される。ポリエチレングリコール液の０．２
ｄ量が加えられ、そして試験管は細胞を再懸濁するた
め手でゆっくりかきまぜられる。
意深く吸引される。ポリエチレングリコール液の０．２
ｄ量が加えられ、そして試験管は細胞を再懸濁するた
め手でゆっくりかきまぜられる。
次に細胞は２５０Ｘｇで３分間、そし゛ζ再度４００×
ｇで３分間遠心され、そしてさらに３分間静止状態に保
たれる。細胞はポリエチレングリコールに約８分曝され
る。その後で約５ ｍｌの血清を含まない培地が試験管
へ加えられ、細胞がゆっくり再懸濁され、そして２５０
Ｘｇにおいて５分間遠心することにより再ベレット化さ
れる。上清を除去し、そして細胞を血清含有培地２０ｍ
１中に再懸濁し、そしてＨＡＴ培地がそれへ添加される
マイクロプレートに移される前に加湿したインキュベー
ター中３７°Ｃで４８時間インキュベートされる。
ｇで３分間遠心され、そしてさらに３分間静止状態に保
たれる。細胞はポリエチレングリコールに約８分曝され
る。その後で約５ ｍｌの血清を含まない培地が試験管
へ加えられ、細胞がゆっくり再懸濁され、そして２５０
Ｘｇにおいて５分間遠心することにより再ベレット化さ
れる。上清を除去し、そして細胞を血清含有培地２０ｍ
１中に再懸濁し、そしてＨＡＴ培地がそれへ添加される
マイクロプレートに移される前に加湿したインキュベー
ター中３７°Ｃで４８時間インキュベートされる。
その代りに、細胞は、ＤＭＥＭ、１０％ＮＣＴＣ１０９
培地（マイクロバイオロジカル、アソシエイツ社）、２
０％ウシ胎児血清（ギブコ社）、２単位ウシインシュリ
ン／ｍｌ（シグマ社）、（１４５ｍＭピルへ一ト、１ｍ
Ｍオキザロアセテート、および必要に応じ抗生物質より
なる培地３０ｄ中に直接懸濁されるチミジン（１，６Ｘ
１０−５Ｍ）およびヒポキサンチン（ＩＸＩＯ−’Ｍ
）が添加される。
培地（マイクロバイオロジカル、アソシエイツ社）、２
０％ウシ胎児血清（ギブコ社）、２単位ウシインシュリ
ン／ｍｌ（シグマ社）、（１４５ｍＭピルへ一ト、１ｍ
Ｍオキザロアセテート、および必要に応じ抗生物質より
なる培地３０ｄ中に直接懸濁されるチミジン（１，６Ｘ
１０−５Ｍ）およびヒポキサンチン（ＩＸＩＯ−’Ｍ
）が添加される。
この培地中の細胞は６個のマイクロプレートにウェル当
り１滴（約５０μｌ）で分配される。次に日にチミジン
とヒポキサンチンを含有し、今回アミノプテリン（８Ｘ
１０−’）を加えた上で規定した培地の１滴を各ウェ
ルへ加える。上の培地を６ないし７日後２滴加え、クロ
ーンは顕微鏡的に１０ないし２０日で出現する。ヒポキ
サンチン−アミノプテリン−チミジン（）ＩＡＴ）は融
合直後または後で加えることができる。得られる雑種の
数の改善は各マイクロウエルヘフィーダー層を加えると
きに達成される。こ＼ではヒト胎児線維芽細胞が４５０
Ｏｒで照射され、そしてこのような細胞１，０００〜２
，０００が各ウェルへ融合の前日または融合した細胞へ
直接加えられ、そしてそれらがマイクロウェル中にその
ように分配される。
り１滴（約５０μｌ）で分配される。次に日にチミジン
とヒポキサンチンを含有し、今回アミノプテリン（８Ｘ
１０−’）を加えた上で規定した培地の１滴を各ウェ
ルへ加える。上の培地を６ないし７日後２滴加え、クロ
ーンは顕微鏡的に１０ないし２０日で出現する。ヒポキ
サンチン−アミノプテリン−チミジン（）ＩＡＴ）は融
合直後または後で加えることができる。得られる雑種の
数の改善は各マイクロウエルヘフィーダー層を加えると
きに達成される。こ＼ではヒト胎児線維芽細胞が４５０
Ｏｒで照射され、そしてこのような細胞１，０００〜２
，０００が各ウェルへ融合の前日または融合した細胞へ
直接加えられ、そしてそれらがマイクロウェル中にその
ように分配される。
顕微鏡的にクローンが出現した後、培地の大部分を除去
し、そして新しい培地を加えることよって交換される。
し、そして新しい培地を加えることよって交換される。
２回目の培地交換後、培地はそのままに少なくとも４日
間放置され、次に慣用定量法により抗体活性および特異
性のアッセイのために集められる。
間放置され、次に慣用定量法により抗体活性および特異
性のアッセイのために集められる。
１５０ｍｍプレートまたはローラーボトルから収穫され
た消費培養培地から多量の抗体が得られる。
た消費培養培地から多量の抗体が得られる。
培地は中空繊維濃縮器（アミコン社）によって後で濃縮
される。また２ないし３週間前に約１０億のクローンし
たハイブリドーマ細胞を注射された無胸腺（無毛）マウ
ス（ｎｕ／ｎｕ）の腹水からも得られる。腹水は各マウ
スの腹腔を食塩水であふれさせることによって食塩水で
希釈され、そして各マウスからの希釈液はプールされる
。
される。また２ないし３週間前に約１０億のクローンし
たハイブリドーマ細胞を注射された無胸腺（無毛）マウ
ス（ｎｕ／ｎｕ）の腹水からも得られる。腹水は各マウ
スの腹腔を食塩水であふれさせることによって食塩水で
希釈され、そして各マウスからの希釈液はプールされる
。
モノクローン性抗ＣＥＡ ＩｇＧは、実施例１げ）の
ように１−１３１で放射標識される。
ように１−１３１で放射標識される。
実施例３
”’Ｉ−ＴＧ ヤギ の 聰
正常ヤギ免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）（マイルス社）を
臭化シアンで結合したＣＥＡに対してアフィニティー精
製し、そしてｌ−１３１の代りに１−１２３を用い、比
放射能の差に対応して試薬の量を比例的に変更すること
を除いて、実施例１げ）の操作を用いてｌ−１２３で放
射標識する。標識した抗体の比放射能を例えば１００−
５００μＣｉ／μｇに調節するため担体ヨー素を添加す
ることができる。添加した担体ヨードの量は、担体当り
のヨー素原子の与えられた数のため、標識した抗体分子
の比放射能を決定するであろう。
臭化シアンで結合したＣＥＡに対してアフィニティー精
製し、そしてｌ−１３１の代りに１−１２３を用い、比
放射能の差に対応して試薬の量を比例的に変更すること
を除いて、実施例１げ）の操作を用いてｌ−１２３で放
射標識する。標識した抗体の比放射能を例えば１００−
５００μＣｉ／μｇに調節するため担体ヨー素を添加す
ることができる。添加した担体ヨードの量は、担体当り
のヨー素原子の与えられた数のため、標識した抗体分子
の比放射能を決定するであろう。
実施例４
１３＋ ■ −ＣＥＡ−”ゝＢＩＧ の °１
（ａ） 実施例１または２で製造した抗ＣＥＡ Ｉ
ＣＧを、ＨａｗＬｈｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｍ
ｅｄ、 Ｃｈｅｍ、＋ １５＋４４９（１９７２）の操
作を使用して、天然存在比のホウ素−１０アイソトープ
（２０％）を有する１−（３−アミノフェニル）−１，
２−ジカルバクロンードデカルボラン（Ｉ２）のジアゾ
ニウム塩の２０倍モル過剰と反応させる。得られる抗体
は、平均して抗体分子当り２ないし１０個のジアゾ結合
カルポラン残基、または４ないし２０のホウ素−１０原
子を有する。
（ａ） 実施例１または２で製造した抗ＣＥＡ Ｉ
ＣＧを、ＨａｗＬｈｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｍ
ｅｄ、 Ｃｈｅｍ、＋ １５＋４４９（１９７２）の操
作を使用して、天然存在比のホウ素−１０アイソトープ
（２０％）を有する１−（３−アミノフェニル）−１，
２−ジカルバクロンードデカルボラン（Ｉ２）のジアゾ
ニウム塩の２０倍モル過剰と反応させる。得られる抗体
は、平均して抗体分子当り２ないし１０個のジアゾ結合
カルポラン残基、または４ないし２０のホウ素−１０原
子を有する。
ら）前記（ａ）の抗ＣＥＡ−”Ｂ Ｉ ｇＧを実施例
１（ｆ）と同様に１−１３１で放射標識し、抗体分子当
すョー素ｌないしＩＯ原子平均を導入する。
１（ｆ）と同様に１−１３１で放射標識し、抗体分子当
すョー素ｌないしＩＯ原子平均を導入する。
実施例５
注・し′、る。 の１１吉
以下に示すように無菌のパイロ−ジエン不含溶液が調製
される。
される。
（ａ） 無菌溶液はｄ当り次の成分を含有する。
（１）ヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）（１％、米局方パ
ークデービス社）３４■ （２） ０．０４ Ｍリン酸緩衝液ｐｆ（７，４（バイ
オウェア社） （３） ０．９％ＮａＣ１ （４）実施例１によって製造したｌｆｆ１ ［−抗Ｃ
ＥＡＩｇＧ（ヨー素平均約５原子／分子、比放射能約８
０μＣｉ／μｇ） 実施例１の標識抗体は２０ｕｇ／ｌｄの濃度において溶
液（１）、（２）および（３）中に貯蔵され、そしてこ
の溶液を調製するためリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中１％Ｈ
３Ａの等容で希釈される。
ークデービス社）３４■ （２） ０．０４ Ｍリン酸緩衝液ｐｆ（７，４（バイ
オウェア社） （３） ０．９％ＮａＣ１ （４）実施例１によって製造したｌｆｆ１ ［−抗Ｃ
ＥＡＩｇＧ（ヨー素平均約５原子／分子、比放射能約８
０μＣｉ／μｇ） 実施例１の標識抗体は２０ｕｇ／ｌｄの濃度において溶
液（１）、（２）および（３）中に貯蔵され、そしてこ
の溶液を調製するためリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中１％Ｈ
３Ａの等容で希釈される。
［有］）実施例３で調製した１２３１ｉｇＧを１５．１
μｇ／ｄ余分に含有することを除いて（ａ）部の操作に
よって無菌溶液が調製される。比放射能５００μＣｉ／
μｇのｌｆｆｌ）ｇＱは１０．２μｇ／瀬の濃度で１％
Ｈ３Ａを含むリン酸緩衝液中に貯蔵される。この溶液の
等容を（ａ）部の操作中のＰＢＳ中１％ＩＳＡの代りに
使用する。
μｇ／ｄ余分に含有することを除いて（ａ）部の操作に
よって無菌溶液が調製される。比放射能５００μＣｉ／
μｇのｌｆｆｌ）ｇＱは１０．２μｇ／瀬の濃度で１％
Ｈ３Ａを含むリン酸緩衝液中に貯蔵される。この溶液の
等容を（ａ）部の操作中のＰＢＳ中１％ＩＳＡの代りに
使用する。
（Ｃ） 抗体が実施例２によって製造し、２０μｇ／
ｄの濃度でＰＢＳ中１％ＩＳＡに貯蔵され、そして比較
し得る活性を有する１ｆｆｌ ｌ−抗ＣＥＡ ｒＦ
、 Ｇであること以外（′ｂ）部の操作による無菌溶液
。
ｄの濃度でＰＢＳ中１％ＩＳＡに貯蔵され、そして比較
し得る活性を有する１ｆｆｌ ｌ−抗ＣＥＡ ｒＦ
、 Ｇであること以外（′ｂ）部の操作による無菌溶液
。
（ｄ） 抗体が実施例４によって製造され、抗体分子
当り平均ジアゾ結合したカルボラン残基５個とヨー素ｌ
原子を有し、そして約１６μＣｉ／μｇの比放射能を有
する１：１１ １−抗ＣＥＡ−”Ｂ ＩｇＧであるこ
と以外（ｂ）部の操作による無菌溶液。最終溶液は抗体
５０．４μｇ／！ｌｌｌを含有する。
当り平均ジアゾ結合したカルボラン残基５個とヨー素ｌ
原子を有し、そして約１６μＣｉ／μｇの比放射能を有
する１：１１ １−抗ＣＥＡ−”Ｂ ＩｇＧであるこ
と以外（ｂ）部の操作による無菌溶液。最終溶液は抗体
５０．４μｇ／！ｌｌｌを含有する。
実施例６
■夏作！息足
放射性ヨード化した抗ＣＥＡ ＩｇＧを腫瘍の疑いあ
る患者に投与する。患者はヤギ１ｇＧまたは骨髄腫１ｇ
Ｇに対するアナフィラキシ−過敏症に対して事前テスト
される。ｌ−１３１またはｌ−１２３の甲状腺摂取を阻
止するため、ルゴール液（ピュアバック社）を口から、
放射能標識した抗体の注射１日前から開始して７日間、
５適づつ１日２回投与する。
る患者に投与する。患者はヤギ１ｇＧまたは骨髄腫１ｇ
Ｇに対するアナフィラキシ−過敏症に対して事前テスト
される。ｌ−１３１またはｌ−１２３の甲状腺摂取を阻
止するため、ルゴール液（ピュアバック社）を口から、
放射能標識した抗体の注射１日前から開始して７日間、
５適づつ１日２回投与する。
位置測定はＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ、 Ｎ、
Ｅｎｇ、 Ｊ、門ｅｄ。
Ｅｎｇ、 Ｊ、門ｅｄ。
２９８．１３８４（１９７Ｂ）の方法により、無菌生理
食塩水２０ｄ中実施例５（ｂ）または５（Ｃ）によって
製造した＋２３ ＩｉｇＧを含有する＋３１ ｆ−抗
ＣＥＡ ＩｇＧの溶’（＆ ３．５ ｍｌを１０分な
いし４５分を要して注入することによって実施される。
食塩水２０ｄ中実施例５（ｂ）または５（Ｃ）によって
製造した＋２３ ＩｉｇＧを含有する＋３１ ｆ−抗
ＣＥＡ ＩｇＧの溶’（＆ ３．５ ｍｌを１０分な
いし４５分を要して注入することによって実施される。
Ｔｃ−９９ｍ化合物は使用せず、減算技術はＩＩＩ
ｌと１２３ （との間を識別するため慣用の態様に適
応している。
ｌと１２３ （との間を識別するため慣用の態様に適
応している。
抗体の注射完了直後および２，８，１２，２４゜４８お
よび７２時間後走査が行われる。
よび７２時間後走査が行われる。
有意な局在化が２時間後に見られ、時間につれて改良さ
れた解像度が得られ、注射後８ないし２４時間の間に高
原に達する傾向がある。追加のバックグラウンド１２！
■ ＪｇＱは添加されない。
れた解像度が得られ、注射後８ないし２４時間の間に高
原に達する傾向がある。追加のバックグラウンド１２！
■ ＪｇＱは添加されない。
この方法のＣＥＡ選択性は以前のＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ
ｅｔａｌ法と比較できるが、しかし解像度、速さおよ
び便利さは著しく増強される。
ｅｔａｌ法と比較できるが、しかし解像度、速さおよ
び便利さは著しく増強される。
実施例７
１監准遼
（ａ） 場合によって実施例６の操作によって検出さ
れ、位置測定された卵巣がんを有する患者に、無菌生理
食塩水５０ｄ中実施例５（ａ）の溶液１５０ｍＣ１を静
脈内注射により注射する。腫瘍サイズの減少を２０日以
内に観察する。前記投与量を個人ベースに調節された間
隔で繰り返す。
れ、位置測定された卵巣がんを有する患者に、無菌生理
食塩水５０ｄ中実施例５（ａ）の溶液１５０ｍＣ１を静
脈内注射により注射する。腫瘍サイズの減少を２０日以
内に観察する。前記投与量を個人ベースに調節された間
隔で繰り返す。
（ｂ） 場合によって実施例６の操作によって検出さ
れ、位置測定された子宮頚部がんを有する患者に、患者
の体重７０ｋｇをもとにして２．８ｍＣ１の１３１１活
性を与えるのに充分な実施例５（ｄ）の溶液の量（無歯
生理食塩水中）を注射する。
れ、位置測定された子宮頚部がんを有する患者に、患者
の体重７０ｋｇをもとにして２．８ｍＣ１の１３１１活
性を与えるのに充分な実施例５（ｄ）の溶液の量（無歯
生理食塩水中）を注射する。
腫瘍は実施例６の操作を使用して注射後１２時間で正確
に位置測定される。よくコリメートされた熱中性子ビー
ムが位置決めされた腫瘍位置に集中される。３Ｘ１０”
中性子／ｃｒ１の照射が各腫瘍位置に対して有効であり
、そして場合により個人ベースで調節された間隔で、放
射標識を持ちまたは持たない腫瘍位置測定抗体の投与が
繰り返される。成功した腫瘍縮小が観察される。
に位置測定される。よくコリメートされた熱中性子ビー
ムが位置決めされた腫瘍位置に集中される。３Ｘ１０”
中性子／ｃｒ１の照射が各腫瘍位置に対して有効であり
、そして場合により個人ベースで調節された間隔で、放
射標識を持ちまたは持たない腫瘍位置測定抗体の投与が
繰り返される。成功した腫瘍縮小が観察される。
実施例８
”’ Ｉ−ＨＣＧ Ｉ Ｇ ヤギ の １（ａ
） ＨＣＧに対する抗体（抗ＨＣＧ）は、Ｇａｇｓｈ
ａｗｅ。
） ＨＣＧに対する抗体（抗ＨＣＧ）は、Ｇａｇｓｈ
ａｗｅ。
Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ＩｎｖｅｓｔｉｓｔｉｇａＬｉｖ
ｅ ａｎｄ ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＥｎｄｏｃｌｔｏｌ
ｏｇｙ、 ｐａｒｔ ＩＩＩ、 Ｐｅｐｔｉｄｅ ）Ｉ
ｏｒｍｏｎｅｓＢｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ、 Ｅｄ
ｓ、、 ｐａｇｅｓ ７５６−７６３（ＮｏｒｔｈＨ
ｏｌｌａｎｄ、 Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、 １９７８）の
方法によって製造される。
ｅ ａｎｄ ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＥｎｄｏｃｌｔｏｌ
ｏｇｙ、 ｐａｒｔ ＩＩＩ、 Ｐｅｐｔｉｄｅ ）Ｉ
ｏｒｍｏｎｅｓＢｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ、 Ｅｄ
ｓ、、 ｐａｇｅｓ ７５６−７６３（ＮｏｒｔｈＨ
ｏｌｌａｎｄ、 Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、 １９７８）の
方法によって製造される。
ＨＣＧのβ−サブユニットに対する抗体（抗−ＨＣＧ−
β ＩｇＧ）は、νａｉｔｕｋａｉｔｉｓ ｅｔ ａｌ
。
β ＩｇＧ）は、νａｉｔｕｋａｉｔｉｓ ｅｔ ａｌ
。
Ａｍ、 Ｊ、 ０ｂｓｔｅｔ、 Ｇｙｎｅｃｏｌ、、
１１３．７５Ｈ１９７２）の方法によって製造される。
１１３．７５Ｈ１９７２）の方法によって製造される。
（ｂ） 前記（ａ）部において調製した抗体は血清溶
液としてさらに精製された。操作は抗−ＨＣＧ ｒｇ
Ｇおよび抗−ＨＣＧ−β ＩｇＧについて同一である。
液としてさらに精製された。操作は抗−ＨＣＧ ｒｇ
Ｇおよび抗−ＨＣＧ−β ＩｇＧについて同一である。
抗−ＨＣＧ （または抗−ＨＣＧ−β）血清の補体は５
６゛Ｃで１・時間のインキュベーションにより不活性さ
れ、もはや血球凝固活性が検出されなくなるまで、血球
凝固アッセイから計算された血清／ＲＢＣ比をもって抗
血液ＡＢヒトＲＢＣが除去される。吸着された抗−〇〇
〇血清は０．１Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０（Ｐ Ｏ４
）の数倍容に対して透析される。
６゛Ｃで１・時間のインキュベーションにより不活性さ
れ、もはや血球凝固活性が検出されなくなるまで、血球
凝固アッセイから計算された血清／ＲＢＣ比をもって抗
血液ＡＢヒトＲＢＣが除去される。吸着された抗−〇〇
〇血清は０．１Ｍリン酸緩衝液ｐ Ｈ７，０（Ｐ Ｏ４
）の数倍容に対して透析される。
（Ｃ） ヒト尿タンパク（ＨＵＰ）免疫吸着体が精製
したＨＵＰを臭化シアン活性化セファローズ４Ｂへ結合
することによって調製され、ＨＵＰ免疫吸着体カラムが
調製され、そして抗−）ＩＣＧ （または抗−ＨＣＧ−
β）が精製され、そして実施例１（Ｃ）の操作に準じて
テストされる。
したＨＵＰを臭化シアン活性化セファローズ４Ｂへ結合
することによって調製され、ＨＵＰ免疫吸着体カラムが
調製され、そして抗−）ＩＣＧ （または抗−ＨＣＧ−
β）が精製され、そして実施例１（Ｃ）の操作に準じて
テストされる。
（ｄ）ＨＣＣ；−免疫吸着体力ラムが精製したＨＣＧを
臭化シアン活性化したセファローズ４ＢへＦ（ＵＰ免疫
吸着体のそれと同じカップリング操作により結合し、（
Ｃ）部と同様にカラムを調製し、前循環し、そして平衡
化することによって調製される。
臭化シアン活性化したセファローズ４ＢへＦ（ＵＰ免疫
吸着体のそれと同じカップリング操作により結合し、（
Ｃ）部と同様にカラムを調製し、前循環し、そして平衡
化することによって調製される。
ＨＣＧ免疫吸着体カラムは自動クロマトグラフィーシス
テムへ導入され、上記（Ｃ）部からの抗ＨＣＧ血清が実
施例１（ｄ）の操作と同様に精製される。
テムへ導入され、上記（Ｃ）部からの抗ＨＣＧ血清が実
施例１（ｄ）の操作と同様に精製される。
抗ＨＣＣ； ＩｇＧ製剤の無菌のパイロ−ジエン不合
血清バイアル中へ無菌口過される。部分標本がＲＩＡお
よび免疫拡散による品質管理テストのために保存される
。
血清バイアル中へ無菌口過される。部分標本がＲＩＡお
よび免疫拡散による品質管理テストのために保存される
。
（ｅ） セファクリルＳ−２００（ファルマシア社）
カラムが準備され、前記（ｄ）部からのヤギ抗ＨＣＧＩ
ｇＧのロフトが実施例１の操作と同様に精製され、そし
てアジ化ナトリウムを保存剤として添加して、約５ｍｇ
ＩｇＧ／ｍｌの１ｄ部分標本として冷蔵される。
カラムが準備され、前記（ｄ）部からのヤギ抗ＨＣＧＩ
ｇＧのロフトが実施例１の操作と同様に精製され、そし
てアジ化ナトリウムを保存剤として添加して、約５ｍｇ
ＩｇＧ／ｍｌの１ｄ部分標本として冷蔵される。
（ｆ）”’ Ｉ ｍＣｉ当り７．２ないし１６．
ａ ｕ ｇのヤギ抗ＨＣＧ ＩｇＧが１１１ （アマ
ーシャムーサール社）を含む核種バイアル中へ注射され
、標識され、そして実施例１（ｆ）の操作と同様に精製
され、貯蔵される。
ａ ｕ ｇのヤギ抗ＨＣＧ ＩｇＧが１１１ （アマ
ーシャムーサール社）を含む核種バイアル中へ注射され
、標識され、そして実施例１（ｆ）の操作と同様に精製
され、貯蔵される。
得られる１３１■−抗ＨＣＧ ＩｇＧまたはＩｌｌ
（−抗ＨＣＧ−β ＩｇＧは、抗体分子当すョー素を
平均３ないし７原子有する。各バッチからの無作為部分
標本は無菌性、発熱原性、毒性およびその他の品質管理
変動について別々にテストされる。
（−抗ＨＣＧ−β ＩｇＧは、抗体分子当すョー素を
平均３ないし７原子有する。各バッチからの無作為部分
標本は無菌性、発熱原性、毒性およびその他の品質管理
変動について別々にテストされる。
実施例９
（ａ） ”’ Ｉ −ＡＦＰ Ｉ Ｇ ヤギ
の ゛１過免疫ヤギ抗血清は、西、Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ、、３０，２５０７（１９７０）の方法により精製
したヒトＡＦＰの繰り返した皮肉注射によって精製され
る。抗血清の特異性は二重ゲル拡散、免疫電気泳動およ
びラジオイムノアッセイによって確認される。免疫電気
泳動的に純粋なｒｇｃは、抗血清１ＯＩｎ１のＤＥＡＥ
セルロースクロマトグラフィーと、次にアミコンＰＭ−
３０膜上の濃縮によって製造される。４．２■／ｄの濃
度において、ヤギ抗ＡＦＰ ＩｇＧは終了点として２
ｎｇの標識抗体の５０％結合を用いて、ラジオイムノア
ッセイ力価３Ｘ１０’を有する。
の ゛１過免疫ヤギ抗血清は、西、Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ、、３０，２５０７（１９７０）の方法により精製
したヒトＡＦＰの繰り返した皮肉注射によって精製され
る。抗血清の特異性は二重ゲル拡散、免疫電気泳動およ
びラジオイムノアッセイによって確認される。免疫電気
泳動的に純粋なｒｇｃは、抗血清１ＯＩｎ１のＤＥＡＥ
セルロースクロマトグラフィーと、次にアミコンＰＭ−
３０膜上の濃縮によって製造される。４．２■／ｄの濃
度において、ヤギ抗ＡＦＰ ＩｇＧは終了点として２
ｎｇの標識抗体の５０％結合を用いて、ラジオイムノア
ッセイ力価３Ｘ１０’を有する。
抗体は実施例１（ｆ）の操作と同様に放射標識され、該
実施例記載と同じ様に精製され、貯蔵される。
実施例記載と同じ様に精製され、貯蔵される。
（ｂ） ”’ Ｉ−Ｃ３Ａ Ｉ Ｇ ヤギ
の １抗Ｃ３Ａｐ血清は、氷水下の脱イオン水の５容
量（Ｗ／Ｖ）中のＧＷ−３９ヒト結腸がん外来移植腫瘍
を全速度で２分間ポリトロンによりホモジナイズするこ
とにより調製される。次にホモジネートは４８．ＯＯＯ
Ｘｇで１時間遠心される。透明な上滑が免疫原として使
用される。免疫原のタンパク含量はロウジー法により測
定するとき７ ｍｇ／ｄである。ヤギがヤギの首に皮下
投与された、５厩の完全フロイドアジュバント中に乳化
したホモシネ−）５ｄ（タンパク３５■）で免疫化され
る。増強免過は３ないし４週間隔で続けられる。
の １抗Ｃ３Ａｐ血清は、氷水下の脱イオン水の５容
量（Ｗ／Ｖ）中のＧＷ−３９ヒト結腸がん外来移植腫瘍
を全速度で２分間ポリトロンによりホモジナイズするこ
とにより調製される。次にホモジネートは４８．ＯＯＯ
Ｘｇで１時間遠心される。透明な上滑が免疫原として使
用される。免疫原のタンパク含量はロウジー法により測
定するとき７ ｍｇ／ｄである。ヤギがヤギの首に皮下
投与された、５厩の完全フロイドアジュバント中に乳化
したホモシネ−）５ｄ（タンパク３５■）で免疫化され
る。増強免過は３ないし４週間隔で続けられる。
ヤギは毎月試験採血され、そして血清が抗体産生につい
てテストされる。特異抗−Ｃ３Ａｐ抗体の製造のため、
アフイニテイにより、１０月目およびその後の日日にお
ける出血が処理される。
てテストされる。特異抗−Ｃ３Ａｐ抗体の製造のため、
アフイニテイにより、１０月目およびその後の日日にお
ける出血が処理される。
抗Ｃ３Ａｐ抗体は各種の臓器および組織抽出物に対して
アフィニティー精製される。ヒト結腸がん、ヒトすい臓
および肺、ハムスター肝臓および腎臓の抽出物は、全速
度２分間のポリトロンにより氷水下の脱イオン水５容（
Ｗ／Ｖ）中につくられる。ホモジネートは４８，０００
Ｘｇで１時間遠心される。透明な上清か集められ、凍結
乾燥され、そして臭化シアン法によって抗原をセファロ
ーズ４Ｂへ結合するのに適当なタンパク濃度を得るよう
に水に再溶解される。同時に、ヒトおよびハムスター血
清がセファローズ４Ｂへの結合前にタンパクについて調
節される。ＧＷ−３９水ホモジネートおよびその４Ｂ、
０００ｇ上清は、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ、
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、、３６．３４５５（１９７６
）に報告されているように、Ｃ３Ａ製造のため９０％フ
ェノール液で処理され、そしてセファローズ４Ｂへ結合
される。
アフィニティー精製される。ヒト結腸がん、ヒトすい臓
および肺、ハムスター肝臓および腎臓の抽出物は、全速
度２分間のポリトロンにより氷水下の脱イオン水５容（
Ｗ／Ｖ）中につくられる。ホモジネートは４８，０００
Ｘｇで１時間遠心される。透明な上清か集められ、凍結
乾燥され、そして臭化シアン法によって抗原をセファロ
ーズ４Ｂへ結合するのに適当なタンパク濃度を得るよう
に水に再溶解される。同時に、ヒトおよびハムスター血
清がセファローズ４Ｂへの結合前にタンパクについて調
節される。ＧＷ−３９水ホモジネートおよびその４Ｂ、
０００ｇ上清は、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ、
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、、３６．３４５５（１９７６
）に報告されているように、Ｃ３Ａ製造のため９０％フ
ェノール液で処理され、そしてセファローズ４Ｂへ結合
される。
アヘイニティー吸着は実施例１（Ｃ）ないしくｅ）の操
作と同様に実施される。粗製ヤギ抗Ｃ３Ａｐ （４ｄ）
は結腸がん抽出物を結合したセファローズ４Ｂ１００＋
＋１を収容するカラムへ適用され、下方へ流下すること
を許容される。流下液中にタンパクが出現する時流れを
止め、そして抗血清は免疫吸着体と３０分間反応するこ
とが許容され、そして次にゲルが０．１ Ｍ Ｐ Ｏ
ａ 、 ｐ Ｈ７，０緩衝液で洗浄される。溶離され
た抗体は直ちにアミコンＰＭ−３０膜上で透析され、０
．１Ｍ ＰＯ，、ｐＨ７゜０緩衝液で、次に０．０５
Ｍ Ｐ Ｏａ 、 ｐ Ｈ７，０中の１．０Ｍ尿素
および１０％グリセロールで、そして最終に０．１Ｍ
ＰＯ，、ｐＨ７，０緩衝液で平衡化される。抗体は次
にヒトひ臓、肺および血清を結合したセファローズ４Ｂ
１５ｄの混合物を通過させられる。抗体が免疫吸着
体と反応することが許容された後、カラムは０．１ＭＰ
○４．ＰＨ７，０緩衝液で溶離される。抗体はアミコン
ＰＭ−３０膜上で濃縮され、そしてハムスター肝臓、腎
臓および血清抗原の混合物を含む免疫吸着体カラム７５
ｄを通過させ、そして前述の態様で処理される。
作と同様に実施される。粗製ヤギ抗Ｃ３Ａｐ （４ｄ）
は結腸がん抽出物を結合したセファローズ４Ｂ１００＋
＋１を収容するカラムへ適用され、下方へ流下すること
を許容される。流下液中にタンパクが出現する時流れを
止め、そして抗血清は免疫吸着体と３０分間反応するこ
とが許容され、そして次にゲルが０．１ Ｍ Ｐ Ｏ
ａ 、 ｐ Ｈ７，０緩衝液で洗浄される。溶離され
た抗体は直ちにアミコンＰＭ−３０膜上で透析され、０
．１Ｍ ＰＯ，、ｐＨ７゜０緩衝液で、次に０．０５
Ｍ Ｐ Ｏａ 、 ｐ Ｈ７，０中の１．０Ｍ尿素
および１０％グリセロールで、そして最終に０．１Ｍ
ＰＯ，、ｐＨ７，０緩衝液で平衡化される。抗体は次
にヒトひ臓、肺および血清を結合したセファローズ４Ｂ
１５ｄの混合物を通過させられる。抗体が免疫吸着
体と反応することが許容された後、カラムは０．１ＭＰ
○４．ＰＨ７，０緩衝液で溶離される。抗体はアミコン
ＰＭ−３０膜上で濃縮され、そしてハムスター肝臓、腎
臓および血清抗原の混合物を含む免疫吸着体カラム７５
ｄを通過させ、そして前述の態様で処理される。
最後に抗体はＧＷ−３９腫瘍のフェノール抽出物でつく
った免疫吸着体３２０ｄへ適用される。
った免疫吸着体３２０ｄへ適用される。
抗体３０分間インキュベートした後、カラムは０゜ＬＭ
ＰＯ，、ＰＨ７，０緩衝液で溶離される。抗体は次
に濃縮され、そしてアミコンＰＭ−３０膜上で０．０５
Ｍ Ｐ Ｏａ 、 ｐ Ｈ７，５緩衝液で平衡化さ
れる。このようにして得られるアフィニティー精製され
た抗体はセファデックスＧ−２００（２゜５Ｘ１００ｃ
＋＋＋）カラムに適用され、そして０．０５Ｍ ＰＯ
４、ｐＨ７，５緩衝液を用いて分画される。
ＰＯ，、ＰＨ７，０緩衝液で溶離される。抗体は次
に濃縮され、そしてアミコンＰＭ−３０膜上で０．０５
Ｍ Ｐ Ｏａ 、 ｐ Ｈ７，５緩衝液で平衡化さ
れる。このようにして得られるアフィニティー精製され
た抗体はセファデックスＧ−２００（２゜５Ｘ１００ｃ
＋＋＋）カラムに適用され、そして０．０５Ｍ ＰＯ
４、ｐＨ７，５緩衝液を用いて分画される。
ＩｇＧ分画はプールされ、アミコンＰＭ−３０膜上で濃
縮される。抗Ｃ３Ａｐ ｒｇＧのタンパクは２．８■
／ｄに調節され、そして−２０°Ｃで貯蔵される。
縮される。抗Ｃ３Ａｐ ｒｇＧのタンパクは２．８■
／ｄに調節され、そして−２０°Ｃで貯蔵される。
１−１３５による放射性ヨー素化は実施例１ （ｆ）の
操作と同様に実施され、そして１コ１【−抗Ｃ３Ａｐ
ＩｇＣ；は核実施例１と同様に精製され、貯蔵される
。
操作と同様に実施され、そして１コ１【−抗Ｃ３Ａｐ
ＩｇＣ；は核実施例１と同様に精製され、貯蔵される
。
（Ｃ） 実施例１．８およびこの実施例に類似の操作
を使用して、ＣＥＡ、ＨＣＧ、ＡＦＰまたはＣ５ＡｐＯ
代りに、前立腺酸性フォスファターゼ、すい臓胎児性腫
瘍抗原、胎盤アルカリ性フォスファターゼ、妊婦ベータ
ー１−グロブリン、小麦小体ホルモン、カルシトニン、
組織ポリペプチド抗原、Ｔ−抗原、ベーター２−マイク
ログロブリン、ガラクトシルトランスフェラーゼ−Ｉ［
（ＧＴ−ＩＩ）。
を使用して、ＣＥＡ、ＨＣＧ、ＡＦＰまたはＣ５ＡｐＯ
代りに、前立腺酸性フォスファターゼ、すい臓胎児性腫
瘍抗原、胎盤アルカリ性フォスファターゼ、妊婦ベータ
ー１−グロブリン、小麦小体ホルモン、カルシトニン、
組織ポリペプチド抗原、Ｔ−抗原、ベーター２−マイク
ログロブリン、ガラクトシルトランスフェラーゼ−Ｉ［
（ＧＴ−ＩＩ）。
ｇｐ−５２ビールス関連抗原、卵巣のう腫瘍関連抗原（
ＯＣＡＡ）、卵巣腫瘍特異抗原（ＯＣＡ）。
ＯＣＡＡ）、卵巣腫瘍特異抗原（ＯＣＡ）。
頚管がん抗原（ＣＡ−５８，ＣＣＡ、ＴＡ−４）。
塩基性胎児性タンパク（ＢＦＰ）、末端デオキシヌクレ
オチジルトランスフエラーゼ（ＴｄＴ）。
オチジルトランスフエラーゼ（ＴｄＴ）。
細胞質黒色腫関連抗原、ヒト星状細胞腫関連抗原（ＨＡ
ＡＡ）、通常グリオーマ抗原（ＣＣＡ）。
ＡＡ）、通常グリオーマ抗原（ＣＣＡ）。
膠芽胎児性抗原（ＧＥＡ）、神経膠原線維酸性タンパク
（ＧＦＡ）、通常髄膜腫抗原（ＣＭＡ）および腫瘍脈管
形成因子（ＴＡＦ）のいずれか１種を用い、そして適当
なアフィニティー精製により、これら抗原に対する標識
した抗体が得られる。
（ＧＦＡ）、通常髄膜腫抗原（ＣＭＡ）および腫瘍脈管
形成因子（ＴＡＦ）のいずれか１種を用い、そして適当
なアフィニティー精製により、これら抗原に対する標識
した抗体が得られる。
実施例１０
モノクローン ”’ Ｉ−ＡＦＰ Ｉ Ｇの ゛
１モノクローン性＋ｆｆ：ｌ ７−抗ＡＦＰ Ｉｇ
Ｇは、ＣＥＡの代りにＡＦＰ抗原を使用することを除い
て、実施例２の操作と同様に製造される。
１モノクローン性＋ｆｆ：ｌ ７−抗ＡＦＰ Ｉｇ
Ｇは、ＣＥＡの代りにＡＦＰ抗原を使用することを除い
て、実施例２の操作と同様に製造される。
モノクローン性抗ＡＦＰ ＩｇＧは実施例１（ｒ）の
操作と同様にｒ−１３３で放射標識される。
操作と同様にｒ−１３３で放射標識される。
実施例１１
■−−Ｉ Ｇ ヤギ の ゛１
正常ヤギＩｇＧ（マイルス社）は、臭化シアン結合ＨＣ
Ｇ、ＡＦＰおよびＣ３Ａｐに対してアフィニティー精製
され、そしてｌ−１２３をｒ−＋３１に代え、実施例３
のように比放射能の差を補償するように試薬の比率を変
更することを除き、実施例１（ｆ）の操作と同様にＴ−
１２３で標識される。
Ｇ、ＡＦＰおよびＣ３Ａｐに対してアフィニティー精製
され、そしてｌ−１２３をｒ−＋３１に代え、実施例３
のように比放射能の差を補償するように試薬の比率を変
更することを除き、実施例１（ｆ）の操作と同様にＴ−
１２３で標識される。
実施例１２
”’ ｒ−ＡＦＰ−１０Ｂ Ｉ Ｇ（７）”−（
ａ） 実施例９（ａ）によって製造した抗ＡＦＰ
ＩｇＧを、実施例４（ａ）の操作と同様に、ホウ素−１
０天然存在比（２０％）を有する、１−（４−アミノフ
ェニル）−１，２−ジカルバクロソードデカルボラン（
１２）のジアゾニウム塩の２０倍モル過剰と反応させる
。生成する抗体は抗体１分子当り、平均ジアゾ結合カル
ボラン残基２ないし１０個、もしくは４ないし２０個の
ホウ素−１０原子を有する。
ａ） 実施例９（ａ）によって製造した抗ＡＦＰ
ＩｇＧを、実施例４（ａ）の操作と同様に、ホウ素−１
０天然存在比（２０％）を有する、１−（４−アミノフ
ェニル）−１，２−ジカルバクロソードデカルボラン（
１２）のジアゾニウム塩の２０倍モル過剰と反応させる
。生成する抗体は抗体１分子当り、平均ジアゾ結合カル
ボラン残基２ないし１０個、もしくは４ないし２０個の
ホウ素−１０原子を有する。
（５）上記（ａ）部の抗Ａ Ｆ Ｐ−”Ｂを実施例１（
ｆ）の操作と同様に１−１３１で放射標識し、抗体１分
子当りヨー素平均１ないし１０原を導入する。
ｆ）の操作と同様に１−１３１で放射標識し、抗体１分
子当りヨー素平均１ないし１０原を導入する。
実施例１３
ン゛ ・し′ る７ の−１・告
無菌のパイロ−ジエン不含溶液は以下に示すように製造
される。
される。
（ａ） 無菌溶液はｄ当り以下の成分を含有する。
（１）ヒト血清アルブミン（Ｈ５Ａ）（１％、米局方、
バークデービス社）３．４■ （２）０．０４ Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，４（バイオ
ウェア社） （３） ０．９％ＮａＣＩ （４）実施例８によって製造した１３１１−抗Ｆ（ＣＯ
ｔｇＣ（ヤギ）１０部ｇ（平均ヨー素約５原子／分子、
比放射能約８０μＣｉ／μｇ）実施例８の標識抗体は２
０部ｇ／ｖｄｌの濃度で（１）、（２）および（３）の
溶液中に貯蔵され、そしてこの溶液を調製するためにリ
ン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１％Ｈ３Ａの等容で希釈
される。
バークデービス社）３．４■ （２）０．０４ Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，４（バイオ
ウェア社） （３） ０．９％ＮａＣＩ （４）実施例８によって製造した１３１１−抗Ｆ（ＣＯ
ｔｇＣ（ヤギ）１０部ｇ（平均ヨー素約５原子／分子、
比放射能約８０μＣｉ／μｇ）実施例８の標識抗体は２
０部ｇ／ｖｄｌの濃度で（１）、（２）および（３）の
溶液中に貯蔵され、そしてこの溶液を調製するためにリ
ン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１％Ｈ３Ａの等容で希釈
される。
［有］）実施例１１で製造した１２ｆｆ ■−ＩｇＧの
５．１μｇ／ｍｌをさらに含有することを除いて、上記
（３１部の操作による無歯溶液。標識放射能５００μＣ
ｊ／μｇにおける１２１ ■−ＩｇＧは濃度１０．２
μｇ／１ｔｄｌにおいて１％Ｈ３Ａを含むリン酸緩衝食
塩水中に貯蔵される。この溶液の等容が（ａ）部の操作
におけるＰＢＳ中１％Ｈ３Ａの代りに使用される。
５．１μｇ／ｍｌをさらに含有することを除いて、上記
（３１部の操作による無歯溶液。標識放射能５００μＣ
ｊ／μｇにおける１２１ ■−ＩｇＧは濃度１０．２
μｇ／１ｔｄｌにおいて１％Ｈ３Ａを含むリン酸緩衝食
塩水中に貯蔵される。この溶液の等容が（ａ）部の操作
におけるＰＢＳ中１％Ｈ３Ａの代りに使用される。
（Ｃ） 抗体が実施例９（ａ）により製造され、濃度
２０μｇ／ｙｎｆｌにおいてＰＢＳ中１５Ｈ３Ａ中に貯
蔵され、そして匹敵する比放射能を有するＩＩＩ ｌ
−抗ＡＦＰ ＩｇＧ（ヤギ）であることを除き、［有
］）部の操作による無菌溶液。
２０μｇ／ｙｎｆｌにおいてＰＢＳ中１５Ｈ３Ａ中に貯
蔵され、そして匹敵する比放射能を有するＩＩＩ ｌ
−抗ＡＦＰ ＩｇＧ（ヤギ）であることを除き、［有
］）部の操作による無菌溶液。
（ｄ） 実施例１０により製造した＋３ゴ ■−抗Ａ
ＦＰＴｇＧ（モノクローン性）１０部ｇ ／ ｍｌをさ
らに含有することを除き、（ｂ）部の操作による無菌溶
液。
ＦＰＴｇＧ（モノクローン性）１０部ｇ ／ ｍｌをさ
らに含有することを除き、（ｂ）部の操作による無菌溶
液。
＋ゴ寛 ■−抗ＨＣＧ ＩｇＧ、＋２’Ｉ−ＩｇＧお
よび＋３３ １−抗ＡＦＰ ＩｇＧはそれぞれ最終溶
液の所望の比放射能の３倍の濃度で貯蔵され、そして各
溶液の等容が無菌溶液の調製に使用される。
よび＋３３ １−抗ＡＦＰ ＩｇＧはそれぞれ最終溶
液の所望の比放射能の３倍の濃度で貯蔵され、そして各
溶液の等容が無菌溶液の調製に使用される。
（ｅ） 抗体が実施例１２により製造され、抗体１分
子当りジアゾ結合カルボラン基を平均５個およびヨー素
平均１原子と、そして比放射能１６μＣｉ／μｇを有す
る１ｕｌｌ ｌ−抗ＡＦＰ ＩｇＧであることを除
き、（ｂ）部の操作による無菌溶液。？８液は抗体５０
．４μｇ ／ ｍｌ含有する。
子当りジアゾ結合カルボラン基を平均５個およびヨー素
平均１原子と、そして比放射能１６μＣｉ／μｇを有す
る１ｕｌｌ ｌ−抗ＡＦＰ ＩｇＧであることを除
き、（ｂ）部の操作による無菌溶液。？８液は抗体５０
．４μｇ ／ ｍｌ含有する。
実施例１４
獲簾位１貫足
放射性ヨード化した抗体は腫瘍の疑いある患者に投与さ
れる。患者はヤギＩｇＧに対するアナフィラキシ−過敏
症に対して事前テストされる。■−１３１またはｌ−１
２３の甲状腺摂取を阻止するため、ルゴール液（ピュア
バック社）が放射性標識抗体の注射１日前から始まる７
日管５滴づつ毎日２回口から投与される。
れる。患者はヤギＩｇＧに対するアナフィラキシ−過敏
症に対して事前テストされる。■−１３１またはｌ−１
２３の甲状腺摂取を阻止するため、ルゴール液（ピュア
バック社）が放射性標識抗体の注射１日前から始まる７
日管５滴づつ毎日２回口から投与される。
（ａ） 位置測定は、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ ｅｔ
ａｌ＋ Ｎ、 Ｅｎｇ、 Ｊ。
ａｌ＋ Ｎ、 Ｅｎｇ、 Ｊ。
Ｍｅｄ、、 ２９８．１３８４（１９７８）の操作によ
り、無菌生理食塩水２０ｄ中実施例１３（ｂ）によって
製造した”Ｉ−ＩｇＧを含有する１３１■−抗ＨＣ０Ｉ
ｇＧの溶液３．５ ｍｌを１０ないし２０分を要して注
入することにより実施される。Ｔｃ−９９ｍ化合物は使
用せず、減算技術は慣用の態様でｌ−１３１と！−１２
３とを識別するのに適応している。
り、無菌生理食塩水２０ｄ中実施例１３（ｂ）によって
製造した”Ｉ−ＩｇＧを含有する１３１■−抗ＨＣ０Ｉ
ｇＧの溶液３．５ ｍｌを１０ないし２０分を要して注
入することにより実施される。Ｔｃ−９９ｍ化合物は使
用せず、減算技術は慣用の態様でｌ−１３１と！−１２
３とを識別するのに適応している。
抗体の注射完了直後および２，８，１２，２４゜４８お
よび７２時間走査が行われる。
よび７２時間走査が行われる。
データ解析はフォト操作データをタンビューターに記憶
させ、標識した正常免疫グロブリンの放射能レベルを少
なくとも１つの標的区域における標識抗体のそれと等化
し、各データポイントについて標識抗体に対するバック
グラウンドレベルを計算し、各データポイント毎に標的
を指向した抗体の活性に対する値を発生するため、写真
毎に全抗体活性からえらえたバックグラウンド値を減算
し、そして得られる標的指向抗体活性の発生した値を関
連する出力信号を発生させるために使用することを含む
。
させ、標識した正常免疫グロブリンの放射能レベルを少
なくとも１つの標的区域における標識抗体のそれと等化
し、各データポイントについて標識抗体に対するバック
グラウンドレベルを計算し、各データポイント毎に標的
を指向した抗体の活性に対する値を発生するため、写真
毎に全抗体活性からえらえたバックグラウンド値を減算
し、そして得られる標的指向抗体活性の発生した値を関
連する出力信号を発生させるために使用することを含む
。
有意を局在化が２時間後に見られ、時間とともに解像度
が改善され、注射後日ないし２４時間で高原へ達する傾
向がある。追加のバックグラウンド１２：１１（ｇＧは
加えない。この方法はＨＣＧ選択性は以前のＧｏｌｄｅ
ｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌの方法に匹敵するが、しかし解
像度、速さおよび便利さは著しく増強される。
が改善され、注射後日ないし２４時間で高原へ達する傾
向がある。追加のバックグラウンド１２：１１（ｇＧは
加えない。この方法はＨＣＧ選択性は以前のＧｏｌｄｅ
ｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌの方法に匹敵するが、しかし解
像度、速さおよび便利さは著しく増強される。
造影はＨＣＧを排泄するこう丸生殖細胞腫瘍を持つ患者
において特に成功する。これら患者の２次的骨盤および
腹部腫瘍もまた成功して位置測定され、それらのうちあ
るもの、例えば腹部転移はコンピューター化した腹部断
層撮影法、静脈内賢う造影法および下部ビナキアボグラ
フィーによっては検出困難または不可能である。
において特に成功する。これら患者の２次的骨盤および
腹部腫瘍もまた成功して位置測定され、それらのうちあ
るもの、例えば腹部転移はコンピューター化した腹部断
層撮影法、静脈内賢う造影法および下部ビナキアボグラ
フィーによっては検出困難または不可能である。
（ｂ） 抗体が実施例１３（Ｃ）で製造した１３１−
ＩｇＧを含有する溶液中のｌｆｆ１ １−抗ＡＦＰ
ＩｇＧであることを除いて、（ａ）部の操作を繰り返す
。
ＩｇＧを含有する溶液中のｌｆｆ１ １−抗ＡＦＰ
ＩｇＧであることを除いて、（ａ）部の操作を繰り返す
。
造影は（ａ）のそれに匹敵し、こう丸および肝臓がんを
有する患者に特に成功である。しばしば高く上昇するＡ
ＦＰレベルにもか＼わらず、２次的腹部および肺転移が
よく位置測定される。
有する患者に特に成功である。しばしば高く上昇するＡ
ＦＰレベルにもか＼わらず、２次的腹部および肺転移が
よく位置測定される。
（Ｃ） 抗体溶液が実施例１３ （ｄ）により製造し
たＩＩＩ （−抗ＨＣＧ ＩｇＧ、”” Ｉ−抗Ａ
ＦＰ ＩｇＧおよびＩ２３ ■−ＩｇＧの３．５ ｄ
であることを除き、（ａ）部の操作が繰り返される。フ
ォト走査データが慣用手段で１−１３１．ｌ−１３３お
よびｌ−１２３放射を分離し、標識標的抗体に対するバ
ックグラウンド値を決定するため等化した［−１２３／
ｌ−１３１およびｌ−１２３／ｌ−１３３比を記憶して
使用し、これらを各抗体に対する個別的標的指向活性を
計算するため減算することによって解析される。
たＩＩＩ （−抗ＨＣＧ ＩｇＧ、”” Ｉ−抗Ａ
ＦＰ ＩｇＧおよびＩ２３ ■−ＩｇＧの３．５ ｄ
であることを除き、（ａ）部の操作が繰り返される。フ
ォト走査データが慣用手段で１−１３１．ｌ−１３３お
よびｌ−１２３放射を分離し、標識標的抗体に対するバ
ックグラウンド値を決定するため等化した［−１２３／
ｌ−１３１およびｌ−１２３／ｌ−１３３比を記憶して
使用し、これらを各抗体に対する個別的標的指向活性を
計算するため減算することによって解析される。
造影は（ａ）部および（ｂ）部の別々の抗体走査により
成功して造影されたすべてのタイプの腫瘍に対して成功
である。走査の組み合せは多数の場合において、特に胎
児性がんにおいて増強された位置測定および解像度を与
える。
成功して造影されたすべてのタイプの腫瘍に対して成功
である。走査の組み合せは多数の場合において、特に胎
児性がんにおいて増強された位置測定および解像度を与
える。
実施例１５
皿簾血班
（ａ） 場合により実施例１４（ａ）の走査によって
検出され、位置測定されたこう丸生殖細胞がんを有する
患者に、無菌生理食塩水５０ｄ中実施例１３（ａ）の溶
液１５０ｍＣｉを静注する。腫瘍の縮小が２０日以内に
観察される。この投与は個人毎に調節される間隔で繰り
返される。
検出され、位置測定されたこう丸生殖細胞がんを有する
患者に、無菌生理食塩水５０ｄ中実施例１３（ａ）の溶
液１５０ｍＣｉを静注する。腫瘍の縮小が２０日以内に
観察される。この投与は個人毎に調節される間隔で繰り
返される。
（ｂ） 場合により実施例１４［有］）の操作により
検出され、位置測定された肝臓がんを有する患者に、患
者の体重７０ｋｇに対してＩＩＩ Ｉ活性２．８ｍＣ
１を与えるのに充分な量の実施例１３（ｅ）の溶液（無
菌生理食塩水５０ｍ１中）を注射する。腫瘍は実施例１
３の操作を用いて注射１２時間後に精密に位置測定され
る。よくコリメートした熱中性子ビームが区切られる腫
瘍位置へ集中される。ｃ４当り３×１０１２中性子の照
射が各腫瘍位置について実施され、そして個人ベースで
調節された間隔で、放射標識しまたはしない腫瘍位置測
定抗体の投与と共に繰り返される。成功した腫瘍縮小が
観察される。
検出され、位置測定された肝臓がんを有する患者に、患
者の体重７０ｋｇに対してＩＩＩ Ｉ活性２．８ｍＣ
１を与えるのに充分な量の実施例１３（ｅ）の溶液（無
菌生理食塩水５０ｍ１中）を注射する。腫瘍は実施例１
３の操作を用いて注射１２時間後に精密に位置測定され
る。よくコリメートした熱中性子ビームが区切られる腫
瘍位置へ集中される。ｃ４当り３×１０１２中性子の照
射が各腫瘍位置について実施され、そして個人ベースで
調節された間隔で、放射標識しまたはしない腫瘍位置測
定抗体の投与と共に繰り返される。成功した腫瘍縮小が
観察される。
実施例１６
（ａ） リン酸緩衝食塩水中１５■／−の実施例１で
製造したアフィニティー精製したヤギ抗ＣＥＡＩ ｇＧ
２ｄが、４°Ｃにおいて２４時間、１００ｍＭ酢酸ナト
リウム緩衝液、ｐＨ４，０（ＮａＡｃ）に対して透析さ
れる。抗体溶液はねし蓋つき試験管へ移され、３７°Ｃ
へ予熱され、そしてＮａＡｃ中３ ｔｐｇ ／ ｒｔｄ
ｌのブタペプシン（シグマ社） ０．１ ｍｌと３７°
Ｃで１６時間インキュベートされる。沈澱を含むダイジ
ェストは１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐ Ｈ７
，５（Ｐ Ｏ−ａ ） ニ対して４°Ｃで６時間透析さ
れる。得られる溶液はセファデックスＧ−１００上でＰ
Ｏ，でクロマトグラフされ、Ｆ（ａｂ’）、フラグメン
トは２番目のタンパクピークに溶離される。Ｆ（ａｂ”
）２分画を合し、限外口過で濃縮し、５０ ｍ Ｍ
Ｐ Ｏａ 、 Ｐ Ｈ７，５に対し透析し、そして−
２０°Ｃで貯蔵する。
製造したアフィニティー精製したヤギ抗ＣＥＡＩ ｇＧ
２ｄが、４°Ｃにおいて２４時間、１００ｍＭ酢酸ナト
リウム緩衝液、ｐＨ４，０（ＮａＡｃ）に対して透析さ
れる。抗体溶液はねし蓋つき試験管へ移され、３７°Ｃ
へ予熱され、そしてＮａＡｃ中３ ｔｐｇ ／ ｒｔｄ
ｌのブタペプシン（シグマ社） ０．１ ｍｌと３７°
Ｃで１６時間インキュベートされる。沈澱を含むダイジ
ェストは１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐ Ｈ７
，５（Ｐ Ｏ−ａ ） ニ対して４°Ｃで６時間透析さ
れる。得られる溶液はセファデックスＧ−１００上でＰ
Ｏ，でクロマトグラフされ、Ｆ（ａｂ’）、フラグメン
トは２番目のタンパクピークに溶離される。Ｆ（ａｂ”
）２分画を合し、限外口過で濃縮し、５０ ｍ Ｍ
Ｐ Ｏａ 、 Ｐ Ｈ７，５に対し透析し、そして−
２０°Ｃで貯蔵する。
（ｂ） ゲル口過前の（ａ）部で得られた溶液をサン
プル戚当り７μ２の２−メルカプトエタノールで処理し
、４°Ｃで０．５時間一定のかきまぜのちとにインキュ
ベートする。サンプル１ ｍｌ当り、１Ｍヨードアセタ
ミド０．１３５ ｍｌを加え、混合物をかきまぜなから
４°Ｃで１時間インキュベートし、遠心して清澄化する
。
プル戚当り７μ２の２−メルカプトエタノールで処理し
、４°Ｃで０．５時間一定のかきまぜのちとにインキュ
ベートする。サンプル１ ｍｌ当り、１Ｍヨードアセタ
ミド０．１３５ ｍｌを加え、混合物をかきまぜなから
４°Ｃで１時間インキュベートし、遠心して清澄化する
。
得られる粗製Ｆａｂ’ フラグメント溶液はセファデッ
クスＧ−１００上でゲル口過され、抗ＣＥＡＦａｂ’
フラグメントは２番目のタンパクピークに溶離される。
クスＧ−１００上でゲル口過され、抗ＣＥＡＦａｂ’
フラグメントは２番目のタンパクピークに溶離される。
ピーク２の分画がプールされ、限外口過により濃縮され
、５０ ｍＭ Ｐ ０４ ｐ Ｈ７，５に対して透析
され、−２０°Ｃで貯蔵される。
、５０ ｍＭ Ｐ ０４ ｐ Ｈ７，５に対して透析
され、−２０°Ｃで貯蔵される。
（Ｃ） 前記（ａ）部の操作により、抗ＨＣＧ、抗Ａ
ＦＰ。
ＦＰ。
抗Ｃ３Ａｐ、抗ＣＧＡ、抗ＧＥＡ、抗ＧＦＡ、抗ＣＭＡ
および抗ＨＡＡＡのＦ（ａｂ’）２フラグメントが製造
される。
および抗ＨＡＡＡのＦ（ａｂ’）２フラグメントが製造
される。
（ｄ） 前記（ａ）部および（ｂ）部の操作により、
抗ＨＣＧ。
抗ＨＣＧ。
抗ＡＦＰ、抗Ｃ３Ａｐ、抗ＣＧＡ、抗ＧＥＡ、抗ＧＦＡ
、抗ＣＭＡおよび抗ＨＡＡＡのＦａｂ’フラグメントが
製造される。
、抗ＣＭＡおよび抗ＨＡＡＡのＦａｂ’フラグメントが
製造される。
（ｅ） １３’ ｌ−１ｍＣ１当り、前記（ａ）部
またハ（Ｃ）カらＦ（ａｂ’）、フラグメント４．４な
いし１０１２８ｇ、または前記Φ）部または（ｄ）部か
らのＦａｂフラグメント２．４ないし５．６μｇがＩｌ
ｌ ｌ （アマーシャムーサール社）を含む放射性核
種バイアル中へ注射され、実施例１（ｆ）の操作と同様
に放射標識される。
またハ（Ｃ）カらＦ（ａｂ’）、フラグメント４．４な
いし１０１２８ｇ、または前記Φ）部または（ｄ）部か
らのＦａｂフラグメント２．４ないし５．６μｇがＩｌ
ｌ ｌ （アマーシャムーサール社）を含む放射性核
種バイアル中へ注射され、実施例１（ｆ）の操作と同様
に放射標識される。
得られる１：１１ １−抗体Ｆ （ａｂ’ ）ｚは、フ
ラグメント当りヨー素平均３ないし７原子を有する。
ラグメント当りヨー素平均３ないし７原子を有する。
各バッチからの無作為部分標本は個々に無凹性、発熱原
性、毒性およびその他の品質管理変動についてテストさ
れる。
性、毒性およびその他の品質管理変動についてテストさ
れる。
実施例１７
フラグメントの １および
（ａ）ＮａＡｃｔｌ衝液ｐ ！４５．０中１５ｍｇ／ｍ
ｌ溶液の形の、実施例１６ （Ｃ）で製造した抗ＣＥＡ
および抗Ｃ３ＡｐＦ（ａｂ”）２フラグメントの等景況
合物がサンプルｉ当り７μ２の０．０１Ｍ２−メルカプ
トエチルアミン塩酸塩溶液で処理され、一定したかきま
ぜのちとに３７”Ｃで１時間インキュベートされる。混
合物は還元剤を除去するためｐＨ５で４０’Ｃにおいて
イオン交換カラム（ＩＲ１２０）を通され、得られる溶
液はｐＨ８に調節され、ゆるやかにかきまぜながらそし
て酸素を溶液に通しながら２時間かきまぜる。溶液は次
にＰＯ，に対して４°Ｃで６時間透析され、実施例１６
（ａ）の最終工程のようにセファデックスｃ−ｔ ｏ
ｏ上ＰＯ。
ｌ溶液の形の、実施例１６ （Ｃ）で製造した抗ＣＥＡ
および抗Ｃ３ＡｐＦ（ａｂ”）２フラグメントの等景況
合物がサンプルｉ当り７μ２の０．０１Ｍ２−メルカプ
トエチルアミン塩酸塩溶液で処理され、一定したかきま
ぜのちとに３７”Ｃで１時間インキュベートされる。混
合物は還元剤を除去するためｐＨ５で４０’Ｃにおいて
イオン交換カラム（ＩＲ１２０）を通され、得られる溶
液はｐＨ８に調節され、ゆるやかにかきまぜながらそし
て酸素を溶液に通しながら２時間かきまぜる。溶液は次
にＰＯ，に対して４°Ｃで６時間透析され、実施例１６
（ａ）の最終工程のようにセファデックスｃ−ｔ ｏ
ｏ上ＰＯ。
でクロマトグラフされる。
Ｆ （ａｂ’ ）ｚ混成フラグメントを含有する分画は
２番目のタンパクピークに溶離される。この分画は臭化
シアンで結合したＣＥＡおよびＣ３Ａｐを含む別々のセ
ファローズ４Ｂカラム上のアフィニティークロマトグラ
フィーにかけられる。両方のカラ１、に保持される分画
は）昆乱的に解離され、セファデックスＧ−１００上で
再クロマトグラムされ、そして硫安で沈澱し、解離しそ
してＰＯ。
２番目のタンパクピークに溶離される。この分画は臭化
シアンで結合したＣＥＡおよびＣ３Ａｐを含む別々のセ
ファローズ４Ｂカラム上のアフィニティークロマトグラ
フィーにかけられる。両方のカラ１、に保持される分画
は）昆乱的に解離され、セファデックスＧ−１００上で
再クロマトグラムされ、そして硫安で沈澱し、解離しそ
してＰＯ。
に対し透析することによってさらに精製され、そして抗
ＣＥＡ／Ｃ３Ａｐ Ｆ （ａ ｂ’ ）ｚの溶液は一
２０℃で貯蔵される。
ＣＥＡ／Ｃ３Ａｐ Ｆ （ａ ｂ’ ）ｚの溶液は一
２０℃で貯蔵される。
（ｂ） 上記（ａ）部の操作により、以下の混成Ｆ（
ａｂ’）フラグメントが製造される。成分Ｆａｂ’記号
はそれらの抗体源によって示される。
ａｂ’）フラグメントが製造される。成分Ｆａｂ’記号
はそれらの抗体源によって示される。
（１）抗ＡＦ Ｐ ／ ＨＣＧ Ｆ （ａ ｂ’ ）
２（２）抗ＣＥＡ／ＰＡＰ Ｆ （ａ ｂ’ ）
２（３）抗ＣＧＡ／ＣＥＡ Ｆ （ａ ｂ’ ） ２
（Ｃ） 上記（８１部および０））部で製造したフラ
グメントはそれぞれ実施例１（ｒ）の操作に同様に＞１
３１またはｌ−１３３のどちらかで放射標識される。
２（２）抗ＣＥＡ／ＰＡＰ Ｆ （ａ ｂ’ ）
２（３）抗ＣＧＡ／ＣＥＡ Ｆ （ａ ｂ’ ） ２
（Ｃ） 上記（８１部および０））部で製造したフラ
グメントはそれぞれ実施例１（ｒ）の操作に同様に＞１
３１またはｌ−１３３のどちらかで放射標識される。
実施例１８
■ Ｇフラグメントの ′告および
正常ヤシＩｇＧ（マイルス社）が臭化シアン結合された
ＨＣＣ；、ＡＦＰ、Ｃ３Ａｐ、ＣＥＡ ＰＡＰ、ＧＥ
ＡおよびＣＧＡに対してアフィニティー精製され、実施
例１６の操作によりフラグメント化され、そしてフラグ
メントが、ｌ−１２３を１−１３１の代りに使用し、そ
して実施例３のように比放射能の差を補償するため試薬
の比例的変更を行うこと以外は実施例１ （ｆ）の操作
と同様に■−１２３で放射標識される。
ＨＣＣ；、ＡＦＰ、Ｃ３Ａｐ、ＣＥＡ ＰＡＰ、ＧＥ
ＡおよびＣＧＡに対してアフィニティー精製され、実施
例１６の操作によりフラグメント化され、そしてフラグ
メントが、ｌ−１２３を１−１３１の代りに使用し、そ
して実施例３のように比放射能の差を補償するため試薬
の比例的変更を行うこと以外は実施例１ （ｆ）の操作
と同様に■−１２３で放射標識される。
実施例１つ
ホウ −１０Ａ フラグメントの ′告および■
（ａ） 抗体フラグメント、例えば実施例１６により
製造した抗ＣＥＡ Ｆ （ａｂ’ ）２を、実施例４
（ａ）の操作と同様に、ホウ素−１０を天然存在比に含
む（２０％）、１．−（３−アミノフェニル）＝１．２
−ジカルバクロソードデカルボラン（１２）のジアゾニ
ウム塩の２０倍モル過剰と反応させる。
製造した抗ＣＥＡ Ｆ （ａｂ’ ）２を、実施例４
（ａ）の操作と同様に、ホウ素−１０を天然存在比に含
む（２０％）、１．−（３−アミノフェニル）＝１．２
−ジカルバクロソードデカルボラン（１２）のジアゾニ
ウム塩の２０倍モル過剰と反応させる。
得られるフラグメントは抗体フラグメント当りジアゾ結
合カルボラン残基を平均２ないし１０個もしくはホウ素
−１０を４ないし１０原子有する。
合カルボラン残基を平均２ないし１０個もしくはホウ素
−１０を４ないし１０原子有する。
ａ〕）前記（ａ）部の抗ＣＥＡ−”Ｂ−Ｆ （ａ ｂ’
） 。
） 。
は実施例１（ｆ）の操作と同様にｒ〜１３１で放射標識
され、抗体フラグメント当りヨー素を平均工ないし１０
原子が導入される。
され、抗体フラグメント当りヨー素を平均工ないし１０
原子が導入される。
（Ｃ） 実施例１６（Ｃ）のＦ（ａｂ’）、フラグメ
ントをそれぞれこの実施例の（ａ）部の操作によりカル
ボラン付加物を付加するように反応させ、得られるホウ
素−１０含有フラグメントは実施例１ （ｆ）の操作と
同様に放射標識され、抗体フラグメント当りヨー素平均
１ないし１０＠子の標識が達成される。
ントをそれぞれこの実施例の（ａ）部の操作によりカル
ボラン付加物を付加するように反応させ、得られるホウ
素−１０含有フラグメントは実施例１ （ｆ）の操作と
同様に放射標識され、抗体フラグメント当りヨー素平均
１ないし１０＠子の標識が達成される。
（ｄ） ヨードアセタミドの代りに、■−（４−アミ
ノフェニル）−１，２−ジカルハクロソードテカルボラ
ン（１２）のＮ−ヨードアセタミドが使用される以外は
、実施例１６α））の操作が繰り返される。咳アミドは
、慣用方法により、塩基の存在下アミンをヨードアセチ
ルクロライドと反応させることによって製造される。得
られるＦａｂ’ フラグメントは、還元的開裂で遊離さ
れたスルフヒドリル基に、２個のカルポラノフェニル置
換アセタミド基を有する。ホウ素−１０含有フラグメン
トは、抗体フラグメント当すョー素平均ｌないし１０原
子の標識を得るように、実施例１ （ｆ）の操作と同様
に放射性コード化される。
ノフェニル）−１，２−ジカルハクロソードテカルボラ
ン（１２）のＮ−ヨードアセタミドが使用される以外は
、実施例１６α））の操作が繰り返される。咳アミドは
、慣用方法により、塩基の存在下アミンをヨードアセチ
ルクロライドと反応させることによって製造される。得
られるＦａｂ’ フラグメントは、還元的開裂で遊離さ
れたスルフヒドリル基に、２個のカルポラノフェニル置
換アセタミド基を有する。ホウ素−１０含有フラグメン
トは、抗体フラグメント当すョー素平均ｌないし１０原
子の標識を得るように、実施例１ （ｆ）の操作と同様
に放射性コード化される。
（ｅ） 実施例１７（ａ）および１７（ｂ）によって
製造した混成Ｆ （ａｂ’ ）ｚフラグメントをこの実
施例の（８１部のように反応させ、次に抗体フラグメン
ト当りヨー素１ないし１０原子の標識を得るように、実
施例１（ｆ）の操作と同様に放射性ヨード化される。
製造した混成Ｆ （ａｂ’ ）ｚフラグメントをこの実
施例の（８１部のように反応させ、次に抗体フラグメン
ト当りヨー素１ないし１０原子の標識を得るように、実
施例１（ｆ）の操作と同様に放射性ヨード化される。
実施例２０
止■旦往工凱戎立二裂遣
無菌のパイロ−ジエン不含溶液が以下のように製造され
る。
る。
（ａ） ｍ１当り、以下の成分の含存する無菌溶液（
１）ヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）（１％、米局方、パ
ークデービス社）３４ｍｇ （２）０．０４ Ｍリン酸緩衝液、ｐｉ（７，４（バイ
オウェア社） （３） ０．９％Ｎ ａ Ｃ１ （４）実施例１６により製造した＋３１ １−抗ＣＥＡ
Ｆ （ａｂ’ ）ｚ （ヤギ）６．１μｇ（ヨー素平
均約５原子／分子、比放射能約１２５μＣｉ／μｇ） 実施例工６の抗体は２４．４μｇ ／ ｍｉの濃度で溶
液（１）、（２）および（３）中に貯蔵され、この溶液
を調製するためにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１％
Ｈ３Ａの３容で希釈される。
１）ヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）（１％、米局方、パ
ークデービス社）３４ｍｇ （２）０．０４ Ｍリン酸緩衝液、ｐｉ（７，４（バイ
オウェア社） （３） ０．９％Ｎ ａ Ｃ１ （４）実施例１６により製造した＋３１ １−抗ＣＥＡ
Ｆ （ａｂ’ ）ｚ （ヤギ）６．１μｇ（ヨー素平
均約５原子／分子、比放射能約１２５μＣｉ／μｇ） 実施例工６の抗体は２４．４μｇ ／ ｍｉの濃度で溶
液（１）、（２）および（３）中に貯蔵され、この溶液
を調製するためにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１％
Ｈ３Ａの３容で希釈される。
（ｂ） 実施例１８で製造した比放射能５００ｕｃｉ
／ｐｇの＋２：ＩＩ −Ｆ （ａｂ’ ）ｚを５．２
ｕ ｇ ／ｍｌをさらに含有することを除き、上記（ａ
）部の操作による無菌溶液。ｔ２コ ｒ Ｆ（ａｂ’
）ｚは濃度２０．８μｇ／ｒｎｌｌにおいて工％Ｈ３Ａ
を含むＰＢＳ中に貯蔵される。この溶液の等容が（ａ）
の操作におけるＰＢＳ中の１％ＩＳＡの１容の代りに使
用される。
／ｐｇの＋２：ＩＩ −Ｆ （ａｂ’ ）ｚを５．２
ｕ ｇ ／ｍｌをさらに含有することを除き、上記（ａ
）部の操作による無菌溶液。ｔ２コ ｒ Ｆ（ａｂ’
）ｚは濃度２０．８μｇ／ｒｎｌｌにおいて工％Ｈ３Ａ
を含むＰＢＳ中に貯蔵される。この溶液の等容が（ａ）
の操作におけるＰＢＳ中の１％ＩＳＡの１容の代りに使
用される。
（Ｃ） 抗体が実施例１６により製造され、濃度４０
゜４μｇ／ｄにおいてＰＢＳ中１％Ｈ３Ａ中貯蔵され（
フラグメント当すョー素平均２゜５原子）、そして１３
＋ １−抗ＣＥＡ Ｆ （ａ ｂ’ ）２フラグメ
ントの活性の約半分を有する１３１ ）−抗ＡＦＰＦ
ａｂ’の１０．１μｇ／ｄであり、そして１２３Ｉ−Ｆ
（ａ ｂ’ ）’ｚの代りに”’Ｉ−Ｆａｂ’を■−
１３１対１−１２３の活性化が実施例２０（ｂ）と同じ
になるような比放射能において含むこと以外は、（ａ）
部の操作による無菌溶液。
゜４μｇ／ｄにおいてＰＢＳ中１％Ｈ３Ａ中貯蔵され（
フラグメント当すョー素平均２゜５原子）、そして１３
＋ １−抗ＣＥＡ Ｆ （ａ ｂ’ ）２フラグメ
ントの活性の約半分を有する１３１ ）−抗ＡＦＰＦ
ａｂ’の１０．１μｇ／ｄであり、そして１２３Ｉ−Ｆ
（ａ ｂ’ ）’ｚの代りに”’Ｉ−Ｆａｂ’を■−
１３１対１−１２３の活性化が実施例２０（ｂ）と同じ
になるような比放射能において含むこと以外は、（ａ）
部の操作による無菌溶液。
（ｄ） 抗体が実施例１６により製造され、２４，４
μｇ ／ ｒｔｄｌの濃度でＰＢＳ中１％ＩＳＡに貯蔵
され、そして匹敵する比活性を有する１３′Ｉ−抗Ｃ３
Ａｐ Ｆ（ａｂ’）ｚであることを除いて、（ｂ）部
の操作による無菌溶液。
μｇ ／ ｒｔｄｌの濃度でＰＢＳ中１％ＩＳＡに貯蔵
され、そして匹敵する比活性を有する１３′Ｉ−抗Ｃ３
Ａｐ Ｆ（ａｂ’）ｚであることを除いて、（ｂ）部
の操作による無菌溶液。
（ｅ）抗体が実施例１７により製造され、２４，４μｇ
／ ｍｌの濃度でＰＢＳ中の１％Ｈ３Ａに貯蔵され、
そして匹敵する比活性を有する１３１■−抗ＣＥＡ／Ｃ
３Ａｐ混成Ｆ（ａｂ’）、であることを除き、［有］）
部の操作による無菌溶液。
／ ｍｌの濃度でＰＢＳ中の１％Ｈ３Ａに貯蔵され、
そして匹敵する比活性を有する１３１■−抗ＣＥＡ／Ｃ
３Ａｐ混成Ｆ（ａｂ’）、であることを除き、［有］）
部の操作による無菌溶液。
（ｆ） それぞれ２４．４μｇ／戚の濃度でＰＢＳ中
の１％ＩＳＡに貯蔵され、そして匹敵し得る比活性を有
する＋３１ ■−抗ＡＦＰ Ｆ（ａｂ’）ｚおよびｌ
ｆｆ１ ｌ−抗ＨＣＧＦ （ａ ｂ’ ）ｚをそれぞ
れ６゜１μｇ／ｒｔｔｌさらに含むことを除き、（′ｂ
）部の操作による無菌溶液。それぞれの等容が（ａ）部
の操作におけるＰＢＳ中の１％Ｉ Ｓ Ａの１容の代り
に使用される。
の１％ＩＳＡに貯蔵され、そして匹敵し得る比活性を有
する＋３１ ■−抗ＡＦＰ Ｆ（ａｂ’）ｚおよびｌ
ｆｆ１ ｌ−抗ＨＣＧＦ （ａ ｂ’ ）ｚをそれぞ
れ６゜１μｇ／ｒｔｔｌさらに含むことを除き、（′ｂ
）部の操作による無菌溶液。それぞれの等容が（ａ）部
の操作におけるＰＢＳ中の１％Ｉ Ｓ Ａの１容の代り
に使用される。
（ｇ） 実施例１７により製造し、２０．４μｇ／ｍ
１の濃度でＰＢＳ中の１％Ｈ３Ａ中に貯蔵され、そして
匹敵し得る比活性を有する１：１３ ■−抗Ａ Ｆ
Ｐ ／ＨＣＧ Ｆ （ａｂ’ ）ｚをさらに含むこと
を除いて（ｅ）部の操作による無菌溶液。
１の濃度でＰＢＳ中の１％Ｈ３Ａ中に貯蔵され、そして
匹敵し得る比活性を有する１：１３ ■−抗Ａ Ｆ
Ｐ ／ＨＣＧ Ｆ （ａｂ’ ）ｚをさらに含むこと
を除いて（ｅ）部の操作による無菌溶液。
（ハ）抗体が実施例１７により製造され、２４．４μｇ
／ ｍｆｌの濃度でＰＢＳ中の１％ＩＳＡに貯蔵され
、そして匹敵する比活性を有する＋１１ １−抗ＣＧＡ
／ＧＥＡ Ｆ （ａ ｂ’ ） ！フラグメントであ
ることを除き、［有］）部の操作による無菌溶液。
／ ｍｆｌの濃度でＰＢＳ中の１％ＩＳＡに貯蔵され
、そして匹敵する比活性を有する＋１１ １−抗ＣＧＡ
／ＧＥＡ Ｆ （ａ ｂ’ ） ！フラグメントであ
ることを除き、［有］）部の操作による無菌溶液。
（ｉ） 抗体が実施例１９により製造され、抗体分子
当り平均５個のジアゾ結合カルポラン残基とヨード１原
子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比放射能を有
する＋３１ ｉ−抗ＣＥＡ−ＩＯＢ Ｆ （ａｂ’
）、フラグメントであることを除き、［有］）の操作に
よる無菌溶液。
当り平均５個のジアゾ結合カルポラン残基とヨード１原
子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比放射能を有
する＋３１ ｉ−抗ＣＥＡ−ＩＯＢ Ｆ （ａｂ’
）、フラグメントであることを除き、［有］）の操作に
よる無菌溶液。
（ｊ） 抗体が実施例１９により製造され、抗体分子
当り平均５個のジアゾ結合カルボラン残基およびヨーＦ
１原子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比放射
能を有するＩＩＩ ｌ−抗ＣＥＡ／Ｃ３ＡＰ １６Ｂ
混成 Ｆ （ａｂ’ ）ｚであることを除き、（ｂ）の
操作による無菌溶液。
当り平均５個のジアゾ結合カルボラン残基およびヨーＦ
１原子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比放射
能を有するＩＩＩ ｌ−抗ＣＥＡ／Ｃ３ＡＰ １６Ｂ
混成 Ｆ （ａｂ’ ）ｚであることを除き、（ｂ）の
操作による無菌溶液。
最終溶液は抗体３０．６μｇ／ｌｎｉを含有する。
（財）抗体が実施例１９（ｄ）により製造され、抗体分
子当り平均２個のアミド結合カルボラン残基およびヨー
素１原子とを有し、そして約５２μＣｉ／μｇの比放射
能を有する直３１ （−抗ＡＦＰ−１’ＢＦａｂ’
フラグメントであることを除き、（ハ）部の操作による
無菌水溶液。最終溶液は抗体１６．８μｇ／ｍｌを含有
する。
子当り平均２個のアミド結合カルボラン残基およびヨー
素１原子とを有し、そして約５２μＣｉ／μｇの比放射
能を有する直３１ （−抗ＡＦＰ−１’ＢＦａｂ’
フラグメントであることを除き、（ハ）部の操作による
無菌水溶液。最終溶液は抗体１６．８μｇ／ｍｌを含有
する。
（１） 抗体が実施例１９（ｅ）により製造され、抗
体分子当り平均５個のアミド結合カルボラン残基および
ヨー素ｌ原子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比
活性を有するＩｌｌ ｌ−抗ＣＣ；Ａ／ＧＥＡＩＯＢ
混成Ｆ （ａｂ’ ）ｚフラグメントであることを除き
、Ｑ′））部の操作による無菌溶液。最終溶液は抗体３
０．６μｇ／ｒｒｄｌを含有する。
体分子当り平均５個のアミド結合カルボラン残基および
ヨー素ｌ原子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比
活性を有するＩｌｌ ｌ−抗ＣＣ；Ａ／ＧＥＡＩＯＢ
混成Ｆ （ａｂ’ ）ｚフラグメントであることを除き
、Ｑ′））部の操作による無菌溶液。最終溶液は抗体３
０．６μｇ／ｒｒｄｌを含有する。
実施例２１
■棗位１皿足
放射性ヨード化した抗体フラグメントは腫瘍の疑いのあ
る患者に投与される。患者は対応するＩｇＧフラグメン
トに対するアナフィラキシ−過敏症について事前テスト
される。ｌ−１３１または！−１２３の甲状腺摂取を阻
止するため、ルゴール液（ピュアパック社）が放射性標
識抗体フラグメントの注射１日前から始める７日間、５
滴づつ１日２回口から投与される。
る患者に投与される。患者は対応するＩｇＧフラグメン
トに対するアナフィラキシ−過敏症について事前テスト
される。ｌ−１３１または！−１２３の甲状腺摂取を阻
止するため、ルゴール液（ピュアパック社）が放射性標
識抗体フラグメントの注射１日前から始める７日間、５
滴づつ１日２回口から投与される。
（ａ） 位置測定はＧｏＩｄｅｒｂｅｒｇｅｔ ａｔ
、 Ｎ、 Ｅｎｇ、 Ｊ。
、 Ｎ、 Ｅｎｇ、 Ｊ。
Ｍｅｄ、、 １３８４（１９７８）の方法により、無菌
生理食塩水２０雁中の、実施例２０（ｂ）により製造し
た！２ｆｆ ｌ−Ｆ （ａｂ’ ）ｚを含むｌｆｆ１
ｌ−抗ＣＥＡＦ（ａｂ’）２の溶液３．５ ｍｌを
１０分ないし２０分を要して注入することにより実施さ
れる。Ｔｃ−９９ｍ化合物は使用されず、減算技術は慣
用態様で１−１３１およびｒ−１２３を識別するのに適
応している。フラグメントの注射の完了直後、および２
．４，８．１２．２４．４８および７８時間後走査が行
われる。
生理食塩水２０雁中の、実施例２０（ｂ）により製造し
た！２ｆｆ ｌ−Ｆ （ａｂ’ ）ｚを含むｌｆｆ１
ｌ−抗ＣＥＡＦ（ａｂ’）２の溶液３．５ ｍｌを
１０分ないし２０分を要して注入することにより実施さ
れる。Ｔｃ−９９ｍ化合物は使用されず、減算技術は慣
用態様で１−１３１およびｒ−１２３を識別するのに適
応している。フラグメントの注射の完了直後、および２
．４，８．１２．２４．４８および７８時間後走査が行
われる。
データ解析は、フォト走査データをコンピューターに記
憶させ、標識した正常ＩｇＧフラグメントの活性レベル
を少なくとも１つの標的区域における標識した特異フラ
グメントのそれに等化し、そして各データポイントに対
し標識したフラグメントのためのバックグラウンドレベ
ル値を計算し、得られたバックグラウンド値を全フラグ
メント活性から減算し、各データポイントに対し標的へ
向ったフラグメントの活性のための値を発生させ、そし
て得られた標的指向フラグメント活性に対する発生させ
た値を関連する出力信号を発生するように使用すること
を含む。
憶させ、標識した正常ＩｇＧフラグメントの活性レベル
を少なくとも１つの標的区域における標識した特異フラ
グメントのそれに等化し、そして各データポイントに対
し標識したフラグメントのためのバックグラウンドレベ
ル値を計算し、得られたバックグラウンド値を全フラグ
メント活性から減算し、各データポイントに対し標的へ
向ったフラグメントの活性のための値を発生させ、そし
て得られた標的指向フラグメント活性に対する発生させ
た値を関連する出力信号を発生するように使用すること
を含む。
２時間後に有意な位置測定が見られ、時間とともに改良
された解像度が得られ、注射後４ないし１２時間の間に
高原に達する傾向が見られる。追加のバックグラウンド
＋２３ １−１’；’ （ａ ｂ’ ） ｚは加えられ
ない。この方法のＣＥＡ特異性は以前のＧｏｌｄｅｒｂ
ｅｒｇ ｅｔ ａｔ法に匹敵するが、しかし解像度、速
さおよび便利さは著しく増強された。
された解像度が得られ、注射後４ないし１２時間の間に
高原に達する傾向が見られる。追加のバックグラウンド
＋２３ １−１’；’ （ａ ｂ’ ） ｚは加えられ
ない。この方法のＣＥＡ特異性は以前のＧｏｌｄｅｒｂ
ｅｒｇ ｅｔ ａｔ法に匹敵するが、しかし解像度、速
さおよび便利さは著しく増強された。
（′ｂ）実施例２０（ｂ）の溶液の代りに実施例２０
（Ｃ）の溶液３．５雁を使用し、上記（ａ）部の操作が
繰り返される。
（Ｃ）の溶液３．５雁を使用し、上記（ａ）部の操作が
繰り返される。
造影は（ａ）部に匹敵し、こう丸および肝臓がんを有す
る患者に特に成功する６２次的肺および腹部転移は、し
ばしば高く上昇する血清ＡＦＰにもかかわらず良好に位
置測定される。
る患者に特に成功する６２次的肺および腹部転移は、し
ばしば高く上昇する血清ＡＦＰにもかかわらず良好に位
置測定される。
（Ｃ） 実施例２０（ｂ）の溶液の代りに実施例２０
（ｄ）の溶液３゜５ ｍｌを使用し、（ａ）部の操作
が繰り返された。
（ｄ）の溶液３゜５ ｍｌを使用し、（ａ）部の操作
が繰り返された。
造影は（ａ）部のそれに匹敵し、結腸がんを有する愚者
に特に成功する。
に特に成功する。
（ｄ） 実施例２０（ｂ）の溶液の代りに実施例２０
（ｅ）の溶液３．５ ｍｌを使用し、（８１部の操作が
繰り返される。
（ｅ）の溶液３．５ ｍｌを使用し、（８１部の操作が
繰り返される。
胃腸がんの造影は特にシャープで、この実施例の（ａ）
部および（Ｃ）部に匹敵する。
部および（Ｃ）部に匹敵する。
（ｅ） 実施例２０（ｂ）の溶液の代りに実施例２０
（ｆ）の溶液３．５ ｍｌを使用し、（ａ）部の操作
を繰り返す。
（ｆ）の溶液３．５ ｍｌを使用し、（ａ）部の操作
を繰り返す。
この実施例の（ａ、）、（ｂ）および（Ｃ）部で位置測
定および検出に成功したタイプのすべてのｌｌ１ｇの造
影に成功する。組み合わせ走査は多くの場合、特にこう
丸生殖細胞、肝臓および肺がんに対して増強された位置
測定および解像度を与える。
定および検出に成功したタイプのすべてのｌｌ１ｇの造
影に成功する。組み合わせ走査は多くの場合、特にこう
丸生殖細胞、肝臓および肺がんに対して増強された位置
測定および解像度を与える。
げ）実施例２０（ｂ）の溶液の代りに実施例２０ （ｇ
）の溶液３．５ ｍｌを使用し、（ａ）部の操作を繰り
返す。
）の溶液３．５ ｍｌを使用し、（ａ）部の操作を繰り
返す。
造影はこの実施例の（ａ）ないしくｂ）部の操作により
造影されるすべての腫瘍タイプに対し、この実施例の（
ｂＪ部のそれに匹敵する。
造影されるすべての腫瘍タイプに対し、この実施例の（
ｂＪ部のそれに匹敵する。
（８）実施例２０［有］）の溶液の代りに実施例２０ら
）の溶液３．５ ｍｆｔを使用し、（ａ）部の操作を繰
り返す。脳の膠芽腫の造影に成功し、混成抗体は血液−
脳障壁を通過することができ、そして脳腫瘍中に集中す
ることを示す。
）の溶液３．５ ｍｆｔを使用し、（ａ）部の操作を繰
り返す。脳の膠芽腫の造影に成功し、混成抗体は血液−
脳障壁を通過することができ、そして脳腫瘍中に集中す
ることを示す。
実施例２２
腫廣血遼
（ａ） 場合により実施例２１の操作により検出され
、位置測定された卵巣がんを有する患者に、無菌生理食
塩水５０緘中実施例２０ （ａ）の溶液１５０ｍＣ１を
静注する。腫瘍サイズの縮小は２０口以内に観察される
。該投与は個人ベースで調節された間隔で繰返される。
、位置測定された卵巣がんを有する患者に、無菌生理食
塩水５０緘中実施例２０ （ａ）の溶液１５０ｍＣ１を
静注する。腫瘍サイズの縮小は２０口以内に観察される
。該投与は個人ベースで調節された間隔で繰返される。
（ｂ）場合により実施例２１の操作により検出され、位
置測定された子宮頚部がんを有する患者に、患者の体重
７０ｋｇに対し＋３１１活性２．８ｍＣ１を与えるのに
充分な量の実施例２０（ｉ）の溶液（無菌生理食塩水５
０ｄ中）を注射する。
置測定された子宮頚部がんを有する患者に、患者の体重
７０ｋｇに対し＋３１１活性２．８ｍＣ１を与えるのに
充分な量の実施例２０（ｉ）の溶液（無菌生理食塩水５
０ｄ中）を注射する。
腫瘍は実施例２１の操作を用いて注射後１２時間で精密
に位置測定される。よくコリメートされた熱中性子ビー
ムが区切られた腫瘍位置に集中される。ｃｆｆｌ当り３
Ｘ１０”中性子の照射が各１１１！ｉ位置に対して実施
され、そして場合により個人ベースで調節された間隔で
、放射標識し、またはしない腫瘍位置測定剤の投与とと
もに繰り返される。
に位置測定される。よくコリメートされた熱中性子ビー
ムが区切られた腫瘍位置に集中される。ｃｆｆｌ当り３
Ｘ１０”中性子の照射が各１１１！ｉ位置に対して実施
され、そして場合により個人ベースで調節された間隔で
、放射標識し、またはしない腫瘍位置測定剤の投与とと
もに繰り返される。
成功する腫瘍縮小が観察される。
（Ｃ） 実施例２０（ｉ）の溶液の代りに実施例２０
（ｊ）の溶液が使用され、患者が結腸がんを有すること
を除いて、上記（ｂ）部の操作が繰り返される。成功し
た腫瘍縮小が観察される。
（ｊ）の溶液が使用され、患者が結腸がんを有すること
を除いて、上記（ｂ）部の操作が繰り返される。成功し
た腫瘍縮小が観察される。
（ｄ） 実施例２０（ｉ）の溶液の代りに実施例２０
（ｋ）の溶液が使用し、そして患者がこう丸生殖細胞腫
瘍を有することを除いて、（ｂ）部の操作が繰り返され
る。腹部転移の減少を含む、成功した腫瘍縮小が観察さ
れる。
（ｋ）の溶液が使用し、そして患者がこう丸生殖細胞腫
瘍を有することを除いて、（ｂ）部の操作が繰り返され
る。腹部転移の減少を含む、成功した腫瘍縮小が観察さ
れる。
（ｅ） 実施例２０（ｉ）の溶液の代りに実施例２０
（１）の溶液を使用し、そして患者が脳の膠芽腫を有す
ることを除き、（ｂ）部の操作が繰り返される。成功し
た腫瘍縮小が観察される。
（１）の溶液を使用し、そして患者が脳の膠芽腫を有す
ることを除き、（ｂ）部の操作が繰り返される。成功し
た腫瘍縮小が観察される。
前記実施例は本発明の一般的にまたは特定的に記載した
反応剤および／または処理条件で前述の実施例中に使用
されたそれらの置き換えることにより、同様の成功度を
もって繰り返すことができる。
反応剤および／または処理条件で前述の実施例中に使用
されたそれらの置き換えることにより、同様の成功度を
もって繰り返すことができる。
以上の記載から、当業者は本発明の基本的特徴を確かめ
ることができ、そしてその精神および範囲を逸脱するこ
となく、その各種の用途および条件に適応させるため本
発明の各種の改変を行うことができる。
ることができ、そしてその精神および範囲を逸脱するこ
となく、その各種の用途および条件に適応させるため本
発明の各種の改変を行うことができる。
Claims (5)
- （１）（ａ）腫瘍マーカーに対し特異性であり、フォト
走査装置を用いて外部から検出可能な薬理学的に不活性
なラジオアイソトープの造影有効量で放射標識された少
なくとも１種のマーカー特異性抗体であって、前記抗体
は細胞内腫瘍マーカーに対して特異性の全免疫グロブリ
ンであり、かつ前記腫瘍マーカーがヒト絨毛ゴナントロ
ビンである時は前記ラジオアイソトープはテクネチウム
−９９ｍ以外のラジオアイソトープである前記マーカー
特異性抗体と、 （ｂ）薬剤学的に許容し得る注射剤担体とを含むことを
特徴とするヒト腫瘍造影用注射組成物。 - （２）前記腫瘍マーカーは、アルファ胎児性タンパク、
ヒト絨毛ゴナントロビンもしくはそのベーターサブユニ
ット、または結腸特異抗原−ｐである第１項の組成物。 - （３）前記抗体はモノクロナール抗体である第１項また
は第２項の組成物。 - （４）前記ラジオアイソトープはインジウム−１１１、
ガリウム−６７、ヨウ素−１２３、またはテクネチウム
−９９ｍである第１項または第２項の組成物。 - （５）前記抗体はモノクロナール抗体である第４項の組
成物。
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| US126262 | 1980-03-03 | ||
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| JPH0684314B2 JPH0684314B2 (ja) | 1994-10-26 |
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