JPH0720887B2

JPH0720887B2 - ヒト腫瘍治療用注射組成物

Info

Publication number: JPH0720887B2
Application number: JP1135703A
Authority: JP
Inventors: ゴールデンバーグ、ミルトン、デービッド
Original assignee: ゴールデンバーグ、ミルトン、デービッド
Priority date: 1980-03-03
Filing date: 1989-05-29
Publication date: 1995-03-08
Anticipated expiration: 2010-03-08
Also published as: IL62267A; JPH036125B2; WO1981002522A1; JPH03141231A; AU6786887A; AU581555B2; JPH03157337A; JPH0684314B2; AU7034181A; IL62267A0; IE52040B1; CA1244344A; JPS57500195A; EP0035265B1; DK482181A; JPH03157338A; JPH03141230A; AU556548B2; EP0035265A3; EP0035265A2

Description

【発明の詳細な説明】本発明の背景がん胎児性抗原（CEA）に対する放射性標識抗体は腫瘍
の位置測定に使用できることが知られている。ハンセン
らの米国特許3,927,193号はそのような方法を開示する
が、しかしその動物への使用の実施例を提供するに過ぎ
ない。この特許に記載されている方法は、腫瘍部位に関
連した放射能の精密な識別を妨害し得る放射能が血液、
その他の体液およびある種の組織、特に心臓および肝臓
のような他の体内部位にも存在する状況において、どの
ように腫瘍が可視化され得るのか説明していない。Reif
et al，Surg．Oncol,6,133(1974)およびMach et al，E
urop,J.Cancer，Suppl．1,113(1978)に報告されている
初期の臨床的研究は、放射性抗CEA抗体をもってヒトの
腫瘍の位置測定に失敗した。

Goldenberg et al，New England Journal of Medicin
e，298,1384(1978)はCEAに対する放射性標識抗体を投与
されている患者のシンチレーション走査によって腫瘍の
発見および位置測定の臨床実験に成功したことを報告し
た。この文献では、血液プールバックグラウンド放射能
から特定の放射性抗体活性を区別することが動物および
ヒトの両方の研究において問題であり、そして他の放射
性核種による特別のスキャナー減法技術がこの方法を用
いるあいまいでない腫瘍位置測定に必須であると考えら
れることを記している。この文献においては使用された
抗体製剤はCEAと70％免疫反応性であった。この文献は
さらに正常なハムスター組織中のCEAの不存在は、該抗
原が通常がん患者には増加したレベルで循環しており、
そしてある正常な組織中には少量した存在しないヒトへ
補外を阻害することを記している。このシンチグラフ方
法を使用する位置測定を可能とするために使用される減
法技術は、各造影スキャンの前にTe−99m過テクネチウ
ム酸塩およびTc−99m標識ヒト血清アルブミンの注射を
含む。得られたデータは標識抗体単独、Tc−99m標識種
との合計、およびこれら各種の値の和および差のデジタ
ルイメージを発生することができるミニコンピュータに
記憶される。

CEAはHiyderman，Scand.J.Immunol.,8.,Suppl.8,119(19
78)およびその他多数によって報告されているように主
として細胞表面抗原である。Spar，Seminars In Nucl．
Med.,6,379(1976)およびEmrich，Deutshe Med．Woch．S
chr.,104，153(1979)により、ヒトの腫瘍位置測定は腫
瘍細胞の表面に存在する抗原に特異性な抗体を必要とす
ると考えていた。前出Heyderman，Lee et al，Guillouz
o et al，Albrechtsen et alおよびRuoslahti et alに
よるそれぞれScand.J.Immunol.,8,Suppl.8,pp．485ff．
289ff，165ff，3ffの報告により、ヒト絨毛膜ゴナンド
トロピン（HCG）およびアルファフェトタンパク（AFP）
の両方が細胞質性細胞内腫瘍関連物質であることが知ら
れている。

Quinones et al,J.Nucl．Med.,12,69(1971)はハムスタ
ーに育成させたヒト絨毛膜がんは腫瘍中において動物の
肝臓中に比較して2.8倍の増加した放射性標識抗HCG抗体
の摂取を示すことを報告した。しかしながら標識した正
常1gGによる対照研究は第２日の後注射により同様の増
加した腫瘍摂取を示した。さらに著者は特に第３日およ
び第４日における組織分析により見られる、標識正常1g
Gを上廻る放射性抗体の摂取量の差は全身写真スキャニ
ングでは観察されなかったと述べている。平井らAbstra
cts 6th Int．Res．Group for Carcinoembroyonic Prot
ein，Marberg/Lahn，西ドイツは移植したヒトへパトー
マを持った、およびラットおよびヒト卵黄のう腫瘍を持
つネズミへ放射性標識抗AFPを投与すると、腫瘍組織へ
の抗体のホームインは見られないことを報告した。

心臓ミオシンへ特異性の抗体の開裂によって得られる放
射性標識フラグメントは、ハーバーの米国特許第4,036,
945号において心筋梗塞の位置および寸法の決定に使用
されている。

抗体を用いる放射療法は多数の人により提案され、１例
の多モード治療的臨床使用におけるその成功の微候がOr
der，Radio.,118,219(1976)に報告されている。治療へ
のホウ素標識抗体の使用はHawthorne et al.,J.Med．Ch
em.,15,449(1972)に報告されているが、しかし治療のた
めホウ素とそして位置測定のためラジオアイソトープの
組み合わせ使用は示されていない。

本発明の目的本発明の目的は、放射線治療的に有効なラジオアイソト
ープがそれが腫瘍関連マーカーに高度に特異性の抗体も
しくは抗体フラグメントへ結合することによって腫瘍生
育部位へ集中される腫瘍放射線療法に使用する注射組成
物を提供することである。

本明細書および請求の範囲をさらに検討するとき、当業
者には本発明のその他の目的および利益が明らかになる
であろう。

本発明の概要本発明は、 (a)腫瘍が産生または関連する細胞質、細胞内または細
胞表面マーカーに対し特異性であり、薬理学的に不活性
なかつ放射療法的に有効なラジオアイソトープの腫瘍減
少有効量で放射標識された少なくとも１種のマーカー特
異性抗体もしくは抗体フラグメントと、 (b)薬剤学的に許容し得る注射剤担体とを含むことを特
徴とするヒト腫瘍治療用注射組成物を提供する。

詳細な議論以下の説明において、本発明の注射組成物をヒト腫瘍の
治療に使用するにあたっては、注射途中の腫瘍の変化を
知ることが重要であるので、フォト走査装置を使用して
腫瘍を造影するそのための手法をあわせて記載する。

本発明に使用される抗体は各種の腫瘍関連抗原またはマ
ーカー物質に特異性であり、他方本発明方法に使用され
るマーカー特異抗体フラグメントはそのような特異抗体
の開裂によって製造される。該マーカーは、腫瘍によっ
て産生される物質、細胞質内であれ、核内であれ、各種
の機能質内であれ腫瘍細胞内に蓄積する物質、または腫
瘍細胞の上もしくはまわりに蓄積する物質でよい。それ
らは細胞内または細胞表面または細胞質マーカーでよ
い。このような腫瘍関連マーカーのうちには、Heberman
による。“Immunodiagnosis of Cancer",Fleisher Ed．
および“The Clinical Biochemistry of Cancer",page3
47（Am．Assn．Clin．Chem.1979），およびwoltsen et
alの米国特許第4,150,149に記載のものがある。

腫瘍関連マーカーは前出Herbermanにより、腫瘍胎児抗
原、胎盤抗原、腫瘍形成または腫瘍ビールス関連抗原、
組織関連抗原、臓器関連抗原、逸所ホルモンおよび通常
の抗原またはその変種を含む多数のカテゴリーに分類さ
れている。しばしば腫瘍関連マーカーのサブユニットが
高い腫瘍特異性を有する抗体を上昇させるために有利に
使用される。例えばヒト絨毛ゴナンドトロピン（HCG）
のベーターサブユニットは、非腫瘍物質への大きく減少
された交差反応性を有する抗体の産生を促進する。本発
明において有用な、それに対する特異抗体を上昇させ得
るこのような好適なマーカーは、これらに限定されるも
のではないが、アルファ胎児タンパク（AFP）、ヒト絨
毛ゴナントロピン（HCG）およびそのベーターサブユニ
ット、結腸特異抗原−ｐ（CSAp）、がん胎児性抗原（CE
A）、前立腺酸性フォスファターゼ、すい臓腫瘍胎児性
抗原、胎盤アルカリ性フォスファターゼ、妊婦ベーター
１−グロブリン、上皮小体ホルモン、カルシトニン、組
織ポリペプチド抗原、Ｔ−抗原、ベーター２−ミクログ
ロブリン、乳房腫瘍関連糖タンパク（MTGP）、ガラクイ
シルトランスフェラーゼ−II（GT−II）、gp−52ビール
ス関連抗原、卵巣のう腫がん関連抗原（OCAA）、乾燥腫
瘍特異抗原（OCA）、子宮頚管がん抗原（CA−58、CCA、
TA−４），塩基性胎児性タンパク（BFP）、末端デオキ
シヌクレオチジルトランスフェラーゼ（TdT），細胞質
黒色腫関連抗原、ヒト星状細胞腫瘍関連抗原（HAAA），
通常グリオーマ抗原（CGA），膠芽胎児性抗原（GEA），
神経膠原線維酸性タンパク（GFA），通常髄膜腫抗原（C
MA），および腫瘍脈管形成因子（TAF）を含む。

マーカー特異性抗体はこの分野でよく知られた慣用方法
によって製造することができる。通常動物、好ましくは
ネズミ、ウサギ、さらに好ましくはヤギまたは霊長類に
腫瘍関連マーカー物質を挑戦させ、それに対しその免疫
系をこれらマーカーに特異性の抗体を産生することによ
って反応させる。動物を出血させ、血液の免疫グロブリ
ン分画を単離し、そして好ましくは１回または２回以上
のアフィニティークロマトグラフィーを含む各種の慣用
分離技術により特異性免疫グロブリンを単離する。腫瘍
関連マーカー物質に特異な抗体を上昇させるための好適
なこのような一般法は、特に“Immunodiagnosis of Can
cer",Herberman et al Eds．（Marcel Dekkeo．Inc.,Ne
wYork and Basel，1979）および“Trmor Markers",Sel
l，Ed．（Humana Perss，Clifton,N.J.,198）に記載さ
れている。

CEA特異抗体は、とりわけPrimus et al,J.Immunol.,11
8,55(1977)；Goldenberg et al，supra；Primus et a
l．Cancer Res.,37，1544(1977)；Goldenberg et al,"I
mmunodiangosis of Cancer,Part I",Herbeman et al，E
ds.,pages、265-306(Marcel Dekker，Inc.,New York &Ba
sel，1979）に報告されている当分野で公知の各種の方
法で製造することができる。

前記の慣用技術によって製造した抗体は通常抗体の混合
物であり、その一定割合が特異性であるが、しかし一般
に非腫瘍関連または他の抗原に交差反応性の抗体を可変
割合で含有している。抗体混合物のいくつかの成分がそ
れに対し交差反応性である結合抗原を使用する繰り返し
アフィニティークロマトグラフィーおよび結合した精製
抗原を含むカラムの通過によって精製した抗体は、高い
特異免疫反応性を有し、しばしば70％近くまたはそれ以
上へ達し、そして非腫瘍関連抗原または他の抗原に対す
る交差反応性が15％以下となる。これら抗体はそれらが
上昇された抗原に対して実質上モノ特異性であると考え
られ、そして本発明において好適に使用される。

腫瘍位置測定のため、高いマーカー特異免疫反応性を有
する抗体を使用することは特に有利である。高い特異性
は、標識抗体の高割合が腫瘍部位を標的とし、小割合が
非標的態様で分布されることを意味する。それ故標識抗
体の少量を使用することができ、患者の被曝量を減ら
し、そして標的へ向わない抗体によるバックグラウンド
放射の低いレベルは解像度を改善するであろう。このこ
とはさらに他のどの方法でもしばしば困難または不可能
であるより小さい腫瘍を検出し得ることを意味する。高
度に特異なモノクローン性抗体は雑種形成技術によって
製造することができる。このような抗体は通常精製を殆
んどまたは全く必要とせず、そして通常少なくとも75％
の特異免疫反応性を持ち、ある場合には95％以上の特異
性を有する。このようなモノクローン性のハイブリドー
マ誘導抗体もまた本発明において使用するのに好適であ
る。好適な具体例において、モノクローン性抗体は、サ
ルに精製した腫瘍関連マーカーを挑戦させ、抗体産生サ
ルリンパもしくはひ臓細胞をヒトもしくはマウス骨髄腫
細胞と融合して雑種細胞をつくり、次にこれを分離し、
クローン化し、前記マーカー物質に特異なモノクローン
性抗体を生成するそれらの能力について選定する。

免疫グロブリンＧ（1gG）分画からのモノクローン性抗
体はこの方法で得られ、そして本発明による腫瘍検出、
位置測定および治療のため使用されるフラグメントを製
造するために使用される。koprowskiの米国特許第4,17
2,124号の1gMモノクローン性抗体はこの方法に使用する
ために適していない。

抗体フラグメントはＦ（ab′）_２と呼ばれる5Sフラグメ
ントを与えるように抗体をペプシンで酵素分解すること
によって製造し得ることが知られている。このフラグメ
ントはさらにチオール還元剤と、場合によってジサルフ
ァイド結合の開裂から生ずるスルフヒドリル基のブロッ
キング基を使用して開裂し、3.5S Fab′１価フラグメン
トを生成させることができる。その代りに、パパインを
使用する酵素分解は直接２個の１価Fabフラグメントお
よび１個のFcフラグメントを生成する。これらの方法は
米国特許第4,036,945号およびその引用文献に、そしてN
isonoff et al，Arch．Biochem．Biophys.,89,320(196
0)；Porter，Biochem.J.,73,119(1959)；Edelman et a
l，“Methods in Immunology and Immunochemistry,"Vo
l.1,422（Acad．Press，1967）に記載されている。

抗体を開裂する他の方法、例えばFabフラグメントのそ
れ以上の開裂または他の酵素もしくは化学的手法の使用
も使用することができる。それらの親抗体がそれに対し
て上昇された腫瘍関連マーカーに対して特異性を保持し
ているフラグメントだけがこの方法に使用される。

混成抗体フラグメントは異なる抗体の還元的開裂から生
ずるFab′フラグメントの酸化的結合によって製造され
た。これらの一部分はもとの抗体がそれに対して上昇さ
れた抗原の両方へ特異性のフラグメントを含有するであ
ろう。これは二つの異なる抗体のペプシン分解によって
製造された二つの異なるＦ（ab′）_２フラグメントを混
合し、Fab′フラグメントの混合物を生成するように還
元的に開裂し、次にもとの抗原のそれぞれへ特異なFa
b′部分を含む混成フラグメントを含むＦ（ab′）_２フ
ラグメント混合物を生成するように酸化してジサルファ
イド結合を再生成させることによって有利に実施するこ
とができる。このように混成抗体フラグメントの製造法
は、Feteanu，“Labeled Antibodies in Biology and M
edicine”pages 321-323（McGraw-Hill Int．Bk．Co.,
Now York et al，1978）；Nisonoff et al．Arch．Bioc
hem．Biophys.,93,470(1961)；Hammerling et al，Ex
p．Med.,128,1461（1968）に記載されている。

以下の議論において、「抗体」なる語は断わりのない限
りこれまで記載したような抗体および抗体フラグメント
を包含する。

抗体は当分野で公知のいくつかの手法のいずれかによっ
ても標識することができる。標識技術の広い範囲がFete
anu．“Labeled in Biology and Medicine",pages 214-
309（McGraw-Hill Int．Bok Co.,New York et al．197
8）に記載されている種々の金属ラジオアイソトープの
導入は、Wagner et al.,J.Nucl．Med.,20,428(1979)，S
undbery et al,J.Med．Chem.,17,1304(1974)；Saha et
al,J.Nucl．Med．6,542(1976)の方法によって達成する
ことができる。以上に当分野で公知のタンパクを放射標
識するための多数の方法の数例に過ぎない。

使用するラジオアイソトープのうち、ガンマ放射体、陽
電子放射体、Ｘ線放射体、および螢光発光体が位置測定
および／または治療用に好適であり、一方ベーター放射
体およびアルファ放射体も治療に使用することができ
る。抗体を標識するため好適なラジオアイソトープはヨ
ウ素−131,ヨー素−123、ヨー素−126,ヨー素−133,臭
素−77,インジウム−111,インジウム−113m,ガリウム−
67,ガリウム−68,ルテニウム−95,ルテニウム−97,ルテ
ニウム−103,ルテニウム−105,水銀−197,水銀−203,レ
ニウム−99m,レニウム−105,レニウム−101,テルル−12
1m,テルル−112m,テルル−125m,ツリウム−165,ツリウ
ム−167,ツリウム−168,テクネチウム−99m,およびフッ
素−18を含む。ハロゲン標識抗体もしくはフラグメント
および／または正常免疫グロブリンもしくは対応するフ
ラグメントは、実質上同一の運動性および分布と、そし
て類似の代謝を持つであろうから、ハロゲンを標識とし
て多かれ少なかれ互換性を持って使用することができ
る。

抗体標識のために好適な技術は、Greenwood et al，Bio
chem.J.,89,114(1963)によって報告され、McConahey et
al，Int．Arch．Allergy Appln．Immunol.,29,185(196
9)によって修正されたように、放射性ヨー化カリウムま
たはナトリウムと抗体との混合物をクロラミン−Ｔで処
理する酸化法を用いて、ヨー素−131（Ｉ−131）または
ヨー素−123（Ｉ−123）で標識することを含む。これは
試薬の割合および反応条件に依存して、抗体分子上の、
恐らくチロシン残基上の、多分トリプトファンおよびフ
ェニルアラニン残基上の水素原子をヨー素原子で直接置
換する結果を生ずる。

一般に、抗体へその免疫特異性を破壊することなくでき
るだけ高い割合の放射性標識を導入するのが望ましい。
非常に多数の研究者は抗体１分子当りヨー素原子1.5な
いし２個以上の直接置換による投入は不利であると考え
ていたが、今や抗体１分子当りヨー素を少なくとも2.5
および好ましくは平均５ないし10原子直接置換して導入
することは、特に抗体が標識前高度にマーカー特異性で
ある場合有利であることが判明した。この場合、高度の
標識化の結果として５ないし33％の抗体特異性の低下さ
えも高い活性の方が上廻り、実質上より少量の標識抗体
の使用を許容する。前記したように、高活性の高い特異
性抗体の使用は効率的な位置測定および増大した解像性
を結果する。この増加した活性を減少した特異性とのバ
ランスは抗体１分子当り平均ヨー素10原子まで有利で、
その後は特異性の減少が高活性の利益を上廻る。放射性
標識を導入するための他の方法を使用することにより、
減少した免疫特異性に受容できない価格を支払うことな
しに抗体フラグメントに対する標識の割合をさらに増加
することが可能であろう。それ以上の改良は、抗体上の
抗原結合部位が保護されることを確実にするため、放射
性標識化を特異抗原の存在下において実施することによ
って達成することができる。該抗原は標識化後分離され
る。

２価混成抗体フラグメントの実例、例えば２つの異なる
腫瘍特異抗体のそれぞれからFab′フラグメントの化学
的結合によって得られるＦ（ab′）_２抗体フラグメント
を以下に示す。表１は、検出および治療の両方に対して
それらが有利に使用される好適なそのような２価混成体
および腫瘍タイプの例示リストを与える。１番目のカラ
ムは混成体の二つのFab′成分がそれに対して特異性で
ある二つの抗原を示し、各混成体はそれぞれの抗原性決
定因子に対し特異性の一つのフラグメントを有する。い
くつかの場合において抗体は特異性を増加させるため腫
瘍関連抗原のより小さいフラグメントに対して上昇され
るであろう。例えばHCGのベーターサブユニットに対し
て上昇された抗体はHCG自体に対して上昇させた抗原よ
り好ましい。２番目のカラムは各ハイブリッドタイプを
優先的に濃縮する腫瘍タイプを示す。

表１に示したような混成フラグメントは多数腫瘍タイプ
または細胞の検出および位置測定のため単一ラジオアイ
ソトープで標識するか、または治療のため単数もしくは
複数のラジオアイソトープで標識することができる。さ
らにこのような混成体は検出のためあるラジオアイソト
ープで、そして治療のため１種またはそれ以上のアイソ
トープで、例えばあるラジオアイソトープおよび／また
はホウ素含有フラグメントで標識することができ、その
ため位置測定された腫瘍は以下記載の態様で熱中性子で
照射されることができる。

より小さいマーカー特異性フラグメントを生成するよう
に抗体からFcフラグメントを除去することは、フラグメ
ントの移動度およびその血液−脳障壁通過能力を容易に
するより小さい分子量を有する分子を生成するという利
益を有する。加えて、Fcフラグメントは抗体の主な過ア
レルゲン性および非特異的結合の大部分に責任がある。
従ってその開裂は抗体の注射、特に多数の腫瘍の造影ま
たは腫瘍放射線療法のための反復注射に対するアレルギ
ー反応の危険を減らす。抗体フラグメントの運動性は全
天然免疫グロブリンよりももっと速く、そして腫瘍にも
っと特異的に結合するので、減算法技術は省略するか、
または特定の状況で使用するため修正することができ
る。加えて、特定の動脈によって供給された腫瘍への標
識した検知剤のもっと直接的な動脈内適用のための標識
抗体の使用は、腫瘍検出および腫瘍放射線療法の両方の
ため、このプロセスの重要な機会を提供する。

腫瘍位置測定、検出および治療のための単一製剤に標識
抗体フラグメントの混合物を使用することができる。該
混合物は、位置測定および解像度を向上させるため同一
腫瘍タイプに関連する異なる抗原に特異なフラグメント
を使用することができる。この代りに広い腫瘍特異性を
有するフラグメントの混合物を使用して、種々の腫瘍タ
イプの広範囲スクリーニングを実施することができる。

混成フラグメントの使用に同様に、同一もしくは異なる
腫瘍または腫瘍細胞タイプに関連する抗原に対し特異な
標識抗体の混合物を使用してもよい。これはある場合に
検出、位置測定および／または治療を向上させることが
でき、そしてまた２種以上の腫瘍または腫瘍細胞タイプ
についての広いスクリーンの範囲を増加することができ
る。

放射性標識特異抗体の投与後24時間後においてのみ通常
腫瘍位置測定を可能とする以前公知の方法とは対照的
に、この改良された減算技術は、放射性標識特異抗体お
よび放射性標識正常免疫グロブリンの同時投与後24時間
以内に腫瘍検出および位置測定を可能とする。腫瘍位置
測定は、抗体／免疫グロブリン対の注射後２時間で、投
与後6,12,18および24時間において改良された解像度を
もって達成することができる。抗体フラグメントは大変
速く組織中に拡散しそして一層速く局在化されるので、
腫瘍検出および位置測定は標識フラグメントの注射後短
時間で達成することができる。

血液プールまたは間質性体液中に標識フラグメントまた
はそれらの代謝物が蓄積することによる放射能は、腫瘍
関連マーカーへ特異性の標識抗体フラグメントを使用す
る腫瘍位置測定の解像度を著しく減少させることがあり
得る。そのような場合には、フォト走査前に被検者へ参
照物質を注射するのが有利である。参照物質はマーカー
特異抗体フラグメント標識と異なるエネルギーで放射
し、そしてフォト走査装置で独立に検出し得るラジオア
イソトープで放射標識される。参照物質の活性のレベル
は非標的指向特異抗体フラグメントによるバックグラウ
ンド活性の測定に使用され、このバックグラウンド活性
は次に特異抗体の全活性から減算され、実質上標的指向
腫瘍関連抗体のみの活性の測定を許容する。

Goldenberg et al,N,Eng.,J.Med.,298,1384(1978)に報
告された成功したヒトがんの非侵入的ラジオ免疫検知法
においては、減算技術が成功的位置測定のために必要で
あることを示した。しかしながら使用された減算技術は
本発明のそれと実質的に相違する。参照方法では、放射
性ヨード化した抗CEA抗体が注射され、そしてテクネチ
ウム−99m標識ヒト血清アルブミンおよび過テクネチウ
ム酸テクネチウム−99mが各造影走査前に静注された。
像はガンマシンチレーションカメラで得られ、得られた
データはミニコンピューターに記憶される。非標的区域
におけるTc−99活性に対するＩ−131活性の比はバック
グラウンド非局在抗体活性のための比較標準を与えた。
これは他の位置における非標的指向特異抗体活性の測定
を許容し、これは全特異抗体活性から減算され、局在化
された標的指向抗体の活性値が得られた。

本発明は適当な参照物質のうちで、Tc−99m標識正常免
疫グロブリンＧまたはそのフラグメントおよびTc−99m
標識イオウコロイドの使用を含む。しかしながら好まし
くは参照物質は、対応する正常な無関係な免疫グロブリ
ンＧ（IgG）か、または腫瘍位置測定剤として使用した
特異抗体フラグメントを製造するために使用したものと
同一もしくは異なる種からの対応するフラグメントであ
る。この正常免疫グロブリンＧは、好ましくは特異抗体
を標識するために使用した同じ元素の異なるアイソトー
プで放射標識され、そして好ましくは放射標識されたマ
ーカー特異抗体と同時に注射される。これは参照物質と
して標識特異抗体と実質上同じ結合、分布および代謝動
力学性を有する分子種を使用するという利益を有する。
その結果一回だけの参照物質の注射が必要で、そして増
加した解像度が得られる。正常1gGはそれが対応する特
異抗体と同じ方法で製造され、標識される。

一方は特異抗体を標識するために使用することができ、
他方は正常免疫グロブリンを標識するために使用される
ラジオアイソトープの適当な対は、ヨー素−131とヨー
素123、インジウム−111とインジウム−113m、ガリウム
−67とガリウム−68、ルテニウム−67とルテニウム−10
3、または水銀−197と水銀−203を含む。ヨー素は化学
的置換反応により直接導入し得るため、そして放射性で
そしてフォト走査装置を使用して検出し得る少なくとも
５種類のアイソトープを有するので、ヨー素は、本発明
方法に使用するため特異抗体フラグメントおよび正常免
疫グロブリンＧ参照物質の両方を放射標識するのに好適
である。有利には、ヨー素−131が特異抗体を標識する
ために使用され、ヨー素−123が正常免疫グロブリンを
標識するために使用される。発生する放射はガンマーシ
ンチレーション検出器の２つの異なるチャンネル上に別
々に検出される。

得られる走査データはミニコンピューターに好都合に記
憶され、そしてその非標的区域における標識参照免疫グ
ロブリンに対する比を上廻る、放射標識特異抗体の過剰
蓄積区域を決定するため前述の減算法が実施される。こ
れらの値は関連した出力信号、有利にはカラービデオス
クリーン上のカラーの変化を発生させるために使用する
ことができる。フォト走査装置はコンピューター断層放
射線写真能力を備えることができる。高い活性と許容し
得る免疫特異性との間に最大のバランスを与えるように
標識した高度にモノ特異性で、好ましくはモノクローン
性の抗体を使用するこの高度に能率率的な減算技術は、
著しく改良された解像度の腫瘍位置測定および検出方法
を提供する。

勿論、高度に標識した、高度に特異性抗体と本発明の改
良された減算技術の組合せはもっと高い解像度を導び
く。好適な具体例において、実質上モノ特異性抗体が抗
体１分子あたりヨー素が平均少なくとも2.5原子、好ま
しくは５ないし10原子導入されるようにＩ−131または
Ｉ−123で放射標識され、そして生成した高度に標識さ
れたモノ特異性抗体は本発明に従って注射される。抗体
１分子当り少なくとも2.5および好ましくは５ないし10
原子の平均ヨー素含量へＩ−131またはＩ−123で放射標
識されたモノクローン性特異抗体の使用も好適である。

さらに改善された解像度は、減算技術において参照物質
として、放射標識された精製正常免疫グロブリンを使用
することによって得られる。正常グロブリンはグロブリ
ンの混合物であり、そのあるものは放射性抗体がそれへ
向けられる特異抗原へ結合されることができる。従って
問題のマーカーに対する反応性を除去するため、減算剤
として使用すべき正常グロブリンを精製することが望ま
しく、そのような一精製法は正常免疫グロブリンを好ま
しくは固体吸着剤上の特異抗原で吸着し、抗原と反応す
るグロブリンをカラム上に残し、そして通過する物質は
非特異性減算剤として標識するためにもっと好適となる
であろう。モノクローン性非特異免疫グロブリンまたは
骨髄性タンパン自体は、標識および減算剤として使用の
ために所望の純度をもつであろう。

本発明の減算技術を使用するとき、高い放射活性と高い
特異性とのバランスは、抗体の対応して高いマーカー特
異免疫反応性をもって、放射性標識のいくらか低い程度
の側においてもっと破壊される。再びマーカー特異免疫
反応性が高い程、標識化は高くなるが、抗体性質の有益
なバランスはなお維持される。このように少なくとも70
％、好ましくは少なくとも80％のマーカー特異免疫反応
性と、15％以下、好ましくは10％以下の交差反応性を有
する実質上モノ特異性の抗体は、高度に効果的な位置測
定を許容するように標識後もなお充分な特異性を保有す
る一方、抗体１分子当り2.5、好ましくは５ないし10ヨ
ード原子程度へ、Ｉ−131またはＩ−123で標識すること
ができる。

改良された減算技術を使用しない、しかし好ましくは使
用する本法の使用は、腫瘍位置の連続的、反復的、また
は随時的監視を許容する。これは特に手術前に腫瘍の診
断および期決定との組合せに利益を有する。加えて、こ
の方法はどの程度完全な腫瘍除去が達成されたかの微候
として、手術中または手術後に有用である。転移の場
合、特に小さい拡散転移の増殖が認められた場合、この
方法の高い解像度は術後療法のための標的区域の同定を
許容する。これは本発明の治療方法または他の技術、例
えば化学療法、照射処置もしくは多モード療法を使用し
て実施することができる。

放射性標識したマーカー特異抗体またはフラグメントは
腫瘍治療に有効である。標識された抗体が被検者の腫瘍
部位に局在化されることが決定された後、一般に投与当
り25ないし250mCi,好ましくは50ないし150mCiの標識さ
れた抗体の高投与量が注射される。注射は静脈内、動脈
内、リンパ管内、包膜内、または体腔でよく、そして反
復することができる。

種々の放射性核種が治療のために有用であり、そしてそ
れらは前に論じた標識化技術によって特異抗体中に取り
入れることができる。好ましい治療的に有効な核種はＩ
−131である。

本発明の治療方法は、有利には高度にマーカー特異抗
体、好ましくは少なくとも70％、好ましくは少なくとも
80％のマーカー特異免疫反応性と、15％以下、好ましく
は10％以下の他の抗原に対する交差反応性を有する抗体
を使用する。モノクローン性抗体はそれらの高い特異性
のために好ましい。

放射標識したマーカー特異抗体またはフラグメントを使
用する療法は、他の療法例えば照射および化学療法と組
合せて一次的治療処置として、そして外科手術の補助法
として有利に使用される。外科的に除去できない、また
は検出をのがれることのできる小さい転移がある場合に
は、本発明の放射療法はこれらの腫瘍を発見しそして破
壊する有力な武器を提供する。

抗体フラグメントはしばしばいくらか低い免疫反応性を
持ち、そしてその時低い放射性核種含量で、例えばフラ
グメント１分子当り、例えばＩ−131を0.1ないし1.0原
子で標識するのが有利である。これは治療のため、そし
てもし必要ならば検出のため、Ｉ−131比活性2.5ないし
52Ci/μｇを有するフラグメントを生成させる。

本発明の抗体は注射組成物の形で有利に投与される。一
般的にスクリーニングのため、そして位置測定および治
療の多数のタイプのため、注射は静脈内、動脈内または
包膜内注射であろう。注射し得る抗体溶液は静脈、動脈
または脊髄液中に２分ないし約１時間のコースにわた
り、好ましくは静脈内または動脈内注入のため10分ない
し20分にわたって投与されるであろう。ある場合には、
皮下、粘膜下組織、または体腔内投与が有利である。腫
瘍が既知の接近し得る動脈から供給される場合は、動脈
内投与が治療のために好ましい。動脈内ルートは製剤の
長い注入時間、例えば24時間またはそれ以上を使用し得
る。加えて包膜内投与または頚動脈中へのフラグメント
の注射は脳内に所在する腫瘍に使用することができる。
皮下、粘膜下組織または体腔内投与は皮膚の特定区域お
よび／または特定の体腔へ近い区域に限られた腫瘍に有
益である。

本発明による典型的な注射組成物は、ヒト血清アルブミ
ン34mg（１％米国局方：パークデビス社）と、0.9％NaC
l含有0.04Mリン酸緩衝液（pH7.4,バイオウエア社）１ml
当り放射標識された抗体１ないし500μｇを含有する。
本発明の減算法技術が使用される場合は、特異抗体の重
量にほぼ等しい放射標識した正常イムノグロブリンの量
を含有する。他の慣用の薬剤学的に許容し得る注射用担
体も、包膜内、皮下、粘膜下組織または体腔内注射のた
め、および静脈内または動脈内注射のためのように指示
された場合に使用することができる。

当業者はさらに熟考することなく、前記説明を用いて本
発明をその全範囲に利用することができるものと信ぜら
れる。従って以下の特定の好ましい具体例は単に例示で
あり、開示の残余の部分を限定するものではないと解す
べきである。以下の実施例において、すべての温度は未
補正の摂氏度であり、断わりのない限りすべての部およ
び％は重量による。

これら実施例で使用される抗体は高度に特異性で、そし
て慣用の免疫化の後、補体を不活性し、血球凝固成分を
除去するため吸着し、そして交差反応性抗原および特異
抗原に対してアフィニティー精製して調製するか、また
はハイブリドーマ誘導モノクローン性抗体のどちらかで
ある。

実施例１¹³¹ Ｉ−抗CEA IgG（ヤギ）の調製 (a)CEAはNewman et al，Cancer Res.,34,2125(1974)の
方法により、結腸がんの肝転移から高純度で得られる。

(b)精製CEA乾燥重量0.5mgをメチル化ウシ血清アルブミ
ン（シグマ社）２mgを含む水２mg中に溶解し、CEA溶液
を完全なフロインドアジユバンド（ディフコ社）の等容
積で乳化する。

CEA接種物の等量を健康ヤギの首の別々の２部位に皮下
注射する。注射は２週間置きに最後の注射後14日後に採
集した抗血清のラジオイムノアッセイ（RIA）が抗CEA力
価1:10^６以上を示すまで投与される。

次にヤギから血液を無菌的に採取し、パイロージエンを
含有しない遠心試験管へ移し、そして遠心する。抗CEA
は−20℃で貯蔵する。

ヤギ抗CEAの補体は56℃で１時間インキュベートするこ
とによって不活化し、そしてそれ以上血球凝固活性が検
出できなくなるまで、洗浄レパックしたAB型ヒト赤血球
（RBC）と、血球凝固活性定量から計算した血清/RBC比
で繰り返して混合することにより、抗血液グループを除
去する。吸収した抗CEA血清は次に0.1Mリン酸緩衝液pH
7.0（PO_４）の数容積に対して透析される。

(c)結腸がん抗原III（CCA−III）免疫吸着体は、正常肺
の過塩素酸抽出物の60,000分子量分画を慣用の技術を用
いて臭化シアン活性化セファローズ4B（ファルマシア
社）へ結合させることにより調製される。結合は４℃で
ゆるやかにかきまぜながら一夜進行を許容される。CCA
−III−免疫吸着体は0.05Mホウ酸緩衝液pH8.4で洗浄さ
れ、0.1Mリン酸緩衝液pH8.0中の1M2−アミノエタノール
の４容積中に再懸濁される。スラリーは室温で１時間混
合され、ロ過され、PO_４で洗浄される。

CCA−III免疫吸着体カラムが調製され、10％（V/V）正
常ヤギ血液（ギブコ社）２ml、次いで3Mチオシアン酸ア
ンモニウムの約１カラム容積を前循環し、そして0.1Mリ
ン酸緩衝液pH7.0で再平衝化される。

CCA−III−免疫吸着体は自動クロマトグラフイ−システ
ムへ挿入され、そして全体のシステムが非発熱原性の無
菌PO_４で完全に洗浄される。緩衝液容器はチオシアン酸
アンモニウムおよび透析物を含む容器で取り替えられ
る。

吸着された抗CEA血清はカラムの空隙容積の2/3の容積へ
PO_４で希釈されそしてカラムを通る１サイクル毎に抗血
清の適当量を含有する。この希釈した抗血清の体積はカ
ラム中へ適用され、そして１カラム空隙体積の全容を与
えるのに充分なPO_４で洗浄される。抗血清は室温で20分
間インキュベートすることが許され、次に吸着されない
分画である特異抗CEA血清がカラムからPO_４で溶離され
る。システムは抗CEAF血清の第２の部分標本を適用する
ことにより、自動的に次のサイクルを開始する。サイク
ルの回数は抗血清の全ロットを処理するようにセットさ
れる。

抗CEA血清の部分標本が抗血液のもとの容積へ濃縮さ
れ、そして免疫拡散によって再テストされる。抗血清は
参照CEA、CCA−III製剤、正常ヒト組織抽出物および血
漿に対してテストされる。もし抗血清がCCA−III製剤、
血漿または正常ヒト組織抽出物に陽性反応を有するなら
ば、それはCCA−III免疫吸着体カラムにリサイクルされ
る。

(d)CEA−免疫吸着体カラムは、CCA−III免疫吸着体と同
じ結合操作により、精製CEAを臭化シアン活性化セファ
ローズ4Bへ結合し、前記(C)のようにカラムを調製し、
前循環し、平衝化することによって調製される。

CEA吸着体カラムは自動化されたクロマトグラフィーシ
ステムへ導入され、そして非発熱原性のPO_４で完全に洗
浄される。各サイクル毎に適用すべき抗CEA血液の量は
ラジオイムノアッセイ定量をもとに計算され、抗血清の
サンプルが希釈され、適用され、そしてCCA−III免疫吸
着体カラムと同様にインキュベートされる。すべての非
反応性免疫グロブリンを含んでいる血清タンパクはカラ
ムからPO_４で溶離され、そして吸着されない分画として
採取される。

特異抗CEA IgGは解離されそしてPO_４中3Mチオシアン酸
アンモニウムでカラムから溶離され、そして吸着された
分画として採集される。チオシアン酸アンモニウムの微
量のすべてを除去するため、吸着された分画はPO_４中1M
尿素および10％グリセロールに対し、中空繊維透析ユニ
ット（アミコン社またはビオラッド社）の使用によって
インライン透析にかけられる。特異抗体の解離のための
別法は、混乱剤としてグアニジン塩酸塩と、脱塩のため
セファデックスG25ゲルロ過クロマトグラフィーを使用
する。

吸着された分画は４℃でPM30膜（アミコン社）による限
外ロ過により、ゲルロ過クロマトグラフィーを容易にす
る体積まで濃縮される。例えば抗CEA血清の100mlのロッ
トは約20mlへ濃縮される。濃縮液は50mMリン酸緩衝食塩
水（PBS）pH7.5の100容で４回、各４時間透析される。
抗CEA IgG製剤は無菌のパイロージエン不含血清バイア
ル中へ無菌ロ過される。部品標本がRIAおよび免疫拡散
による品質管理試験のために保存される。

(e)セファクリルＳ−200（ファルマシア社）カラムがゲ
ルを無菌のパイロージエン不含50mM,PBS,pH7.5で５回洗
浄することによって調製される。カラムは180℃で３時
間乾燥滅菌される。使用カラム寸法は抗体のロットサイ
ズに応じて2.6×90cmか、または5.0×90cmである。次に
カラムはカラムの３倍容のPBSで洗浄される。

ヤギ抗CEA IgGのロットはカラムに適用され、そしてPB
Sで6m/cm²／時間の流量において溶離される。IgGタンパ
クを含有する分画がプールされ、そして約５mg IgGタン
パク／ml、に濃縮され、PBSに対して透析され、0.2ミクロンMillex
ユニット（ミリポア社）で無菌ロ過され、そして保存剤
としてアジ化ナトリウムを添加して約５mgIgGタンパク
／mlの１ml部分標本の形で冷蔵される。

(f)¹³¹Ｉの1mCi当り7.2ないし16.8μgIgGのヤギ抗CEA I
gG¹³¹Ｉ（アマーシャム−サール社）を含む放射性核種
バイアル中へ注入する。

クロラミンＴおよびメタ重亜硫酸ナトリウム溶液は、そ
れぞれクロラミンT10mgおよび重亜硫酸塩50mgを含む２
個のバイアルのそれぞれへ、無菌のパイロージエン不含
0.04Mリン酸緩衝液pH7.4の５mlを注入することによって
調製された。クロラミンＴは10μg/mCi¹³¹Ｉの割合で放
射性核種バイアル中へ注入された。クロラミンＴの５倍
量のメタ重亜硫酸ナトリウム溶液は、クロラミンＴの注
入後正確に90秒後にバイアル中へ注入される。混合物は
無菌注射器で反応バイアルから除去され、反応バイアル
は１％正常ヒト血清アルブミンでリンスされ、リンス液
は反応混合物と合併された。¹³¹ Ｉ抗CEA IgGのサンプルが事前にPBS中１％正常ヒト
血清アルブミンで平衝化されたPD−10セファデックスＧ
−25カラムに適用され、PBS中１％正常ヒト血清アルブ
ミン約4.5mlで溶離され、シールドされたガンマ検出器
（Eberline社）でモニターされ、貯蔵および使用のため
採集され、あらかじめ定めた濃度に希釈される。

生成する¹³¹Ｉ−抗CEA IgGは抗体１分子当り平均ヨー素
３ないし７原子を有する。各バッチからの無作為部分標
本が無菌性、発熱原性、毒性およびその他の品質管理変
動について別々にテストされる。

実施例２モノクローン性¹³¹Ｉ−抗CEA IgGの製造雌６月令のBalb/Cマウスに、がん胎児性抗原10ないし10
0μｇを腹腔内注射する。その場合CEAは等容積（10−10
0μｌ）の不完全フロイドアジュバント中に混合され
る。これは１週間後とそして２週間後に繰り返される
が、最後はアジュバントなしで静脈内ルートが用いられ
る。３日ないし４日後、マウスは頚部脱臼により殺され
る。与えられた抗原に対する抗体を得るための最適時期
は、抗原、投与ルート、免疫化のタイミング、それに最
終の増強注射とひ臓細胞除去の間の間隔によって変化す
る。

ひ臓を除去し、そして室温で、血清不含培地か、または
20％ウシ胎児血清を加えたダルベッコの修正イーグル培
地（DMEM）を収容する60mmペトリ皿中に入れ、そして細
胞を分散するためはさみでミンチする。細胞はVortexミ
キサー上で１−２分かきまぜることによりさらに遊離さ
れる。ひ臓細胞は円錐形遠心試験管へ移され、IEC−MS2
遠心機中で1,000rpmにおいてベレット化され、上清が除
去され、ペレットをたたいてほぐし、そして赤血球を溶
解するため10分間冷たい0.1NH_４C15ml中に再懸濁する。
20％ウシ胎児血清添加の冷却したDMEMを加え、そして細
胞をペレット化し、そして再び20％ウシ胎児血清を添加
したDMEM10ml中に懸濁する。

融合のために使用した骨髄腫細胞系統は、高グルコース
（4.5g/l）および20％ウシ胎児血清添加DMEM中の静止懸
濁培養物に、５ないし10％CO_２中、100,000ないし1,00
0,000/mlの細胞濃度において保存される。骨髄腫（形質
細胞腫）細胞系統は、SvastiおよびMilstein．Biochem.
J.,128,427-444(1972)により報告された、MOPC−21から
誘導されたBalb/C形質細胞腫であるP3−X63−Ag8か、Fa
zekas de st．Groth & Scheidegger，Basle Institute
of ImmunolgyによりるFOとして知られるその誘導体か、
またはMargulies et al．Cell．８，405(1976)によって
報告された。MPC−11から誘導されたBalb/C系統である4
5.6TG1.7であることができる。これら系統のすべては酵
素ヒポキサンチンフォスフォリボシルトランスフェラー
ゼ（HPRT;E.C.2.4.2.8）を欠き、そしてそのためLittle
field,Science，145,709,-710(1964)に記載されている
ように、ヒポキサンチン，アミノプテリンおよびチミジ
ンを含有する選択培地中で死滅する。

免疫化した動物から得られるひ臓細胞は、次にGelferet
al，Somatic Cell Ginetic.,3,231-236(1977)の方法の
採用によるポリエチレングリコールを使用することによ
り、形質細胞腫細胞と融合される。例えば30％ポリエチ
レングリコール溶液は、無菌ポリエチレングリコール40
00（メルク社、分子量約4,000）（ポリエチレングリコ
ール0.5g＋ジメチルスルホキシド（DMSO）0.05ml＋蒸留
水0.5ml）と、血清なしのDMEMとを41℃へ加熱し、そし
てポリエチレングリコール３mlを血清なしのDMEM pH7.4
−7.6の７mlと混合することにより調製され、そして使
用まで37℃で保存される。融合は室温で行われる。骨髄
腫細胞（10^６−10^７）は血清を含まない培地で２回洗浄
され、50ml円錐底遠心試験管（ファルコン2070）中のひ
臓細胞１−３×10^７−１−３×10^８と混合される。細胞
は250×ｇで５分間遠心され、そして上清液は注意深く
吸引される。ポリエチレングリコール液の0.2ml量が加
えられ、そして試験管は細胞を再懸濁するため手でゆっ
くりかきまぜられる。次に細胞は250×ｇで３分間、そ
して再度400×ｇで３分間遠心され、そしてさらに３分
間静止状態に保たれる。細胞はポリエチレングリコール
に約８分曝される。その後で約５mlの血清を含まない培
地が試験管へ加えられ、細胞がゆっくり再懸濁され、そ
して250×ｇにおいて５分間遠心することにより再ペレ
ット化される。上清を除去し、そして細胞を血清含有培
地20ml中に再懸濁し、そしてHAT培地がそれへ添加され
るマイクロプレートに移される前に加湿したインキュベ
ーター中37℃で48時間インキュベートされる。その代り
に、細胞は、DMEM,10％NCTC109培地（マイクロバイオロ
ジカル、アソシエイツ社）、20％ウシ胎児血清（ギブコ
社）、２単位ウシインシュリン／ml（シグマ社）、0.45
mMピルベート、1mMオキザロアセテート、および必要に
応じ抗生物質よりなる培地30ml中に直接懸濁されるチミ
ジン（1.6−10^‐５Ｍ）およびヒポキサンチン（１×10
^‐４Ｍ）が添加される。この培地中の細胞は６個のマイ
クロプレートにウエル当り１滴（約50μｌ）で分配され
る。次に日にチミジンとヒポキサンチンを含有し、今回
アミノプテリン（８×10^‐７）を加えた上で規定した培
地の１滴を各ウエルへ加える。上の培地を６ないし７日
後２滴加え、クローンは顕微鏡的に10ないし20日で出現
する。ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（HA
T）は融合直後または後で加えることができる。得られ
る雑種の数の改善は各マイクロウエルへフィーダー層を
加えるときに達成される。こゝではヒト胎児線維芽細胞
が4500rで照射され、そしてこのような細胞1,000〜2,00
0が各ウエルへ融合の前日または融合した細胞へ直接加
えられ、そしてそれらがマイクロウエル中にそのように
分配される。顕微鏡的にクローンが出現した後、培地の
大部分を除去し、そして新しい培地を加えることによっ
て交換される。２回目の培地交換後、培地はそのままに
少なくとも４日間放置され、次に慣用定量法により抗体
活性および特異性のアッセイのために集められる。

150mmプレートまたはローラーボルトから収穫された消
費培養培地から多量の抗体が得られる。培地は中空繊維
濃縮器（アミコン社）によって後で濃縮される。また２
ないし３週間前に約10億のクローンしたハイブリドーマ
細胞を注射された無胸腺（無毛）マウス（nu/nu）の腹
水からも得られる。腹水は各マウスの腹腔を食塩水であ
ふれさせることによって食塩水で希釈され、そして各マ
ウスからの希釈液はプールされる。

モノクローン性抗CEA IgGは、実施例１(f)のようにＩ−
131で放射標識される。¹²³ Ｉ−IgG（ヤギ）の製造正常ヤギ免疫グロブリンＧ（IgG）（マイルス社）を臭
化シアンで結合したCEAに対してアフィニティー精製
し、そしてＩ−131の代りにＩ−123を用い、比放射能の
差に対応して試薬の量を比例的に変更することを除い
て、実施例１(f)の操作を除いてＩ−123で放射標識す
る。標識した抗体の比放射能を例えば100−500μCi/μ
ｇに調節するため担体ヨー素を添加することができる。
添加した担体ヨードの量は、担体当りのヨー素原子の与
えられた数のため、標識した抗体分子の比放射能を決定
するであろう。

実施例４注射し得る組成物の製造以下に示すように無菌のパイロージエン不含溶液が調製
される。

(a)無菌溶液はml当り次の成分を含有する。

(1)ヒト血清アルブミン（HSA）（１％、米局方パークデ
ービス社）34mg (2)0.04Mリン酸緩衝液pH7.4（バイオウエア社） (3)0.9％NaCl (4)実施例１によって製造した¹³¹Ｉ−抗CEAIgG（ヨー素
平均約５原子／分子、比放射能約80μCi/μｇ）実施例１の標識抗体は20μg/mlの濃度において溶液
(1)、(2)および(3)中に貯蔵され、そしてこの溶液を調
製するためリン酸緩衝液（PBS）中１％HSAの等容で希釈
される。

(b)実施例３で調製した¹²³Ｉ−IgGを15.1μg/ml余分に
含有することを除いて(a)部の操作によって無菌溶液が
調製される。比放射能500μCi/μｇの¹²³Ｉ−IgGは10.2
μg/mlの濃度で１％HSAを含むリン酸緩衝液中に貯蔵さ
れる。この溶液の等容を(a)部の操作中のPBS中１％HSA
の代りに使用する。

(c)抗体が実施例２によって製造し、20μg/mlの濃度でP
BS中１％HSAに貯蔵され、そして比較し得る活性を有す
る¹³¹Ｉ−抗CEA IgGであること以外(b)部の操作による
無菌溶液。

実施例５腫瘍位置測定放射性ヨード化した抗CEA IgGの腫瘍の疑いある患者に
投与する。患者はヤギIgGまたは骨髄腫IgGに対するアナ
フィラキシー過敏症に対して事前テストされる。Ｉ−13
1またはＩ−123の甲状腺摂取を阻止するため、ルゴール
液（ピュアパック社）を口から、放射能標識した抗体の
注射１日前から開始して７日間、５滴づつ１日２回投与
する。

位置測定はGoLdenberg et al,N,Eng.J.Med.,298,1384(1
978)の方法により、無菌生理食塩水20ml中実施例４(b)
または４(c)によって製造した¹²³Ｉ−IgGを含有する¹³¹
Ｉ−抗CEA IgGの溶液3.5mlを10分ないし45分を要して注
入することによって実施される。Tc−99m化合物は使用
せず、減算技術は¹³¹Ｉと¹²³Ｉとの間を識別するため慣
用の態様に適応している。抗体の注射完了直後および2,
8,12,24,48および72時間後走査が行われる。

有意な局在化が２時間後に見られ、時間につれて改良さ
れた解像度が得られ、注射後８ないし24時間の間に高原
に達する傾向がある。追加のバックグラウンド¹²³Ｉ−I
gGは添加されない。この方法のCEA選択性は以前のGolde
nberg et al法と比較できるが、しかし解像度、速さお
よび便利さは著しく増強される。

実施例６腫瘍治療場合によって実施例５の操作によって検出され、位置測
定された卵巣がんを有する患者に、無菌生理食塩水50ml
中実施例４(a)の溶液150mCiを静脈内注射により注射す
る。腫瘍サイズの減少を20日以内に観察する。前記投与
量を個人ベースに調節された間隔で繰り返す。

実施例７¹³¹ Ｉ−抗HCG IgG（ヤギ）の製造 (a)HCGに対する抗体（抗HCG）は、Gagshawe，“Method
in Investistigative and Diagnostic Endocliology，p
art III，Peptide Hormones",Bearson et al，Eds.,pag
es 756-763(North Holland,Amsterdam,1978)の方法によ
って製造される。

HCGのβ−サブユニットに対する抗体（抗−HCG−β Ig
G）は、Vaitukaitis et al，Am.J.Obstet．Gynecol.,11
3,751(1972)の方法によって製造される。

(b)前記(a)部において調製した抗体は血清溶液としてさ
らに精製された。操作は抗−HCG IgGおよび抗−HCG−β
IgGについて同一である。

抗−HCG（または抗−HCG−β）血清の補体は56℃で１時
間のインキュベーションにより不活性され、もはや血球
凝固活性が検出されなくなるまで、血球凝固アッセイか
ら計算された血清/RBC比をもって抗血液ABヒトRBCが除
去される。吸着された抗−HCG血清は0.1Mリン酸緩衝液p
H7.0（PO_４）の数倍容に対して透析される。

(c)ヒト尿タンパク（HUP）免疫吸着体が精製したHUPを
臭化シアン活性化セファローズ4Bへ結合することによっ
て調整され、HUP免疫吸着体カラムが調製され、そして
抗−HCG（または抗−HCG−β）が精製され、そして実施
例１(c)の操作に準じてテストされる。

(d)HCG−免疫吸着体カラムが精製したHCGを臭化シアン
活性化したセファローズ4BへHUP免疫吸着体のそれと同
じカップリング操作により結合し、(c)部と同様にカラ
ムを調製し、前循環し、そして平衝化することによって
調製される。

HCG免疫吸着体カラムは自動クロマトグラフィーシステ
ムへ導入され、上記(c)部からの抗HCG血清が実施例１
(d)の操作と同様に精製される。

抗HCG IgG製剤の無菌のパイロージエン不含血清バイア
ル中へ無菌ロ過される。部分標本がRIAおよび免疫拡散
による品質管理テストのために保存される。

(e)セファクリルＳ−200（ファルマシア社）カラムが準
備され、前記(d)部からのヤギ抗HCGIgGのロットが実施
例１の操作と同様に精製され、そしてアジ化ナトリウム
を保存剤として添加して、約５mg IgG/mlの１ml部分標
本として冷蔵される。

(f)¹³¹I mCi当り7.2ないし16.8μｇのヤギ抗HCG IgGが
¹³¹Ｉ（アマーシャム−サール社）を含む核種バイアル
中へ注射され、標識され、そして実施例１(f)の操作と
同様に精製され、貯蔵される。

得られる¹³¹Ｉ−抗HCG IgGまたは¹³¹Ｉ−抗HCG−β Ig
Gは、抗体分子当りヨー素を平均３ないし７原子有す
る。各バッチからの無作為部分標本は無菌性、発熱原
性、毒性およびその他の品質管理変動について別々にテ
ストされる。

実施例８ (a)¹³¹Ｉ−抗AFP IgG（ヤギ）の製造過免疫ヤギ抗血清は、西、Cancer Res.,30,2507(1970)
の方法により精製したヒトAFPの繰り返した皮内注射に
よって精製される。抗血清の特異性は二重ゲル拡散、免
疫電気泳動およびラジオイムノアッセイによって確認さ
れる。免疫電気泳動的に純粋なIgGは、抗血清10mlのDEA
Eセルロースクロマトグラフィーと、次にアミコンPM−3
0膜上の濃縮によって製造され。4.2mg／mlの濃度におい
て、ヤギ抗AFP IgGは終了点として2ngの標識抗体の50％
結合を用いて、ラジオイムノアッセイ力価３×10^５を有
する。

抗体は実施例１(f)の操作と同様に放射標識され、該実
施例記載と同じ様に精製され、貯蔵される。

(b)¹³¹Ｉ−抗CSAp IgG（ヤギ）の製造抗CSAp血清は、氷水下の脱イオン水の５容量（W/V）中
のGW−39ヒト結腸がん外来移植腫瘍を全速度で２分間ポ
リトロンによりホモジナイズすることにより調製され
る。次にホモジネートは48,000×ｇで１時間遠心され
る。透明な上清が免疫原として使用される。免疫原のタ
ンパク含量はロウリー法により測定するとき７mg／mlで
ある。ヤギがヤギの首に皮下投与された、５mlの完全フ
ロイドアジュバンド中に乳化したホモジネート５ml（タ
ンパク35mg）で免疫化される。増強免過は３ないし４週
間隔で続けられる。ヤギは毎月試験採血され、そして血
清が抗体産生についてテストされる。特異抗−CSAp抗体
の製造のため、アフィニティにより、10月目およびその
後の日日における出血が処理される。

抗CSAp抗体は各種の臓器および組織抽出物に対してアフ
ィニティー精製される。ヒト結腸がん、ヒトすい臓およ
び肺、ハムスター肝臓および腎臓の抽出物は、全速度２
分間のポリトロンにより氷水下の脱イオン水５容（W/
V）中につくられる。ホモジネートは48,000×ｇで１時
間遠心される。透明な上清が集められ、凍結乾燥され、
そして臭化シアン法によって抗原をセファローズ4Bへ結
合するのに適当なタンパク濃度を得るように水に再溶解
される。同時に、ヒトおよびハムスター血清がセファロ
ーズ4Bへの結合前にタンパクについて調節される。GW−
39水ホモジネートおよびその48,000g上清は、Goldenber
g et al，Cancer Res.,36,3455(1976)に報告されている
ように、CSA製造のため90％フェノール液で処理され、
そしてセファローズ4Bへ結合される。

アヘィニティー吸着は実施例１(c)ないし(e)の操作と同
様に実施される。粗製ヤギ抗CSAp（４ml）は結腸がん抽
出物を結合したセファローズ4B100mlを収容するカラム
へ適用され、下方へ流下することを許容される。流下液
中にタンパクが出現する時流れを止め、そして抗血清は
免疫吸着体と30分間反応することが許容され、そして次
にゲルが0.1M PO_４,pH7.0緩衝液で洗浄される。溶離さ
れた抗体は直ちにアミコンPM−30膜上で透析され、0.1M
PO_４,pH7.0緩衝液で、次に0.05M PO_４,pH7.0中の1.0M
尿素および10％グリセロールで、そして最終に0.1M PO
_４,pH7.0緩衝液で平衝化される。抗体は次にヒトひ臓、
肺および血清を結合したたセファローズ4B 75mlの混合
物を通過させられる。抗体が免疫吸着体と反応すること
が許容された後、カラムは0.1M PO_４,pH7.0緩衝液で溶
離される。抗体はアミコンPM−30膜上で濃縮され、そし
てハムスター肝臓、腎臓および血清抗原の混合物を含む
免疫吸着体カラム75mlを通過させ、そして前述の態様で
処理される。

最後に抗体はGW−39腫瘍のフェノール抽出物でつくった
免疫吸着体320mlへ適用される。抗体30分間インキュベ
ートした後、カラムは0.1M PO_４,pH7.0緩衝液で溶離さ
れる。抗体は次に濃縮され、そしてアミコンPM−30膜上
で0.05M PO_４,pH7.5緩衝液で平衝化される。このように
して得られるアフィニティー精製された抗体はセファデ
ックスＧ−200（2.5×100cm）カラムに適用され、そし
て0.05M PO_４,pH7.5緩衝液を用いて分画される。IgG分
画はプールされ、アミコンPM−30膜上で濃縮される。抗
CSAp IgGのタンパクは2.8mg／mlに調節され、そして−2
0℃で貯蔵される。

Ｉ−135による放射性ヨー素化は実施例１(f)の操作と同
様に実施され、そして¹³¹Ｉ−抗CSAp IgG核実施例１と
同様に精製され、貯蔵される。

(c)実施例1,7およびこの実施例に類似の操作を使用し
て、CEA,HCG,AFPまたはCSApの代りに、前立腺酸性フォ
スファターゼ、すい臓胎児性腫瘍抗原、胎盤アルカリ性
フォスターゼ、妊婦ベーター１−グロブリン、小皮小体
ホルモン、カルシトニン、組織ポリペプチド抗原、Ｔ−
抗原、ベーター２−マイクログロブリン、ガラクトシル
トランスフェラーゼーII（GT−II）,gp−52ビールス関
連抗原、卵巣のう腫瘍関連抗原（OCAA），卵巣腫瘍特異
抗原（OCA），頚管がん抗原（CA−58,CCA,TA−４），塩
基性胎児性タンパク（BFP），末端デオキシヌクレオチ
ジルトランスフェラーゼ（TdT），細胞質黒色腫関連抗
原，ヒト星状細胞腫関連抗原（HAAA），通常グリオーマ
抗原（CGA），膠芽胎児性抗原（GEA），神経膠原線維酸
性タンパク（GFA），通常髄膜腫抗原（CMA）および腫瘍
脈管形成因子（TAF）のいずれか１種を用い、そして適
当なアフィニティー精製により、これら抗原に対する標
識した抗体が得られる。

実施例９モノクローン性¹³³ 1−抗AFP IgGの製造モノクローン性¹³³ I−抗AFP IgGは、CEAの代りにAFP抗
原を使用することを除いて、実施例２の操作と同様に製
造される。

モノクローン性抗AFP IgGは実施例１(f)の操作と同様に
Ｉ−133で放射標識される。

実施例10¹²³ Ｉ−IgG（ヤギ）の製造正常ヤギIgG（マイルス社）は、臭化シアン結合HCG,AFP
およびCSApに対してアフィニティー精製され、そしてＩ
−123をＩ−131に代え、実施例３のように比放射能の差
を補償するように試薬の比率を変更することを除き、実
施例１(f)の操作と同様にＩ−123で標識される。

実施例11 注射し得る組成物の製造無菌のパイロージエン不含溶液は以下に示すように製造
される。

(a)無菌溶液はml当り以下の成分を含有する。

(1)ヒト血清アルブミン（HSA）（１％，米局方、パーク
デービス社）3.4mg (2)0.04Mリン酸緩衝液、pH7.4（バイオウエア社） (3)0.9％NaCl (4)実施例７によって製造した¹³¹Ｉ−抗HCG IgG（ヤ
ギ）10μｇ（平均ヨー素約５原子／分子、比放射能約80
μCi/μｇ）実施例８の標識抗体は20μg/mlの濃度で(1)、(2)および
(3)の溶液中に貯蔵され、そしてこの溶液を調製するた
めにリン酸緩衝食塩水（PBS）中の１％HSAの等容で希釈
される。

(b)実施例10で製造した¹²³Ｉ−IgGの5.1μg/mlをさらに
含有することを除いて、上記(a)部の操作による無菌溶
液。標識放射能500μCi/μｇにおける¹²³Ｉ−IgGは濃度
10.2μg/mlにおいて１％HSAを含むリン酸緩衝食塩水中
に貯蔵される。この溶液の等容が(a)部の操作におけるP
BS中１％HSAの代りに使用される。

(c)抗体が実施例８(a)により製造され、濃度20μg/mlに
おいてPBS中15HSA中に貯蔵され、そして匹適する比放射
能を有する¹³¹Ｉ−抗AFP IgG（ヤギ）であることを除
き、(b)部の操作による無菌溶液。

(d)実施例９により製造した¹³³Ｉ−抗AFPIgG（モノクロ
ーン性）10μg/mlをさらに含有することを除き、(b)部
の操作による無菌溶液。¹³¹Ｉ−HCG IgG、¹²³Ｉ−IgGお
よび¹³¹Ｉ−抗AFP IgGはそれぞれ最終溶液の所望の比放
射能の３倍の濃度で貯蔵され、そして各溶液の等容が無
菌溶液の調製に使用される。

実施例12 腫瘍位置測定放射性ヨード化した抗体は腫瘍の疑いのある患者に投与
される。患者はヤギIgGに対するアナフイラキシー過敏
症に対して事前テストされる。Ｉ−131またはＩ−123の
甲状腺摂取を阻止するため、ルゴール液（ピュアパック
社）が放射性標識抗体の注射１日前から始まる７日管５
滴づつ毎日２回口から投与される。

(a)位置測定は、Goldenberg et al,N.Eng.J.Med.,298,1
384(1978)の操作により、無菌生理食塩水20ml中実施例1
1(b)によって製造した¹²³Ｉ−IgGを含有する¹³¹Ｉ−抗H
CG IgGの溶液3.5mlを10ないし20分を要して注入するこ
とにより実施される。Tc−99m化合物は使用せず、減算
技術は慣用の態様でＩ−131とＩ−123とを識別するのに
適応している。抗体の注射完了直後2,8,12,24,48および
72時間走査が行われる。

データ解析はフォト操作データをタンピューターに記憶
させ、標識した正常免疫グロブリンの放射能レベルを少
なくとも１つの標的区域における標識抗体のそれと等化
し、各データポイントについて標識抗体に対するパック
グラウンドレベルを計算し、各データポイント毎に標的
に指向した抗体の活性に対する値を発生するため、写真
毎に全抗体活性からえられたバックグラウンド値を減算
し、そして得られる標的指向抗体活性の発生した値を関
連する出力信号を発生させるために使用することを含
む。

有意を局在化が２時間後に見られ、時間とともに解像度
が改善され、注射後８ないし24時間で高原へ達する傾向
がある。追加のバックグラウンド¹²³Ｉ−IgGは加えな
い。この方法はHCG選択性は以前のGoldenberg et alの
方法に匹適するが、しかし解像度、速さおよび便利さは
著しく増強される。

造影はHCGを排泄するこう丸殖細胞腫瘍を持つ患者にお
いて特に成功する。これら患者の２次的骨盤および腹部
腫瘍もまた成功して位置測定され、それらのうちあるも
の、例えば腹部転移はコンピューター化した腹部断層撮
影法、静脈内腎う造影法および下部ビナキアボグラフィ
ーによっては検出困難または不可能である。

(b)抗体が実施例11(c)で製造した¹²³Ｉ−IgGを含有する
溶液中の¹³¹Ｉ−抗AFP IgGであることを除いて、(a)部
の操作を繰り返す。

造影は(a)のそれに匹適し、こう丸および肝臓がんを有
する患者に特に成功である。しばしば高く上昇するAFP
レベルにもかゝわらず、２次的腹部および肺転移がよく
位置測定される。

(c)抗体溶液が実施例11(d)により製造した¹³¹Ｉ−抗HCG
IgG,¹³³Ｉ−抗AFP IgGおよび¹²³Ｉ−IgGの3.5mlである
ことを除き、(a)部の操作が繰り返される。フォト走査
データが慣用手段でＩ−131,I−133およびＩ−123放射
を分離し、標識標的抗体に対するバックグラウンド値を
決定するため等化したＩ−123/I−131およびＩ−123/I
−133比を記憶して使用し、これらを各抗体に対する個
別的標的指向活性を計算するため減算することによって
解析される。

造影は(a)部および(b)部の別々の抗体走査により成功し
て造影されたすべてのタイプの腫瘍に対して成功であ
る。走査の組み合せは多数の場合において、特に胎児性
がんにおいて増強された位置測定および解像度を与え
る。

実施例13 腫瘍治療場合により実施例12(a)の走査によって検出され、位置
測定されたこう丸生殖細胞がんを有する患者に、無菌生
理食塩水50ml中実施例11(a)の溶液150mCiを静注する。
腫瘍の縮小が20日以内に観察される。この投与は個人毎
に調節される間隔を繰り返される。

実施例14 抗体Ｆ（ab′）_２およびFab′フラグメントの製造およ
び標識 (a)リン酸緩衝食塩水中15mg／mlの実施例１で製造した
アフィニティー精製したヤギ抗CEAIgG2mlが、４℃にお
いて24時間、100mM酢酸ナトリウム緩衝液、pH4.0（NaA
c）に対して透析される。抗体溶液はねじ蓋つき試験管
へ移され、37℃へ予熱され、そしてNaAc中３mg／mlのブ
タペプシン（ジグマ社）0.1mlと37℃で16時間インキュ
ベートされる。沈澱を含むダイジェストは100mMリン酸
ナトリウム緩衝液、pH7.5（PO_４）に対して４℃で６時
間透析される。得られる溶液はセファデックスＧ−100
上でPO_４でクロマトグラフされ、Ｆ（ab′）_２フラグメ
ントは２番目のタンパクピークに溶離される。Ｆ（a
b′）_２分画を合し、限外ロ過で濃縮し、50mM PO_４,pH
7.5に対し透析し、そして−20℃で貯蔵する。

(b)ゲルロ過前の(a)部で得られた溶液をサンプルml当り
７μｌの２−メルカプトエタノールで処理し、４℃で0.
5時間一定のかきまぜのもとにインキュベートする。サ
ンプル１ml当り、IMヨードアセタミド0.135mlを加え、
混合物をかきまぜながら４℃で１時間インキュベート
し、遠心して清澄化する。

得られる粗製Fab′フラグメント溶液はセファデックス
Ｇ−100上でゲルロ過され、抗CEAFab′フラグメントは
２番目のタンパクピークに溶離される。ピーク２の分画
がプールされ、限外ロ過により濃縮され、50mM PO_４pH
7.5に対して透析され、−20℃で貯蔵される。

(c)前記(a)部の操作により、抗HCG,抗AFP,抗CSAp,抗CG
A,抗GEA,抗GFA,抗CMAおよび抗HAAAのＦ（ab′）_２フラ
グメントが製造される。

(d)前記(a)および(b)部の操作により、抗HCG,抗AFP,抗C
GA,抗GEA,抗GFA,抗CMAおよび抗HAAAのFab′フラグメン
トが製造される。

(e)¹³¹Ｉ−ImCi当り、前記(a)部または(c)からＦ（a
b′）_２フラグメント4.4ないし10.2μｇ、または前記
(b)または(d)部からのFab′フラグメント2.4ないし5.6
μｇが¹³¹Ｉ（アマーシャムーサール社）を含む放射性
核種バイアル中へ注射され、実施例１(f)の操作と同様
に放射標識される。

得られる¹³¹Ｉ−抗体Ｆ（ab′）_２は、フラグメント当
りヨー素平均３ないし７原子を有する。各バッチからの
無作為部分標本は個々に無菌性、発熱原性、毒性および
その他の品質管理変動についてテストされる。

実施例15 混成フラグメントの製造および標識 (a)NaAc緩衝液pH5.0中15mg／ml溶液の形の、実施例14
(c)で製造した抗CEAおよび抗CSApF（ab′）_２フラグメ
ントの等量混合物がサンプルml当り７μｌの0.01M2−メ
ルカプトエチルアミン塩酸塩溶液で処理され、一定した
かきまぜのもとに37℃で１時間インキュベートされる。
混合物は還元剤を除去するためpH5で40℃においてイオ
ン交換カラム（1R120）を通され、得られる溶液はpH8に
調節され、ゆるやかにかきまぜながらそして酸素を溶液
に通しながら２時間かきまぜる。溶液は次にPO_４に対し
て４℃で６時間透析され、実施例14(a)の最終工程のよ
うにセファデックスＧ−100上PO_４でクロマトグラフさ
れる。

Ｆ（ab′）_２混成フラグメントを含有する分画は２番目
のタンパクピークに溶離される。この分画は臭化シアン
で結合したCEAおよびCSApを含む別々のセファローズ4B
カラム上のアフィニティークロマトグラフィーにかけら
れる。両方のカラムに保持される分画は混乱的に解離さ
れ、セファデックスＧ−100上で再クロマトグラムさ
れ、そして硫安で沈澱し、解離しそしてPO_４に対し透析
することによってさらに精製され、そして抗CEA/CSAp F
（ab′）_２の溶液は−−20℃で貯蔵される。

(b)上記(a)部の操作により、以下の混成Ｆ（ab′）_２フ
ラグメントが製造される。成分Fab′記号はそれらの抗
体源によって示される。

(1)抗AFP/HCG F（ab′）_２ (2)抗CEA/PAP F（ab′）_２ (3)抗CGA/CEA F（ab′）_２ (c)上記(a)部および(b)部で製造したフラグメントはそ
れぞれ実施例１(f)の操作に同様にＩ−131またはＩ−13
3のどちらかで放射標識される。

実施例16 正常IgGフラグメントの製造および標識正常ヤジIgG（マイルス社）が臭化シアン結合されたHC
G,AFP,CSAp,CEA,PAP,GEAおよびCGAに対してアフィニテ
ィー精製され、実施例14の操作によりフラグメント化さ
れ、そしてフラグメントが、Ｉ−123をＩ−131の代りに
使用し、そして実施例３のように比放射能の差を補償す
るため試薬の比例的変更を行うこと以外は実施例１(f)
の操作と同様にＩ−123で放射標識される。

実施例17 注射し得る組成物の製造無菌のパイロージエン不含溶液が以下のように製造され
る。

(a)ml当り、以下の成分の含有する無菌溶液 (1)ヒト血清アルブミン（HSA）（１％，米局方，パーク
デービス社）34mg (2)0.04Mリン酸緩衝液、pH7.4（バイオウエア社） (3)0.9％NaCl (4)実施例14により製造した¹³¹Ｉ−抗CEAF（ab′）
_２（ヤギ）6.1μｇ（ヨー素平均約５原子／分子，比放
射能約125Ci/μｇ実施例14の抗体は24.4μg/mlの濃度で溶液(1)、(2)およ
び(3)中に貯蔵され、この溶液を調製するためリン酸緩
衝食塩水（PBS）中の１％HSAの３容で希釈される。

(b)実施例16で製造した比放射能500μCi/μｇの¹²³Ｉ−
Ｆ（ab′）_２を5.2μg/mlをさらに含有することを除
き、上記(a)部の操作による無菌溶液。¹²³Ｉ−Ｆ（a
b′）_２は濃度20.8μg/mlにおいて１％HSAを含むPBS中
に貯蔵される。この溶液の等容が(a)の操作におけるPBS
中の１％HSAの１容の代りに使用される。

(c)抗体が実施例14により製造され、濃度40.4μg/mlに
おいてPBS中１％HSA中貯蔵され（フラグメント当りヨー
素平均2.5原子）、そして¹³¹Ｉ−抗CEA F（ab′）_２フ
ラグメントの活性の約半分を有する¹³¹Ｉ−抗AFP Fab′
の10.1μg/mlであり、そして¹²³Ｉ−Ｆ（ab′）_２の代
りに¹²³Ｉ−Fab′をＩ−131対Ｉ−123の活性化が実施例
20(b)と同じになるような比放射能において含むこと以
外は、(a)部の操作による無菌溶液。

(d)抗体が実施例14により製造され、24.4μg/mlの濃度
でPBS中１％HSAに貯蔵され、そして匹適する比活性を有
する¹³¹Ｉ−抗CSAp F（ab′）_２であることを除いて、
(b)部の操作による無菌溶液。

(e)抗体が実施例15により製造され、24.4μg/mlの濃度
でPBS中の１％HSAに貯蔵され、そして匹適する比活性を
有する¹³¹Ｉ−抗CEA/CSAp混成Ｆ（ab′）_２であること
を除き、(b)部の操作による無菌溶液。

(f)それぞれ24.4μg/mlの濃度でPBS中の１％HSAに貯蔵
され、そして匹適し得る比活性を有する¹³¹Ｉ−抗AFP F
（ab′）_２および¹³¹Ｉ−抗HCGF（ab′）_２をそれぞれ
6.1μg/mlさらに含むことを除き、(b)部の操作による無
菌溶液。それぞれの等容が(a)部の操作におけるPBS中の
１％HSAの１容の代りに使用される。

(g)実施例15により製造し、20.4μg/mlの濃度でPBS中の
１％HSA中に貯蔵され、そして匹適し得る比活性を有す
る¹³³Ｉ−抗AFP/HCG F（ab′）_２をさらに含むことを除
いて(e)部の操作による無菌溶液。

(h)抗体が実施例15により製造され、24.4μg/mlの濃度
でPBS中の１％HSAに貯蔵され、そして匹適比活性を有す
る¹³¹Ｉ−抗CGA/GEA F（ab′）_２フラグメントであるこ
とを除き、(b)部の操作による無菌溶液。

実施例18 腫瘍位置測定放射性ヨード化した抗体フラグメントは腫瘍の疑いのあ
る患者に投与される。患者は対応するIgGフラグメント
に対するアナフィラキシー過敏症について事前テストさ
れる。Ｉ−131またはＩ−123の甲状腺摂取を阻止するた
め、ルゴール液（ピュアパック社）が放射性標識抗体フ
ラグメントの注射１日前から始める７日間、５滴づつ１
日２回口から投与される。

(a)位置測定はGolderberg et al,N.Eng.J.Med.,1384(19
78)の方法により、無菌生理食塩水20ml中の、実施例17
(b)により製造した¹²³Ｉ−Ｆ（ab′）_２を含む¹³¹Ｉ−
抗CEA F（ab′）_２の溶液3.5mlを10分ないし20分を要し
て注入することにより実施される。Tc−99m化合物は使
用されず、減算技術は慣用態様でＩ−131およびＩ−123
を識別するのに適応している。フラグメントの注射の完
了直後、および2,4,8,12,24,48および78時間後走査が行
われる。

データ解析は、フォト走査データをコンピューターに記
憶させ、標識した正常IgGフラグメントの活性レベルを
少なくとも１つの標的区域における標識した特異フラグ
メントのそれに等化し、そして各データポイントに対し
標識したフラグメントのためのバックグラウンドレベル
値を計算し、得られたバックグラウンド値を全フラグメ
ント活性から減算し、各データポイントに対し標的へ向った
フラグメントの活性のための値を発生させ、そして得ら
れた標的指向フラグメント活性に対する発生させた値を
関連する出力信号を発生するように使用することを含
む。

２時間後に有意な位置測定が見られ、時間とともに改良
された解像度が得られ、注射射後４ないし12時間の間に
高原に達する傾向が見られる。追加のバックグラウンド
¹²³Ｉ−Ｆ（ab′）_２は加えられない。この方法のCEA特
異性は以前のGolderberg et al法に匹適するが、しかし
解像度、速さおよび便利さは著しく増強された。

(b)実施例17(b)の溶液の代りに実施例17(c)の溶液3.5ml
を使用し、上記(a)部の操作が繰り返される。

造影は(a)部に匹適し、こう丸および肝臓がんを有する
患者に特に成功する。２次的肺および腹部転移は、しば
しば高く上昇する血清AFPにもささわらず良好に位置測
定される。

(c)実施例17(b)の溶液の代りに実施例17(d)の溶液3.5ml
を使用し、(a)部の操作が繰り返された。

造影は(a)部のそれに匹敵し、結腸がんを有する患者に
特に成功する。

(d)実施例17(b)の溶液の代りに実施例17(e)の溶液3.5ml
を使用し、(a)部の操作が繰り返される。

胃腸がんの造影は特にシャープで、この実施例の(a)部
および(c)部に匹適する。

(e)実施例17(b)の溶液の代りに実施例17(f)の溶液3.5ml
を使用し、(a)部の操作を繰り返す。

この実施例の(a)、(b)および(c)部で位置測定および検
出に成功したタイプのすべての腫瘍の造影に成功する。
組み合わせ走査は多くの場合、特にこう丸生殖細胞、肝
臓および肺がんに対して増強された位置測定および解像
度を与える。

(f)実施例17(b)の溶液の代りに実施例17(g)の溶液3.5ml
を使用し、(a)部の操作を繰り返す。

造影はこの実施例の(a)ないし(b)部の操作により造影さ
れるすべての腫瘍タイプに対し、この実施例の（ｂ）部
のそれに匹適する。

(g)実施例17(b)の溶液の代りに実施例17(h)の溶液3.5ml
を使用し、(a)部の操作を繰り返す。脳の膠芽腫の造影
に成功し、混成抗体は血液−脳障壁を通過することがで
き、そして脳腫瘍中に集中することを示す。

実施例19 腫瘍治療場合により実施例18の操作により検出され、位置測定さ
れた卵巣がんを有する患者に、無菌生理食塩水50ml中実
施例17(a)の溶液150mCiを静注する。腫瘍サイズの縮小
は20日以内に観察される。該投与は個人ペースで調節さ
れた間隔で繰返される。

実施例20 局在化比の測定本発明の放射標識されたマーカー特異抗体もしくは抗体
フラグメントは、注射組成物として患者へ投与した場
合、標的腫瘍に対して選択的に局在化されることは実施
例12および実施例18による腫瘍位置測定によって確かめ
ることができるが、実験動物を使用する以下の方法によ
って定量的に局在化比を測定することもできる。

無胸腺マウス（Balb/cバックグラウンド上のnu／nu）
へ、放射標識した抗体局在化に適当なタイプのヒトがん
細胞の適当数（例えば２×10^６）を皮下注射で移植す
る。が通常直径0.4〜1.0cmに生育した後、放射標識した
抗体または未分化IgG（２〜80μｇ）が心臓内または腹
腔内注射される。放射性ヨウ素標識が使用される時は、
放射性ヨード化した抗体または未分化IgGの注射前約２
日から始まる実験中、飲用水へ0.1％v/v Nalが補給され
る。１〜５日後（使用する該種に応じて）、マウスをと
殺し、解剖し、腫瘍、内臓、筋肉、骨、血液サンプルお
よび残りの死体を秤量し、ガンマシンチレーションカウ
ンターで放射能を測定する。腫瘍中の放射標識した抗体
の特異的取込みを評価するため、同じまたは異なる種の
未分化IgGまたはネズミモノクローナル抗体の場合は好
ましくはミエローマMOPC−21IgGの同じ量を、異なるカ
テゴリのそして特異抗体を使用するために使用したアイ
ソトープから分離し得るアイソトープで標識し（例えば
抗体をＩ−131で標識しそして未分化IgGをＩ−125で標
識するか、または抗体をＩ−131で標識し未分化IgGをTc
−99mで標識する。）、特異性放射標識抗体製剤と当量
のIgGタンパク量で同時に注射する。器官を秤量し、放
射能を測定した後、結果は特定の参照組織もしくは血液
中のｇ当りの放射能に対する、組織ｇ当りの注射した放
射能の比もしくは腫瘍ｇ当りの放射能の比（腫瘍／非腫
瘍および腫瘍／血液比）として表される。マウスが標識
したIgGと抗体とを同時に注射された時は、局在化比は
各器官について以下の式によって計算される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 45/00 8415−4Ｃ 51/00

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）腫瘍が産生または関連する細胞質細
胞内または細胞表面マーカーに対し特異性であり、薬理
学的に不活性なかつ放射療法的に有効なラジオアイソト
ープの腫瘍減少有効量で放射標識された少なくとも１種
のマーカー特異性抗体もしくは抗体フラグメントと、（ｂ）薬剤学的に許容し得る注射剤担体とを含むことを
特徴とするヒト腫瘍治療用注射組成物。
【請求項２】前記腫瘍マーカーは、細胞表面マーカーで
ある第１項の組成物。
【請求項３】前記腫瘍マーカーは、ガン胎児性抗原であ
る第２項の組成物。
【請求項４】前記腫瘍マーカーは、細胞内マーカーであ
る第１項の組成物。
【請求項５】前記腫瘍マーカーはアルファ胎児タンパ
ク、ヒト絨毛ゴナントロピンもしくはそのベーターサブ
ユニット、または結腸特異抗原−ｐである第４項の組成
物。
【請求項６】前記腫瘍マーカーは、前立腺酸性フォスフ
ァターゼ、すい臓腫瘍胎児性抗原、胎盤アルカリ性フォ
スファターゼ、妊婦ベーター１−グロブリン、上皮小体
ホルモン、カルシトニン、組織ポリペプチド抗体、Ｔ−
抗原、ベーター２−ミクログロブリン、ガラクトシルト
ランスフェラーゼII、gp−52ビールス関連抗原、卵巣の
う腫瘍関連抗原、卵巣腫瘍特異抗原、子宮頚管がん抗原
CA−58、子宮頚管がん抗原CAA、子宮頚管がん抗原TA−
４、塩基性胎児性タンパク、末端デオキシヌクレオチド
トランスフェラーゼ、細胞質黒色腫関連抗原、ヒト星状
細胞腫関連抗原、神経膠原腺維酸性タンパク、通常髄膜
腫抗原、および腫瘍脈管形成因子の１種である第１項の
組成物。
【請求項７】前記抗体フラグメントは、化学的結合の形
で、第１の腫瘍マーカーに対して特異性の少なくとも１
種のマーカー特異性フラグメントと、そして同じもしく
は異なる腫瘍マーカーに対して特異性の少なくとも１種
の第２の異なるマーカー特異性フラグメントを含んでい
る多価混成体である第１項の組成物。
【請求項８】前記抗体フラグメントはモノクロナール抗
体フラグメントである第１項ないし第７項のいずれかの
組成物。
【請求項９】前記ラジオアイソトープはヨウ素もしくは
レニウムのアイソトープである第１項ないし第７項のい
ずれかの組成物。
【請求項１０】前記抗体フラグメントはモノクロナール
抗体フラグメントである第９項の組成物。