JPH03141231A - ヒト腫瘍治療用注射組成物 - Google Patents

ヒト腫瘍治療用注射組成物

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JPH03141231A
JPH03141231A JP1135704A JP13570489A JPH03141231A JP H03141231 A JPH03141231 A JP H03141231A JP 1135704 A JP1135704 A JP 1135704A JP 13570489 A JP13570489 A JP 13570489A JP H03141231 A JPH03141231 A JP H03141231A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 木溌■坐丘量 がん胎児性抗原（ＣＥＡ）に対する放射性標識抗体は腫
瘍の位置測定に使用できることが知られている。ハンセ
ンらの米国特許３，９２７，１９３号はそのような方法
を開示するが、しかしその動物への使用の実施例を提供
するに過ぎない、この特許に記載されている方法は、腫
瘍部位に関連し７だ放射能の精密な識別を妨害し得る放
射能が血液、その他の体液およびある種の組織、特に心
臓および肝臓のような他の体内部位にも存在する状況に
おいて、どのように腫瘍が可視化され得るのか説明して
いない。Ｒｅ１ｆ　ｅｔ　ａｌ、　Ｓｕｒｇ、　０ｎｃ
ｏｌ＋　６＋１３３（１９７４）およびＭａｃｈ　ｅｔ
　ａｌ＋　Ｅｕｒｏｐ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ、　５ｕ
ｐｐｌ。
１、１１３（１９７８）に報告されている初期の臨床的
研究は、放射性抗ＣＥＡ抗体をもってヒトのＭｉｉｊｉ
の位置測定に失敗した。
Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｔ、　　Ｎｅｗ　Ｅｎ
ｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ、
　２９８．１−５８４（１９７Ｂ）はＣＥＡに対する放
射性標識抗体を投与されている患者のシンチレーション
走査によって腫瘍の発見および位置測定の臨床実験に成
功したことを報告した。この文献では、血液プールバッ
クグラウンド放射能から特定の放射性抗体活性を区別す
ることが動物およびヒトの両方の研究において問題であ
り、そして他の放射性核種による特別のスキャナー減法
技術がこの方法を用いるあいまいでない腫瘍位置測定に
必須であると考えられることを記している。この文献に
おいて使用された抗体製剤はＣＢＡと７０％免疫反応性
であった。この文献はさらに正常なノ１ムスター組織中
のＣＥＡの不存在は、該抗原が通常がん患者には増加し
たレベルで循環しており、そしである正常な組織中には
少量した存在しないヒトへ補性を阻害することを記して
いる。このシンチグラフ方法を使用する位置測定を可能
とするために使用される減法技術は、各造影スキャンの
前にＴｅ−９９ｍ過テクネチウム酸塩およびＴｃ−９９
ｍ標識ヒト血清アルブミンの注射を含む。得られたデー
タは標識抗体単独、Ｔｃ−９９ｍ標識種との合計、およ
びこれら各種の値の和および差のデジタルイメージを発
生することができるミニコンピユータに記憶される。
ＣＥＡはＨｉｙｄｅｒｍａｎ、　５ｃａｎｄ、　Ｊ、　
Ｉａ＋ｍｕｎｏ１．＋８．＋５ｕｐｐ１．８．１１９（
１９７Ｂ）およびその他多数によって報告されているよ
うに主として細胞表面抗原である。
５ｐａｒ、　Ｓｅｍ１ｎａｒｓ　Ｉｎ　Ｎｕｃｌ、　Ｍ
ｅｄ、Ｊ、３７９（１９７６）およびＥｍｒｉｃｈ、　
Ｄｅｕｔｓｈｅ　Ｍｅｄ、　Ｗｏｃｈ、　５ｃｈｒ、　
１０４＋１５３（１９７９）により、ヒトの腫瘍位置測
定は腫瘍細胞の表面に存在する抗原に特異性な抗体を必
要とすると考えていた。前出Ｈｅｙｄｅｒｍａｎ、　Ｌ
ｅｅ　ｅｔ　ａｌ、　Ｇｕｉｌｌｏｕｚ。
ｅｔ　ａｌ、　Ａｌｂｒｅｃｈｔｓｅｎ　ｅｔ　ａｌお
よびＲｕｏｓｌａｈｔｔ　ｅｔ　ａｌによるそれぞれ５
ｃａｎｄ、　Ｊ、　Ｉｍｓ＋ｕｎｏ１．．８，５ｕｐｐ
１．８゜ｐｐ、　４８５　ｆｆ、２８９ｆｆ、１６５ｆ
ｆ、３ｆｆの報告により、ヒト絨毛膜ゴナンドトロビン
（ＨＣＧ）およびアルファフェトタンパク（ＡＦＰ）の
両方が細胞質性細胞内腫瘍関連物質であることが知られ
ている。
口ｕｉｎｏｎｅｓ　　ｅｔ　　ａｌ、　　Ｊ、Ｎｕｃｌ
、Ｍｅｄ、＋１２．６９（１９７１）　　はハムスター
に育成させたヒト絨毛膜がんは腫瘍中において動物の肝
臓中に比較して２．８倍の増加した放射性標識抗ＨＣＧ
抗体の摂取を示すことを報告した。しかしながら標識し
た正常１ｇＧによる対照研究は第２日の後注射により同
様の増加した腫瘍摂取を示した。さらに著者は特に第３
日および第４日における組織分析により見られる、標識
正常１ｇＣ，を土建る放射性抗体の摂取量の差は全身写
真スキャニングでは観察されなかったと述べている。平
井らＡｂｓｔｒａｃｔｓ　６ｔｈ　Ｉｎｔ、　Ｒｅｓ、
　Ｇｒｏｕｐｆｏｒ　Ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｏｙｏｎ
ｉｃ　ＰｒｏＬｅｉｎ＋　Ｍａｒｂｅｒｇ／Ｌａｈｎ。
西ドイツは移植したヒトへバトーマを持った、およびラ
ットおよびヒト卵黄のう１ｉｉｉを持つネズミへ放射性
標識抗ＡＦＰを投与すると、腫瘍組織への抗体のホーム
インは見られないことを報告した。
心臓ミオシンへ特異性の抗体の開裂によって得られる放
射性標識フラグメントは、ハーバ−の米国特許第４，０
３６，９４５号において心筋梗塞の位置および寸法の決
定に使用されている。
抗体を用いる放射療法は多数の人により提案され、１例
の多モード治療的臨床使址におけるその成功の徴候が０
ｒｄｅｒ、　Ｒａｄｉｏｌ、　１１８．２１９（１９７
６）に報告されている。治療へのホウ素標識抗体の使用
は）１ａｗＬｈｏｒｎｅ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、　Ｍｅｄ
、　Ｃｈｅａｐ、　１５４４９（１９７２）に報告され
ているが、しかし治療のためホウ素とそして位置測定の
ためラジオアイソトープの組み合わせ使用は示されてい
ない。
前出Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇらによる最近の成功した腫瘍
位置測定および検出方法といえども、その解像力、効率
および実用性を制限するいくつかの欠点を有する。米国
特許第３．９２７．１９３号は、上で論じた後の参考で
は疑問とされなかった制限である、抗ＣＥＡ抗体はその
特異性を妨害する程度まで標識してはならないことを教
える。しかしながらこれはこの方法の解像力を制限し、
そして像検出のために多量の抗体を必要とする。
標識した抗体は非常に大きい分子であり、そして交差反
応性の抗原性定量分を含むことがあり、そのため交差反
応性を１５％以下に減らし、そして７０％より高い特定
抗原に対する特異性を得ることは非常に困難である。Ｇ
ｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｌによって使用された減
算法は、標識特異抗体とは異なる移動および分布動力学
を有する担体へ結合した異なる放射性核種の使用を含む
。加えて、バックグラウンド補償材料は各写真走査毎に
事前に注射されなければならず、これは患者を増大した
レベルの放射能および不快さへ暴露する。先行技術方法
のさらに別の制限は抗体分子が血液−脳障壁を通過でき
ないことであり、これは静脈注射した抗体が頭蓋的腫瘍
の位置測定に使用できないことを意味する。
さらに細胞表面抗原に対する抗体の使用に限定されず、
減算性技術のためバックグラウンド補償材料の反復注射
を必要とせず、診断および治療に適応でき、高度の信顛
性と高い解像力を有し、単−回の注射を使用して理想的
にはｌ！瘍または腫瘍細胞の二基上のタイプを検出し、
そして位置測定することができる腫瘍検出および位置測
定方法に対する需要が存在し続ける。
本見所皇旦ｍ 従って本発明の目的は、バックグラウンド活性のコンピ
ューターを使用した減算法のため他の放射性物質の反復
注射の必要なしに、高い解像度が得られるｌｉ！瘍位置
測定および、検出方法を提供することである。
本発明の他の目的は、高い特異活性およびＣＥＡに対す
る高い特異性を有し、それによりシンチグラフ法による
腫瘍位置測定および検出方法の解像度を改善する腫瘍検
出および位置測定用抗体を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、高い解像度が得られ、そし
て細胞内腫瘍関連マーカー物質を使用する腫瘍位置測定
および検出方法を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、高い特異活性および高い腫
瘍マーカーに対する特異性を有し、それによりシンチグ
ラフ法による腫瘍位置測定および検出方法の解像を改善
する腫瘍検出および位置測定用抗体フラグメントを提供
することである。
本発明のなお他の目的は、腫瘍関連抗原またはマーカー
の２タイプ以上に対する特異性を有するフラグメントを
化学的組合せにおいて含有する多価抗体フラグメントを
提供することである。
本発明の他の目的は、放射線治療的に有効なラジオアイ
ソトープがそれがＵＳ関連マーカーに高度に特異性の抗
体もしくは抗体フラグメントへ結合することによって腫
瘍生育部位へ集中される腫瘍放射線療法を提供すること
である。
本発明のさらに別の目的は、結合したラジオアイソトー
プ標識の検出によって位置測定されたホウ素−１０アイ
ソト一プ含有抗体もしくは抗体フラグメントが熱中性子
によって励起される腫瘍治療方法を提供することである
。
本明細書および開基の範囲をさらに検討するとき、当業
者には本発明のその他の目的および利益が明らかになる
であろう。
木光朋ｐ貞Ｉ− 前記の諸口的は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）を産生ずる
かまたはそれに関連する腫瘍の位置を決定する方法であ
って、ＣＥＡに特異であり、そして写真走査装置を使用
して検出しｌる薬理学的に不活性なラジオアイソトープ
で標識した抗体を被検者に被経口的に注射することと、
そして前記腫瘍による前記抗体の発生する摂取の位置を
決定するように前記装置によりその後被検者を走査する
ことよりなる前記方法において、前記特異抗体の製造に
使用された種と同一または異なる種からの正常免疫グロ
ブリンを前記被検者に同時に注射することよりなり、前
記免疫グロブリンは前記特異抗体を標識するために使用
した同じ元素の異なるラジオアイソトープで放射標識さ
れそして前記写真走査装置を使用して独自検知可能なエ
ネルギーにおいて放射するものであり、標識した正常免
疫グロブリンは目標を指向しない特異抗体によるバック
グラウンド活性の分布を測定するために使用され、前記
分布は特異抗体の全活性より減算されそれにより実質上
目標を指向した腫瘍関連抗体だけの活性が測定されるこ
とよりなる改良の提供によって達成される。
本発明はさらに、前記抗ＣＥＡ抗体として標識前のＣＥ
Ａ−特異免疫反応性を少なくとも７０％、および他の抗
体に対する交差反応性を１５％以下有する実質上単一特
異性抗体であって、そのＣＥＡ特異免疫反応性を５ない
し３３％減少するに充分な程度に放射標識した該抗体を
使用することを含む前記−船方法の改良を提供する。
加えて、本発明は、細胞内マーカー物質を産性するかま
たはそれに関連する腫瘍の検出および位置測定方法であ
って、前記マーカー物質に特異性でそして写真走査装置
を使用して検出し得る薬理学的に不活性なラジオアイソ
トープによって標識した抗体を被検者に非経口的に注射
し、そしてその後前記腫瘍による前記標識抗体の摂取部
位を検出し位置測定するため前記装置により前記被検者
を走査することよりなる前記方法を提供する。
細胞質、細胞内または細胞表面マーカー物質を産生しま
たはそれに関連するｍｉを検出し、そして位置測定する
方法であって、前記マーカー物質に特異性な抗体の開裂
によって得られ、そして写真走査装置を使用して検出し
得る薬理学的に不活性なラジオアイソトープによって標
識した少なくとも１種のマーカー特異フラグメントを被
検者に非経口的に注射し、そしてその後前記Ｉｌ！瘍に
よる前記標識抗体フラグメントの摂取部位を検出し位置
測定するため前記装置により前記被検者を走査すること
よりなる前記方法が提供される。
本発明はまた少なくとも１種の細胞質、細胞内または細
胞表面マーカー物質を産生または関連する少なくとも１
タイプの腫瘍の検出および位置測定方法であって、第１
の腫瘍関連マーカーに対し特異性の抗体の開裂によって
得られる少なくとも１種のマーカー特異フラグメントと
、そして同一または異なる腫瘍関連マーカーに対し特異
性の抗体の開裂によって得られる少なくとも第２の異な
るマーカー特異フラグメントとを化学的組合せにおいて
含有する多価ハイブリッドにして、写真走査装置を使用
して検出し得る薬理学的に不活性なラジオアイソトープ
で放射標識した該ハイブリッドを被検者に非経口的に注
射することと、そしてその後前記少なくとも１タイプの
腫瘍による前記標識ハイブリッドの摂取の部位を前記装
置により検出し、位置測定するため被検者を走査するこ
とよりなる前記方法を提供する。
前記方法に使用するために好適な抗体および注射し得る
組成物と、そして放射能標識したマーカー特異性腫瘍関
連抗体または抗体フラグメントが提供される。
用貴星ｌ論 本発明に使用される抗体は各種の腫瘍関連抗原またはマ
ーカー物質に特異性であり、他方本発明方法に使用され
るマーカー特異抗体フラグメントはそのような特異抗体
の開裂によって製造される。
該マーカーは、腫瘍によって産生される物質、細胞質内
であれ、核内であれ、各種の機能質的であれ腫瘍細胞内
に蓄積する物質、または腫瘍細胞の上もしくはまわりに
蓄積する物質でよい。それらは細胞内または細胞表面ま
たは細胞質マーカーでよい。このような腫瘍関連マーカ
ーのうちには、Ｈｅｂｅｒｎ＋ａｍによる。”Ｔｍｍｕ
ｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ”。
Ｆｌｅｉｓｈｅｒ　Ｅｄ、および“Ｔｈｅ　Ｃ１１ｎｉ
ｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｓ＋１ｓｔｒｙｏｆ　−Ｃａｎｃ
ｅｒ’、　　ｐａＢｅ　３４７　　（Ａｍ、　　Ａｓ５
ｎ、てｆｉｎ、　　Ｃｈｅｗ。
１９７９）　、およびｌｌ４ｏ１ｔｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ
の米Ｍ許第４．１５０゜１４９に記載のものがある。
腫瘍関連マーカーは前出Ｈｅｒｂｅｒｍａｎにより、腫
瘍胎児抗原、胎盤抗原、腫瘍形成または腫瘍ビールス関
連抗原、組織関連抗原、臓器関連抗原、透析ホルモンお
よび通常の抗原またはその変種を含む多数のカテゴリー
に分類されている。しばしば腫瘍関連マーカーのサブユ
ニットが高い腫瘍特異性を有する抗体を上昇させるため
に有利に使用される。例えばヒト絨毛ゴナンドトロピン
（ＨＣＧ）のベータ−サブユニットは、非腫瘍物質への
大きく減少された交差反応性を有する抗体の産生を促進
する。本発明において有用な、それに対する特異抗体を
上昇させ得るこのような好適なマーカーは、これらに限
定されるものではないが、アルファ胎児タンパク（ＡＦ
Ｐ）、ヒト絨毛ゴナントロピン（ＨＣＧ）およびそのベ
ータ−サブユニット、結腸特異抗原−ｐ　（Ｃ３Ａｐ）
　、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）　、前立腺酸性フォスフ
ァターゼ、すい臓腫瘍胎児性抗原、胎盤アルカリ性フォ
スファターゼ、妊婦ベータ−１−グロブリン、上皮小体
ホルモン、カルシトニン、組織ポリペプチド抗原、Ｔ−
抗原、ベータ−２−ミクログロブリン、乳房１１ｆｆｌ
瘍関連糖タンパク（ＭＴＧＰ）、ガラクイジルトランス
フェラーゼ−ＩＩ　（ＧＴ−ｎ）、ｇｐ−５２ビールス
関連抗原、卵巣のう腫がん関連抗原（ＯＣＡＡ）　、乾
燥腫瘍特異抗原（ＯＣＡ）　、子宮頚管がん抗原（ＣＡ
−５８、ＣＣＡ、、ＴＡ−４）。
塩基性胎児性タンパク（ＢＦＰ）、末端デオキシヌクレ
オチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）。
細胞質黒色腫関連抗原、ヒト星状細胞腫関連抗原（ＨＡ
ＡＡ）、通常グリオーマ抗原（ＣＧＡ）。
膠芽胎児性抗原（ＧＥＡ）、神経謬原腺維酸性タンパク
（ＧＦＡ）、通常髄膜腫抗原（ＣＭＡ）。
および腫瘍脈管形成因子（ＴＡＦ）を含む。
マーカー特異抗体はこの分野でよく知られた慣用方法に
よって製造することができる。通常動物、好ましくはネ
ズミ、ウサギ、さらに好ましくはヤギまたは霊長類に腫
瘍関連マーカー物質を挑戦さ廿、それに対しその免疫系
をこれらマーカーに特異性の抗体を産生ずることによっ
て反応させる。
動物を出血させ、血液の免疫グロブリン分画を単離し、
そして好ましくは１回または２回以上のアフィニティー
クロマトグラフィーを含む各種の慣用分離技術により特
異性免疫グロブリンを単離する。ｌｌ１ａｉｔ関連マー
カー物質に特異な抗体を上昇させるための好適なこのよ
うな一般法は、特に“１ｍ＋＊ｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉ
ｓ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　、　Ｈｅｒｂｅｒｓａｎ　ｅ
ｔ　ａｌＥｄｓ、　（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、　
Ｉｎｃ、、　Ｎｅｗ’ｔｏｒｋ　ａｎｄ　Ｂａ５ｅｌ。
１９７９）および“Ｔｒｔａｏｒ　Ｍａｒｋｅｒｓ″、
　Ｓｅｔ　Ｉ、　Ｂｄ、　（ＨｕｍａｎａＰｅｒｓｓ、
　Ｃ１１ｆｔｏｎ、　Ｎ、Ｊ、　１９８）に記載されて
いる。
ＣＥＡ特異抗体は、とりわけＰｒ１ｓｕｓ　ｅｔ　ａｌ
、　Ｊ。
Ｉａ＋ｍｕｎｏ１．１１８．５５（１９７７）；　Ｇｏ
ｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｌ、５ｕｐｒａ；Ｐｒｉｍ
ｕｓ　ｅｔ　ａｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、３７．
１５４４（１９７７）；Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　
ａｌｌ″Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｃａ
ｎｃｅｒ。
Ｐａｒｔ　Ｉ”、　Ｈｅｒｂｅｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、　
Ｅｄｓ、、ｐａｇｅｓ　２６５−３０６（ＭａｒｃｅＩ
　Ｄｅｋｋｅｒ、　Ｉｎｃ、、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　＆　
ｅａｓｅｌ、　１９７９）に報告されている当分野で公
知の各種の方法で製造することができる。
前記の慣用技術によって製造した抗体は通常抗体の混合
物であり、その一定割合が特異性であるが、しかし一般
に非ＭｆｆｉＪＲ関連または他の抗原に交差反応性の抗
体を可変割合で含有している。抗体混合物のいくつかの
成分がそれに対し交差反応性である結合抗原を使用する
繰り返しアフィニティークロマトグラフィーおよび結合
した精製抗原を含むカラムの通過によって精製した抗体
は、高い特異免疫反応性を有し、しばしば７０％近くま
たはそれ以−ヒヘ達し２、そして非腫瘍関連抗原または
他の抗原に対する交差反応性が１５％以下となる。
これら抗体はそれらが上昇された抗原に対して実質上モ
ノ特異性であると考えられ、そｊ７て本発明において好
適に使用される。
腫瘍位置測定のため、高いマーカー特異免疫反応性を有
する抗体を使用することは特に有利である。高い特異性
は、標識抗体の高割合が腫瘍部位を標的とし、小割合が
非標的態様で分布されることを意味する。それ故標識抗
体の少量を使用することができ、患者の被ｌ！ＩＩを減
らし、そして標的へ向わない抗体によるバックグラウン
ド放射の低いレベルは解像度を改善するであろう。この
ことはさらに他のどの方法でもしばしば困難または不可
能であるより小さい腫瘍を検出し得ることを意味する。
高度に特異なモノクローン性抗体は雑種形成技術によっ
て製造すみことができる。このような抗体は通常精製を
殆んどまたは全く必要とせず、ぞして通常少な（とも７
５％の特異免疫反応性を持ち、ある場合には９５％以上
の特異性を有する。このようなモノクローン性のハイブ
リドーマ誘導抗体もまた本発明において使用するのに好
適である。好適な具体例において、モノクローン性抗体
は、サルに精製した腫瘍関連マーカーを挑戦させ、抗体
産生サルリンパもしくはひ臓細胞をヒトもし７くはマウ
ス骨髄腫細胞と融合して雑種細胞をつくり、次にこれを
分離し、クローン化し、前記マーカー物質に特異なモノ
クローン性抗体を生成するそれらの能力について選定す
る。
免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分画からのモノクローン性
抗体はこの方法で得られ、そして本発明による腫瘍検出
、位置測定および治療のため使用されるフラグメントを
製造するために使用される。
Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉの米国特許第４，１７２，１２４号
のＩｇＭ七ツクツクローン性抗体の方法に使用するため
に適していない。
抗体フラグメントはＦ　（ａｂ’　）ｚと呼ばれる５Ｓ
フラグメントを与えるように抗体をペプシンで酵素分解
することによって製造し得ることが知られている。この
フラグメントはさらにチオール還元側と、場合によって
ジサルファイド結合の開裂から生ずるスルフヒドリル基
のブロッキング基を使用して開裂し、３，５Ｓ　　Ｆａ
ｂ’　　１価フラグメントを生成させることができる。
その代りに、パパインを使用する酵素分解は直接２個の
１価Ｆａｂフラグメントおよび１個のＦｃフラグメント
を生成する。これらの方法は特に米国特許第４゜０３６
．９４５号およびその引用文献に、そしてＮ１５ｏｎｏ
ｆｆｅＬ　ａｌ、　Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｔ＋ｅｍ、　
Ｂｆｐｈｙｓ、＋　８９，３２０（１９６０）；）’ｏ
ｒｔｅｒ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｊ、、　７３，１１９（１
９５９）；　Ｅｄｅｌｍａｎ　ｅｔａｌ　　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏ５ｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕ
ｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。
Ｖｏｌ、　１，４２２（Ａｃａｄ、　Ｐｒｅｓｓ、　１
９６７）に記載されている。
抗体を開裂する他の方法、例えばＦａｂフラグメントの
それ以上の開裂または他の酵素もしくは化学的手法の使
用も使用することができる。それらの親杭体がそれに対
して上昇された腫瘍関連マーカーに対して特異性を保持
しているフラグメントだけがこの方法に使用される。
混成抗体フラグメントは異なる抗体の還元的開裂から生
ずるＦａｂ’　フラグメントの酸化的結合によって製造
された。これらの一部分はもとの抗体がそれに対して上
昇された抗原の両方へ特異性のフラグメントを含有する
であろう。これは二つの異なる抗体のペプシン分解によ
って製造された二つの異なるＦ（ａｂ’）、フラグメン
トを混合し、Ｆａｂ“フラグメントの混合物を生成する
ように還元的に開裂し、次にもとの抗原のそれぞれへ特
異なＦａｂ”部分を含む混成フラグメントを含むＦ　（
ａｂ’　）！フラグメント混合物を生成するように酸化
してジサルファイド結合を再生成させることによって有
利に実施することができる。
このように混成抗体フラグメントの製造法は、Ｆｅｔｅ
ａｎｕ、　”Ｌａｂｅｌｅｄ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　
ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ　　ｐ
ａｇｅｓ　３２１−３２３（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ　
Ｉｎｔ、　Ｂｋ。
Ｃｏ、、　Ｎｏｗ　Ｙｏｒｋ　ｅｔ　ａｌ、　１９７Ｂ
）；　Ｎ１５ｏｎｏｆｆ　ｅｔ　ａｌ。
八ｒｃｈ、　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　Ｂｉｏｐｈｙｓ、
、９３，４７０（１９６１）；）ｌａｍｍｅｒｌｉｎｇ
ｅｔ　ａｔ、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、１２８１４
６１（１９６Ｂ）に記載されている。
以下の議論において、「抗体」なる語は断わりのない限
りこれまで記載したような抗体および抗体フラグメント
を包含する。
抗体は当分野で公知のいくつかの手法のいずれによって
も標識することができる。標識技術の広い範囲がＦｅｔ
ｅａｎｕ、”Ｌａｂｅｌｅｄ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　
ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　　、
　ｐａｇｅｓ　２１４−３０９（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌ
ｌ　Ｉｎｔ。
口ｏｏｋ　Ｃｏ、、　Ｎｅｗ　’ｆｏｒｋ　ｅｔ　ａｌ
、　１９７８）に記載されている種々の金属ラジオアイ
ソトープの導入は、Ｗａｎｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ
、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、、　２０＋４２８（１９７９
）。
５ｕｎｄｂｅｒｙ　ｅｔ　ａｔ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃ
ｈｅ＋ｉ、、１７．１３０４（１９７４）；５ａｈａ　
ｅＬ　ａｌ、　Ｊ、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、、６．５４
２（１９７６）の方法によって達成することができる。
以−上に当分野で公知のタンパクを放射標識するたｂの
多数の方法の数例に過ぎない。
使用するラジオアイソトープのうち、ガンマ放射体、陽
電子放射体、Ｘ線放射体、および螢光発光体が位置測定
および／または治療用に好適であり、一方ベータ−放射
体およびアルファ放射体も治療に使用することができる
。抗体を標識するため好適なラジオアイソトープはヨウ
素−１３１゜ヨー素−１２３．ヨー素１２６．ヨー素１
３３゜臭素−７７，インジウム−１１１，インジウム−
１１５ｍ、ガリウム−６７、ガリウム−６８，ルテニウ
ム−９５，ルテニウム−９７，ルテニウム−１０３，ル
テニウム−１０５，水銀−１９７゜水銀−２０３，、レ
ニウム−９９ｍ、レニウム−１０５、レニウム−１０１
，テルル−１２１ｍ、テルル−１１２ｍ、テルル−１２
３ｍ、ツリウム−１６５、ツリウム−１６７、ツリウム
−１６８゜テクネチウム−９９ｍ、およびフッ素−１８
を含む。ハロゲン標識抗体もしくはフラグメントおよび
／または正常免疫グロブリンもしくは対応するフラグメ
ントは、実質上同一の運動性および分布と、そして類似
の代謝を持つであろうから、ハロゲンは標識として多か
れ少なかれ互換性を持って使用することができる。
抗体標識のために好適な技術は、Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ　
ｅｔａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、８９，１１４（
１９６３）によって報告され、ＭｃＣｏｎａｈｅｙ　　
ｅ、Ｌ　　ａｌ、　　Ｉｎｔ、　　八ｒｃｈ、　　Ａｌ
ｌｅｒｇｙ　　Ａｐｐｌｎ。
ＩＩＩＩｍｕｎｏｌ、、　２９．１８５（１９６９）に
よって修正されたように、放射性ヨー化カリウムまたは
ナトリウムと抗体との混合物をクロラミン−Ｔで処理す
る酸化法を用いて、ヨー素−１３１（Ｉ−１３１）また
はヨー素−１２３（＋−１２５）で標識することを含む
。これは試薬の割合および反応条件に依存して、抗体分
子上の、恐らくチロシン残基上の、多分トリプトファン
およびフェニルアラニン残基上の水素原子をヨー素原子
で直接置換する結果を生ずる。
一般に、抗体へその免疫特異性を破壊することなくでき
るだけ高い割合の放射性標識を導入するのが望ましい。
非常に多数の研究者は抗体１分子当すョー素原子１．５
ないし２個以上の直接置換による投入は不利であると考
えていたが、今や抗体１分子光リョー素を少なくとも２
．５および好ましくは平均５ないし１０原子直接置換し
て導入することは、特に抗体が標識前高度にマーカー特
異性である場合有利であることが判明した。この場合、
高度の標識化の結果として５ないし３３％の抗体特異性
の低下さえも高い活性の方が上廻り、実質上より少量の
標識抗体の使用を許容する。前記したように、高活性の
高い特異性抗体の使用は効率的な位置測定および増大し
た解像性を結果する。
この増加した活性と減少した特異性とのバランスは抗体
１分子当り平均ヨー素１０原子まで有利で、その後は特
異性の減少が高活性の利益を上廻る。
放射性標識を導入するための他の方法を使用することに
より、減少した免疫特異性に受容できない価格を支払う
ことなしに抗体フラグメントに対する標識の割合をさら
に増加することが可能であろう。それ以上の改良は、抗
体上の抗原結合部位が保護されることを確実にするため
、放射性標識化を特異抗原の存在下において実施するこ
とによって達成することができる。該抗原は標識化後分
離される。
２価混成抗体フラグメントの実例、例えば２つの異なる
Ｉ！ｆｆ！瘍特異抗体のそれぞれがらＦａｂ’　フラグ
メントの化学的結合によって得られるＦ（ａｂ′）、抗
体フラグメントを以下に示す。表１は、２検出および治
療の両方に対しそれらが有利に使用される好適なそのよ
うな２価混成体および！Ｉ！ｆ！瘍タイプの例示リスト
を与える。１番目のカラムは混成体の二つのＦａｂ’成
分がそれに対して特異性である二つの抗原を示し、各混
成体はそれぞれの抗原性決定因子に対し特異性の−っの
フラグメントを存する。いくつかの場合において抗体は
特異性を増加させるため腫瘍関連抗原のより小さいフラ
グメントに対して上昇されるであろう。例えばＨＣＧの
ベータ−サブユニットに対して−Ｆ昇された抗体はＨＣ
Ｇ自体に対して上昇させた抗原より好ましい。２番目の
カラムは各ハイブリッドタイプを優先的に濃縮するＩ！
１５２％タイＹを示す。
ＣＥ　Ａ　／　ＣＳ　Ａ　ｐ ＣＥＡ／ＰＯＡ ＣＥＡ／ＨＣＧ ＣＥＡ／ＡＦＰ ＣＥＡ／ＴＡｒ’ ＣＥＡ／フェリチン ＣＥＡ／カルシトニン ＣＥ、Ａ／ＰＡＰ ＣＥＡ／上皮小体ホルモ ）ＩＣＧ／ＰＢＧ ＣＧＡ／ＧＥＡ ＧＦＡ／ＣＭＡ 凡例： ＥＡ 胃腸例えば結腸、こう門、胃 すい臓、肺 肺２卵巣、胃腸 肝臓、胃腸、卵巣、こう丸 大部分 がん胎児性抗原 固形、造血、肝臓 甲状腺 前立腺 ン　　　上皮小体、肺 顆粒性原形質 脳 脳 ＳＡｐ ＯＡ ＦＰ ＰＡ ＡＰ ＢＧ ＧＡ ＥＡ ＦＡ ＭＡ 結腸特異抗原−ｐ すい臓腫瘍胎児性抗原 アルファ胎児性タンパク 組織ペプチド抗原 前立腺酸性フォスファターゼ 妊婦ベータ−１−グロブリン 通常グリオーマ抗原 膠芽胎児性抗原 神経謬原腺維酸性タンパク 通常髄膜腫抗原 表１に示したような混成フラグメントは多数腫瘍タイプ
または細胞の検出および位置測定のため単一ラジオアイ
ソトープで標識するが、または治療のため単数もしくは
複数のラジオアイソトープで標識することができる。さ
らにこのような混成体は検出のためあるラジオアイソト
ープで、そして治療のため１種またはそれ以上のアイソ
トープで、例えばあるラジオアイソトープおよび／また
はホウ素含有フラグメントで標識することができ、その
ため位置測定された腫瘍は以下記載の態様で熱中性子で
照射されることができる。
より小さいマーカー特異性フラグメントを生成するよう
に抗体からＦｃフラグメントを除去することは、フラグ
メントの移動度およびその血液−脳障壁通過能力を容易
にするより小さい分子量を有する分子を生成するという
利益を有する。加えて、Ｆｃフラグメントは抗体の主な
過アレルゲン性および非特異的結合の大部分に責任があ
る。従ってその開裂は抗体の注射、特に多数の腫瘍の造
影または腫瘍放射線療法のための反復注射に対するアレ
ルギー反応の危険を減らす。抗体フラグメントの運動性
は全天然免疫グロブリンよりももっと速く、そして腫瘍
にもっと特異的に結合するので、減算性技術は省略する
か、または特定の状況で使用するため修正することがで
きる。加えて、特定の動脈によって供給された腫瘍への
標識した検知剤のもっと直接的な動脈内適用のための標
識抗体の使用は、Ｉ！ｆ！瘍検出および腫瘍放射線療法
の両方のため、このプロセスの重要な機会を提供する。
ＩＩ！Ｉ！瘍位置測定位置測定よび治療のための単一製
剤に標識抗体フラグメントの混合物を使用することがで
きる。該混合物は、位置測定および解像度を向上させる
た、め同一腫瘍タイプに関連する異なる抗原に特異なフ
ラグメントを使用することができる。この代りに広い腫
瘍特異性を有するフラグメントの混合物を使用して、種
々の腫瘍タイプの広範囲スクリーニングを実施すること
ができる。
混成フラグメントの使用に同様に、同一もしくは異なる
腫瘍または腫瘍細胞タイプに関連する抗原に対し特異な
標識抗体の混合物を使用してもよい。
これはある場合に検出、位置測定および／または治療を
向上させることができ、そしてまた２種以上の腫瘍また
は腫瘍細胞タイプについての広いスクリーンの範囲を増
加することができる。
放射性標識特異抗体の投与後２４時間後においてのみ通
常腫瘍位置測定を可能とする以前公知の方法とは対照的
に、この改良された減算技術は、放射性標識特異抗体お
よび放射性標識正常免疫グロブリンの同時投与後２４時
間以内に腫瘍検出および位置測定を可能とする。腫瘍（
を置測定は、抗体／免疫グロブリン対の注射後２１奈間
で、投与後６．１２．１８および２４時間において改良
された解像度をもって達成することができる。抗体フラ
グメントは大変速く組織中に拡散しそして一層速く局在
化されるので、腫瘍検出および位置測定は標識フラグメ
ントの注射後短時間で達成することができる。
血液プールまたは間質性体液中に標識フラグメントまた
はそれらの代謝物が蓄積することによる放射能は、腫瘍
関連マーカーへ特異性の標識抗体フラグメントを使用す
る腫瘍位置測定の解像度を著しく減少させることがあり
得る。そのような場合には、フォト走査前に被検者へ参
照物質を注射するのが有利である。参照物質はマーカー
特異抗体フラグメント標識と異なるエネルギーで放射し
、そしてフォト走査装置で独立に検出し得るラジオアイ
ソトープで放射標識される。参照物質の活性のレベルは
非標的指向特異抗体フラグメントによるバックグラウン
ド活性の測定に使用され、このバックグラウンド活性は
次に特異抗体の全活性から減算され、実質上標的指向腫
瘍関連抗体のみの活性の測定を許容する。
Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｌ、　Ｎ、　Ｅｎｇ、
　Ｊ、　Ｍｅｄ、、　２９８＋　１−５８４　（１９７
８）に報告された成功したヒトがんの非侵入的ラジオ免
疫検知法においては、減算技術が成功的位置測定のため
に必要であることを示した。
しかしながら使用された減算技術は本発明のそれと実質
的に相違する。参照方法では、放射性ヨード化した抗Ｃ
ＥＡ抗体が注射され、そしてテクネチチウムー９９ｍ標
識ヒト血清アルブミンおよび過テクネチウム酸テクネチ
ウム−９９ｍが各造影走査前に静注された。像はガンマ
シンチレーションカメラで得られ、得られたデータはミ
ニコンピユータ−に記憶される。非標的区域におけるＴ
ｃ−９９活性に対するｌ−１３１活性の比はバックグラ
ウンド非局在抗体活性のための比較標準を与えた。これ
は他の位置における非標的指向特異抗体活性の測定を許
容し、これは全特異抗体活性から減算され、局在化され
た標的指向抗体の活性値が得られた。
本発明は適当な参照物質のうちで、Ｔｃ−９９ｍ＋５識
正常免疫グロブリンＧまたはそのフラグメントおよびＴ
ｃ−９９ｍａｌ！！ｆイオウコロイドの使用を含む。し
かしながら好ましくは参照物質は、対応する正常な無関
係な免疫グロブリンＧＣｒｇＧ）か、または腫瘍位置測
定剤として使用した特異抗体フラグメントを製造するた
めに使用したものと同一もしくは異なる種からの対応す
るフラグメントである。この正常免疫グロブリンＧは、
好ましくは特異抗体を標識するために使用した同じ元素
の異なるアイソトープで放射標識され、そして好ましく
は放射標識されたマーカー特異抗体と同時に注射される
。これは参照物質として標識特異抗体と実質上同じ結合
、分布および代謝動力学性を有する分子種を使用すると
いう利益を有する。
その結果−回だけの参照物質の注射が必要で、そして増
加した解像度が得られる。正常１ｇＧはそれが対応する
特異抗体と同じ方法で製造され、標識される。
−・方は特異抗体を標識するために使用することができ
、他方は正常免疫グロブリンを標識するために使用され
るラジオアイソトープの適当な対は、ヨー素−１３１と
ヨー素１２３、インジウム−１１１とインジウム−１１
５ｍ、ガリウム−６７とガリウム−６８、ルテニウム−
９７とルテニウム−１０３、または水銀−１９７と水銀
−２０３を含む。ヨー素は化学的置換反応により直接導
入し得るため、そして放射性でそしてフォト走査装置を
使用して検出し得る少なくとも５種類のアイソトープを
有するので、ヨー素は、本発明方法に使用するため特異
抗体フラグメントおよび正常免疫グロブリンＧ参照物質
の両方を放射標識するのに好適である。有利には、ヨー
素−１３１が特異抗体を標識するために使用され、ヨー
素−１２３が正常免疫グロブリンを標識するために使用
される。
発止する放射はガンマ−シンチレーション検出器の２つ
の異なるチャンネル上に別々に検出される。
得られる走査データはミニコンピユータ−に好都合に記
憶され、そしてその非標的区域における標識参照免疫グ
ロブリンに対する比俊上形る、放射標識特異抗体の過剰
蓄積区域を央定するため前述の減算法が実施される。こ
れらの値は関連した出力信号、有利にはカラービデオス
クリーン上のカラーの変化を発生させるために使用する
ことができる。フォト走査装置はコンピューター断層放
射線写真能力を備えることができる。高い活性と許容し
得る免疫特異性との間に最大のバランスを与えるように
標識した高度にモノ特異性で、好ましくはモノクローン
性の抗体を使用するこの高度に能率的な減算技術は、著
しく改良された解像度の腫瘍位置測定および検出方法を
捉供する。
勿論、高度に標識した、高度に特異性抗体と本発明の改
良された減算技術の組合せはもっと高い解像度を導びく
。好適な具体例において、実質上モノ特異性抗体が抗体
１分子あたリョー素が平均少なくとも２．５原子、好ま
しくは５ないし１０原子導入されるように！−１３１ま
たはｒ−１２３で放射標識され、そして生成した高度に
標識されたモノ特異性抗体は本発明に従って注射される
。
抗体１分子当り少なくとも２．５および好ましくは５な
いし１０原子の平均ヨー素含量へｌ−１３１または［−
１２３で放射標識されたモノクローン性特異抗体の使用
も好適である。
さらに改善された解像度は、減算技術において参照物質
として、放射標識された精製正常免疫グロブリンを使用
することによって得られる。正常グロブリンはグロブリ
ンの混合物であり、そのあるものは放射性抗体がそれへ
向けられる特異抗原へ結合されることができる。従って
問題のマーカーに対する反応性を除去するため、減算剤
として使用すべき正常グロブリンを精製することが望ま
しく、そのような−精製法は正常免疫グロブリンを好ま
しくは固体吸着剤上の特異抗原で吸着し、抗原と反応す
るグロブリンをカラム上に残し、そして通過する物質は
非特異性減算剤として標識するためにもっと好適となる
であろう。モノクローン性非特異免疫グロブリンまたは
骨髄腫タンパン自体は、標識および減算剤として使用の
ために所望の純度を持つであろう。
本発明の減算技術を使用するとき、高い放射活性と高い
特異性とのバランスは、抗体の対応して高いマーカー特
異免疫反応性をもって、放射性標識のいくらか低い程度
の側においてもっと破壊される。再びマーカー特異免疫
反応性が高い程、標識化は高くなるが、抗体性質の有益
なバランスはなお維持される。このように少なくとも７
０％、好ましくは少なくとも８０％のマーカー特異免疫
反応性と、１５％以下、好ましくは１０％以下の交差反
応性を有する実質上モノ特異性の抗体は、高度に効果的
な位置測定を許容するように標識後もなお充分な特異性
を保有する一方、抗体１分子当り２．５、好ましくは５
ないし１０ヨ一ド原子程度へ、ｌ−１３１またはｌ−１
２３で標識することができる。
改良された減算技術を使用しない、しかし好ましくは使
用する本性の使用は、腫瘍位置の連続的、反復的、また
は随時的監視を許容する。これは特に手術前に腫瘍の診
断および期決定との組合せに利益を有する。加えて、こ
の方法はどの程度完全な腫瘍除去が達成されたかの徴候
として、手術中または手術後に有用である。転移の場合
、特に小さい拡散転移の増殖が認められた場合、この方
法の高い解像度は術後療法のための標的区域の同定を許
容する。これは本発明の治療方法または他の技術、例え
ば化学療法、照射処置もしくは多モード療法を使用して
実施することができる。
放射性標識したマーカー特異抗体またはフラグメントは
腫瘍治療に有効である。標識された抗体が被検者の腫瘍
部位に局在化されることが決定された後、一般に投与当
り２５ないし２５０ｍＣ１゜好ましくは５０ないし１５
０ｍＣｉの標識された抗体の高投与量が注射される。注
射は静脈内、動脈内、リンパ管内、包成内、または体腔
でよ（、そして反復することができる。
種々の放射性核種が治療のために有用であり、そしてそ
れらは前に論じた標識化技術によって特異抗体中に取り
入れることができる。好ましい治療的に有効な核種はｌ
−１３１である。
本発明の治療方法は、有利には高度にマーカー特異抗体
、好ましくは少なくとも７１％、好ましくは少なくとも
８０％のマーカー特選免疫反応性と、１５％以下、好ま
しくは１０％−以下の他の抗原に対する交差反応性を有
する抗体を使用する。
モノクローン性抗体はそれらの高い特異性のために好ま
しい。
放射標識したマーカー特異抗体またはフラグメントを使
用する療法は、他の療法例えば照射および化学療法と組
合せて一次的治療処置として、そして外科手術の補助法
として有利に使用される。
外科的に除去できない、または検出をのがれることので
きる小さい転移がある場合には、本発明の放射療法はこ
れらのｌ１ｆｆｌ瘍を発見しそして破壊する有力な武器
を提供する。
抗体フラグメントはしばしばいくらか低い免疫反応性を
持ち、そしてその時低い放射性核種含量で、例えばフラ
グメント１分子当り、例えば■−１３１を０．１ないし
１．０原子で標識するのが有利である。これは治療のた
め、そしてもし必要ならば検出のため、ｌ−１３１比活
性２．５ないし５２Ｃｉ／μｇを有するフラグメントを
生成させる。
本発明のさらに別の局面は、ラジオアイソトープ標識と
、ホウ素−ＩＯアイソトープの天然存在比を少なくとも
２０％有する著しい多数のホウ素原子を含む付加物の両
方を含有する抗体またはフラグメントの使用に関する。
ホウ素含有付加物は各種の方法により、好ましくは抗体
に、Ｈａｗｔｈｏｒｎｅｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、
　Ｃｈｅｍ、、　１５，４４９（１９７２）の方法によ
り、１−（４−アミノフェニル）−１，２−ジカルバク
ロソドデカボラン（１２）から誘導されたジアゾニ、ウ
ムイオンのようなホウ素リッチなカップリング剤をカッ
プリングすることによって導入することができる。ホウ
素−１０含有抗体は次に（ｌＩ！ｌｒ！ｌｊ位置測定お
よび／または治療のため１種またはそれ以上の放射性標
識と、そして熱中性子の吸収のためホウ素−１０原子の
高含量の両方を含有する抗体を製造するため、上述の方
法の一つまたはそれ以上に従って放射標識される。放射
標識されそしてホウ素標識された抗体を注射した後、放
射性標識を用いて腫瘍の位置測定をする。腫瘍は次によ
くコリメートされた熱中性子のビームで照射され、それ
らはホウ素含有付加物中のホウ素−１０核によって優先
的に吸収され、そして活性化された核は急速にリチウム
−７およびアルファ粒子に崩壊する。これら生成するア
ルファ粒子は細胞毒性で、そしてそれらの腫瘍細胞内で
の生成は細胞を殺し、そして腫瘍の減少をもたらす。
高度にマーカー特異性の抗体上のホウ素付加物と１種ま
たはそれ以上の放射性標識との結合は、はじめて多モー
ド腫瘍治療剤として作用する単一の試薬を提供する。腫
瘍部位におけるこれら二重に標識された抗体の急速なそ
して特異的な局在化は、中性子照射を集中すべき区域の
速いそして精密な区切りを許容する。さらに、腫瘍細胞
は放射性標識からの放射と中性子で活性化されたホウ素
−１０放射との結合効果によって破壊され、そして殺さ
れた腫瘍細胞は除去されるので、放射線治療的処理は局
在化された放射標識された抗体の測定または他のｌＩＩ
ｇＩＩ検出法によって監視することができる。
本発明の抗体は注射組成物の形で有利に投与される。−
船釣スクリーニングのため、そして位置測定および治療
の多数のタイプのため、注射は静脈内、動脈内または包
膜内注射であろう。注射し得る抗体溶液は静脈、動脈ま
たはを髄液中に２分ないし約１時間のコースにわたり、
好ましくは静脈内または動脈内注入のため１０分ないし
２０分にわたって投与されるであろう。ある場合には、
皮下、粘ｎり下ｔＪｔ織、または体腔内投与が有利であ
る。腫瘍が既知の接近し得る動脈から供給される場合は
、動脈内投与が治療のために好ましい。動脈内ルートは
製剤の長い注入時間、例えば２４時間またはそれ以」二
を使用し得る。加えて包膜内投与または頚動脈中へのフ
ラグメントの注射は脳内に所在するｌ１ｌｆｆｉに使用
することができる。皮下、粘膜上組織または体腔内投与
は皮膚の特定区域および／または特定の体腔へ近い区域
に限られた腫瘍に有益である。
本発明による典型的な注射組成物は、ヒト血清アルブミ
ン３４■（１％米国局方：バークデビス社）と、０．９
％ＮａＣ１含有０．０４−Ｍリン酸緩衝液（ｐ　Ｈ７，
４、バイオウェア社）１〜Ｉｄｌ当り放射標識された抗
体１ないし５００μｇを含有する。本発明の減算性技術
が使用される場合は、特異抗体の重量にほぼ等しい放射
標識し、た正常イムノグロブリンの量を含有する。他の
慣用の薬剤学的に許容し得る注射用担体も、包膜内、皮
下、粘膜上組織または体腔内注射のため、および静脈内
または動脈内注射のためのように指示された場合に使用
することができる。
当業者はさらに熟考することなく、前記説明を用いて本
発明をその全範囲に利用することができるものと信ぜら
れる。従って以下の特定の好ましい具体例は単に例示で
あり、開示の残余の部分を限定するものではないと解す
べきである。以下の実施例において、すべての温度は未
補正の摂氏度であり、断わりのない限りすべての部およ
び％は重量に・よる。
これら実施例で使用される抗体は高度に特異性で、そし
て慣用の免疫化の後、補体を不活性し、血球凝固成分を
除去するため吸着し、そして交差反応性抗原および特異
抗原に対してアフィニティー精製して調製するか、また
はハイブリドーマ誘導モノクローン性抗体のどちらかで
ある。
実施例１ ｔゴ’ｒ−ＣＥＡ　　ｒ　　Ｇ　　ヤギ　の（ａ）ＣＥ
ＡはＮｅＷｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ
ｓ、＋　３４＋２１２５（ｉ９７４）の方法により、結
腸がんの肝転移から高純度で得られる。
（１））　　精製ＣＥＡ乾燥重量０．５■をメチル化ウ
シ血清アルブミン（シグマ、社）２■を含む水２ＩＩ１
ｇ中に溶解し、ＣＥＡ溶液を完全なフロインドアジュバ
ント（デイフコ社）の等容積で乳化する。
ＣＥＡ接種物の等量を健康ヤギの首の別々の２部位に皮
下注射する。注射は２週間置きに最後の注射後１４日後
に採集した抗血清のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が
抗ＣＥＡ力価１：１０’以上を示すまで投与される。
次にヤギから血液を無菌的に採取し、パイロ−ジエンを
含有しない遠心試験管へ移し、そして遠心する。抗ＣＥ
Ａは一２０℃で貯蔵する。
ヤギ抗ＣＥＡの補体は５６℃で１時間インキュベートす
ることによって不活化し、そしてそれ以上血球凝固活性
が検出できなくなるまで、洗浄レバツクしたＡＢ型ヒト
赤血球（ＲＢＣ）と、血球凝固活性定量から計算した血
清／ＲＢＣ比で繰り返して混合することにより、抗血液
グループを除去する。吸収した抗ＣＥＡ血清は次に０．
１Ｍリン酸緩衝液ｐ　Ｈ１，０（Ｐ　Ｏ４）の数容積に
対して透析される。
（Ｃ）　　結腸がん抗原ＩＩＩ　（ＣＣＡ−ＩＩＩ）免
疫吸着体は、正常肺の過塩素酸抽出物の６０．０００分
子量分画を慣用の技術を用いて臭化シアン活性化セファ
ローズ４Ｂ（ファルマシア社）へ結合させることにより
調製される。結合は４°Ｃでゆるやかにかきまぜながら
一夜進行を許容される。ＣＣＡ−Ｉ［１−免疫吸着体は
０．０５　Ｍホウ酸緩衝液ｐ　Ｈ８，４で洗浄され、０
、１　Ｍリン酸緩衝液ｐ　Ｈ８，０中の１Ｍ２−アミノ
エタノールの４容積中に再懸濁される。スラリーは室温
で１時間混合され、口過され、ＰＯ，で洗浄される。
ＣＣＡ−ＩＩＩ免疫吸着体カラムが調製され、１０％（
Ｖ／Ｖ）正常ヤギ血液（ギブコ社）２戚、次いで３Ｍチ
オシアン酸アンモニウムの約１カラム容積を前循環し、
そして０．１　Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７，０で再平衡化さ
れる。
ＣＣＡ−ＩＩＩ−免疫吸着体は自動クロマトグラフィー
システムへ挿入され、そして全体のシステムが非発熱原
性の無菌ＰＯ４で完全に洗浄される。
緩衝液容器はチオシアン酸アンモニウムおよび透析物を
含む容器で取り替えられる。
吸着された抗ＣＥＡ血清はカラムの空隙容積の２／３の
容積へＰＯ４で希釈され、そしてカラムを通るｌサイク
ル毎に抗血清の適当量を含有する。
この希釈した抗血清の体積はカラム中へ適用され、そし
て１力ラム空隙体積の全容を与えるのに充分なＰＯ４で
洗浄される。抗血清は室温で２０分間インキュベートす
ることが許され、次に吸着されない分画である特異抗Ｃ
ＥＡ血清がカラムがらＰＯ４で溶離される。システムは
抗ＣＥＡ血液の第２の部分標本を適用することにより、
自動的に次のサイクルを開始する。サイクルの回数は抗
血清の全ロフトを処理するようにセット−される。
抗ＣＥＡ血清の部分標本が抗血液のもとの容積へ濃縮さ
れ、そして免疫拡散によって再テストされる。抗血清は
参照ＣＥＡＳＣＣＡ−ＩＩＩ製剤、正常ヒト組織抽出物
および血漿に対してテストされる。もし抗血清がＣＣＡ
−ＩＩＩ製剤、血漿または正常ヒト組織抽出物に陽性反
応を有するならば、それは０ＣＡ−ＩＩＩ免疫吸着体カ
ラムにリサイクルされる。
（ｄ）ＣＥＡ−免疫吸着体力ラムは、ＣＣＡ−ｍ免疫吸
着体と同じ結合操作により、精製ＣＥＡを臭化シアン活
性化セファローズ４Ｂへ結合し、前記（Ｃ）のようにカ
ラムを調製し、前循環し、平衡化することによって調製
される。
ＣＥＡ吸着体カラムは自動化されたクロマトグラフィー
システムへ導入され、そして非発熱原性のＰＯ４で完全
に洗浄される。各サイクル毎に適用すべき抗ＣＥＡ血液
の量はラジオイムノアッセイ定量をもとに計算され、抗
血清のサンプルが希釈され、適用され、そしてＣＣＡ−
ｍ免疫吸着体カラムと同様にインキュベートされる。す
べての非反応性免疫グロブリンを含んでいる血清タンパ
クはカラムからＰＯ，で溶離され、そして吸着されない
分画として採取される。
特異抗ＣＥＡ　　ＩｇＧは解離されそしてＰＯ。
中３Ｍチオシアン酸アンモニウムでカラムから溶離され
、そして吸着された分画として採集される。
チオシアン酸アンモニウムの微量のすべてヲ除去するた
め、吸着された分画はＰＯａ中ＩＭ尿素および１０％グ
リセロールに対し、中空繊維透析ユニット（アミコン社
またはビオラッド社）の使用によってインライン透析に
かけられる。特異抗体の解離のための別法は、混乱剤と
してグアニジン塩酸塩と、脱塩のためセファデックスＧ
２５ゲルロ過クロマトグラフイーを使用する。
吸着された分画は４℃でＰＭ３０膜（アミコン社）によ
る限外口過により、ゲル口過クロマトグラフィーを容易
にする体積まで！縮される。例えば抗ＣＥＡ血清の１０
０ｄのロットは約２０ｄへ濃縮される。濃縮液は５０ｍ
Ｍリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７，５の１００容で
４回、各４時間透析される。抗ＣＥＡ　　ＩｇＧ製剤は
無菌のパイロ−ジエン不含血清バイアル中へ無菌口過さ
れる。
部品標本がＲＩＡおよび免疫拡散による品質、管理試験
のために保存される。
（ｅ）　　セファクリルＳ−２００（ファルマシア社）
カラムがゲルを無菌のパイロ−ジエン不含５０ｍＭ。
ＰＢＳ、ｐＨ’７．５で５回洗浄することによって調製
される。カラムは１８０℃で３時間乾燥滅菌される。使
用カラム寸法は抗体のロフトサイズに応じて２．６／９
０ｃｍか、または５．ＯＸ９０ｃｍである。
次にカラムはカラムの３倍容のＰＢＳで洗浄される。
ヤギ抗ＣＥＡ　　ＩｇＧのロットはカラムに適用され、
そしてＰＢＳで６ｍ／ｄ／時間の流量において溶離され
る。ＩｇＧタンパクを含有する分画がプールされ、そし
て約５■　ＩｇＧタンパク／ＢＳに対して透析され、０
．２ミクロンＭｉ１１ｅｘユニット（ミリポア社）で無
菌口過され、そして保存剤としてアジ化ナトリウムを添
加して約５■ＩｇＧタンパク／′ｍ！の１ｍ１部分標木
の形で冷蔵される。
（ｒ）　　１１１　　ｌの１ｍＣ１当り７．２ないし１
６．８　ｕ　ｇＩｇＧのヤギ抗ＣＥＡ　　ＩｇＧをＩＩ
Ｉ　　ｌ　（アマージャム〜ザール社）を含む放射性核
種バイアル中へ注入する。
クロラミンＴおよびメタ重亜硫酸ナトリウム溶液は、そ
れぞれクロラミンＴＩＯ■および重亜硫酸塩５０■を含
む２個のバイアルのそれぞれへ、無菌のパイロ−ジエン
不含０．０４　Ｍリン酸緩衝液ｐ　Ｈ７，４の５ｄを注
入することによって調製された。クロラミンＴは１０　
ｕ　ｇ／ｍＣｉ　１″’　　Ｉの割合で放射性核種バイ
アル中へ注入された。クロラミンＴの５倍量のメタ重亜
硫酸ナトリウム溶液は、クロラミン′ｒの注入後正確に
９０秒後にバイアル中へ注入される。混合物は無菌注射
器で反応バイアルから除去され、反応バイアルは１％正
常ヒト血清アルブミンでリンスされ、ＩＪ　ｙス液は反
応混合物と合併された。
Ｉｌｌ　　ｌ抗ＣＥＡ　　ＩｇＧのサンプルが事前にＰ
ＢＳ中１％正常ヒト血清アルブミンで平衡化されたＰＤ
−１０セファデックスＧ−２５カラムに適用され、ＰＢ
Ｓ中１％正常ヒト血清アルブミン約４６５　ｍｌで溶離
され、シールドされたガンマ検出器（Ｅｂｅｒｔｉｎｅ
社）でモニターされ、貯蔵および使用のため採集され、
あらかじめ定めた濃度に希釈される。
生成する＋３１　１−抗ＣＥＡ、　　ＩｇＧは抗体１分
子当り平均ヨー素３ないし７原子を有する。各バッチか
らの無作為部分標本が無菌性、発熱原性、毒性およびそ
の他の品質管理変動について別々にテストされる。
実施例２ モノクローン　１″’　　Ｉ−ＣＥＡ　　Ｉ　　Ｇの　
゛１＃６月令のＢａ１ｂ／Ｃマウスに、がん胎児性抗原
１０ないし１００μｇを腹腔内注射する。その場合ＣＥ
Ａは等容積（１０−１００μｆ！、）の不完全フロイド
アジュバント中に混合される。これは１週間後とそして
２週間後に繰り返されるが、最後はアジュバントなしで
静脈内ルートが用いられる。３日スエいし４日後、マウ
スは頚部脱臼により殺される。与えられた抗原に対する
抗体を得るための最適時期は、抗原、投与ルート、免疫
化のタイミング、それに最終の増強注射とひ臓細胞除去
の間の間隔によって変化する。
ひ臓を除去し、そし２て室温で、血清不合培地か、また
は２０％ウシ胎児血清を加えたダルベツコの修正イーグ
ル培地（ＤＭＥＭ）を収容する６０ｍｍペトリ皿中に入
れ、そして細胞を分散するためはさみでミンチする。細
胞はＶｏｒｔｅｘ　ミキサー上で１−２分かきまぜるこ
とによりさらに遊離される。
ひ臓細胞は円錐形遠心試験管へ移され、ＩＥＣ−ＭＳ２
遠心機中でＬ　　ＯＯＯｒｐｍにおいてペレット化され
、上清か除去され、ペレットをたたいてはくし、そし２
て赤血球を溶解するためｌＯ分間冷たい０．１　ＮＨ，
Ｃｌ　Ｓｍｌ中に再懸濁する。２０％ウシ胎児血清添加
の冷却したＤＭＥＭを加え、そして細胞をペレット化し
、そして再び２０％ウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ１
０ｄ中に懸濁する。
融合のために使用した骨髄腫細胞系統は、高グルコース
（４，５ｇ／ｆｆ）および２０％ウシ胎児血清添加ＤＭ
ＥＭ中の静止懸濁培養物に、５ないし１０％ＣＯ□中、
１００．０００ないし１，０００，０００／Ｉｔｌの細
胞濃度において保存される。骨髄腫（形質細胞腫）細胞
系統は、５ｖａｓｔ’ｉおよび旧！５ｔｅｉｎ、　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ。
Ｊ、、　１２８，４２７−４４４（１９７２）により報
告された、ＭＯＰＣ−２１から誘導されたＢａ１ｂ／Ｃ
形質細胞腫であるＴ）３−Ｘ６３−Ａｇ８か、Ｆａｚｅ
ｋａｓ　ｄｅ　Ｓｔ。
Ｇｒｏｔｈ　＆　Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒ、　Ｂａ５ｌ
ｅ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＩｍｓ＋ｕｎｏ１ｇｙに
よるＦＯとして知られるその誘導体か、またはＭａｒｇ
ｕｌｉｅｓ　ｅｔ　ａＬ　Ｃｅ１ｌ、　８．４０５（１
９７６）によって報告された、ＭＰＣ−１１から誘導さ
れたＢａ１ｂ／Ｃ系統である４　５．６　Ｔ　Ｇ　１．
７であることができる。これら系統のすべては酵素ヒポ
キサンチンフォスフォリボシルトランスフエラーゼ（Ｈ
ＰＲＴ；Ｅ、ｃ、２．４．２．８）を欠き、そしてその
ためＬｉｔｔｌｅｆｉｅｌｄ、　５ｃｉｅｎｃｅ＋　１
旦、７０９−７ｔｏ（１９６４）に記載されているよう
に、ヒボキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを
含有する選択培地中で死滅する。
免疫化した動物から得られるひ臓細胞は、次にＧｅ１ｆ
ｅｒｅｔ　ａｌ＋　Ｓｏｍａｔｉｃ　Ｃｅ１ｌ　Ｇｉｎ
ｅｔｉｃ、＋　３，２３１−２３６（１９７７）の方法
の採用によるポリエチレングリコールを使用することに
より、形質細胞腫細胞と融合される。例えば３０％ポリ
エチレングリコール溶液は、無菌ポリエチレングリコー
ル４０００　（メルク社、分子量約４，０００）（ポリ
エチレングリコール０．５ｇ＋ジメチルスルホキシド（
ＤＭＳＯ）　０．０５　ｍｌ−＋−Ｊｊｊ留水０．５　
ｒｎｌ　）と、血清なしのＤＭＩＥＭとを４１゛Ｃへ加
熱し、そしてポリエチレングリコール３　ｒｎｌを血清
なしのＤ　Ｍ　Ｅ　Ｍ　　ｐ　Ｈ７゜４−７．６の７　
ｍｌと混合することにより調製され、そして使用まで３
７°Ｃで保存される。融合は室温で行われる。骨髄腫細
胞（１０６−１０’　）は血清を含まない培地で２回洗
浄され、５０ＩＩＩＩ１円錐底遠心試験管（フアシヨン
２０７０）中のひ臓細胞１−３Ｘ１０’　−１−５Ｘ１
０”　と混合される。
細胞は２５０Ｘｇで５分間遠心され、そして上清液は注
意深く吸引される。ポリエチレングリコール液の０．２
ｄ量が加えられ、そして試験管は細胞を再懸濁するため
手でゆっくりかきまぜられる。
次に細胞は２５０Ｘｇで３分間、そして再度４０ＱＸｇ
で３分間遠心され、そしてさらに３分間静止状態に保た
れる。細胞はポリエチレングリコールに約８木曜される
。その後で約５ＩＩｆｌの血清を含まない培地が試験管
へ加えられ、細胞がゆっくり再懸濁され、そして２５０
Ｘｇにおいて５分間遠心することにより再ペレット化さ
れる。上清を除去し、そして細胞を血清含有培地２０ｄ
中に再懸濁し、そしてＨＡＴ培地がそれへ添加されるマ
イクロプレートに移される前に加湿したインキュベータ
−中３７°Ｃで４８時間インキュベートされる。
その代りに、細胞は、ＤＭＥＭ、１０％ＮＣＴＣ１０９
培地（マイクロバイオロジカル、アソシエイツ社）、２
０％ウシ胎児血清（ギブコ社）、２単位うジインシュリ
ン／ｄ　（シグマ社）、０．４５ｍＭピルベート、１ｍ
Ｍオキザロアセテート、および必要に応じ抗生物質より
なる培地３０ｄ中に直接懸濁されるチミジン（１，６ｘ
ｔｏ−ｓＭ）およびヒボキサンチン（ＩＸＩＯ−’Ｍ）
が添加される。
この培地中の細胞は６個のマイクロプレートにウェル当
り１滴（約５０μりで分配される。次に日にチミジンと
ヒボキサンチンを含存し、今回アミノプテリン（８Ｘｌ
□−ｔ）を加えた上で規定した培地の１滴を各ウェルへ
加える。上の培地を６ないし７日後２滴加え、クローン
は顕微鏡的に１０ないし２０日で出現する。ヒボキサン
チン−アミノプテリン−チミジン（Ｉ（ＡＴ）は融合直
後または後で加えることができる。得られる雑種の数の
改善は各マイクロウエルヘフィーダー層を加えるときに
達成される。ニーではヒト胎児線維芽細胞が４５０Ｏｒ
で照射され、そしてこのような細胞１，０００〜２，０
００が各ウェルへ融合の前日または融合した細胞へ直接
加えられ、そしてそれらがマイクロウェル中にそのよう
に分配される。
顕微鏡的にクローンが出現した後、培地の大部分を除去
し、そして新しい培地を加えることよって交換される。
２回目の培地交換後、培地はそのままに少なくとも４日
間放置され、次に慣用定量法により抗体活性および特異
性のアッセイのために集められる。
１５０ｍプレートまたはローラーボトルから収穫された
消費培養培地から多量の抗体が得られる。
培地は中空繊維濃縮器（アミコン社）によって後で濃縮
される。また２ないし３週間前に約１０億のクローンし
たハイブリドーマ細胞を注射された無胸腺（無毛）マウ
ス（ｎｕ／ｎｕ）の腹水からも得られる。腹水は各マウ
スの腹腔を食塩水であふれさせることによって食塩水で
希釈され、そして各マウスからの希釈液はプールされる
。
モノクローン性抗ＣＥＡ　　ＩｇＧは、実施例１（ｆ）
のように１−１３１で放射標識される。
実施例３ ”　ｔ−１Ｇ　　ヤｔ’　　（７） 正常ヤギ免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）（マイルス社）を
臭化シアンで結合したＣＥＡに対してアフィニティー精
製し、そして［−１３１の代りに１−１２３を用い、比
放射能の差に対応して試薬の量を比例的に変更すること
を除いて、実施例１（ｒ）の操作を用いて！−１２３で
放射標識する。標識した抗体の比放射能を例えば１００
−５００μＣｉ／μｇに３Ａ節するため担体ヨー素を添
加することができる。添加した担体ヨードの量は、担体
当りのヨー素原子の与えられた数のため、標識した抗体
分子の比放射能を決定するであろう。
実施例４ ”’　Ｋ−ＣＥＡ−”Ｂ　　Ｉ　　Ｇの　′１（ａ）　
　実施例文または２で製造した抗ＣＥＡ　　ＩＣＧを、
Ｈａｗｔｈｏｒｎｅ　ｅＬ　ａｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　
Ｃｈｅｎ＋、＋　１５＋４４９（１９７２）の操作を使
用して、天然存在比のホウ素−１０アイソトープ（２０
％）を有する１−（３−アミノフェニル）−１，２−ジ
カルバクロンードデカルボラン（１２）のジアゾニウム
塩の２０倍モル過剰と反応させる。得られる抗体は、平
均して抗体分子当り２ないし１０個のジアゾ結合カルボ
ラン残基、または４ないし２０のホウ素−１０原子を有
する。
（ｂ）　　前記（ａ）の抗ＣＥＡ−”Ｂ　　Ｉ−ｇＧを
実施例１（ｆ）と同様に１−１３１で放射標識し、抗体
分子当りヨー素１ないし１０原子平均を導入する。
実施例５ ヱ↓：今寸−仁、ｉ墜ユく←１耳Ｊ４ξ４勿ヨｑと１胃
り違１以下に示すように無菌のパイロ−ジエン不合溶液
が調製される。
（ａ）　　無菌溶液はａｌ当り次の成分を含有する。
（１）ヒト血清アルブミン（ＩＳＡ）（１％、米局方パ
ークデービス社）３４■ （２）０．０　／ｌ　Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７，４（バイ
オウェア社） （３）　０．９％ＮａＣＩ （４）実施例１によって製造した１１１　　■−抗ＣＥ
ＡＩｇＧ（ヨー素平均約５原子／分子、比放射能的８０
μＣｉ／μｇ） 実施例１の標識抗体は２０μｇ／ｄ、の濃度において溶
液（１）、（２）および（３）中に貯蔵され、そしてこ
の溶液を調製するためリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中１％Ｉ
　Ｓ　Ａの等容で希釈される。
部）実施例３で調製したｌｆｆ１りｉｇＧを１５．１μ
ｇ　／　ｒｔｔｌ余分に含有することを除いて（ａ）部
の操作によって無菌溶液が調製される。比放射能５００
μＣｉ／μｇのＩ！ｆｆｉ１ｇＱはｌ００２μｇ／ｄの
濃度で１％Ｈ３Ａを含むリン酸緩衝液中に貯蔵される。
この溶液の等容を（ａ）部の操作中のＰＢＳ中１％Ｆｆ
　Ｓ　Ａの代りに使用する。
（Ｃ）　　抗体が実施例２によって製造し、２０μｇ／
ｌｅｌの濃度でＰＢＳ中１％Ｈ３Ａに貯蔵され、そして
比較し得る活性を有するｌｆｆ１　　■−抗ＣＥＡ　　
Ｉｇｃであること以外ら）部の操作による無菌溶液。
（ｄ）　　抗体が実施例４によって製造され、抗体分子
当り平均ジアゾ結合したカルボラン残基５個とヨー素ｌ
原子を有し、そして約１６μＣｉ／μｇの比放射能を有
する′３１　■−抗ＣＥＡ−ＩＯＢ　　Ｉ　ｇＧである
こと以外（ｂ）部の操作による無菌溶液。最終溶液は抗
体５０．４μｇ／！ｄを含有する。
実施例６ 獲瘍亘１眉淀 放射性ヨード化した抗ＣＥＡ　　Ｉｇｃを腫瘍の疑いあ
る患者に投与する。患者はヤギＩｇＧまたは骨髄腫１ｇ
Ｇに対するアナフィラキシ−過敏症に対して事前テスト
される。ｌ−１３１または■−１２３の甲状腺摂取を阻
止するため、ルゴール液（ピュアバック社）を口から、
放射能標識した抗体の注射１日前から開始して７日間、
５滴づつ１日２回投与する。
位置測定はＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｌ、　Ｎ、
　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、２９８．１−５８４（１９
７Ｂ）　（７）方法ニ１、無菌生理食塩水２〇−中実施
例５（ｂ）または５（Ｃ）によって製造した１２３７７
ｇＱを含有する１３１　１〜抗ＣＥＡ　　１ｇＧの溶液
３．５　ａｆｔを１０分ないし４５分を要して注入する
ことによって実施される。Ｔｃ−９９ｍ化合物は使用せ
ず、減算技術は１３１■とＩＺｆｆ　　ｌとの間を識別
するため慣用の態様に適応し°ζいる。
抗体の注射完了直後および２，８，１２，２４゜４８お
よび７２時間後走査が行われる。
有意な局在化が２時間後に見られ、時間につれて改良さ
れた解像度が得られ、注射後８ないし２４時間の間に高
原に達する傾向がある。追加のバックグラウンドＩ！ｉ
ｌ１ｇＧは添加されない。
この方法のＣＥＡ選択性は以前のＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ
　ｅｔａｌ法と比較できるが、しかし解像度、速さおよ
び便利さは著しく増強される。
実施例７ 旧棗桁僚 （ａ）　　場合によって実施例６の操作によって検出さ
れ、位置測定された卵巣がんを有する患者に、無菌生理
食塩水５０ｍ１中実施例５（ａ）の溶液１５０ｍＣ１を
静脈内注射により注射する。Ｉ！ｆｆ！ｉサイズの減少
を２０日以内に観察する。前記投与量を個人ベースに調
節された間隔で繰り返す。
（ｂ）　　場合によって実施例６の操作によって検出さ
れ、位置測定された子宮頚部がんを有する患者に、患者
の体重７０ｋｇをもとにして２．８　ｍ　Ｃｉの１ｆｆ
ｌ　　ｌ活性を与えるのに充分な実施例５（ｄ）の溶液
の量（無菌生理食塩水中）を注射する。
腫瘍は実施例６の操作を使用して注射後１２時間で正確
に位置測定される。よくコリメートされた熱中性子ビー
ムが位置決めされた１瘍位置に集中される。３ＸＩＯ”
中性子１０１１ｄ射が各腫瘍位置に対して有効であり、
そして場合により個人ベースで調節された間隔で、放射
標識を持ちまたは持たない腫瘍位置測定抗体の投与が繰
り返される。成功した腫瘍縮小が観察される。
実施例８ １’ｌ　　Ｉ−ＨＣＧ　　Ｉ　　Ｇ　　ヤギ　の　１（
ａ）ＨＣＧに対する抗体（抗ＨＣＣ，）は、Ｇａｇｓｈ
ａｗｅ。
”Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔｉｓｔｊｇａｔｉ
ｖｅ　ａｎｄ　ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＥｎｄｏｃｔｉｏ
ｌｏｇｙ、　ｐａｒｔ　ＩＩＩ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｈ
ｏｒｍｏｎｅｓ　。
Ｂｅａｒｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　Ｅｄｓ、、　ｐａｇｅ
ｓ　７５６−７６３（Ｎｏｒｔｈｌｌｏｌｌａｎｄ、　
Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、　１９７Ｂ）の方法によって製造
される。
ＨＣＧのβ−サブユニットに対する抗体（抗−ＨＣＧ−
β　ＩｇＧ）は、Ｖａｉｔｕｋａｉｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ
。
Ａｍ、　Ｊ、　０ｂｓｔｅｔ、　Ｇｙｎｅｃｏｌ、、　
１１３．７５Ｈ１９７２）の方法によって製造される。
ら）前記（ａ）部において調製した抗体は血清溶液とし
てさらに精製された。操作は抗−ＨＣＧ　　ｙｇＧおよ
び抗−ＨＣＧ−β　ＩｇＧについて同一である。
抗−ＨＣＧ　（または抗−ＨＣＧ−β）血清の補体は５
６°Ｃで１時間のインキュベーションにより不活性され
、もはや血球凝固活性が検出されなくなるまで、血球凝
固アッセイから計算された血清／ＲＢＣ比をもって抗血
液ＡＢヒ）ＲＢＣが除去される。吸着された抗−ＩＩ　
ＣＧ血清は０．１Ｍリン酸緩衝液ｐ　Ｈ７，０，（Ｐ　
Ｏｓ　）の数倍容に対して透析される。
（Ｃ）　　ヒト尿タンパク（ＨＵＰ）免疫吸着体が精製
したＨＵＰを臭化シアン活性化セファローズ４Ｂへ結合
することによって調製され、ＨＵＰ免疫吸着体カラムが
調製され、そして抗−ＨＣＧ　（または抗−ＨＣＧ−β
）が精製され、そして実施例１（Ｃ）の操作に準じてテ
ストされる。
（ｄ）ＨＣＧ−免疫吸着体力ラムが精製したＨＣＧを臭
化シアン活性化したセファローズ４ＢへＨＵＰ免疫吸着
体のそれと同じカップリング操作により結合し、（Ｃ）
部と同様にカラムを調製し、前循環し、そして平衡化す
ることによって調製される。
ＨＣＧ免疫吸着体カラムは自動クロマトグラフィーシス
テムへ導入され、上記（Ｃ）部からの抗ＨＣＧ血清が実
施例１（ｄ）の操作と同様に精製される。
抗ＨｃＧ　　ＩｇＧ製剤の無菌のパイロ−ジエン不含血
清バイアル中へ無菌口過される。部分標本がＲＩＡおよ
び免疫拡散による品質管理テストのために保存される。
（ｅ）　　セファクリルＳ−２００（ファルマシア社）
カラムが準備され、前記（ｄ）部からのヤギ抗ＨｃＧＩ
ｇＧのロットが実施例１の操作と同様に精製され、そし
てアジ化ナトリウムを保存剤として添加して、約５■　
ＩｇＧ／ｘｉ！のｌｄ部分標本として冷蔵される。
（ｆ）”’　　Ｉ　　ｍＣｉ当り７，２ないし１６．８
　ＩＩ　ｇのヤギ抗ＨＣＧ　　ＩｇＧが１３Ｉｌ　（ア
マーシャムーサール社）を含む核種バイアル中へ注射さ
れ、標識され、そして実施例１　（ｆ）の操作と同様に
精製され、貯蔵される。
得られる重３１　１−抗ＨｃＧ　ＩｇＧまたは１３１　
■−抗ＨＣＧ−β　ｉｇｃは、抗体分子光リョー素を平
均３ないし７原子有する。各バッチからの無作為部分標
本は無菌性、発熱原性、毒性およびその他の品質管理変
動について別々にテストされる。
実施例９ （ａ）　　Ｉ：ｌ’　　Ｉ−ＡＦＰ　　Ｉ　　Ｇ　　ヤ
ギ　の過免疫ヤギ抗血清は、西、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ
、、３０．２５０７（１９７０）の方法により精製した
ヒトＡＦＰの繰り返した皮肉注射によって精製される。
抗血清の特異性は二重ゲル拡散、免疫電気泳動およびラ
ジオイムノアッセイによって確認される。免疫電気泳動
的に純粋なＩｇＧは、抗血清ｌＯｍｆｌのＤＥＡＥセル
ロースクロマトグラフィーと、次にアミコンＰＭ−３０
Ｍ上の濃縮によって製造される。４．２ｍｇ　／　ｄの
濃度において、ヤギ抗ＡＦＰ　　ＩｇＣ；は終了点とし
て２ｎｇの標識抗体の５０％結合を用いて、ラジオイム
ノアッセイ力価３Ｘ１０’を有する。
抗体は実施例１（ｆ）の操作と同様に放射標識され、該
実施例記載と同じ様に精製され、貯蔵される。
［有］）　　”’　　Ｉ−Ｃ３Ａ　　　Ｉ　　Ｇ　　ヤ
ギ　の抗Ｃ３Ａｐ血清は、氷水下の脱ネオン水の５容！
　（Ｗ／Ｖ）中のＧＷ−３９ヒト結腸がん外来移植腫瘍
を全速度で２分間ポリトロンによりホモジナイズするこ
とにより調製される。次にホモシネ−１−は４Ｂ、ＯＯ
ＯＸｇで１時間遠心される。透明な上清か免疫原として
使用される。免疫原のタンパク合計はロウソー法により
測定するとき７　ｒａｇ／　ｍｌである。ヤギがヤギの
首に皮下投与された、５−の完全フロイドアジュバント
中に乳化したホモジネート５ｔｎｆｌ（タンパク３５■
）で免疫化される。増強免過は３ないし４週間隔で続け
られる。
ヤギは毎月試験採血され、そして血清が抗体産生につい
てテストされる。特買抗−Ｃ３Ａｐ抗体の製造のため、
アフィニティにより、１０月目およびその後の日日にお
ける出血が処理される。
抗Ｃ３Ａｐ抗体は各種の臓器および組織抽出物に対して
アフィニティー精製される。ヒト結腸がん、ヒトすい臓
および肺、ハムスター肝臓および腎臓の抽出物は、全速
度２分間のポリトロンにより氷水下の脱イオン水５容（
Ｗ／Ｖ）中につくられる。ホモジネートは４８，０００
Ｘｇで１時間遠心される。透明な上清か集められ、凍結
乾燥され、そして臭化シアン法によって抗原をセファロ
ーズ４Ｂへ結合するのに適当なタンパク濃度を得るよう
に水に再溶解される。同時に、ヒトおよびハムスター血
清がセファローズ４Ｂへの結合前にタンパクについて調
節される。Ｃ０Ｗ−３９水ホモシネ−Ｉ・およびその４
８，０００ｇ上清は、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａ
ｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｃｓ、＋３６．３４５５（１９
７６）に報告されているように、Ｃ３Ａ製造のため９０
％フェノール液で処理され、そしてセファローズ４Ｂへ
結合される。
アヘイニティー吸着は実施例１（Ｃ）ないしくｅ）の操
作と同様に実施される。粗製ヤギ抗Ｃ３Ａｐ　（４１Ｉ
ｔ１）は結腸がん抽出物を結合したセファローズ４Ｂ】
００ＩＩｌを収容するカラムへ適用され、下方へ流下す
ることを許容される。流下液中にタンパクが出現する時
流れを止め、そして抗血清は免疫吸着体と３０分間反応
することが許容され、そして次にゲルが０．１Ｍ　　Ｐ
Ｏ，、ｐＨ７，０緩衝液で洗浄される。溶離された抗体
は直ちにアミコンＰＭ−３０膜上で透析され、０．１　
Ｍ　　Ｐ　Ｏｓ　、　　ｐ　Ｈ７゜０緩衝液で１、次に
０．０５Ｍ　　ＰＯ，、ｐ　Ｈ７，０中の１．０　Ｍ尿
素および１０％グリセロールで、そして最終に０．１　
Ｍ　　Ｐ　０４　、　　ｐ　Ｈ７，０緩衝液で平衡化さ
れる。抗体は次にヒトひ臓、肺および血清を結合したセ
ファローズ４Ｂ　　７５ｄの混合物を通過させられる。
抗体が免疫吸着体と反応することが許容された後、カラ
ムは０．１Ｍ　　Ｐ　Ｏｓ　、　　ｐＨ７，０緩衝液で
溶離される。抗体はアミコンＰＭ−３０膜上で濃縮され
、そしてハムスター肝臓、腎臓および血清抗原の混合物
を含む免疫吸着体カラム１５ｄを通過させ、そして前述
の態様で処理される。
最後に抗体はＧＷ−３９腫瘍のフェノール抽出物でつく
った免疫吸着体３２０　ｄへ適用される。
抗体３０分間インキュベートした後、カラムはＯｏＩＭ
　　Ｐ、０４．ｐＨ７，０１！街液で溶離される。抗体
は次に濃縮され、そしてアミコンＰＭ−３０膜上で０．
０５Ｍ　　ＰＯ，、ｐＨ７，５緩衝液で平衡化される。
このようにして得られるアフィニティー精製された抗体
はセファデックスＧ−２００（２゜５ｘｌＯＯｃｍ）カ
ラムに適用され、そして０．０５Ｍ　　ＰＯ，、ｐＨ７
，５緩衝液を用いて分画される。
■ｇＧ分画はプールされ、アミコンＰＭ−３０膜上で濃
縮される。抗Ｃ３Ａｐ　　Ｉｇａのタンパクは２．８　
ｍｇ　／　ｍｆｌに調節され、そして−２０°Ｃで貯蔵
される。
［−１３５による放射性ヨー素化は実施例１（ｒ）の操
作と同様に実施され、そしてＩＩＩ　　ｌ−抗Ｃ３Ａｐ
　　ＴｇＧは核実施例１と同様に精製され、貯蔵される
。
（Ｃ）　　実施例１，８およびこの実施例に類似の操作
を使用して、ＣＥＡ、ＨＣＧ、ＡＦＰまたはＣ５ＡｐＯ
代りに、前立腺酸性フォスファターゼ、すい臓胎児性腫
瘍抗原、胎盤アルカリ性フォスファターゼ、妊婦ベータ
−１−グロブリン、小皮小体ホルモン、カルシトニン、
組織ポリペプチド抗原、Ｔ−抗原、ベータ−２−マイク
ログロブリン、ガラクトシルトランスフェラーゼ−１ｆ
　（ＧＴ−Ｉｔ）。
ｇＰ−５２ビールス関連抗原、卵巣のう腫瘍関連抗原（
ＯＣＡＡ）、卵巣腫瘍特異抗原（ＯＣＡ）。
頚管がん抗原（ＣＡ−５８，ＣＣＡ、ＴＡ−４）。
塩基性胎児性タンパク（ＢＦＰ）、末端デオキシヌクレ
オチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）。
細胞質黒色腫関連抗原、ヒト星状細胞腫関連抗原（ＨＡ
ＡＡ）、通常グリオーマ抗原（ＣＣ；Ａ）。
膠芽胎児性抗原（ＧＥＡ）、神経謬原腺維酸性タンパク
（ＧＦＡ）、通常髄膜腫抗原（ＣＭＡ）および腫瘍脈管
形成因子（ＴＡＦ）のいずれか１種を用い、そして適当
なアフィニティー精製により、これら抗原に対する標識
した抗体が得られる。
実施例１０ −Ｅ）’）Ｏ−７”’　　Ｉ−ＡＦＰ　　Ｉ　　Ｇの　
”＝モノクローン性１３３Ｉ−抗ＡＦＰ　　ＩｇＧは、
ＣＥＡの代りにＡＦＰ抗原を使用することを除いて、実
施例２の操作と同様に製造される。
モノクローン性抗ＡＦＰ　　ＩｇＧは実施例！　（ｆ）
の操作と同様にｌ−１３３で放射標識される。
実施例１１ ”　　Ｉ−Ｉ　　Ｃヤギ　ノ１゛告 正常ヤギＩｇＧ（マイルス社）は、臭化シアン結合ＨＣ
Ｇ、ＡＦＰおよびＣ３Ａｐに対してアフィニティー精製
され、そしてｌ−１２３を１−１３１に代え、実施例３
のように比放射能の差を補償するように試薬の比率を変
更することを除き、実施例１　（ｆ）の操作と同様に１
−１２３で標識される。
実施例１２ ”’　　Ｉ−ＡＦＰ−”’Ｂ　　Ｉ　　Ｇの（ａ）　　
実施例９（ａ）によって製造した抗ＡＦＰ　　ＩｇＧを
、実施例４（ａ）の操作と同様に、ホウ素−１０天然存
在比（２０％）を有する、１−（４−アミノフェニル）
−１，２−ジカルバクロソードデカルボラン（１２）の
ジアゾニウム塩の２０倍モル過剰と反応させる。生成す
る抗体は抗体１分子当り、平均ジアゾ結合カルボラン残
基２ないし１０個、もしくは４ないし２０個のホウ素−
１０原子を有する。
（ロ）上記（ａ）部の抗ＡＦＰ−ＩＯＢを実施例１（ｆ
）の操作と同様に１−１３１で放射標識し、抗体１分子
当りヨー素平均１ないし１０原を導入する。
実施例１３ ゛・し′−る　　　の１゛ 無菌のパイロ−ジエン不合溶液は以下に示すように製造
される。
（ａ）　　無菌溶液は−当り以下の成分を含有する。
（１）ヒト血清アルブミン（ＩＳＡ）（１％、米局方、
バークデービス社）３．４＋ｎｇ （２）０．０４　Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ１，４ｃバイオ
ウ工ア社） （３）　０．９％ＮａＣ１ （４）実施例８によって製造したＩＩＩ　　ｌ−抗ＨＣ
ＧＩｇＧ（ヤギ）１０Ｍｇ（平均ヨー素約５原子／分子
、比放射能約８０μＣｉ／μｇ）実施例８の標識抗体は
２０Ｍｇ／ａｌｌの濃度で（１）、（２）および（３）
の溶液中に貯蔵され、そしてこの溶液を調製するために
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１％ＩＳＡの等容で希
釈される。
（ｂ）　　実施例１１で製造したＩ！ゴ　Ｉ−ＩｇＧの
５．１μｇ　／　ｍｌをさらに含有することを除いて、
上記（ａ）部の操作による無菌溶液。標識放射能５００
μＣ１／μｇにおけるＩ！ｆｆｉ１ｇＱは濃度１０．２
μに　／　ｍＲにおいて１％ＩＳＡを含むリン酸緩衝食
塩水中に貯蔵される。この溶液の等容が（ａ）部の操作
におけるＰＢＳ中１％ＨＳ　Ａの代りに使用される。
（Ｃ）　　抗体が実施例９（ａ）により製造され、濃度
２０ｕｇ／ｍｌｌにおいてＰＢＳ中１５Ｈ３Ａ中に貯蔵
され、そして匹敵する比放射能を有する１３１　　ｉ−
抗ＡＦＰ　　ＩｇＧ（ヤギ）であることを除き、（ｂ）
部の操作による無菌溶液。
（（１）実施例１０により製造したｌ：ｌｆｆ　　ｌ−
抗ＡＦＰＩｇＧ（モノクローン性）１０ｔＩｇ／Ｉｄｌ
をさらに含有することを除き、（ｔ））部の操作による
無菌溶液。
１３１■−抗１１ＣＧ　　ＩｇＧ、’Ｚゴ　Ｉ−ＩｇＧ
および１３３■−抗ＡＦＰ　　ＩｇＧはそれぞれ最終溶
液の所望の比放射能の３倍の濃度で貯蔵され、そして各
溶液の等容が無菌溶液の調製に使用される。
（ｅ）抗体が実施例１２により製造され、抗体１分子当
りジアゾ結合カルポラン基を平均５個およびヨー素平均
１原子と、そして比放訃能１６μＣｉ／μｇを有する１
１　　Ｔ−抗ＡＦＰ　　、ＩｇＧであることを除き、（
ｂ）部の操作による無菌溶液。溶液は抗体５０．４μｇ
／ｄ含有する。
実施例１４ 種漉位１面淀− 放射性ヨード化した抗体は腫瘍の疑いある患者に投！ｊ
−される。患者はヤギＴｇＧに対するアナフィラキシ−
過敏症に対して事前テストされる。■−１３１またはｌ
−１２３の甲状腺摂取を阻止するため、ルゴール液（ピ
ュアバック社）が放射性標識抗体の注射１日前から始ま
る７日前５滴づつ毎日２回口から投与される。
（ａ）　　位置測定は、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ　ｅｔ　
ａｌ、　Ｎ、εｎｇ、　Ｊ。
Ｍｅｄ、　、％謬−，１−５８４（１９７８）の操作に
より、無菌生理食塩水２０瀬中実施例１３い）によって
製造したＩｔ３１−ＩｇＧを含有すル１３ＩＩ−抗ＨＣ
ＧＩｇＧの溶液３．５　ｍｌを１０ないし２０分を要し
て注入することにより実施される。Ｔｃ−９９ｍ化合物
は使用せず、減算技術は慣用の態様でｌ−１３１とｌ−
１２３とを識別するのに適応している。
抗体の注射完了直後および２．８，１２，２４゜４８お
よび７２時間走査が行われる。
データ解析はフォト操作データをタンピユータ−に記憶
させ、標識した正常免疫グロブリンの放射能レベルを少
なくとも１つの標的区域における標識抗体のそれと等化
し、各データポイントについて標識抗体に対するバック
グラウンドレベルを計算し、各データポイント毎に標的
を指向した抗体の活性に対する値を発生するため、写真
毎に全抗体活性からえらえたバックグラウンド値を減算
し、そして得られる標的指向抗体活性の発生した値を関
連する出力信号を発生させるために使用することを含む
や 有意を局在化が２時間後に見られ、時間とともに解像度
が改善され、注射後８ないし２４時間で高原へ達する傾
向がある。追加のバックグラウンド＋２ｆｆｌｉｇＧは
加えない。この方法はＨＣＧ選択性は以前のＧｏｌｄｅ
ｎｂｅｒｇ　ｅｔ　ａｔの方法に匹敵するが、しかし解
像度、速さおよび便利さは著しく増強される。
造影はＨＣＧを排泄するこう丸生殖細胞腫瘍を持つ患者
において特に成功する。これら患者の２次的骨盤および
腹部腫瘍もまた成功して位置測定され、それらのうちあ
るもの、例えば腹部転移はコンピューター化した腹部断
層撮影法、静脈内賢う造影法および下部ビナキアボグラ
フィーによっては検出困難または不可能である。
（ｂ）　　抗体が実施例１３（Ｃ）で製造した１２：１
１−ＩｇＧを含有する溶液中の１３１　１−抗ＡＦＰ　
　ＩｇＧであることを除いて、（ａ）部の操作を繰り返
す。
造影は（ａ）のそれに匹敵し、こう丸および肝臓がんを
有する患者に特に成功である。しばしば高く上昇するＡ
ＦＰレベルにもか−わらず、２次的腹部および肺転移が
よく位置測定される。
（Ｃ）　　抗体溶液が実施例１３（ｄ）により製造した
１ｆｆｌ　　ｌ−抗ＨＣ，Ｇ　　ＩｇＧ、ｌ”　Ｉ−抗
ＡＦＰ　　ＩｇＧおよび＋ｚｚＨ−■ｇＧの３．５１ｎ
１であることを除き、（ａ）部の操作が繰り返される。
フォト走査データが慣用手段で１−１３１．ｌ−１３３
およびｌ−１２３放射を分離し、標識標的抗体に対する
バ・ンクグラウンド値を決定するため等化した！−１２
３／ｌ−１３１およびｌ−１２３／ｌ−１３３比を記憶
して使用し、これらを各抗体に対する個別的標的指向活
性を計算するため減算することによって解析される。
造影は（ａ）部および（ｂ）部の別々の抗体走査により
成功して造影されたすべてのタイプの腫瘍に対して成功
である。走査の組み合せは多数の場合において、特に胎
児性がんにおいて増強された位置測定および解像度を与
える。
実施例１５ Ｕ廣血廠 （ａ）　　場合により実施例１４（ａ）の走査によって
検出され、位置測定されたこう丸生殖細胞がんを有する
患者に、無菌生理食塩水５０ｔｎｆｌ中実施例１３（ａ
）の溶液１５０ｍｃｉを静注する。腫瘍の縮小が２０日
以内に観察される。この投与は個人毎に調節される間隔
で繰り返される。
し）−場合により実施例１４（ｂ）の操（ｎこより検出
され、位置測定された肝臓がんを有す４患者に、患者の
体重７０ｋｇに対してＩＩＩ　　ｌ活性２．８　ｍ　Ｃ
ｉを与えるのに充分な量の実施例１３（ｅ）の溶液（無
菌生理食塩水５０ｄ中）を注射する。ｌｌ！１１瘍は実
施例１３の操作を用いて注射１２時間後に精密に位置測
定される。よくコリメートした熱中性子ビームが区切ら
れる腫瘍位置へ集中される。ｃｄｌ当り３×ｌＱＩ！中
性子の照射が各腫瘍位置について実施され、そして個人
ベースで調節された間隔で、放射標識しまたはしない腫
瘍位置測定抗体の投与と共に繰り返される。成功した腫
瘍縮小が観察される。
実施例１６ （ａ）　　リン酸緩衝食塩水中１５■／　ｍｌｌの実施
例１で製造したアフィニティー精製したヤギ抗ＣＥＡＩ
ｇＧ２ｄが、４℃において２４時間、１００ｍＭ酢酸ナ
トリウム緩衝液、ｐＨ４，０（ＮａＡｃ）に対して透析
される。抗体溶液はねじ蓋つき試験管へ移され、３７°
Ｃへ予熱され、そしてＮａＡｃ中３　ｍｇ　／　ｍｌの
ブタペプシン（シグマ社＞　０．１　ｍと３７°Ｃで１
６時間インキュベートされる。沈澱を含むダイジェスト
は１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７，５（Ｐ
Ｏ４）に対して４℃で６時間透析される。得られる溶液
はセファデックスＧ−１００上でＰＯ，でクロマトグラ
フされ、Ｆ（ａｂ’）、フラグメントは２番目のタンパ
クビークに溶離される。Ｆ（ａｂ’）ｚ分画を合し、限
外口過で濃縮し、５０ｍＭ　　ＰＯＡ　、ｐＨ７，５に
対し透析し、そして−２０°Ｃで貯蔵する。
０））ゲル口過前の（ａ）部で得られた溶液をサンプル
ｄ当り７μｌの２−メルカプトエタノールで処理し、４
°Ｃで０．５時間一定のかきまぜのもとにインキュベー
トする。サンプルＩｄ当り、１Ｍヨードアセタミド０．
１３５ｍを加え、混合物をかきまぜなから４°Ｃで１時
間インキュベートし、遠心して清澄化する。
得られる粗製Ｆａｂ’フラグメント溶液はセファデック
スＧ−１００上でゲルロ遇され、抗ＣＥＡＦａｂ’　フ
ラグメントは２番目のタンパクビークに溶離される。ビ
ーク２の分画がプールされ、限外口過により濃縮され、
５０　ｍＭ　　Ｐ　Ｏａ　ｐ　Ｈ７，５に対して透析さ
れ、−２０℃で貯蔵される。
（Ｃ）　　前記（ａ）部の操作により、抗ＨＣＧ、抗Ａ
ＦＰ。
抗Ｃ３Ａｐ、抗ＣＧＡ、抗ＧＥＡ、抗ＧＦＡ、抗ＣＭＡ
および抗ＨＡＡＡのＦ　（ａｂ’　）、フラグメントが
製造される。
（ｄ）　　前記（ａ）部および（ロ）部の操作により、
抗ＨＣＧ。
抗ＡＦＰ、抗Ｃ３Ａｐ、抗ＣＧＡ、抗ＧＥＡ、抗ＧＦＡ
、抗ＣＭＡおよび抗ＨＡＡＡのＦａｂ’フラグメントが
製造される。
（ｅ）”’　　ｌ−１ｍＣ１当り、前記（ａ）部または
（Ｃ）からＦ　（ａｂ’　）、フラグメント４．４ない
し１０１２μｇ、または前記（ｂ）部または（ｄ）部か
らのＦａｂ’フラグメント２．４ないし５．６μｇがＩ
ＩＩ　　ｌ　（アマーシャムーサール社）を含む放射性
核種バイアル中へ注射され、実施例１　（ｆ）の操作と
同様に放射標識される。
得られる＋３１　　［−抗体Ｆ（ａｂ’）、は、フラグ
メント当りヨー素平均３ないし７原子を有する。
各バッチからの無作為部分標本は個々に無菌性、発熱原
性、毒性およびその他の品質管理変動についてテストさ
れる。
実施例１７ フラグメントの　１および （ａ）　　Ｎ　ａ　Ａ　ｃ　ｍ１ｊｊ液ｐ　Ｈ５，０中
１５ｍｇ／ｍｆｆ１溶液の形の、実施例１６　（Ｃ）で
製造した抗ＣＥＡおよび抗Ｃ３Ａｐ　Ｆ　（ａ　ｂ’　
）ｚフラグメントの等量混合物がザンブルｍｌ当り７μ
ｒの０．０１Ｍ２−メルカプトエチルアミン塩酸塩溶液
で処理され、一定したかきまぜのちとに３７°Ｃで１時
間インキュベートされる。混合物は還元剤を除去するた
めｐＨ５で４０°Ｃにおいてイオン交換カラム（ＩＲ１
２０）を通され、得られる溶液はｐ　）［８に調節され
、ゆるやかにかきまぜながらそして酸素を溶液に通しな
がら２時間かきまぜる。溶液は次にＰＯ，に対して４°
Ｃで６時間透析され、実施例１６（ａ）の最終工程のよ
うにセファデックスＧ−１００上Ｐ０４でクロマトグラ
フされる。
Ｆ（ａｂ”）、混成フラグメントを含存する分画は２番
目のタンパクビークに溶離泊れる。この分画は臭化シア
ンで結合し、たＣ　Ｅ　、ＡおよびＣ３Ａｐを含む別々
のセファローズ４Ｂカラム上のアフィニティークロマト
グラフィーにかけられる。両方のカラムに保持される分
画は混乱的に解離され、セファデックスＣ，−１００上
で再クロマトグラムされ、そして硫安で沈澱し、解離し
そしてＰｏ４に対し透析することによってさらに情調さ
れ、そして抗ＣＥＡ／Ｃ３Ａｐ　　Ｆ（ａ　ｂ’　）ｚ
の溶液は一２０″Ｃで貯蔵される。
ら）上記（ａ）部の操作により、以下の混成Ｆ（ａｂ’
）フラグメントが製造される。成分Ｆａｂ’記号はそれ
らの抗体源によって示される。
（１）抗ＡＦＰ／ＨＣＧ　　Ｆ（ａｂ’）。
（２）抗ＣＥＡ／ＰＡＰ　　Ｆ　（ａ　ｂ’　）　ｚ（
３）抗ＣＧＡ／ＣＥＡ　　Ｆ　（ａ　ｂ’　）　２（Ｃ
）　　上記（ａ）部および（ｂ）部で製造したフラグメ
ントはそれぞれ実施例１（ｒ）の操作に同様にｌ−１３
１またはｌ−１３３のどちらかで放射標識される。
実施例１８ １Ｇフーグメントの　　　よび 正常ヤシＩｇＧ（マイルス社）が臭化シアン結合された
ＨＣＧ、ＡＦＰ、Ｃ３Ａｐ、ＣＥＡ、ＰＡＰ、ＧＥＡお
よびＣＧＡに対してアフィニティー精製され、実施例１
６のｈ作によりフラグメント化され、そしてフラグメン
トが、ｌ−１２３を１−１３１の代りに使用し、そして
実施例３のように比放射能の差を補償するため試薬の比
例的変更を行うこと以外は実施例１（ｒ）の操作と同様
にＩ〜１２３で放射標識される。
実施例１９ ホウ　−１０　　　　フーグメン　の　　および見識 （ａ）　　抗体フラグメント、例えば実施例１６により
製造した抗ＣＥＡ　　Ｆ　（ａ　ｂ　’　）　ｚを、実
施例４（ａ）の操作と同様に、ホウ素−１０を天然存在
比に含む（２０％）、１−（３−アミノフェニル）−１
，２−ジカルバクロソードデカルボラン（１２）のジア
ゾニウム塩の２０倍モル過剰と反応させる。
得られるフラグメントは抗体フラグメント当りジアゾ結
合カルボラン残基を平均２ないし１０個もしくはホウ素
−１０を４ないし１０原子有する。
（ｂ）　　前記（ａ）部の抗ＣＥＡ−ＩＯＢ−Ｆ　（ａ
　ｂ’　）。
は実施例１（ｆ）の操作と同様に１−１３１で放射標識
され、抗体フラグメント当りヨー素を平均工ないし１０
原子が導入される。
（Ｃ）　　実施例１６（ｃ）のＦ　（ａｂ’　）ｚフラ
グメント、をそれぞれこの実施例の（ａ）部の操作にま
りカルボラン付加物を付加するように反応させ、得られ
るホウ素−１０含有フラグメントは実施例１（ｆ）の操
作と同様に放射標識され、抗体フラグメント当りヨー素
平均１ないＬＩＯ原子の標識が達成される。
（ｄ）　　ヨードアセタミドの代りに、１−（４−アミ
ノフェニル）−１，２−ジカルバクロソードテカルボラ
ン（ｉ２）のＮ−ヨードアセタミドが使用される以外は
、実施例１６（ｂ）の操作が繰り返される。該アミドは
、慣用方法により、塩基の存在下アミンをヨードアセチ
ルクロライドと反応させることによって製造される。得
られるＦａｂ’　フラグメントは、還元的開裂で遊離さ
れたスルフヒドリル基に、２個のカルポラノフェニル置
換アセタミド基を有する。ホウ素−１０含有フラグメン
トは、抗体フラグメント当すョー素平均１ないし１０原
子の標識を得るように、実施例１（ｆ）の操作と同様に
放射性ヨード化される。
（ｅ）　　実施例１７（ａ）および１７（ｂ）によって
製造した混成Ｆ（ａｂ’）２フラグメントをこの実施例
の（ａ）部のように反応させ、次に抗体フラグメント当
すョー素ｌないしｌＯ原子の標識を得るように、実施例
１　（ｆ）の操作と同様に放射性ヨード化される。
実施例２０ ？・・し′”る　　　の−Ｉ＋−１ 無菌のパイロ−ジエン不合溶液が以下のように製造され
る。
（ａ）　　ｔｅｌ当り、以下の成分の含有する無菌溶液
（１）ヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）（１％、米局方、
パークデービス社）３４ｍｇ （２）０．０４　Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，４（バイオ
ウェア社） （３）　０．９％ＮａＣ１ （４）実施例１６により製造した１！＋、４−抗ＣＥＡ
Ｆ（ａｂ’）！（ヤギ）　６．　Ｉ　ｔｔ　ｇ、（ヨー
素平均約５原子／分子、比放射能約１２５μＣｉ／μｇ
） 実施例１６の抗体は２４．４μｇ　／　ｔｅｌの濃度で
溶液（１）、（２）および（３）中に貯蔵され、この溶
液を調製するためにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の１
％Ｉ　Ｓ　Ａの３容で希釈される。
（ｂ）　　実施例１８で製造した比放射能５０ｏｌｌｃ
ｉ／μｇの””　　Ｉ　　Ｆ　（ａｂ’　）ｚを５．２
μｇ／ｒｄをさらに含有することを除き、上記（ａ）部
の操作による無菌溶液、”３１−Ｆ　（ａｂ’　）２は
濃度２０、８６　ｇ　／　ｍｌにおいて工％ＩＳＡを含
むＰＢＳ中に貯蔵される。この溶液の等容が（ａ）の操
作におけるＰＢＳ中の１％Ｈ３Ａの１容の代りに使用さ
れる。
（Ｃ）　　抗体が実施例１６により製造され、濃度４０
゜４μｇ／ＩｄにおいてＰＢＳ中１％ＩＳＡ中貯蔵され
（フラグメント当りヨー素平均２．５原子）、そして１
３１　１−抗ＣＥＡ　　Ｆ　（ａｂ’　Ｌ　７ラグメン
トの活性の約半分を有する１３１　１−抗ＡＦＰＦａｂ
’の１０．１μｇ／ｍｌ！であり、そして１２１　１−
Ｆ　（ａｂ’　）ｚの代りに”’１−Ｆａｂ’を１１３
１対ｌ−１２３の活性化が実施例２０伽）と同じになる
ような比放射能において含むこと以外は、（ａ）部の操
作による無菌溶液。
（ｄ）　　抗体が実施例１６により製造され、２４．４
μｇ／ｍｌの濃度でＰＢＳ中１％Ｉ　Ｓ　Ａに貯蔵され
、そして匹敵する比活性を有する１３１　１−抗Ｃ３Ａ
ｐ　　Ｆ（ａｂ’）、であることを除いて、（ｂ）部の
操作による無菌溶液。
（ｅ）　　抗体が実施例１７により製造され、２４．４
μｇ　／　ｍｌの濃度でＰＢＳ中の１％ＩＳＡに貯蔵さ
れ、そして匹敵する比活性を有するＩＩＩ　　■−抗Ｃ
ＥＡ／　ＣＳ　Ａ　ｐ混成Ｆ　（ａｂ’　）ｚであるこ
とを除き、（ｂ）部の操作による無菌溶液。
げ）それぞれ２４．４μｇ／ｒｒｄｌの濃度でＰＢＳ中
の１％Ｉ　Ｓ　Ａに貯蔵され、そして匹敵し得る比活性
を有する１３１■−抗ＡＦＰ　　Ｆ（ａｂ’）ｚおよび
１１＋　　１−抗ＨＣＧＦ　（ａ　ｂ’　）　！をそれ
ぞれ６゜１μｇ／ｄさらに含むことを除き、（ｂ）部の
操作による無菌溶液。それぞれの等容が（ａ）部の操作
におけるＰＢＳ中の１％Ｈ３Ａの１容の代りに使用され
る。
（６）実施例１７により製造し、２０．４μｇ／ｒｔｄ
ｌの濃度でＰＢＳ中の１％ＩＳＡ中に貯蔵され、そして
匹敵し得る比活性を有する′３３　■−抗ＡＦＰ／ＨＣ
Ｇ　　Ｆ　（ａｂ’　）ｚをさらに含むことを除いて（
ｅ）部の操作による無菌溶液。
（ｂ）抗体が実施例１７により製造され、２４．４μｇ
／〆の濃度でＰＢＳ中の１％Ｈ３Ａに貯蔵され、そして
匹敵する比活性を有する１３１１−抗ＣＣＡ／ＧＥＡ　
　Ｆ　（ａ　ｂ’　）　ｚ　７ラグメントであることを
除き、（ｂ）部の操作による無菌溶液。
（ｉ）　　抗体が実施例１９により製造され、抗体分子
当り平均５個のジアゾ結合カルボラン残基とヨード１原
子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比放射能を有
するＩｌｌ　　ｌ−抗ＣＥＡ−１０Ｂ　　Ｆ　（ａｂ’
）２フラグメントであることを除き、０））の操作によ
る無菌溶液。
（ｊ）　　抗体が実施例１９により製造され、抗体分子
当り平均５個のジアゾ結合カルポラン残基およびヨード
川原子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比放射能
を有する１ｆｆＩ　　ｌ−抗ＣＥＡ／Ｃ３Ａｐ　ＩＯＢ
混成　Ｆ（ａｂ’）、であることを除き、（ｂ）の操作
による無菌溶液。
最終溶液は抗体３０．６μｇ　／　ｍｌを含有する。
（ｋ）　　抗体が実施例１９（ｄ）により製造され、抗
体分子当り平均２個のアミド結合カルボラン残基および
ヨー素ｌ原子とを有し、そして約５２μＣｉ／μｇの比
放射能を有する＋３＋　　１−抗ＡＦＩ”ＢＦａｂ’　
フラグメントであることを除き、（１））部の操作によ
る無菌水溶液。最終溶液は抗体１６．８μｇ／ｄを含有
する。
（１）抗体が実施例１９（ｅ）により製造され、抗体分
子当り平均５個のアミド結合カルボラン残基およびヨー
素１原子とを有し、そして約２５μＣｉ／μｇの比活性
を有する１３１　１−抗ＣＧ　Ａ／Ｇ　Ｅ　Ａ１０１３
混成Ｆ　（ａｂ’　）ｚフラグメントであることを除き
、（ｂ）部の操作による無菌溶液。最終溶液は抗体３０
．６μｇ　／　ｍｆｌを含有する。
実施例２１ ＪｉＪＪＬ［を護憲 放射性ヨード化した抗体フラグメントは腫瘍の疑いのあ
る患者に投与される。患者は対応するＩｇｃフラグメン
トに対するアナフィラキシ−過敏症について事前テスト
される。ｌ−１３１または！−１２３の甲状腺摂取を阻
止するため、ルゴール液（ピュアパック社）が放射性標
識抗体フラグメントの注射１日前から始める７日間、５
滴づつ１日２回口から投与される。
（ａ）　　位置測定はＧｏｌｄｅｒｂｅｒｇ　ｅｔ　ａ
ｌ、　Ｎ、　Ｅｎｇ、　Ｊ。
Ｍｅｄ、、　１−５８４（１９７Ｂ）の方法により、無
菌生理食塩水２０ｍ１中の、実施例２０（ｂ）により製
造した＋２ｆｆ　　（Ｆ（ａｂ’）、を含む１３１１−
抗ＣＥＡＦ（ａｂ’）、の溶液３．５１ｎ１を１０分な
いし２０分を要して注入することにより実施される。Ｔ
ｃ−９９ｍ化合物は使用されず、減算技術は慣用態様で
ｒ−１３１およびｌ−１２３を識別するのに適応してい
る。フラグメントの注射の完了直後、および２，４，８
，１２，２４．４８および７８時間後走査が行われる。
データ解析は、フォト走査データをコンピューターに記
憶させ、標識した正常１ｇＧフラグメントの活性レベル
を少なくとも１つの標的区域における標識した特異フラ
グメントのそれに等化し、そして各データポイントに対
し標識したフラグメントのためのバックグラウンドレベ
ル値を計算し、得られたバンクグラウンド値を全フラグ
メント活性から減算し、各データポイントに対し標的へ
向ったフラグメントの活性のための値を発生させ、そし
て得られた標的指向フラグメント活性に対する発生させ
た値を関連する出力信号を発生するように使用すること
を含む。
２時間後に有意な位置測定が見られ、時間とともに改良
された解像度が得られ、注射後４ないし１２時間の間に
高原に達する傾向が見られる。追加のハックグラウンド
ｌｚｘ　　１−Ｆ（ａ　ｂ’　）　ｚは加えられない。
この方法のＣＥＡ特異性は以前のＧｏｌｄｅｒｂｅｒｇ
　ｅｔ　ａｌ法に匹敵するが、しかし解像度、速さおよ
び便利さは著しく増強された。
（ｂ）　　実施例２０［有］）の溶液の代りに実施例２
０　（Ｃ）の溶液３．５　ｍを使用し、上記（ａ）部の
操作が繰り返される。
造影は（ａ）部に匹敵し、こう丸および肝臓がんを有す
る患者に特に成功する。２次的肺および腹部転移は、し
ばしば高く上昇する血清ＡＦＰにもかかわらず良好に位
置測定される。
（Ｃ）　　実施例２０［有］）の溶液の代りに実施例２
０　（ｄ）の溶液３．５　ｍｆｌを使用し、（ａ）部の
操作が繰り返された。
造影は（ａ）部のそれに匹敵し、結腸がんを有する患者
に特に成功する。
（ｄ）　　実施例２０　（ｂ）の溶液の代りに実施例２
０　（ｅ）の溶液３．５　ｄを使用し、（ａ）部の操作
が繰り返される。
胃腸がんの造影は特にシャープで、この実施例の（ａ）
部および（Ｃ）部に匹敵する。
（ｅ）　　実施例２０（ｂ）の溶液の代りに実施例２０
（ｆ）の溶液３．５　ｄを使用し、（ａ）部の操作を繰
り返す。
この実施例の（ａ）、（ｂ）および（Ｃ）部で位置測定
および検出に成功したタイプのすべての腫瘍の造影に成
功する。組み合わせ走査は多くの場合、特にこう丸生殖
細胞、肝臓および肺がんに対して増強された位置測定お
よび解像度を与える。
（ｆ）　　実施例２０　（ｂ）の溶液の代りに実施例２
０（匂の溶液３．５　ｍＲを使用し、（ａ）部の操作を
繰り返す。
造影はこの実施例の（ａ）ないしくハ）部の操作により
造影されるすべての腫瘍タイプに対し、この実施例の（
ｂ）部のそれに匹敵する。
（（至）実施例２０　（ｂ）の溶液の代りに実施例２０
の）の溶液３．５　ｍｌを使用し、（ａ）部の操作を繰
り返す。脳の膠芽腫の造影に成功し、混成抗体は血液−
脳障壁を通過することができ、そして脳腫瘍中に集中す
ることを示す。
実施例２２ 腿簾面像 （ａ）　　場合により実施例２１の操作により検出され
、位置測定された卵巣がんを有する患者に、無菌生理食
塩水５０ｄ中実施例２０　（ａ）の溶液１５０ｍＣ１を
静注する。腫瘍サイズの縮小は２０日以内に観察される
。該投与は個人ペースで調節された間隔で繰返される。
（ロ）場合により実施例２１の操作により検出され、位
置測定された子宮頚部がんを有する患者に、患者の体重
７０ｋｇに対しＩＩＩ　　ｌ活性２．８ｍＣ１を与える
のに充分な量の実施例２０（ｉ）の溶液（無菌生理食塩
水５０１ｄ中）を注射する。
腫瘍は実施例２１の操作を用いて注射後１２時間で精密
に位置測定される。よくコリメートされた熱中性子ビー
ムが区切られた腫瘍位置に集中される。ｃＪ当り３Ｘ１
０＋！中性子の照射が各腫瘍位置に対して実施され、そ
して場合により個人ペースで調節された間隔で、放射標
識し、またはしない腫瘍位置測定剤の投与とともに繰り
返される。
成功する腫瘍縮小が観察される。
（Ｃ）　　実施例２０（ｉ）の溶液の代りに実施例２０
（ｊ）の溶液が使用され、患者が結腸がんを有すること
を除いて、上記（ロ）部の操作が繰り返される。成功し
た腫瘍縮小が観察される。
（ｄ）　　実施例２０（ｉ）の溶液の代りに実施例２０
（ト）の溶液が使用し、そして患者がこう丸生殖細胞腫
瘍を有することを除いて、（ｂ）部の操作が繰り返され
る。腹部転移の減少を含む、成功した腫瘍縮小が観察さ
れる。
（ｅ）　　実施例２０（ｉ）の溶液の代りに実施例２０
（１）の溶液を使用し、そして患者が脳の膠芽腫を有す
ることを除き、（ｂ）部の操作が繰り返される。成功し
た腫瘍縮小が観察される。
前記実施例は本発明の一般的にまたは特定的に記載した
反応剤および／または処理条件で前述の実施例中に使用
されたそれらの置き換えることにより、同様の成功度を
もって繰り返すことができる。
以上の記載から、当業者は本発明の基本的特徴を確かめ
ることができ、そしてその精神および範囲を逸脱するこ
となく、その各種の用途および条件に適応させるため本
発明の各種の改変を行うことができる。

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）（ａ）腫瘍マーカーに対し特異性であり、薬理学
    的に不活性なかつフォト走査装置を用いて外部から検出
    可能なラジオアイソトープの造影有効量で放射標識され
    た少なくとも１種のマーカー特異性抗体もしくは抗体フ
    ラグメントであって、ホウ素−１０アイソトープの少な
    くとも天然存在比を有するホウ素を少なくとも５原子含
    む少なくとも１種の付加物を化学的結合の形で含んでい
    る前記抗体もしくは抗体フラグメントと、 （ｂ）薬剤学的に許容し得る注射剤担体とを含むことを
    特徴とするヒト腫瘍治療用注射組成物。
  2. （２）前記腫瘍マーカーは腫瘍細胞表面マーカーである
    第１項の組成物。
  3. （３）前記腫瘍マーカーはがん胎児性抗原である第２項
    の組成物。
  4. （４）前記腫瘍マーカーは細胞内腫瘍マーカーである第
    １項の組成物。
  5. （５）前記腫瘍マーカーはアルファ胎児タンパク、ヒト
    ゴナントロピンもしくはそのベータ−サブユニット、ま
    たは結腸特異抗原−ｐである第４項の組成物。
  6. （６）前記ラジオアイソトープはヨウ素もしくはレニウ
    ムのラジオアイソトープである第１項ないし第５項のい
    ずれかの組成物。
  7. （７）前記抗体はモノクロナール抗体である第１項ない
    し第６項のいずれかの組成物。
  8. （８）前記抗体フラグメントはモノクロナール抗体フラ
    グメントである第１項ないし第６項のいずれかの組成物
    。
  9. （９）前記成分（ａ）は前記抗体フラグメントであり、
    前記腫瘍マーカーは前立腺酸性フォスファターゼ、すい
    臓腫瘍胎児性抗原、胎盤アルカリ性フォスファターゼ、
    妊婦ベータ−１−グロブリン、上皮小体ホルモン、カル
    シトニン、組織ポリペプチド抗体、Ｔ−抗原、ベータ−
    ２−ミクログロブリン、ガラクトシルトランスフェラー
    ゼII、ｇｐ−５２ビールス関連抗原、卵巣のう腫瘍関連
    抗原、卵巣腫瘍特異抗原、子宮頚管がん抗原ＣＡ−５８
    、子宮頚管がん抗原ＣＡＡ、子宮頚管がん抗原ＴＡ−４
    、塩基性胎児性タンパク、末端デオキシヌクレオチドト
    ランスフェラーゼ、細胞質黒色腫関連抗原、ヒト星状細
    胞腫関連抗原、神経謬原腺維酸性タンパク、通常髄膜腫
    抗原、および腫瘍脈管形成因子の１種である第１項の組
    成物。
  10. （１０）前記抗体フラグメントは、化学的結合の形で、
    第１の腫瘍マーカーに対して特異性の少なくとも１種の
    マーカー特異性フラグメントと、そして同じもしくは異
    なる腫瘍マーカーに対して特異性の少なくとも１種の第
    ２の異なるマーカー特異性フラグメントを含んでいる多
    価混成体である第９項の組成物。
  11. （１１）前記抗体フラグメントはモノクロナール抗体フ
    ラグメントである第９項または第１０項の組成物。
  12. （１２）前記ラジオアイソトープはヨウ素もしくはレニ
    ウムのアイソトープである第９項または第１０項の組成
    物。
  13. （１３）前記抗体フラグメントはモノクロナール抗体フ
    ラグメントである第１２項の組成物。
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