JPH02504387A - 金属イオンで抗体を標識付けする方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 金属イオンで抗体を標識付けする方法 発明の背景 タンパク質は、免疫診断および免疫治療の手順において種々の放射性金属および 他の放射性同位元素でｉｕａ付けされてきている。ある放射性金属はこれらの技 術における使用にすぐれた性質を有する。テクネチウム−９９ｍは、その核の性 質のため、シンチグラフィーの画像形成理想的な放射性核種である。それは１４ ０ｋｅＶの巣−のフォトン二不ルギー、約６時間の半減期を有し、そして９″Ｍ 　ｏ　−”Ｔ　ｃ発生体から容易に入手可能である。レニウムの放射線同位元素 は、標的細胞を殺すことができ、こうして治療において有用である、ベータ線放 射体である。レニウム−１８６およびレニウム−１８８は、また、追加の特徴と して、シンチグラフィー技術により画像形成を可能とする、ガンマ線放射を有す る。

２つの一般のアプローチは、タンパク質、抗体を放射性金属で標識付けするため に用いられて来ている。第１は、放射性金属をタンパク質分子それ自体に結合す る、直接１Ｉｔａ付は方法である。第２は間接標識付は方法であり、ここでキレ ート剤をタンパク質に結合し、そして放射性金属をキレート剤を経てタンパク質 に結合する。

ローデス（Ｒｈｏｄｅｓ）は、配位子固相交換を包含する、タンパク質をテクネ チウム−９９ｍで直接ｆ！ＪＩ＆付けする方法を開示している。参照、米国特許 第４．３０５，９２２号。ローデスの方法に従い、パーテクネテート（ｐｅｒｔ ｅｃｈｎｅｔａｔｅ）をテクネチウム１ｖに還元し、次いでセファデックス（Ｓ 　ｅ　ｐ　ｈ　ａ　ｄ　ｅ　ｘ）　＠カラム上に適用する。

還元されたテクネチウム−９９ｍはセファデックス物質に結合する。標識付けす べきタンパク質の溶液をセファデックスカラムの上部へ注ぎ、ここにそれを止ま らせて、配位子の交換が起こるようにする。結局、テクネチウム−９９ｍはセフ ァデックス物質からタンパク質に優先的に移送される。タンパク質は塩化第一ス ズで予備処理して（「予備スズ化（ｐｒｅｔｉｎｎｉｎｇ）と呼ばれる手１１１ ［）タンパク質への放射性金属の移送を高める二とができる。参照、米国特許第 ４．４２４，２００号。

種々の試越がタンパク質を放射性金属で間接アプローチによりｓｗＬ付けするた めのなされてきている。１つのこのようなアプローチにおいて、キレート剤、例 えば、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）をタンパク買上へ接合し、 次いで金属イオンをタンパク質分子に取り付けられたキレート剤上に標識付けす る。例えば、ナラ（Ｋ　ｎ　ａ　ｗ）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２０ ９　：　２９５−２９７　（１９８０）は、ＤＴＰＡを経てインジウム−１１１ で標識付けされｔ：心臓ミオシンに対する抗体、およびＩＩ識抗体を心筋梗塞の 画像形成のために使用することを開示している。参照、また、タレジカレク（Ｋ ｒｅｊｃａｒｅｋ）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ ・コミニニケーシ曹ン（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｔｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｒｎ 、）、ヱヱ：５８１−５８５　（１９７７）；ジルズ（Ｃｈｊｌｃｌｓ）、Ｒ， Ｌ。

およびフトウィッチ（Ｈｎａｔｏｗｉｃｈ）、Ｄ、Ｊ、、ジャーナル・オブ・ニ ュークリアー・メディシン（Ｊ、Ｎｕｃｌ、Ｍｅｄ、）、２Ｂ−：２９３（１９ ８５）。より最近のアプローチにおいて、フリツペルグＣＦｒｉｔｚｂｅｒｇ） らは、キレート剤として、特定のジアミノジチオールおよびジアミノジチオール の群の使用を開示している。フリツベルグ（Ｆｒｉｔｚｂｅｒｇ）ら、ジャーナ ル・万ブ・二ニークリアー・メディシン（Ｊ、Ｎ＊ｃ　１．Ｍｅｄ、）、２ユニ ９５７　（１９８６）；欧州特許出顯第１１００３６ｃｌ　６号。

種々の程度の成功は、放射性金属によるタンパク質の標識付けの直接および間接 の方法の両者を用いて達成されてぎている。しかしながら、標識生成物は生体内 でしばしば不安定である。さらに、使用前の標識生成物を精製する技術はしばし ば要求される。放射性免疫診断および放射性免疫治療の手順のために、タンパク 質を安定に標識付けする歌良された方法が必要とされている。

発明の要約 本発明は、放射性金属のチク洋チウムー９９ｍルニウム−１８６、レニウム−１ ８８、レニウム−１８９およびレニウム−１９１でスルフヒドリル含有抗体また は抗体断片を標識付けする、簡単な、急速かつ効率よい方法に関する。一般１； 、この方法は、工程：ａ１構成： ｉ）放射性金属、および ｉｉ）還元剤および水溶性配位子、前記配位子は放射性金属を錆化して可溶性放 射性金属−配位子の錯化合物を形成することができる、の混合物を形成し、そし て ｂ１前記混合物をスルフヒドリル含有抗体まＩ；は抗体断片と、前記放射性金属 が抗体または断片に移送させて放射性金属標識された抗体または抗体断片を形成 できる条件下Ｌ：、接触させる、からなる。

チク矛チウムー９９ｍ標識抗体または抗体断片は、放射線免疫診断の目的、例え ば、免疫シンチグラフィーのために有用である。レニウム標識抗体まｔ；は抗体 断片は、治療に使用することができる。

好ましい配位子は、約１０．０００ダルトンより小さい分子量を有するポリヒド ロキシジカルボン酸またはその塩である。ことに好ましい配位子は糖酸である。

糖酸はその還元された状態のテクネチウム−９９ｍと、有意のテクネチウムコロ イドを形成させないで、急速にかつ安定に錆化する。スルフヒドリル含有抗体と 接触させるとき、テクネチウム−９９ｍは抗体に優先的に移送されて、安定な標 識抗体を形成する。

この方法において使用するｔこめに好ましい還元剤は、第一スズの還元剤、例え ば、塩化第一スズである。これらの試薬は、テクネチウムを効果的に還元し、そ して薬理学的に許容されうる。

本発明の方法は、全抗体（例えば、１ｇｃｔ）または抗体断片（例えば、Ｆａｂ ’）を標識付けするために使用することができる。全抗体は、例えば、還元剤の ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元して、スルフヒドリル含有抗体を生成する ことができる。Ｆａｂ’断片はこの手順による標識付けにことに適当する。非酸 化性条件下に、これらの断片は、（Ｆ（ａｂ’）２断片中に存在するジサルファ イド架橋の還元により生成されるので）遊離のスルフヒドリル基を含有する。は とんどの放射線免疫診断技術のために、抗体断片、例えば、Ｆａｂ’断片は好ま しく、こうして、本発明の標識付は手順はこれらの技術のために放射線製剤の調 製にことに適当する。

抗体または抗体断片を表示した放射性金属で放射性標識付けする方法は、簡単な ２つのバイアルの手順として実施する巳とができる。この目的に対して、臨床医 がその場ですぐに使用する形態で試薬を有するキットを提供することができる。

例えば、このようなキットは、還元剤（第一スズのイオン）および水溶性配位子 （例えば、糖酸ま！；はその塩）を含有する第１バイアル、および特定の診断ま １；は治療の手順ｌ二適しｔ；Ｆａｂ’断片を含有する第２バイアルを包含する ことができる。反応は好ましくは水性媒質中で実施するが、試薬は凍結乾燥され た、凍結された、または水性の形態で供給する二とができる。テクネチウム−９ ９ｍ１ｌｌｌｌ＆断片の調製のために、テクネチウム−９９ｍ（一般にバーチク 不テートの形態）を第１バイアルに添加し、次いで第１および第２バイアルの内 容物を混合し、そして十分な時間インキニベーシａンして、テクネチウム−９９ ｍｔ−Ｆ　ａ　ｂ’断片に定量的に移送する。次いで、この組成物を患者に精製 しないで注入することができる。レニウムを使用する標識付けのために、レニウ ムのアイソトープ（ベルヘネート（ｐｅｒｒｈｅｎａｔｅ）の形態）をテクネチ ウムの代わりｌ：使用する。レニウム標１ｋＦａｂ’断片は、また、精製しない で注入するために適する。

好ましい実施態様において、放射性標識付けは単一のバイアルにおいて＊施する ことができる。キットは、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片、還元剤（例 えば、第一スズのイオン）、および好ましくは水溶性配位子（例えば、Ｄ−グル カル酸またはその塩）から構成された抗体混合物を包含することができる。抗体 混合物は、好ましくは、凍結乾燥された形態で供給するが、凍結または水性の形 態も適する。テクネチウム−９９ｍ（一般に■′″Ｔｃバーテクネテートの形態 ）をバイアルに添加し、そして生ずる混合物を十分な時間インキュページＩンし て、チク坏チウム−９９ｍを抗体または抗体断片に移送させる。次いで、この組 成物を精製しないで患者に注入することができる。本発明の方法により調製され たチク坏チフムー９９ｍ＃識抗体または抗体断片は、診断の目釣に、例えば、ｍ 瘍、心筋梗塞、血栓またはバクテリア性Ｉｉ！瘍の免疫ンンチグラ７／−に使用 することができる。レニウム標識抗体は、治療のためにレニウム放射性同位元素 を生体内に選択的に供給するために使用することができる。

本発明の方法は、いくつかの重要な利点を有する。前述したように、使用する配 位子は、有意の量のテクネチウムコロイドを形成しないで、テクネチウム−９９ ｍを錯化合物として安定な形態で定量的に錆化することができる。適当な条件下 にスルフヒドリル含有抗体と接触すると、錯化したテクネチウム−９９ｍスルフ ヒドリル含有含有−寅質的に定量的に移送されるので、放射線診断の組成物は非 常に高い特異的活性をもって調製することができる。この方法により標識付けさ れた抗体または抗体断片は、それらのもとの免疫活性を保持し、結局それらの標 的特異性を保持する。放射性標識付けされた抗体は溶液中で、および血清中で安 定である。この方法により標識されたＦａｂ″断片を生体内に投与するとき、肝 臓中ノ；蓄積される標識は非常にわずかであり、これは標識抗体が生体内で安定 であることを示す。さらｔ；、この標識付は方法は急速に実施することができ（ それは１時間より短い時間で完結することができる）そしてこの方法は室温にお いてｐＨ５〜９で５！施することができるゎｍａされた生成物は、使用前に、精 製を必！としない。

図面の簡単な説明 第１図は、テクネチウム−９９ｍ標識ミオンン特異的Ｆａｂ’断片の注射後、種 々の時間におけるイヌのガンマ線シンチグラムを示す。

第２図は、異なる図面から取った同一のイヌのガンヤ線シンチグラムを示″ｒ０ 第３図は、１つのバイアルおよび２つのバイアルのｌＩ識付はキットにおいて調 製された、抗フィブリンＴ２ＧＬＳを使用して実施した、血液においてマウスの 生物分布の研究の結果を示す。

第４図は、１つのバイアルおよび２つのバイアルの標識付はキットにおいて調製 された、抗フィブリンＴ２ＧＬＳを使用して実施した、肝臓においてマウスの生 物分布の研究の結果を示す。

第５図は、１つのバイアルおよび２つのバイアルの標識付はキットにおいて調製 された、抗フィブリンＴ２ＧＬＳを使用して実施した、牌臓に８いてマウスの生 物分布の研究の結果を示す。

第６図は、１つのバイアルおよび２つのバイアルの標識付はキットにおいて調製 された、抗フィブリンＴ２ＧＬＳを使用して実施しｔ：、腎臓においてマウスの 生物分布の研究の結果を示す。

第７図は、１つのバイアルおよび２つのバイアルの標識付はキットにおいて調製 された、抗フ４プリンＴ２ＧＬＳを使用して実施した、大腸においてマウスの生 物分布の研究の結果を示す。

発明の詳細な説明 １つの実施態様ｌ：８いて、本発明の方法は、テクネチウム−９９ｍ（ｌＩ！化 された状態）を水溶性配位子と還元剤の存在下に反応させて、還元された状態（ 例えば、ＩＶまたはＶの原子価状態）のテクネチウム−９９ｍと配位子との間の 錆化合物を形成し、次いでこの錯化合物を１または２以上のスルフヒドリル基を 含有する抗体または抗体断片と反応させること１：よって実施する。スルフヒド リル含有抗体をテクネチウム−９９ｍで標識付けする好ましい＋Ｘ態様において 、水性ナトリウム９９ｍパーテクネテートを第一スズの還元剤および糖酸（また はその塩）の水溶液と混合して、■″″Ｔｃ″Ｔｃ−サツカレートｃｈａｒａｔ ｅ）錯化合物を形成する。次いで、この錯化合物なＦａｂ’断片と接触させ、そ して、錯化合物からテクネチウム−９９ｍをＦａｂ’断片に交換してテクネチウ ム４［ｉ＆Ｆａｂ’断片を形成できる時間の間および条件下に、インキニペーン ヨンする。全体の手順は、１時間より短い時間で室温および約５〜９のｐＨにお いて実施することができる。これらの条件下に、テクネチウム−９９ｍの本質的 に完全な移送（＊　＊　７　ｃ−サッカレート錯化合物から抗体タンパク質への ）は、抗体の免疫活性を有意に損失しないで、達成することができる。

１つのバイアルの技術 本発明は、単一のバイアル中のタンパク質の放射性標識付けする方法を提供する 。酸化された状態のテクネチウム−９９ｍの還元および放射性標識付は反応（す なわち、タンパク質の放射性同位元素の結合）は、同一バイアルにおいて達成さ れる。ここで使用するとき、用Ｎ［バイアル（ｖｉａｌ）Ｊは、任意の型の反応 器を言及し、そしていがなる方法においても限定を意図しない。この方法は、簡 単であり、効率的であり、そして再現性があり、そして放射性標識付けを実施す る人への安定性の危険を最小にする。本発明の方法は、診断のために抗体（ポリ クローナル抗体およびモノクローナル抗体）をｓｍ付けするｔ；めに特に適する 。

抗体は、この方法ｔこより、免疫活性の損失を最小にして、高い特異的活性にＩ Ｉ識付けすることができる。

テクネチウム−９９ｍで標識付けする２つのバイアルおよび他の既知の方法より すぐれた、本発明の１つのバイアルの方法の利点は、次のものを包含する：（１ ）周囲の条件下における急速な標識付け。９０％より大きい標識付けの収率は、 加熱せずに周囲温度において５〜１５分で達成することができる。診断剤のほぼ 瞬間的な調製の臨床的利点は、寅質的であることができる。（２）単一のバイア ルの方法の凍結乾燥された配合物の安定性は、２つのバイアルの方法において使 用する匹敵する配合物よりすぐれる。（３）１つのバイアルの方法から生ずる生 成物の生物分布の研究は、重要な器官において統計的に有意の差を示す。腎臓お よび肝臓における吸収は、この方法により生成された生成物ではより低い。血液 のｉｌＦ浄化は有意に速い。これらのタイプの差は、この方法からの生成物がよ り低いバックグラウンド、重要な器官へ吸収される線量がより低いこと、および 問題の区域を映像するより速い能力を生ずるより速い血液の清浄化を生成するで あろうことを示す、すべてのこれらは寅質的な臨床的利点であろう。（４）生成 物の血漿安定性はより大きい。

これは、生体内で診断剤として働くべき、より生存し得る無傷の生成物を提供す る。

好ましい実施態様において、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片、還元剤大 きい水溶性配位子から構成された抗体混合物をバイアルへ添加する。好ましくは 、密閉可能なバイアルを使用し、これは、好ましくは無！または準無菌の条件下 に、試薬を導入および抜き出す手段を有する。

注射器の注入口を含有するバイアルは好ましい。すべての試薬は注射器により反 応バイアルに注入しかつそれから抜き出すことができ、これにより放射性試薬ま たは生物危険性の試薬への暴露を減少することができる。最も好ましいｇｉ！施 態様において、この混合物を凍結乾燥し、そしてバイアルを予ｍ密閉し、そして その形態で使用のために供給する。抗体または抗体断片を標識付けするために、 酸化された状態のテクネチウム−９９ｍを抗体混合物と接触させる。次いで、放 射性標識性は反応を進行させる。イン卑二ベージフンの期間および条件は臨界的 ではないｅ好ましくは、インキュベージ１ンは約１分〜約６０分、最も好ましく は約５分〜約３０分間冥施する。

標識付は反応の完結後、標識された抗体または抗体断片をバイアルから抜き出す 。分離または精製は必要ではない。全体の手順は周囲温度および約５〜９のｐＨ において１５分より短い時間で！＋［することができる。これらの条件下に、テ クネチウム−９９ｍによる抗体まｔ：は抗体断片の本質的に完全な標識付けを、 抗体の免疫活性を有意に損失しないで、達成することができる。

この方法において使用する種々の試薬およびこの方法のパラメーターを、下に詳 述する。

配位子 一般に、本発明の方法において有用な配位子は、テクネチウム−９９ｍまたはレ ニウムの放射性同位元素とそれらの還元された状態で錆化して、安定な金属イオ ン／配位子錯化合物を形成することができる、水溶性（または水溶性とすること ができる）キレート剤である。錯化合物はテクネチウム−９９ｍをスルフヒドリ ル含有抗体または抗体断片と交換することができる。

本発明の標識付は方法において使用できる配位子のあるものは、式：％式％） 式中、 Ｘ８よびＹはＯＨまたはＮＨ，であり、ＲおよびＲ′は、独立Ｉ：、８％Ｃ０Ｏ Ｈ，またはＣＨ２０Ｈであるか、あるいはＲおよびＲ′は一緒になって環または ２座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍａｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ５ は、独立に、Ｈ１低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０またはｌであり、ただしｐが１であるとき、ｍお よびｎは独立に少なくとも１である、 により表される。本発明において使用するための好ましい水溶性配位子のあるも のは、式： ％式％） 式中、ＲおよびＲ′はＣ０ＯＨまたはＣＨ，ＯＨであり、モしてｎ−２〜ｌＯで ある、 により表される。この式により表される配位子のうちで、約１０．０００ダルト ンより小さい分子量を有するポリヒドロキシジカルボン酸は最も好ましい。これ らのタイプの配位子のいくつかの特定の例は、糖酸、グルコヘプトン酸、酒石酸 、ガラフタル酸、アラポン酸、およびそれらのＩＦ：類である。

この方法における使用に特に好ましい配位子は、糖酸である。前述したように、 糖酸はテクネチウム−９９ｍと錯化して、安定なテクネチウム−９９ｍ−サッカ レート錆化合物を急速に形成する。スルフヒドリル含有抗体または抗体断片と接 触させると、錯化合物からタンパク質への突貫的に定量的な移動が急速にかつ温 和な条件下に達成される。後述するように、テクネチウム−９９ｍは優先的に好 適なタンパク質分子上の結合部位に移送される。この優先的な移送は、免疫活性 でありかつ生体内で例外的に安定である、標識された抗体または抗体断片を生ず る。

濫え刃 この方法において使用するための還元剤は、テクネチウム−９９ｍをその酸化さ れた状態から１ｖまたはＶの酸化状態に還元するためｌ；、あるいはレニウムを その酸化された状態から還元するために、生理学的に許容されうるものである。

この方法において使用することができる還元剤の例は、塩化第一スズ、酒石酸第 一スズ、およびジチオン酸ナトリウムであり；好ましい還元剤は第一スズの還元 剤、ことに塩化第一スズである。

テクネチウムおよびレニウムの放射性同位元素テクネチウム−９９ｍ源は好まし いは水溶性であるべきである。好ましい源はアルカリ金属およびアルカリ土類金 属のバーチク不テート（ＴＣＯ，−）である。テクネチウム−９９ｍは、最も好 ましくは、無菌のテクネチウム−９９ｍ発生体（例えば、普通の９９Ｍｏ／９９ ７Ｃ発生体）から、新鮮なナトリウムパーテクネテートの形態で得られる。しか しながら、生理学的に許容されうる任意の源を使用することができる。

ベルヘネート塩類の形態のレニウム放射性同位元素（同位元素１８６．１８８． １８９および１９１）は、適当な反応器の技術により生成することができるか、 あるいは適当な発生器でつくることができる。ベルヘネート塩類は安定性の可溶 性塩類であり、そしてパーテクネテートに類似して挙動する。ベルヘネートは、 還元にわずかにより大きい還元のポテンシャルを必要とし、そして酸素の存在下 にパーチク不テートより容易にベルヘネートに戻る傾向がある。この理由で、レ ニウムをその還ｘされた状態に還元かつ安定化するために、異なる条件を必要と するであろう。これらは当業者により寅験的に確認することができる。

スルフヒドリル含有抗体まツ；は抗体断片スルフヒドリル含有の全抗体まツ；は 低分子量の抗体断片は、本発明の方法により標識付けすることができる。スルフ ヒドリル基は分子上に存在する好適な結合部位の少なくとも一部を構成し、そし て放射性金属は・放射性金属−配位子の錯化合物から分子上のこれらの好適な部 位へ優先的交換されると、信じられる。抗体分子上のこれらの部位の優先的標識 付けは、例外的に安定なｉｉ＊された抗体を生ずる。

全抗体（例えば、ＩｇＧ）は、抗体を還元剤、例えば、ジチオスレイトールジチ オスレイトールで還元することによってスルフヒドリル基を有することができる 。ＤＴＴによる処理は、ジサルファイド架橋の還元により、スルフヒドリル基を 露出する。

はとんどの免疫診断手順のために、抗体断片は好ましい試薬である。

抗体断片は、画像形成するために全抗体よりすぐれた利点を有し、一般に、分布 および標的部位への蓄積がより急速であり、そして免疫原性がより少ない。Ｆａ 、ｂ″断片１価の抗体結合性であり、遊離のスルフヒドリル基を含有する（非酸 化性条件下に維持したとき）、これらの断片は本発明の方法により効率的に標識 付けすることができる。

Ｆａｂ’断片は全抗体から次のようにして調製することができる：抗体分子をま ずエンドペプチダーゼ、例えば、ペプシンで処理して、抗体分子のＦ　ｃ　９５ 分を放射性金属するゎ生ずるＦ　（ａ　’ｏ’　）　２ｍ！’Ｔ片を還元剤、例 えば、ＤＴＴまたは／スティンで処理して、Ｆ（ａｂ’）、断片上に存在するジ サルファイド結合を破壊して、分子上に存在するスルフヒドリル基を暴露し、こ れｊ二より１つの抗体分子について２つのＦａｂ’分子を生成する。

反応条件 還元剤の量は、テクネチウムを還元して、配位子に還元された状態で結合するよ うにするために必要な量である。好ましいモードにおいて、塩化第一スズ（Ｓｎ Ｃ１ｐ）は還元剤であり、そして１〜１，０００μｇ　／　ｍ　Ｑ　ｓ好ましく は約３０〜５０μｓ／ｍΩの範囲であることができる。糖ＩＩ（カリウムサッカ レートとして）の量は、約０．５ｍｇ／ｍＱから媒質中の最大可溶性量までであ る。糖酸の好ましい量は３０〜１５μｇ／ｍＱの範囲である。抗体（または断片 ）の量は、０．０１〜約３０　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｑ　ｓ好ましくは約０．１７− 約］、５ｍｇ／ｍ１２の範囲であることができる。最後に、パーチク不テートの 形態のテクネチウム−９９ｍは約５００μＣＩ／ｍＩ２、好ましくは約１−５０ ．ｃ＋Ｃｉ／ｍ（＋の量であることができる。抗体のμＣｉ／ｍｇの量は、好ま しくは約３〜１５０である。

抗体と金属イオン−移送配位子錯化合物の間の反応は、好ましくは、タンパク質 が安定であるｐＨにおいて、水溶液中で実施する。「安定」とは、タンパク質が 可溶性にとどまり、そしてその生物学的活性を保持することを意味する。通常、 反応のためのｐＨは約５〜９であり、好まし；ｖｐＨは約６〜８である。金属イ オン−移送配位子錯化合物および抗体を、好ましくは約り０℃〜約６０℃、最も 好ましくは約り０℃〜約３７℃の温度におし１て、金属イオンを配位子錯化合物 から抗体へ移送させることができるために十分な時間の間インキニベーシ！ンす る。一般に、］時間より短い時間は、これらの条件下に移送を完結するために十 分である。

この方法を実施するｔ；めのキット 標識付けの方法を実施するための試薬は、臨床における方法の便利な実施のため キットにアセンブリングする。最小で、抗体まｔ；は抗体断片を放射性金属で放 射性標識付けするためのキットは、１つの成分、還元剤（好ましくは第一スズの イオン）および糖酸またはその塩を含有するバイアル（＠閉および無菌）から成 ることができる。これらのキットは、ユーザーにより抗体または抗体断片が準備 されたとき、使用することができる。

キットは、また、標識すべきスルフヒドリル含有抗体または抗体断片を含有する 第２バイアルを含むことができる。２成分のキットは、次のものを包含するであ ろう： ａ１還元剤および水溶性配位子を含有するバイアル、およびす、非酸化性条件下 にスルフヒドリル含有抗体または抗体断片。

キットは、任意の特定の免疫診断間免疫治療の手順のために適当な抗体または抗 体断片を含有するように設計することができる（それらのあるものは下ｊ；説明 する）。

キット内の試薬は水性、凍結乾燥された形態で準備することができる。

凍結乾燥された調製物は、使用の時、水性媒質で希釈することができる。

バイアルの各々における試薬の量は、方法の選択したパラメーターに従い変化さ せるすることができる（上の反応条件を参照）。

試薬を、前述したように、２成分のキットとして準備するとき、標識付は手順は 、２つのバイアルの技術として簡単に実施することができる。

チク２、チウム−９９ｍ（例えば、水性ナトリウムパーチク不テートの形態で） 、水溶液中に還元剤および水溶性配位子を含有するバイアルに添加する。次いで 、２つのバイアルの内容物を混合し、そして十分な時間インキュベージ２ンして 、抗体または抗体断片の標識付けを実施する。

次いで、放射性標識付けした抗体または抗体断片は精製しないで直ちに使用する ことができる。

この方法を実施するための１つのバイアルのキット本発明の標識付けの方法を実 施するだめの試薬は、臨床における便利な実施のために単一のバイアルのキット として組み立てる。１つの９！施態様において、キットはスルフヒドリル含有抗 体または抗体断片、還元剤（好ましくは第一スズのイオン）および水溶性配位子 （好ましくはＤ−グルカル酸またはその塩）を含有する１つのキン）　（［閉お よび無Ｍ）を含有する。キットは、任意の免疫診断または免疫治療手順のために 適当な抗体または抗体断片を含有するようｔ：設計されている（それらのいくつ かを後述する）。

キット中の試薬は、水性、凍結または凍結乾燥された形態で提供することができ る。凍結乾燥された調製物は、使用の時、水性媒質で希釈することができる。バ イアルの各々における試薬の量は、方法の選択したパラメーターに従い変化させ るすることができる（上の反応条件を参照）。

標識付は手順は、テクネチウム−９９ｍ（例えば、水性ナトリウムパーチクるテ ートの形態で）を、抗体または抗体断片、還元剤および、好ましい突流態様ｌ： おいて、水溶性配位子を含有するするバイアルに単に添加することによって実施 することができる。次いで、２つのバイアルの内容物を混合し、そして十分な時 間インキュベーンタンして、抗体または抗体断片の標識付けを実施する。次いで 、放射性標識付けした抗体または抗体断片は精製しないで直ちに使用することが できる。

免疫診断に８ける傑識抗体の使用 テクネチウム−９９ｍ１ｌ識付けした抗体または抗体断片は、免疫シンチグラフ ィーにおいて使用することができる。１つの重要な使用は腫瘍の画像形成である 。前述したように、抗原はほとんどの免疫シンチグラフィー技術のために好まし い。腫瘍特異的抗体の標識付けＦａｂ″断片を調製し、そして−次または二次の 腫瘍の画像形成のために使用することができる。一般に、テクネチウム−９９ｍ 標識抗原は、（ｉ）９９ｍＴｃおよび（］ｉ）還元剤および水溶性配位子の水性 混合物を形成し、そして前記混合物を腫瘍に対して特異的なＦａｂ’断片と接触 させることによって調製する。

次いで、標識Ｆａｂ’断片を被検体に非経口的に注入（好ましくは静脈内注射） する。注入後、十分な時間を経過させて、４！！Ｊ識Ｆａｂ″断片を＠瘍の部位 に蓄積させる。次いで、被検体をガンマ線カメラで走査して、テクネチウム−９ ９ｍのガンマ線放射を検出し、これにより腫瘍の画像を得る。このようにして、 腫瘍は局在化し、そしてその大ぎさを決定することができる。

これらの手順において使用するための腫瘍特異的抗体断片は、抗結腸直腸癌抗体 、抗肝癌抗体、抗卵巣癌抗体、抗乳癌抗体、および抗前立腺癌抗体から誘導する ことができる。本発明の方法により標識付けし、そして腫瘍の映像のためｊ；使 用することができる腫瘍特異的抗体のいくつかの特定の例は、モノクローナル抗 体１７−ＩＡおよび１９−９（胃腸）、ＣＡ　　１２５（卵巣）および１０３Ｄ ２　（乳房）である。

本発明の方法により標識付けされた抗体は、心筋梗塞を標識付けするために使用 することができる。心筋梗塞を画像形成して、それらの大きさおよび位置を決定 することは、米国特許第４．４２１．７３５号（Ｈａｂｅｒ）に記載されている 。簡単に述べると、本発明の標識付は方法を使用すると、被検体における心筋梗 塞の画像は、まず、（ｚ　）　＠　９ｍ　７Ｃおよび（’ｉｉ）還元剤および” ”Ｔ　ｃのためん水溶性配位子の水性混合物を形成し、次いでこの混合物をミオ シン特異的Ｆａｂ’断片と接触させることによって、まずＴｃ−９９ｍ標識ミオ シン特異的Ｆａｂ’断片を調製することによって得ることができる。次いで、標 識ミオシン特異的断片を被検体に静脈内注射する（例えば、環状動脈閉塞後）、 標識断片を梗塞の部位に局在化させ、そして閉塞の画像をガンマ線カメラで心臓 を走査することによって得る。

標識ミオシン特異的Ｆａｂ″断片を産生ずるための好ましい抗体は、モノクロー ナル抗体ＲＩＩＤＩＯである。

さらに、フィブリン特異的Ｆａｂ’断片は、本発明の方法により標識付けして、 血液凝固を画像形成するための試薬を提供することができる。

Ｔｃ−９９ｍ標ｔｔｔフィブリン特異的断片は、（ｉ）″”Ｔ　ｃおよび（Ｘｉ ）還元剤および９９′″Ｔｃのための水溶性配位子の水性混合物を形成し、そし てこの混合物をフィブリン特異的Ｆａｂ’断片と接触させることによって調製す る。１′″Ｔｅ標識フィ標識フィブリン特異被断体に注射する。断片を血液凝固 の部位に局在化させた後、被検体を走査して凝固の画像を得る。フィブリノゲン と交差反応性でないフィブリン特異的抗体は、この画像形成技術のために好まし い抗体である。

バクテリアに対して特異的な抗体断片は、免疫シンチグラフィー技術１；おいて 使用して、被検体においてバクテリア性Ｓ瘍の画像を得ることができる。この目 的に対して、抗バクテリアまたは抗マクロファージの抗体断片を使用する。ダラ ム陰性バクテリアの共通の決定基に対する抗体（例えば、抗脂質Ａ抗体）を使用 して、ダラム陰性微生物により引き起こされるａａ＊を画像形成することができ る。抗体は、前述したようにテクネチウム−９９ｍで標識付けし、被検体に注射 し、そして膿瘍において局在化する。次いで、被検体を光走査装置で走査して膿 瘍の両会を得る。

放射線免疫治療 レニウム標識した抗体または抗体断片を使用して、生体内で標的細胞にレニウム の放射性同位元素を選択的に供給することができる。−例えば、レニウム標識抗 体は癌細胞を選択的ｔ；探索し、そしてそれらを破壊することができる。この目 的に対して、Ｉｍｇ！Ｊ特異的抗体、例えば、前述のものを本発明の方法により １１［識し、そして得られる標識抗体を腫瘍を有する被検体に非経口的に注入す ることができる。

次の実施例Ｌ；よって、本発明をさらに説明する。

！！ｊ 実施例１ ”’Ｔ　ｃ−サッカレートを使用するテクネチウム−９９−によるアントミオシ ン抗体ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の放射性標識付け９”Ｔｃ−サッカレートの調製 モノボタシウムサッ力レート（２５ｍｇ）を、０．２モルの重炭酸酸塩（１，０ ｍＱ）中にｐＨ８，０において溶解した。５００ｐＱのす・ンカレート溶液に、 ４０μｇの０．１モルの酢酸中の塩化第一スズ（２゜５ｍｇ／ｍ（１）を添加し 、次いで５００ｐＱのＴｃ−９９ｍ発生体の溶離液（６０ｍＣ４／ｍｇタンパク 質）をし加した。得られる溶液を室温において５分間放置し、次いでペーパーク ロマトグラフィー（Ｗａｔｍａｎ　　３ＭＭ、６０％のＣＨ，ＣＮ：　４０％の Ｈ，Ｏ）により放射線化学的純度について分析しｔ；。

ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の調製 ４０ミリモルのトリスｐＨ７，０中のアンチミオシンモノクローナル抗体ＲＩＩ ＤＩＯＦ（ａｂ’）ｚを１０ミリモルのＤＴＴで６０分間室温において還元し、 次いでセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−２５カラムに通過させて還元剤 を除去した。得られる溶液は、ゲル濾過ＨＰＬＣにより８０％のＦａｂ’断片を 含有しｔ；。

１”Ｔｃ−サッカレートを使用するＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　の標識付け５０ミリ モルのリン酸塩、０．３５ミリモルのＺｎＣｌ２．ｐＨ６゜５中のアンチミオシ ン抗体ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　　（５００μ（＋の１ｍｇ／ｍＱ溶液）を、５０ ０　ｐＱ　ｆ）””Ｔ　ｃ−サッカレート溶液と混合し、そして室温において５ −６０分間放置した。得られる一″″Ｔｃ標識タンパク質を、放射線化学的純度 についてペーパークロヤトグラフイ−（Ｗａｔｍａｎ　　３ＭＭ、６０％のＣＨ ３ＣＮ：　４０％のＨ２Ｏ）およびゲル濾過１（ＰＬＯにより、および免疫活性 についてミオシン親和カラムにより分析した。

実施例２ ＩＩｓ″Ｔｃ−サッカレートの形成へのサッカレート濃度の効果９″′″Ｔｃ− サッカレートを、実施例１に記載するようにして、異なる濃度のボタシウムサッ 力レート（０，０９−１２，２５ｍｇ／ｍＯ）を使用して調製した。生成物をペ ーパークロマトグラフィー（Ｗａｔｍａｎ　　３ＭＭ、６０％のＣＨ，ＣＮ：　 ４０％のＨ２Ｏ；　”’Ｔ　Ｃ０４−Ｒｆ　−１，０、”’Ｔ　ｃ−サッカレー ト、Ｒｆ”−０，４；”’ＴＣＯｈＸＨ！０１Ｒｆ−０）により分析した。表１ 中のデータが示すように、０．２モルの重炭酸酸塩中の６ｍｇ／ｍΩのポタシウ ムサツ力レートの濃度は、還元したテクネチウムを完全に安定化するために十分 である。

実施例３ ”’Ｔ　ｃ−サッカレートの安定性 ６かも調製したＩＩ＋″Ｔｃ−サッカレートの試料および１２ｍｇ／ｍＱのポタ シウムサッ力レートを、７時間かけて分析した。結果（表ＩＩ）が示すように、 １２ｍｇ／ｒｎ（ｉのサッカレートからの調製はより安定であり、そして約２時 間安定であった。

実施例４ ■′″Ｔｃ−サッカレートを使用するＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の標識付けへの抗体 濃度の効果 ””Ｔ　ｃ標識ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’を、実施例１に記載するようにして、１２ ５０ｐｇ／ｍΩまでの種々のタンパク質濃度を使用して調製した。１時間後、反 応混合物をペーパークロマトグラフィーおよびＨＰＬＣにより分析した。結果（ 表ＩＩＩ）が示すように、放射線化学的収率はタンパク質濃度に依存し、そして 定量的標識付けは少なくとも３４０μｇ／ｍΩを使用して１時間で得ることがで きた。

Ｆａｂ″断片と比較した非還元抗体／断片への””Ｔｃ−サッカレートからのチ ク７・チウムの移送の評価 アンチミオシン抗体ＲＩＩＤＩＯ１抗膵臓抗体ｊ９−９および抗結腸直腸抗体１ ７−ＩＡの１００ｐ（ｒの全抗体（２ｍｇ／ｍｎ）、Ｆ（ａｂ’）２Ｃ２ｍｇ／ ｍＱ　）、Ｆａ　ｂ’　　（１ｍｇ／ｍＱ　）を、ｉｏＯμＱＬ７）””ＴＣ− サッカレート溶液と室温において１時間および３時間インキニベーションした。

得られる生成物をペーパークロマトグラフィーにより分析した。結果（表ＩＶ） が示すように、非還元抗体／断片の標識付けはＦａｂ’断片の定量的標識付けに 対して５％より少ない。

実施例６ Ｆａｂ’断片と比較した非還元抗体／断片への”Ｔ　ｃ−グルコヘプトネートを 使用するＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　の標識付けＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　　（１ｍｇ ／ｒｎＱ）を、””Ｔ　ｃ−グルコヘプト？、−トと室温において１時間インキ ュベーン巴ンした。ペーパークロマトグラフづ−による分析は、抗体のテクネチ ウムの定量的移送を示しブこ。

実施例７ 抗結腸直腸抗体１７−ＩＡ　　Ｆａｂ’　およびアンチミオノン抗体Ｒ１１ＤＩ ＯＦａｂ’　のチクど・チウム−９９ｍ標識標識付者の断片を、実施例１に記載 するように、調製および標識付けした。

室温において３時間後の生成物のゲル濾過ＨＰＬＣ分析は、１７−ＩＡについて 、生成物の３５％がＦ（ａｂ”）、および６５％のＦａｂ’の形態でであり、こ れに対してＲＩＩＤＩＯについて、２３％がＦ（ａｂ″）。

およびＦａｂ″　として７７％の形態であったことを示した。しかしながら、放 射能の検圧は、放射能の８０％が両者の抗体ｊこつし１てＦａｂ″ポリヌクレオ チドキナーゼと関連することを示した。これらの結果が示すように、１“Ｔｃ− サッカレートはＦａｂ’断片を優先的に標識付けする。

１１丁ｃｍ識１７−ＩＡＦａｂ’　およびＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　　を、ヒト血 漿の存在下および不存在下に３７℃において１時間インキニベーンヨンした。結 果（表■）が示すように、テクネチウムの８０％は血漿が存在してさえ２０時間 にわたり抗体に結合して止まった。

””Ｔｃ−Ｒ１１ＤＩＯＦａｂ’　８ｍ物の免疫反応性を、ミオシン親和クロマ トグラフィーを使用して決定した。１“Ｔｃ−１７−ＩＡを対照として使用して 、非特異的結合を推定した。標識タンパク質の各々をヒト血漿の存在下に３７℃ においてインキユベーションした。

表ｖ■に示すように、″″′Ｔｃ標１１ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　は、３時間後は ぼ８０％免疫反応性であり、そして２０時間後はぼ７０％免疫反応性であった。

後者は、標識付は直後見いだされる免疫反応性の８０％保持に相当した。

雑種イヌ（ｎ＝６）をベンドパルビトール（３０ｍｇ／ｋｇ）で静脈内麻酔し、 そしてバーバード（Ｈａｒｖａｒｄ）呼吸器で呼吸を維持した。左關胸術を９！ 施し、心臓を心臓周囲の離被架中に懸垂し、そして先端から基部へのほぼ２／３ の距離で左内部の下降する冠状動脈のセグメントを自由に切り放した。次いで、 ＬＡＤを絹の縫合糸で閉塞した。ＬＡＤの閉塞の３時間後、閉塞縫合糸を除去し 、そして再潅流を確立した。

再潅流の１５分後、２００μＣ】のインジウム−Ｉｌｌ標識Ｒ１１ＤＩＲ１１Ｄ １０　　Ｆａｂ’　を注射した。ガンマ線カメラで系統的に映像をトレーサー投 与直後開始した。第１図は、抗体の注射の３５分後（上の左）、１．５時間後（ 上の右）、２，５時間後（下の左）および５時間後（下の右）イヌのガンマ線シ ンチグラムを示す。第２図は、第１図に示すのと同一のイヌのガンマ線画像、右 横（上の左）、後部の前方（下の右）の図面を示す。透明の心筋梗塞の画像は、 後部の位置を除外したすべての図面において観察されｔ；。より重要なことには 、この図面は、Ｔｃ−ＲＩ　ＩＤ１Ｏ−Ｆａｂ’の注射後３時間におし゛て、有 意の肝臓の吸収を示す。

寒鳳±上土 マウスにおけるテクネチウム−９９ｍ［識ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’およびインジウ ム−Ｉｌｌ標識ＲＩＩＤＩＯ−Ｆａｂ−ＤＴＰＡの生物分布二更穴 生物研究をＢａ１ｂ／ｃマウスにおいて実施した。マウス（４マウス／群）を１ ５０ｐｃｉのチク洋チウムー９９ｒｒ＋探識ＲＩＩＤ１０　　Ｆａｂ′（４μＣ ｉ／μｇ）で、あるいは１０μＣ】のインジウム−１１１標識ＲＩ　ＩＤｌ０− Ｆａｂ−ＤＴＰＡ　（４μｃ　１／ｐｇ）で静脈内注射しプ；。

マウスの群を注射後の〕、４および８時間に殺し、そして器官を取り出し、秤量 し、そして計数した。表Ｖｌｌは、調製物の各々について得られた注射した線量 ％／ｇを要約する。

”’Ｔｃ−ＲＩ　ＩＤｌ０　　Ｆａｂ’　は、血液および肝臓の両者から急速清 浄された。１時間における血液中のＴｃ−ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’についての注射 した線量の百分率は、１３．６％であり、そして８時間後に２．０％に低下した 。放射能の同様な低下は、肝臓において後者の時点においてＩ！測され？：（１ 時間で６．４％および８時間で２．４％）。

しかしながら、インジウム−１１）標識調製物は、注射後８時間で肝臓（１０， ８％）および血液（５，１％）の両者において非常に高い放射モノボタンウムア ラポ不−ト（２０ｍｇ）を０．１モルのＮａＮ０゜（１，０ｍＱ）中にｐＨ１Ｏ ，Ｏにおいて溶解した。５００ｐＱの７ラボ洋−トの溶液に、５０ＤｐＱのＴｃ −９９ｍ発生体溶離液（はぼ６０ｍＣ１／ｍｇタンパク質）を添加し、次いで４ ０μｇの０．１モルの酢酸中の塩化第一スズ（２，５ｍｇ／ｍｆｆ）を添加した 。得られる溶液を室温において３０分間放置し、次いで１．０モルの塩酸を使用 してｐＨ７に調節した。

試料を放射線化学的純度についてペーパークロマトグラフィー（Ｗａｔ　ｆｆ、 ａ　ｎ　　ｊ　Ｍ　Ｍ、６０％のＣ）ｉ３ＣＮ　：　４０％のＨ，Ｏ）により分 析し実施例１に概説しなのと同一手順をＲＩＩＤＩＯＦａｂ″の調製に使用した 。

０”Ｔｃ−アラボネートを　用するＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の調製５０ミリモルの リン酸塩、０．３５ミリモルのＺｎＣ１，、ｐＨ６゜５中のアンチミオシン抗体 ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　　（５００μ４の１ｍｇ／ｍＱ溶液）を、５００μＱの １”Ｔｃ−アラボネート溶液と混合し、そして室温において６０分間放置した。

生ずる”’Ｔ　ｃ標識タンパク質を、実施例１に前述したように、放射線化学的 純度について分析した。

結果は、これらの条件下にけるタンパク質への■″’Ｔｃの定量的移送を示した 。

里友豊上且 ”’Ｔｃ−タートレートを使用するテクネチウム−９９ｍによる抗ミオ酒石酸ニ ナトリウム（２３０ｍｇ）を、０．１モルのＮａＮ○、（１゜０ｍＱ’）中にｐ Ｈ４０，０において溶解した。５００μｇのタートレート溶液に、５００．ｕＱ のＴｃ−９９ｍ発生体溶離液（はぼｍｃｉ／ｍｇタンパク質）を添加し、次いで ４０μΩの０．１モルの酢酪中の塩化第一スズ（２，５ｍｇ／ｍａＱ）を添加し た。生ずる溶液を室温において３０分間放置し、次いで０．０モルの塩酸でｐＨ ７に調節した。試料を実施例１に概説したように（１３ページ参照）放射線化学 的純度について分析した。

ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の調製 実施例１に概説しなのと同一手順をＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の調製に使用した。

ｌ″Ｔｃ−タートレートを使用するＲＩＩＤＩＯＦａｂ’（７）調製５０ミリモ ルのリン酸塩、０．３５ミリモルのＺｎＣ］、、ｐＨ６゜５中のアンチミオシン 抗体ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　　（５００，ｕＱの１ｍｇ／ｍＱ溶液）を、５００ ／ＪＩ２の”’Ｔ　ｃ−タートレート溶液と混合し、そして室温において６０分 間放置しｔ；。生ずる”’Ｔｅ１ｌ識タンパク質を、実施例１に前述したように 、放射線化学的純度について分析した。

結果は、これらの条件下にけるタンパク質への”’Ｔ　ｃの定量的移送を示した 。

ペーパークロマトグラフィーにより分析しこ、種々の濃度において室温において １時間インキュページ蔚ンした後の市Ｔ　ｃ　Ｏ，８よび””Ｔｃ−サッカレー トの百分率 １２．２５　　　　　　　　　．０　　　　１００．００．３８　　　　　　　 　３０．０　　　　７０．００．１９　　　　　　　　４１．０　　　　５９． ００．０９　　　　　　　　５７．０　　　　　４３．０表ＩＩ 室温における””Ｔｃ−サッカレートの安定性表ＩＩＩ ペーパークロマトグラフィーおよびＨＰＬＣゲル濾過クロマトグラフィーにより 分析した、異なるタンパク質濃度において■″ＴｃＴｃ−サツカレート付けしツ ユ後の”Ｔｅｌ！識ＲＩＩＤ１０　　Ｆａｂ’　の百分率１２５０　　　　　　 １００．０　　　　　　　　　　　０３４０　　　　　　１００．０　　　　　 　　　　　　０１６５　　　　　　７２．０　　　　　　　　　　２８．００　 　　　　　　０．８　　　　　　　　　１００．０表１〜７ 還元対非還元の抗体／断片へのｌ′″Ｔｃ−サッカレートとしての９９・テクネ チウムの移送の評価 ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　　　　　　　　１００．０　　　　　１００−０１７− ＩＡ　Ｆａｂ’　　　　　　　　　１００．０　　　　　１００．０表Ｖ ヒト血漿の不存在下および存在下における””Ｔ　ｃ標識１７−１　、ＡＦａｂ ’および９　ｒｔ　Ｔ　ｃ標識ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の安定性１７−ＩＡ　Ｆａ ｂ’　　　　８２　　　　８５　　　　　９３　　　　８４ＲＩＩＤＩＯＦａｂ ’　　　　８２　　　　８３　　　　　８６　　　　８６結合の％ ０時間　　　３時間　　　２０時間 Ｔｃ　−１７−ＩＡ　Ｆａｂ’　　　　１−２　　　　２．２　　　　　３．３ ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’　　　　　　８１　　　　　７９　　　　　７０表ＶＴＩ マウスにおける注射後１．４および８時間後のインジウム標ｉｉ＆Ｒ１１Ｄ１０ −Ｆａｂ−ＤＴＰＡおよびテクネチウム−９９ｍ標識ＲＩＩＤＩＯＦａｂ’の注 射線量／ｇの％の生物分布血液　１３．６２刊４．５２　０６．９２±０．０６ ４　０４．８２±０１．００　０５．１１±００．４９　０２．０２太００．４ ８牌臓　０３．３昨０１．５１　０３．２６±０１．５３　０４．５１±０３． ０４　０４．９７±０１．１１　０２．３１±０１．１７胃　　　　０２．３４ ±００．８３　　０２．０７±００．２５　　００．８９ｆＯ０，３５０１，５ １±０１．０４　　００．３１±００D２３ 腸　　　　０２．７４吐０１．００　　０２．７２±００．１８　　０１．４９ ±００．０４　　０２．５３±００．０７　　００．７５±O０．２４ 腎１！１　１１５．００土３２．３０　　３６．８８±０９．３８　　８１．１ ０±１５．４０　　５８．９０±０５．１０　　５７．６７}２２．６１ 肝臓　０６．４４±０１．８７　０８．８２±００．９１　０３．６８±００． ５２　１０．７９±００．３５　０２．３６土００．９５肺　　０７．８９±０ ３．３２ ０５．６２±０１．６０　０３．６０±００．９３　０３．７４±００．８７　 ０１．６１±００．５７心臓　０８．７７±０４．１６　０３．００±００．２ ８　０３．００±０１．１３　０３．１０±００．８０　０１．３３±００．０ ５筋肉　０１．３］ｆｏＯ，１７０１５３±００．１６　００．８３±００．３ ２　０１．８２±００．５　００．４２旬０．１１骨　　０Ｃ１６３±ＯＣ１， ２４−−−−−００，９０±００．１７　　　−−−−−　　　００．９２出０ ０．３８−−一得られず Ａ、寅蒐例１４：１つのバイアルの方法塩化ナトリウム（０，１モル）を含有す るトリス緩衝液（１５，５ｍｌ、０．０５モル、ｐＨ８，０）中のＴ２Ｇ］ｓ　 　Ｆ　（ａｂ’　）！抗体断片を、ＤＴＴ　（１ミリモル）で周囲温度において １〜２時間インキニペーシ這ンした。生ずる混合物をアルゴン下に、塩化ナトリ ウム（０゜１モル）およびＥＤＴＡ　（０，００１モル）を含有するリン酸ナト リウム緩衝液（０，０５モル、ｐ）（６，４）の２４体積との交換による、透析 濾過により精製して、７２Ｇ］ｓ　　Ｆａｂ’　　（３３５ｍｇ、濃度１ｍｇ／ ｍＱ　）を含有する溶液を得た。

２、７２ＧＩｓ　　Ｆｔフイグリン抗体Ｆａｂ’ｔｆｔ片のテクネチウムー９９ 　、、、ｌｌｌ＆付１すめための単一の一４イアルのキットの調製ＥＤＴＡ　（ ０，０００５モル）８よび塩化ナトリウム（０，１６モル）を含有するリン酸カ リウム緩衝液（０，０５モル、ｐＨ６，４）中のＤ−グルタル酸−カリウムＣ１ ２−５ｍｇ／ｍΩ、０．０５モル）の脱気した溶液（５ｍｆｆ）に、塩化第一ス ズ溶液（７，５μｆｆ、Ｏ，１ｍｇ／ｍＱ、ＩＮ　　ＨＣｌ中）を添加した。こ の溶液（４，７ｍｎ）に、上の小区Ａ、ｌに記載しｌ；ように調製しｌ；細胞系 ７２Ｇ］ｓから誘導しｔ；ネズミモノクローナル抗体Ｆａｂ’断片の溶液（０， １モルの塩化ナトリウムおよび０．００１モルのＥＤＴＡを含有する０、０５モ ルリン酸カリウム緩衝液ｐＨ６，４中の７．５ｐＱ、Ｏ，１ｍｇ／ｍｆｆ）を添 加し１：、よく混合した後、一部（１，Ｏｍｆｌ）を血清バイアル中に分配し、 凍結乾燥し、次いでゴムのバイアルのふにで密閉した。

３、　単一のバイアルのキット中のテクネチウム−９９ｍによる抗体Ｆａｂ’の 放射性標識付け １つのバイアルの手順において、ナトリウム（■″Ｔｃ）パーテクネテート（１ ，ｏｍｆｆ、２０ｍＣ１）を、上の小区Ａ、２に記載したＴ２Ｇａｓ　　Ｆａｂ ’のバイアルに添加した。この溶液を周囲温度において放置し、そしてこの混合 物を間隔を置いてクロマトグラフィー（Ｗａｔｍａｎ＠３ＭＭのペーパー）によ り分析し、アセトニトリル：水（７：３）で溶離しＩ；。この系において、生成 物は元のところに止まったが、（８１ｍ７ｃ）バーテクネテートおよび還元した 錆化テクネチウム−９９ｍは元のところから移動しｔ；。反応の完結は、元のと ころにおける放射性標識付けした生成物の百分率により決定した。それ以上の希 釈は、感層Ｌ：　Ｉｔ、じて、東１的塩霞娘瘉（０−ｑ虹）を使ｍＬイ蜜貧し一 二一二の１つのバイアルの方法の生成物は、下の節Ｃに記載するようＬこさらに 分析しｔ；・ 上の小区Ａ、１１ｍ実質的に前述したように調製した７２Ｇ］ｓ　　Ｆａｂ’　 　（０，５ｍｇ）を、リン酸カリウム（０，０５モル、ｐＨ６，４）、塩化ナト リウム（０，１モル）およびＥＤＴＡ　（０，００１モル）の緩衝液（１，０ｍ ｇ）中にを含有する、バイアルを調製した。このバイアルをゴムのバイアルのふ たで密閉した。

ｂ）　抗体断片の凍結乾燥配合物 上の小区Ａ、］に実質的に前述したように調製した７２Ｇ］ｓ　　Ｆａｂ′　（ ０，５ｍｇ）を、リン酸カリウム（０，０５モル、ｐＨ６，４）、塩化ナトリウ ム（０，０５モル）、ラクトース（０，０５モル）およびＥＤＴＡ　（０，００ ０５モル）の緩衝液（１，０ｍｆｆ）中にを含有する、バイアルを調製しｔ；。

バイアルの内答物を凍結乾燥し、次いでゴムのバイアルのふＩ；で密閉した。

２、　２つのバイアルの方法のための第一スズ組成物の調製嫌気的条件下ｌ；、 Ｄ−グルタル際−カリウム（１２，５ｍｇ、０．０５ミリモル）、塩化第一スズ （１５０μｇ、０．７９μモル）および重炭酸ナトリウム（１６，８ｍｇ、０． ２ミリモル、ＰＨ７，６）の溶液Ｌ　４’に−Ｊ−１７１−／　ＬＬ　！ＩＩＩ ＩＡ　Ｌ　ノ＝、　　！　−／　７、−−ｐ７＝ｉｌｉｉｉｉｉ　い　Ｒｂ−、 コムのＩくイＴルのｂｌ；で密閉したも２つのバイアルの手順において、ナトリ ウムＣＩ′″Ｔｃ）パーテクネテート（１，０ｍｆｆ、２０ｍＣ１）を、前述の ように第一スズの組成物に添加した。１０分後、０．１ｍｇのこの溶液を上の小 区ａ）およびｂ）に記載する溶液および凍結乾燥した配合物に添加した。生成物 を節Ｃに記載するようｌ二分析した。

医２ 標識の免疫活性は、親和カラム（ＣＮＢｒ−セファローズ６Ｂ＋＝結合した、ヒ トフィブリンのベータ鎖のアミノ末端の最初の７７ミノ１ｍ）に、抗体反応混合 物の７リコートを適用することによって試験した。充填ベッドの体積は１ｍｇで あった。このカラムを、０．０１モルのリン酸ナトリウム、０．１４５モルのＮ ａＣ］、ｐＨ７，０中の１％のＢＳＡの１０ｍ（ｔで溶離し、次いで０．１モル のグリシン、ｐＨ２，５、で溶離した。これらの溶離の間、１ｍｆｆの分画を集 め、そしでＮａ１（Ｔｌ）ウェルカウンター中でカウントした。免疫活性の百分 率を次のように計算しｔ二： 免疫活性％−（グリシンにより溶離された合計の正味の計数／両者の溶液により 溶離された合計の正味の計数）Ｘ１００結果を表ＶＴＩＩＩよび工ｘに示す。

表１は、また、上の小区Ａ、３に記載したペーパークロマトグラフィー技術に従 いタンパク質組み込み％により決定した、１つのバイアルおよび２つのバイアル のキットについての標識性は速度を示す。結果が示すように、１つのバイアルの キットは２つのバイアルのキットより速く標識生成物を生成する。

表■：１つのバイアルおよび２つのバイアルのキットの標識性は速度３、　１つ のバイアルおよび２つのバイアルのキノ１の安定性の１つのバイアルおよび２つ のバイアルのキットの安定性は、４℃および３７℃の両者において上の小区Ａ、 ３に記載するペーパークロマトグラフィーに従い、タンパク質の組み込み％Ｌ； より決定した。結果を表２に示す。結果が突圧するように、１つのバイアルのキ ットは、３７°Ｃにおいて貯蔵しプ；とき、１２〜１７日の期間においてよりす ぐれた標識の効率を維持する。

表ＩＸ：１つのバイアルおよび２つのバイアルのキットの安定性節ＡおよびＢに 前述の１つのバイアルおよび２つのバイアルの溶液キットに従い調製した標識抗 原断片のマウスの生物分布を、標識断片をマウスに静脈内注射し、そして異なる 組織において蓄積された放射能の相対量を決定することによって検査した。結果 を第３図〜第７図ｊ；示す。結果は、評価したすべての器官の系ｊ；おいて１つ のバイアルのキットが絖計的に有意ｉ：すぐれることを示す。

表Ｘ 注射後 標識抗体を上の実施例および比較の実験（溶液配合物）に記載するようｌこシて 調製した。■″Ｔｃ標１ｉｉｉ７２Ｇ］ｓ　　Ｆａｂ’　断片（１００μｆｆ） をクエン酸化血漿（５０μρ）に添加した。表ＸＩは、１つのバイアルおよび２ つのバイアルのキットからの生成物対対照（３７℃におけるタンパク質組み込み ％により決定した、血漿の安定性を比較する。結果が示すように、１つのバイア ルのキットの血漿の安定性は２つのバイアルのキットよりすぐれている。

表ＩＸ　　１つのバイアルおよび２つのバイアルのキットの血漿安定性１つのバ イアル　８８　９０　　８４　　８９　　９０　　８８　　８６　　８３同等の ′ｇ！施態様 当業者は、ここに記載した発明の特定の５！施態様と同等の多くの実施態様を認 識するか、あるいは日常の実験を越えない実験を使用して確証することができる であろう。このような同等の実施態様は次の請求の範囲により包含されることを 意図する。

Ｎｏ　　２　　　　　　　　工Ｃ−ＮＹＯＩＣ！ＮＴ−ＫＶＰ　　２Ｆｉｇｕｒ ｅ　３ Ｐ−値　　　　（，０５ｎｓ　　ｎｓ Ｆｉｇｕｒｅ　４ ｐ−値　　　　　　　（，０５（，０５ｎｓＦｉｇｕｒｅ　５ Ｐ−値　　　　　　ｎｓ　　　　　ｎｓ　　（，０５Ｆｉｇｕｒｅ　６ Ｐ−値　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（，０５ｎｓ　　　　　 　　　ｎｓＦｉｇｕｒｅ　７ 補正音の写しく翻訳文）提出書　（特許法第１８４条の８）平成１年１０月、４ を 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿 １、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　８８１０１０４　Ｒ ２、発明の名称 金属イオンで抗体を標識付けする方法　　、３、特許出願人 電話　５８５−２２５６ ５、補正音の提出年月日 １９８９年４月６日 タンパク買上へ接合し、次いで金属イオンをタンパク質分子に取り付けられたキ レート剤上に標識付けする。例えば、ナラ（Ｋ　ｎ　ａ　Ｗ）ら、サイエンス（ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２立９　：　２９５−２９７　（］　９８０）は、ＤＴＰＡ を経てインジウム−１１１で標識付けされた心算ミオシンに対する抗体、および 標識抗体を心筋梗塞の画像形成のために使用することを開示している。参照、ま た、クレジカレク（Ｋｒｅ　ｊ　ｃａ　ｒｅｋ）ら、バイオケミカル・アンド・ バイオフィジカル・リサーチ・コミユニケージ１ン（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐ ｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、）、７ヱ：５８］−５８５（１９７７）；ジルズ（ Ｃｈｉｌｄｓ）、Ｒ，Ｌ。

およびフトウィッチ（Ｈｎａｔｏｗｉｃｈ）、Ｄ、Ｊ、、ジャーナル・才ブ・ニ ュークリアー・メディンン（Ｊ、Ｎｕｃ　１．Ｍｅｄ、）、２６７２９３　（１ ９８５）；米国特許第４，６５２．４４０号（Ｐａｉｋら）。より最近のアプロ ーチにおいて、フリッペＬ’；ｆ　（Ｆｒｉｔｚｂｅｒｇ）らは、キレート剤と して、特定のジアミノジチオールおよびジアミノジチオールの群の使用を開示し ている。フリツベルグ（Ｆｒｉｔｚｂｅｒｇ）ら、ジャーナル・オブ・ニューク リアー・メディンン（Ｊ、Ｎｕｃ］、Ｍｅｄ、）、２７：９５７　（１９８６） ；ａ州特許出！＋１第８６１００３６０．６号。米国特許第４．０２７，００５ 号において、アルダ−（Ａ＋ｄｅｒ）らは、放射性核種の診断剤として使用する ためのテクネチウム標識ポリヒドロキシカルボン酸を開示している。

種々の程度の成功は、放射性金属によるタンパク質の標識付けの直接および間接 の方法の両者を用いて達成されてきている。しかしながら、７、配位子は約１０ ，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシカルボン酸またはその塩で ある、請求の範囲第６項記載の方法。

８、配位子は糖酸、グルコヘプトンｆｉ（ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｎｉｅａｃｉｃ ｌ）、酒石酸、ガラフタル酸、アラポン酸（ａｒａｂｏｎｉｃａｃｉｄ）および それらの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第７項記載の方法。

９、水溶性配位子は糖ｒｒｉまたはその塩である、請求の範囲第８項記載の方法 。

１０、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第１項記載の方法。

１）酸化された状態のＴｃ　　９９ｍ５および】】）還元剤および式： 式中、 ＸおよびＹはＯＨま１；はＮＨ，であり、ＲおよびＲｏは、独立に、Ｈ，Ｃ０Ｏ Ｈ％まｔ；はＣＨｔｏ　）ｌであるか、あるいはＲおよびＲｏは一緒になって環 または２座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜ｌＯでありかつｍａｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ７ は、独立に、Ｈ２低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０またはｌであり、ただしｐが１であるとき、ｍお よびｎは独立ｌ；少なくともｌである、 の配位子からなる組成物、 の混合物を形成し、そして ｂ１前記混合物をＦａｂ’断片を接触させてＴｃ−９９ｍｇ１ｌＩ！Ｆａｂ′断 片を生成する、 からなる、゛スルフヒドリル含有Ｆａｂ’断片をテクネチウム−９９ｍで標識付 けする方法。

Ｒ−（ＣＨＯＨ）、−Ｒ’ 式中、ＲおよびＲ′はＣ０ＯＨまたはＣＨ，ＯＨであり、そしてｎ　−２〜１０ である、 ｔ；より表される、請求の範囲第１１項記載の方法。

１７、配位子は約１０．０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシジカ ルボン酸まｔ；はその塩である、請求の範囲第１６項記載の方法。

１８、配位子は糖酸、グルコヘプトン酸、酒石酸、ガラフタル酸、アラポン酸お よびそれらの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第１７項記載の方法。

１９、水溶性配位子は糖酸またはその塩である、請求の範囲第１８項記載の方法 。

２０、Ｆａｂ’断片は抗ミオシン、抗フィブリン、まｔ；は抗血小板抗体から誘 導される、請求の範囲第１１項記載の方法。

２１、Ｆａｂ’断片は抗腫瘍抗体から誘導される、請求の範囲第１１項記載の方 法。

２２、抗＠５ｓ抗体は、抗結腸直腸癌抗体、抗卵巣癌抗体、抗肺癌抗体、抗乳癌 抗体または抗前立腺抗体である、請求の範囲第２１”Ｊ記載の方法。

２３、Ｆａｂ’断片は抗バクテリアまたは抗マクロファージ抗体である、請求の 範囲第１１項記載の方法。

２４、工程： ａ、水性パーテクネテート−９９ｍを水溶性配位子と還元剤の存在下に反応させ て、配位子および還元された状態のテクネチウム−９９ｍの安定化された錯化合 物を形成し、そしてｂｌその後、Ｆａｂ’断片を前記錯化合物と反応させて、Ｔ ｃ−９９ｍ標識Ｆａｂ’断片を形成する、 かもなる、スルフヒドリル含有Ｆａｂ’断片をテクネチウム−９９ｍで標識付け する方法。

２５、還元剤は第一スズのイオンであり、そして配位子は糖−またはその塩であ る、請求の範囲第２４項記載の方法。

２６、工程： ａ１バーテクネテート−９９ｍ、第一スズの還元剤および糖酸の水性混合物を形 成し、 ｂ１前記混合物をスルフヒドリル含有抗体または抗体断片と一緒にして、テクネ チウム−９９ｍ標識抗体または抗体断片を生成する、からなる、スルフヒドリル 含有抗体または抗体断片をテクネチウム−９９ｍで標識付けする方法。

２７、抗体断片はＦａｂ″断片である、請求の範囲第２６項記載の方法。

２８、工程： ａ１ナトリウムパーテクネテートー９９ｒｎを、第一スズの還元剤および糖酸ま たはその塩の水溶液を含有する第１バイアルに添加し、モしてす、その後、第１ バイアルの内容物を、ｔａｂ’断片の水溶液を含有する第２バイアルの内容物と 、非酸化性条件下に、混合する、かもなる、スルフヒドリル含有Ｆａｂ″断片を テクネチウム−９９ｍで標識付けする方法。

２９、約５〜約９のｐＨを有する水溶液中の還元剤および糖酸またはその塩の混 合物からなる、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片を直接放射性標識付けす る組成物。

３０、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第２９項記載の組成物。

３１、第一スズの還元剤は塩化第一スズである、請求の範囲第３０項記載の組成 物。

３２、還元剤および糖酸まＩ；はその塩の混合物をを含有する密閉された無菌の バイアルからなる、スルフヒドリル含有抗体まＩ；は抗体断片を放射性標識付け するためのキット。

３３、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第３２項記載のキット。

３１、第一スズの還元剤は塩化第一スズである、請求の範囲第３３項記載のキッ ト。

３２、還元剤および糖酸ま１：はその塩の混合物を含有する密閉しｌ：無菌のバ イアルからなる、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片を放射性金属で放射性 標識付けするｔ；めのキット。

３３、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第３２項記載のキット。

３４、第一スズの還元剤は塩化第一スズである、請求の範囲第３３項記載のキッ ト。

３５、構成成分： ａ１還元剤および式： 式中、 Ｘ８よびＹはＯＨまたはＮＨ，であり、Ｒ８よびＲ′は、独立に、Ｈ，Ｃ０ＯＨ ，またはｃＨ，ＯＨＴあるか、あるいはＲおよびＲｏは一緒になって環または２ 座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびＤは０〜ｌＯでありかっｍ十ｎは少なくとも２であり、Ｒ８およびＲ１ は、独立に、Ｈ１低級アルキル、置換低級アルキノ呟アリールまＩ；は低級アル キルアリールであるが、あるいはＲ３およびＲは一緒ｌ；なってカルボニル基を 完成することができ、モしてｐは０または１であり、ただしｐが１であるとき、 ｍおよびｎは独立に少なくとも１である、 にょう表される化合物またはその塩からなる水溶性配位子の混合物を含有するバ イアル、および ｂ１非酸化性条件下にＦａｂ’断片を含有するバイアル、からなるスルフヒドリ ル含有抗体または抗体断片を放射性標識付けするためのキット。

３６、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第３５項記載のキット。

３７、配位子は、式： ％式％） 式中、ＲおよびＲ′はＣ０ＯＨまたはＣＨ，ＯＨであり、モしてｎ−２〜１０で ある、 により表される、請求の範囲第３６項記載のキット。

３８、配位子は約１０，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキンジカ ルボン酸またはその塩である、請求の範囲第３７項記載のキット。

３９、配位子は糖酸、酒石酸、グルコヘプトン酸、ガラフタル酸、アラポン酸お よびそれらの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第３８項記載のキット 。

４０、水溶性配位子は糖酸ま１：はその塩である、請求の範囲第３９項記載のキ ット。

４１、構成成分： ａ、還元剤および糖酸の塩の混合物を含有するバイアル、およびｂ１非酸化性条 件下にＦａｂ’を含有するバイアル、からなる、スルフヒドリル含有Ｆａｂ’断 片をテクネチウム−９９ｍで標識付けするためのキット。

４２、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第４１項記載のキット。

４３、Ｆａｂ’断片は抗ミオシン、抗フィブリン、または抗血小板抗体から誘導 される、請求の範囲第４１項記載のキット。

４４、Ｆａｂ’断片は抗ｌｌ蕩抗体から誘導される、請求の範囲第４１項記載の キット。

４５、抗腫瘍抗体は、抗結腸直腸癌抗体、抗卵巣癌抗体、抗腫瘍抗体、抗乳癌抗 体または抗前立腺抗体である、請求の範囲第４４”Ｊ記載のキット。

４６、Ｆａｂ″断片は抗バクテリアまたは抗マクロファージ抗体である、請求の 範囲第４１項記載のキット。

４７、工程： ａ、　　（］）”″″Ｔｃ○いおよび （＋］）還元剤および水溶性配位子、 の水性混合物を形成し、そして前記混合物を腫瘍に対して特異的なＦａｂ′断片 と接触させることによって、前記腫瘍に対して特異的なＴｃ−９９ｍ１！識Ｆａ ｂ’断片を調製し、 ｂ１前記標識Ｆａｂ’断片を被検体ｔ；非経口的に注入し、Ｃ１前記標１ｋＦａ ｂ″断片を前記腫瘍において局在化し、モしてｄ、前記被検体をガンマ線カメラ で走査して、前記腫瘍の画像を得る、からなる、被検体ｔ：８ける腫瘍のシンチ グラフィーの画像を得る方法。

ｂ、前記”’Ｔｃｍ識フィブリン特異的Ｆａｂ’断片を被検体に注入し、 ｃ１前前記用を血液凝固の部位において局在化し、そしてｄ１前記被検体を走査 して、前記凝固の画像を得る、からなる、被検体における血液凝固の画像を得る 方法。

７０、工程： と、　　（］）］レニウムー１８６レニウム−１８８、レニウム−１８９まｊ； はレニウム−１９１のベルヘネート（ｐｅｒｒｈｅｎａｔｅ）、および （ｌ］）還元剤およびレニウムのための水溶性配位子、の水性混合物を形成し、 そして前記混合物を腫瘍特異的断片と接触させることによって、レニウム標識腫 瘍特異的抗体断片を調製し、モしてｂ１前記レニウム標標識片する、 かもなる、腫瘍の免疫治療の方法。

７１、バイアル中において、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片、還元剤お よび水溶性配位子から構成された抗体混合物を、酸化された状態のテクネチウム −９９ｍと接触させることからなる、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片を テクネチウム−９９ｍで標識付けする１つのバイアルの方法。

７３、スルフヒドリル含有抗体はＩｇＧを還元剤で還元することによって調製さ れる、請求の範囲第７１項記載の方法。

７４、抗体断片はＦａｂ’断片である、請求の範囲第７１項記載の方法。

７５、Ｆａｂ’　はＦ（ａｂ”）、をＤＴＴで還元することによって産生される 、請求の範囲第７４項記載の方法。

７６、抗体混合物は凍結乾燥された形態から再構成される、請求の範囲第７１項 記載の方法。

７７、水溶性配位子は、式： 式中、 ＸおよびＹはＯＨまたはＮＨ，であり、Ｒ８よびＲｏは、独立に、Ｈ，Ｃ００Ｈ １またはｃＨａＯＨＴあるか、あるいはＲおよびＲｏは一緒になって環または２ 座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍａｎは少なくとも２であり、Ｒ３およびＲ１ は、独立に、Ｈ％低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ，およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０または１であり、ただしｐが１であるとき％　ｍ ｕよびｎは独立に少なくともｌである、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第７２項記載の方法。

８２、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第７１項記載の方法。

８３、工＠： ａＳｌ　％　Ｆ　ａ　ｂ’抗体断片、 ｉｉ、第一スズの還元剤、および ４４１％Ｄ−グルカル酸、 の凍結乾燥混合物を含有するバイアルを準備し、そしてす、前記バイアルにナト リウム（Ｉ）＋ｍ７ｃ）パーテクネテートの水溶液を添加する、 からなる、スルフヒドリル含有Ｆａｂ’抗体断片をテクネチウム９９ｍで標識付 けする方法。

８４、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片、還元剤および水溶性配位子から 構成されｔ；混合物からなり、ここで前記抗体混合物を一酸化された状態のテク ネチウム−９９ｍと接触させて、標識されｔ；抗体まｔ；は抗体断片を提供する 、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片をテクネチウム−９９ｍで標識付けす るための１つのバイアルのキット。

８６、抗体混合物は凍結乾燥された形態である、請求の範囲第８５項記載の１つ のバイアルのキット。

８７、放射性金属を移送させる条件は、約り０℃〜約６０”Ｃ温度、約５〜約９ のｐＨを有する水溶液中、約１時間、である、請求の範囲第１項記載の方法。

８８、工程（ｂ）を実施する条件は、約り０℃〜約６０℃温度、約５〜約９のｐ Ｈを有する水溶液中、約１時間、である、請求の範囲第１１項記載の方法。

８９、工程（ｂ）を実施する条件は、約り０℃〜約６０”Ｃ温度、約５〜約９の ｐＨを有する水溶液中、約１時間、である、請求の範囲第２２項記載の方法。

国際調査報告 １＋１＋、％、＋＋ｅＭＩＡ６Ｎａａｍｌ＋ｔｖ　　　ＰＣＢ／ＵＳ　　εε１ ０ユ０４８−９惰１１１〜１＾−−螺１ゆ５鴫　？ごτ／υＳ　とε、ｌ０１４ ０Ｂ国際調査報告 ＬＩＳ８８０１０４８ ＳＡ　　　　２２３４］

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、工程： ａ、成分： ｉ）放射性金属、および ｉｉ）還元剤および水溶性配位子、前記配位子は放射性金属を錯化して可溶性放 射性金属−配位子の錯化合物を形成することができる、の混合物を形成し、そし て ｂ、前記混合物をスルフヒドリル含有抗体または抗体断片と、前記放射性金属が 抗体または断片に移送させて放射性金属標識された抗体または抗体断片を形成で きる条件下に、接触させる、からなる、テクネチウム−９９ｍ、レニウム−１８ ６、レニウム−１８８、レニウム−１８９およびレニウム−１９１から成る群よ り選択される放射性金属でスルフヒドリル含有抗体または抗体断片を標識付けす る方法。 ２、スルフヒドリル含有抗体は還元されたＩｇＧである、請求の範囲第１項記載 の方法。 ３、抗体断片はＦａｂ′断片である、請求の範囲第１項記載の方法。 ４、Ｆａｂ′はＦ（ａｂ′）２をＤＴＴで還元することによって産生される、請 求の範囲第１項記載の方法。 ５、水溶性配位子は、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ＸおよびＹはＯＨまたはＮＨ２であり、ＲおよびＲ′は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ 、またはＣＨ２ＯＨであるか、あるいはＲおよびＲ′は一緒になって環または２ 座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍ＋ｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ２ は、独立に、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０または１であり、ただしｐが１であるとき、ｍお よびｎは独立に少なくとも１である、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第１項記載の方法。 ６、配位子は、式： Ｒ−（ＣＨＯＨ）ｎ−Ｒ′ 式中、ＲおよびＲ′はＣＯＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、そしてｎ＝２〜１０で ある、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第５項記載の方法。 ７、配位子は約１０，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシジカル ボン酸またはその塩である、請求の範囲第６項記載の方法。 ８、配位子は糖酸、グルコヘプトン酸（ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｎｉｃａｃｉｄ） 、酒石酸、ガラクタル酸、アラボン酸（ａｒａｂｏｎｉｃａｃｉｄ）およびそれ らの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第７項記載の方法。 ９、水溶性配位子は糖酸またはその塩である、請求の範囲第８項記載の方法。 １０、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第１項記載の方法。 １１、工程： ａ、成分； ｉ）酸化された状態のＴｃ−９９ｍ、およびｉｉ）還元剤および式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ＸおよびＹはＯＨまたはＮＨ２であり、ＲおよびＲ′は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ 、またはＣＨ２ＯＨであるか、あるいはＲおよびＲ′は一緒になって環または２ 座もしくは多産の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍ＋ｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ２ は、独立に、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０または１であり、ただしｐが１であるとき、ｍお よびｎは独立に少なくとも１である、 の配位子からなる組成物、 の混合物を形成し、そして ｂ．前記混合物をＦａｂ′断片と接触させてＴｃ−９９ｍ標識Ｆａｂ′断片を生 成する、 からなる、Ｆａｂ′断片をテクネチウム−９９ｍで標識付けする方法。 １２、Ｆａｂ′断片はＦ（ａｂ′）２断片を還元することによって産生される、 請求の範囲第１１項記載の方法。 １３、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第１１項記載の方法。 １４、第一スズの還元剤は塩化第一スズである、請求の範囲第１２項記載の方法 。 １５、テクネチウム−９９ｍはパーテクネテートとして使用する、請求の範囲第 １１項記載の方法。 １６、配位子は、式： Ｒ−（ＣＨＯＨ）ｎ−Ｒ′ 式中、ＲおよびＲ′はＣＯＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、そしてｎ＝２〜１０で ある、 により表される、請求の範囲第１１項記載の方法。 １７、配位子は約１０，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシジカ ルボン酸またはその塩である、請求の範囲第６項記載の方法。 １８、配位子は糖酸、グルコヘプトン酸、酒石酸、ガラクタル酸、アラボン酸お よびそれらの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第７項記載の方法。 １９、水溶性配位子は糖酸またはその塩である、請求の範囲第８項記載の方法。 ２０、Ｆａｂ′断片は抗ミオシン、抗フィプリン、または抗血小板抗体から誘導 される、請求の範囲第１１項記載の方法。 ２１、Ｆａｂ′断片は抗腫瘍抗体から誘導される、請求の範囲第１１項記載の方 法。 ２２、抗腫瘍抗体は、抗結腸直腸癌抗体、抗卵巣癌抗体、抗肺癌抗体、抗乳癌抗 体または抗前立腺抗体である、請求の範囲第２１項記載の方法。 ２３、Ｆａｂ′断片は抗バクテリアまたは抗マクロファージ抗体である、請求の 範囲第１１項記載の方法。 ２４、工程： ａ、水性パーテクネテート−９９ｍを水溶性配位子と還元剤の存在下に反応させ て、配位子および還元された状態のテクネチウム−９９ｍの安定化された錯化合 物を形成し、そしてｂ、その後、Ｆａｂ′断片を前記錯化合物と反応させて、Ｔ ｃ−９９ｍ標識Ｆａｂ′断片を形成する、 からなる、Ｆａｂ′断片をテクネチウム−９９ｍで標識付けする方法。 ２５、還元剤は第一スズのイオンであり、そして配位子は糖酸またはその塩であ る、請求の範囲第２４項記載の方法。 ２６、工程： ａ、パーテクネテート−９９ｍ、第一スズの還元剤および糖酸の水性混合物を形 成し、 ｂ、前記混合物をスルフヒドリル含有抗体または抗体断片と一緒にして、テクネ チウム−９９ｍ標識抗体または抗体断片を生成する、からなる、スルフヒドリル 含有抗体または抗体断片をテクネチウム−９９ｍで標識付けする方法。 ２７、抗体断片はＦａｂ′断片である、請求の範囲第２６項記載の方法。 ２８、工程： ａ、ナトリウムパーテクネテート−９９ｍを、第一スズの還元剤および糖酸また はその塩の水溶液を含有する第１バイアルに添加し、そしてｂ、その後、第１バ イアルの内容物を、Ｆａｂ′断片の水溶液を含有する第２バイアルの内容物と、 非酸化性条件下に、混合する、からなる、Ｆａｂ′断片をテクネテウム−９９ｍ で標識付けする方法。 ２９、還元剤および糖酸またはその塩の混合物からなる、抗体または抗体断片を 直接放射性標識付けするための組成物。 ３０、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第２９項記載の組成物。 ３１、第一スズの還元剤は塩化第一スズである、請求の範囲第３０項記載の組成 物。 ３２、還元剤および糖酸またはその塩の混合物を含有する密閉した無菌のバイア ルからなる、抗体または抗体断片を放射性金属で放射性標識付けするためのキッ ト。 ３３、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第３２項記載のキット。 ３４、第一スズの還元剤は塩化第一スズである、請求の範囲第３３項記載のキッ ト。 ３５、構成成分： ａ、還元剤および式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ＸおよびＹはＯＨまたはＮＨ２であり、ＲおよびＲ′は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ 、またはＣＨ２ＯＨであるか、あるいはＲおよびＲ′は一緒になって環または２ 座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍ＋ｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ２ は、独立に、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてＰは０または１であり、ただしＰが１であるとき、ｍお よびｎは独立に少なくとも１である、 により表される化合物またはその塩からなる水溶性配位子の混合物を含有するバ イアル、および ｂ、非酸化性条件下にＦａｂ′断片を含有するバイアル、からなる抗体または抗 体断片を放射性標識付けするためのキット。 ３６、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第３５項記載のキット。 ３７、配位子は、式： Ｒ−（ＣＨＯＨ）ｎ−Ｒ′ 式中、ＲおよびＲ′はＣＯＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、そしてｎ＝２〜１０で ある、 により表される、請求の範囲第３６項記載のキット。 ３８、配位子は約１０，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシジカ ルボン酸またはその塩である、請求の範囲第３７項記載のキット。 ３９、配位子は糖酸、酒石酸、グルコヘプトン酸、ガラクタル酸、アラボン酸お よびそれらの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第３８項記載のキット 。 ４０、配位子は糖酸またはその塩である、請求の範囲第３９項記載のキット。 ４１、構成成分： ａ、還元剤および糖酸の塩の混合物を含有するバイアル、およびｂ、非酸化性条 件下にＦａｂ′を含有するバイアル、からなる、Ｆａｂ′断片をテクネチウム− ９９ｍで標識付けするためのキット。 ４２、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第４１項記載のキット。 ４３、Ｆａｂ′断片は抗ミオシン、抗フィブリン、または抗血小板抗体から誘導 される、請求の範囲第４１項記載のキット。 ４４、Ｆａｂ′断片は抗腫瘍抗体から誘導される、請求の範囲第４１項記載のキ ット。 ４５、抗腫瘍抗体は、抗結腸直腸癌抗体、抗卵巣癌抗体、抗肺癌抗体、抗乳癌抗 体または抗前立腺抗体である、請求の範囲第４４項記載のキット。 ４６、Ｆａｂ′断片は抗バクテリアまたは抗マクロファージ抗体である、請求の 範囲第４１項記載のキット。 ４７、工程： ａ、（ｉ）９９ｍＴｃＯ４−、および （ｉｉ）還元剤および水溶性配位子、 の水性混合物を形成し、そして前記混合物を腫瘍に対して特異的なＦａｂ′断片 と接触させることによって、前記腫瘍に対して特異的なＴｃ−９９ｍ標識Ｆａｂ ′断片を調製し、 ｂ、前記標識Ｆａｂ′断片を被検体に非経口的に注入し、ｃ、前記標識Ｆａｂ′ 断片を前記腫瘍において局在化し、そしてｄ、前記被検体をガンマ線カメラで走 査して、前記腫瘍の画像を得る、からなる、被検体における腫瘍のシンチグラフ ィーの画像を得る方法。 ４８、水溶性配位子は、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ＸおよびＹはＯＨまたはＮＨ２であり、ＲおよびＲ′は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ 、またはＣＨ２ＯＨであるか、あるいはＲおよびＲ′は一緒になって環または２ 座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍ＋ｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ２ は、独立に、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０または１であり、ただしｐが１であるとき、ｍお よびｎは独立に少なくとも１である、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第４６項記載の方法。 ４９、配位子は、式： Ｒ−（ＣＨＯＨ）ｎ−Ｒ′ 式中、ＲおよびＲ′はＣＯＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、そしてｎ＝２〜１０で ある、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第４８項記載の方法。 ５０、配位子は約１０，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシジカ ルボン酸またはその塩である、請求の範囲第４９項記載の方法。 ５１、配位子は糖酸、グルコヘプトン酸、酒石酸、ムチン酸、アラボン酸および それらの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第５０項記載の方法。 ５２、水溶性配位子は糖酸またはその塩である、請求の範囲第５１項記載の方法 。 ５３、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第４７項記載の方法。 ５４、Ｆａｂ′断片は抗腫瘍抗体から誘導される、請求の範囲第４７項記載の方 法。 ５５、抗腫瘍抗体は、抗結腸直腸癌抗体、抗卵巣癌抗体、抗肺癌抗体、抗乳癌抗 体または抗前立腺抗体である、請求の範囲第４４項記載の方法。 ５６、工程： ａ、（ｉ）９９ｍＴｃＯ４、および （ｉｉ）還元剤および糖酸またはその塩、の水性混合物を形成し、そして前記混 合物を腫瘍に対して特異的なＦａｂ′断片と接触させることによって、前記腫瘍 に対して特異的なＴｃ−９９ｍ標識Ｆａｂ′断片を調製し、 ｂ、前記標識Ｆａｂ′断片を被検体に非経口的に注入し、ｃ、前記標識Ｆａｂ′ 断片を前記腫瘍において局在化し、そしてｄ、前記被検体をガンマ線カメラで走 査して、前記腫瘍の画像を得る、からなる、被検体における腫瘍のシンチグラフ ィーの画像を得る方法。 ５７、Ｆａｂ′断片は抗腫瘍抗体から誘導される、請求の範囲第５６項記載の方 法。 ５８、抗腫瘍抗体は、抗結腸直腸癌抗体、抗卵巣癌抗体、抗肺癌抗体、抗乳癌抗 体または抗前立腺抗体である、請求の範囲第５７項記載の方法。 ５９、工程： ａ、（ｉ）９９ｍＴｃＯ４−、および （ｉｉ）還元剤およびＴｃ−９９ｍのための水溶性配位子、の水性混合物を形成 し、そして前記混合物をＦａｂ′断片と接触させることによって、Ｔｃ−９９ｍ 標識された抗バクテリアＦａｂ′断片を調製し、 ｂ、前記標識Ｆａｂ′断片を被検体に非経口的に注入し、ｃ、前記標識Ｆａｂ′ 断片をバクテリア性腫瘍において局在化し、そして ｄ、前記被検体をガンマ線カメラで走査して、腫瘍の画像を得る、からなる、被 検体におけるバクテリア性腫瘍のシンチグラフィーの画像を得る方法。 ６０、水溶性配位子は、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ＸおよびＹはＯＨまたはＮＨ２であり、ＲおよびＲ′は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ 、またはＣＨ２ＯＨであるか、あるいはＲおよびＲ′は一緒になって環または２ 座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍ＋ｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ２ は、独立に、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲは一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０または１であり、ただしｐが１であるとき、ｍお よびｎは独立に少なくとも１である、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第５９項記載の方法。 ６１、配位子は、式： Ｒ−（ＣＨＯＨ）ｎ−Ｒ′ 式中、ＲおよびＲ′はＣＯＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、そしてｎ＝２〜１０で ある、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第６０項記載の方法。 ６２、配位子は約１０，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシジカ ルボン酸またはその塩である、請求の範囲第６１項記載の方法。 ６３、配位子は糖酸、グルコヘプトン酸、ガラクタル酸、酒石酸およびアラボン 酸から成る群より選択される、請求の範囲第６２項記載の方法。 ６４、移送配位子は糖酸またはその塩である、請求の範囲第６３項記載の方法。 ６５、Ｆａｂ′は抗バクテリア抗体から誘導される、請求の範囲第６３項記載の 方法。 ６６、Ｆａｂ′は抗マクロファージ抗体から誘導される、請求の範囲第６３項記 載の方法。 ６７、工程： ａ、（ｉ）９９ｍＴｃＯ４−、および （ｉｉ）還元剤およびＴｃ−９９ｍのための水溶性配位子、の水性混合物を形成 し、そして前記混合物をミオシン特異的Ｆａｂ′断片と接触させることによって 、Ｔｃ−９９ｍ標識されたミオシン特異的Ｆａｂ′断片を調製し、 ｂ、前記９９ｍＴｃ標識ミオシン特異的Ｆａｂ′断片を被検体に注入し、ｃ、前 記断片を心筋梗塞の部位において局在化し、そしてｄ、前記被検体を心臓の領域 において走査して、前記梗塞の画像を得る、 からなる、被検体における心筋梗塞の画像を得る方法。 ６８、水溶性配位子は糖酸またはその塩である、請求の範囲第６７項記載の方法 。 ６９、工程： ａ、（ｉ）９９ｍＴｃＯ４−、および （ｉｉ）還元剤およびＴｃ−９９ｍのための水溶性配位子、の水性混合物を形成 し、そして前記混合物をフィプリン特異的Ｆａｂ′断片と接触させることによっ て、Ｔｃ−９９ｍ標識されたフィプリン特異的Ｆａｂ′断片を調製し、 ｂ、前記９９ｍＴｃ標識フィブリン特異的Ｆａｂ′断片を被検体に注入し、 ｃ、前記断片を血液凝固の部位において局在化し、そしてｄ、前記被検体を走査 して、前記凝固の画像を得る、からなる、被検体における血液凝固の画像を得る 方法。 ７０、工程： ａ、（ｉ）レニウム−１８６、レニウム−１８８、レニウム−１８９またはレニ ウム−１９１のベルヘネート（ｐｅｒｒｈｅｎａｔｅ）、および （ｉｉ）還元剤およびレニウムのための水溶性配位子、の水性混合物を形成し、 そして前記混合物を腫瘍特異的断片と接触させることによって、レニウム標識腫 瘍特異的抗体断片を調製し、そしてｂ、前記レニウム標識断片する、 からなる、腫瘍の免疫治療の方法。 ７１、バイアル中において、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片および還元 剤から構成された抗体混合物を、酸化された状態のテクネチウム−９９ｍと接触 させることからなる、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片をテクネチウム− ９９ｍで標識付けする１つのバイアルの方法。 ７２、抗体混合物は、さらに、水溶性配位子を含む、請求の範囲第７１項記載の 方法。 ７３、スルフヒドリル含有抗体はＩｇＧに還元される、請求の範囲第７２項記載 の方法。 ７４、抗体断片はＦａｂ′断片である、請求の範囲第７１項記載の方法。 ７５、Ｆａｂ′はＦ（ａｂ′）２をＤＴＴで還元することによって産生される、 請求の範囲第７４項記載の方法。 ７６、抗体混合物は凍結乾燥された形態から再構成される、請求の範囲第７１項 記載の方法。 ７７、水溶性配位子は、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 ＸおよびＹはＯＨまたはＮＨ２であり、ＲおよびＲ′は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ 、またはＣＨ２ＯＨであるか、あるいはＲおよびＲ′は一緒になって環または２ 座もしくは多座の配位子を形成することができ、 ｍおよびｎは０〜１０でありかつｍ＋ｎは少なくとも２であり、Ｒ１およびＲ２ は、独立に、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、アリールまたは低級アルキ ルアリールであるか、あるいはＲ１およびＲけ一緒になってカルボニル基を完成 することができ、そしてｐは０または１であり、ただしｐが１であるとき、ｍお よびｎは独立に少なくとも１である、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第７２項記載の方法。 ７８、配位子は、式： Ｒ−（ＣＨＯＨ）ｎ−Ｒ′ 式中、ＲおよびＲ′はＣＯＯＨまたはＣＨ２ＯＨであり、そしてｎ＝２〜１０で ある、 により表される化合物またはその塩である、請求の範囲第７７項記載の方法。 ７９、配位子は約１０，０００ダルトンより小さい分子量のポリヒドロキシジカ ルボン酸またはその塩である、請求の範囲第７８項記載の方法。 ８０、配位子はＤ−グルカル酸、グルコヘプトン酸、酒石酸、ガラクタル酸、ア ラボン酸およびそれらの塩類から成る群より選択される、請求の範囲第７９項記 載の方法。 ８１、水溶性配位子はＤ−グルカル酸またはその塩である、請求の範囲第８０項 記載の方法。 ８２、還元剤は第一スズの還元剤である、請求の範囲第１項記載の方法。 ８３、工程： ａ、ｉ、Ｆａｂ′抗体断片、 ｉｉ、第一スズの還元剤、および ｉｉｉ、Ｄ−グルカル酸、 の凍結乾燥混合物を含有するバイアルを準備し、そしてｂ、前記バイアルにナト リウム（９９ｍＴｃ）パーテクネテートの水溶液を添加する、 からなる、Ｆａｂ′抗体断片をテクネチウム９９ｍで標識付けする方法。 ８４、スルフヒドリル含有抗体または抗体断片および還元剤から構成された混合 物からなり、ここで前記抗体混合物を酸化された状態のテクネチウム−９９ｍと 接触させて、標識された抗体または抗体断片を提供する、スルフヒドリル含有抗 体または抗体断片をテクネチウム−９９ｍで標識付けするための１つのバイアル のキット。 ８５、抗体混合物は、さらに、水溶性配位子を含有する、請求の範囲第８４項記 載の１つのバイアルのキット。 ８６、抗体混合物は凍結乾燥された形態である、請求の範囲第８５項記載の１つ のバイアルのキット。