JPH03155796A - ＴＧＦ―αに対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は　ヒトの　腫瘍細胞増殖因子 （Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　　ｆ’ａ
ｅｔｏｒＳＴＧＦ）　−ａに特異的に反応するモノクロ
ーナル抗体、より詳しくは、ヒトＴＧＦ−αの免疫学的
精製、測定等を可能にするモノクローナル抗体に関する
。

従来の技術及び課題 ＴＧＦは１９７８年にＲＮＡ腫瘍ウィルスで形質転換し
た細胞の培養上清から分離された増殖因子である（Ｊ、
　Ｉ２．　Ｄｃｌａｒｃｏ、　Ｇ、　Ｊ、　Ｔｏｄａｒ
ｏ、　Ｐｒａｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｅａｄ、　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ、　　４
００１−４００５　　（１９７ｇ））。

このＴＧＦを培地中に添加することにより、細胞の増殖
促進、ＤＮＡ合成の促進及び正常細胞の悪性形態様変化
、軟寒天培地中におけるコロニー形成能の獲得が確認さ
れている。

近年、多くの腫瘍細胞、腫瘍組織、胎児細胞及び正常細
胞から、数種のＴＧＦが分離され（Ａ、Ｂ。

Ｒｏｂｅｒｔｓ、ｅｔ　ａｌ、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、
　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ。

７７、３４９４−３４９８　（１９８０）；　Ｇ、　Ｊ
、　Ｔｏｄａｒｏ、　Ｃ，Ｉ４゜Ｆｒｙｌｉｎｇ、　Ｊ
、　Ｅ、　Ｄｅｌａｒｅｏ、　Ｐｒａｃ、　Ｎａｔｌ、
　Ａｃａｄ。

Ｓｃ１．　ＬＩＳＡ、　７７、５２５８−５２６２　（
１９８０））　、之等はその物理化学的性質よりＴＧＦ
−α、−β、−γの３群に分類されている。このうちＴ
ＧＦ〜αは上皮細胞増殖因子（Ｅｐｉｄｃｒｍａｌ　ｇ
ｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　；ＥＧＦと略す）と極めて
類似した二次構造をもち、全アミノ酸の３２％が相同性
を有すること及びレセプターを共有することが知られて
いる。

ＴＧＦ−αの特性から、インビボでの造腫瘍性との密接
な関連が示唆され、ＴＧＦ−αの体液中濃度の測定が、
癌診断等に応用されることが期待できる。

従来、ＴＧＦ−αの測定は、Ａ４３１細胞等を用いたラ
ジオ　レセプター　アッセイ法によって行われてきたが
、この方法ではレセプターを共ＨするＥＧＦとの分別が
不可能であり、ＴＧＦ−αを正確には測定できなかった
。よってＴＧＦ−αに特異的で高感度な測定系が当業界
で望まれる。

課題を解決するための手段 本発明の目的は、上記測定系の開発及びそのための抗体
を提供することにあり、この目的はヒトＴＧＦ−αに特
異的に反応するモノクローナル抗体により達成される。

本発明抗体は、これをＥＬＩＳＡ系に利用することによ
って、ＴＧＦ−αを特異性に優れ、高感度で、しかも簡
便に測定可能とする。

特に本発明抗体はＥＧＦと交叉性を示さず、従って、こ
れを用いたサンドイッチＥＬ　Ｉ　ＳＡ系はＥＧＦと交
叉性を示さない。また本発明抗体を利用したＥＬ　Ｉ　
ＳＡ系では７８ｐｇ／ｍｌまでの低濃度のヒ）ＴＧＦ−
αが検出可能である。

さらに本発明抗体はヒトＴＧＦ−αの生物活性に対して
中和活性を有し、ヒトＴＧＦ−αの測定に好適である。

従って、本発明抗体を用いた測定系は、ＴＧＦ−αの関
連する各種の疾患、例えば各種の癌の検出及び診断に有
用である。

また、本発明抗体はヒトＴＧＦ−αに特異的であるため
、例えばアフィニティークロマトグラフィー等の手法に
よる、ヒトＴＧＦ−αの特異的精製に利用できる。

更に、ヒトＴＧＦ−αの生物活性に対して中和活性をＨ
する本発明抗体は、ＴＧＦ−αの産生を伴う１各種の疾
患、例えば各種のガンにおけるＴＧＦ−αの生物活性を
、抑制乃至中和するために有用であり、かかる各種疾患
の治療上極めて価値ある医薬が提供される。

本発明抗体は、ヒトＴＧＦ−αを免疫抗原として製造で
きる。より具体的には、例えば上記免疫抗原で免疫した
哺乳動物の形質細胞（免疫細胞）と哺乳動物の形質細胞
腫細胞との融合細胞（ｈｙｂｒｌｄｏｍａ）を作成し、
これよりヒトＴＧＦ−αを認識する所望抗体を産生ずる
クローンを選択し、該クローンの培養により製造できる
。

上記方法において用いられる免疫抗原としてのヒトＴＧ
Ｆ−αは、特に限定はなく、既に公知のインビトロで誘
導されたヒトＴＧＦ−αを４．４−する培養上清乃至そ
の精製標品、遺伝子組換え技術に従い製造されたヒトＴ
ＧＦ−α及びそれらの−部のアミノ酸配列を有する合成
ペプチド等のいずれでもよい。

また、上記方法において免疫抗原で免疫される哺乳動物
としては、特に制限はないが、細胞融合に使用する形質
細胞腫細胞との適合性を考慮して選択するのが好ましく
、一般にはマウス、ラット等がａ利に用いられる。

免疫は一般的方法により、例えば上記免疫抗原又は結合
試薬により担体と結合させた抗原を哺乳動物に静脈内、
皮内、皮下、腹腔内注射等により投与することにより実
施できる。

上記に於いてハプテンに結合される担体としては、通常
抗原の作成にあたり慣用される高分子の天然もしくは合
成の蛋白質を広く使用でき、例えば各種動物の血清アル
ブミン類、血清グロブミノ類、チログロブリン類、ヘモ
グロビン類、ヘモシアニン類や、回虫より抽出された蛋
白質（アスカ−リス抽出物、特公昭６１−６１３５０号
）等のほか、ポリリジン、ポリグルタミン酸、リジン−
グルタミン酸共重合体、リジン又はオルニチンを含む共
重合体等を挙げることができる。

また、結合試薬としては、通常の抗原の作成に当たり慣
用されるものを広く使用でき、具体的にはアミノ基とア
ミノ基を架橋結合する、例えばグリオキサール、マロン
ジアルデヒド、ゲルタールアルデヒド、スクシンアルデ
ヒド、アジポアルデヒド等の脂肪族ジアルデヒド類、チ
オール基とチオール基を架橋結合する、例えばＮ、Ｎ’
−０−フェニレンジマレイミド、Ｎ、Ｎ−−ｍ−フェニ
レンジマレイミド等のシマレイミド化合物、アミノ基と
チオール基を架橋結合させる、例えばメタマレイミドベ
ンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル等の
マレイミドカルボキシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステル化合物、アミノ基とカルボキシル基とをアミ
ド結合する通常のペプチド結合形成反応に用いられる試
薬、例えばＮ、Ｎ″−ジシクロへキシルカルボジイミド
、Ｎ−エチル−Ｎ″−ジメチルアミノカルボジイミド、
１−エチル−３−ジイソプロピルアミノカルポジイミド
、１−シクロへキシル−３−（２−モルホニル−４−エ
チル）カルボジイミド等のカルボジイミド類等の脱水縮
合剤を挙げることができるが、さらにはｐ−ジアゾニウ
ムフェニル酢酸等のジアゾニウムアリールカルボン酸類
と通常のペプチド形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤
とを組み合わせたものも、使用可能である。

免疫は、例えばマウスの場合、免疫抗原を所望により通
常のアジュバントと併用して、供試動物に２〜１４日毎
に数回投与し、総投与世が約１００〜５００μｇ／マウ
ス程度になるようにして実施するのが好ましい。免疫細
胞としては、上記最終投与の約３日後に摘出した膵臓細
胞を使用するのが好ましい。

更に、上記免疫細胞と融合される他方の親細胞としての
哺乳動物の形質細胞腫細胞としては、既に公知の種々の
もの、例えばｐ３　（ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ８）　　（Ｎ
ａｔｕｒｅ、　２５６．４９５−４９７　（１９７５）
　）、ｐ　３−　Ｕ　１　（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｏｐｉ
ｃｓ　ｉｎ　Ｍｌｃｒｏｂｌｏｌｏｇｙａｎｄ　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ、　８１．１−７　（１９７８）　　）
　、ＮＳ　−１（Ｅｕｒ、　　Ｊ、　　１ｍｍｕｎｏ１
．、６．５１１−５１９　（１９７Ｂ））、ＭＰ　Ｃ−
１１（Ｃｅ１１．　８．４０５−４１５　　（１９７Ｂ
）　）、Ｓ　Ｐ　２　／　Ｏ（Ｎａｔｕｒｅ、　　２７
８，２８９−２７０　（１９７８）　）、Ｆ　Ｏ（Ｊ、
　　１ｍｏ＋ｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈ、、　３５．１−２
１　（１９８０）　）、Ｘ６３．　６．　５．　３．　
　（Ｊ、　　ｌ＋＋ｍｕｎｏ１．、　１２３．１５４８
−１５５０　（１９７９）　）　、５１９４　　（Ｊ、
　Ｅｘｐ、　　Ｍｅｄ、。

１４８、３１３−３２３　（１９７８）　’）等や、ラ
ットにおけるＲ２１０　（Ｎａｔｕｒｏ、　２７７、１
３１−１３３　（１９７９））等の骨髄腫細胞等を使用
できる。

上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との融合反応は、公知の
方法、例えばＭｉ　１ｓｔｅｉｎらの方法（Ｍｅｔｈｏ
ｄｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌ、　７３．　
ｐｐ　３　（１９８１）　）等に準じて行なうことがで
きる。より具体的には、上記融合反応は、通常の融合促
進剤、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、セン
ダイウィルス（ＨＶＪ）等の存在下に、通常の培地中で
実施され、培地には更に融合効率を高めるためにジメチ
ルスルホキシド等の補助剤を必要に応じて添加すること
もできる。免疫細胞と形質細胞腫細胞との使用比は、通
常の方法と変りはなく、例えば形質細胞腫細胞に対して
免疫細胞を約１〜１０倍程度用いるのが普通である。融
合反応時の培地としては、形質細胞腫細胞の増殖に通常
使用される各種のもの、例えばＲＰＭＩ−１６４０培地
、ＭＥＭ培地、その他のこの種細胞培養に一般に利用さ
れるものを例示でき、通常２等培地は牛胎児血清（Ｆ　
ＣＳ）等の血清補液を抜いてお（のがよい。

融合は上記免疫細胞と形質細胞肺細胞との所定量を、上
記培地内でよ（混合し、予め３７℃程度に加温したＰＥ
Ｇ溶液、例えば平均分子量１０００〜６０００程度のも
のを、通常培地に約３０〜６０ｗ／ｖ％の濃度で加えて
混ぜ合せることにより行なわれる。以後、適当な培地を
逐次添加して遠心し、上清を除去する操作を繰返すこと
により所望のハイブリドーマが形成される。

得られる所望のハイブリドーマの分離は、通常の選別用
培地、例えばＨＡ　Ｔ培地（ヒポキサンチン、アミノプ
テリン及びチミジンをきむ培地）で培養することにより
行なわれる。該ＨＡＴ培地での培養は、目的とするハイ
ブリドーマ以外の細胞（未融合細胞等）が死滅するのに
充分な時間、通常数日〜、数週間行なえばよい。かくし
て得られるハイブリドーマは、通常の限界希釈法により
目的とする抗体の検索及び単一クローン化に供される。

目的抗体産生株の検索は、例えばＥＬ　Ｉ　ＳＡ法（Ｅ
ｎｇｖａｌｌ、　Ｅ、、　Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ
、、　’１６．４１９−４３９（１９８０））　、プラ
ーク法、スポット法、凝集反応法、オフテロニー（０ｕ
ｃｈｔｃｒｌｏｎｙ）法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩ
　Ａ）法等の一般に抗体の検出に用いられている種々の
方法（「ハイブリドーマ法とモノクローナル抗体」、株
式会社Ｒ＆Ｄプラニング発行、第３０〜５３頁、昭和５
７年３月５日）に従い実施することができ、この検索に
は前記免疫抗原が利用できる。

かくして得られるヒトＴＧＦ−αを認識する所望のモノ
クローナル抗体を産生ずるハイブリドーマは、通常の培
地で継代培養することができ、また液体窒素中で長期間
保存することができる。

上記ハイブリドーマからの所望抗体の採取は、該ハイブ
リドーマを、常法に従って培養してその培養上清として
得る方法やハイブリドーマをこれと適合性のある哺乳動
物に投与して増殖させ、その腹水として得る方法等が採
用される。前者の方法は、高純度の抗体を得るのに適し
ており、後者の方法は、抗体の大量生産に適している。

また上記のごとくして得られる抗体は、更に塩析、ゲル
濾過法、アフィニティクロマトグラフイー等の通常の手
段により精製することができる。

発明の効果 本発明によ゛す、ヒトＴＧＦ−αに特異的なモノクロー
ナル抗体が提供され、本発明抗体を利用することによゆ
、高感度で特異性に優れたヒトＴＧＦ−αの測定が可能
となる。従って臨床サンプル等に含有される極めて低濃
度であるヒトＴＧＦ−αを、正確に測定できる免疫測定
法が提供される。

実施例 本発明を更に詳しく説明するため、以下に実施例を挙げ
る。

（１）モノクローナル抗体の製造 リコンビナント　ヒトＴＧＦ−α（アース製薬株式会社
製）をＷＳＣＤ法（Ｗａｔｅｒ　５ｏｌｕｂｌｅｃａｒ
、ｂｏｄｉｉｍｉｄｅ法）及びＢＤＢ法（Ｂｉｓ−ｄｉ
ａｚｏｔｉｚｅｄｂｃｎｔｉｄｉｎ法）により、アスカ
リス抽出蛋白質と結合した。３０週齢のＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ
　／　ｃ♂マウスに、その結合物３３μｇ／匹を完全フ
ロイント　アジュバントと共に腹腔内投与し、その後同
様に２回、１週問おきに追加投与して免疫した。最終免
疫の３〜４日後に、上記免疫したマウスの牌細胞と廿髄
腫細胞（マウス　ミエローマｐ３−Ｕｌ）を、５：１の
割合で用いて、ポリエチレングリコール（ポリエチレン
グリコール１５００）により細胞融合した。

ＨＡＴ培地でハイブリドーマを選別した後、その上清を
酵素免疫測定法で試験して、限界希釈法により、目的の
ヒトＴＧＦ−αに対する抗体産生株を検出した。この酵
素免疫測定法は、上記ヒトＴＧＦ−αをコートした９６
穴マイクロプレート及びパーオキシダーゼ標識ヤギ抗マ
ウスグロブリン抗体（イー、ライ。ラブ、　　（Ｅ、　
Ｙ、　Ｌａｂ、）社製）を用いて行った。

検出された抗体産生株を、上記免疫に用いたものと同系
統のマウス腹腔内で増殖させ、抗ヒトＴＧＦ−αモノク
ローナル抗体を腹腔液として得た。

上記抗体産生株は、工業技術院微生物工業技術研究所に
ｒＯＡＬ−ＭＴＧ−０１４なる表示で寄託されており、
その寄託番号は微工研菌寄第１０７６９号（ＦＥＲＭ　
　Ｐ−１０７６９）である。

（２）抗ヒトＴＧＦ−αモノクローナル抗体の性質 く抗体力価の測定〉 各希釈率の抗ＴＧＦ−αモノクローナル抗体希釈液１０
０，１．約□１７ｐｇ／ｍ／の１２Ｊ　　７ＧＦ−α（
上記ヒトＴＧＦ−αをヨード化したもの’）　１００１
　　（ｌｏｏｏｏｃｐｍ）及び０．１％のＢＳＡを含む
５０ｍＭ　　ＰＢＳ　（ｐＨ７，４）６００μンを混合
し、４℃で一晩放置した。この反応液に正常マウス血清
１００μｌ、抗マウスＩｇＧ抗体１００μｌ及び１５％
のＰＥ０２００μｌを加え、室温で３０分放置後、４℃
で３０分間、３０００　ｒｐｍで遠心して抗ＴＧＦ−α
モノクローナル抗体抗原複合物を沈殿させた。上清と沈
殿を分離して夫々の放射活性をカウントし、沈殿のカウ
ント数を全カウント数（１００００ｃｐｍ）で徐したも
の（Ｂ／Ｔ）を縦軸とし、抗体の希釈率を横軸としてプ
ロットした。その結果を第１図に示す。第１図から、本
抗体の２５００倍希釈液が約５０％の結合を与えること
が解る（力価２５００）。

くヒトＴＧＦ−αに対する特異性〉 第１図で約５０％の結合を与える希釈率の抗ＴＧＦ−α
モノクローナル抗体希釈液を用いて、ヒトＴＧＦ−αに
対するスタンダード　カーブを作成した。即ち、２５０
０倍希釈の抗ＴＧＦ−αモノクローナル抗体（０，４４
μｇ　／　ｍ　ｌに相当）を用い、３４μｇ／ｍｚの１
２５Ｉ−ＴＧＦ−α１００　ｕ　ｌ　　（２００００ｃ
ｐｍ）と同時に各濃度のヒトＴＧＦ−α又はＥＧＦ　（
アース製薬株式会社製）１００μｔを加える以外は、上
記力価測定系と同一の系に於いて反応を行い、上清と沈
殿の放射活性を測定した。この時の沈殿のカウント値（
Ｂ）を、ＴＧＦ−α又はＥＧＦを加えずに同様の反応を
行った時の沈殿のカウント値（Ｂ　ｏ）で徐した値（Ｂ
／Ｂｏ）を縦軸とし、ＴＧＦ−α又はＥＧＦの濃度を横
軸としてプロットした。その結果を第２図に示す。

第２図から、本抗体はヒトＴＧＦ−ｒ−αに対して高い
特異性を示し、ＥＧＦとは交叉しないことが解る。

＜Ａ４３１細胞に於ける中和活性〉 従来ＴＧＦ−αの測定に用いられてきたＡ４３１細胞に
於いて、ＴＧＦ−αの生物活性に対する本抗体の作用を
調べた。

各濃度の本抗体希釈液１００μン、ホルマリンで固定し
たＡ４３１細胞２００μｌ　　（２００００細胞）及び
１２５１−ＴＧＦ−α２００１’　　（２００００ｃｐ
ｍ）を４°Ｃで一晩反応させた。これを３００Ｏｒｐｍ
で３０分遠心し、上清を除き、沈殿（Ａ４３　ルセブタ
ー細胞）のカウントを測定した。

結果を第３図に示す。第３図から、本抗体はＡ４３１細
胞に於いて、抗体濃度が１．３５μｇ／ｍ７！の時に１
２５１−ＴＧＦ−ａの結合を５０％阻害することが解る
。

このことにより、本抗体はＡ４３１細胞レセプターに対
するＴＧＦ−αの結合を阻害することが考えられ、ＴＧ
Ｆ−αの生物活性に対する本抗体の中和活性が示唆され
る。

（３）ヒトＴＧＦ−α特異的ＥＬＩＳＡ系の作成本抗体
を用いて、ヒトＴＧＦ−α特異的すンドイッチＥＬＩＳ
Ａ系を作成した。本ＥＬＩ　ＳＡ系は、本抗体をキャッ
チャ−抗体とし、測定試料を反応後、ポリクローナル抗
体、ペルオキシダーゼ標識・抗つサギＩｇＧ抗体（ザイ
メット社製）を反応させ、基質として０−フェニレンジ
アミンを用いる測定系である。

即ち、まず９６ウエル　プレートに５μｇ／ｍｌの本抗
体を１００μｌ加え、４℃で一晩放置して固相化し、プ
レートを洗浄後１％ＢＳＡで室温で４時間以上ブロッキ
ングした。

洗浄したこのプレートに測定試料１００μｌを加え、４
℃で一晩反応させた。

さらにプレートを洗浄後３０００倍希釈した抗ＴＧＦ−
α−ポリクローナル抗体１００μ２を加え、室温で２時
間放置した。

さらにプレートを洗浄後、３０００倍希釈した上記ペル
オキシダーゼ標識・抗つサギＩｇＧ抗体１００μｌを加
え、室温で１時間放置した。。

最後にプレートを洗浄後、０−フ二二しンジアミン１ｍ
ｇ／ｍ／溶液を加えて５分間発色させ、ＯＤ４９２ｎｍ
を測定した。

測定試料としてＴＧＦ−α又はＥＧＦを用いた結果を第
４図に示す。このＥＬ　Ｉ　ＳＡ系はＥＧＦと少なくと
も１μｇ　／　ｍ　／まで交叉性を示さず、しかも、Ｔ
ＧＦ−ａを７８ｐｇ／ｍ／の低濃度まで検出可能であっ
た。

（３）で作成したヒトＴＧＦ−α特異的ＥＬＩＳＡ系を
用いて、ヒト試料中のＴＧＦ−α量を測定した。ヒト試
料としては、健常人尿及び膀胱癌患者床を用い、両者を
比較した。

まず尿５０ｍ／を、Ｏ，ＩＭ　　ＮａＣ／を含む５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）に−晩透析し、この透析
床１００μｌを測定試料として上記ＥＬ　Ｉ　ＳＡ系に
かけた。結果を第５図及び第３表に示す。

第５図Ｂ及びＣは、健常人及び膀胱癌患者の透析床を各
々、セファデックスＧ−５０スーパーフアイン（１，８
ｃｍｘ６５ｃｍ）を用い、１Ｍ酢酸水溶液でゲル濾過分
離した後、各分画を２．５ｍ／ＥＬＩＳＡ系で測定した
ものであり、第５図Ａは透析床の代わりにリコンビナン
ト　ヒトＴＧＦ−αを用いた対照である。健常人の透析
床はＴＧＦ−α含有量が少ないため、透析後凍結乾燥を
繰り返して濃縮し、その後ゲル濾過した。

結果は、健常人尿試料はりコンビナンド　ヒトＴＧＦ−
αと同じ溶出位置に本発明抗体に結合するピークを持つ
が、膀胱癌患者尿試料ではそのピークが左に移動するこ
とを示す。このことは、膀胱癌患者尿中には、リコンビ
ナント　ヒトＴＧＦ−αとは異なる分子型をもつＴＧＦ
−α様免疫活性物質が存在し、本発明抗体は健常人尿中
のヒトＴＧＦ−αのみならず、この分子型とも結合する
ことを示唆する。

健常人尿及び膀胱癌患者尿中のＴＧＦ−α様免疫活性物
質の量を測定した結果をまとめたのが第１表である。こ
こで健常人尿はＴＧＦ−α含有量が少ないため、透析後
、本発明抗体を用いたアフィニティ　りロマトグラフィ
にかけ測定試料とした。アフィニティ　りロマトグラフ
ィは、まず、ＣＮＢ　ｒ活性化セファロース４Ｂ（ファ
ルマシア製）２ｍ／に本発明抗体ＩＱｍｇを結合させて
アフィニティ　カラムを作成し、次に、これに透析床５
０ｍ／をアプライし、０．１Ｍ　　ＮａＣ／を含む５０
ｍＭリン酸緩衝液で洗浄後、０．ＩＭＮａＣｌを含む０
．０５Ｍグリシン−ＨＣ／緩衝液（ｐＨ２二　３）でＴ
ＧＦ−αを溶離し、ｐＨ調節後上記ＥＬ　Ｉ　ＳＡ系で
測定した。

各試料中のＴＧＦ−α様免疫活性物質の量は、健常人尿
で１．０３〜４．７５ｐｇ／ｍ！、膀胱癌患者尿では２
４１．７μｇ／ｍ！！及び４３０、Ｏｐｇ／ｍ／であり
、健常人及び膀胱癌患者間で顕著な差異を示した。

これらの結果から、本発明抗体を用いたＥＬＩＳＡ系が
健常人及び癌患者の診断に非常に有用であることが示唆
される。

第 １ 表 第３図は、Ａ４３ルセブター細胞に対する抗ヒトＴＧＦ
−αモノクローナル抗体の阻害反応を示す。

第４図は、抗ヒトＴＧＦ−αモノクローナル抗体を用い
たＥＬ　Ｉ　ＳＡ系の、スタンダード　カーブである。

第５図は、ヒト試料中のＴＧＦ−α様免疫活性物質の、
ゲル濾過パターンを示す。

（以　上）

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗ヒトＴＧＦ−αモノクローナル抗体の力価
曲線である。 第２図は、抗ヒトＴＧＦ−αモノクローナル抗体を用い
た、ＴＧＦ−αのスタンダード　カーブである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒトＴＧＦ−αに特異反応性を有することを特徴
   とするヒトＴＧＦ−αに対するモノクローナル抗体。