JPH03101624A - 血小板減少症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は血小板減少症治療剤に関する．より詳細に記す
と、本発明はヒトＢＣＤＦを有効成分とする血小板減少
症治療剤に関する。

〔従来の技術〕

ヒト及びマウスにおいて或ＤＢ細胞を抗体産生細胞へ分
化させる因子をＢ細胞分化因子（ＢＣＤＦ）と総称する
． ヒトの体内においてこのような重要な作用を有するとト
ＢＣＩ）Ｆについて、本発明者等は研究を重ね、そのＤ
ＮＡ配列、及びアミノ酸配列を決定（特開昭６３−４２
６８８．６３−５６２９１）　Ｌ、大腸菌によるヒトＢ
ＣＤＦの生産に戒功している（特開昭６３−４５７９９
６）　．またヒト　ＢＣＤＦが感染症及び癌の治療に有
効な免疫療法剤となる事、骨髄移植療法の有効な支持剤
となる事も見出している（特願昭６２−２８９００７，
特願昭６３−１４７５９４）　．　Ｌかしながら、今ま
でこのヒトＢＣＤＦの血小板造血に対する薬効について
の報告はない． なおヒトＢＣＤＰをＢＳＦ−２あるいはインターロイキ
ン６（ＩＬ−６）と呼ぶことも提唱されているが、（Ｎ
ａｔｕｒｅ，　３２４．　７３（１９８６），　ＥＮＢ
Ｏ．Ｊ．，　６．　１２１９（１９８７）　）ここでは
従来よりのＢＣＤＦなる名称を用いる．またここで用い
るヒトＢＣＤＦはインターフェロン活性を有さす、よっ
てインターフェロン活性を持つＩＦＮ−β２標品（ヨー
ロッパ出願公開魚０２２０５７４）とは異なる． ここではまずヒトＢＣ叶を含有する血小板減少治療剤が
効果を呈する血小板減少症について概説するとともに現
在行なわれている治療法について簡単に説明する． 血小板は生体の止血機構に重要な役割を果たす血球成分
であり、損傷組織へ粘着・凝集するとともに細胞内成分
を放出し一連の凝固反応を惹起する． さて、血小板の数が減少する血小板減少症には遺伝性血
小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病、再性不良性貧
血などが知られているが、臨床的に重要なのは放射線全
身照射、造血抑制作用のある薬剤などによる二次性の血
小板減少症である．これらの二次性血小板減少症は癌患
者への化学療法・放射線療法、骨髄移植療法等に伴い、
多くの場合骨髄巨核球が低形成となる事により発症し、
患者の予後の回復を遅延させたり、場合により出血死に
至らしめる事もある危険な疾患である．血小板減少症に
対する現在最もよく用いられている治療法としては血小
板数を２０，０００個／μＥ以上に保つよう血小板輸血
が行なわれている。しかし例えば骨髄移植の場合血小板
数が正常値に回復するには数カ月を要するため、多回に
わたるＨＬＡ不一致の血小板輸血が必要となる。その結
果、抗血小板抗体が生じ血小板輸血しても血小板数が増
加しなくなる例が多い．また輸血によるサイトメガロウ
イルス等の感染の危険もあり、サイトメガロウイルスに
よる間質性肺炎が術後の死因の三大要因の一つを占める
事を考えると、なるべく血小板輸血の回数は減らす方が
好ましい．ところで、血小板造血は多能性造血幹細胞に
由来する巨核球系前駆細胞が、巨核芽球を経て巨核球と
なり、その後この巨核球から血小板が産生されろ過程で
ある． この生理的な血小板造血は液性因子によって制御されて
いると考えられている． 従ってこのような液性因子を外部より補充する事により
愚者自身の血小板造血を充進させれば、血小板輸血を行
なう事なく出血を肪ぐ事ができ、ひいては血小板減少症
の根本的な治療に有効であると期待できる． 血小板造血に関与する液性因子としてこれまでトロンボ
ボエチン（ＴＰＯ）、巨核球刺激因子（ＭＳＦ）若しく
は血小板造血刺激因子（ＴＳＦ）等の因子がｉｎｖｉｖ
ｏで巨核球の或熟・分化を冗進するとされているが、そ
の実体は明らかではない．（医学のあゆみ，１４３巻．
５２８頁（１９８７））　．一方、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで
の巨核球コロニー形或には巨核球コロニー刺激因子（ｌ
ｉｅｇ　−　ＣＳＰ）及び巨核球コロニー増幅因子（Ｍ
ｅｇ　−　ＰＯＴ）が必要であるという報告もある（メ
ディカルイムノロジー．　１４巻．４６３頁（１９８７
）　）　． 近年ＧＭｅｇ　−　ＣＳＦについてはｉｎｖｉｔｒｏに
おいてＩＬ−３％、ＧＭ−ＣＳＦ，　ＥＰＯ等がＭｅｇ
　−　ＣＳＦ活性を有する事が明らかになったが（実験
医学，５巻．８２２Ｎ　（１９８７）　）、その他の因
子については、その存在が種々の生理活性測定系より示
唆されるのみである． もちろんアミノ酸配列・ＤＮＡ配列等も不明であり、し
たがって医薬として用いうる純品を、工業的に生産する
事もなされていない．さらに重要なことはこれらの因子
を生体内投与しても末梢血血小板数が増加するとの報告
が未だない事である。

すなわち患者へ投与する事により、愚者自身の血小板数
を増加させるような血小板造血冗進作用を有する因子は
未だない． 〔発明が解決しようとする課題〕 そこで本発明の目的は従来にない、血小板減少症患者自
身の血小板造血を冗進し、結果として血小板減少症を治
療する薬剤の提供である．〔課題を解決する為の手段〕 本発明者等は上記課題を解決する為に鋭意研究を重ねた
結果、ヒトＢＣＤＦが■ｉｎ　ｖｉｔｒｏでＩＬ−３等
と相乗的に巨核球を増殖させる事及び単独で巨核球のＩ
ｆｊ．熟・分化を誘導する事、■生体内投与で末梢血血
小板数を増加させる事を見出し、本発明を完成した． すなわち、本発明はヒｌ−　ＢＣＤＦを有効成分とする
血小板減少症治療剤である。

本発明に係るヒト　ＢＣＤＦは例えば特開昭６３−４２
６８８．６３　−　５６２９１及び特願昭６２　−　２
８９００７号公報に示されるような、下記のアミノ酸配
列（１）又は（ＩＩ）を有する． アミノ酸配列（■）： Ｐｒｏ　　Ｖａｌ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　
Ｇｌｕ　　Ａｓｐ　　Ｓｅｒ　　Ｌｙｓ　　Ａｓｐ　　
Ｖａｔ＾１ａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ａｒｇ　Ｇｌ
ｎ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　ＳｅｒＧｌｕ　
　Ａｒｇ　　Ｉｌｅ　　Ａｓｐ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｎ　
　Ｉｌｅ　　Ａｒｇ　　Ｔｙｒ　　Ｉｌｅ　　ＬｅｕＡ
ｓｐ　Ｇｌｙ　Ｉｃｅ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｒ
ｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　ＧｙｓＬｙｓ　　Ｓｅｒ
　Ａｓｎ Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ｇｌｕ ＡＪａ　　Ｇｌｕ　　Ｌｙｓ Ａｓｎ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ　　Ａｓｎ Ａｌａ　　Ａｒｇ　　Ａｌａ Ｔｉｅ　　Ｇｉｎ　　Ｐｈｅ ＾ｓｐ　Ａｌａ　　Ｉｌｅ Ａ１ａ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ Ｇｌｎ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｓｅｒ Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ａｌａ Ａｓｎ Ａｌａ ｎｅｔ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｉ１ｅ Ｓｅｔ 又は アミノ酸配列 Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　Ｖａｌ Ｖａｌ　　Ａｌａ　　Ａｌａ Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ Ｌｅｕ　Ａａｐ　Ｇｌｙ Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ Ｍｅｔ　Ｃｙｓ　　Ｇｌｕ Ａｓｎ　　Ａｓｎ　　Ｌｅｕ Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ 丁ｈｒ　　Ｃｙｓ　　Ｌｅｕ Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｕ Ａｒｇ　　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ Ｖａｌ　　Ｇｉｎ　　Ｍｅｔ Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ　　Ｌｙｓ Ｔｈｒ　　Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ Ｇｉｎ　　Ａｓｐ　　Ｍｅｔ Ｐｈｅ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｇｌｎ Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　　Ｌｙｓ Ａｓｎ　　Ｌｅｕ　　Ｐｒｏ Ｐｈｅ　　Ｇｌｎ　　Ｓｅｒ Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　　Ｉｌｅ Ｖａｌ　　Ｔｙｒ　　Ｌｅｕ Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｇｌｕ Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　　Ｌｙｓ Ｌｙｓ　　Ａｌａ　　Ｌｙｓ Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ　　Ａｌａ Ｔｈｒ　　Ｔｈｒ　　Ｈｉｓ Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｇ１ｙ ｌｉｅ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｔ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｉｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ （■）　： Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｙ Ｐｒｏ　　｝Ｉｉｓ　　Ａｒｇ ｌｉｅ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ Ｉ１ｅ　　Ｓｅｒ　　Ａｌａ Ｓｅｒ　　Ａｓｎ　　Ｍｅｔ Ｇｌｕ　　Ａｓｐ　　Ｓｅｒ Ｇｌｎ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ Ｇｉｎ　　Ｉｌｅ　Ａｒｇ Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｌｙｓ Ｃｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ Ｌｙｓ　　Ａｓｐ Ｔｈｒ　　Ｓｅｒ Ｔｈｒ　　Ｉｌｅ Ｇｌｕ　　Ｔｈｒ Ｓｅｒ　　Ｌｙｓ Ｇｌｕ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ｇｌｕ　　
Ａｓｎ　　Ａｓｎ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｎ　　Ｌｅｕ　　
ＰｒｏＬｙｓ　　Ｍｅｔ　Ａｈａ　Ｇｌｕ　　Ｌｙｓ　
　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ
Ｇｌｙ　　Ｐｈｅ　　Ａｓｎ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　　
Ｔｈｒ　　Ｃｙｓ　　Ｉ，ｅｕ　　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　
　ＩｌｅＴｉｅ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ
　　Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｕ　　Ｖａｌ　　Ｔｈｒ
　ＬｅｕＧｌｕ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ａ
ｒｇ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　ＧｌｕＧｌｕ
　Ｇｉｎ　　Ａｌａ　　Ａｒｇ　Ａｌａ　　Ｖａｌ　　
Ｇｉｎ　　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　ＬｙｓＶａｌ　　
Ｌｅｕ　　Ｉｌｅ　　Ｇｌｎ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ　　
Ｇｉｎ　　Ｌｙｓ　　Ｌｙｓ　　Ａｌａ　　ＬｙｓＡｓ
ｎ　　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｔ
ｈｒ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　ＴｈｒＴｈｒ　　Ａｓ
ｎ　　Ａｌａ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ　　Ｔｈ
ｒ　　Ｌｙｓ　　Ｌｅｕ　　Ｇｉｎ　　ＡｌａＧｌｎ　
Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　）
１ｅｔ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ＨｉｓＬｅｕ．　　Ｉｌｅ　
　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　　Ｌｙｓ　
　Ｇｌｕ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ　　ＧｉｎＳｅｒ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｌｅｕ　　Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　　Ａ
ｒｇ　　Ｇｉｎ　　Ｍｅｔアミノ酸配列（１）は天然型
ヒトＢＣＤＦであり、アミノ酸配列（Ｕ）は天然型ヒト
　ＢＣＤＦのＮ末端にＡｌａが１つ付加されたポリペブ
チド（以下ヒトＡｌａ　一ＢＣＤＰと記す）である。し
かし、本発明で用いるヒト　ＢＣＤＦは必ずしも上記ア
ミノ酸配列（１）又は（ＩＩ）で示される構造をとる必
要はない．即ち、天然型ヒトＢＣＤＦのＮ末端及び／又
はＣ末端より１個もしくは複数個のア呉ノ酸が付加され
た構造を有するもの、天然型ヒト　ＢＣＤＦの構造中の
１個もしくは複数個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換さ
れた構造を有するものも、ヒト　ＢＣＤＦ活性を有する
限り本発明のヒトＢＣＤＦとして用いることができる．
好ましくは天然型ヒトＢＣＤＦ又はヒトＡｌａ−　ＢＣ
ＤＦを用いるのがよい。本発明に係るヒトＢＣＤＦの含
量は当該血小板減少症治療剤中０．　０　０　０　１〜
１００重量％、好ましくは０．１〜１．０重量％である
． また本発明のヒトＢＣＤＦを有効成分とする血小板減少
症治療剤には血清アルブミン等の安定化剤、マンニトー
ル等の賦形剤を含有させてもよい。

更に本発明の血小板減少症治療剤にはヒト　ＢＣＤＦ以
外に、助剤としてヒトＢＣＤＦ以外のサイト力イン、例
えば、ＩＬ−３、ｒＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、Ｇ−
ＣＳＦ，　ＧＭ−ＣＳＦ　，　Ｍ−ＣＳＦ，　ＥＰＯ及
びＭｅｇ　−　ＣＳＦを１種類以上含有させてもよい。

このような助剤を含有させると血小板減少症治療剤とし
ての効果は相乗的に増加する。すなわちＩＬ−１、ＩＬ
−３、ＩＬ−４、ＩＬ−　５　、Ｇ−ＣＳ．Ｆ，　Ｇ門
ＣＳＦ，　Ｍ−ＣＳＦ，　ＥＰＯ　ＧＭｅｇ−ＣＳＦは
造血機能の冗進を増強するからである。これらの助剤の
添加量は特に限定しないが、ヒト　ＢＣＤＦを１００と
した場合にそれぞれ０．０００１〜２０００００重量％
添加すればよい。

くり返し述べるが、これら助剤の添加量は決して上述の
値に限定されるものでなく、症状、患者の年令等により
適宜決定すればよい。

尚、ＩＬ−３、等の助剤は必ずしもヒトＢＣＤＦと同時
に同じ薬剤として投与しなくともよい．即ち、ヒｌ−　
ＢＣＤＦを有効戒分とする血小板減少症治療剤の投与前
又は後の適当な時期にこれらの助剤を投与してもかまわ
ない． もちろん、本発明の血小板減少症治療剤は血小板輸血療
法と併用してもかまわない。

本血小板減少治療剤は静脈内注射で用いてもよいし、筋
肉内注射・皮下注射で用いても良い、。即ち、いずれの
方法を用いて投与してもかまわない．ヒトＢＣ叶の製剤
法については特願昭６２　−　２８９００７，昭６３　
−　１４７５９４に準じれば良い．さて、本発明に用い
るヒトＢＣ叶はヒトＴ細胞、Ｂ細胞、線維芽細胞等より
既知の方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃ
ｉ．　ＵＳＡ，　８２．　５４９０　（１９８５））に
より生産、精製したものでも大腸菌、酵母、サル細胞（
ＣＯＳ細胞）、ハムスター、細菌など適当な宿主にヒト
ＢＣＤＦをコードする遺伝子を適当なベクターを用いて
形質転換された株を培養することにより生産、更には精
製したヒトＢＣＤＦを用いてもよい。

またヒトの血液・尿等より精製したものでも良い。

なお、これらの製造法の詳細については特開昭６１−１
１５０２４、特開昭６３　−　４２６８８、特開昭６３
　−　５６２９１号公報及び特開昭６３−１５７９９６
を参考にされたい。

〔効　果〕

本発明のヒト　ＢＣＤＦを有効成分として含有する血小
板減少症治療剤は、巨核球系の戒熟・分化を促進し、末
梢血血小板数を増加させる作用により血小板減少症患者
、特に化学療法・放射線療法・骨髄移植療法後の癌患者 ａ小仮輸血時。ウィ７，ユ感染等，抵抗ヵ。

低い患者等の治療に有用である． 〔実施例１．ヒトＢＣＤＦによる巨核球コロニー形戒の
促進〕 Ｃ５７ＢＬ／６マウス大腿骨より常法に従い骨髄細胞を
調製した． このうち非付着性細胞７．５Ｘ１０’個をｌ％ウシ血清
アルプミン、３６０μｇ　／　ｍ　Ｉ！鉄飽和ヒトトラ
ンスフェリン、０．９８μｇ　／　ｍ　ｌコレステロー
ル、１０００７ｍＡペニシリンーストレプトマイシン，
０．３％寒天を含むイスコフ変法ダルベフコ培地１ｍｌ
中で培養した。培地には第１表に示すような各種濃度の
ヒトＢＣＤＰ及び２．５％のポークウィードマイトゲン
刺激マウス牌細胞培養上清（ＰＷＭ−　ＳＣＹＩ　と略
すＧＭｅｇ　−　ＣＳＦ活性を含む）を加えた．培養７
日目にアセチノレコリンエステラーゼ（ＡｃｈＥ）染色
により巨核球コロニー数を同定した結果を第１表に示し
た。

またＰ囲一ＳＣＨに代え、２　０　Ｕ　／　ｍ　ｌのマ
ウスＩＬ−３（ゲンザイム社製）を添加した．その結果
を第２表に示した．ヒトＢＣＤＦ単独での巨核球コロ二
一形成能は微弱だったが、ヒトＢＣＤＦはＭｅｇ　−　
ＣＳＦ活性を有するＰＷＭ　−　ＳＣＭまたはマウスＩ
Ｌ−３と共存させる事により濃度依存的に巨核球コロニ
ーの形或を誘導した． 尚、同様の効果はヒト骨髄細胞に対しても認められた．
すなわちヒトＩＬ−３　　（１　０　０Ｕ／ｍｊ！）単
独添加に比し、ヒトＢＣＤＦ　（１　０　０ｎｇ／ｍ　
ｌ＞とヒトＩＬ−３　　（１　０　０Ｕ／ｍｊ！）を共
存させる事により、巨核球コロニー数は２．５倍に増加
した．夷一」二一麦 〔実施例２．ヒト　ＢＣＤＦによる巨核球の成熟分化誘
導〕 実施例１の方法で調製したマウス骨髄細胞を内因性コリ
ンエステラーゼ不活化処理し、ＩＸＩＯ’個の細胞を種
々の濃度のヒト　ＢＣＤＦを含有する無血清液体培地０
．　２　ｍ　ｌ！中で３日間培養した。

４日後に骨髄細胞のうち巨核球数をマウス巨核球特異的
酵素であるアセチルコリンエステラーゼ（Ａｃｈ［Ｅ）
陽性細胞数で求めた．また成熟・分化度を巨核球の直径
及びＡｃｈε活性を指標に調べた。第３表、第４表に示
すように、ヒトＢＣＤＦは、単独で、濃度依存的に巨核
球の直径、ＡｃｈＥ活性を増加させた． さらに、ただ１個の巨核球を１μＥの液体培地中で１日
間培養する系においても、２００ｎｇ／ｍｌのヒトＢＣ
ＤＦ添加により、第５表に示すように巨核球の直径は有
意にＪ曽加した。

以上よりヒトＢＣＤＦは単独で直接巨核球に作用し巨核
球の戒熟・分化を誘導した． なお、液体培養法、ＡｃｈＥ活性測定法、単一細胞培養
法はＢＬＯＷ０６７．　１５１２　（１９８６）　Ｊ．
　ＣＩｉｎ．ｓｔ．，７９，　２８６　（１９８７）、
の方法に従った．Ｉｎｖｅ 夷一≦し一友 第 ４ 表 〔実施例３．ヒト　ＢＣＤＦ生体内投与によるマウス骨
髄巨核球の成熟及び末梢血血小板数 の増加〕 ヒトＢＣＤＦ　５〜１０μｇを１００μ２の１％マウス
血清含有ＰＢＳに溶解し、１２時問おきに１日２回ずつ
５日間、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（雄性，６〜７週令，　
ホ央）４〜７匹に腹腔内投与した．対照群には１００”
Ｃ、４０分加熱処理して失活させたヒトＢＣ叶を同様に
投与した．最終投与後４時間後にマウスより大腿骨を摘
出、ホルマリン固定後切片標本を作成し、ヘマトキシリ
ンーエオジン染色し、ヒト　ＢＣＤＦの骨髄巨核球に対
する効果を検討した。

その結果、第６表のように、対照群に比し巨核球数の増
加は有意ではなかったが、巨核球の直径はヒト　ＢＣＤ
Ｐ投与で有意に増加し、巨核球の戒熟が認められた． また同様にヒトＢＣＤＦ０．　５−’−１　０μｇを５
日間マウス４〜８匹に腹腔内投与し、最終投与後４時間
後にＥＤＴＡ処理したシリンジにて心採血を行ない、血
液自動分析機（コールター社製）にて血小板数を測定し
た．第７表のようにヒトＢＣ叶投与量依存的に血小板数
は増加した．また継時的採血の結果、第８表のように、
投与後４日目よりヒトＢＣ叶の効果は顕著となった． 〔実施例４，ヒｌ−　ＢＣＤＦ生体内投与による血小板
減少症マウスの末梢血血小板数の回復〕 ヒト８ＣＤＦ７　０　１！　ｇ　　（１　０μｇ／マウ
ス／日×７ヨ間）をアルザ社製浸透圧ポンプに充填し、
ＤＢＡ／２マウス（雌性８週令）５匹の皮下に埋め込み
連続投与した．経時的にマウスより末梢血を心採血し、
血中血小板数を自動血球計測装置（東亜医１ｔ子社）で
測定した．ヒトアルブ旦ン投与を行った対照群（８０±
６Ｘ１０’／μｌ〉に比し、？トＢＣＤＦ７日間投与群
では血小板数が９７±１４ＸＩＯ’／μｌと統計学的に
有意に増加していた。

また、１００℃、４０分の熱処理にて失活させたヒトＢ
ＣＤＦ投与では血小板数の有意な増加は認められなかっ
た． このヒｌ−　ＢＣＤＦ連続投与による効果は化学療法剤
投与により血小板減少症をきたしたマウスでも認められ
た． すなわち５−ＦＵ，　　１　５　０■／　ｋｇを静脈内
注射したマウスにおいても対照群に比し、５−ＦＵ投与
後５時間目よりヒトＢＣＤＦを浸透圧ポンプにて皮下投
与した群では血小板数は第９表のように増加した．また
、４．ＯＧＶＯＸ線照射したマウスにおいても対照群に
比し、Ｘ線照射後よりヒト　ＢＣＤＦを浸透圧ポンプに
て皮下投与した群では血小板数の回復の有意な促進が認
められた． 〔実施例５．ヒトＢＣＤＦ生体内投与によるサル末梢血
血小板数の増加〕 ヒトＢＣＤＦを１％非働化自己血清含有ＰＢＳに溶解し
、カニクイザル（雌性、体重２．　８　−　３．　８ｋ
ｇ）皮下に２　ｍｊ！／回ずつ１２時問おきに１日２回
、計１４日間連続投与した．経時的に静脈より採血し、
自動血球計測装置（東亜医用電子社）で血球数を測定し
た。第１１表に示すようにヒトＢＣＤＦ５μｇ／ｋｇ／
日および１０μｇ／ｋｇ／日投与（２回／日に分割投与
）により血小板数は経時的に増加し、最高、投与前値の
２　−　２．　３倍に増加与が必要であった． また赤血球数の増加は５−５００μｇ／ｋｔｒ／日のい
ずれの投与量でも認められなかった．このようなヒトＢ
ＣＤＦの血小板特異的増加作用は静脈内投与でも認めら
れた． 以上、ヒトＢＣＤＦは生体内投与により血小板数を上げ
る作用があることがサルでも明らかになまた骨髄病理像
の解析によりヒトＢＣＤＦ投与による骨髄巨核球造血の
冗進が認められた。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒトＢ細胞分化因子（以下ヒトＢＣＤＦと記す）
   を有効成分とする血小板減少症治療剤。
2. （２）ヒトＢＣＤＦが下記のアミノ酸配列（ I ）を有
   するものである請求項（１）記載の血小板減少症治療剤
   。 ￥アミノ酸配列（ I ）：￥ 【遺伝子配列があります】 【遺伝子配列があります】
3. （３）ヒトＢＣＤＦが下記のアミノ酸配列（II）を有す
   るものである請求項（１）記載の血小板減少症治療剤。 ￥アミノ酸配列（II）：￥ 【遺伝子配列があります】 【遺伝子配列があります】
4. （４）ヒトＢＣＤＦが糖鎖を有さないものである請求項
   （１）項記載の血小板減少症治療剤。
5. （５）ヒトＢＣＤＦが原核生物で作られたものである請
   求項（１）項記載の血小板減少症治療剤。
6. （６）血小板減少症治療剤がヒトＢＣＤＦ以外に助剤と
   してインターロイキン３（以下ＩＬ−３と記す）、イン
   ターロイキン１（以下ＩＬ−１と記す）、インターロイ
   キン４（以下ＩＬ−４と記す）、インターロイキン５（
   以下ＩＬ−５と記す）、顆粒球コロニー刺激因子（以下
   Ｇ−ＣＳＦと記す）、顆粒球・マクロファージコロニー
   刺激因子（以下ＧＭ−ＣＳＦと記す）、マクロファージ
   コロニー刺激因子（以下、Ｍ−ＣＳＦと記す）エリスロ
   ポエチン（以下Ｅｐｏと記す）及び巨核球コロニー刺激
   因子（以下Ｍｅｇ−ＣＳＦと記す）、を１種類以上含有
   することを特徴とする請求項（１）記載の血小板減少症
   治療剤。