JPH05502667A

JPH05502667A - 血小板減少症の処置方法及びそれに対し有用な医薬組成物

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Publication number: JPH05502667A
Application number: JP3501145A
Authority: JP
Inventors: メットカーフ、ドナルド
Original assignee: アムラド・コーポレイション・リミテッド
Priority date: 1989-12-18
Filing date: 1990-12-18
Publication date: 1993-05-13
Anticipated expiration: 2012-01-22
Also published as: DE69023006D1; DE69023006T2; WO1991008752A1; AU6910491A; JP2574962B2; GR3017727T3; EP0506716A1; ATE128871T1; EP0506716A4; AU644834B2; CA2071956A1; US5571508A; FI922839A; EP0506716B1; CA2071956C; HU210882A9; ES2078501T3; HU9202026D0; DK0506716T3; FI922839A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】血小板減少症の処置方法及びそれに対し有用な医薬組成物本発明は、一般に、有効量の白血病阻害因子（Ｌ　Ｉ　Ｆ）及び／又はその誘導体及び所望により１又はそれ以上の他のサイトカインとの組合せの投与による哺乳動物における血小板減少症の処置の方法及び、それに有効な医薬組成物に関する。

白血病阻害因子（ＬＩＦ）は精製され（１，２）そして、分化を誘導するその能力の基にクローン化され（３）、そして、Ｍｌマウス骨髄性白血病細胞系のクローン原性（ｃｌｏｎｏｇｅｎｅｃｉｔｙ）を抑制する（国際特許出願番号ＰＣＴ／Ａｔ：８８１０００９３参竪）。ＬＩＦは、特にコロニー刺激因子と協同に作用したときヒトＨＬ６０及びＵ９３７細胞に類似の効果を有する（４）。慣用の半固体培養において、ＬＩＦは、連続造血細胞系り、Ａ１．１ａ（６）及びｍｙＣ−形質転換マウス胎児肝臓細胞からの赤色細胞系の増殖を刺激するけれども正常なネズミの造血細胞に対するコロニー刺激活性はない。

ＬＩＦについてのレセプターは単核球マクロファーン（７）、並びに骨芽細胞、胎盤及び肝臓細胞（８）を含む幾つかの非造血細胞に存在する。ＬＩＦは作用の顕著な変化を有することが示される。それは骨組織からカル／ラムを放出しく９）、正常胎児性幹細胞における自然の分化を防ぐ因子であり（１０，１１）、ＤＡ　１．１ａ（６）細胞増殖を刺激する分子であり、肝臓細胞を刺激して急性期蛋白を生成しく１２．１３）、そして、リポ蛋白リパーゼインヒビターである（１４）最初の研究で、高ＬＩＦレベルの結果が、ＬＩＦ生成Ｆｂｃ−ＰＩ細胞が植えつけられたマウスに測定された（国際特許出願番号ＰＣＴ／Ｕ９０１０００９２　；　１５．１６）。かかるマウスは、体量損失の致死症候群、補償の牌及び肝臓軸外造血を伴う前硬化、好中球白血球増加、膵炎、骨格筋肉、心臓及び肝臓での石灰化、肝臓壊死及び線維症、胸腺萎縮、副腎皮質変化並びに精子形成及び黄体形成の不全を発達させた。

植えつけられたモデルは、もしかすると植えつけられたＦＤＣ−ＰＩ細胞の存在によるコンプレックスである。本発明は、精製された組換えネズミしＩＦをマウスに注入することによりこの複雑度に打ち勝つことを試みる実験から生れ、注入されたＬＩＦからどんな変化が誘導されたかを測定する。とりわけ血液成分、骨髄、牌及び腹腔細胞成分、骨髄及び牌における巨核球及び前駆体細胞成分での変化が分析され、ＬＩＦが巨核球及び／又はそれらの前駆体細胞の形成のレベルで促進、刺激及び／又は増加を起こし血小板の増加に至ることが驚くべきことに発見された。従って、本発明は、幾つかの急性感染症、アナフィラキンーンヨック、ある種の出血性疾患、（化学又は放射線療法の結果としての）貧血、血小板− 作用欠損病、慢性肝臓障害及び腎障害に起きる血小板減少症の処置に有益であろう。

従って本発明の一局面は、哺乳動物における血小板減少症の処置法に係り、方法は、該哺乳動物に有効量の白血病阻害因子（Ｌ　Ｉ　Ｆ）を、巨核球及び／又はそれらの前駆体の形成のレベルを促進し、刺激し及び／又は増加し、及び／又は血小板のレベルを増加するに十分な時間及び条件下に投与することを含む。

他の実施態様では、ＬＩＦは、１又はそれ以上の他のサイトカインと同時に又は連続的に投与される。

本発明の他の局面は、哺乳動物における血小板減少症を処置するための医薬組成物に向けられ、該組成物は、１又はそれ以上の他のサイトカイン及び１又はそれ以上の製薬上許容しうる担体及び／又は希釈剤との組合せてＬＩＦを含む。

本発明のさらに他の局面は、ＬＩＦのみの、又は１又はそれ以上のサイトカイン及び／又はそれらの誘導体との組合せでの、巨核球及び／又はその前駆体及び／又は哺乳動物における血小板の形成のレベルを促進し、刺激し及び／又は増加することによる血小板減少症を処置するための医薬の製造のための、使用に関する。

好ましい実施態様では、哺乳動物はヒト又は家畜類動物であり、ヒト、ネズミ及び／又は家畜動物ＬＩＦが用いられる。さらに好ましい他のサイトカインはインターロイキン３（ＩＬ−３）、トロンホポイエチン及び／又はインターロイキン６（ＩＬ−６）を含む。最も好ましい他のサイトカインはＩＬ−３である。いかなる例でも、好ましい他のサイトカインは、ヒト、ネズミ及び／又は家畜動物起源である。

本発明はマウス又はサルにおけるＬＩＦの効果に関して記載される。これは、しかしながら、本発明が全ての哺乳動物における、そして特にヒト及び家畜動物におけるＬＩＦの効果に拡がることの理解と共になされる。従って、マウス又はサルでのし■Ｆの効果を本明細書中で引用することにより、哺乳動物、特にヒト及び家畜動物でのＬＩＦの効果にも適用しうることを意味する。

１実施態様において、ヒト、ネズミ又は、家畜動物ＬＩＦが用いられるが本発明は本明細書中に記載された望ましい活性を有する全ての哺乳動物ＬＩＦに及ぶ。

用語「血小板減少症」は本明細書においては、巨核球及び／又はそれらの前駆体及び／又は血小板のレベルに影響する哺乳動物で条件を示すのに用いられる。従って、血小板減少症の処置は、巨核球及び／又はそれらの前駆体及び／又は血小板の増加に影響するに十分な時間及び条件下に、有効量のＬＩＦの投与により、巨核球及び／又はそれらの前駆体細胞の形成のレベルを促進し、刺激し、及び／又は増加することに、及び／又は、哺乳動物における血小板のレベルを増加することに、とられる。血小板減少症は、疾病条件に続いて起きるか外傷又は治療から生じ、本発明は血小板減少症の１又はそれ以上の原因に限定されない。典型的には、血小板減少症は、幾つかの急性感染症、アナフイラキノーショ・ツク、ある種の出血性疾患、化学又は放射線療法の結果としての貧血、血小板−作用欠損疾病、慢性肝臓障害及び腎障害に起きる。

本発明は、又、予防治療に及び、それによってＬＩＦ及び所望により１又はそれ以上のサイトカインが投与され、血小板減少症発展の可能性を予防又は減少する。

静脈内に注射されたＬＩＦの非常に短い血清半減期は、腹腔内ルートがマウス内て高められた血清ＬＩＦレベルの維持期間を確実にするのにより実行可能であることを示した。しかしながら、投与の他のルートも本発明の範囲からはずれることな（可能であり（例、静脈内、筋肉内、及び皮下）、全てのかかるルートは含まれる。ＬｌＦ−生成細胞が植えつけられた、放射線照射されたマウスは１０３単位／ｒｎｌまでの血清レベルに達しある発達した器管は１４日内に変化する（１５．１６）。注射されたＬＩＦのインビボ効果を実証する試みに選ばれた最初の計画は、２μｇ１日３回１４日で、これは各注射後数時間ＬｒＦレベル１０’ 単位／ｍ１以上に達する。遭遇した極端な副作用は、これらが有毒であったことを示唆する。本発明に導（作業にみられる予期しない、且つ予期てきない変化、例えば血小板レベルでのそれらは、初めに認識されず、全てのマウスがこれらの変化を分析されたわけではない。

本発明に従ってＬＩＦの、単独又は１又はそれ以上の他のサイトカインとの組合せでの注射により、前駆体細胞の明らかな上昇が牌中に誘導され、これは巨核球前駆体での上昇を含むことが見出された。前駆体細胞変化は、天然好中球、単核球又は好酸球での観察しうる増加とはならないが、その変化は巨核球メンバーでの上昇、続く血液血小板レベルでの上昇と関連している。巨核球及びＬＩＦにより誘導５れた血小板増加の大きさは、単独又はｌ又はそれ以上の他のサイトカインとの組合せで、巨核急及び／又はそれらの前駆体細胞及び／又は血小板のレベルを増加することにより血小板減少症を処置するためのＬＩＦの潜在性臨床使用を示すＩＬ−３（１８）、トロンボボイエチン（１９）又はＩＬ−６のみ（２０，２１）により誘導されたそれらと等しいかそれらより大である。それゆえに、ＬＩＦの減少した用量が、依然として、行動の変化又は体又は胸腺重量損害により評価されたように毒性効果なく巨核球及び血小板レベルで変化を誘導しうることは興味がある。特に有効な組合せはＬＩＦとＩＬ−３である。

ＬＩＦが、未分別マウス骨髄細胞又は精製前駆体細胞の慣用半固体培養においてコロニー刺激活性を有しないよってある（ヒルトン・ディジエイ、ニコラ・エヌエイ及びメトコープディ、未発表データ）一方、本発明は巨核球がＬＩＦ受容体を表現することを認明する。

本発明を活性のモードの後の１理論に限定することが意図ではないが、巨核球及び血小板形成でのＬＩＦの刺激効果は幾つかの他の因子との関連した直接効果を表わす。ＬＩＦは巨核球前駆体細胞及び血小板レベルでの上昇前の巨核球での上昇を誘導し、血小板での観察された上昇が巨核球の増加した形成に基づき単に存在する巨核球からの血小板の誘導された遊離ではないことを示唆する。さらに明細書に記載された前駆体細胞レベル、巨核球形成及び血小板レベルでの注射されたＬＩＦの効果は、正常造血細胞インヒホでのＬＩＦの明らかな不活性と対照的である。他の可能性は、ＬＩＦが幾つかの他の巨核球刺激因子の生成に相互に作用するかそれを誘導しうることでありうる。

従って、本発明は哺乳動物における血小板減少症を処置する方法を意図し、その方法は、該哺乳動物に有効量のＬＩＦを単独又は１又はそれ以上の他のサイトカインとの組合せて巨核球及び／又はそれらの前駆体及び／又は血小板の数を増加するに十分な時間及び条件下に投与することを含む。

好ましい哺乳動物はヒト又は家畜動物であるが本発明はそれに限定されない。さらに投与のルートは好ましくは腹腔内、静脈内、筋肉内又は皮下投与（例、注射）によるが、他のルートも、ここて意図された方法にごくわずかの修飾で同様に適用しつる。ＬＩＦの有効量は、哺乳動物及び処置される条件による。例えばマウスでは、巨核球の度数は、牌中、３〜１４日、１日２μｇＬＩＦで１−３同腹腔内注射後２−５倍に増加した。しかしながら、哺乳動物に投与されるべ（要求される量は無毒であることが必要である。従って、マウスにおいて、例えば、１４日間１日１ないし３回与えられた２００ｍｇ又はより低い用量は、近接の毒性用量に比べて巨核球及び血小板をごく少し増加を起こすが、決して少しの有効ではなく、重要なことは無毒である。一般にＬＩＦ及び用いられるサイトカインの有効量は０．０１ないし１０．０００μｇ／ｋｇで好ましくは１ないし１０００ μｇ／ｋｇ体重である。

用語「家畜動物」のここでの使用はヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマ、ロバ及びウシのような動物を含むことを意図し、さらにネコ及びイヌに及ぶ。

本発明の方法は、さらにＬＩＦの、１又はそれ以上の他のサイトカインとの同時又は連続的投与を意図する。このようなサイトカインは、Ｉ　Ｌ−３、トロンホポイエチン及び／又はＩＬ−６を含むがこれらに限定されない。最も好ましい実施態様では、ＬＩＦはＩＬ−３と与えられる。かかる投与のモードは、ＬＩＦ及びサイトカインの両方を含む単一組成物の投与（同時投与）又は、二つの別の組成物、一つはＬＩＦを含み他は１又はそれ以上の他のサイトカインを含む、の投与（連続的投与）を含む。本発明は１つより多くのサイトカインの、別の組成物での又は単一組成物での使用に及ぶ。さらに本発明は全ての順序でのＬＩＦ及びサイトカインの使用を意図する。

他の実施態様では、一つのサイトカイン（ＬＩＦを含む）が直接注射により与えられ、一方他のサイトカインは例えば点滴により投与される。連続的投与においては、本発明は二つの組成物の投与の間のいかなる時間の期間も限定されない。

しかしながら好ましくは時間差は７２時間よりも少ない。

上の場合の全てにおいて、本発明はＬＩＦ及び他のサイトカインの誘導体、同族体及び／又は類似体の使用に及ぶ。「誘導体」及び「類似体」により、誘導体が巨核球、巨核球前駆体及び／又は血小板刺激活性を有する限り、ＬＩＦ又は他のサイトカインの組換え体、化学又は他の合成形及び／又は全ての変更、例えばＬＩＦ又は他のサイトカインの分子のアミノ酸配列成分への又は、炭化水素又は他の結合した分子残基（もし存在するなら）への付加、置換及び／又は削除を意味する。好ましくは、ＬＩＦはヒト、ネズミ又は家畜動物起源であるが本発明はこれらに限られる必要はない。従って、明細書において用語ｆ”ＬＩＦＪ及び「サイトカイン」の使用は、天然に生じている（天然）又は組換え又は合成形を含む全ての１又はそれ以上のそれらの誘導体、同族体又は類似体を含むことを意図する。

本発明により、ＬＩＦ及び１又はそれ以上の他のサイトカイン（例えばＩｔ−３）は同−又は異なる哺乳動物種がらでありうる。

さらに本発明は、ＬＩＦを、１又はそれ以上の他のサイトカイン及び／又はそれらの誘導体及び１又はそれ以上の製薬上許容しうる担体及び、／又は希釈剤との組合せで含む医薬組成物に及ぶ。かがる医薬組成物は、巨核球及び／又はその前駆体細胞及び／又は血小板細胞の形成のレベルを促進し、刺激し及び／又は増加するのに有用である。

本発明に従って記載された方法及び医薬組成物は、幾つかの急性感染症、アナフィラキーショック、ある種の出血性疾患、化学又は放射線療法の結果としての白血病貧血、血小板−作用欠損疾病、慢性肝臓障害及び腎障害に起きる血小板減少症の処置にとりわけ有用である。さらに本発明は、哺乳動物、特にヒト及び家畜動物における、例えば血小板減少症の処置ての巨核球及び／又はその前駆体及び／又は血小板のレベルを促進し、刺激し及び／又は増加するための医薬の製造のためのＬＩＦ及び／又はその誘導体のみの、又は１又はそれ以上の他のサイトカイン及び／又はそれらの誘導体との組合せの使用に及ぶ。

腹腔的注射による投与後ＬＩＦの存在は以下に概説されるように他の影響を有する。

ＬｒＦ−注射マウスに見られる造血変化（実施例２参照）は、ＬＩＦがある種の造血群（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）に影響を及ぼす直接又は間接作用を有することを示すパターンを有した。２μｇＬＩＦのマウスへの注射は植えついたモデル（１６）に見られる特徴的な好中球白血球増加を再生成するのに失敗したが、骨髄リンパ球の選択的欠損を伴う減少骨髄細胞性、増加した牌性赤血球生成を伴う牌リンパ球母集団の抑制及び皮質リンパ球の欠損による著しい胸腺萎縮を含むマウスに見られる他の変化を再生した。

さらにＬＩＦの高用量の早い影響は過剰活性状態と体量欠損で、後者は、皮下及び腹部脂肪組織の減少に基づく、過剰活性状態はＬＩＦの、アドレナリン作動性からコリン作動性モードに合図する自律神経を切り換える能力に関連するか、又は高カルシウム血（２２）に関連しつる。体脂肪の選択的欠損はリピドの脂肪細胞への移転を阻止しうるＬ　Ｉ　Ｆ（１４）のリポ蛋白リパーゼ阻止活性に基づきつる。

ＬＩＦ−注射マウスに気づく増加した赤血球沈降速度は単一注射の６時間以内に現れ、赤血球沈降を影響するように急性期蛋白（１２゜１３）の肝臓細胞による生成を誘導するＬＩＦの能力による。

心筋層での最小石灰化以外にＬＩＦ−注射マウスの他の器管において異京は見られず、これはＬＩＦの最高用量注射したマウスにのみ見られた。

ＬＩＦ一種植えつけマウスでの最も顕著な変化は過剰な骨芽細胞活性及び特に胸骨及び長骨の端に起きる新しい骨形成であった（１５、１６）。この性質の著しい変化はＬＩＦ−注射マウスには見られないがＬＩＦ注射は、胸骨の骨切片の皮質を幾らか厚くすることを誘導した。１２５−標識ＬＩＦの静脈注射後、骨髄骨芽細胞の標識が見られ、注射されたＬＩＦはこれらの細胞への接近を有し、それゆえＬＩＦは骨芽細胞及び新前形成に直接作用を有する。それゆえに、予め放射線照射されたが正常でないマウスへの３日間ＬＩＦ注射の最初の実験例は、骨髄中、細胞に明確な増加を生じ、マウスの骨髄中劇的な形で見られる変化はＬＩＦ −生成細胞を植えついだ。

血清カルシウムレベルを高めるＬＩＦの低容量の能力は、新しい骨形成でのＬＩＦの作用について重要である。

本発明は以下の非限定図面及び実施例によりさらに記載される。

図１は、２μｇＬ　Ｉ　Ｆの腹腔内注射後のＤＢＡ／２マウスでの血清ＬＩＦレベルを示すグラフ表現である。各点は異なるマウスからの血清レベルを示す。

図２は、１日３回２μｇＬ　Ｉ　Ｆを注射したＤＢＡ／２及びＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスでの体重の欠損を示すグラフ表現である。体量欠損は最初の週に限定されることに注意。

図３は１日３回１４日２μｇＬＩＦを注射したＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスにおける血清カルシウム／アルブミン比の上昇を示すグラフ表現である。

図４は、１日３回１４日２μｇを注射したＤＢＡ／２マウスの牌（Ａ）ＦＣ８／生理食塩水を注射した対照マウスからの牌（Ｂ）における巨核球での増加を示す絵の表現である。ヘマトキンリン及びエオシン（ｘ２５０）。

図５は１日３回１４日２μｇを注射したマウスの骨髄及び牌の前駆体細胞の度数（０）対ＦＣ８／生理食塩水を注射した対照マウスにおける度数（０）での増加を示すグラフ表現である。各点は個々の動物からのデータを示す。

図６は、ＬＩＦのｍＡ’当り１０００単位の封入によるＣ３Ｈ／ＨｅＪ骨髄細胞の５０．０００のＩＬ−３促進培養での巨核球コロニー形成の増加を示すグラフ表現である。各点は重複培養からの平均値を示す。

図７はｍ１ＩＬ−３当り５００単位プラス０ＩＩＩｌｌ生理食塩水又はｍＡＩＬ −３当り５００単位プラスｍＡＬＩＦ当り１０００単位により促進された５０．０００Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ骨髄細胞の培養での巨核球コロニー形成での１８の別個の実験例からの集められたデータを示すグラフ表現である。各点は単一培養皿でのコロニーの数を示す。

図８は、全体的又は部分的に巨核球からなるコロニーの巨核球の絶対数の度数分布分析、ｍｉ’ＩＬ　３当り５００単位プラス０．１ｍＪ生理食塩水により促進された４４４コロニー及びｌ−３当り５００単位プラスｍｊＬ　Ｉ　Ｆ当り１０００単位により促進された５６５コロニーの逐次分析を示すグラフ表現である。

図９は、過剰の未標識ＬＩＦを伴い又は伴うことなく、＋２５１−１１Ｆを結合する骨髄巨核球のオートラジオグラフでのグレインカウントの度数分布を示すグラフ表現である。

図１０は、アカゲザルでのｒｈＬＩＦに対する血小板反応を示すグラフ表現である。

図１１は、アカケザルでのｒｈＬＩＦに対する血小板反応を示すグラフ表現である。

実施例１材料及び方法マウス用いたマウスは系ＤＢＡ／２（国際特許出願番号ＰＣＴ／、ＡＵ９０１０００９２に記載されるようにＬＩＦ−生成ＦＤＣ−ＰＬ細胞のレビンエントとして既に用いた系）及びエンドトキシン低反応性系Ｃ３Ｈ／Ｈｅｊの特異的病原体−フリーの２ないし３月令雌、後者は全ての観察される変化をエンドトキンンに起因する可能性を最小にする。

組換えＬＩＦ組換えネズミＬｒＦはＧＥＸ細菌発現系を用いて生成し、既に記載されるように（Ｐ　ＣＴ／ＡＵ　８８１０００９３）均質性に精製した。

ＬＩＦの特異的活性はＭＩ白血病細胞上でのアッセーとして約１０８単位／ｍｇ蛋白であった（５０単位／ｍＡ’は３００ＭＩ細胞の寒天培養での５０％のＭＩコロニーの分化を含むＬＩＦの濃度である一ＰＣＴ／ＡＵ８８１０００９３参暉）。

組換えＬＩＦを５％（Ｖ／Ｖ）つ／胎児血清（ＦＣ５／生理食塩水）に溶解し、注射した各用量は領２ｍｌの容量であった。対照マウスはＱ、２ｍｒの同じ５％（ｖ／ｖ）　Ｆ　ＣＳ　／生理食塩水希釈液ハツチを注射した。ＬＩＦの２つに別れた調製品を用いて２つの異なるバッチのＦＣ８／生理食塩水を希釈剤として用いた。全ての調製品をカブトガニアメーバ様細胞溶解物アンセーによりアッセーＬ、ＦＣＳ／生理食塩水中０．２ｍＪのＬＩＦ又は０．２ｍ１Ｆ　ＣＳ／生理食塩水の注射容量は、材料のエンドトキシン含量が用いたＦＣＳから多分始まったことを示す領１−０．２ｎｇエンドトキシンを含むことが判った。

注射マウスは１日１〜３回１４日間まで０．２ｒｎｉのＬＩＦ又はＦＣ５／生理食塩水を注射し、時々重量測定し、次いで注射最後の日の完了後の朝に詳細に分析した。

培養全ての培養は、０３％（ｗ／ｖ）寒天中、２０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清の最終濃度を伴う１ｍｒの寒天培地中、２ケ月令Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスからの５０．０００骨髄細胞を含む３５ｎｏｎベトリ皿を用いて実施した。

培養物は空気中１０％（ｖ／ｖ）　ＣＯ２の十分に湿った大気中、３７°Ｃてインキュベートした。１週間のインキュベーション後、コロニー計算を×３５拡大で実施し、次いで全培養物を領９％（Ｗ／Ｖ）生理食塩水中、２５％（Ｗ、／Ｖ）グルタルアルデヒドの１ｍｆｆを用いて固定した。

ガラススライド上無傷の培養物を浮遊したのち、培養物を空気乾燥し、アセチルコリンエステラーゼ用に、次いで、ルクソールーファストーブル及びヘマトキノリンで染色した。コード化スライドを用い、巨核球コロニー（１又はそれ以上のアセチルコリンエステラーゼー陽性細胞を含むクローンとして定着される）を数えあげ、全細胞数は各コロニー中アセチルコリンエステラーゼ−陽性細胞とした。

試験した全ての刺激は、細菌又は酵母発現系を用いこの研究室で生成された精製ネズミ組換え因子てあった。ＬＩＦ、ＩＬ−３，ＧＭ−Ｃ３Ｆ、Ｇ−ＣＳＦ及びＭ−ＣＳＦについての特異的活性は全て１０８単位／ｍｇであった。

オートラノオグラフィ精製組換えネズミＬＩＦは既に記載した方法（３）を用い１２５■て標識した。

成熟マウスを１０８カウント／分１２Ｊ−ＬＴＦで静脈内に注射し、１時間後殺した。組織を１ｏ正式生理食塩水中に固定し５μ部分を調製し、コグツクＮ２エマルションに浸漬した。３ケ月暴露後、スライドを発展させ、ヘマトキンリン及びエオシンで染めた。インビトロ研究のため、牌及び骨髄管濁液を１２５−Ｌ　Ｉ　Ｔ（１０ｏ、ｏｏｏカウント／分）と、２０倍過剰の未標識ＬＩＴと共に又はなしに３７℃で１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、細胞遠心機（ｃｙｔｏｃｅｎｔｒｉ　ｆｕｇｅ）調製品を２．５％（Ｗ／Ｖ）グルタルアルデヒドを用いて固定した。浸漬及び暴露後、調製品はマイ・グリーンワルド・キムザて染色した。

観察マウスを麻酔して眼窩兼血液を白血球、ヘマトクリット及び血小板評価に用いた。マウスを液窩管から瀉血して血清をさらに分析するため１・４に希釈した。腹腔細胞を２ｍｌの５％（ｖ／ｖ）　Ｆ　ＣＳ　／生理食塩水を用いて集め、器管の重さを測り、全大関細胞計数を実施した。細胞遠心機調製品を腹腔、牌及び骨髄細胞から作り、マイ・グリーンワルド・ギムザて染色した。全ての調製品をコード化スライドを用いて採点した。器管を１０％（Ｖ／Ｖ）正式生理食塩水に固定し、分割し、次いてヘマトキンリン及び細網用にエオシンで染色した。

牌及び骨髄細胞懸濁液を培養して、４００単位ＧＭ−Ｃ３Ｆ及び４００単位ＩＬ −３（１７）の混合物により刺激された２　５．０００細胞の１酊寒天−培地培養を用いる前駆体細胞の頻度を測定した。７日でコロニー計数を実施し、培養物を１１１Ｑｌの２５％（Ｗ／Ｖ）グルタルアルデヒドと混合し、純にアセチルコリンエステラーゼ次いでルクソールファストブルー及びヘマトキシリン用に染色した。

赤血球沈降をヘパリンを加えた毛細へマドクリットチューブ中、５０［１ｍカラムの血液を用い測定した。赤血球の促進沈降は、ＬＩＦ−注射マウスからの血液と１０分で気付いたが測定は普通に２時間で行なった。簡単にするため、図を算数的に１００ｍｍカラム当１）ｍｍ沈降に移した。

血清カルシウム及びアルブミン評価を１−４希釈血清を用い実施した。

巨核球細胞計数を牌及び胸骨骨髄切片のセクションから×４００拡大で実施した。調査された区域は、カメラルシダ（ｌｕｃｉｄａ）図から測定し、像は牌について巨核球×区域−１×器管重量又は個々の胸骨骨髄切片について巨核球×区域 −’Ｘ１００として表わした。

統計分析全てのデータは、スチューデントのも検定を用いて分析し、観察した差の統計的意味を確立した。

実施例２ＬＩＦの効果ＬＩＦ−精製ＦＤＣ−Ｐ１細胞を植えつけたマウスにおける平均血清ＬＩＦ濃度は１０００単位／ｍｌであった（１５．１６）。類似の濃がＬＩＦの注射により達せられるかを測定するため、静脈内又は腹腔内に注射されたＬＩＦの血清半減期について研究を実施した。

２μｇのＬＩＦの注射は８−９分の第二期を伴う非常に短い血清半減期となった。しかしながら２μｇのＬＩＦの腹腔内注射は、約３時間１０００単位／ｍｌを超過する血ｆｉＬＩＦレベルのより維持された上昇となった（図１）。これを基に最初の注射を、腹腔内に注射された２　μｇＬ　Ｉ　Ｆを用Ｌ’８．　ＯＯａｍ、２．００μｍ及び５．００μｍに日に３回実施した。続〈実施例で、低容量のＬｒＦを用い１日当りの注射の数を１−３から変えた。

一般的観察１６ＤＢＡ／２マウスの最小の、５及び９日の間の多分異常なＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスの４の、並び１こ５巳ての８Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスの他のグループの最小の３日に死が起きたので、１日３回２μｇＬＩＦの用量が毒性限界に近いように思われた。

この用量レベルで、５つの骨細の実験例での両系のマウスでの注射されたＬＩＦの均一効果は、２日まで最初の明らがな重量損失及び注射の第−週の間の進行したが、第２週の間、重量損失はなかった（図２）。Ｍ量損失に伴って、背中の特に首の後の毛が直立したマウスの過剰運動性及び被刺激性の奇妙な状態であった。戦いは示さなかった。ＬＩＦ−注射マウスは又、用いた麻酔薬−メトキンフルオランからの回復に困難を示した。

１日１−３回１４日与えられた、ＬＩＦの２００ｎｇ又はより低い用量て注射したマウスには死亡又は重量損失は起らず、又機能の被刺激性もこれらの用量レベルでは見られなかった。

血液変化１日３回２μｇＬ　ｒ　Ｆを注射したマウスの１５日に見られた変化は表１にまとめた。有意な変化は全白血球に起きなかったがヘマトクリットにおける小低下（ｆａｌｌ）はＬＩＦ注射マウスに見られた。ＬＩＦ注射マウスにおける最大１００％の血小板レベルでの増加が顕著に見られた。血小板レベルは、１日３回与えた２μｇＬＩＦの単一注射後６及び２４時間又は２μｇＬ　Ｉ　Ｆの注射の３日後で上昇しなかった（表１，２）。

２μｇＬＩＦを注射したマウスからの血液試料の他の特徴は、赤血球沈降の促進であった。他の実験例では、促進された赤血球沈降は２μｇＬＩＦの単一注射に続く６及び２４時間で、及び１日１回２００ｎｇというＬＩＦの低用量で１４日に気づいた（表２）。

図３における典型的実施例に示されるように、血清カルシウムレベルは１４日間２μｇＬ　Ｉ　Ｆを注射したマウスで上昇した。上昇は対照−注射マウスで平均３０％以上値であった。上昇した血清カルシウムレベルは１４日間１日１回与えた２０ｎｇの低用量で見られた（表２）。１日３回２μｇを注射したマウスで、上昇したカルシウムレベルは注射の６時間後項れなかったが３日後現れた。

骨髄、胛及び腹腔細胞変化表３は１４日間１５３回２μｇＬＩＦを注射したＤＢＡ／２マウスからのデータをまとめる。簡潔にするため、Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスからの同様のデータは詳しく述べない。

両系のマウスにおいて均一に見られることは、リンパ様細胞の百分率での有意な低下と成熟顆粒球の百分率での小さいが有意な上昇を伴う全骨髄細胞数での約４０％の低下であった。

少しの重量増加がＬＩＦ注射マウスの牌に見られ、表３に示すようにＬＩＦ注射マウスにおいて、リンパ球の百分率での有意な低下及び有核赤血球細胞及び成熟顆粒球の百分率での有意な上昇があった。

一貫しない傾向が明らかなＬＩＦ−注射マウスにおける腹腔細胞の全数で実験例間に、ある変異性が遭遇した。ＦＣ，Ｓ／生理食塩水の注射は有意な数の好酸球、異種蛋白の反復注射に対する恐らく免疫応答及び注射の第２週の間明白となることのみの出現を誘導した。

この好酸球応答はＬＩＦ−注射マウスにおいて有意に低いかなかった。反対にＬｌ−注射マウスは腹腔個体群におけるリンパ球のパーセントでの有意な上昇を示した。

上記パラメーターの全てにおいて、ＬＩＦ−注射Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスに見られる変化は、方向で同一であり、統計的に有意であるが通常大きさで少し小さかった。

２００ｎｇＬ　ｒ　Ｆを注射したＤＢ、Ａ／２マウスでは、骨髄細胞性における日に１ないし３回類似するが少し著しい変化が見られ、興味深いことに牌拡大は高ＬＩＦ用量でより明らかであった。

巨核球変化巨核球は細胞遠心機調製品で十分に表れなかったので、巨核球数の計数は、牌及び胸骨骨髄切片の部分からなした。日に３回２μｇＬＩＦて１４日間注射された両系で、巨核球の度数は牌において有意に増加しく２−５倍）（表４１図４）でより少しの大きさの有意な上昇が胸骨骨髄に観察された。

牌巨核球数の有意な上昇は１日１回１４日間の注射て２０ｎｇＬＩＦめという少しても検出可能であり（３倍）、巨核球数は日に３回２μｇＬＩＦ注射の３日以内に稗において上昇した（表２）。

骨髄及び腺における前駆体細胞変化前駆体細胞（巨核球前駆体を除く）の度数は、１日３回１４日間２μｇＬ　Ｉ　Ｆを注射したＤＢ−Ａ／２及びＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスの骨髄において、対照注射マウスの骨髄におけるよりも、有意に高かった（図５）。しかしながら、これらの値は全骨髄細胞性における低下を訂正すると、全前駆体細胞数はＬＩＦ注射により本質的に変らなかった。

対照的に、前駆体細胞の度数における著しい上昇は、ＬＩＦを注射した両系の牌に見られた。牌の全体の大きさは少し増加したので、これは前駆体細胞の絶対数での上昇を示す。特異のコロニー数は、ＬｒＦ−注射及び対照マウス間に、前駆体細胞　顆粒球の、顆粒球−マクロファー／、好酸球、赤血球及び混合−赤血球前駆体の種々のサブセットの比較的度数において差のないことを明らかにした。

巨核球コロニーの度数は図５てデータに示されず、それらの度数を測定するため、計数はアセチルコリンエステラーゼー染色培養上独二に実施した。巨核球前駆体の度数はＬＩＦ＝注射マウスの骨髄において対照マウスにおけるよりも有意に高く、ＬＩＦ−注射マウスの脛において対照マウスにおけるよりも１０倍高かった（表４）。

絶対細胞数に訂正すると骨髄において巨核球前駆体て少しの絶対上昇があったが牌では少くとも１０倍した。

Ｌ　Ｉ　Ｆ−注射マウスにおける他の変化１日３回１４日間２μｇＬＩＦを注射したマウスにおいて、試験は体重の損失が皮下及び腹部脂肪の完全な損失に帰因することを示し、変化は又、注射の３日後にのみ明らかであった。肝臓及び腎臓重量は変化せず、重量損失は真のカヘキノーではないことを示す。

これらの用量のＬＩＦを受けているマウスは皮質リンパ球の完全な損失による著しい胸腺萎縮（表２）を示した。胸腺重量の損失はより低い用量のＬＩＦを注射したマウスには見られなかった。

肝臓は、造血細胞による侵入の鉦拠、非活性クツパー細胞での増加及び石灰化を示さなかった。しかしながら、１日３回１４日間２μｇＬＩＦを受けているマウスでは、核−フリー細胞質の領域における対応増加を伴う単位面積当りの実質細胞核の数における奇妙な減少があった（例えばＤＢＡ／２マウスにおいて、対照マウスにおける２０±２からＬＩＦ−注射マウスにおける１６±３．０．０１（Ｐ＜０．０２））。肝臓細胞核のピクノーセは見られなかった。

カルシウム沈澱の小フォーカスは２μｇＬ　Ｉ　Ｆ注射したＩＩＤＢＡ／２マウスの８の心筋層に、対１２対照マウスの４に見られた。

少して有意差なし。

組織学的異常は、ＬＴＦ＝生成細胞を植えついだマウスに存在するものに似て膵臓、卵巣、副腎皮質又は骨髄筋に認められなかった。

ＬＩＦ−生成ＦＤＣ−Ｐ１細胞（１５，１６）を植えついだマウスにおける著しい過剰の新しい骨形成を考慮して、分析は大腿骨、脛骨及び胸骨で行なった。

明らかな新前形成は異常な柱形成により評価され、大腿骨又は脛骨において見られなかった。しかしながら、胸骨切片の分析でＬＩＦ−注射ＤＢＡ／２マウスにおいて、骨皮質かつ有意に厚くなることを認めた。１日３回１４日間２μｇを注射したマウスで骨皮質により占められた区域は、胸骨切片の全区域の３０．４± ４．２％対、対照マウスにおける２３．１±５６％であった（Ｐ＜０．０１）。

しかしながら同−ＬＩＦ容量が与えられたＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスては、像は２３．１±５３％対２１４±４４で有意差はなかった。

実施例３ＬＪＦ及びＩＬ−３の効果１００単位／ｍｌのＬＩＦを含む骨髄細胞の７日培養では巨核球又は池のコロニー形成及び単−巨核球の延命を示さなかった。ＬＩＦ（１０００単位／ｍｌ）と１０００単位／ｍｒのＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−Ｃ５Ｆ又はＭ−Ｃ３Ｆとの組合せを含む培養において、巨核球を含むコロニーは見られず、巨核球単−延命もなかった。

１２５から１０００単位／［ＩｌｔのＩＬ−３を含む骨髄培養において、巨核球コロニー形成が見られた。これらのコロニーは通常２つの型−少数の大きな分散した巨核球を含めたもの又は種々の大きさのアセチルコリン−陽性細胞を含む大きなコロニーであった。少ない頻度で、巨核球を他の系統の細胞と共に含む混合コロニーが見られ、典型的にこれらのコロニーではアセチルコ’ノンエステラーゼー陽性細胞の数は比較的小であった。このような培養での１０００単位のＬＩＦの含有は、ＩＬ−３の全濃度と共に示す巨核球コロニーの数を増加した（図６）。５００単位のｌ−３を用いる１８の別個の実験例からの巨核球コロニー数でのデータは、各培養で、巨核球コロニーの数が広く変ることを示した。同じ１８の実験例で、５００単位のＩＬ−３プラス１０００単位／ｍＩｌ′のＬＴＦを含む培養では、各培養間の多様性にもかかわらず、巨核球コロニー数での有意な全体増加が見られた（図７Ｘｔ−４，４３，Ｐ＜０．０１）。

ＬＩＦとＩｔ−３の組合せは、ＩＬ−３のみを含む培養と比較してこれらの培養において発達する顆粒球−マクロファージコロニーの数又は大きさに影響しなかった。この促進されたコロニー形成がより多くの巨核球の生成となることを実証するため、金目核球を、５００単位ＩＬ−３のみ又は１０００単位のＩＬ−３との組合せを用いる１４実験例中、全培養皿におけるコロニー巨核球を数えることによｉ）測定した。各型の５０の未選択培養での計数において、ＬｌＦの添加は培養当り発達する巨核球の全数を１８３±１２２から３００±１８５（±５０）（ｔ＝３．７９．ｐ＜０．０１）に有意に増加した。

個々のコロニーにおける巨核球数の度数分布を分析してＬＩＦが成熟細胞の小コロニーの大きさに、又は成熟の変化段階て巨核球を含んでいるより大きなコロニーに選択的影響を及ぼすかを測定した。

図８のヒストグラムは小又は大の数の巨核球を含んでいるコロニーの度数分布を示す。ＬＩＦの添加は巨核球含有コロニーの特異的サブセントの度数において唯一の増加となるようには見えなかった。

実施例４巨核球でのＬＩＦについてのレセプター巨核球について濃縮された骨髄懸濁液をインビトロで＋２５Ｉ−標識ＩＬＦと、２０倍過剰の未標識ＬＩＦと共に又はなしにインキュベートした。図９に示すように、標識化は、約８５％の巨核球により示された。過剰の未標識ＬＩＦの存在で、標識化は、有意に減少し、排除しない。これは、観察された標識化の部分が非特異的で、それゆえに、傷ついた巨核球が未標識ＬＩＦによりブロックされない顕著な標識化を示すことが明らかであることを示唆する。成熟巨核球が好塩基細胞膜を伴う少し成熟していない細胞より高いグレインカウント（ｇｒａｉｎ　ｃｏｕｎｔ）を示すことも明らかてあった（成熟細胞についての平均グレインカウント−８０±５０対、未成熟細胞」１土１４細胞当りグレイン）Ｃ実施例５サルにおける血液血小板数でのＬＩＦの効果材料及び方法両性、約６ないし１０年令、６ないし１１ｋｇの８成熟アカゲザル、マカカ・ムラツタを個々に収容した。サルは６０％±１０の比較湿度で２３±２℃に新鮮な空気条件の１時間当り１０変化を与えた。

それらは１２時間明／暗サイクルに保持し生水ａｄリビタム（ｌｉｂｉｔｕｍ）及び商業上の霊長類食物及び果物を与えた。

ＬＩＦ用量及び処置計画サルＮｏ、　性　ｒｈＬＩＦの用Ｊｌ（μｇ／ｋｇ／日０−１３）Ｂ６２　雄　５０ＢＩＯ雌　５０Ｄ１３　雄　１０６４５　雌　１０Ｃ７８雄　２ ■１４３　雌　２ｒｈＬＩＦの投与ココス・ニコラ博士（す・ワルダー・アンド・エリザ・ホール・インスチチュート・オブ・メディカル・リサーチ、メルボルン、オーストリア）により提供されたｒｈＬＩＦの凍結保存溶液を１日量に分は再び一７０°Ｃで保存した。１日量を解凍し、０５％サル血清を補充した４ｍｌ生理食塩水で希釈した。サイトカインの一日用１を２投与に分けて、午前８と９時及び午後４と５時の間に皮下注射（Ｓｃ）した。生物活性を測定するための試料は、処理期間の始めと終りに維持した。対間サルは、０５％サル血清を補充した非パイロ−ジエン生理食塩水のＳ、　Ｃ，注射を受けた。

血液学的実験末梢血を、ＥＤＴＡ−被覆管中血液学的実験用に、処理開始前、処理期間中、１日又は２日間隔て、及び処理期間後の１週３回集めた。

測定したパラメータは、赤血球（ＲＢＣ）、白血球（ＷＢＣ）、血小板の総計算並びにヘモグロビン及びヘマトクリット値の測定を含んだ（ノスメノクス２０００、ティーオウエイ：東京、日本）。特異の血液細胞計数は２人の独立した観察者によりギムザ染色血液塗抹標本の２００細胞の試験でアカケサル（２３）に対し正常として確立した。

結果血液血小板計数の上昇図１０に示すように、２μｇＬ　Ｉ　Ｆ／ｋｇの１日用量を受けている動物の１つは２迩処理期間の終わりに血液血小板計数での上昇を示したつ上記正常レベルを１４倍上昇した最大血小板計数は、ＬＩＦ投与の終了後５日に測定した。２μ ｇ用量グループにおける他の動物は、血小板計数で少しの上昇を示した。２週間１０μｇＬ　Ｉ　Ｆ／ｋｇの１日用量を受けている２匹のサルは、約１５倍基礎レベルの血小板計数で最高上昇を応答した。図１１に示すように、５０μｇＬ　Ｉ　Ｆ／ｋｇの１巳用量で処理した動物は、処理の開始後２−３巳に始める血小板計数において早い上昇で、投与期間の終りて正常レベルの上２−３倍の範囲において最大レベルで応答した。

この分野の当業者は、本明細書に記載される発明が特に記載されたものと別に変更や修飾の余地があることを識別するであろう。本発明がそのような変更や修飾を全て含むことが理解されるべきである。本発明は、又、本明細書で引用され又は示される全ての段階、特徴、組成物及び化合物を個々に又は集合的にそして全ての２又はそれ以上の該段階又は特徴の全ての組合せて含む。

特表平５−５０２６６７　（１２）巨核球前駆体牌　３．９±３．７＊　０．４±０．５＊　５．９±５．１＊　０．６士０．５＊巨核球骨骨髄　９６±１．３＊５．叶１．１＊４．４±１．０＊３．０±０７＊前駆体細胞は２．５Ｘ１０’細胞の培養から評価した。巨核球の数は胸骨骨髄切片又は区域に訂正された牌部分当りの数である。器型の８マウスからの平均値±５Ｄｓ８有意に異なる値（Ｐ＜、０１）を示す。

用文献１、トミダ・エム、ヤマモトーヤマグチ・ワイ、ホズミ・エム、ンヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリイ、２５９．１０７８．１９８４゜２　ヒルトン・ディージエイ、ニコラ・エヌエイ、ゴウフ・エヌエム、メトカーフ・ディー、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ミストリイ、２６３．９２３８．１９８８゜３、ギアリング・ディーピー、ゴウフ・エヌエム、キング・ンエイエイ、ヒルトン・ディージエイ、ニコラ・エヌエイ、シインブンン・アールジェイ、ナイス・イージー、ケルン・エイ、メトコーフ・ディー、エンボ・ジャーナル、６．３９９５．１９８７゜４、マエカワ・ティー、メトコーフ・ディー、ロイケミア３．２７０．１９８７゜５、メトコーフ・ディー、ヒルトン・ディージエイ、ニコラ・エヌエイ、ロイケミア２．２１６．１９８８゜６、モレアロ・ジェイーニフ、ドナルドソン・ディーディー、べネット・エフ、ウィテクーギアノティ・ジエイエイ、クラーク・ニス／−、ロング・シイ−シイ−、ネイチャー３３６．６９０．１９８８゜７、ヒルトン・ディージエイ、ニコラ・エフエイ、メトコーフ・ディー・プロノーディンゲス・オフ・ナショナル・アカデミイ・オフ・サイエンノイズ・ニーニスエイ、８５．５９７１．１９８８゜８　ヒルトン・ディージエイ、ニコラ・エフエイ、メトコーフ・ディー・ンヤーナル・オフ・セルラー・フィンオロジイ。

（印刷中）９、アベ・イー、タナ力・エッチ、イノミ・ワイ、ミャウチ・ノー、ハヤン・ティー、ナカサワ・エッチ、トミダ・エム、ヤマグチ・ワイ、ホズミ・エム、スダ・ティー、プロノーディンゲス・オフ・ナショナル・アカデミイ・オフ・サイエンノイズ・ニーニスエイ、８３．５９５８．１９８６゜１０　ウィリアムス・アールエルース・ニス、ウィルソン・ティーエイ、ステワード・ノーエル、ゲアリング・ディーピー、ワグナ−・イーピー、メトコーフ・ディー、ニコラ・エフエイ、ゴウフ・エフエム、ネイチャー、３３６、６８４、１９８８。

１１　スミス・エイノー、ハース・ジェイケイ、ドナルドソン・ディーディー、ウォング・シーン＝、モレアラ・シェイ・ストール・エム、ロガース・ディー、ネイチャー、３３６、６８８、１９８８。

１２　バウマン・エッチ、ウォン・ケイ−エイ、シャーレイス・シーピー、ンヤーナル・オフバイオロジカル・ケミストリイ・２６４、８０４６、１９８６。

１３　バウマン・エッチ、ウォン・シーノー、ンヤーナル・オフ・イムノロノイ、１４３、１１６３、１９８９。

１４、モリ・エム、ヤマグチ・ケイ、アベ・ケイ、バイオケミカル・パイオフイノカル・リサーチ・コミュニケーションズ、１６０１１０８５、１９８９。

１５、メトコーフ・ディー、ゲアリング・ディーピー、プロノーディンゲス・オフ・ナショナル・アカデミイ・オフ・サイエンノイズ・ニーニスエイ、８６、５９４８、１９８９。

１６　メトコーフ・ディー、ロイケミア（印刷中）１７　メトコーフ・ディー、エルセヴイアー・アムステルダム、１９８４。

１８　メトコーフ・ディー、ベグレイ・ノージー、ンヨンソン・ジ−アール、ニコラ・エフエイ、ロベズ・アイエフ、ウイリアミソン・ディージエイ、ブラッド、７４、１５４５、１９８９。

１９、マクドナルド・ティーピー、エクスベリメンタルーへマトロノイ、１６、２１０、１９８０。

２０　ローテム・ジエイ、ンヤボ・ワイ、ジャシュ・エル、ブラッド、７４、１５４５、１９８９。

２１、インバシ・ティー、キムラ・エッチ、ンカマ・ワイ、ウチダ・ティー、カリョネ、ニス、ヒラメ・ティー、キシモト・ティー、タカツキ・エフ、アキャマ・ワイ、ブラッド、７４、１２４１、１９８９。

２２　ヤマムリ・ティー等、サイエンス、２４６、１４１２、１９８９。

２３　フサ−・エッチディー（ニド）、アトラス・オフ・コンパラティブ・プライメイト・ヘマトロジ付部、ノーマル・ヘマトロンイ　ニューヨーク、アカデミツク・プレス　８５頁、１９７０。

注射後時間注射の日Ｆｉｇ５．２μｇＬＩＦを１日３回１４日間注射したマウスの骨髄及び牌の２５．０００培養細胞当たりの前駆体細胞の頻度（・）対ＦＣ５／生理食塩水を注射した対照マウスにおける頻度（○）での増加。各点は個々の動物からのデータを表す。

ＦｒＧＵＲＥ　６多重−ＣＳＦ単位単位／ｍ源度Ｆ工ＧＵＲＥ　７Ｆ工ＧＵＲＥ　８コロニー当たりの細胞の数Ｆ工ＧＵＲＥ　９結晶板Ｘ　１０Ｅ３／μｍ　血液要　約　書血小板　ｘ　１０Ｅ３／ｕｌ　血液国際調査報告Ｎ１任ｘＴＯ翳化ｍΣＲ階リゴα轄り舒λＲＯ（ＲＪアαごＧＪ夕酪ね肩頃【ＡＰ阻ａ−１世＝≧殴」Σ四略取Ａｌｌ　１５９０７／Ｂｅ　り　２８５４４８　匍　８８０７ξＢＥＸ）（Ｆ　ＡＮＩ征ズ

Claims

【特許請求の範囲】

１．哺乳動物の血小板減少症を処置する方法であって、その方法は、該哺乳動物に、有効量の白血病阻害因子（ＬＩＦ）を、巨核球及び／又はそれらの前駆体の形成のレベルを促進し、刺激し及び／又は増加する及び／又は、血小板のレベルを増加するに十分な時間及び条件下に投与することを含む。
２．１又はそれ以上の他のサイトカインと同時又は連続的組合せでＬＩＦを投与することをさらに含む請求項１の方法。
３．他のサイトカインが１又はそれ以上のインターロイキン−３（ＩＬ−３）、トロンボポイエチン及びインターロイキン−６（ＩＬ−６）を含む請求項２の方法。
４．他のサイトカインがＩＬ−３である請求項３の方法。
５．ＬＩＦ及び／又は他のサイトカインがヒト、ネズミ又は家畜類起源のものである先行請求項のいずれか１項の方法。
６．ＬＩＦ及び他のサイトカインが組換え又合成手段により調製される請求項５の方法。
７．哺乳動物がヒト又は家畜類動物である請求項１の方法。
８．投与の経路が静脈内、腹腔内、筋肉内又は皮下経路によるものである請求項１の方法。
９．ＬＩＦの及び使用される他のサイトカインの有効量が０．０１ないし１０，０００μｇ／体重のｋｇである先行請求項のいずれか１つの方法。
１０．ＬＩＦ及びサイトカインの有効量が１ないし１０００μｇ／体重のｋｇである請求項９の方法。
１１．哺乳動物の血小板減少症を処置するための医薬組成物であって、該組成物はＬＩＦを１又はそれ以上の他のサイトカイン及び１又はそれ以上の製薬上許容しうる担体及び／又は希釈剤と組合せて含む。
１２．ＬＩＦ及びサイトカインがヒト、ネズミ及び／又は家畜類起源のものである請求項１１の組成物。
１３．ＬＩＦ及び他のサイトカインが組換え又は合成手段により調製される請求項１２の組成物。
１４．他のサイトカインが１又はそれ以上のＩＬ−２トロンボポイエチン及び／又はＩＬ−６を含む請求項１１ないし１３のいずれか１つの組成物。
１５．他のサイトカインがＩＬ−３である請求項１４の組成物。
１６．哺乳動物の血小板減少症を処置するための医薬の製造におけるＬＩＦの用途。
１７．１又はそれ以上の他のサイトカインの用途をさらに含む請求項１６の用途。
１８．他のサイトカインが１又はそれ以上のＩＬ−３、トロンボポイエチン、及びＩＬ−６を含む請求項１７の用途。
１９．他のサイトカインがＩＬ−３である請求項１８の用途。
２０．ＬＩＦ及びサイトカインがヒト、ネズミ及び／又は家畜類種起源のものである請求項１６ないし１９のいずれか１つの用途。
２１．哺乳動物がヒト又は家畜類動物である請求項１６の用途。