MXPA05003057A - Metodos para aumentar la produccion de celulas madre hematopoyeticas y plaquetas. - Google Patents

Abstract

Se describe un metodo para incrementar la produccion de celulas madre hematopoyecticas: el metodo incluye administrar un compuesto mimetico de TPO a un sujeto; tambien se describen las composiciones farmaceuticas que incluyen un compuesto mimetico de TPO y un portador farmaceuticamente aceptable.

Description

METODOS PARA AUMENTAR LA PRODUCCION DE CELULAS MADRE HEMATOPOYETICAS Y PLAQUETAS Esta solicitud reclama prioridad a las solicitudes Nos. 60/411 ,779 y 60/411 ,700, presentadas en septiembre 18 de 2002.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La trombopoyetina (TPO), clonada inicialmente como un regulador importante de la producción de plaquetas, desempeña una función primordial en la biología de células madre hematopoyéticas (HSCs). Véase Kaushansky et al., Nature, 369: 568-571 (1994). Virtualmente, todas las HSCs primitivas que exhiben actividad de repoblación, expresan a c-MpI, el receptor de TPO. Véase Solar et al., Blood, 92: 4-10 (1998). La TPO sola o en combinación con otras citocinas de acción temprana, tales como factor de células madre (SCF), interleucina 3 (IL-3) o ligando de Flt-3, intensifican la proliferación de HSCs primitivas in vitro. Véase Ku et al., Blood, 87: 4544-4551 (1996); Sitnicka et al., Blood 87: 4998-5005 (1996). Estudios in vivo han confirmado estas conclusiones. Véase Kimura et al., Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 95: 1 195-1200 (1998). La importancia de la TPO en la autorrenovación y expansión de células madre, fue apoyada también por la observación clínica de que mutaciones del gen de c-Mpl, causaban trombocitopenia amegacariocítica congénita, una enfermedad en la cual todos los linajes hematopoyéticos fallan durante la niñez. Véase Ballmaier et al., Blood, 97: 139-146 (2001). Se ha encontrado que la expansión de HSCs en médula ósea de adulto, es 10 a 20 veces menos vigorosa en ratones tpo-/- después del trasplante de médula ósea. La TPO añadida exógenamente rescató este defecto. Véase Fox et al., J. Clin. Invest., 1 0: 389-394 (2002). Estos reportes indican que la TPO es un colaborador no redundante importante de la autorrenovación y expansión de HSCs. El trasplante autólogo de células madre (ASCT) se usa cada vez más ampliamente como un medio para reconstituir la médula ósea después de la administración de quimioterapia a altas dosis mieloablativa potencialmente curativa. La base de esta técnica, es movilizar HSCs de la médula ósea a la sangre periférica (usando quimioterapia con cebadura de G-CSF ÷/-), a partir de la cual se cosechan mediante aféresis. Estas células madre, las cuales forman una minoría de la población cosechada, son entonces capaces de reconstituir la médula ósea cuando son reinfundidas después de la terapia mieloablativa. Las células madre obtenidas de sangre periférica en esta técnica parecen ser similares a las células sanguíneas del cordón umbilical, y superiores a las células de la médula ósea en su capacidad para regenerar médula ósea después de la terapia mieloablativa, con tiempo para el injerto de neutrófilos y plaquetas en menos de 10 días. Los tipos de tumores más comunes en los cuales se usa ASCT, son mieloma, linfoma (linfoma de enfermedad de Hodgkin y no de Hodgkin) y leucemia mieloide aguda. La quimioterapia con ASCT a altas dosis puede usarse cada vez más como terapia de primera línea, en particular en mieloma, pero se usa también como terapia de salvataje después de la falla de la quimioterapia de primera línea. Dichos sujetos con frecuencia se han pretratado intensamente, y de esta manera tienen médula ósea con potencial hematopoyético deteriorado. Después de la reinfusión de estas células cosechadas en el sujeto, existe un período durante el cual el sujeto, por ejemplo, un paciente humano, está en riesgo de infección (bajo contenido de neutrófilos) y hemorragia (bajo contenido de plaquetas). Este período varía, dependiendo del número de células madre reinfundidas, que a su vez depende de la capacidad para estimular la expansión de células madre de la médula ósea. Además, algunos sujetos desarrollan también falla de médula ósea después de un período de injerto inicial. El trasplante de células madre se usa también en un ambiente alogénico cuando se movilizan y cosechan células madre de sangre periférica de donadores comparados en HLA. Dichos trasplantes alogénicos se usan con menos frecuencia que el ASCT debido a la incidencia de enfermedad de injerto contra hospedero, pero pueden usarse cuando no sea posible obtener células madre suficientes del paciente. Sin embargo, el uso de células madre alogénicas para obtener injerto parcial en ausencia de mieloablación completa (el "minitrasplante"), puede ofrecer también cierto beneficio terapéutico debido a un efecto de injerto contra tumor. Otro uso posible, actualmente en un número extremadamente pequeño de pacientes, es en el campo de la terapia génica, en donde células de médula ósea alogénicas normales o células autólogas transducidas con una copia normal de un gen defectuoso, pueden curar alguna enfermedad heredada causada por defectos de un solo gen. Los trasplantes alogénicos están también bajo investigación como una opción terapéutica para enfermedad autoinmunes. A pesar de la utilidad potencial y simplicidad del ASCT, existen limitaciones significativas para su uso generalizado más allá del período esperado de pancitopenia, para el cual se requiere soporte intensivo del sujeto para permitir que las células reinfundidas vuelvan a asumir niveles de hematopoyesis suficiente para mantener los conteos de sangre periférica. Una proporción significativa (hasta 40%) de los sujetos trasplantados requiere transfusiones prolongadas de plaquetas después del trasplante (falla primaria del injerto). Un grupo más pequeño (5-10% en trasplante autólogo, pero mayor de 20% con trasplante alogénico), desarrolla trombocitopenia secundaria a pesar del injerto inicial, requiriendo a veces transfusiones prolongadas. La falla del injerto o el injerto retardado se asocia con mortalidad incrementada, costos incrementados de cuidado a la salud, y calidad de vida disminuida del sujeto. De esta manera, existe la necesidad de aumentar la producción de HSCs en dichos sujetos. Los estudios han demostrado que la administración de TPO a pacientes, da como resultado la movilización de células progenitoras de sangre periférica. Un estudio demostró la movilización de células formadoras de colonias a partir de linajes múltiples y células CD34+ en la sangre periférica, después de la administración de dosis múltiples de TPO en combinación con G-CSF. Otro estudio identificó un incremento 6 veces mayor en células CD34+ circulantes 3 a 7 días después de la administración de una sola dosis de TPO en pacientes cancerosos con hematopoyesis de otra manera normal. En este estudio, una subfracción enriquecida en células madre (CD34+Thy+Lin-) fue incrementada casi 9 veces más, y la subfracción megacariocítica comprometida (CD34+CD41+CD14-) fue incrementada casi 15 veces más. Este estudio sugiere que la TPO es capaz de movilizar HSCs autorrenovables y células hijas comprometidas de la médula ósea. Aunque se ha mostrado que la disponibilidad de TPO recombinante (rhTPO) promete aumentar la producción de HSCs, existe la necesidad de una mejora en la terapia con TPO mediante el modo de suministro de fármacos. De esta manera, existe la necesidad de compuestos miméticos de molécula pequeña de TPO que retengan sustancialmente la actividad agonista completa de la TPO, mientras al mismo tiempo permitan varios modos de administración. Existe también la necesidad de compuestos miméticos de molécula pequeña de TPO que tengan inmunogenicidad reducida respecto a una o más de rhTPO y rhlL-11 , así como un perfil farmacocinético mejorado respecto a una o más de rhTPO y rhll_-1 .

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención está dirigida a un método para aumentar la producción de HSCs en un sujeto, el cual comprende un paso de administrar un compuesto mimético de TPO al sujeto. El compuesto mimético de TPO puede administrarse al sujeto solo o en un vehículo farmacéuticamente aceptable. El compuesto mimético de TPO puede usarse solo, o puede combinarse con uno o más compuestos miméticos de TPO adicionales y/u otros agentes que puedan intensificar la movilización de células madre de la médula ósea incluyendo, por ejemplo, G-CSF, SCF, IL-3 y/o Flt-3. La presente invención está dirigida también de esta manera a una composición farmacéutica mimética de TPO que comprenda una cantidad efectiva de un compuesto mimético de TPO y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Una cantidad efectiva de un compuesto mimético de TPO está presente cuando tras la administración, el compuesto mimético de TPO intensifica la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea de un sujeto, y/o moviliza las células madre en la circulación periférica de un sujeto. La presente invención está dirigida también a un método para proveer HSCs a un sujeto. El método puede incluir los pasos de administrar un compuesto mimético de TPO al sujeto para intensificar la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea, y/o para movilizar las células madre en la circulación periférica. Después, el método puede incluir cosechar una o más células madre de la médula ósea o de la circulación periférica del sujeto, y trasplantar entonces las una o más células madre cosechadas en el sujeto. La presente invención está dirigida también a un método para proveer HSCs de un sujeto donador a un sujeto receptor.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La figura 1 es un esquema que representa la regulación de la producción de plaquetas y HSCs de conformidad con el método de la presente invención. La figura 2 es un listado de compuestos que pueden ser adecuados para su uso en el método de la presente invención.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Las porciones relevantes de la literatura y las publicaciones de patente citadas en la presente, se incorporan en la presente como referencia. En una modalidad, la presente invención está dirigida a aumentar la producción de HSCs administrando a un sujeto un péptido de TPO, un compuesto mimético de TPO incluyendo, pero no limitado a, los compuestos expuestos en la figura 2, y formas PEGiladas de los compuestos expuestos en la figura 2. La metodología que puede usarse para la PEGilación de los compuestos expuestos en la figura 2, se describe en la patente de E.U.A. No. 5,869,451. En una modalidad, la presente invención está dirigida a aumentar la producción de HSCs, administrando a un sujeto un péptido de TPO, como se describe en la solicitud de E.U.A. correspondiente número de serie US 60/498740 (caso de apoderado No. 038073-5005 PR), presentada en agosto 28 de 2003, cuyo contenido se incorpora en la presente como referencia. De conformidad con esta modalidad, el péptido de TPO es un compuesto que tiene (1 ) un peso molecular menor de aproximadamente 5000 daltons, y (2) una afinidad de unión al receptor de TPO expresada por una IC50 no mayor de aproximadamente 100 µ?, en donde de cero a todos los enlaces de -C(0)NH- de los péptidos han sido reemplazados por un enlace seleccionado del grupo que consiste del enlace de -CH2OC(0)NR-; un enlace de fosfonato; un enlace de -ChfeSíOkNR-; un enlace de CH2NR-; un enlace de C(O)NR6; y un enlace de -NHC(0)NH-, en donde R es hidrógeno o alquilo inferior, y R6 es alquilo inferior, en donde además el N-terminal de dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste de un grupo -NRR1; un grupo -NRC(0)OR; un grupo -NRS(O)2R; un grupo -NHC(O)NHR; un grupo succinimida; un grupo benciloxicarbonil-NH y un grupo benciloxicarbonil-NH que tiene de 1 a 3 sustituyentes en el anillo de fenilo seleccionados del grupo que consiste de alquilo inferior, alcoxi inferior, cloro y bromo, en donde R y R1 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo inferior, y más aún cuando el C-terminal del compuesto tiene la fórmula -C(0)R2, en donde R2 se selecciona del grupo que consiste de hidroxi, alcoxi inferior y -NR3R4, en donde R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo inferior, y en donde el átomo de nitrógeno del grupo -NR3R4 puede ser opcionalmente el grupo amina del N-terminal del péptido para formar un péptido cíclico, y sales fisiológicamente aceptables de los mismos. En una modalidad relacionada, el péptido mimético de TPO comprende una secuencia de aminoácidos en donde X9 es A, C, E, G, I, L, M, P, R, Q, S, T o V; y X8 es A, C, D, E, K, L, Q, R, S, T o V; y X6 es un residuo de p-(2-naftil)alanina (referido en la presente como "2-Nal"). Más preferiblemente, X9 es A o I, y X8 es D, E o K. Además, Xi es C, L, M, P, Q o V; X2 es F, K, L, N, Q, R, S, T o V; X3 es C, F, I, L, M, R, S, V o W; X4 es cualquiera de los 20 L-aminoácidos codificados genéticamente; X5 es A, D, E, G, K, M, Q, R, S, T, V o Y; y X7 es C, G, I, K, L, M, N, R o V. Un péptido mimético de TPO particularmente preferido es I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R A. En otra modalidad, el péptido mimético de TPO es dimerizado u oligomerizado para aumentar la afinidad y/o actividad del compuesto. Un ejemplo de dicho compuesto incluye: I E G P T L R Q (2-NaI) L A A R A - X10 \ K(NH2) / I E G P T L R Q (2-Nal) L A A R A - X10 en donde X10 es un residuo de sarcosina o ß-alanina o una forma PEGilada de este compuesto. La forma PEGilada puede incluir un residuo de MPEG de 20k enlazado covalentemente a cada ¡soleucina N-terminal. Uno o más péptidos miméticos de TPO, y en particular péptidos miméticos de TPO PEGilados (referidos en conjunto en la presente como "compuestos miméticos de TPO" o "compuestos miméticos de TPO de la invención"), pueden usarse para aumentar el número de células madre en la médula ósea. Datos importantes que apoyan el uso de un compuesto mimético de TPO en ASCT, son provistos por un estudio realizado por Somlo et al., Blood, 93(9): 2798-2806 (1999), en el cual trombopoyetina humana recombinante (rhTPO) fue capaz de intensificar la movilización y el rendimiento de aféresis de células madre CD34+ en respuesta a G-CSF con reducción consecuente en el número de aféresis. Después, el injerto de células reinfundidas mejoró también en términos de tiempo reducido para ANO0.5 x 109/L e independencia de la transfusión de plaquetas, aunque este efecto no alcanzó significancia estadística en el tamaño de muestra pequeño usado en este estudio piloto. Mediante el aumento del número de células madre, la cosecha total de células madre del sujeto puede mejorar significativamente. Además, mediante el aumento del número de células madre cosechadas del sujeto, el número de células madre disponible para trasplante de nuevo en el sujeto puede mejorarse también en forma significativa, reduciendo potencialmente de esta manera el tiempo al injerto (el tiempo durante el cual el sujeto tiene neutrofilos y plaquetas insuficientes), previniendo de esta manera complicaciones. Además, la presente invención puede reducir también la proporción de sujetos que son incapaces de cosechar suficientes células para proceder con el tratamiento para su enfermedad primaria, por ejemplo, quimioterapia y otros tratamientos ablativos de médula ósea. Además, puede reducirse también la proporción del número de sujetos con injerto primario retardado. Compuestos miméticos de TPO tales como los de la figura 2 y descritos en la presente, pueden usarse para aumentar la producción de HSCs. Esto se logra administrando uno o más de los compuestos a un sujeto. Los compuestos expuestos en la figura 2 y descritos en la presente, así como las formas PEGiladas de los compuestos expuestos en la figura 2, pueden tener inmunogenicidad reducida respecto a una o más de rhTPO y rhlL-11 , y pueden tener también un perfil farmacocinético mejorado respecto a una o más de rhTPO rhlL-11. Pueden usarse también compuestos miméticos de TPO para proveer HSCs autólogas a un sujeto. Típicamente, esto incluye los pasos de administrar un compuesto mimético de TPO a un sujeto que necesita del mismo para intensificar la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea, y/o para movilizar las células madre en la circulación periférica; cosechar una o más de las células madre de médula ósea o una o más de las células madre en la circulación periférica; y trasplantar las una o más células madre cosechadas de nuevo en el sujeto. Además, las células madre obtenidas de la cosecha de conformidad con el método de la presente invención descrito anteriormente, pueden criopreservarse usando técnicas conocidas en la materia para criopreservación de células madre. Por consiguiente, mediante el uso de criopreservación, las células madre pueden mantenerse de modo que una vez que se determina que un sujeto necesita trasplante de células madre, las células madre pueden descongelarse y trasplantarse de nuevo en el sujeto. Los compuestos miméticos de TPO, incluyendo los compuestos expuestos en la figura 2 y descritos en la presente, así como las formas PEGiladas de los compuestos expuestos en la figura 2, pueden usarse de esta manera para, entre otras cosas, reducir el tiempo al injerto después de la reinfusión de células madre en un sujeto; reducir la incidencia de injerto primario retardado; reducir la incidencia de falla secundaria de la producción de plaquetas; y reducir el tiempo de injerto de plaquetas y/o neutrófilos después de la reinfusión de células madre en un sujeto. Estos métodos incluyen típicamente los pasos de administrar un compuesto mimético de TPO a un sujeto que necesita del mismo, para intensificar la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea y/o para movilizar las células madre en la circulación periférica, y entonces cosechar una o más de las células madre de médula ósea o las células madre en la circulación periférica, y trasplantar entonces las células madre cosechadas de nuevo en el sujeto en el momento adecuado, según se determina por las necesidades particulares del sujeto. El método de la invención puede usarse también para aumentar el número de células madre de un sujeto donador cuyas células se usan entonces para el rescate de un sujeto receptor que ha recibido quimioterapia de ablación de médula ósea.

A. Formas de dosificación y vías de administración Los compuestos miméticos de TPO útiles para la presente invención pueden administrarse como composiciones farmacéuticas que comprenden, como un ingrediente activo, por lo menos uno de los péptidos o péptidos miméticos expuestos en la figura 2 y/o descritos en la presente, y/o descritos en la patente de E.U.A. No. 5,869,451 , cuyo contenido completo se incorpora en la presente como referencia, en asociación con un vehículo o diluyente farmacéutico. Los compuestos pueden administrarse mediante inyección oral, pulmonar o parenteral (intramuscular, intraperitoneal, intravenosa (IV) o subcutánea), por inhalación (mediante una formulación de polvo fino), o mediante vías de administración transdérmica, nasal, vaginal, rectal o sublingual, y pueden formularse en formas de dosificación adecuadas para cada vía de administración. Véase, por ejemplo, Bernstein et al., publicación de patente del PCT No. WO 93/25221; Pitt, et al., publicación de patente del PCT No. WO 94/17784; y Pitt, et al., solicitud de patente europea 613,683, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia. Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, tabletas, pildoras, polvos y gránulos. En dichas formas de dosificación sólidas, el compuesto activo puede mezclarse con por lo menos un vehículo inerte farmacéuticamente aceptable, tal como sacarosa, lactosa o almidón. Dichas formas de dosificación pueden comprender también, como es la práctica normal, otras sustancias diferentes de diluyentes inertes, por ejemplo, agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. En el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, las formas de dosificación pueden comprender también agentes reguladores de pH. Las tabletas y pildoras pueden prepararse además con recubrimientos entéricos. Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen jarabes, suspensiones, soluciones y emulsiones farmacéuticamente aceptables, y los elíxires contienen diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como agua. Además de dichos diluyentes inertes, las composiciones pueden incluir también adyuvantes, tales como agentes mojantes, agentes emulsificantes y de suspensión, y agentes edulcorantes, saborizantes y de perfume. Las preparaciones para administración parenteral incluyen emulsiones, suspensiones o soluciones estériles acuosas o no acuosas. Ejemplos de solventes o vehículos no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva y aceite de maíz, gelatina, y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Dichas formas de dosificación pueden contener también adyuvantes tales como agentes conservadores, mojantes, emulsificantes y de dispersión. Pueden esterilizarse, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro retenedor de bacterias, incorporando agentes de esterilización en las composiciones, irradiando las composiciones, o calentando las composiciones. Pueden fabricarse también usando agua estéril o algún otro medio inyectable estéril, inmediatamente antes del uso. Las composiciones para administración rectal o vaginal son de preferencia supositorios que pueden contener, además de la sustancia activa, excipientes tales como manteca de cacao o una cera de supositorio. Se preparan también composiciones para administración nasal o sublingual con excipientes estándar bien conocidos en la técnica. Las composiciones de la invención pueden microencapsularse también mediante, por ejemplo, el método de Tice y Bibi (en Treatise on Controlled Drug Delivery, ed. A. Kydonieus, Marcel Dekker, New York (1992), pp. 315-339). La composición puede combinarse también con, entre otros, G-CSF, SCF, IL-3 o Flt-3 y/u otros agentes que puedan intensificar la movilización de células madre de la médula ósea (incluyendo quimioterapia con cebadura y antagonistas de integrina).

B. Cantidad de dosificación Las cantidades de un compuesto mimético de TPO necesarias para la presente invención dependerán de muchos factores diferentes, incluyendo medios de administración, sitio objetivo, estado fisiológico del sujeto y otros medicamentos administrados. De esta manera, las dosificaciones de tratamiento deben titularse para optimizar la seguridad y la eficacia. Típicamente, las dosificaciones usadas in vitro pueden proveer una guía útil en las cantidades usadas para la administración in situ de estos reactivos. La realización de pruebas de dosis efectivas en animales para el tratamiento de trastornos particulares, proveerá más indicación predictiva de la dosificación en humanos. Varias consideraciones se describen, por ejemplo, en Gilman, et al. (eds), Goodman y Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8a. ed., Pergamon Press (1990); y Remington's Pharmaceutical Sciences, 7a. ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1985); cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia. Los compuestos miméticos de TPO son útiles para la presente invención cuando se administran a una escala de dosificación de alrededor de 0.001 mg a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal por día. En forma alternativa, en algunos casos pueden administrarse también de 0.0001 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg. La dosis específica usada es regulada por la condición particular que se esté tratando, la vía de administración, así como por el juicio del médico clínico tratante, dependiendo de factores tales como la severidad de la condición, la edad y condición general del sujeto, y similares.

C. Sujetos e indicaciones Como se usa en la presente, un sujeto incluye cualquiera que sea un candidato para trasplante autólogo de células madre o médula ósea durante el curso de tratamiento para enfermedad maligna, o como un componente de terapia génica. Otros candidatos posibles son sujetos que donen células madre o médula ósea a sujetos para trasplante alogénico para enfermedad maligna o terapia génica. Para proveer una probabilidad de injerto aceptable, debe cosecharse un número mínimo de células madre. Aunque no definido con precisión, se acepta en general que deben cosecharse 2-3 x 106 células CD34+ por kg para proveer una oportunidad de injerto razonable. La reinfusión de 5 x 106 células/kg parece producir resultados óptimos en términos de tiempo al injerto. Este gran número de células se requiere debido a que el número real del subconjunto específico de células CD34+ que son capaces de reconstitución de médula ósea a largo plazo, es muy pequeño. Se considera que tanto como 20% de los pacientes trasplantados son malos movilizadores, requiriendo aféresis múltiples para generar células suficientes. Aunque uno de los predictores más importantes de mala movilización de células madre es la edad del paciente, el tratamiento intensivo con quimioterapia es también un factor significativo. Existe probablemente un gran número de pacientes, en particular pacientes de edad avanzada con mieloma con NHL, quienes no son considerados para ASCT, debido a la baja probabilidad de injerto exitoso.

Por consiguiente, el método de la invención provee una solución a la necesidad no cubierta en ASCT, es decir, la necesidad de mejorar la proporción de pacientes que tienen injerto exitoso y rápido. Esto se logra principalmente debido a la mejora en la movilización de células madre, ya sea aumentando los números de células movilizadas, o aumentando la proporción de HSCs en la población de células CD34+ movilizadas. El método de la invención provee de esta manera los siguientes beneficios: 1. Permite que proceda el trasplante en pacientes quienes de otra manera no serían considerados como candidatos debido al riesgo inaceptablemente alto de injerto fallido; 2. Reduce el número de aféresis requeridas para generar una cosecha mínima aceptable; 3. Reduce la incidencia de falla de injerto primaria y secundaria, aumentando el número de HSCs disponibles para trasplante; y 4. Reduce el tiempo requerido para el injerto primario, aumentando el número de precursores comprometidos de los linajes hematopoyéticos importantes. De conformidad con el efecto establecido de la TPO sobre las HSCs, los compuestos miméticos de TPO de la invención pueden tener los siguientes beneficios clínicos en el trasplante de células madre: - Mejora de los rendimientos de aféresis: numerosos estudios han sugerido que el número de células madre CD34+ reinfundidas, es un factor importante para determinar el tiempo al injerto. Como se demostró con la TPO, la adición de un compuesto mimético de TPO puede aumentar la movilización de células CD34+ como un adyuvante a los regímenes de movilización convencionales de G-CSF y quimioterapia. El beneficio principal sería mejorar la perspectiva para el injerto a largo plazo rápido y subsecuente. La reducción del número de aféresis requeridas para generar un número aceptable de células, reduciría el costo y la inconveniencia para el paciente. La mejora en los rendimientos de aféresis sería de beneficio particular en pacientes con factores de riesgo para baja movilización (edad y pretratamiento intenso). Dichos pacientes no pueden ser de otra manera candidatos para ASCT. - Mejora del potencial de injerto de células infundidas por aféresis: el injerto a largo plazo después de la terapia mieloablativa, es producido por una pequeña fracción de la población de células CD34+ (más probablemente dentro de la población de células CD34+CD38-Lin-). Debido a que son muy raras, se requieren grandes números de células CD34+ para proveer un injerto efectivo (2-5 x 106/kg). El G-CSF no afecta las proporciones de los subtipos diferentes de células CD34+, y se usa simplemente como un agente que puede aumentar el número de estas células en sangre periférica antes de la cosecha. La quimioterapia con cebadura puede ser realmente tóxica para dichas células. Sin embargo, la TPO se reconoce cada vez más ampliamente como un agente que puede aumentar la autorrenovación de la mayoría de las células madre, y de esta manera capaz de reconstitución hematopoyética a largo plazo. Un efecto similar de un compuesto mimético de TPO puede aumentar por lo tanto la proporción de la población de células CD34+ que pueden favorecer el injerto a largo plazo, y reducir de esta manera el riesgo de falla del injerto. La TPO puede aumentar también los números de células madre comprometidas al linaje megacariocítico, produciendo de esta manera independencia más temprana de la transfusión de plaquetas, es decir, tiempo reducido al injerto. Los dos efectos benéficos descritos anteriormente pueden ser aditivos o sinergísticos, llevando a mayor reducción en el tiempo al injerto del que podría verse con agentes que sólo aumentan la movilización de las células madre. El uso de un compuesto mimético de TPO de la invención probablemente sólo requeriría un pequeño número de dosis administradas, por ejemplo, intravenosamente o subcutáneamente, antes de la aféresis. Dicho régimen de dosificación reduciría al mínimo el riesgo de antigenicidad significativa, la cual se predice ya es baja debido al uso de un producto PEGilado. El compuesto mimético de TPO de la invención se administra primero a voluntarios normales: 1. Para establecer el efecto del compuesto mimético de TPO sobre poblaciones de células CD34+ de sangre periférica, conteo de plaquetas y otros parámetros hematológicos; 2. Para establecer el perfil de seguridad preliminar del compuesto mimético de TPO en términos de toxicidad limitativa de la dosis y eventos adversos de alta frecuencia; 3. Para determinar la dosis, el régimen de dosis y la regulación de la dosis de la dosificación de preaféresis más adecuados con el compuesto mimético de TPO; y 4. Para determinar el perfil farmacocinético del compuesto mimético de TPO en humanos. 5. Para generar información comparativa preliminar sobre los efectos de un compuesto mimético de TPO de la invención y el G-CSF sobre el potencial de linajes múltiples de las células madre de sangre periférica. Voluntarios humanos normales, que son la población más adecuada para la evaluación de la farmacocin ética y el perfil de seguridad inicial, proveen el entendimiento más claro de los efectos del compuesto mimético de TPO sobre las HSCs, debido a la ausencia de los efectos de fondo de la quimioterapia y la enfermedad. El estudio seria un estudio de un solo ciego de aumento de la dosis, en el cual voluntarios humanos normales reciben una sola dosis intravenosa del compuesto mimético de TPO de la invención, dado como una infusión horaria. La dosis de partida será de 15 ug/kg. Los grupos de dosis sucesivas recibirán 25, 50, 100 y 200 ug/kg. Cuatro sujetos serán enrolados en cada grupo, tres de los cuales recibirán terapia activa, y uno que recibirá placebo. Cada sujeto será observado a intervalos regulares (15 minutos) durante la infusión, y continuará siendo un paciente interno por 24 horas para monitoreo de seguridad y muestreo farmacocinético estrechos. Más tratamiento complementario de los pacientes externos para evaluación de seguridad, farmacocinética y farmacodinámica, ocurrirá en los días 2, 4, 7, 14, 21 y 28. Cada grupo de dosis sucesivas será tratado dos semanas después del grupo previo. Cuando se alcanza una dosis a la cual se observa evidencia de efecto farmacodinámico (definido como un incremento de 50% en el conteo de plaquetas respecto al valor de pretratamiento) en 2/3 de los sujetos tratados activamente, la dosificación a ese nivel se extenderá para incluir otros cuatro sujetos (3/1 terapia activa/placebo). Si se confirma la eficacia, un grupo de dosis adicional de seis sujetos (4/2 terapia activa/placebo) será enrolado para proveer más confirmación del efecto farmacodinámico. Si el efecto farmacodinámico se observa sólo a la dosis planeada más alta, se considerará un incremento de dosis adicional, suponiendo que no se ha observado evidencia de toxicidad. Si un evento de seguridad/tolerabilidad que se relaciona posiblemente o probablemente con la medicación de estudio ocurre en un solo sujeto tratado activamente a cualquier dosis, otros cuatro sujetos (3/1 terapia activa/placebo) serán enrolados a esa dosis para determinar si se ha identificado una toxicidad limitativa de la dosis. Se tomarán muestras de sangre para la medición de los niveles de fármaco 30 minutos después de haber iniciado la infusión, al final de la infusión y en las siguientes ocasiones después del final de la infusión: 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 96 horas y 7 y 14, 21 y 28 días. Se medirán los niveles de compuesto usando un bioensayo basado en células o mediante ELISA. Para comparación, se administrará una sola dosis de G-CSF a tres sujetos para medir los efectos sobre las células CD34+. El efecto del compuesto mimético de TPO sobre el conteo de células CD34+ de sangre periférica, si es que existe alguno, será retardado por varios días (3 a 7 si el efecto es similar a la trombopoyetina). Además, debido al impacto desconocido de la farmacocinética del compuesto mimético de TPO sobre el perfil de PD, no se sabe cuándo se verá el efecto máximo de una sola dosis. Es la regulación del efecto máximo, lo que determinará el intervalo entre la dosificación del compuesto mimético de TPO y la cosecha de células CD34+ en estudios subsecuentes en pacientes. Se ha demostrado una buena correlación entre el conteo de células CD34+ de sangre periférica y el rendimiento en la cosecha subsecuente, sugiriendo que este procedimiento es razonable. Puede ser adecuado asegurar que el compuesto mimético de TPO de la invención se administre antes del G-CSF para permitir una expansión de la población de HSCs dentro de la médula ósea, seguida de movilización de la población expandida. La mayoría de los estudios que usan G-CSF para estimular la movilización, le dan al fármaco cinco días con la cosecha iniciada hacia el final del período de dosificación. Es posible que el perfil farmacodinámico del compuesto mimético de TPO requiera que sea dosificado algunos días antes del G-CSF. El impacto del compuesto mimético de TPO sobre el número de HSCs autorrenovables en la población movilizada, podría proveer un incremento en la capacidad de autorrenovación que llevaría a un injerto exitoso con menores números de células movilizadas, mayor facilidad para llevar a cabo trasplantes en tándem, y la posibilidad de que el compuesto mimético de TPO pudiera reemplazar finalmente al G-CSF como el agente de movilización estándar. Este aspecto de la farmacología clínica del compuesto mimético de TPO puede destacarse midiendo la capacidad de autorrenovación de las poblaciones de células CD34+ a partir del estudio en voluntarios normales, tanto en estudios ¡n vitro de la capacidad para sustentar la formación de colonias a largo plazo (el cultivo de LTC-IC), como llevando a cabo pruebas de repoblación en ratones SCID/NOD en las cuales las células movilizadas son infundidas en ratones SCID/NOD irradiados Ietalmente. Los cálculos preliminares indican que la realización de dichos estudios debe ser factible con las células CD34+ que están contenidas en 30 a 50 mi de sangre, siempre que el conteo de células CD34+ se haya elevado hasta aproximadamente 5x103/ml. Se esbozan a continuación las hipótesis que sustentan esta afirmación: 1. Se obtendrán PBMCs de sujetos normales mediante separación con Ficoll/Hypaque, y entonces se removerán células Lin+ mediante selección negativa. Subfracciones de células CD34+CD38- de esta población enriquecida se aislarán entonces mediante FACS, y se administrarán a ratones SCID/NOD. Los ratones recibirán también células accesorias y factores de crecimiento que permitan el uso de menores números de células CD34+CD38-Lin- por ratón (Bonnet et al., Bone, Marrow Trasplantation, 23: 203-209 (1999)). En forma alternativa, la población de PBMCs original se usará sin más purificación para proveer células accesorias y útiles para repoblación. 2. El punto final primario de esta prueba, será la supervivencia de los ratones receptores. Sin embargo, se llevarán a cabo también análisis Southern Blot para detectar ADN humano en los ratones receptores. Si es posible, se determinará la detección de células progenitoras humanas mediante cultivos de médula a largo plazo selectivos de humano y/o citometría de flujo con MAbs específicos de humano. 3. Cada sujeto proveerá suficiente sangre para poner a prueba cuatro dosis de células CD34+CD38-Lin- (250, 500, 1000 y 2000 células/ratón). Cada dosis de células se dará a cinco ratones. Con estas hipótesis de diseño, se necesitarán aproximadamente 1.9x104 células CD34+CD38-Lin- de cada sujeto. Si se llevan a cabo otros estudios de formación de colonias ¡n vitro, se necesitarán más células. 4. Cada sujeto normal proveerá esta muestra de sangre sólo una vez, y sólo cuando el conteo de células CD34+ en sangre periférica haya alcanzado 15x103/ml. La población de células CD34+CD38-Lin- representa 5 a 8% de la población de células CD34+ (Gallacher et al., Blood, 95: 2813-2820 (2000)). Los estudios con TPO en voluntarios normales, indicaron que se observaron 16x103 células CD34+/ml en la sangre periférica. 5. Se requerirán 30 mi de sangre de cada sujeto para dar 2.25-3.6x104 células. 6. No será posible llevar a cabo estos estudios en sujetos tratados con placebo, debido a bajos niveles de células CD34+ (<3x103/ml).

Para comparación, se tomarán cantidades similares de células de sujetos tratados con G-CSF. Se infundirán números iguales de células en los ratones. 7. La validez de estas hipótesis se pone a prueba con datos independientes. Aproximadamente 1 en 6x106 PBMCs es capaz de repoblar un ratón SCID/NOD (Wang et al., Blood, 89: 3919-3924 (1997)). De esta población, la población de células CD34+ es 0.13-0.39%, y 5-8% de este subgrupo son células CD34+CD38-Lin- (Tichelli et al., Br. J. Hematol., 106: 152-158 (1999)). Esto representa 390-1872 células de los 6x106 PBMCs originales. En un estudio separado, se ha demostrado que la incidencia de células que vuelven a poblar ratones SCID/NOD en la población de células CD34+CD38-Lin-, es de 1 en 617 (Bhatia et al., PNAS, 94: 5320-5325 (1997)). Esta cifra es consistente con la extrapolación a la incidencia en células no seleccionadas. 8. Si el número de células llega a ser limitativo, se excluirá el grupo de ratones con dosis de células más alta. Las células CD34+ tomadas de voluntarios a quienes se les da G-CSF, se usarán como un control para estos estudios. El estudio propuesto con voluntarios normales proveerá la base de datos requerida para determinar el diseño de estudios en pacientes en términos de dosis, régimen de la dosis y regulación de la dosis, así como evidencia farmacodinámica fuerte que predice la eficacia clínica. La siguiente fase del programa de farmacología clínica, buscará reproducir los efectos observados en pacientes programados para trasplante de células madre, así como proveer datos de traducción que demuestren un vínculo entre los puntos finales farmacodinámicos descritos anteriormente y los puntos finales clínicos requeridos para la aprobación regulatoria. El compuesto mimético de la presente invención se administra entonces a pacientes que necesitan: 1. Explorar el riesgo para el perfil de beneficio que tiene el compuesto mimético de TPO en diferentes poblaciones de pacientes que son candidatos para trasplante autólogo de células madre; y 2. Obtener evidencia preliminar del efecto probable del compuesto mimético de TPO sobre los rendimientos de aféresis de células madre CD34+ de sangre periférica y los resultados del post-injerto. El primer estudio en pacientes será de nuevo un diseño de una sola dosis con aumento de la dosis (asumiendo que no exista razón para dar la dosis del compuesto mimético de TPO como una dosis dividida). La dosificación del compuesto mimético de TPO se introducirá en un régimen de movilización estándar, con el intervalo de dosis entre la dosificación y la cosecha predicho a partir del estudio en voluntarios. Los mismos puntos finales farmacodinámicos se evaluarán en este estudio como en el estudio previo, pero se obtendrán también datos sobre el rendimiento de aféresis, número de aféresis e índices y tiempos subsecuentes de injerto. La dosificación se administrará mediante un frasco de 10 a 20 mg de un solo uso conteniendo polvo liofilizado como una sola dosis, mediante administración de bolo intravenoso antes de la aféresis y después de la reinfusión de las células cosechadas. Puede administrarse un bioequivalente de la dosificación subcutánea con dosificación intravenosa. Se espera que la dosis esté entre aproximadamente 10-300 µ9/? 9. Un aspecto clave de este estudio, será explorar la relación de riesgo a beneficio del compuesto mimético de TPO en diferentes poblaciones de pacientes. Un número creciente de pacientes está recibiendo terapia mieloablativa a altas dosis con ASCT relativamente temprano en el curso de su enfermedad. Dichos pacientes tienen con frecuencia médula ósea relativamente normal y, en particular si son jóvenes, es probable que movilicen números aceptables de células CD34+ con alta probabilidad consecuente de injerto rápido. En esta población, el impacto potencial de un agente adicional que intensifique la movilización puede ser limitado, pero podría manifestarse como injerto incluso más rápido, con reservación de células cosechadas para trasplante en tándem. Sin embargo, esta población, que se asemeja más estrechamente a la población normal por lo menos en términos de sensibilidad a la médula ósea, es un grupo de traducción importante para el desarrollo del compuesto mimético de TPO. Los pacientes que llegan a ser candidatos para ASCT después de sesiones previas múltiples de terapia, tienen con frecuencia mayor dificultad para generar suficientes células CD34+ para una cosecha adecuada. Por consiguiente, muchos de estos pacientes requieren programas de aféresis prolongados y una mayor incidencia de injerto retardado o fallido. Una proporción de estos pacientes no es capaz de sufrir trasplante autólogo, y debe recurrir más bien al trasplante alogénico con riesgo incrementado de complicaciones post-trasplante. Es esta población en la cual un agente de movilización adicional puede ser de gran beneficio. Por consiguiente, el primer estudio en pacientes enrolará pacientes de ambas categorías. Los datos de los "buenos movilizadores" se usarán como una marca fija para determinar el impacto del compuesto mimético de TPO sobre los "malos movilizadores". Se incluirá un grupo no tratado que reciba sólo estándar de cuidado. Los puntos finales farmacodinámicos esbozados anteriormente proveerán un sustituto vigoroso del beneficio probablemente clínico del compuesto mimético de TPO en ASCT. Se llevarán a cabo estudios definitivos como estudios controlados con placebo, de doble ciego y de grupo paralelo. Una vez que la aleatorización haya ocurrido, se tomarán decisiones clínicas acerca del trasplante de acuerdo a reglas predefinidas y la práctica clínica aceptada. El punto final primario para los estudios será el tiempo medio al injerto después de la reinfusión de las células cosechadas. El tiempo al injerto se definirá como el número de días hasta que el conteo de plaquetas se mantenga arriba de 20x109/L sin soporte de transfusión durante un período de 7 días. Los puntos finales secundarios incluirán: 1. Tiempo al injerto de neutrófilos (definido como conteo de neutrófilos mantenido arriba de 0.5x109/L); 2. Tiempo al conteo de plaquetas >50x109/L (mantenido por 7 días sin soporte de transfusión); 3. Proporción de pacientes con injerto de plaquetas retardado; 4. Proporción de pacientes con falla secundaria de injerto de plaquetas; 5. Proporción de pacientes que fallan para generar la cosecha mínima necesaria para el trasplante; 6. Cosecha de células CD34+ (células CD34+/kg); 7. Número de aféresis requeridas para la cosecha; y 8. Número de transfusiones de plaquetas. Un factor clave en el diseño del estudio, será la selección de la población objetivo. Los datos publicados indican que el número de células CD34+ cosechadas es un determinante importante de la cinética de injerto subsecuente, y fijará firmemente por lo tanto directamente el punto final primario de los estudios. Las características demográficas clave que influirán sobre la capacidad para movilizar células CD34+, es la cantidad de pretratamiento y la edad del paciente. Deben considerarse los siguientes aspectos: 1. Si se selecciona una población de mala movilización, habrá una mayor oportunidad de detectar una mejora en los índices de injerto, pero la capacidad de la médula ósea para responder al compuesto mimético de TPO puede comprometerse de esta manera, que no es posible una respuesta. 2. Si se selecciona una población de alta movilización, la capacidad para detectar una respuesta sobre la terapia de fondo puede ser limitada debido al hecho de que los números óptimos de HSCs autorrenovables serán reinfundidos, a pesar de la adición del compuesto mimético de TPO; 3. El efecto intrínseco del compuesto mimético de TPO de la invención para aumentar la movilización, puede prevenir la definición precisa de buenos o malos movilizadores; 4. La capacidad para detectar el efecto, sobre el injerto, de un aumento en la autorrenovación de las HSCs, puede observarse sólo en pacientes en quienes el número de estas células es un factor limitativo en la cinética de injerto. Con base en estos aspectos, es importante que la población de estudio para estos estudios se limite al número de pacientes en los extremos de la escala de movilización. En cualquier extremo, puede ser difícil demostrar la eficacia del compuesto. Esto puede lograrse excluyendo algunos grupos de pacientes que es altamente probable que favorezcan valores de movilización extremos (por ejemplo, pacientes que reciben terapia de primera línea, pacientes con mielodisplasia y/o baja reserva de médula), y también asegurando que el tamaño de muestra sea determinado por pacientes que alcanzan una escala predefinida de tamaño de la cosecha de células CD34+ (es decir, se reemplazaría a los pacientes aleatorizados que fallan en cumplir estos criterios). Si se sigue un diseño de este tipo, la mayoría de los pacientes que favorecerían el punto final primario en el grupo con placebo tendrían un rendimiento de células CD34+ que está en las siguientes categorías a una relación de 2:3:1, respectivamente: <2.0x106/kg (tiempo medio al injerto = 17 días) 2-5x 06/kg (tiempo medio al injerto = 12 días) >5x 06/kg (tiempo medio al injerto = 10 días). En una población de este tipo, el tiempo medio esperado al injerto sería de 13 a 14 días. Si el efecto del compuesto mimético de TPO sobre el rendimiento de células CD34+ fue alterar las proporciones de las diferentes categorías de cosecha de 2:3:1 a 1 :2:3, este cambio resultaría sólo en una reducción en el tiempo medio al injerto de 1.66 días. Si un tiempo mejorado al injerto dentro de cada categoría causado por números incrementados de autorrenovación de HSCs se sobrepone sobre esto, de modo que el tiempo medio al injerto mejore en 5 días en el grupo de rendimiento más bajo (es decir, se comportan como el grupo de rendimiento medio) y dos días en el grupo intermedio (es decir, se comportan como el grupo de alto rendimiento), la reducción adicional en el tiempo medio al injerto sería de 1.66 días. Ningún efecto sobre el tiempo al injerto se asume para el grupo de alto rendimiento. En conjunto, el impacto del tratamiento con el compuesto mimético de TPO sobre el tiempo medio al injerto de plaquetas, con el propósito de calcular un tamaño de muestra, seria de 3 días. Para permitir la oportunidad máxima de definir el beneficio clínico del compuesto mimético de TPO, debe establecerse un umbral relativamente bajo para la cosecha mínima requerida para permitir que proceda la mieloablación. La capacidad para demostrar la eficacia del compuesto mimético de TPO en ASCT es relativamente directa, debido a que basta la observación de números incrementados de células madre CD34+ en la sangre periférica de voluntarios normales tratados con dosis individuales. El primer estudio en humanos demostrará por lo tanto un efecto biológicamente relevante. Varios estudios han identificado el nivel de células CD34+ en sangre periférica como un predictor importante del rendimiento de aféresis subsecuente. Sin embargo, el efecto sobre la movilización de células madre en combinación con el G-CSF no se establecerá hasta que haya concluido el primer estudio en pacientes. Será más difícil establecer que las células CD34+ movilizadas contienen números incrementados de células madre, debido en parte a que es difícil medir los bajos niveles de HSCs en pacientes no estimulados. Sin embargo, puesto que se reporta que el G-CSF no afecta la proporción de HSCs en la población de células CD34+, puede ser posible inferir cierto efecto del compuesto mimético de TPO sobre el número de HSCs autorrenovables dentro de la población de células movilizadas en comparación con células movilizadas con el G-CSF.

El predictor de éxito más importante, será el rendimiento de aféresis. El número de células reinfundidas es un predictor importante del tiempo subsecuente al injerto. Por consiguiente, la proporción de pacientes con rendimientos clínicamente aceptables o altos será un determinante importante del impacto probable sobre el tiempo al injerto, y la proporción de pacientes con injerto retardado o fallido. Se espera que el compuesto mimético de TPO sea tan bueno como el G-CSF o superior al mismo para movilizar células madre, y que el compuesto mimético de TPO provea calidad mejorada de la población de células madre movilizadas. Un estudio de un solo ciego evalúa el efecto del compuesto mimético de TPO sobre la movilización de células madre CD34+ de sangre periférica cundo se añade a regímenes de movilización estándar en pacientes programados para quimioterapia mieloablativa con trasplante autólogo de células madre. Para determinar el efecto del compuesto mimético de TPO sobre la movilización de células madre antes de la aféresis, se llevará a cabo un estudio de aumento de la dosis, con una sola dosis, usando dosis que se ha demostrado movilizan células CD34+ en voluntarios normales. Cada grupo de dosis contendrá seis pacientes que reciben medicaciones activas, y dos que reciben sólo terapia de fondo con G-CSF. Cada grupo será dividido en dos grupos de tres pacientes con terapia activa y un paciente con placebo. Un grupo, serán pacientes que reciben SCT autólogas como terapia de primera línea, mientras que el otro serán pacientes pretratados intensamente que reciben SCT autólogas como terapia de salvataje. Cuando se alcanza una dosis que produce un rendimiento incrementado de células CD34+ respecto al paciente con placebo (efecto del tamaño por ser definido) y para controles históricos para el efecto del G-CSF sobre la movilización de células madre, se reclutará a otros ocho pacientes (por subgrupo) a esa dosis para solidificar la evidencia de eficacia, y para explorar otros puntos finales de pre- y posttrasplante (para incluir el número de aféresis que se requiere para dar 3 x 106 células/kg, la proporción de pacientes que logran una cosecha adecuada, y el tiempo para la recuperación de neutrófilos post-trasplante e independencia de la transfusión de plaquetas). Más incrementos de dosis continuarán como para el programa de aleatorización original. Si un subgrupo alcanza una meseta de eficacia o toxicidad limitativa de la dosis, el subgrupo restante continuará en la escala de dosis. Al momento de la aféresis, se obtendrá una muestra de células infundidas por aféresis para estudiar la capacidad multipotencial de las células cosechadas (asumiendo que el tamaño de la cosecha no es limitativo). Después de cumplir los criterios de selección y la colecta de muestras de sangre de línea de referencia, el paciente recibirá una sola dosis de la medicación de estudio administrada mediante infusión intravenosa durante un período de 60 minutos. Ocurrirán visitas consecutivas cada 48 horas, hasta que la cosecha de células madre concluya. Se considerará que la cosecha de células madre ha fallado, si 10 aféresis han fallado para dar células suficientes para injerto exitoso (2x106/kg como mínimo). El paciente continuará entonces con quimioterapia mieloablativa, reinfusión de células madre y tratamiento complementario con cuidado de soporte adecuado de acuerdo al protocolo definido para el tumor del paciente. Los datos sobre el injerto se resumirán de los documentos de origen de acuerdo a especificaciones predefinidas. Se tomarán muestras para muestreo farmacocinético en cada visita de estudio. Se medirán los niveles de compuesto usando una ELISA. Se piensa que la administración del compuesto mimético de TPO de conformidad con el método de la invención, proveerá muchas ventajas que incluyen, entre otras: - Reducción en el tiempo medio al injerto de plaquetas (definido como conteo de plaquetas >20x109/L) de 3 días cuando se añaden a la terapia estándar. La reducción es de 1 día cuando se usa en lugar de la terapia estándar. - Reducción en la proporción de pacientes con tiempo retardado al injerto de plaquetas de 40% a 10%. - Incremento en la proporción de pacientes que logran recuperación primaria de plaquetas (definida como pacientes que mantienen un conteo de plaquetas >50,000 por 7 días), de 60% a 85%. - Reducción en el número de transfusiones de plaquetas requeridas (de una media de 5 a una media de 3). - Reducción en el tiempo medio a ANC>0.5x109/L, de 1 día.

- Reducción en la proporción de pacientes que fallan en cumplir las cosechas mínimas de células madre (3 x 106/kg) para el trasplante (de 35% a 5%) cuando se usan en combinación con el G-CSF. - Aumento en el rendimiento de células CD34+ cuando se usan en combinación con el G-CSF (4 x 106/kg contra 1 x 106/kg). - Reducción en el número de cosechas requeridas para dar células suficientes para sustentar el trasplante cuando se usan en combinación con el G-CSF (de una media de 3 a una media de 1). La terapia de una sola dosis conveniente mejora la eficiencia del trasplante de células madre, permite el tratamiento más agresivo de tumores sólidos, mieloma y linfoma, y aumenta el número de candidatos para el trasplante de células madre. Aunque sólo se han descrito específicamente modalidades particulares de la invención, se apreciará que modificaciones y variaciones de la invención son posibles sin apartarse del espíritu y alcance deseado de la invención.

Claims (12)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Un método para aumentar la producción de células madre hematopoyéticas en un sujeto, que comprende un paso de administrar un compuesto mimético de TPO a dicho sujeto.

2.- Un método para proveer células madre hematopoyéticas a un sujeto, que comprende los pasos de: administrar un compuesto mimético de TPO a un sujeto para intensificar la expansión de una población de células madre dentro de la médula ósea, y/o para movilizar células madre en la circulación periférica; cosechar una o más de las células madre de la médula ósea o células madre en la circulación periférica; y trasplantar las células madre cosechadas en el sujeto.

3.- El método de conformidad con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado además porque el sujeto es un humano.

4.- El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque las una o más células madre son criopreservadas después de la cosecha.

5.- El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque las una o más células madre criopreservadas son descongeladas, y se determina que sean viables antes de trasplantarlas en el sujeto.

6. - El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque las una o más células madre se trasplantan en el sujeto cuando el sujeto está en necesidad de dicho trasplante.

7. - El método de conformidad con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado además porque el compuesto mimético de TPO tiene inmunogenicidad reducida respecto a una o más de rhTPO y rhlL-11.

8. - El método de conformidad con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado además porque el compuesto mimético de TPO tiene un perfil de PK mejorado respecto a una o más de rhTPO y rhlL-11.

9.- Un método para reducir el tiempo al injerto después de reinfusión de células madre en un sujeto, que comprende los pasos de: administrar un compuesto mimético de TPO al sujeto; intensificar la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea, y/o movilizar las células madre en la circulación periférica; y cosechar una o más de las células madre de médula ósea o una o más de las células madre en la circulación periférica; y trasplantar las una o más células madre cosechadas en el sujeto.

10.- Un método para reducir la incidencia de injerto primario retardado, que comprende los pasos de: administrar un compuesto mimético de TPO al sujeto; intensificar la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea, y/o movilizar las células madre en la circulación periférica; y cosechar una o más de las células madre de médula ósea o una o más de las células madre en la circulación periférica; y trasplantar las una o más células madre cosechadas en el sujeto.

11. - Un método para reducir la incidencia de falla secundaria de la producción de plaquetas, que comprende los pasos de: administrar un compuesto mimético de TPO al sujeto; intensificar la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea, y/o movilizar las células madre en la circulación periférica; y cosechar una o más de las células madre de médula ósea o una o más de las células madre en la circulación periférica; y trasplantar las una o más células madre cosechadas en el sujeto.

12. - Un método para reducir el tiempo de injerto de plaquetas y/o neutrófilos después de la reinfusión de células madre en un sujeto, que comprende los pasos de: administrar un compuesto mimético de TPO al sujeto; intensificar la expansión de la población de células madre dentro de la médula ósea, y/o movilizar las células madre en la circulación periférica; y cosechar una o más de las células madre de médula ósea o una o más de las células madre en la circulación periférica; y trasplantar las una o más células madre cosechadas en el sujeto.