JPH0264461A - 家禽中のマレックウイルスを表示する方法及びキット - Google Patents
家禽中のマレックウイルスを表示する方法及びキットInfo
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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- G01N33/56983—Viruses
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＢＬＩＳＡ原理による家禽中のマレックウィル
スを表示する方法及びこの方法を実施できるキットに関
するものである。
スを表示する方法及びこの方法を実施できるキットに関
するものである。
マレック病ウィルス（ＭＤＶ）に感染した家禽は、感染
の後２〜４週でウィルス分泌を始める。前記ウィルス分
泌は皮膚と羽毛小胞とを介して起こる。
の後２〜４週でウィルス分泌を始める。前記ウィルス分
泌は皮膚と羽毛小胞とを介して起こる。
無細胞ウィルスの分泌により、他の動物が感染する（水
平拡散）。
平拡散）。
現在に至るまで、ＭＤＶは寒天ゲル沈降法（八〇Ｐ）試
験（Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ、 ４ 、 （１９７
５）、 １４７〜１６２） によるか、又は酵素結合
抗体免疫吸着アッセイ （εＬＩＳＡ） （Ｊ、Ｖｉ
ｒｏｌｌＭｅｔｈ、 １４． （１９８６）２３７
〜２４１及び１３ 、 （１９８６）、 ２３１〜２
４４）によって表示されている。これら既知の試験は随
分と長時間（２４〜４８時間）かかり、特別の機器を必
要とし、かつ実験室内だけしか実施できないという不利
益を被っている。
験（Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ、 ４ 、 （１９７
５）、 １４７〜１６２） によるか、又は酵素結合
抗体免疫吸着アッセイ （εＬＩＳＡ） （Ｊ、Ｖｉ
ｒｏｌｌＭｅｔｈ、 １４． （１９８６）２３７
〜２４１及び１３ 、 （１９８６）、 ２３１〜２
４４）によって表示されている。これら既知の試験は随
分と長時間（２４〜４８時間）かかり、特別の機器を必
要とし、かつ実験室内だけしか実施できないという不利
益を被っている。
またＥＬＩＳＡ原理によるＭＤＶの測定は、供試動物の
羽毛をキャリアーとして用いることにより実施できるこ
とを見出した。
羽毛をキャリアーとして用いることにより実施できるこ
とを見出した。
従って本発明は羽毛をキャリアーとして用い、固定液で
羽毛先端に小胞残渣を固定し、ＭＤＶ自身又はＭＤＶに
より誘発される抗原に対して向けられる抗体およびこれ
に結合する酵素抗体を用いて羽毛を培養し、最後に酵素
に適した基質を用いて羽毛を培養する、ＥＬＩＳＡ原理
による家禽中のＭＤＶを表示する方法に関するものであ
る。ＭＤＶの存在は、酵素と基質の反応により生ずる羽
毛先端の肉眼で観察可能な変色で明らかとなる。
羽毛先端に小胞残渣を固定し、ＭＤＶ自身又はＭＤＶに
より誘発される抗原に対して向けられる抗体およびこれ
に結合する酵素抗体を用いて羽毛を培養し、最後に酵素
に適した基質を用いて羽毛を培養する、ＥＬＩＳＡ原理
による家禽中のＭＤＶを表示する方法に関するものであ
る。ＭＤＶの存在は、酵素と基質の反応により生ずる羽
毛先端の肉眼で観察可能な変色で明らかとなる。
好適例においては、羽毛を適当な固定液で処理した後、
ＭＤＶに対して向けられたモノクローナル抗体を用いて
最初に培養し、次いで前記抗体に対しかつ酵素が結合す
る二番目の抗体を用いて培養し、最後にこの酵素に好適
な基質を用いて培養する。前記方法の利点は、この方法
が極めて選択的なことである。
ＭＤＶに対して向けられたモノクローナル抗体を用いて
最初に培養し、次いで前記抗体に対しかつ酵素が結合す
る二番目の抗体を用いて培養し、最後にこの酵素に好適
な基質を用いて培養する。前記方法の利点は、この方法
が極めて選択的なことである。
好適な固定液は、例えば、０．３％の過酸化水素と１％
のアジ化ナトリウムとを含む７０％エタノールの溶液で
ある。
のアジ化ナトリウムとを含む７０％エタノールの溶液で
ある。
ＭＤＶに対し向けられるモノクローナル抗体（ｍｃＡｂ
） としては、例えばｍｃＡｂ ３５．１を使用でき
る。ｍｃＡｂ ３５．１はＰＢ Ｓ中（７） １０”ｘ
９ ／ −ル固定ＭＤＣＣ−ＭＳＢ、細胞（０，０１Ｍ
； ｐ８７．４ ）で腹膜内でマウスを免疫化し、３
週間後に同量の抗原で追加免疫することで得られる。２
週間後マウスを１０６ＭＤＣＣ−ＭＳＢ、細胞の静脈内
注射により追加免役し、３日後にこの追加免疫肺臓細胞
を集め、５Ｐ２１０−Ａ、１４ 骨髄細胞で、ケーラ
ー等（Ｋ５ｈｌｅｒ ｅｔａｌ ）のｒＮａｔｕｒｅ
２５６． （１９７５）、 ４９５〜４９７ ）の方
法により、Ｐ［ｉＧ ４０００を融合剤として用いて融
合した。ＭＤＶ−感染チキン胎児繊維芽細胞（ＭＤＶ−
ＣＥＦ）上の免疫蛍光性染色を、抗−ＭＤＶ活性のため
発生するクローンをスクリーニングするのに用いろる。
） としては、例えばｍｃＡｂ ３５．１を使用でき
る。ｍｃＡｂ ３５．１はＰＢ Ｓ中（７） １０”ｘ
９ ／ −ル固定ＭＤＣＣ−ＭＳＢ、細胞（０，０１Ｍ
； ｐ８７．４ ）で腹膜内でマウスを免疫化し、３
週間後に同量の抗原で追加免疫することで得られる。２
週間後マウスを１０６ＭＤＣＣ−ＭＳＢ、細胞の静脈内
注射により追加免役し、３日後にこの追加免疫肺臓細胞
を集め、５Ｐ２１０−Ａ、１４ 骨髄細胞で、ケーラ
ー等（Ｋ５ｈｌｅｒ ｅｔａｌ ）のｒＮａｔｕｒｅ
２５６． （１９７５）、 ４９５〜４９７ ）の方
法により、Ｐ［ｉＧ ４０００を融合剤として用いて融
合した。ＭＤＶ−感染チキン胎児繊維芽細胞（ＭＤＶ−
ＣＥＦ）上の免疫蛍光性染色を、抗−ＭＤＶ活性のため
発生するクローンをスクリーニングするのに用いろる。
クローン３５．１は希釈を制限することで二度サブクロ
ーニングする。
ーニングする。
ｍｃＡｂ ３５．１はＭＤＶにより誘導される非構造細
胞性タンパク質に対して向けられる。このｍｃＡｂ３５
．７は、１０％正常ヤギ血清のリン酸緩衝生理食塩水溶
液（ＰＢＳ）中のヤギ−アンチマウス−ペルオキシダー
ゼにより表示できる。ペルオキシダーゼに好適な基質と
しては、例えば、０．００６％の過酸化水素を含む０．
５ ｍｇ／ｍ Ｉ！のジアミノベンジジンのＰＢＳ溶液
を用いろる。
胞性タンパク質に対して向けられる。このｍｃＡｂ３５
．７は、１０％正常ヤギ血清のリン酸緩衝生理食塩水溶
液（ＰＢＳ）中のヤギ−アンチマウス−ペルオキシダー
ゼにより表示できる。ペルオキシダーゼに好適な基質と
しては、例えば、０．００６％の過酸化水素を含む０．
５ ｍｇ／ｍ Ｉ！のジアミノベンジジンのＰＢＳ溶液
を用いろる。
本発明はまた、本発明による方法を実施するのに好適な
キットに関するものである。
キットに関するものである。
２つの既知方法のように、本発明の方法によってＭＤＶ
の発生する３つの血清型を表示できる。
の発生する３つの血清型を表示できる。
しかし同様に水平に拡散するワクチンウィルス（［’Ｖ
Ｉ ９８８ ） は、この方法では検出されない。この
結果として、前記方法により羽毛先端の小胞残渣中のフ
ィールドウィルスを表示することが可能である。
Ｉ ９８８ ） は、この方法では検出されない。この
結果として、前記方法により羽毛先端の小胞残渣中のフ
ィールドウィルスを表示することが可能である。
本発明によるサンプルの採取、試験の実施及び解読は非
常に簡単であり、また実験室外で短い時間（約２時間）
で実施できるので、前記方法は獣医や牧畜業者が使用で
きる分野の診断キット用に好適である。
常に簡単であり、また実験室外で短い時間（約２時間）
で実施できるので、前記方法は獣医や牧畜業者が使用で
きる分野の診断キット用に好適である。
本発明を次の実施例により更に詳細に記述する。
実施例
供試動物の羽毛を、除去した直後に、０．３％の過酸化
水素と１％のアジ化ナトリウムとの７０％エタノール溶
液で３０分間処理して羽毛先端に小胞残滓を固定した。
水素と１％のアジ化ナトリウムとの７０％エタノール溶
液で３０分間処理して羽毛先端に小胞残滓を固定した。
次いでこれら羽毛を１０％正常ヤギ血清１ｍｌのＰＢＳ
で１０分間処理し、ｍｃＡｂ３５．１の上清２００μｍ
を用い３０分間培養した。培養はポリプロピレンの１ｍ
ｌチューブ中で常に室温で実施した。培養工程の間、羽
毛をＰＢＳで３回洗浄した。
で１０分間処理し、ｍｃＡｂ３５．１の上清２００μｍ
を用い３０分間培養した。培養はポリプロピレンの１ｍ
ｌチューブ中で常に室温で実施した。培養工程の間、羽
毛をＰＢＳで３回洗浄した。
羽毛を２００μβのヤギ−アンチマウス−Ｉｇ−ベルオ
キンダーゼ（ＰＢＳ中の１０％正常ヤギ血清中で１１５
０に薄めた。）中で３０分間培養して、吸着したｍｃＡ
ｂを呈示させた。ＰＢＳで洗浄した後、０．５ｍｇ／ｍ
βのジアミノベンジジンと０．００６％の過酸化水素を
用い１５分間培養した。
キンダーゼ（ＰＢＳ中の１０％正常ヤギ血清中で１１５
０に薄めた。）中で３０分間培養して、吸着したｍｃＡ
ｂを呈示させた。ＰＢＳで洗浄した後、０．５ｍｇ／ｍ
βのジアミノベンジジンと０．００６％の過酸化水素を
用い１５分間培養した。
ＭＤＶに感染した動物に由来する羽毛は、明瞭に観察可
能なかっ色の斑点を羽毛先端に示した。
能なかっ色の斑点を羽毛先端に示した。
感染していない動物の羽毛はこれらの斑点を示さなかっ
た。
た。
特許出願人 デュファル・インチルナチオナル・レセ
ールフ・ベー・ヴ工−
ールフ・ベー・ヴ工−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、供試動物の羽毛をキャリアとして用い、固定液で羽
毛先端に小胞残渣を固定し、ＭＤＶ自体又はＭＤＶによ
り誘発される抗原に対して向けられる抗体と前記羽毛と
を反応させ、結合した抗体を表示することにより測定を
実施することを特徴とする家禽中のマレックウイルスを
表示する方法。 ２、前記ＭＤＶに対し向けられる抗体およびこれに結合
する酵素を用いて前記羽毛を培養し、次いで前記酵素に
適した基質を用い前記羽毛を培養することを特徴とする
請求項１記載の方法。 ３、前記羽毛を前記ＭＤＶに対して向けられたモノクロ
ーナル抗体を用いて培養し、次いで最初の抗体に対して
向けられかつ前記酵素が結合する第２の抗体を用いて培
養し、最後に前記酵素に適した基質を用いて培養するこ
とを特徴とする請求項１記載の方法。 ４、ｍｃＡｂ３５．１上清をＭＤＶに対して向けられる
モノクローナル抗体として用いることを特徴とする請求
項３記載の方法。 ５、ヤギ−アンチ−マウス−ペルオキシダーゼを前記第
２の抗体として用いることを特徴とする請求項３記載の
方法。 ６、使用した前記基質が０．５ｍｇ／ｍｌのジアミノベ
ンジジンと０．００６％の過酸化水素とを伴うＰＢＳで
あることを特徴とする請求項３記載の方法。 ７、請求項１記載の方法を実施するのに適したキットで
あって、なかでも固定液、ブロッキングタンパク質、Ｍ
ＤＶに対して向けられかつ酵素が結合するモノクローナ
ル抗体及び前記酵素用の基質を有し、測定を実施するた
めの処方を伴なう指示書を必要に応じて有するキット。 ８、請求項７記載のキットであって、なかでも固定液、
ブロッキングタンパク質、ＭＤＶに対して向けられたモ
ノクローナル抗体、前記モノクローナル抗体に対して向
けられ酵素が結合する抗体、及び前記酵素用の基質を有
し、前記測定を実施するための指示書を必要に応じて有
するキット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8801534 | 1988-06-16 | ||
| NL8801534 | 1988-06-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0264461A true JPH0264461A (ja) | 1990-03-05 |
Family
ID=19852474
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1150651A Pending JPH0264461A (ja) | 1988-06-16 | 1989-06-15 | 家禽中のマレックウイルスを表示する方法及びキット |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPH0264461A (ja) |
| AT (1) | ATE94992T1 (ja) |
| DE (1) | DE68909317T2 (ja) |
| DK (1) | DK288389A (ja) |
| ES (1) | ES2045387T3 (ja) |
| HU (1) | HU209210B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101123023B1 (ko) | 2002-10-15 | 2012-03-15 | 와이어쓰 엘엘씨 | 조류 조직 샘플중의 바이러스 검출 분석 방법 |
| CN103235129B (zh) * | 2013-04-17 | 2015-10-28 | 河南省农业科学院 | 马立克氏病病毒和j亚群禽白血病病毒快速联检试纸条 |
| CN107632150A (zh) * | 2017-09-07 | 2018-01-26 | 武汉科前生物股份有限公司 | 一种检测鸡马立克氏病病毒抗体的试剂盒及其应用 |
-
1989
- 1989-06-13 DK DK288389A patent/DK288389A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-06-13 HU HU893073A patent/HU209210B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-06-14 ES ES89201537T patent/ES2045387T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-14 EP EP89201537A patent/EP0346998B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-14 DE DE89201537T patent/DE68909317T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-06-14 AT AT89201537T patent/ATE94992T1/de active
- 1989-06-15 JP JP1150651A patent/JPH0264461A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE94992T1 (de) | 1993-10-15 |
| EP0346998A1 (en) | 1989-12-20 |
| DE68909317D1 (de) | 1993-10-28 |
| DK288389A (da) | 1989-12-17 |
| EP0346998B1 (en) | 1993-09-22 |
| HU209210B (en) | 1994-03-28 |
| HUT50989A (en) | 1990-03-28 |
| DK288389D0 (da) | 1989-06-13 |
| ES2045387T3 (es) | 1994-01-16 |
| DE68909317T2 (de) | 1994-01-13 |
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