JPH0254834B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は式（）で示される26，26，26，27，
27，27−ヘキサフルオロ−25−ヒドロキシ−６，
19−エビジオキシビタミンD₃に関する。 式（）で示されるビタミンD₃誘導体はヒト
の骨髄性白血病細胞に対し強い分化誘導能に有し
医薬、例えば白血病等の治療薬として有用であ
る。 ビタミンD₃は生体内で最初肝臓において25位
が水酸化された25−ヒドロキシビタミンD₃とな
り次いで腎臓において1α位あるいは24位が水酸
化されて1α、25−ジヒドロキシビタミンD₃と
24R、25−ジビドロキシビタミンD₃となる。これ
らの天然の代謝産物の中で1α、25−ジヒドロキ
シビタミンD₃およびその合成アナローグである
1α−ヒドロキシビタミンD₃等が強い小腸からの
カルシウム吸収作用および骨塩動員作用を有し
種々のカルシウム代謝異常に基づく疾患の治療薬
として有用であることはよく知られている。また
最近になつてこれらのビタミンD₃誘導体、殊に
1α、25−ジヒドロキシビタミンD₃および1α−ヒ
ドロキシビタミンD₃が骨髄性白血病細胞の分化
誘導体を有し、しかもその活性が従来最も活性が
強いことが知られているデキサメタゾンの約100
倍またはそれ以上であることがSLマウスから得
られた骨髄性白血病細胞M1株を用いた実験によ
り確められ報告されている〔Proc.Matl.Acad.
Sci.USA.78、4990（1981）〕。強い分化誘導活性を
有するこれらのビタミンD₃は医薬、例えば骨髄
性白血病等の白血病の疾患の治療薬として用いる
ことができる。しかしながらこれらのビタミン
D₃類または生体内のカルシウム代に及ぼす影響
も強く投与量如何によつては高カルシウム血症を
引き起こし場合によつては大量かつ連続的な投与
が必要となる白血病等の治療薬としては難点を有
している。本発明者はこれらの事情を鑑み鋭意研
究した結果、17位に結合している順鎖の特定部位
の水素がフツ素置換しているビタミンＤ類の６，
19−エビジオキシ体、中でも本発明の式（）で
示される26，26，26，27，27，27−ヘキサフルオ
ロ−25−ヒドロキシ−６，19−エピジオキシビタ
ミンD₃が強い骨髄性白血病細胞に対する分化誘
導能を有し、しかも生体内カルシウムの代謝に及
ぼす影響が少ないことを見い出し、更に検討を加
え本発明を完成した。 本発明の式（）で示される化合物は新規化合
物であり、例えば米国特許第4248791号公報の記
載に従つて得られる26，26，26，27，27，27−ヘ
キサフルオロ−25−ヒドロキシビタミンD₃を酸
素存在下光増感酸化することによつて製造され
る。 光増感酸化は、例えばメタノール、エタノー
ル、プロパノール、ベンゼン等の不活性溶媒中、
ローズベンガル、エオシン、メチレンブル−等の
増感剤の存在下、通常は酸素気流中ハロゲンラン
プ、タングステンランプ等の可視光線を発光する
光源を用いて照射することにより行なわれる。照
射時間は光源の強さ、酸素通気速度、温度、溶媒
等により違いがあるが、好ましくは原料化合物が
消失する時点を適当な手段例えば薄層クロマトグ
ラフイーまたは高速液体クロマトグラフイーによ
り求める方法により行う。反応混合物から本発明
の化合物の単離は常法により例えば溶媒を留去し
た後、カラムクロマトグラフイー等の分離、精製
手段に付すことにより行なわれる。 このようにして得られる本発明の化合物にはそ
の６位の不斉炭素原子による２種の異性体が存在
し両者の混合物または分離された各々の異性体い
ずれの形でも本発明の目的に供し得る。 次に本発明の化合物の生物活性試験を示す。な
お実験では本発明の化合物では全て２種の異性体
を分離することなく混合物を用いた。分化誘導能
はヒト骨髄性白血病細胞の貧食能の増加とC3リ
セブターの出現を指標とした。 〔実験方法・結果〕 (1) 分化誘導能 本発明の化合物 本発明の化合物をエタノールに溶解し、培養
液中のエタノールが0.1％となるように調整し
て添加した。 細胞培養 ヒト骨髄性白血病細胞（HL−60株）は
RPMI−1640（Roscoell Park Memorial
Intitute Media）の培地に、56℃、30分間熱処
理を行なつて不活性化した牛胎児血清を10％と
なるように混合し、５％二酸化炭素／95％空気
の気相下で培養し２〜３日毎に培地交換を行つ
た。 貧食能とC3リプセターの測定 HL−60細胞の分化誘導の指標としてカンジ
ダ アルビカンス（Candida Albicans）の細
胞内への取り込み（貧食能）と補体C3リセプ
ターの細胞表面への出現度を検索した。 貧食能はHL−60細胞の培地にヒトAB血清
を10％になるように添加した溶液に、HL−60
細胞を１×10⁶cell／mlとカンジタ アルビカ
ンス４×10⁶／mlを添加し、37℃で30分間イン
キユベートした。その後、顕微鏡下でカンジダ
アルビカンスを１個以上取り込んだ細胞を数
え、全細胞数に対する割合は求めた。 C3リセプターの出現はヒツジ赤血球５×
10⁷／mlおよびその抗体と新鮮マウス血清（補
体）を含む溶液にHL−60細胞１×10⁶cell／ml
を添加し500ｇで３分間遠心後そのまま室温で
１時間インキユベートした。その後顕微鏡下で
表面に赤血球の付着した細胞を数え全細胞数に
対する割合を求めた。 結 果 HL−60細胞に本発明の化合粉を添加すると
顆粒球への分化が形態学的に観察され、それに
伴つて貧食能とC3リセプターが出現した。本
発明の化合物の分化誘導に対する作用は添加後
３日目に調べた。その結果を次表に示す。

【表】 (2) カルシウム代謝に及ぼす影響 離乳直後のスプラーク ドーレイ（Spraque
Dawley）系雄性ラツト（体重45〜50ｇ）をダ
イエツト11と脱イオン水で６週間白熱灯下飼育
した。本発明の化合物および対照として用いた
1α−ヒドロキシビタミンD₃および1α、25−ジ
ドロキシビタミンD₃はMCT（medium chain
triglyceride、日清製油社製）に溶解し、これ
を毎日１回経口的に投与した。各検体を連日投
与した動物は絶食後、断頭して採血した。また
同個体より十二指腸をとり反転腸管法にて⁴⁵Ca
の吸収を調べた〔Amer.J.Physi.、216、1351
（1969）参照〕。一方、採取した血液から血漿を
分離しこのカルシウムと無機リンをそれぞれ
OCPC法〔Am.J.Clin.Path、45290（1966）〕お
よび〔Biochem.J.、65、709（1957）〕にて測定
した。測定の結果、本発明の化合物は腸管から
のカルシウム輪送能において対照として用いた
1α−ドロキシビタミンD₃および1α、25−ジヒ
ドロキシビタミンD₃と比比較して弱く、また
血漿中のリンおよびカルシウム濃度に及ぼす影
響も少ないことが明らかとなつた。 実施例 26，26，26，27，27，27−ヘキサフルオロ−25
−ヒドロキシビタミンD₃2.0mgをベンゼン−エタ
ノール（20ml＋４ml）に溶かし、ローズベンガル
10mgを加える。激しく撹拌しながら酸素ガスを５
分間吹込んだ後氷水冷却下パイレツクスフイルタ
ーを通して200Wハロゲンランプで15分間照射す
る。次いでアルゴンガスを吹込んだベンゼン30ml
を加え、水洗３回、硫酸ナトリウムで乾燥し溶媒
を留去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフイー（シリカゲル2.5ｇ、溶媒：40％酢酸エ
チル−ヘキサン）に付し目的化合物を得る。更に
精製するため再度シリカゲルカラムクロマトグラ
フイー（シリカゲル1.5ｇ、溶媒：15％酢酸エチ
ル−ベンゼン）に付し26，26，26，27，27，27−
ヘキサフルオロ−25−ヒドロキシ−６，19−エピ
ジオキシビタミンD₃846μｇ（収率40％を得た）。 マススペクトルｍ／ｅ：540（M⁺）、522（Ｍ−18）、
508、504（Ｍ−18−18）、402（Ｍ−69−69）、
384.371、330、285 UVスペクトル（局方エタノール）：210nｍ以上
に極大吸収なし

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 で示される26，26，26，27，27，27−ヘキサフル
   オロ−25−ヒドロキシ−６，19−エビジオキシビ
   タミンD₃。