JPH02502251A - ヒトのモノクローン性抗ｈｉｖ‐１‐抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ２７、細胞毒素の細胞毒性部分がリシンのＡ鎖である、請求項２６記載の免疫毒 素。

２８、細胞毒素の細胞毒性部分がアブリンのＡ鎖である、請求項２６記載の免疫 毒素。

２９、細胞毒素の細胞毒性部分がジフテリア毒素のＡ鎖である、請求項２６記載 の免疫毒素。

３０、細胞毒素において、請求項８に記載の抗体および細胞毒性部分の接合体で あることを特徴とする、細胞毒素。

３１、　ｇｔ求積項２７よび２８に記載の免疫毒素からなることを特徴とする、 細胞毒性カクテル。

３２、請求項２記載のヒトモノクローン性抗体の予防量を投与することによるヒ トホスト中の細胞のＨＩＶ−１感染を阻止する方法。

３３、請求項２または４に記載の少なくとも２つの異なるヒト抗体のカクテルを 投与することによるヒトホスト中の細胞のＨＩ　Ｖ−１感染を阻止する方法。

３４、ＨＩＶ感染しＩ；細胞を治療する方法において、請求項２記載の抗体の治 療量をヒ）ＨＩＶ感染した細胞ホストに投与することを特徴とする、ＨＩＶ感染 した細胞を治療する方法 ３５、　ＨＩ　Ｖ感染した細胞を治療する方法において、請求ｑ４２７．２８． ２９および３０に記載の免疫毒素の治療量をヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投 与することを特徴とする、ＨｒＶ感染した細胞を治療する方法 ３６、　ＨＩ　Ｖ感染した細胞を治療する方法において、請求項３１に記載の細 胞電性カクテルの治療量をヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投与することを特徴 とする、ＨＩＶ感染しＩ；細胞を治療する方法３７、ヒトＨＩ　Ｖ−１感染し！ ；細胞を治療する方法において、ホスト体重１キログラムあたり請求項２７．２ ８．２９および３０に記載の細胞毒集約０．Ｏ１〜２０ミリグラムをヒトＨＩＶ 感染した細胞ホストに投与することを特徴とする、ヒトＨＩＶ−１感染した細胞 を治療する方法。

３８、請求項３１記載の細胞毒素をＨＩＶ−１感染した細胞ホストに投与するこ とによるヒトＨＩＶ−１感染した細胞を治療する方法において、全部の免疫毒素 の全用量がホスト体重１キログラムあたり約０゜０１〜約２０ミリグラムの範囲 内にあることを特徴とする、ヒトＨＩ　Ｖ−１感染しｔ；細胞を治療する方法。

３９、請求項１記載の抗体の少なくとも１つを有するヒト血液または組織培養液 体中のＨｒＶ−１感染した細胞を特異的に検出する方法。

４０、　ｆｆ請求項２記載抗体の少なくとも１つを有するヒト血液または組織培 養液体中のＨＩＶ−１感染しｔ；細胞を特異的に検出する方法。

明　　　　　細　　　　　書 ヒトのモノクローン性抗ＨＩＶ−１−抗体本発明は、免疫学的に特殊なエイズ治 療の分野およびＨＩＶ−感染した細胞の生体内での画像の分野に関する。より詳 細には、本発明は、ヒトのモノクローン性抗ＨＩ　Ｖ−１−抗体および該抗体か ら得られた免疫学的化学薬品、ならびに該免疫学的化学薬品を使用する治療法に 関する。ヒトのモノクローン性抗体（ｈ　ｕｍＡｂｓ）の生産は、感染および他 の疾病の免疫学゛的治療に使用することができる抗体の新しい源を表わすことが できる。マウス起源の代わりにヒト起源のｍＡｂを使用することは、ヒトにおけ る抗体応答の誘導を阻止する。マウス抗体のＦｃ部分は、異種の投与された蛋白 質に対して抗体応答を最小にするためにヒトへの注入よりも先に除去しなければ ならない。しかし、ヒトのモノクローン性抗体は、ヒト個体の相同蛋白質の一部 を表わす、ヒト免疫不全ビールス（ＨＩ　Ｖ）に感染したヒトの血清の場合には 、抗ビールス抗体は、感染後の一定期間に亘って後天性免疫不全症候群（ＡＩＤ Ｓ）の如何なる臨床学的発現もなしに検出することができた。活性免疫応答の前 記状態で高い数の抗原−特異的Ｂ細胞は、循環していることが予想された。この 日細胞は、ヒトモノクローン性抗ＨＩＶ抗体を発生させるための融合成分として 使用された。本明細書中では、つぎのことが記載されるニ ーＨＩＶ抗厚に対するヒトｍＡｂの発生、−ＨＩＶ感染した細胞の成長の実質的 な阻害、一記載したヒト抗Ｈ夏Ｖ−１−ｍＡｂおよびＡ鎖毒素と接合した免疫毒 素の調製、 一免疫毒素を用いてのＨＩＶ−１感染した細胞の選択的殺害、 一抗体依存性細胞毒性によるＨＩＶ−１感染した細胞の選択的殺害、 −ヒトモノクローン性抗ＨＩＶ−１抗体を用いての細胞感染の選択的阻害、 一ヒト血清中のＨＩＶ−１抗原の選択的測定。

発明の詳細な説明 物質および方法 ヒト抗ＨＩＶモノクローン性抗体（）（ｕ抗ＨＩＶ−１−ｍＡｂ） 本発明の好ましい実施態様によれば、使用したｈｕ抗ＨＩＶ−１−ｍＡｂは、ケ ンネット（Ｋｅｎｎｅｔ）等著、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅ ｓ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅｓ；ｐｒｏｇｒｅｓｓ 　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃｔｉｏｎｓ”、ＰＩｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ　Ｙ ｏｒｋ）、１９８４に記載された公知のハイブリッド形成方法により得られたＩ ｇＧ１サブクラスを有する。ハイブリドーマ３Ｄ６の試料は、Ｅ　ＣＡ　ＣＣ％ Ｐｏｒｔｏｎ　Ｄｏｖｎ、　５ａｌｉｓｂｕｒｙ　Ｓ　Ｐ　４　０　Ｊ　Ｇ、英 国に寄託した。３Ｄ６は、ＨＩＶエンベロープ蛋白質を認める抗体を生じる６種 類のハイブリドーマの中のただ１つ寄託したものであった。寄託しｔ：ハイブリ ドーマのＥＣＡＡＣＣ寄託番号および寄託データは次の通りであった：８７１１ ０３０１　；　１９８７年１１月３日。

融　　合 記載した方法で実施した融合（Ｋ６ｈｌｅｒ等、Ｅｕｒｏｐ、　Ｊｏｕｒｎａｌ 　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｓ　６　（１９７６）　＝　２９２　）。

ＰＥＧ１５００との細胞融合よりも先に、ＨＩＶ　　Ｔ血清の正の供与体からの 抹消血液リンパ系細胞は、３回血清遊離細胞培養液で洗浄された。細胞は、融合 よりも３日前にアメリカヤマゴボウの根茎（ＰＷＭ）５ｎ９と直ちに融合された か、または該根茎で刺激された。細胞は、ＨＡＴ感受性融合細胞と５：１の比で 混合された。細胞は、ＤＭＳＯ７，５％（Ｓｅｒｖａ、　Ｆ　ＲＧ）の存在下に ＰＥＧ　　１５００　４２％（Ｆｅｒａｋ、Ｆ　ＲＧ）と融合された。細胞は、 希釈を制限することによってクローン化されかつサブクローン化された。

ハイブリドーマのスクリーニング １９Ｇおよび１９Ｍイソタイプは、公知方法でペルオキシダーゼ接合した抗ヒト １ｇＧ、１９Ｍ（重鎮特異的）抗体を用いてサンドイッチェンザイムリンクトイ ムノソルパントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって培養上澄み液から分析した。特 異的抗体のスクリーニングは、１０μｇ／ｍ（ｌの濃度でＨＩＶを使用すること によリサンドイッチＥＬＩＳＡによって実施された。細胞培養から単離されｌ； ビールスは、平らな底面のマイクロ滴定板中に塗布され、未結合の物質は洗浄除 去される。培養上澄み液は、４℃で一晩中インキユベートされた。未結合の物質 を洗浄除去しｔ；後、特異的抗体は、ペルオキシダーゼで標識化された抗ヒト− ！９−重鎖特異的抗体によって検出された。

イムノプロッティング 自然のバイロンから得られたＨＩＶエンベローフ蛋白質を使用することによるイ ムノプロット：精製されたウィルスは、変質され、５ＤＳ２．５％および２−メ ルカプトエタノール５．０％で９０℃で５分間還元され、かつ１０％のポリアク リルアミドスラブゲルに使用された６分離後、蛋白質バンドは、ニトロセルロー スシート（Ｓｃｈｌｅｉｃｂｅｒ　＆　５ｃｈＱｌ１％Ｆ　ＲＧ　）に電子伝達 されｔ；。このシートをドライミルク５％で遮断した後、ストリップが切断され 、かつｌ：２の希釈した培養上澄み液ＳｍＱ中に浸漬された。結合した抗体は、 ）（ＲＰで標識されＩ；抗ヒトＩｇＧ抗体と反応されかつＮｉＣｌ２０．１％を 含有するジアミノベンジジンで染色することによって検出されｔ：。

クローン化された物質から得られたＨＩＶエンベロープ蛋白質を使用することに よるイムノプロット：５ＤＳ−ゲル電子泳動法は、レンムリ　（Ｌａｅｍｍｌｉ ）　（Ｎａｔｕｒｅ２２７、ｌ　９７０　；　６８０−５８５）の方法に従って 実施された。それぞれ遺伝的に設計されたエシェリキア　コリ　Ｅ　、ＣＯｌ　 　ｉ　　（Ｌ、Ｈ，Ｃ＋ｏｓｔｉｎｇ等、Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａ ｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　５２　１９８７　（８４５〜８，１１８））か ら誘導された、電気泳動的に分離されたエンベロープまたはコア蛋白質は、ニト ロセルロースにエレクトロプロットされた。牛血清アルブミン３％（ＰＢＳに溶 解したＢＳＡ）で遮断した後に、ストリップはＰＢＳ緩衝液中で希釈された試料 （トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）　Ｘ　−１０００，１％、ＢＳＡ　　１％、ゼラチ ン　０．５％）中に一晩中浸漬され、３回洗浄され、かつペルオキシダーゼで標 識化されたヤギ抗ヒトγ−鎖と一緒にインキュベートされた。

商業的に入手可能なプロットストリップを使用することによるイムノプロット： デュポン社Ｄｕ　Ｐａｎｔのロフト番号７０４４１２８からのプロットストリッ プは、当社の推薦により使用されＩこ。

商業的に入手可能なＥＩＡ 商業的に入手可能なＥＩＡは、モノクローン性抗体の特異性を検査するために使 用された。キャッチーエリサ（ｃａｔｃｈ　−ｅｌｉｓａ）および競合的ＥＩＡ の双方とも使用されに、ラブシステムズ（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ；（Ｆｉｎｌａ ｎｄ））、オルガノン（Ｏｒｇａｎｏｎ；（Ｂｅｌｇｉｕｍ））、パスツール（ Ｐａｓｔｅｕｒ；（Ｆｒ、ａｎｃｅ））、バイオクロム（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；（ ＦＲＧ））、アボット（Ａｂｏｔｔ；（ＵＳＡ））からの検定法およびオルガノ ン（Ｏｒｇａｎｏｎ；（Ｄｅｌｇｉｕｍ））からの競合的ＥＩＡが使用された。

ペプチドのマツピング 異なるペプチドは、抗原結合部位の評価のために評価された。ペプチドＡおよび Ｂは、刊行物の記載により合成された。ＣおよびＤは、バイオクロム（ｌｌｌｉ □ｃｈｒ。

ａ：（ＦＲＧ乃からの贈呈品である。４種類の異なるペプチドが試験された。

ペプチドＡ：ワン（Ｗａｎｇ）他、ＰＮＡＳ　　８３，６１５９〜６１６３　（ １９８６）。

ＲＩ　ＬＡＶＥＲＹＬＫＤＱＬＬＧ　ＩＷＧＣＳペプチドＢ：ナン（Ｇｎａｎｎ ）他、Ｊ、　　Ｖｉｒｏｌ、６ユ、２６３９〜２６４１　（１９８７）。

ＬＧ　ＩＷＧＣ５ＧＫＬ　ＩＣ ペプチドＣ：本発明による結果 ＫＤＱＱＬＬＧ　ＩＷＧＣ３ＧＫＬ　Ｉ　ＣペプチドＤ＝バイオクロム（Ｂｉｏ ｃｈｒｏｍ；（ＦＲＧ））から得られｔ二 ＫＤＱＱＬＬＧＩＷＧＣ５ＧＫＬＩＣＶＰＷＮＡＳペプチドＣおよびＤは、ハイ ブリドーマＮ　ｏ　、３　Ｄ６によって得られｔ；モノクローン性抗体と反応さ れたヒトＤＮＡのハイブリッド形成の検出 多細胞系列の１０８個の細胞は、ニトロセルロース膜上にスポットされた。ハイ ブリッド形成試料は、ヒトＤＮＡに対して特異的でありかつゲノム中で約３００ ０００回繰り返されているクローン化されｔ：Ａ］ｕ配列を含有する３２ｐ−標 識化されたプラスミド　ブルール（Ｂｌｕｒ）　８であッｆ二（Ｓｃｈ＋ｅｉｄ 他、５ｃｉｅｎｃｅ２１６．１９８２　；　１０６５）。−晩に亘る予備ハイブ リッド形成およびハイブリッド形成の後、膜は３回１００ｍＱのＳＳＣ中で２回 、０．１％のＳＤＳ中で１回室温で５分間洗浄され、かつ２回２００ｍ１２のＳ ＳＣ中で１回、０．１％のＳＤＳ中で１回６０℃で３０分間洗浄されＩこ。

免疫蛍光法 固定）（ＩＶ−１感染した細胞（Ｈ９細胞）は、ｈｕ抗ＨＩＶ−ｍＡｂと一緒に 高温保持された。ｍＡｂの結合は、ＦＩＦＴ標識された抗ヒト！ｇＧで未結合の ｍＡｂを洗浄除去した後に１秒間のインキュベーションによって証明された。

３Ｂ６抗体および３Ａ６抗体の精製 精製は、公知方法で実施されｔ；。澄明にされＩ；培養上澄み液は、セファデッ クス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ　−２５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上でのゲル 濾過を使用することにより脱塩され、かつさらにＣＭ−セファロースファストフ ローカラム（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ｆａｓｔ　ｆｌｏｗ　ｃｏｌｕｍｎ）（Ｐｈ ａｒｍａｃｉａ）上でクロマトグラフィー処理された。ＣＭ−セファロースファ スト７０−カラム（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ｆａｓｔ　ｆｌｏｗｃｏｌｕｍｎ）の 溶出液は、限外濾過によって濃縮され、かつフェニル−スーパーロース（Ｐｈｅ ｎｙｌ　−Ｓｕｐｅｒｏｓｅ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用することにより再 クロマトグラフィー処理された。クロマトグラフィ一工程は、ファーマシア社　 Ｐｈａｒ＋ｍａｃｉａ　　ｃｏｍｐａｎｙの推菖により実施された。

フェニル−スーパーロース（Ｐｈｅｎｙｌ　−５ｕｐｅｒｏｓｅ）カラムに溶液 を負荷する前に粗製ｍＡｂ溶液は、２モルの硫酸アンモニウム溶液によって希釈 された。

３Ａ６ｔｌｌは、ＣＭ−セファロース７アスト７０−（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ｆ ａｓｔ　ｆｌｏｗ　）および蛋白質−Ａスーパーロース（５ｕｐｅｒｏｓｅ）を 使用することにより陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製された。

リシン−Ａ鎖毒素の製造 リシンは、ヒマ（Ｒｉｃｉｎｕｓ　Ｃｏ＋ｅ＋ｅｕｎｉｓ）から公知方法によっ て抽出される。リシンは、粉砕された全体のヒマ（Ｒｉｃｉｎｕｓ　Ｃｏｍｍｕ ｎｉｓ）から抽出されるか、或イハｌ：　−Ｆ　加工の副生成物であるヒマのケ ーキから抽出される。ヒマのケーキは、３回４０　（ｖ／ｖ）％−６０（ｖ／ｖ ）％の石油エーテル５容量で抽出することによって脱脂される。

次に、空気乾燥された物質は、燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ；ＮａＣ（１０，１５ モル、燐酸塩　０．０１モル、ｐＨ７，２）中で一晩中抽出される。抽出液は、 ナイロンガーゼを通して濾過することによって澄明にされ、引続き１５００ｇで １時間遠心分離される。澄明な上澄み液は、４℃で飽和硫酸アンモニウムで沈澱 される。硫酸アンモニウム６０％の最終的な濃度で、沈澱物は捕集され、かつ遠 心分離によって収集され（１５００ｇ、１時間）、ＰＢＳの最小量中に再溶解さ れ、かつ抽出液が硫酸アンモニウムを含有しなくなるまでＰＢＳに対して透析さ れる。

アフィニティークロマトグラフィー 澄明にされかつ透析された毒素抽出液は、レクチンアフィニティークロマトグラ フィーによって後精製される。ゲル（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　４　Ｂ　ｓ　Ｐｈａ ｒｍａｃｉａ社）は、１モルのプロピオン酸で少なくとも４週間室温で前処理さ れ、レクチンの結合能は増大される。

カラムクロマトグラフィーは、１０未満の温度で処理され、レクチン結合を最適 化する。

澄明にされかつ透析された抽出液は、ＰＢＳ平衡にされｔ；酸で前処理されたセ ファロース（５ｅｐｈａｒｏｓｅ）４Ｂ−カラムに使用される。試料の使用後、 カラムはＵＶ吸収が基本線に戻るまでＰＢＳで洗浄される。毒素は、他のレクチ ンと一緒にＰＢＳ中の１００ミリモルのガラクトースで溶離される。更に、この 混合物は、セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ　２００　　ＨＲでゲルクロ マトグラフィーによって分離される。試料の容量は、全床量の３〜４％を越えて はならない。毒素は、他のレクチンから前記条件下で完全に分解される。アフィ ニティーカラムから回収された毒素は、セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ 　２０　ＯＨＲカラムでの使用前に限外濾過（ミリ孔ＰＴＧＣ膜）によってｌｏ ｍｇ／ｍ４に濃縮される。毒素ピークは捕集され、かつフィルター滅菌された。

滅菌毒素溶液は、Ａ鎖とＢ鎖とに切断される前に一３０℃で凍結されて貯蔵され た。

Ａ鎖およびＢ鎖へのりシンの切断 アフィニティー精製されかつ濃縮された毒素は、５％のメルカプトエタノール溶 液によってＡ鎖とＢｌとに切断される。この毒素は、β−メルカプトエタノール （最終的濃度５％）およびガラクトース（最終的濃度０．５モル）で完成された ０、１モルのトリス（Ｔｒ　１ｓ）−ＨＣＱのｐ　Ｈ８，５の緩衝液中５ｍｇ／ ｍＱの濃度で室温で一晩中インキユベートされ、引続き３７℃で２〜３時間イン キュベートされる。この毒素は、インキュページ夏ン緩衝液で平衡にされたセフ ァデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　Ｇ　２５カラムでのゲルクロマトグラフィー によって出発緩衝液（ＰＢＳ）からインキュベーション緩衝液（Ｔｒｉｓ緩衝液 ）に移される。

インキュベージ３ン後、試料は、０．１モルのトリス（Ｔｒｉｓ）／ＨＣＱ緩衝 液、ｐ　Ｈ８，５で平衡にされたＤＥＡＥ−セフ　７０−スフテスト７０−（５ ｅｐｈａｒｏｓｅ　ｆａｓｔｆｌｏｗ）に使用された。このカラムは、全ての未 結合物質が溶出されるまで０．１モルのトリス（Ｔｒｉｓ）／ＨＣＱ緩衝液、ｐ 　Ｈ８，５で洗浄される。未結合の物質、本質的には純粋なＡ鎖、は、捕集され 、かつアシアロ−７エツインーセフアロース（ａｓｉａ’１ｏ−ｆｅＬｕｉｎ− Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）４Ｂ　カラムを通過し、汚染毒素は除去される。アジアＯ −７ｘ　フィン−セファロース（ａｓｉａｌｏ−ｆｅｔｕｉｎ−５ｅｐｈａｒｏ ｓｅ）　４　Ｂは、ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の推奨によって製造 された。未結合の物質は、捕集され、フィルター滅菌され、かつ４℃で貯蔵され る。

ＤＥＡＥ−セファロース７アストフロ（５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ｆａｓｔ　ｆｌｏ ｗ）は、ガラクトース０．１モルおよびＮａＣθ１モルを含有量る０、１モルの トリス（Ｔｒｉｓ）　−ＨＣρ緩衝液、ｐＨ８，５で再生される。

停電点の測定 ｈｕ　　抗ＨＩＶ−１−ｍＡｂの等電点は、記載した方法によって測定された。

ファルマライト（Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ）はキャリヤー両性電解質として使用さ れた。全体の方法は、ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の推奨によって実 施された（小冊子：　ｌ５ｏｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｆｏｃｕｓｉＢ、Ｐｈａｒｍａ ｃｉａ　ｆｉｎｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）。

二次的種類および軽鎖の測定 軽鎖およびサブクラスは、ＥＬＩＳＡによって測定されｔ；。アルカリ金属ホス ファターゼで標識化された特異的な抗ヒトに鎖抗体またはペルオキシダーゼによ って標識化された特異的な抗ヒトＧｌ、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４抗体が使用されＩ ；。

リシンＡ１１１［の品質制御 品質制御試験は、精製リシン−Ａｉｌｌ上で実施される。還元条件下での勾配５ ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により、如何なる汚染物質も存在して いないことが判明する。それぞれ３３キロダルトンで１つのみのバンドおよび３ ０キロダルトンで１つのみのバンドを検出することができる。

Ａ鎖毒素とモノクローン性抗体との接合精製されＩ；モノクローン性抗体５ｍｇ 　（ＰＢＳ中１〜２ｍ＋？／ｍｆｆ）は、ジメチルホルムアミド中１ｍｇ／ｍＱ で溶解されたＳ　Ｐ　Ｄ　Ｐ　（Ｐｈａｒ＋ｏａｃｉａ）の１０倍のモル過剰量 と、室温で３０分間反応された。ＦＤＰ置換された抗体は、セファデックス（Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ）　Ｇ　−２５を使用することによりゲル濾過によって脱塩され た。

２８０ｎｍで連続的に測定された蛋白質ピークは、捕集され、かつ氷上に置かれ Ｉ；。リシンＡ鎖５ｍｇは、ＤＴＴ５ミリモルを用いて室温で１時間還元され、 かつセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　Ｇ　−２５のカラム上で脱塩された 。カラムはＰＢＳで平衡にされた。蛋白質ピークは、捕集され、かつ冷たいＦＤ Ｐ置換された抗体と直ちに混合された。この混合物は、４℃で１時間振盪され、 次いで塩化ナトリウム２モルを含有する０、０１モルの燐、酸ナトリウム緩衝液 に対して４℃で透析濾過された。未接合のＡ鎖のバルクは、セファクリル（Ｓｅ ｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ　２００　　ＨＲでゲルクロマトグラフィー処理することに よって免疫毒素から分離された。

カラムは、塩化ナトリウム３モルを含有する０、０２モルの燐酸ナトリウム中で 平衡にされた。

免疫毒素を含有した第１のピークは、プールされ、かつ抗ヒトＩｙＧ−セファロ ース（５ｅｐｈａｒｏｓｅ）　４　Ｂ上でアフィニティ精製された。免疫毒素は 、３．５モルの塩化マグネシウムを用いてアフィニティ力ラムから溶出され、か つ専ら塩化ナトリウムに対して透析され、次いでＰＢＳに対して透析された。

免疫毒素（０，２−２ｍｅ／　ｍＱ）は、ＰＴＧＣ膜を使用して限外濾過するこ とによって試験に必要とされる最終的濃度に濃縮された。最終的な調製物は、滅 菌濾過され、かつ−２０℃でアリコート中に貯蔵された。免疫毒素は、還元条件 および非還元条件の双方の下で５ＤＳ−ＰＡＧＥによって分析された。免疫毒素 の置換は、ラジオイムノアッセイによって測定された。

抗体１モルあたりＡ鎖ｌ〜２モルの平均的置換が観察されｔ；。

競合的ＥＴＡ 精製ｈｕｔ＊）（ＩＶ−ｍＡｂは、ウィルソン（Ｍ、　Ｂ。

Ｗｉｌｓｏｎ）およびナカ不ＣＰ、　Ｋ、　ＮａｋａｎａＸｌ　９７８　）　　 Ｉ＋ａｍｕｎｏｆｌｏｕｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｅｃｈ ｎｉｑｕｅｓ）　”　、　Ｗ。

Ｋｎａｐｐ他編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　ＮｅＬｈｅｒｌａｎｄｓに記載された公知 方法によってペルオキシダーゼと接合された。

ｈｕ抗ＨＩ　Ｖ　−ｍ　Ａ　ｂの一連の希釈液（ＰＢＳ中でＢ５Ａｌ％およびＴ ｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１００）は、４℃で一晩中インキユベートされた精製ＨＩＶ エンベロープ蛋白質で被覆された平らな底面を有するマイクロ滴定容器（＋ｍ１ ｃｒｏｔｉｔｅｒ　ｖｅｉｌｓ）中で分散させた。未結合の物質を洗浄除去した 後、結合した接合体は、１．４−７エニレンジアミンとの反応によって測定され た。展開された色は、４９２ｎｍで測定された。較正曲線は、光学密度対希釈度 をプロットしたものであった。半飽和の希釈は、この較正曲線から計算された。

半量大飽和に相当する希釈液でのＨｕ抗ＨＩＶ−ｍＡｂは、ＡＩＤＳを患ってい る患者からの血清と混合されたか、または常法のスクリーニング法（ＥＬＩＳＡ ）および確認試験（ウェスタンプロット）によって血清陽性であることが測定さ れた発端者からの血清と混合された。接合体（半最大希釈）と、発端者からの血 清との混合物は、ＨＩＶエンベロープ蛋白質で被覆されたマイクロ滴定容器中で インキュベートされ、洗浄され、かつ染色されｊ；。

前記試料の光学密度は、半量大飽和時に抗ＨＩＶ−ｍＡｂと比較される。半量大 飽和よりも低い値は、ヒト血清と、ヒトモノクローン性抗−ＨＩＶ抗体との間の 競合を示す。

ＨＩＶ−１ピリオンの感染性に対する中和活性ｈｕ抗ＨＩＶ−１−ｍＡｂの中和 活性のための検定法は、公知方法により実施された（Ｊ、　ＶｉｒｏｌＯｇｙ、 　６１．２０２４−２０２８、（１９８７）　；Ｎａｔｕｒｅ　３１６．７２− ７４．１９８５　；　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　５　９４０〜９４６．１９ ８７）。１２日百計５０％の接種された培養基中で感染を惹起させるための量の ２０倍に等しいＨＩ　Ｖ−１用量（２０ｘＴ　Ｉ　ＣＤ　　２０）は、Ｈ９ＦＩ Ｉ胞系統を感染させるｔ；めに使用された。細胞は、ビールスの接種後３日目、 ６日目、９日目および１２日後に捕集され、かつ感染の百分率は、免疫蛍光法に よって測定されＩ；。１００％の感染は、６日目ないし９日目の間に観察された 。また、中和効果は、モノクーロン性抗体の存在下に種々の希釈率で試験された 。

３Ｄ６抗体の中和活性は、ビールスの接種直後に抗体の１回量の添加（最終的濃 度ＩＰｇ／ｍ（＋）によって評価された。感染速度は、感染された細胞の百分率 として表わされｊ二。

細胞毒性試験 細胞毒性試験に使用した試験細胞系統は、ＨＩＶ−１感染したＨ９細胞であった 。ＨＩ　Ｖ−１感染したＨ９細胞は、ＨＩＶ−１ビールスの感染性に対する中和 活性下で記載しｔ；ように得られｔ；。感染されていないＨ９細胞は、陰性の対 照として使用された。ビールスの接種後６〜９日後に収集されＩ；細胞は、媒体 １ｍＱ中に懸濁された。ｈｕ　　ｍＡｂ毒素接合体の種々の希釈液は、感染され Ｉ；細胞および陰性の対照に添加された。３７℃で２４時間のインキュベージ１ ン後に、細胞はＰＢＳで洗浄され、３５Ｓ−メチオニンで補われｔ；メチオニン 遊離媒体が添加された。細胞は３７℃で２時間インキュベートされ、次に媒体は 遠心分離によって除去され、細胞は、ガラス繊維フィルターに移され、かつメチ オノン１ｍｇ／ｍｆｆを含有するトリクロル酢ｉ！１０％で３回洗浄された。こ の細胞は、フィルター上で空気乾燥され、次いでシンンチレーシ２ン液体中に移 される。放射能は、シンチレーションカウンター中で計数された。細胞毒性は、 対照未処理蛋白質合成の５０％（ＴＣＩＤｓｏ）を生じた接合体の組織培養抑制 量と、して表わされた。

実験結果 種々の実験には、本発明を詳説しかつ次の実施態様に利用するための実施例とし て役立つことが示されている。

ヒトの起源、生化学的性質、免疫化学的特性、試験管内および生体内での挙動は 、代表的な結果によって証明されている。

図面には、次のことが示されている： 第１ｄ図：ハイブリドーマＮ　ｏ　、３　Ｄ　６によって産生されｔ；ヒトｍＡ ｂのイムノプロット。ＨＩＶエンベロープ蛋白質は、天然のバイロンからＳＤＳ および２−メルカゾトエタノール処理によって得られｔ；。

茅ｌｂ図：ハイブリドーマ３Ｄ６によって産生されたヒト抗ＨＩＶ−ｍＡｂのイ ムノプロット、ＨＩＶエンベロープ蛋白質は、遺伝的に設計されたエシェリキア コリ　Ｅ　、　　ｃ　ｏ　ｌ　ｉ　　（Ｌ、）１．Ｇｏｓｔｉｎｇ他：　Ｊｏｕ ｒｎａｌ　ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ）’　２５．１９８ ７　（８４５−８４８）の公知方法による）から得られた。

第１ｃ図：ハイブリドーマ３Ｄ６によって産生されたｔ：　）抗ＨＩ　Ｖ−ｍＡ 　ｂのイムノプロット。商業的に入手し得るプロットストリップ（デュポン社Ｄ ｕ　Ｐｏｎ１のロット番号ニア０４４１２８）が使用された。

第１ｄ図：ハイブリドーマ３Ａ６　（１）、１９Ｈ２（２）、２３Ｈ７（３）、 ３７Ｇ　（１２）および４２Ｂ９（４）によって産生された抗ＨＩＶ　ｍａｂの イムノプロット。精製されたビールスは、電気泳動的に分離され、かつプロット された。

第２図：ハイブリッド形成によるヒトＤＮＡの検出。

ａ）３Ｄ５；ｂ）３Ｄ９；ｃ）２４Ｇ３；ｄ）ＢＪＡ−Ｂ（ヒトリンパ系細胞系 統の正の制御）：ｅ）Ｐ３Ｘ６３Ａ９／６５３　（マウス骨髄腫の負の制御）； ｆ）ＢＵＢＴＵ　（ヒト膀胱癌腫の正の制御）。

第３図：３Ｄ６−抗体およびＦＩＴＣと接合された抗ヒトＩｇＧのサンドイッチ を用いて画像診断される固定ＨＩＶ−１で感染されたＨ９細胞の免疫蛍光法。ク ローン３Ｄ６および３Ｄ５が示されている。

第４図：感染された細胞の百分率として表わされた３Ｄ６抗体の中和活性。感染 されｌ；細胞は、３Ｄ６抗体を使用することにより免疫蛍光法によって示されＩ ；。

第５図：感染された細胞の百分率として表わされた３へ〇抗体の中和活性。

第６図：３５５−メチオニン配合によって測定された蛋白質合成の抑制率は、細 胞毒性に対する測定値と見なされる。分子量を１８００００ダルトンと仮定する ことに基づいて、免疫毒素のモル濃度は計算された。免疫毒素（３Ｄ６）−リシ ン−Ａ鎖のＴＣＩＤｓｏはｌＯｎｍ未満である。

第７図：エイズまたはプレエイズを患っている血清陽性の患者からの３Ｄ６杭体 と血清との間の比較。第■表による結果は、この図面に示されている。

第８図：商業的に入手可能なＥＩＡ。

モノクローン性抗体のクローンおよびヒト起源の発生種々のクローンは、抹消血 液リンパ系細胞および融合細胞系統の融合によって得られた。１１種類の１１イ ブリドーマの特異性は、第１表に示されている。

第■表＝１１種類のハイブリドーマの特性ハイブリドーマ　イムノブロッティン グによる試験および二次的種類　軽鎖Ｎｏ、　　　　　　　ｍＡｂの特異性　　 　　　　　　　　　イソタイプ３Ｄ６　　　　　　ｙｐ４１、ｇｐ１２０　　　 　　　　　　　Ｇ１３Ｄ９　　　　　９＋）４１　　　　　　　　　　　　　　 　　Ｇ　　　　　　ｎ、ｄ。

２４Ｇ３　　　　９Ｐ１６０　　　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　ｎ、 ｄ。

２５Ｃ２１ｉｐ１２０　　　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　ｎ、ｄ。

５４Ｅ３　　　　９ｐ４１．ｇ＄）１６０　　　　　　　　　　Ｍ　　　　　　 ｎ、ｄ。

８１Ｃ７ｇ＋）１６０　　　　　　　　　　　　　　Ｍ　　　　　　ｎ、ｄ。

３Ａ６　　　　　　　ｐ２４　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　 ｎ、ｄ。

１９Ｈ２ｐ２４　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　ｎ、ｄ。

２３Ｈ７ｐ２４　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　ｎ、ｄ。

３７Ｇ１２　　　　　ｐ５５　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　 ｎ、ｄ。

４２Ｂ９　　　　　　ｐ５５、ｐ６５　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　 ｎ、ｄ。

ｎ、ｄ、−測定せず ハイブリドーマＮ　ｏ　、３　Ｄ　６は、Ｅ　ＣＡ　ＣＣ，Ｐｏｒｔ。

ｎ　Ｄｏｗｎ、　５ａ１ｉｓｂｕｒｙ、英国に寄託番号Ｎｏ、８７１１０３０１ 　（１９８７年１１月３日）で寄託されている。

このハイブリドーマ系統（３Ｄ６）によって産生されｆ：ｈ　ｕ　　ｍＡ　ｂｖ ｃＨＩ　Ｖ　−１は、本発明を説明するための例として使用されている。３Ｄ６ 抗体のイムノプロットは、第１ａ図、第１ｂ図および第Ｃ図に示されている。

３Ａ６、ｌ　９Ｈ２，２３Ｈ７，３７Ｇ１２および４２Ｂ９抗体のイムノプロッ トは、第１ｄ図に示されている。

モノクローン性抗体のヒト起源は、３２Ｐ−標識化プラスミドロブルール（Ｂｌ ｕｒ）　８のハイブリッド形成によって示されている。ハイブリドーマ細胞のＤ ＮＡを用いた場合のオートラジオグラフは、第２図に示されている。また、抗ヒ ト１９Ｇおよびヒト１４１Ｍ抗血清との反応および二次的種類を測定するための より特異的な血清は、モノクローン性抗体がヒト起源であることを検定する。

抗体の生化学的性質および免疫化学的特性ハイブリドーマＮ　ｏ　、３　Ｄ　６ によって産生されたモノクローン性抗体のイソタイプは、Ｇである。ＥＬＩＳＡ によって測定されたサブクラスはＧｌである。ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃ　 ｉａ）固定系統システムを使用しての等電焦点合わせによって測定された等電点 け、ｐＨ８，６の範囲内にある。

また、結果の総括は第１表に示されている。

免疫蛍光法 固定ＨＩＶ感染されｔ；細胞は、３Ｄ６抗体と一緒にインキュベージコンされた 。マーカー接合体抗ヒト！ｇｃ−ｐｒＴｃによって惹起されＩ；特異的蛍光法は 、第３図に示されている。

モノクローン性抗体および関連せる免疫毒素の試験管内での挙動 中和活性 ３Ｄ６抗体ｌｐｇ／ｍＩ２までの存在下でＨ９細胞をＨ！■ビールス細胞の２０ 倍のＴＣＩＤｓｏによって感染させることはできなかった。中和活性は第４図に 示されている。

２０倍のＴＣＩＤ５．を用いてビールス接種してから９日後に３Ｄ６抗体０．１ ．ｕｇ／ｍｆｆは、Ｈ９細胞中のＨＩＶ感染を阻止することができた。３Ａ６抗 体の中和活性は、第５図に示されている：６日遅れて観察することができた。感 染速度は免疫蛍光法によってそくていされｔ；。

細胞毒性 リシンＡ鎖と共役的に結合したモノクローン性抗体（３Ｄ６）は、抗体の細胞毒 性を証明するために使用された。細胞毒性は、３５５−メチオニン配合によって 測定された。物質および方法について記載したように得られた、３Ｄ６抗体とり シンＡ鎖との間の接合体から構成されている免疫毒素は、特異的にＨＩ　Ｖ−１ 感染したＨ９細胞を殺害した。３５５−メチオニン配合率は、対照の百分率で表 わされている（第６図）。

ｈｕ　　抗ＨＩＶ−ｍＡｂと、血清陽性者およびエイズまたはブリエイズを患っ ている患者から自然に生じる抗体との比較 請求の範囲に記載に記載されｔ：モノクローン性抗体と、ＨＩＶ感染後にヒトに おいて自然に生じる抗体との比較のために、競合的ＥＩＡ（酵素免疫検定法）が 選択された。３Ｄ６モノクロ一ン性抗体はペルオキシダーゼと接合され、半量大 飽和の希釈が測定された。

半量大飽和の希釈時に３Ｄ６抗体は、エイズの臨床的発現のない血清陽性者から の異なる血清と混合され、かつエイズまたはプリエイズを患っている患者からの 血清と１：ｌで混合された。血液中での３Ｄ６抗体と、自然に生じる抗体との競 合は、半量大飽和の％で表わされている。

３Ｄ６抗体による半量大飽和は、１００％と見なされている。第■表には、３Ｄ ６−抗体ペルオキシダーゼ接合体および異なる血清を使用することによる競合的 ＥＩＡからの値が示されている。

第■表：血清陽性者およびエイズもしくはプレエイズを患っている患者からの３ Ｄ６抗体と血清との比較発端者　　　　　　　　　　　　　　　　的発現（２） 　　　　　　　　　　％　　　　　　血清陽性の発端者ペプチド分析 ペプチドＣおよびＤを３Ｄ６抗体と反応させた。同様の競合的配列は、ｙｐ１２ ０の場合にも見い出されＩ；。これは、５ｐ４１とｇｐ１２０との反応の結果で ある。

商業的に入手可能なＥＩＡ 商業的に入手可能なＥＩＡの結果は、第８図に示されている。全てのＥＩＡの場 合に、Ａｂｏｔｔ　ＥＬＩＳＡを使用することを除いてプラスの結果が得られた 。オルガノン（Ｏｒｇａｎｏｎ）（２）検定物質は、競合的ＥＩＡであった。

Ｆノと７　ブＣ Ｆｉｇ、１ｄ： Ｆｉｇ、２： り）の頻４〕ｔカ Ｆｔ’ｇ、　６ Ｆｔ’ｑ、８ 国際調査報告 １Ｍ−、、、−ＩＡ、、、、、、、、、、、・、　　ＰＣＴ／ＥＰ　８８１０１ ０７２１ｍｅｎｎｂｅｅ１＾ｅｓＭ＋＋ｗ＊ｓｅ、ｐ（７／三ｐ　　８８１０１ ０７２国際調査報告 ＥＰε８０１０７２ ＳＡ　　　　２５９８１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ヒトモノクローン性抗体において、ａ）選択的にＨＩＶ−１のエンベロープ 蛋白質に結合し、 ｂ）選択的にＨＩＶ−１感染した細胞に結合していることを特徴とする、ヒトモ ノクローン性抗体。 ２．ヒトモノクローン性抗体において、ａ）選択的にＨＩＶ−１のコア蛋白質に 結合し、ｂ）選択的にＨＩＶ−１感染した細胞に結合していることを特徴とする 、ヒトモノクローン性抗体。 ３．ヒトモノクローン性抗体において、ａ）選択的にＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ　Ｉ ＩＩ／ＬＡＶ）のエンベロープ蛋白質に結合し、 ｂ）選択的にＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ　ＩＩＩ／ＬＡＶ）感染した細胞に結合し、 ｃ）リシンＡ鎖に結合した場合には、１０ナノモル未満のＨＩＶ−１感染したＨ −９細胞に対してＴＣＩＤ５０％を示し、 ｄ）ＧまたはＭインクイプを示し、 ｅ）ＨＩＶ−１パイロンに対して中和活性を示すことを特徴とする、ヒトモノク ローン性抗体。 ４．ヒトモノクローン性抗体において、ａ）選択的にＨＩＶ−１のコア蛋白質に 結合し、ｂ）選択的にＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ　ＩＩＩ／ＬＡＶ）感染した細胞に 結合し、 ｃ）選択的にｐ２４またはｐ５５またはｐ６５６に結合し、 ｄ）リシンＡ鎖に結合した場合には、１０ナノモル未満のＨＩＶ−１感染したＨ −９細胞に対してＴＣＩＤ５０を示し、 ｅ）ＧまたはＭインクイプを示し、 ｆ）ＨＩＶ−１バイロンに対して中和活性を示すことを特徴とする、ヒトモノク ローン性抗体。 ５．ハイプリドーマによって得られた次の抗体：ａ）３Ｄ６　　ｅ）５４Ｅ７ ｂ）３Ｄ９　　ｆ）８１Ｃ７ ｃ）２４Ｇ３ ｄ）２５Ｃ２　　２ ｇ）該基の員と官能的に等価であるモノクローン性抗体の１つである、請求項１ 記載のヒトモノクローン性抗体。 ６．ハイブリドーマによって得られた次の抗体：ａ）３Ａ６　　ｂ）１９Ｈ２ ｃ）２３Ｈ７　ｄ）３７Ｇ１２ ｅ）４２Ｂ９ ｇ）該基の員と官能的に等価であるモノクローン性抗体の１つである、請求項１ または４に記載のヒトモノクローン性抗体。 ７．ＨＩＶ−１のエンベロープ蛋白質 ａ）ｇｐ　　１６０、 ｂ）ｇｐ　　１２０および ｃ）ｇＰ　　４１および ｄ）ＨＩＶ−１感染した細胞 に結合している、請求項１記載のモノクローン性抗体。 ８．ＨＩＶ−１のコア蛋白質 ａ）Ｐ　２４、 ｂ）Ｐ　５５ ｃ）Ｐ　６５ ｄ）ＨＩＶ−１感染した細胞 に結合している、請求項２記載のモノクローン性抗体。 ９．マウス×ヒトハイブリドーマにおいて、請求項１記載のヒトモノクローン性 抗体およびハイブリドーマの子孫を生じることを特徴とする、マウス×ヒトハイ ブリドーマ。 １０．マウス×ヒトハイブリドーマにおいて、請求項１または３に記載のヒトモ ノクローン性抗体およびハイブリドーマの子孫を生じることを特徴とする、マウ ス×ヒトハイブリドーマ。 １１．マウス×ヒトハイブリドーマにおいて、請求項２記載のヒトモノクローン 性抗体およびハイブリドーマの子孫を生じることを特徴とする、マウス×ヒトハ イブリドーマ。 １２．マウス×ヒトハイブリドーマにおいて、請求項２または４に記載のヒトモ ノクローン性抗体およびハイブリドーマの子孫を生じることを特徴とする、マウ ス×ヒトハイブリドーマ。 １３．免疫毒素において、請求項１または３に記載の抗体および細胞毒性部分の 接合体であることを特徴とする、免疫毒素。 １４．免疫毒素の細胞毒性部分がリシンのＡ鎖である、請求項１３記載の免疫毒 素。 １５．免疫毒素の細胞毒性部分がアブリンのＡ鎖である、請求項１３記載の免疫 毒素。 １６．免疫毒素の細胞毒性部分がジフテリア毒素のＡ鎖である、請求項１３記載 の免疫毒素。 １７．免疫毒素において、請求項７記載の抗体および細胞毒性部分の接合体であ ることを特徴とする、免疫毒素。 １８．細胞毒性カクテルにおいて、請求項１４および請求項１５に記載の免疫毒 素からなることを特徴とする、細胞毒性カクテル １９．請求項１記載のヒトモノクローン性抗体の予防量を投与することによるヒ トホスト中の細胞のＨＩＶ−１感染を阻止する方法。 ２０．請求項１または２に記載の少なくとも２つの異なるヒト抗体のカクテルを 投与することによるヒトホスト中の細胞のＨＩＶ−１感染を阻止する方法。 ２１．ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法において、請求項１記載の抗体の治療 量をヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投与することを特徴とする、ＨＩＶ感染し た細胞を治療する方法。 ２２．ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法において、請求項１４、１５、１６お よび１７に記載の免疫毒素の治療量をヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投与する ことを特徴とする、ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法。 ２３．ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法において、請求項１８記載の細胞毒性 カクテルの治療量をヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投与することを特徴とする 、ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法。 ２４．ＨＩＶ−１感染した細胞を治療する方法において、ホスト体重１キログラ ムあたり請求項１４、１５、１６および１７に記載の免疫毒素約０．０１〜２０ ミリグラムをヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投与することを特徴とする、ＨＩ Ｖ−１感染した細胞を治療する方法。 ２５．請求項１７記載の免疫毒素をＨＩｖ−１感染した細胞ホストに投与するこ とによるヒトＨＩＶ−１感染した細胞を治療する方法において、全部の免疫毒素 の全体量がホスト体重１キログラムあたり約０．０ｌ〜約２０ミリグラムの範囲 内にあることを特徴とする、ＨＩＶ−１感染した細胞を治療する方法。 ２６．細胞毒素において、請求項２または４に記載の抗体および細胞毒性部分の 接合体であることを特徴とする、細胞毒素。 ２７．細胞毒素の細胞毒性部分がリシンのＡ鎖である、請求項２６記載の免疫毒 素。 ２８．細胞毒素の細胞毒性部分がアブリンのＡ鎖である、請求項２６記載の免疫 毒素。 ２９．細胞毒素の細胞毒性部分がジフテリア毒素のＡ鎖である、請求項２６記載 の免疫毒素。 ３０．細胞毒素において、請求項８に記載の抗体および細胞毒性部分の接合体で あることを特徴とする、細胞毒素。 ３１．請求項２７および２８に記載の免疫毒素からなることを特徴とする、細胞 毒性カクテル。 ３２．請求項２記載のヒトモノクローン性抗体の予防量を投与することによるヒ トホスト中の細胞のＨＩＶ−１感染を阻止する方法。 ３３．請求項２または４に記載の少なくとも２つの異なるヒト抗体のカクテルを 投与することによるヒトホスト中の細胞のＨＩＶ−１感染を阻止する方法。 ３４．ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法において、請求項２記載の抗体の治療 量をヒトＨＩｖ感染した細胞ホストに投与することを特徴とする、ＨＩＶ感染し た細胞を治療する方法 ３５．ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法において、請求項２７、２８、２９お よび３０に記載の免疫毒素の治療量をヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投与する ことを特徴とする、ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法 ３６．ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法において、請求項３１に記載の細胞毒 性カクテルの治療量をヒトＨＩＶ感染した細胞ホストに投与することを特徴とす る、ＨＩＶ感染した細胞を治療する方法３７．ヒトＨＩＶ−１感来した細胞を治 療する方法において、ホスト体重１キログラムあたり請求項２７、２８、２９お よび３０に記載の細胞毒素約０．０１〜２０ミリグラムをヒトＨＩＶ感染した細 胞ホストに投与することを特徴とする、ヒトＨＩＶ−１感染した細胞を治療する 方法。 ３８．請求項３１記載の細胞毒素をＨＩＶ−１感染した細胞ホストに投与するこ とによるヒトＨＩＶ−１感染した細胞を治療する方法において、全部の免疫毒素 の全用量がホスト体重１キログラムあたり約０．０ｌ〜約２０ミリグラムの範囲 内にあることを特徴とする、ヒトＨＩＶ−１感染した細胞を治療する方法。 ３９．請求項１記載の抗体の少なくとも１つを有するヒト血液または組織培養液 体中のＨＩＶ−１感染した細胞を特異的に検出する方法。 ４０．請求項２記載の抗体の少なくとも１つを有するヒト血液または組織培養液 体中のＨＩＶ−１感染した細胞を特異的に検出する方法。