JPH05506669A - エイズ治療法及びワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 エイズ冶療法及びワクチン 発明の分野 本発明は、エイズ冶療法、ワクチン、及び診断法に関する。

本明細書中で用いる場合、種々の表踊、及び他のこのような見出しは指標を意図 するものであって、本発明を限定するものと解釈すべきでない。

１９８０年初頭に確認されて以来、エイズ（後天性免疫不全症候群）の治療又は 予防は、それが社会的及び疫学的に密接に関係しているために、多数のグループ が研究中であったものに無比の目標を提供してきた。しばらくの間、エイズの原 因に関していくつかの注目すべき論争があり、実際、意見は依然として分かれて いる。

初期理論 極く初期には、エイズは対宿主移植片病（ＧＶＨＤ）、即ち罹患者に外来免疫適 格細胞を導入することに起因する免疫疾患に非常によく似た生理学的障害であり 、下記のような特徴：免疫系に関連した血球の塊状増殖：免疫応答性と自己寛容 との喪失；並びに胸腺変性及び巨牌腫のような他の症状を有するといったいくつ かの推測がなされた。しかしながら、ウィルス（ＨＩＶ−ヒト免疫不全ウィルス ）が関与していることが次第に明らかになってきたため、この理論は必然的に効 力を失い、治療又はワクチンに関する研究が始まった。

困難性 研究に関与したいろいろなグループの努力は、ウィルスの形態と代謝性とによっ て繰り返しくじかれてきた。したがって、ウィルスのコートタンパク質の固有の 変異性のために、そしてまたウィルスがレトロウィルス群の一員であるために、 有力なワクチン及び治療法は失敗してきた。

レトロウィルス はとんどのウィルスは生宿主細胞を感染させることにより繁殖し、次いで繁殖す るためにその代謝機構を乗っ取る。

十分に新しいウィルスが造られると、細胞は破裂し、新しいウィルスが放出され る。次いで、その周期が再び始まる。

レトロウィルスはこの機序をもう一段階採用し、その遺伝物！（この場合はＲＮ Ａ）を宿主型遺伝物質（ＤＮＡ）中に逆処理後に、細胞の遺伝物質中にその遺伝 物質を活発に組み入れる。

したがって、それらが活発にウィルスを産生じない限り、感染細胞を検出するの は困難であって、その他のレンチウィルス感染と同様、ＨＩＶにおける潜伏期間 は延長され、即ちウィルスの活発な産生はしばらく起きない。このことは、治療 にむけての研究を妨げはしないが、非常に邪魔になる。

抗ＨＩＶ薬 ＡＺＴ　（３’　−アジド−３°　−デオキシチミジン）でさえＨＩＶ誘発性エ イズの患者を治癒できないが、しかしウィルス遺伝物質の宿主遺伝物質中への逆 転写の工程を妨害することにより体内にウィルスが蔓延するのを防ぐことだけは できる。さらに、ＡＺＴを用いた臨床試験からは、疾病の軽減は一過性に過ぎず 、ＡＺＴで処置された患者は必ずしも何の治療も受けていない患者より長生きで きると予期できるわけではない。

ＡＺＴと池の薬、例えばアシクロビルａｃｙｃｌｏｖｉｒとを組み合わせて、エ イズ治療に用い得る。ＤＤＣ（ジデオキシシチジン）も有用であることが立証さ れているが、ＤＤＣは、副作用が低毒性であるもののＡＺＴと同様の方法で作用 するので、ＨＩＶ感染に対する解答を提供するとは考え薬剤療法に代わるものと しては、ＨＩＶ感染、又はＨ１■感染により誘発されるエイズを予防するための ワクチンがある。ワクチンは活性（ａｃｔｉｖｅ）であるか又は受動性（ｐａｓ ｓｉｖｅ　）であり得る。活性ワクチンは侵入生物、例えばエイズウィルス（Ｈ Ｉ　Ｖ）に対して身体に抗体を産生させるじ免疫反応°）。受動性ワクチンは、 一般に例えばマウス、ウサギ、又はモノクローナル抗体産生細胞株からの前産生 抗体で構成され、これらは患者の身体が何もしなくても、即ち免疫反応を生じな くても、ウィルスを認識し、襲撃し得る。

ワクチンアプローチ ワクチンを製造するためには種々の方法がある。古典的ワクチンは、殺した、又 はひどく弱めた（弱毒化）ウィルスの製剤を患者に注入することにより達成され る。このアプローチに伴う問題は、いくつかの理由のために、ウィルスが”不意 打ちし”、患者が実際にエイズを発病した場合に、悲劇的な結末を生じる恐れが あることである。にもかかわらず、このアプローチは研究されてきたが、限られ た成功しかおさめていない。生じた免疫は、ウィルスの個々の単離物に対する防 御を提供するのに十分なだけで、いかなる供給源からのＨＩＶに対しても十分で はない。これは主として、ウィルス粒子の表面上のコートタンパク質が生来変化 しやすく、ある感染者と別の感染者との間でさえ変化し得るためである。したが って、このアプローチは、先ず患者がエイズを発病するという危険にさらされる ために、しかし主として全ウィルスワクチンが、この場合、必ずしも防御を保証 するわけではないために、満足のいくものでこれらの理由のために、ウィルスが どのように免疫不全を引き起こしたかに関してこれが何らかの説明を提供するか 否かをみるために、ウィルスがヒト細胞と如何に相互作用するかを確定すること が望ましかった。ＣＤ４タンパク質が、ＨＩＶＩ及びＨＩＶ２ウィルスの細胞と の結合に際して有意の役割を演じることが迅速に確定された（例えばＤａｌｇｌ ｅｊｓｈ　ｅｔ　ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８４）、３１２．７６３−７６ ８参照）。

ＣＤ４タンパク質は、Ｔヘルパーリンパ球として公知の白血球の特定のサブユニ ット上に特徴的に存在するが、しかしマーカーは、マクロファージのような別の 種類の細胞上にも存在し、脳にも存在することが知られている。ＣＤ４を欠く細 胞型における感染についての報告がなされてきたけれども、このような感染は、 常に実験室内で誘発されたものであって、自然感染は圧倒的にＣＤＪ＋細胞型に 限定されると思われる。

ＣＤ４ ＣＤ４タンパク質は目下、広範に特徴づけられ、成熟又はメモリーＴリンパ球に おいて研究されている。それは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ−Ｔｉ）を含有し、抗原 提示細胞複合抗原■型）の認識に関与する膜複合体ＣＤ４７３Ｔｉの一部を構成 する。ＣＤ４Ｔ３ＴｉとＭＨＣ間の相互作用は、外来抗原の存在によりＴ細胞が 活性化されるか否かを決定する場合に重要である。Ｔ細胞のこれらの抗原反応性 サブユニットの活性化は、次にその増殖を引き起こし、次いでこれらのＴ細胞の ほとんどが、関連のＢ細胞を手助けし、したがってそれらが増殖し、抗原に対す る抗体を産生ずる。

ＣＤ４はＭＨＣｎを固定する ＣＤ４はＭＩＩＣＵに会合した外来抗原の認識の役割を演じないが、むしろ不変 であるＭＨＣ■分子の一部を認識する。この相互作用は極めて接近したＴＣＲ及 びＭＨＣｎ分子を固定し、そのためそれらが相互作用し得る。相互作用が正の刺 激を構成するものである場合には、Ｔ細胞は活性ＣＤ４の一次配列は、それがイ ムノグロブリン遺伝子工科に属する複合分子であることを示す。ＣＤ４分子のい くつかの部分は抗体分子のＶ領域に似ているが、−万能の部分は本質的にＣＤ４ が由来する宿主に独特のものであるＣＤ４とウィルス間の有意の相互作用は、Ｃ Ｄ４分子によるウィルスコートタンパク質ｇｐ１２０の認識である。２２１２０ 分子は、大型エンベロープｇ　ｐ　１６０タンパク質からの切断により生成され 、同時に小型ｇｐ４１が生成される。

ｇ　ｐ　１２０及びｇｐ４１の生成は細胞内部で起こり、２つのタンパク質は、 成熟ウィルスが細胞膜から出芽するウィルス複製の段階の前、及びその段階中に 細胞表面に発現される。

ｇ　ｐ　１２０及びｇｐ４１を生成するために細胞内タンパク質分解的切断が生 じた後、ｇ　ｐ１２０はトランスメンブレンｇｐ４１を伴って非共有的に残存す る。エンベロープタンパク質のこの表面位置は、それらをワクチン及び免疫療法 のための主標的にした。

ｇ　ｐ　１２０の機能的重要性 ｇ　ｐ　１２０がＣＤ４＋Ｔ細胞機能を直接妨害し得ることは公知である。ｉｎ 　ＶｉｔｒＯ及びｉｎ　ｖｉｖｏでｇ　ｐ　１２０の免疫抑制作用に関して示唆 された一つの解釈は、高親和性ＣＤ４−ｇｌ）１２０結合がＣＤ４／ＭＨＣＩＩ 相互作用を妨げることにより抗原特異的ＭＨＣｎ依存性Ｔ細胞増殖を妨げるとい うものである。しかしながら、１ｎ　ｖｊｖｏ　ＨＩ　Ｖ感染によって引き起こ される公知の免疫不全に対する推定は、抗原特異的メモリーＴ細胞反応の欠除が 感染初期に起こるという観察と一致せず、明らかに不可逆的である。ｇ　ｐ　１ ２０のいかなる細胞毒性作用が、″メモリー”Ｔ細胞反応が顕著に選択的に欠除 され一万能のＴ細胞反応は無傷のままであるということを説明し得るというのは 疑わしい。

ＨＩＶ感染をＣＤ４＋Ｔ細胞数の減少と直接結びつける試みがなされてきたが、 ＣＤ４＋Ｔ細胞喪失の機序は、Ｔ細胞機能の喪失とは異なるので、直接的ウィル ス細胞毒作用によるものであるとは考えられない。ｇ　ｐ　１２０を発現又は結 合中の他のＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ４＋Ｔ細胞による細胞溶解性除去のようなその 他の急性細胞破壊的機序は、ＣＤ４＋Ｔ細胞数の慢性的漸次的減少を説明すると は考えら抗原特異性メモリーＴ細胞増殖は、ｇ　ｐ　１２０により、そして全ウ ィルスによって別様に影響を及ぼされる。ｇｐ１２０は可逆的に、しかしただち に抗原に反応してＴ細胞増殖を抑制するが、−万全ウィルスによって生じる同等 の免疫抑制作用は認められない。抗原特異性Ｔ細胞が抗原及びＨＩＶで前処理さ れた抗原提示細胞（Ａ　Ｐ　Ｃ）に暴露された結果としての初期増殖反応は、無 傷である。しかしながら、同一の抗原に特異的な増殖反応は、抗原刺激にひき続 く周期にはもはや回復可能でない；その作用は、欠除の遅延又は抗原反応性Ｔ細 胞の不活性化によるものである。

最近の研究 ｇ　Ｉ）　１２０は非常に変わりやすい分子であり、結晶化しにくい。多くの単 離物がシーケンシングされてきており、非常に限定された配列の保存を示す。そ の分子上のいくつがの部位は、ＭＨＣ分子上の部位と少し似た配列を示す。ある 保存領域はＣＤ４結合部位を構成し、確認されている。

この情報に基づいて、ＨａｂｅｓｈａｖとＤａｌｇｌｅｉｓｈ　（Ｊｏｕｒｎａ ｌ　ｏｆＡＩＤＳ　（１９８９）　２．４５７−４６８）　ハ、ｇ　ｐ　１２０ 分子がＴ細胞抗原認識を妨害し、ＴＣＲ及びＭＨＣｎ間の相互作用を妨げること を示唆した。しかしながら、このようないかなる妨害の機序も明らかでなく、エ イズのための治療又はワクチンの開発を手助けしなかったが、著者等は、ｇ　ｐ 　１２０のＣＤ４結合部位に対する抗体を基礎にした抗イチオタイブワクチンの 使用を示唆した。ｇ　ｐ　１２０及びＭＨＣＩＩに対するＣＤ４結合部位を限定 することが困難であるのは立証されてχ）たので、このようなアプローチには困 難がある。

ＣＤ４を認識するｇ　Ｉ）　１２０上及びＭＨＣＩＩ上のそれらの結合部位間を 識別する試みも解決されないままである。したがって、Ｃ１ａｙｔｏｎ　ｅｔ　 ａｌ、（Ｎａｔｕｒｅ（１９８９）、　３３９．ｐ５４ｇ以降を参照）は、ｇ　 ｐ　１２０結合に作用し、ＭＨＣＩＩ結合にも作用するＣＤ４分子の突然変異で あるが、しかしＭＨＣＩＩ結合に作用する突然変異は必ずしもｇｐ１２０結合に 作用しないという突然変異を実証した′。したがって、ｇ　ｐ１２０結合部位は 、ＣＤ４上のＭＨＣ■結合部位の特異的サブセットを形成し、この非修飾部位は したがってワクチン生成には適していないと考えられる。

抗イチオタイブワクチン 特定の病原ウィルスに対するワクチンを生成するための別のアプローチは、例え ばＢ型肝炎ウィルス（ＨＢ　Ｖ）に対して用いるために、例えばｘｅｎｎｅａｙ 等（欧州特許出願公開番号第０１１０７０８号）が開示している。実際には、ワ クチンとして用いるのに十分な抗体を生じるような免疫化量でウィルスを動物に 注入する。動物から単離された抗体はウィルスを認識でき、“第一世代°抗体（ Ａｂ−１）である。

これらのＡｂ−１抗体を、次に別の動物に注入して、第一世代を認識する、且つ ウィルス表面の一部を模倣する第二世代の抗体（Ａｂ−２）を産生じ得る。この 効果は、ウィルスの表面のよう１ご見える°、そして免疫反応が起こり得るがし かし殺した又は弱毒化したウィルスを用いる場合に内在するいかなる危険も保有 しないものを産生ずることである。したがって、Ａｂ−２抗体はワクチンとして 使用し得る。患者に注入した場合に、第三世代の抗体（Ａｂ−３）が、Ａｂ−２ 抗体に対して生成される。Ａｂ−２抗体はウィルス抗原の模倣であるため、Ａｂ −３抗体はウィルスを中和し得る。このアプローチは、患者は全ウィルスに暴露 されないという利点を有するが、しかし中和抗原が余りにも変わりやすいために Ｈ１ψに適用できない。

しかしながら、欧州特許出願公開番号第２８７２２６号は、ＣＤ４上のｇ　ｐ１ ２０結合部位を基礎にして、抗イチオタイブワクチンに関する変異体を開示する 。欧州特許出願公開番号第２８７２２８号に開示された抗イチオタイブワクチン は、ｇｐ　１２０上のＣＤ４結合部位が完全に保存されるという原理に基づいて いる。したがって、ＣＤ４上のｇ　ｐ　１２０結合部位と結合する抗体（Ａｂ− １）を含有するワクチンを患者に投与すると、次いで患者は、これらの抗体に対 する抗体（Ａｂ−２）を生じる（いわゆる抗イチオタイブ反応）。

これらの二次抗体（Ａ　ｂ　−２）は、ｇ　Ｉ）　１２０上のＣＤ４結合部位に 結合し、ＨＩＶウィルスの表面を被覆して、他の細胞の感染からウィルスを保護 する。

新しい抗原に反応する能力を患者が喪失しているので、このようなワクチンは、 進行したエイズにはほどんど用いないが、対応する不活性ワクチンは用い得る。

さらに、進行した場合、このようなワクチンが作用した場合でさえ、患者は依然 として免疫不全であると思われる。

免疫反応の機序 免疫反応は、ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩｒ分子による抗原提示に頼っている。ＭＨＣ Ｉは、細胞内に由来する抗原を提示するのに関与し、全細胞に認められる。ＭＨ Ｃｎは、細胞外起源の抗原を提示するのに関与し、その発現は本質的に、Ｂ細胞 、樹状突起細胞、及び食細胞のような免疫系の細胞に限定される。

ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩは、いわゆるイムノグロブリン（Ｉｇ）上材に属し、抗 体上に見いだされる不変（Ｃ）ドメインに非常によく似たその分子のドメインを 有する。Ｔ細胞受容体もこの科に属し、抗体に特徴的な可変領域（Ｖ）と不変領 域とを有する。

上記したように、ＭＨＣＩ及びＭＨＣｎは抗原の提示に関与する。そうする場合 、プロセッシングされた外来抗原からの直鎖ペプチド配列は、ＭＨＣ分子の特徴 的な裂は目に位置する。この裂は目は、βプリーツシート上に支持される２つの αヘリックス間に形成される。ＣＤ４は裂は目の外側の不変領域をつなぎ、一方 ＴＣＲは裂は目に会合した抗原を認識する。裂は目の抗原ペプチドかＴＣＲと相 互作用する場合、Ｔ細胞は活性になる。

ＭＨＣＩは一つのポリペプチド鎖（常に血液タンパク質β２ｍに会合して見いだ される）を含有し、一方ＭＨＣｎは２つのポリペプチド鎖（α及びβ鎖）を含有 するけれども、それらの構造は非常によく似ている。今日までＭＨＣｎを結晶化 することかできていないため、ＭＨＣｎの３−〇構造を絶対的に確定することは できない。にもかかわらず、ＭＨＣｎ及びＭＨＣＩはかなりの程度の相同関係を 共有し、ＭＨＣＩα鎖は結晶化されている。結晶学的分析により、確信を持って 構造を決定できるようになった。Ｂｒｏｗｎ等（Ｎａｔｕｒｅ　（１９８ｇ）、 ２３２．１１４５−４５０　）は、ＭＨＣＩの確定されたモデルに基づいてＭＨ ＣＩＩに関する仮説的モデルを提唱し、更なる配列データも提供している。

ＭＨＣ分子の多元性 侵入生物が被膜を、又は別に免疫系の中和反応を回避し得る抗原を生じることが 知られている。これは、自己抗原を模倣するか、又はＭＨＣｎ／１分子を模倣し て、あるいはプロセッシングが困難であるか又はＭＨＣ分子と結合しない構造を 発現することによって可能である。この種の進化的圧力は、免疫系のＭＨＣ成分 が多数の対立遺伝子を有する非常に多形態且つ多元的な遺伝子族として強いて発 現させた。ヒトは、各々のＭＨＣ分子分子間して６対の対立遺伝子を有する（Ｎ ａｇｙ　ｅｔ　ａｌ、、Ｉｇ＋ｍｕｎｏｌｏｇｙ　Ｔｏｄａｙ　（１９Ｈ）　。

１０．１３２−１３１１を参照）。

したがって、ＭＨＣ分子はいくつかの異なるクラス−ＨＬＡＡ、Ｂ、又はＣ（ク ラスエ）、及びＨＬＡ　ＤＰ。

ＤＱ、又はＤＲ（クラス■）−を形成し、各クラスはそのα又はβ鎖の構造が異 なる。誰でもヒトは、α及びβ鎖の精密な構造は両親から継承する。父方及び母 方の特性の組換えが個体に起こり、全個体がクラスＩ及びクラス■指紋において 実際に唯一無比になる。

アロエビトープ 個体間のＭＨＣアルファ及びベータ鎖構造の相違は、Ｔ細胞受容体と相互作用す る分子のその領域に影響を及ぼすに過ぎない。これらの領域がアロエビトープで ある。ＭＨ例えばＣＤ４及びＣＤ８）は個体間で変化しないが、種間では変化す る。アロエビトープは、Ｔ細胞に対して抗原を提示するのに関与しており、多数 の対立形態の提示部位があるため、いかなる指定抗原に対しても２個体が常に厳 密に同じ方法で反応しないことを確証する。

それらは抗原を提示するため、ＭＭＣ分子はＴ細胞受容体（Ｔ　ＣＲ）がそれら と反応することも決定するが、これはＴＣＲα及びβ鎖の可変部Ｖα及びＶβに 依る。外来ＭＨＣを認識しないＴＣＲに及ぼす進化学的圧力は認められず、別の 個体のＭＢＣのアロエビトープ領域を認識し得る、そして認識する多数のＴ細胞 があらゆる個体に存在する。

他方、自己ＭＨＣが抗原提示裂は目（Ｔ細胞制限）に提示される外来抗原ペプチ ドを含有しない限り、ＴＣＲはＴ細胞の増殖又は活性化を誘発しない。イムノグ ロブリン上材とも相同を共有するＴＣＲは、ＭＭＣ表面の形状を認識する。しか しながら、ＴＣＲに対して提示されるアロエピトープ表面は外来抗原を提示する 自己ＭＭＣとしてどういうわけかほとんどのＴ細胞に気づかれるため、抗原が存 在しない場合でさえ、外来ＭＨＣは、増殖を誘発し得る。

妊娠中、胸腺個体発生（胸腺内のＴ細胞集団及びクローンの分化）は、宿主細胞 により提示される型のＭＨＣＩＩ分子に制限されるＴ細胞集団を生成させる。宿 主ＭＨＣを認識しない、又はＭＨＣを非常に強く認識するクローンは削除される 。

対宿主移植片病 上記したように、アロエピトープ形態のＭＨＣを発現する外来免疫適格細胞の導 入に関して、問題が生じる。外来細胞を受容者に注入する場合、結果的に生じる 疾患は、”対宿主移植片病”　（ＧＶＨＤ）と呼ばれる免疫の全身性不全を特徴 とする。外来ＭＨＣが存在するために、免疫系は新抗原に対する相関反応を高め る能力を失い；それ自身の自己抗原と反応し：そして外来抗原に対する反応の記 憶を失う。この疾患は、例えば介入性感染、並びに皮膚、肝臓、及び腎臓のよう な極めて重要な臓器の免疫破壊により、外来細胞の受容者を終には死に導く恐れ がある。

ＧＶＨＤの発病の前提条件は下記のとおりである：１゜ドナー接種物中の免疫適 格細胞の存在：２．受容者がドナー細胞を拒否できないこと；３．宿主とドナー とのＭＨＣ分子間の遺伝的差異の存在。その結果生じるＧＶＨＤは以下の特徴を 示す：１．肝牌腫大及びリンパ節症；２．自己抗体の産生；３．糸球体腎炎；４ ．欠損細胞性及び体液性免疫反応；５．高ガンマグロブリン血症。

ＧＶＨＤの主な原因は、ドナー及び受容者細胞の増殖を伴うＴ細胞の過剰活性化 であるが、活性化された受容者細胞の数は常にドナー接種物数より多い。受容者 Ｔ細胞がアロエピトープ形態のＭＨＣＩ［と接触するようになった場合には、そ れが抗原特異性であるとしても、多くの場合、活性化されるようになる。例えば 、Ａｓｈｖｅｌ　Ｉ等（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’ｌｕ＋ｕｎｏｌｏｇｙ　（１９ ８６）１３Ｂ、９．３８９）は、６２個のチトクロームＣ特異性子細胞のうち、 ６０％がアロ反応性であり、言い換えれば、特異的抗原チトクロームＣが存在し ない場合でさえ、それらは同一種からの外来ＭＭＣの存在下で活性化されるよう になったことを立証した。

ＧＶＨＤにおけるアロ反応性 アロ反応性の現象は広範に研究されており、妊娠中に外来ＭＨＣを有する細胞を 母マウスに接種するとマウス新生仔におけるＧＶＨＤを防止できることが判明し ている。母親を父方細胞で免疫化する場合には、その結果生じる仔は、これらを 大量に注入した場合でも、父方細胞に対して耐性を示す。その作用は、胎盤を通 じて胎仔に母方抗体を渡すことによって、引き起こされる。これは、Ｔ細胞集団 の個体発生に及ぼす直接作用を有することが知られている出来事である。

母方抗体の作用は、完全には理解されていないが、しかし新生仔における父方細 胞に対するＴ細胞反応の特異的積極的選択と非特異的抑制との結果であると考え られる。したかって、別の系統のマウスにおける免疫化細胞に対するＴ細胞反応 を抑制するために免疫化された母親の保護された仔からのＴ細胞集団を用いるこ とができる。異質遺伝子ＭＨＣのＴ細胞認怠のために使用されるＴＣＨの類似性 のために、母方免疫化の抑制作用は、Ｔ細胞反応のｉｎ　ｖｉｔｒＯ検定で試験 した場合、無会合゛性組織適合性抗原に対するＴ細胞反応の減少にまで及ぶ（Ｄ ｅＧｌｏｒｇｉ　ｅｔ　ａｌ、、（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｉａｖｕｎｏｇｅｎｅ Ｈｃｓ　（１９９０）　１７．７７−８８）を参照）。

アロエピトープ形態のＭＨＣに対するＴ細胞の増殖は、Ｔｅｒｓｊｊｔｅｌｅｎ 　（Ｈｕｍａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　（１９９０）、２８．１−１０　）が 考察している。抗原が抗原提示裂は目により提示されるか否かについて外来ＭＨ Ｃの認識に影響を及ぼす分子構造に関係のあるアロ認識に対する種々の可能性が 提案されている。

アロエビトープＭＭＣは、ペプチド結合溝の形状の、そしてＴ細胞受容体と相互 作用する表面アミノ酸残基の差異を示す。したがって、ＭＨＣ多形型によるアロ エピトープ反応は、ペプチド結合、ＭＨＣによるペプチドの゛模倣”、又はＭＨ ＣのＴＣＲとの直接相互作用による。例えば、シシサルＭＨＣＩにおけるアロエ ピトープ特異性アミノ酸置換の大多数が、抗原結合裂は目に位置する（νａｔｋ ｊｎｓ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＩｌｌＩＩｕｎｏｌｏｇｙ　（ １９９０）、１４４．１１３８−１１４３）　ｏ別の研究（Ｒｏｔｈｂａｒｄ　 ｅｔ　ａｌ、、Ｃｅ１ｌ　（１９８８）、５２，５１５−５２３）では、ＭＨＣ ｎＤＲを模倣する配列を含有するブタフサペプチドか特定のＤＲ配列に反応する Ｔ細胞を刺激し得ることが利金ウィルス及びｇ　ｐ　１２０単独の分析に基づく 研究により、ＨＩＶに感染させた、又はパルスさせたＡＰＣは抗原特異性Ｔ細胞 反応を選択的に削除できることが立証された。Ｃ１ｅｒ４ｃｉ等（Ｊｏｕｒｎａ ｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌ’ｏｇｙ　（１９９０）　１４４．３２６６−３２７ １）は、’ｆｌｕウィルスに対するＴ細胞反応を喪失したＨＩＶ”患者が、ある 環境で、’ｆｌｕ抗原と、異なるＭＨＣＩＩ分子と゛の共提示によりｆｌｕに対 する反応を再生し得ることを立証した。これは、アロエビトープに対して反応す る能力に及ぼすＨＩＶの影響が、特異的抗原ペプチドに対するより特異的且つ敏 感な反応よりも非常に少ないことを示している。

ｇ　９１２０は単独で、いかなるウィルス補因子の非存在下でＴ細胞活性化を抑 制し得る。これはＣＤ４と結合するｇｐ１２０の直接作用であって、ＣＤ４ＭＨ Ｃｎ相互作用を遮断し、Ｔ細胞受容体に対するＭＨＣの抗原結合面の接近を防止 し、それによってＭＨＣｎによる全Ｔ細胞反応の広範な、非特異的抑制を生じる 。

抗原としてのｇ　ｐ１２０ 抗原としてのＨＩ　Ｖ　ｇ　Ｉ）　１２０に対するＴ細胞反応は、相対的に少数 の免疫優性エピトープに制限される。ペプチドとしてプロセッシングされ、提示 されたｇ　ｐ　１２０に対して反応するＴ細胞の能力は、提示ペプチドに反応し 得る素朴な能力範囲のＴ細胞の種類及び数により決定される。

しかしながら、自己ペプチドに似たｇ　Ｉ）　１２０由来ペプチドは反応をまっ たく誘発しないため、得られる反応性の程度は、ｇ　Ｉ）　１２０のアミノ酸配 列とＭＨＣのような種々の自己ペプチドとの間の全体的類似性に依る。概して、 自己模倣ペプチドが親線性のＭＨＣＩＩ又はクラスＩによって提示される場合、 反応は起こらない。制限Ｔ細胞反応は、自己由来、及びアロ由来ＭＢＣペプチド 間の分岐（多形型）を代表するペプチドに対して起こる。ｇ　ｐ１２０が自己Ｍ ＭＣ配列に類似した場合、制限されたＴ細胞反応が予測されるが、この場合、ｇ 　ｐ　１２０及びＭＨＣ間の類似性によりＴ細胞反応を誘発できず、その結果、 多量のｇ　ｐ　１２０分子のＴ細胞耐性を生じる。

ｇ　ｐ１２０の代表的な合成ペプチドに対する素朴なＴ細胞反応の分析から、分 子中の約２０個のＴ細胞エピトープを確認する広範なＴ細胞能力範囲が明示され た。Ｔ細胞反応性がほとんど認められない有意の領域は、ＣＤ４結合部位を形成 ｔ　ルＡ　Ａ　３８３−４５３を含ムカ、しがしＡ　Ａ　４５ｇ−５０３＋、： 対する反応は獲得できる。ＣＤ４結合部位に対する反応の欠如は、この部位にお けるペプチド構造（自己構造）の保存を示すものと思われる。

このように、エイズに対する研究についてなし得る方法により、多くの情報が得 られたが、ＨＩＶによって誘発されるエイズの治療又は予防の基本的な問題は、 依然として未解決のままである。

発明の概要 第一の態様によれば、本発明は： ａ）ＨＩＶｇｐ１６０の、あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピ トープを認識するか、又は；ｂ）ＨＩＶｇｐ１６０の、あるいは一つ又はそれ以 上のその生成物質のアロエピトープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識する 物質であって、 アロエピトープが、ＨＩＶ誘発性エイズに感染しやすいヒトにおける少なくとも 一つのＣＤ４＋Ｔ細胞クローンの増殖を刺激し得る物質を提供する。

発明の詳細な説明 定義 “認識する°という用語は、本物質及びｇ　ｐ　ｔｅａアロエピトープ、又はＴ 細胞受容体が共にもたらされる場合、ある程度の会合又は結合が生じることを示 すのに用いる。

“アロエピトープ”という用語は、細胞膜上に提示された場合、ＣＤ４＋Ｔ細胞 増殖検定において少なくとも一つのＣＤ４＋Ｔ細胞クローンの増殖を刺激するｇ 　ｐ　１６０又は一つ又はそれ以上のその生成物質に会合した特徴を示す。

Ｔ細胞刺激の量は、ウィルス単離物によって変化し、集団の各々の及びすべての 試料においてアロ反応を生じるアロエピトープはないと予測される。しかしなが ら、アロエピトープ作用か観察される場合は、通常は少なくとも一つの、普通は 多数のクローンか刺激され、集団の切片から採取された試料の大多数でその作用 が観察される場合である。

“ｇ　ｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質“という用語は、本明 細書中ではアロエピトープの位置を指示するために用いる。以下の説明から明ら かになるように、アロエピトープはＨＩＶｇｐ１８０遺伝子生成物質に会合する ことは現在確定されているが、しかしエイズに反応するアロエピトープがｇ　Ｉ ）　１６０それ自体と会合しているが否が、あるいはｇ　Ｉ）　１８０の切断生 成物質（ｇ　ｐ　１２０及び／又はｇｐ４１）、もしくはＭＨＣＩ又は■のよう な宿主分子、あるいは宿主膜の一部と会合したｇｐＬ６０　、　ｇｐＬ２０及び ｇｐ４１のいずれかと会合するか否かは分かっていない。さらに、アロエピトー プは、もっばらＨＩＶｇｐ１８０遺伝子の発現物質と会合するが、それが宿主細 胞の膜と会合している場合だけである。我々の実験は、アロエビトープ作用はお そらくおちにｇｌ）１２０の主αヘリックスと会合することを示す（下記参照） 。いずれにしても、“ｇｐｌｅｏ、あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質″ という用語は、それがアロエピトープを含有する部分を網羅する程度まで、上記 の可能性をすべて包含する。

本発明の物質は、例えば抗体のような天然物質、あるいは工学的に作り出したタ ンパク質、ペプチド、又は小有機分子のような合成物質、あるいはその組み合わ せである。

本発明の物質は、主として、アロエピトープが重要な自己タンパク質を模倣する ことによりその作用を発揮し、上記したように、身体は自己タンパク質に対する 免疫反応を自然には生じないという理由のために、天然には生じないと考えられ ている。したがって、本発明の物質は、天然物質ではないが、本発明により利用 できるようになる。したがって、本発明は、このような物質、並びにｉｎ　ｖｉ ｖｏ及びｉｎ　ｖｉｔｒｏでのこのような物質の生成方法を提供する。

概して、本発明の物質は、ある環境においては余りにも広範であるので、上記の アロエピトープを認識しないＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識しないのが好ましいが 、しかし本発明に関する種々の適用があって、その場合、アロエピトープを認識 しないＴ細胞の限定認識が許容可能である。これは、特に免疫療法に関する場合 で（下記参照）、その場合はすべてのアロエピトープ認識クローンが削除される ことを保証するのが好ましく、誤差限界がを用である。

発見 ＨＩＶ誘発性エイズに感染しやすい個体において、ＣＤ４＋Ｔ細胞の亜集団は細 胞膜上に発現された場合はｇｐ１６０に対してアロ反応性であり、これらのＴ細 胞は外来ＭＨＣ■に対してアロ反応的にそれらが作用していたかのように同様の 方法で増殖する、というのが不可欠な事実である。

このようなＴ細胞は、ｇ　ｐ　１８０に対してアロ反応性であると言われている 。したがって、本発明の物質は関与するｇｐ１６０のその部分、即ちアロエピト ーブー認識するか、又はｇ　９１６０に対してアロ反応性のそれらのＴ細胞受容 体を認識する。

アロエピトーブー、膜発現化ｇ　ｐ　１６０と会合することが判明しているが、 ｇ　Ｉ）　１２０単独、又はｇ　ｐ１２０及びｇｐ４１が一緒、あるいはｇｐＨ ｌｉｏの非切断バージョンと特異的に会合し得るのであって、そのいずれかが、 アロエピトーブー明示するために膜成分とさらに会合する必要がある。例えば、 ＭＨＣｎの一部又は全部との会合が要求される。ＭＨＣによる提示は必要である とは考えられないが、特に抗原提示細胞の細胞膜と会合する場合に、アロエピト ーブーｇ　ｐ　１２０の主要なαヘリックスと会合するということが特に考えら れる。αヘリックスペプチドのＭＨＣＩ又はＭＨＣｎとの会合は、二の場合でさ え考えられる。

適用の可能性 本発明は、下記のものを含めた多数の分野での上記の物質の使用を意図するが、 本発明は必ずしもそれらに限定されない： ｉ）　ＨＩＶ誘発性エイズに対するワクチン。このワクチンは活性又は受動性で ある： Ｉｆ）　ＨＩＶ誘発性エイズの治療又は予防のための免疫療法： １ｉ１）　ＨＩ　Ｖ誘発性エイズに感染しやすい又は罹患中のヒトを確認するた めの診断試験及び方法；ｉｖ）　ＨＩＶ誘発性エイズの治療又は予防のための製 剤又は医薬品；及び ■）　可能性のある抗ＨＩＶ誘発性エイズ療法のための検定。

本発明め利点 したがって、本発明は、ＨＩＶ感染により誘発されるエイズの治療又は予防のた めのワクチンを提供することが可能である。さらに、そのワクチンは、ＨＩＶに よる連続感染の存在下でさえ、患者に免疫適格性を回復させ得る。

本発明はさらに、ＨＩＶ感染により誘発されるエイズの治療又は予防のだめの薬 剤を提供し得るし、並びにこのような薬剤の合成を意図し、それにより“いきあ たりばったり”実験の必要性を排除し得る。

本発明はさらに、ＨＩＶに感染した場合でも、エイズという病気を発病しにくい 個体を確認するための手段を提供し得る。

ＨＩＶ上のアロエピトーブーＧＶＨＤの作因宿主細胞の表面上で発現した場合、 又はそれに会合した場合に、ｇｐ１２０分子はアロエピトーブ一方法でＣＤ４＋ Ｔ細胞を刺激し、それによっである型のＧＶＨＤを生じることを、我々はここに 発見した。

したがって、エイズはウィルス感染によって引き起こされるにもかかわらず、こ の病気の病状は、Ｎ１Ｈｃを模倣又は妨害するウィルスのコートタンパク質に起 因し、対宿主移植片病に似た病気を誘発する。

より具体的には、細胞膜、ｇ　Ｉ）　１６０　、又はｇｐ４１と会合するｇｐ１ ２０上で発現するか又はそれに会合した場合は、外来ＭＨＣによって生じるもの と同様の作用が生じる。いくつかのＣＤ４＋Ｔ細胞により認識可能な会合部分が アロエピトーブーあって、それは異質遺伝子ＭＨＣｒ又はＭＨＣｎ（ＭＨＣＩ又 はＨの棟内変異体）を模倣するが、エイズの特徴的病状を生じるＭＨＣｎの模倣 であるということが最も考えられる。この模倣によりＧＶＨＤと同様の疾患が生 じる。この病気はまた同質遺伝子性ＭＨＣｎに制限される又は依存する免疫反応 の抑制又は削除も含む。ｇｐ１６０の作用も必要であり、あるいはＭＨＣｎモノ マーとの会合により増強される。

分子的に言えば、膜発現ｇ　ｐ１２０　／ｇ　ｐ４１は、外来又は異質遺伝子Ｍ ＨＣ１分子であると思われるような方法でＣＤ４と結合し、Ｔ細胞受容体と相互 作用する。異質遺伝子ＭＨＣｎと同様、細胞膜上でｇｐ４１と会合するｇ　ｐ　 １２０はＣＤ４＋Ｔ細胞の分画（ＨＩＶ誘発性エイズの場合は、お候群を引き起 こす。Ｔ細胞が生理学的に異質遺伝子ＭＨＣとの相互作用することを防ぐ機序は ないため、アロエピトーブーいかなる模倣も大多数の正常個体における少なくと もいくつかのＴ細胞を活性化する。したがって、はとんどの人々がＨＩＶ感染後 にエイズを発病しやすいことになる。

Ｔ細胞の助けを借りて抗体を産生ずるＢ細胞は、Ｔ細胞刺激によってそのように 行動する。アロエピトーブー作用によるＴ細胞刺激は本質的に行き当たりばった りであるので、したがって、ＨＩＶ感染に影響を及ぼすＢ細胞抗体産生の任意の 機会は少ししかない。したがって、ＨＩＶ感染は継続し、ＧＶＨＤと同様の症状 が発症する。

Ｇ　ｐ　１８０及びＧｐ１２０−ＭＨＣＩＩとの類似性アロエビトープがｇ　ｐ 　１６０と、又はおそら＜ｇｐ４１と結合したｇ　ｐ　１２０と、又はこれらの いくつかの組み合わせにより会合するか否かは定かでないので、本明細書中で用 いているように、ｇ　＋）　１２０及びｇｐ１６０は交換可能である。

ＨＩＶ糖タンパク質ｇｐ１２０、及び会合ｇｐ４１断片は、感染細胞の膜上で発 現される場合、おそらくアロエピトーブー形態で作用する。

ｇ　ｐ１２０がＨＩＶ会合異質遺伝子作用の不可欠部分であることが明らかであ る一方、それはｇ　ｐ１２０単独の作用ではなく、おそらくはｇｐ１８０の、又 はおそらくは細胞膜上でのｇ　ｐ１２０とｇｐ４１の会合であり得る。アロエピ トープ構造がＭＨＣＩ又はＭＨＣＩＩの存在により、ｇ　Ｅ）　１２０と同−細 胞膜上で直接、又は細胞が接触により相互作用する場合に、増強されるとも考え られるが、異質遺伝子作用がＭＨＣＩ又はＭＨＣｎの非存在下で観察される実験 が実施されたように、ＭＨＣＩ又はＭＨＣＩｒ分子がその作用に不可欠でないこ とは明らかである。

さらに、ＨＩＶの異質遺伝子作用が抗原提示細胞上でのｇ　ｐ　１６０発現に主 として限定されるが、その作用はｉｎ　Ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｊｖｏでの、Ｈ ＩＶ感染ＣＤ４＋Ｔ細胞のような他の細胞型によるｇｐ１２０　（又はｇｐｌＢ Ｏ）の発現によっても生じ得る。

細胞表面上での発現様式 ｇ　ｐ　１６０が感染細胞の表面で発現されることは公知である。ｇ　ｐ　１６ ０が熱衝撃タンパク質モチーフを発現することも知られている。このモチーフを 有するタンパク質はリゾソーム及びエンドシト−シス区画に蓄積される傾向があ り、それゆえ、ウィルスにより産生されるｇ　ｐ　１６０は膜会合形態でリゾソ ーム区画内に発現されると思われる。

ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩはともにエンドサイト−シス経路によって再生されるが 、これには抗原プロセッシング及び抗原提示に関係かある。それらが外性及び内 性ペプチドに暴露されるのはここである。次いで、ペプチド／ＭＨＣ複合体が細 胞表面に提示される。ウィルス感染細胞内のｇｐｌＢＯの細胞内経路は、ＭＨＣ Ｉ及びＭＨＣＩＩ分子のものを模倣し、エンドサイト−シスの小胞膜上でのその 発現後に細胞プロテアーゼがｇ　ｐ　ｔｅａ分子を切断する。

したがって、エンドサイト−シス膜表面で提示されるｇｐｌＢＯは、細胞プロテ アーゼによりｇ　ｐ　１２０及びｇｐ４１断片に切断するのに利用できる。次い で、ｇ　ｐ　１２０は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び抗原提示細胞のような感染細胞の表 面上でｇｐ４１とともに発現される。外細胞膜上に提示される場合、ｇ　ｐ　１ ２０及びｇｐ４１はともに、アロ反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞を刺激し得るのに十分に ＭＨＣＩ又はＭＨＣｒ１分子に似ていると思われる。この作用は、おそらく、さ らにｇ　ｐ　１２０／ｇｐ４に量体との複合体を形成することにより、又はＭＨ ＣＩ又はＭＨＣｎのような他の膜付子との、あるいはβ２ミクログロブリンのよ うなタンパク質との複合会合を形成することにより増強されると考えられる。

従来の観察 これは、５ｃｈｏｌｓ（Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｎｏ、３５７３．６ｔｈ　Ｉｎｔｅ ｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎｆ’ｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　ＡＩＤＳ、Ｓａｎ　Ｆｒａ ｎｃｉｓｃｏ、Ｃａ１ｉｆ’ｏｒｎｉａ、ＵＳＡ、２０ｔｈ−２４ｔｈ　Ｊｕｎ ｅ　１９９０）の観察を説明するものであり、彼はＭＨＣ■分子に対する抗体が ＨＩＶウィルスが出芽中の細胞膜と結合し得ることを立証した。使用したＴ細胞 株は活性化されるとＨＬＡＤＰ、ＤＱ、及びＤＲを発現するという事実にもかか わらず、ウィルス感染による感受性増大はＤＲと反応するモノクローナル抗体に よって検出されただけであった。本発明によれば、この現象は、出芽中のウィル ス（即ちｇ　ｐ　１２０　／　ｇ　ｐ４１）により発現された場合、ウィルスエ ンベロープ糖タンパク質はＨＬＡＤＲ（ＭＨＣＩＩ）エピトープと似た領域を示 すが、成熟ウィルスが放出された場合、ｇｐ１２０部分の消失後は示さないとい う仮定により説明される。したがって、ＨＩＶアロエビトープはＥ（ＬＡＤＲの 官能性エピトープである。

アロ刺激作用に対する別の可能性 ＨＩＶのアロ刺激作用に対する別の説明は、ｇ　ｐ　１２０が、おそらくはｇｐ ４１と組み合わさって、Ｔ細胞受容体とＭＨＣｎとを架橋結合する又は結合を増 強するのに役立ち、Ｔ細胞を見せかけ的に刺激するのに役立つというものである 。

しかしながら、我々の結果（下記の実施例４参照）は、アロ反応性子細胞を刺激 するために同質遺伝子ＭＨＣｎが存在する必要はないということを明らかに示し ている。ｇｐｌＢＯ及びＭＨＣＩを発現するがＭＨＣＩＩを発現しない、ＣＨＯ 細胞のような標的細胞は、ヒトＴ細胞を刺激することが示されたが、このほとん どが常態ではヒトＭＨＣＩＩとのみ相互作用するＣＤ４＋Ｔ細胞であった。ＣＨ Ｏ細胞単独では同等のＣＤ４＋Ｔ細胞集団を刺激せず、ｇ　ｐ　１２０の製剤を 用いても刺激は観察されない。したがって、ｇｐ１２０／ｇｐ４１としてＣＨＯ 細胞の膜上で発現されるｇ　ｐ　ｉｅ。

はおそらく、アロ反応性子細胞集団を刺激するような方法でＴ細胞受容体及びＣ Ｄ４と直接相互作用すると考えられる。

機序がどうであれ、ＨＩＶ誘発性エイズに感染しやすい個体においては、ｇｌ） １６０７０エピトープはＧＶＨＤに億た病状を生じる。

アロエビトープ刺激の作用 妊娠中のＴ細胞の初期選択（胸腺個体発生）は、自己ＭＭＣと強く相互作用する が、しかし抗原の非存在下での増殖によりその後自己ＭＭＣと反応しないＴ細胞 受容体を選択する。抗体の非存在下での増殖により外来ＭＨＣと反応するであろ うＴ細胞を削除する機序はない。このような排除の非存在下では、Ｔ細胞の大集 団は、相互作用し、そのＭＨＣが宿主ＭＭＣに十分に類似する場合には外来又は 異質遺伝子ＭＭＣにより刺激される受容体を有する。

外来又は異質遺伝子ＭＨＣに対する自然選択のための基礎はないので、自己ＭＨ Ｃに十分に類似した外来ＭＨＣ及び物質が宿主Ｔ細胞集団のある亜集団を人工的 に刺激し得るが、これがＧＶＨＤを引き起こす。

しかしながら、ｇ　ｐ　１２０は、ある程度の三次構造的相同をＭＨＣＩＩと共 有するが、おそらくはＣＤ４＋Ｔ細胞のおそらく２％位の、そしておそらくはそ れ以下でさえある小集団を刺激するのに十分にＭＨＣｎに似ているわけではない 。全体的異質遺伝子作用はさらに、クラス■受容体、ＣＤ４に対する非常に高い 親和性により増強されると考えられ、したがってｇ　ｐ　１８０及びＭＨＣ間に 殆ど類似性がないことがＣＤ４結合領域外に必要とされる。

さらに、アロ反応性子細胞がアロエビトープによって活性化される場合、比率は アロエビトープに制限されるようになり、特異的抗原と会合する同質遺伝子ＭＨ Ｃによってよりもむしろ異質遺伝子ＭＭＣにより優先的に刺激される。

この作用は非常に顕著であるので、細胞はついには自己ＭＨＣを認識する能力を 失い、ｇｐ１２０はＭＨＣＩＩの１，０００〜１０，０００倍も強＜ＣＤ４を結 合すると推定されるという事実によって顕著に増強されると考えられる。

アロ反応性子細胞集団の刺激は、概して、体重減少、成長阻害、発育不全を伴う 慢性免疫不全を引き起こす。この免疫不全の原因は、Ｔ細胞産生を刺激し続ける アロエピトープ発現細胞の継続的存在であるが、これに対する協調反応は生じな い。

正常反応では、ＭＭＣと会合する関連の抗原が選択的にＴ細胞産生を刺激し、し たがってＢ細胞が抗原又は侵入作因に対して特定される抗体を産生ずる。これは 抗原の減少を、したがって刺激の減少を引き起こし、そこでその系はＴ細胞及び Ｂ細胞の特定のクローンによって支配されるようになる。しかしながら、ＨＩＶ アロ反応性Ｔ細胞反応はいかなる抗原提示とも無関係であって、ｇ　ｐ　ｉｅｏ の細胞表面での存在にのみ依っている。この作用は任意のクローンの刺激を引き 起こすので、これは抗体産生細胞の、並びに細胞毒性Ｔ細胞の無秩序活性化を引 き起こす。

我々の観察の一つは、ｇ　ｐ　１２０主αヘリツクスに対応するペプチドによる 細胞毒性Ｔ細胞の産生の刺激が、会合抗原に関係なく、抗原提示細胞の無差別な 又は非特異的な殺害が可能な細胞毒性細胞を生じる、というものである。その結 果は、関連のＡＰＣの無差別除去により他の抗原に対する本物の免疫反応を生じ る可能性をさらに減少させるものである。

感染しやすさが増大することとは別に、アロ反応性子細胞の連続的増殖は、抗原 に対する免疫反応、特にＭＨＣＵ制限Ｔ制限及細胞反応る能力を比例的に減少さ せ、自己反応性抗体を発生させる。高ガンマグロブリン血症、自己抗体の存在、 及び胃損傷もその結果生じるが、これらはエイズにおいても観察される。

Ｔ細胞受容体の遺伝的変異の作用 近交系マウスの遺伝的背景がＭＨＣ及びＭＢＣ模倣体のアロエビトープ、例えば ＭＬＳａが認識されるか否かを支配することは公知である。したがって、少数の ヒト個体はアロエビトープとしてｇｐ１２０を認識しないことも考えられる。こ のような個体は、慣用的ウィルス抗原としてｇｐ１２０と反応し、ウィルスに多 量に感染しているにもかかわらず、おそらくエイズを発病しない。チンパンジー のＣＤ４分子並びにＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩ抗原の構造がともにヒトのものに非 常に似ているのに、ＨＩＶ感染チンパンジーにエイズ発病に対して免疫を持たせ るのは、はぼ確実にこの機序である。

したかって、そのヒトのＴ細胞かアロエビトープとしてｇ　ｐ　１２０を認識で きない場合には、ＨＩＶの生産的感染は起こるが、しかしエイズは決して発病し ない。考察を要する２つの現象か認められることが分かる。即ちウィルスとして のＨＩＶに対する免疫反応；及びｇ　ｐ　１６０に対するアロエビトープ反応で ある。大多数のＨＩＶ血清陽性個体においては、抗ウィルス及びアロエビトープ 反応が一緒に起こり、その結果、部分免疫及びエイズ感受性を生じる。アロ抗原 反応を欠＜ＨＩＶ血清陽性個体は、感染の結果としての病気に罹患しない。

チンパンジーにおけるＨ　Ｉ　Ｖｌｌ様様チンパンジーとヒトのＭＨＣの比較（ Ｐａｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｈｕｒａａｎ１＋ＩＩｕｎｏｌｏｇｙ　［１９８９］、 ２６．１０７−１２１　）から、チンパンジーのＭＨＣは、位置及び配列が少し ヒトのものとは違っているだけであることが立証されている。ヒト及びチンパン ジーのＴ細胞はともに、そのそれぞれのＣＤ４及びＭＨＣ１１分子と相互に作用 する。

ヒト及びチンパンジー間のＨＩＶに対する反応性における重要な差異は、これら の種のＴ細胞によって自然に発現される可変部遺伝子レパートリ−にある。細胞 膜上でｇｐ１２０／ｇｐ４１により提示される場合、チンパンジーＴ細胞レパー トリ−におけるアロ反応性子細胞の欠如は、チンパンジーにおけるエイズの発病 を前もって阻止する。逆に、ヒトにおいてアロエビトープとしてｇ　ｐ　１２０ を認識するＴ細胞が例えばわずか１〜２％又はそれ以下でも存在すると、ヒト集 団においてエイズに対する感受性が広範に誘発される。ｇｐ１２０／ｇｌ）４１ を認識するアロ反応性子細胞を欠く個体は、したがって生産的ウィルス感染を発 現し得るが、エイズを発病することはない。

Ｔ細胞受容体がｇ　Ｉ）　１２０をアロエビトープとして認識しない人々は、し たがって、ＨＩＶによる感染に対して必ずしも免疫されるわけではないが、エイ ズは免疫系がｇｐ１２０／ｇｐ４１をＭＨＣのアロエビトープとして認識する場 合に生じるだけであるので、ＨＩＶ誘発性エイズに対しては免疫される。

感染しゃすいＴ細胞集団の除去 アロ反応性Ｔ細胞亜集団を除去し、残りのＴ細胞から免疫受容能力を回復させる ことにより、エイズは治療し得ると考えられる。

上記のように、ｇ　Ｉ）　１２０アロエピトープの認識に関与するＴ細胞受容体 の領域は、Ｖα及びＶβ領域を含むドメインである。ヒトがエイズに感染しやす い場合には、Ｔ細胞受容体中に適切なＶα及びＶβの組み合わせを有するＴ細胞 のみがｇ　ｐ１２０に対してアロ反応性である。このＴ細胞集団は我々のデータ に基づけば、２〜１０％であると思われる。

Ｔ細胞レパートリ−は広範なりローン削除に耐性があり、比較的小さなＴ細胞集 団によって全範囲の免疫反応性が保持され得ることが知られているので、このア ロ反応性子細胞小集団の除去が免疫能力を低下させることはないと考えられる。

アロ反応性集団が１０％より大きい場合でも、一般的に残りのＴ細胞クローンは 、正常な、又はほとんど正常な防御の補体を提供するために変化を与え得る。

このように、Ｔ細胞クローンは除去され、Ｔ細胞レパートリ−の全体的変化は低 減されたけれども、ＨＩＶ感染が残存しているとしても、その個体はもはやエイ ズには感染しにくい。

このようなりローン削除後、残りのＴ細胞はｇ　ｐ　１２０に対してアロ反応性 でないが、互いの又はｇｐ１２０／ｇｐ４Ｌアロエピトープに類似したアロエビ トープのすべてがそうではないので、他のドナーＭＨＣ型に関しては依然として アロ反応性であると考えられる。

診断及び治療の可能領域 ｇｐ１２０／ｇｐ４１に対する個体のＴ細胞のアロ反応性は、エイズに対する個 体の感受性を示す。したがって、本発明は、ＨＩＶ誘発性エイズに対して抗原性 である人々の確認を可能にする。このようなデータは、ワクチン設計及び疫学と いった領域では重要なものであり、ＨＩＶ＋ではあるがエイズを発病しない人々 を治療する必要性が低減されるので、共同体の対エイズ経費を節減し得る。これ は、それ自体か望ましくない副作用を有する抗ＨＩＶ療法との接触を最小限にす ることにおいて抗原性集団にとっても有益である。したがって、エイズに感染し やすいヒトだけが、治療される必要がある。

Ｇ　ｐ　１２０の三次構造 Ｇ　ｐ　１２０の三次構造の解明に伴って、エイズの病因についての問題が解決 された。

構造の模型作りにより、かなりの問題が持ち出された。

Ｇ　ｐ　１２０は、結晶化しない大型の強力なグリコジル化分子であって、その 構造はＸ線結晶学では解明できない。二次構造に関しては一定の領域の分子を分 析できるが、これは特徴をほとんど明示せず、従来、追求する価値があるとは考 えられていない。

Ｇ　ｐ１２０の配列は公知であるが、ｇ　ｐ　１２０とＭＨＣ分子分子−ずれか との間に何らかの大きな配列相同性があるとは考えられなかった。しかしながら 、無理やり適合させずに、αヘリックス及びβシート構造の有望な領域を算出す るだけにして、ｇ　ｐ　１２０に関する分子模型作りを実施すると、ｇ　ｐ１２ ０及びＭＨＣ分子間に意外な程度の構造的相同が見出される。

重要な保存領域が優先権、並びに一般的に有用な、ｇｐ１２０の公知の配列に適 用されるＣｈｏｕとＦａｓｍａｎの法則のような理論的及び経験的要件を与えら れる場合、本質的には、ＭＨＣ様三次構造が予測される。ＭＨＣとの類似性は、 ｇｐ１２０分子における表面構造及び保存グリコジル化部位を考慮すると、かな り増強される。

Ｇ　ｌ）　１２０及びＭＨＣ間の類似性Ｇ　ｐ　１２０　、並びに〜１ＨｃＩ及 びＭＨＣＩＩは、非常によく似たαへワックス領域を有する。ｇ　ｐ　１２０分 子のある保存ドメインは、〜Ｉ　Ｈ−Ｃ主αヘリックスと強度の類似性を示すが 、これは−次Ｔ細胞受容体結合部位を構成する。この観察は、部分的に、本発明 に帰着した。

Ｇ　ｐ　１２０分子の強力なαヘリックス領域は、ＭＨＣ主αヘリックスと同様 の立体特性を有し、全体的構造に関連して、特に主βドメイン及びＣＤ４結合ル ープに関連して、同様の配向を有する。ｇ　ｐ　１２０のこのαヘリックスは、 本明細書中では、ｇｐ１２０の主αヘリックスを示す。したがって、ｇｐ４１は 、ｇ　ｐ　１２０と会合して、ＭＨＣ分子の抗原提示面に似た構造を形成するの に役立つ（図１参照）。

主αヘリックスのさらに厳密な分析から、ｇ　り　１２０及びＭＨＣ抗原間のさ らなる類似性が示される。特にＭＨＣ分子では、ヘリックスの一面から突出する 一部の塩基性残基が認められる。対応する群が、ＭＨＣのものと同一ではないが 、ｇ　ｐ　１２０αヘワツクスの対応する面から突出する。

しかしながら、ｇｐ１２０αヘリックスとＭＢＣのＩ及び■クラスのものとの間 の分子の識別を可能にする、第一のものから回転移動させた面上にｇ　ｐ　１２ ０αヘリツクスに関する別の群が認められる。

残基の第一の配分群は、Ｔ細胞受容体結合に重要であることが知られている。第 二群の近接性及び一般的保存性を前提とすると、この群は本発明の特別な標的で あるのみならず、Ｔ細胞受容体結合に影響を及はすものであると考えられる。こ の第二群は、今日までに分析されたすべてのＨＩＶ単離物中に顕著に保存されて いる。

補足説明 ＨＩＶのアロエピトープ作用は、主として、ＭＨＣ及びｇ　ｐ　１２０間のαヘ リックスの類似性、並びに残りの分子に対するこれらの領域の相対的配向に基づ いていると考えるのがもっともらしいし、アロエビトープ作用は、細胞膜と会合 させた場合のｇ　ｐ　１２０主αヘリツクス単独の使用によって観察されるか、 Ｔ細胞活性化に関与するｇ　ｐ　１２０及びＭＨＣ間の類似性は、必ずしもｇ　 ｐ１２０の主αヘリックスにだけあるわけではない。高親和性を有するＣＤ４に 結合するｇ　ｐ　１２０の能力は、おそらく、例えばＭＨＣｎを模倣するその能 力の一部を構成するものと思われる。

本発明の第一の目的は、ＨＩＶ誘発性エイズを予防するためにワクチンを提供す ることである。このようなワクチンは活性又は受動性であって、十分量の本発明 の物質を含有して： ＨＩＶのアロエピトープ構造に対する免疫反応を刺激し：又は ＨＩＶのこの成分に対して直接的に作用し：又はｇ　ｐ　１６０のアロエビトー プとアロ反応性であるそのＴ細胞受容体に対する免疫反応を刺激し：又はこのよ うなＴ細胞受容体に対して直接作用する。

本発明のワクチンは、本発明のどのような好適な物質をも包含する。しかし本考 察は抗体に限定されるけれども、本発明のワクチンはそのように限定されるもの ではないと理解されるべきであって、ワクチンに有用な他の物質は本明細書中に そして以下に詳細に記載される。

したがって、本発明のワクチンに用いる抗体は：ａ）ＨＩＶｇｐ１６０あるいは 一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエビトープを認識し、又はｂ）ＨＩＶｇ ｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエビトープを認識する ＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識する。

ａ）の種類の抗体は、ＨＩＶ感染によって引き起こされる免疫不全を軽減するた めにワクチン中に使用する場合、ＨＩ　Ｖｇｐ１２０　／ｇｐ４１に対するＴ細 胞アロ反応性を排除するための免疫反応を発生させるためにあらゆる誘発試験に 対して受動的意味で、又は活性的意味で用いられる。ｂ）の種類のものは、アロ 反応性Ｔ細胞クローンを抑制又は排除するために、活性ワクチン中に用いるか、 又は一般的に受動性ワクチン中に用い得る。

受動性ワクチン ｇｐｌ［ｆＯ（ｇｐ１２０　／ｇｐ４１）のアロエビトープを認識する抗体は、 できるならば、ＭＨＣｎをも認識するように普遍的であるべきでない。認識は、 ２つの理由から望ましくない。第一に、重要な自己タンパク質に対して特定され る抗体の固有の望ましくないことである。第二の理由は、ｇ　ｐ　ｉｅｏ以外の 物質を認識する能力は、ｇ　ｐ　１［ｉ０以外のものを結合することにより、抗 体か有し得るどのような作用をも弱めるのに役立つだけであるということである 。

この問題を回避するために、ｇｐ１２０／ｇｐ４１の普遍的認識を有する抗体が 産生され、次いでスクリーニングされてＭＨＣ反応性を除去するか、又は単一の 反応性を有する特異的抗体が、例えばハイブリドーマにより産生される。

例えば動物を免疫化し、そして所望の物質、即ちポリクローナル抗血清を分離す ることによる普遍的抗体の産生は、最終生成物質の含量又は特異性が不確定であ るために、一般的に望ましくない（しかしそれでもやはり本発明の範囲内に含ま れる）。

複数及び単数の特異的抗体抱合体は、モノクローナル技術により産生される。こ のような抗体は、すべてのｇｐｔｅＯ分子のアロエビトープ成分を認識し得るの に十分に特異的であるか、又は一つのみを認識し得る。いくつかの形態のｇ　ｐ １６０７０エピトープを認識し得る抗体は、可変性の親和性を用いてアロエビト ープドメインと反応する相補性決定域（ＣＤＲ）を有するか、又は例えば種々の ｇ　ｐ１６０単離物の共通のＴ細胞受容体結合特徴のみを示すペプチドに対して 反応するよう選択されるが、この場合、結合親和性は不変であるべきである。

ｇ　ｐ　１６０の単一単離物のアロエピトープ反応性を遮断する抗体は、ＨＩＶ の個々の株の異質遺伝子活性に対して強力な防御を提供する。一般に、治療効果 を広げるために、任意のワクチン中にいくつかの種類の抗体を併用するのはさら に有用である。

好ましいワクチンは、上記のような種々の特異性を有するある範囲の抗体を含有 する。

活性ワクチン アロエビトープに対する活性ワクチンは、アロ反応性Ｔ細胞受容体、即ちアロエ ビトープにより活性化されるＴ細胞に対して十分にｇ　ｐ１２０　／ｇ　ｐ４１ 又はｇ　Ｉ）　１６０を認識するＴ細胞受容体に対して特定される抗体を含む。

ｇ　ｐ　１６０を認識するＴ細胞受容体Ｖ領域ドメインは、抗体上の可変領域と 同様にＴ細胞受容体の可変部（Ｖ領域）がＴ細胞受容体の標的アロエピトープと の相互作用の特異性の決定に関与する程度に抗体Ｖ領域に類似する。したがって 、Ｔ細胞受容体アロエピトープ反応性領域を認識する抗体は、受動性ワクチンに 用いる抗体と交叉反応するＣＤＲを示す。このような抗体は、特異的なＡｂ２β 抗イデオタチオのＡｂｌ、即ちアロエビトープ特異的抗体である。

ｇ　ｐ１６０を認識するＴ細胞受容体のみに対して特異的である抗体の産生は、 多数の方法で達成される。一つの方法は、受動性ワクチンに用いるようなｇ　ｐ １２０　／　ｇ　ｐ４１アロエビトープ特異的抗体を産生ずること、そしてその 抗体で動物を免疫化してＡｂ２β抗イデオタチオ反応を生成することである。Ｊ ｅｒｎｅが記載したイチオタイブ／抗イデオタイプネットワーク反応は、抗原（ 又は、この場合はアロエビトープ）のイメージが免疫系に導入され、その後これ は、抗原がもはや系中に存在しなくても、抗原反応性であるＡｂ２β抗体を継続 的に産生ずることを保証する。これらのＡｂ２β抗体は、ＨＩＶの適切なアロエ ビトープに対する免疫反応としてＡｂ２β抗イデオタチオ反応を誘発することに より、本発明の活性ワクチンの意味で用い得る。

あるいは、アロ反応性Ｔ細胞受容体を発現するＴ細胞を単離し、ｇ　ｐ　ｉｅｏ のアロエピトープ決定因子に対する反応性に関してスクリーニングし得る。ｇ　 ｐ　１２０を結合するＴ細胞受容体を次にクローニングするか、又は細胞製剤と して用いて、適当な動物に抗体反応を生じさせる。あるいは、動物を関連のＴ細 胞受容体を発現する全Ｔ細胞で免疫化するが、しかしこれは疑似反応を生じると 思われる。その結果生じる抗体を、次に、本発明の活性ワクチン中に用いる。

本発明の活性ワクチンに適用可能な他の要件は、受動性ワクチンに関して上記し たものと同様の、例えば抗体特異性及び抗体の種類の範囲である。

ウィルス含有ワクチン 活性ワクチンは全ＨＩＶを含有し得るが、この場合、アロエピトープ以外のウィ ルスの成分に対する反応を生しるのが望ましい。したがって、免疫反応を引き出 すのに有効な量のＨＩＶ及びそのための好適な担体を含有するＨＩＶ誘発性エイ ズに対するワクチンが提供されるが、上記のＨＩＶは、あらゆる宿主ＣＤ４＋Ｔ 細胞受容体によりアロエビトープとして認工される有効なｇ　ｐ　ｉｅｏアロエ ビトープあるいは一つ又はそれ以上のその生成物質は有していない。

ＨＩＶは、非エイズ誘発性感染の危険を避けるために、任意の慣用的手段で殺害 するのが好ましい。

ワクチン用のウィルスを産生ずるためには、上記のｇｐ１６０アロエビトープ、 あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質がヒトｃＤ４＋Ｔ細胞受容体を刺激す るのに役に立たなくするために、上記のｇ　ｐ　１６０アロエピトープに関する 遺伝暗号が欠失又は突然変異されるようにＨＩＶの株を遺伝的に変化させること により、これを行い得る。このような突然変異父は欠失は、単一塩基の欠失又は 突然変異のみを、あるいはアロエピトープが効果的に不活性化される場合は全遺 伝子の欠失を包含する。いかなる慣用的方法を用いて、特定部位の突然変異誘発 、又は不完全遺伝子による形質転換のような突然変異又は欠失をなし遂げる。

一般的要件 概して、受動性及び活性ワクチンに関する上記の要件は、Ｔ細胞受容体に対する 受動性及び活性ワクチンにも適切である。

本発明により提供されるどのようなワクチンについても、抗イチオタイブ抗体を 、又は適切な場合にはさらに抗イチオタイプ世代を用い得る。第二世代（Ａｂ３ ）抗イチオタイブ抗体は、例えば免疫療法に関して本明細書に後述される活性ワ クチンを提供する場合に有用である。

本発明のワクチンに使用するための抗体は、必ずしも完全に天然のものである必 要はなく、例えば下記の“ペプチド″の項に記載されているようなペプチド配列 を含有する工学的に処理された抗体が有用である。

抗体は、適切な標的エピトープと反応性の単−Ｖ領域をコードする遺伝子配列（ 単一ドメイン試薬）を用いて、又は動物中に産生された抗体からのＣＤＲを用い て、外来タンパク質に対するあらゆる悪反応を最小限にするためにこれらをヒト 抗体中に挿入して、工学的に処理される。

抗イチオタイブ又は工学的処理単一ドメイン抗体の産生及び使用の利点は、Ｔ細 胞受容体のような自己タンパク質、・又はＨＬＡのαヘリックスの固有の耐性を 克服し得ることである。ｇ　Ｉ）　１６０は少なくともいくつかの点で自己抗原 に似ているため、適切なペプチド配列に対して直接免疫反応を起こさせるのは困 難であるが、しかしこの拘束は、抗イチオタイブ抗体又は選択Ｖ領域ドメインを 有する工学的処理抗体を用いる免疫化には当てはまらない。反応は、ＨＩＶ血清 陽性であり且つエイズを有する患者においてさえ、通常、Ｉｇ可変領域に対して 生じ得る。

したかって、工学的処理抗体は、抗イチオタイプワクチンに使用される。

本発明に従って使用する抗体は、診断に用いるにしても治療に用いるにしても、 適切ならばモノクローナルでも又はポリクローナルでもよいと思われる。これら と等価の抗体は、例えば・抗体のＦａｂ’断片、例えばＦａｂ、Ｆａｂ　’　、 Ｆ　（ａ　ｂ　’　）　２　、及びＦ■；イチオタイブ：単一ドメイン試薬ある いはそれから又は単離ＣＤＲドメインから工学的に処理された抗体を包含する。

他の好適な修飾及び／又は薬剤は、当業者には明らかである。

上記の抗体の模倣型が、本発明にしたがって用い得ると考えられる。模倣型とい う用語は、本明細書中で用いる場合、所定の抗体のバラトープを結合するために 特に合成されたペプチド又はペプチド誘導体を意味する。模倣型は、Ｇｅｙｓｅ ｎ、）１．Ｍ、、ａｔ　ａｌ、（ＰＮＡＳ、［１９８４］、　８１．３９９８− ４００２及びＰＮＡＳ０９８５］、　８２，１７８−１８２）　（この記載内容 は、参照により本明細書中に含めるものとする）の方法に従って調製する。

下記の“ペプチド°の項に記載されているようにペプチドは、直接用いてもよい し、又は大きな構造の一部となり得るし、そして例えば抗体を産生ずるために担 体上に提示されるが、ｇ　ｐ　１２０ペプチドは、自己の資質により十分に又は 強力に免疫原性である十分に強いヘリックス形成体であるとみなされる。好まし いペプチドは、ｇｐ１２０の主αヘワックスの実買的部分又は全部に相当する。

このペプチドは細胞毒性検定においてアロエピトープ作用を生じ得るが、ＨＩＶ 感染か起きた場合、免疫化配列と非常によく似るように又は同一に切断された場 合でも、自然配列がエイズを引き起こせないように、耐容化量で、例えばワクチ ン中に０４１〜２００μｇ／用量（この場合、用量は０．５１が適している）、 特に１〜１００μｇノ用量、及び特に１０〜５０μｇ／用量で用い得る。特に好 ましい配列は、ＴＫＡＫＲＲＶＶＥＲＥＫＲであるが、他のものも後述する。

抗体を産生させるために、及び免疫を発生させるために本発明のペプチドの使用 を考慮する場合、すべてのＨＩＶ単離物が、例えばあらゆる免疫又は検定に対し て被検体であることを保証し、そしてウィルスがいかなるワクチンの作用を逃れ るために防御的に突然変異できないことを保証する手助けとなるある範囲のペプ チドを生成するのが望ましい。

本発明はまた、上記のような有効量の物質を提供し、その物質をそのための好適 な担体と接触させることを包含する、上記のようなワクチンの製造方法に及ぶと 考えられる。

患者に対して免疫原性であるドメインを発現する大量の非ヒト抗体の投与は、期 間中、ワクチンの作用を中和し得る免疫反応を十分に誘発するが、これは、患者 が既にエイズを発病している場合には、初期には起こりそうもない。

この問題は、上記のように、ＣＤＲ（相補性決定領域）移植により回避されるが 、この場合、関連の特異性を有する抗体は非ヒト動物中に、そしてｃＤＮＡレベ ルでヒト抗体分子中に移植された分子の有効領域、即ちＶ領域に生じる。

これは、公知の技術により達成される。

活性ワクチンは、生産的感染を防止し得るよう、患者における全標的抗原と直接 相互作用するのに十分な抗体を含有する必要がある受動性ワクチンで必要とされ るよりもかなり低いレベルの、又は等価の抗体を要する。活性ワクチンにおいて は、発生する適切な免疫反応は継続的で、標的エピトープの身体負荷に比例する 。投与抗体のＶ領域に対する抗体反応は、ｇ　ｐ　１２０のアロエビトープ決定 因子に対するＴ細胞関与を排除するのに役立つ受動性ワクチンの方法及び特異性 での抗体反応を誘発する。

本発明のワクチンの投与及び治療法は、年齢、体重、及び患者の全身状態を考慮 して、状況により変化する。

ワクチンは、自己十分用量として、又はある期間にわたって一連の用量として投 与する。

免疫を増強又は保持するための投与の反復は、後に、便宜上約３か列後に実施す るのが一般的に望ましいが、このような増強投与は、初期に又は患者の人生の残 りの期間中いつでも実施してもよく、多くの場合に必要である。

薬物等級食塩水を単数又は複数の抗体のための担体として用いて簡単なワクチン を提供し得る。しかしながら、活性ワクチン用のこのような処方物に対する抗イ チオタイブ反応は非常に強力であるわけではないので、しばしばアジュバントを 用いるのが好ましい。

本発明にしたがって使用するのに特に有用なアジュバント及び担体タンパク質は 、キーホールリムペット（ｋｅｙｈｏ　１ｅ　ｌ１ｉｐｅｔ）　ヘモシアニン（ ＫＬＨ）、ムラミルジペプチド、及びミョウバン製剤である。これらの物質を用 いると、Ａｂ−２反応を大いに増強し、したがってこのような物質を含有するワ クチンは、本発明の特に好ましい態様を構成する。

受動性ワクチンでは、アジュバントの必要はない。しかしながら、抗イチオタイ ブ反応を生じるものである場合には、アジュバントは、免疫刺激量のモノクロー ナル抗体（ＭＡｂ）とともに、有用である。

アジュバントは、同−又は異なる製剤中にＭＡｂと一緒に、又はワクチンの投与 の時期とは異なる時期に別々に投与する。

本発明のワクチンは、通常は慣用的経路、例えば静脈内、腹腔内、筋肉内、又は 皮下経路に依る注入によって投与する。他の好適な経路としては、皮肉接種、又 は微粒子エーロゾルによる投与が含まれる。

このようなワクチンは一般に、薬学的に許容しうる担体及び任意にアジュバント 、ワクチンを体液と等張にする物質、及び必要ならば風味料、乳化剤、及びその 他の成分を包含する。

上記のようなワクチンは、同時に又は一定期間中に、好適には週単位で、何度か に分けて投与し得る。

抗体及び細胞株産生の方法 Ｔ細胞受容体に対して抗体を生じさせることか必要な場合は、このような細胞は アロ反応生成物質としてＭＨＣｎでなく　ｇ　ｐ　１２０を認識するのて、ｇ　 ｐ　１６０アロ反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞を用いるのか好ましい。好適な細胞株は、 本明細書中で例証されているように、容易に産生じ得る。

必要な抗体を得るためのプロトコールは、鰯歯類、ウマ、同様の、有蹄類、又は 霊長類のような好適ないかなる動物で、並びに当業界で公知の標準技術によって 収穫された抗体発現細胞及び生じたモノクローナルハイブリドーマにおいて実施 し得る。

必要な種類のＴ細胞を産生ずるためには、種々のプロトコールがもくろまれる。

例えば、同質遺伝子ＡＰＣ（抗原提示細胞）及び末梢血リンパ球（Ｐ　Ｂ　Ｌ） は、公知の方法で得られ、単離される。次いで２種類に分離される。次に、ＡＰ ＣをＨＩＶでパルスする。これによってＨＩＶはＡＰＣに取り込まれ、その結果 生じたウィルスのエンベロープ糖タンパク質が細胞膜上に発現される。次にＨＩ Ｖ感染ＡＰＣを用いて同質遺伝子及び異質遺伝子Ｔ細胞を刺激する。

増殖したＴ細胞を次に収穫し、さらにＨＩＶパルス化ＡＰＣに導入する。その周 期を数回繰り返して、ｇ　ｐ１２０にアロ反応性のＴ細胞の集団を得る。このよ うな細胞増殖して、膜会合形態のｇ　ｐ　１２０　／　ｇ　ｐ４１を適切に発現 し、そしてｇｐ１２０／ｇり４１による抗原提示だけに制限されることさえある 。制限Ｔ細胞クローンは、初期アロ反応性子細胞プールから単離される。

上記の産生され１コｇｐ１２０制限Ｔ細胞かｇ　ｐ　１２０に対してアロ反応性 であることを保証するためには、それらを、例えばｇ　ｐ　１６０をコードし、 膜上にｇｐ１２０／ｇｐ４１を発現するＤＮＡでトランスフェクトさせた鰯歯類 細胞に導入する。増殖する（上記と同様の方法で）Ｔ細胞は、ｇｐ１２０アロ反 応性である。しかしながら、このようなアロ反応性は、ｇｐ１２０／ｇｐ４１ア ロエピトープにだけの制限を示さない。

制限されたｇｌ）１２０／ｇｐ４１アロエビトープであるＴ細胞を産生ずるため には、さらに上記で産生されたｇ　ｐ　１２０／ｇｐ４１アロ反応性Ｔ細胞株の 抗原特異的反応性に基づく選択を要する。この工程によって得られるＴ細胞の増 殖は、抗原特異的且つｇ　ｐ　１２０制限的である。

これらのプロトコールにより得られる２種類のＴ細胞は、抗原に対するいかなる 要件も伴わずに膜発現ｇ　ｐ　１２０に対して増殖するのみであるか、又はその 他のＭＨＣアロエピトープの存在下でなく、ｇ　ｐ　１２０の存在下で抗原に暴 露された場合に抗原特異的方法で増殖するのみである。

したがって、これら２つのＴ細胞は本明細書中ではａ）ｇ　ｐ　１２０特異的、 及びｂ）抗原特異的、ｇ　ｐ　１２０制限として示される。

有用なＨＩＶ株 ｇ　ｐ１２０特異的及び制限Ｔ細胞を調製するための上記のプロトコールにおい ては、技術をひどく妨害する恐れがあるので、培養を調製するために用いるＨＩ Ｖは生産的感染を生じ得ないようにする必要がある。したがって、我々は逆転写 酵素遺伝子を欠失するＨＩＶ突然変異株を調製し、これを細胞に結合し、内在化 （インターナライズ）する。

成熟ピリオンは突然変異株ウィルスＤＮＡをコードするプラスミドでトランスフ ェクトすることにより産生され得るに過ぎない。付随の実施例（１）は、この突 然変異株の産生方法を説明する。

その他のＨＩＶ逆転写酵素欠失突然変異株は、例えば、Ｔ、Ｆｏｌｋｓ　ｅｔ　 ａｌ、、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１Ｂ４：２８０；　Ｍ、Ｌｉｇｈｔｆｏｏｔ　ｅ ｔ　ａｔ。

（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、８０ニア７ｌ−７７５）；及びＨ，Ｇｅｎｄｅｌｍａｎ　ｅ ｔ　ａｌ、（Ｖｉｒｉｏｎ１６０：３２３−３２９）　に記載されている。

構築された突然変異株は、Ｊ、Ｈａｎｓｅｎ等（ＥＭＢｏ　７：２３９２−３８ ６７）により説明されており、彼らはクローン化ＰＯＬ遺伝子を用いて、ＰＯＬ 遺伝子からの２つのＫｐｎｌ制限酵素部位に結合される断片を除去することによ り調製される突然変異株を記載しているが、Ｍ、Ｔｔｓｄａｌｅ等（ＪＪｉｒｏ ｌ、８２：３６６２−３６６７）は同様の突然変異を構築している。

本発明はさらに、ウィルス又は感染しゃすいＴ細胞クローンに対して特定される ことにより、ＨＩＶ誘発性エイズを治療するための免疫療法を提供する。したが って、本発明による免疫療法は、ｇ　ｐ　１２０又はｇ　Ｉ）　１６０に対して アロ反応性であるＣＤ４＋Ｔ細胞クローンを除去するのに、又は感染におけるア ロエピトープに対して直接作用するの１こアロ反応性クローンの除去は、そこで の感染しやすｕ）Ｔ細胞クローンの増殖が中止され、それによりエイズ症状力（ 逆転されることを意味する。ＨＩＶ誘発性エイズ罹患者の治療は、ＧＶＨＤ様反 応に関与するクローンを排除し、ｇｐ１２０に対してアロ反応性でない正常Ｔ細 胞集団のみをそのままにすると、これは慣用的に環境抗原に反応する。

治療方法 免疫療法は、上記のようにワクチン接種と同様の方法で実施する。本発明の免疫 療法に用い得る物質は、ワクチンに関して上記したものと同様である。これらは 、例え＋ｉ抗体を用いる活性及び受動性免疫療法を含む。本発明の免疫療法は、 一般に抗体に関して記載するが、そのよう１こ限定されるものではなく、本明細 書の“ペプチド°の項（こ後述するような他の物質も用い得る。有用な抗体叱例 え（ｆワクチンとして用いられるものと同様の特性を有する力く、アロエビトー プ構造のｇｐ１２０／ｇｐ４１よりもむしろ主（二Ｔ細胞受容体又はＴ細胞受容 体生成物質に特定されるの力く好ましい。後述するように、免疫療法剤には、Ｔ 細胞受容体を代表するペプチド、同様にｇ　Ｉ）　１２０構造に由来するペプチ ドと類似の範囲のペプチドか含まれる。

免疫療法ワクチン 本発明の免疫療法は、アロ反応性子細胞受容体又はＨＩＶを標的にする。免疫療 法の目的は、ＨＩＶ誘発性エイズを予防することではなく　（ワクチン）、ＨＩ Ｖ感染に起因する免疫不全を治療することである。

したがって、活性及び受動性形態の療法がもくろまれ、そして両者が用いられる が、もしあれば、感染段階が選択に影響を及ぼす傾向がある。

活性免疫療法 活性免疫療法に用いる薬剤は、エイズに向けて進行を開始している患者における ＨＩＶアロエピトープ又はアロ反応性子細胞に対する抗体反応を引き出すために 使用されるか、もしくはウィルス又は細胞に直接作用する。あるいは、薬剤、又 はワクチンは、ウィルスを排除するか又は反応性Ｔ細胞のアロエビトープ刺激を 防止するために、アロエピトープを結合し、又は反対に反応を生じさせるのに役 立つ。

活性免疫療法は、反応で産生される抗体のすべてが必ずウィルス又はアロ反応性 子細胞受容体を認識するということが保証されるわけではないので、特に好まし いわけではない。好ましい活性免疫療法は、下記の“ペプチド”の項に記載され ているような物質を使用する。しかしながら、活性ワクチンは、例えばアロ反応 性子細胞の免疫遮断又は抑制に耐えるために用い得る。アロ反応性子細胞クロー ンの抑制の継続的保持は、これが新規のアロ反応性クローンが出現しないことを 保証するので、好ましい長期療法である。

感染しゃすいＴ細胞クローンを排除するための免疫療法は、患者はＨＩＶ＋であ るがエイズの症候を示さないが、エイズが発病する危険性が高い場合にも用い得 る。

受動性免疫療法 ワクチンの含量が公知であって、例えば活性免疫療法の成分に対する二次反応を 待たねばならないということもなく、アロ反応性子細胞を除去するのにただちに 有効な抗体が利用できるので、受動性免疫療法が一般的に好ましい。

受動性免疫療法の抗体を、例えば抗Ｔ細胞作用をさらに増強するために、又はア ロエピトープを有する細胞を破壊するために、好適な毒素又は補足活性剤と結合 させてもよい。

好適な毒素は当業界で公知であって、毒性放射性同位元素、重金属、及び酵素、 並びにリシンのような天然毒素を包含するが、これらは細胞当たり１又は２個の みの分子のレベルで作用し得る。

その他の要件 その他の要件は、上記の“ワクチン”の項に記載したものと一般的に同様であっ て、好適な抗体の産生方法、個々のワクチンにおける抗体型の変異、投与形態等 が含まれる。

本発明にしたがって使用する抗体は、診断的使用であれ、治療的使用であれ、モ ノクローナル又はポリクローナルが適切であると考えられる。これらの抗体等傷 物は、例えば：抗体のＦａｂ’断片、例えばＦ　ａ　ｂ　、％Ｆ　ａ　ｂ　’　 、Ｆ　（ａ　ｂ　’）２、及びＦｖ：イチオトーブ：又はＣＤＲ移植の結果を包 含する。他の好適な修飾及び／又は薬剤は、当業者には明らかである。

診断的使用 本発明はまた、アロ反応性子細胞受容体、ＨＩＶ又はそれらを認識する抗体のよ うな物質の検出のための診断技術を提供する。

本発明のいかなる物質も好適な診断技術に用い得るが、考察は一般的に抗体に限 定されている。本発明の技術はそのように限定されるものではない。

検出するのが一般的に最も望ましい種々の部分としては、ＨＩ　Ｖ、アロ反応性 子細胞受容体、及び抗ＨＩＶ抗体が挙ＨＩＶの検出に適した抗体は、ＨＩＶｇｐ １８０．あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピトープを認識する ものである。このような技術の有用性は、より一般的にＨＩＶを検出し得るその 他の技術が商業的に利用可能であるという事実によって、限定されがちである。

しかしながら、Ｈ’ｌ　Ｖを診断するための上記の技術の利点は、その技術をよ り一般的な診断技術と組み合わせて用いることにある。後者の技術がＨＩＶを診 断するが、本発明によればそうでない場合には、感染株に対してアロエビトープ 反応性のＴ細胞は患者に出現又は発生しないので、感染はエイズを誘発しないと 思われる。

アロ反応性子細胞受容体の検出 より一般的に使用が可能なのは、アロ反応性子細胞受容体検出のための技術であ る。ｇ　ｐ１２０アロ反応性Ｔ細胞受容体の検出は、個体がＨＩＶ誘発性エイズ に感染しやすいかどうかを表示し、アロ反応性子細胞受容体の存在が感受性の診 断に役立つことを示す。

アロ反応性子細胞受容体の存在に関して、いかなる時期でも個体をスクリーニン グしてよい。アロ反応性子細胞受容体が、ＨＩＶ感染の非存在下で、個体中に特 に高頻度で見出される場合には、所望により、感染を回避し又はエイズを予防す るために、上記のように感受性のＴ細胞を排除するための製剤投与のような好適 な措置をとる。

アロ反応性子細胞受容体のスクリーニングにおけるペプチドの役割 ｇ　ｐ　１２０のαヘソックスに似たペプチドを用いて、アロ反応性子細胞受容 体を直接検出し得る。このようなペプチドは、好適なビヒクル（例えば赤血球） 上に提示される場合は、可変性の親和性によりアロ反応性子細胞のＴ細胞受容体 と結合し得る。このようなペプチドは、ペプチドに特異的なＴ細胞受容体を発現 するＴ細胞のロゼツト形成を促すが、非反応性Ｔ細胞受容体は伴わない。ペプチ ド結合子細胞の定量は、個体におけるその普及を直接示し、ＨＩＶに感染した場 合に個体がエイズに感受性であることを示す。

ペプチドの診断的使用は、担体（通常は細胞）又はウィルス粒子上にｇ　ｐ　１ ２０により提示される敏感な被検者におけるＴ細胞増殖反応の測定によるバイオ アッセイより好ましいことを立証し得る。

エイズ発病に対する感受性の診断は、エイズが明白な場合でさえ、感染後に実施 し得るが、しがしこの場合、使用は一般的に治療効果のモニタリングに限定され る。前者の場合、アロ反応性子細胞の欠如は、ＨＩＶ＋患者はｇｌ）１２０に対 してアロ反応性のＴ細胞集団を有していないので、その患者はエイズを発病しな いことを示す。したがって、このような患者に対しては治療は必要ないが、しが し一般的に、後期のアロ反応性クローンに対してこのような人々をモニタリング するのが得策である。

匡−匝 したがって、本発明は、以下の： ａ）　ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープ： ｂ）　ＨＩＶｇｐ１８０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体。

ｃ　）　ＨＩ　Ｖ　ｇ　ｌ）　１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質 のアロエピトープを認識する物質：及びｄ）　ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又 はそれ以上のその生成物質のアロエピトープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を 認識する物質から成る群から選択される物質であって、細胞膜上に提示される場 合には上記のアロエピトープがｇｐ１６０、あるいは一つ又はそれ以上のその生 成物質と会合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖検定で提示される場合には少なくとも一つ のＣＤ４＋Ｔ細胞クローンの増殖を刺激する物質の検出のための診断技術であっ て、検定試料を：ａ）　ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成 物質のアロエピトープを認識し、又はｂ）　ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又は それ以上のその生成物質のアロエピトープを認識するＣＤＪ＋Ｔ細胞受容体を認 識する検定物質であって、好ましくは上記のアロエピトープを認識しないＣＤＪ ＋Ｔ細胞受容体を認識しない物質で、検定するのに望ましい物質により選択され る物質と接触させ、その後、上記の物質の結合を検定することから成る技術を提 供する。

診断を実施するのに適した技術は、当業界で十分説明されている。これらは、標 的アロエピトープの存在又は他の点を確定することを意図するだけの簡単な定性 技法から、一般により複雑な定量技法まで様々である。

例えばアロ反応性Ｔ細胞受容体の存在又は非存在に関する試験は、単に、調製Ｔ 細胞試料を使用し、その試料を適切な抗体の標識化製剤と接触させ、次いで余分 な抗体を洗い落とすことから成る。次に、残りの抗体を適宜、例えばＦＡＣ３分 析、蛍光顕微鏡、又は後述のようなその他の技法により検出する。

定性的、且つ十分公知の抗体ベースの技法としては、例えば異質遺伝子ＥＬＩＳ Ａ（酵素連鎖イムノソルベント検定ｅｎｚｙｍｅ　１ｉｎｋｅｄ　１ｍ１ｕｎｏ ｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ）　％−又は二工程ＲＩＡ　（ラジオイムノアッセ イ）、及びサンドイッチＲＩＡが挙げられる。このようなイムノアッセイのため には、あらゆる慣用的操作が用いられる。

操作は：例えば好適なｇｐ１２０又はＴ細胞受容体標準を１２５１又は３５Ｓの ような放射性同位元素が、あるいはホースラディッンユベルオキシダーゼ又はア ルカリ性ホスファターゼのような酵素で標識し、そして非標識化試料とともに該 当する抗体と接触させて、そこに二次抗体を用いて分析される一次放射能又は固 定化酵素と結合させる（コンペティティブアソセイ）；あるいは、試料中のｇｐ １２０又はＴ細胞受容体を該当する固定化抗体と反応させ、放射性同位元素−又 は酵素標識化抗ｇ　ｐ１２０又は抗Ｔ細胞受容体抗体をその系と反応させて、放 射能又は酵素を検定する（ＥＬＩＳＡ〜サンドイッチ検定）ように実施するのが 適している。好適な場合には、他の慣用的方法を用いてもよい。

上記の技法は、実際上は、“一工程°又は“二工程”検定として実施する。“一 工程″検定は、抗原を固定化抗体と接触させ、洗浄せずに、その混合物を標識化 抗体と接触させることを包含する。゛二工程′検定は、混合物を標識化抗体と接 触させる前に洗浄することを包含する。好適であれば、他の慣用的方法を用いて もよい。

ｇ　Ｉ）　１２０又はＴ細胞受容体及び／又は抗体の酵素及び放射能標識は、慣 用的方法で実施し得る。チロシン基の放射能標識は、タンパク質を、好適には１ ２５Ｉ標識化ヨウ化ナトリウムの形態の放射性ヨウ素の存在下で、グルコースオ キシダーゼのような酵素、又は別の作用の穏やかな酸化剤、例えばクロラミンＴ に暴露することにより実施するのが適している。

その他の標識法としては、一般に、例えばゲルタールアルデヒドにより、酵素の 活性に悪影響を及ぼさないように特異的に、酵素と抗原、又は該当する抗体を共 有結合することが挙げられるが、この場合、酵素が依然としてその基質と相互作 用し得ることを意味するが、検定を実施するのに十分な活性が残存する場合はす べての酵素が活性である必要はない。実際、酵素を結合するためのいくつかの技 法は非特異的であって（ホルムアルデヒドを使用する場合のように）、ある比率 の活性酵素を生じるだけである。

通常は、支持体上に検定系の一成分を固定化し、それにより系の他の成分をその 成分と接触させて、労力と時間を要することなく容易に除去し得るのが望ましい 。第二段階が第一段階から固定化され得るが、普通は一工程で十分である。

支持体上に酵素自体を固定化することかできるか、しかし固相酵素が必要な場合 には、抗体に結合し、抗体を支持体に添付することにより、一般に最もうまく達 成されるが、このモデル及び系は、当業界で十分公知である。ポリスチレンに簡 単に暴露することが、支持体を提供するのに適している。

標識化に使用可能な酵素は特に限定されないが、例えばオキシダーゼ群の成員か ら選択される。これらは変色により測定されるように、０２発生酸化活性からの 電子の除去を触媒する。還元酵素を用いてもよい。

他の技法としては、ウェスターンブロッティング（Ｔｏｖｂｉｎ　ｅｔ　ａｌ、 、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（１９７９）、　７８．４３５０）が 挙げられるが、この場合、例えばｇ　ｐ　１２０又はＴ細胞受容体の好適に処理 された試料をＳＤＳ　ＰＡＧＥゲル上で処理し、その後ニトロセルロースフィル ターのような固体支持体に転移（トランスファー）する。次に、抗ｇ　Ｉ）　１ ２０又は抗Ｔ細胞受容体抗体（非標識化）を支持体と接触させて、標識化タンパ ク質Ａ又は抗イムノグロブリン（好適な標識としては　＋２Ｊ１ホースラデイツ シユペルオキシダーゼ、及びアルカリ性ホスファターゼが挙げられる）のような 二次免疫試薬により検定する。

酵素の他に、その他の好適な標識としては、放射性同位元素、例えばヨウ素（１ ２５１，１２１１）、炭素（”Ｃ）、イオウ（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、 インジウム（＋１２１０）、及びテクネチウム（”−ＴＣ）、、蛍光標識、例え ばフルオレセイン及びローダミン、並びにビオチン、及びフィコエリトリンが挙 げられる。

診断のための試料は、一般に、血液又はリンパ系から採取するが、所望により、 他の供給源を用いてもよい。

ｆｎ　ｖｆｖｏイメージングが望ましい場合には、この目的にかなったマーカー は、実質的に抗体結合を妨げず、外部検出が可能なものである。好適なマーカー としては、Ｘ線撮影、ＮＭＲ，又はＥＳＲで検出されるものが挙げられる。

Ｘ線撮影法に関しては、好適なマーカーとしては、検出可能な放射線を放射する が、患者に明らかに有害でない、例えばバリウム又はセシウムのような任意の放 射性同位元素が挙げられる。ＮＭＲ及びＥＳＲに適したマーカーとしては、一般 に、例えば関連のハイブリドーマのための栄養素を好適に標識化することにより 抗体に取り込まれるシュウチリウムのような検出可能な特徴的スピンを有するも のが挙げられる。

ｉｎ　ｖｉｖｏイメージング法の場合には、放射性同位元素（例えば、＋３１１ ．　＋１２１　ｎ、９９１１７ｃ）、放射線不透過性物質、又は核磁気共鳴で検 出可能な物質のような適切な検出可能イメージング部分で標識化された抗体又は 抗体断片を、実験される被験者に導入する（例えば非経口的に、皮下に、又は腹 腔内に）。注入する放射能の量は、通常、例えばテクネチウム−９９１１では、 約５〜２０ミリキユリーの範囲である。

製薬的使用 （Ａ）ポリイオン性抗ＨＩＶ化合物 本発明はさらに、ＭＨＣＩＩの主αヘリックスに対応するｇ　＋）　１２０のα ヘリックスの特徴的に荷電した領域と相互作用する化合物を提供する。これらの 化合物は、膜結合ｇｐ１６０によるＴ細胞のアロ反応性誘導を遮断し得る。

用途 このような化合物は、抗エイズ剤として有用である。本化合物の分子配置は、本 化合物がｇ　Ｉ）　１２０のアロエビトープ領域と相互作用又は結合するような ものである。したがって、これらの化合物をＨＩＶ感染者に投与することは、Ｔ 細胞受容体によるｇｐ１２０／ｇｐ４１アロエピトープの認識の遮断によってエ イズの発病を予防するのに役立つ。

誘導設計 本発明の特別の利点は、このような薬剤は経験的調査によりもはや見出される必 要はないということを知った上で、そしてＭＨＣはあるにしてもほとんど影響さ れないということを知った上で、ＨＩＶに特異的な薬剤を生成する能力によって もたらされる。

ワクチンに関して上記したように、化合物の効力を弱め、実際に免疫系に有害な 影響を及ぼすので、ＭＨＣを結合し得るように化合物を工学的に処理するのは一 般的に望ましくないが、これらの第一の要因は、さらに意味を持つものと思われ る。

ｇｐ１２０構造の関連性 これも上記されているように、ｇ　ｐ　１２０の主αヘリックスがその分子のＣ Ｄ４結合領域に空間的に極めて接近していて、したがってαヘリックスと相互作 用する大きく且つ長い化合物はＣＤ４結合を立体的に妨害し、遮断するのに役立 つ。これは、本発明の特に好ましい特徴である。硫酸デキストランの抗ＨＩＶ作 用を説明するのはまさにこのような作用であると考えられる。

Ｇ　ｐ　１２０の主αヘリックスは、ＡＡ４９６−５０８の一般領域に存在し； そしてＡＡＬ５２−１６５の領域におけるＭＨＣｌの領域に対応し、ＡＡ８８− １１１の領域におけるＭＨＣＩＩの領域に対応する。αヘリックスは一般に特異 的残基に該当すると言われるが、このような二次構造は、配座の制限及び考慮し なければならないその他の力が存在するので、正確な残基で開始し、正確な残基 で終止すると特異的に限定されないと考えられる。しかしながら、分子のαヘリ ックスは一般に、限定された領域内に位置する。

Ｇ　ｐ　１２０αヘワツクスにおける１３個のアミノ酸のうち７個が塩基性であ って（正に荷電）、これらのうち５つのアルギニン側鎖かへワックスの底面から 突出する（ＭＨＣｆのＡＡ　１５２−１８５及びＭＨＣｎのＡＡ６７−８１は、 それぞれ一つ及び二つのアルギニン残基を含有する）。

ＭＨＣ分子の主αヘリックスは、−面から突出する塩基性残基の一部を有し、ｇ 　ｐ１２０は対応する群を有するか、しかしそれはさらに最初のものから回転移 動した面上にも一部を有する。両群とも、結合しているＴ細胞受容体に関係があ り、この第二群は高度に保存れる。したがって、本発明の化合物は、この第二群 の少なくとも一つの残基か認識され、結合されるように工学的に処理されるのが 好ましい。

添付の図９には、ｇ　＋）　１２０のαヘリックスが簡単に図解されている。中 空三角形△で標識化された残基はＭＢＣ分子のそれと対応し、星印＊は相同の程 度を示す。星印一つ＊は直接的相同というよりむしろ類似性を示す。中黒三角ム で標識化された残基はｇ　ｐ１２０に特徴的であり、これらの残基はαヘリック スの異なる面に認められるものとして描かれている。括弧内の残基は、いくつか の単離物中に生じる別の残基を示す。図９に示されているのは単なる図解であっ て、ｇ　ｐ　１２０の領域の一般的形態を示すだけであると考えられる。

配列４９６−５０８におけるｇ　ｐ　１２０の明らかに重要な領域は、位置４９ ７．５０１及び５０５である。それらは、試験した全単離物において、それぞれ リジン（又はアルギニン）、アルギニン、及びアルギニンである。さらに、ＭＭ Ｃ王αへソックスの荷電面に対応するヘワックスの面は、位置５００．５０４及 び５０８にアルギニン、グリシン、及びアルギニンを有し、一方ＭＨＣＩにおい ては、対応する残基はＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ｖａｌであり、ＭＨＣＩＩにおいてはＡ ｒｇ。

ＡｓｐＳＡｒｇである。

Ｇｐ１２０　、ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩ間の比較下記の式は、ｇ　Ｉ）　１２０ のＡＡ４９６−５０８の配列をＭＨＣｌ　（ＨＬＡ　Ａ２）及びＭＨＣＩＩ　（ ＤＲβ１）の配列と並べたものであって、Ｔ細胞受容体（星印で示す）によって 認識される非多型残基に関して特異性を示す。

Ｇ　ｐ　１２０に関する上記の配列は、本発明で用いるためのさらに好ましい配 列である。

下線を施した２個組の各アミノ酸は、それぞれ関連のαへソックスの２つの隣接 面の１つから突出する（クラスエ及びＨに関して考察するためには、Ｂｒｏｗｎ 　ｅｔ　ａｌ、（Ｎａｔｕｒｅ１９ｇ８，３３２；８４５）を参照）。ヘソック スの２つの面から突出する重要なそれらの残基を、口及びで示して、２面を区別 する。

ｇ　Ｉ）　１２０　ＡＡ４９６−５０８の配列は、溶液に溶解した“完全′５倍 へソックスを採用し、Ｒ４９７，５０１及び５０５のアミン基は実際には平面で あり、約０６５０−の距離で分けられている。これらの距離は、オリゴ糖の粒状 硫酸塩置換基を隔てる距離と同様であって、薬剤設計に便利な標的を提供する。

したがって、主αヘリックス領域におけるｇ　ｐ１２０の荷電残基は、硫酸塩の ような他の荷電基との相互作用を可能にし、したがってこれらの基と相互作用し ている化合物を用いてｇｐ１２０／ｇｐ４１アロエピトープ構造のＴ細胞認識を 遮断するために使用できるし、したがってエイズ発病を予防し得る。

薬剤の定義 本発明によれば、荷電基を有し、その荷電基がｇ　ｐ１２０の主αヘリックスの 特性荷電基と相補的であって、領域４９６−５０８におけるＨＩＶｇｌ）１２０ の特性荷電基との相互作用が生じるような配座を採用することを特徴とする抗Ｈ １■有効化合物が提供される。

“特性″という用語は、ＭＭＣに関しては上記の荷電基を意味し、ｇ　ｐ　１２ ０の少なくとも一つの特性残基が化合物に結合される場合にはＭＨＣの特性を示 す数種の又はすべての残基を含む。

“相補性”という用語は、ｇ　ｐ　１２０の関連の荷電基を引きつけるような電 荷を有する基を意味する。ｇ　Ｉ）　１２０の特性荷電基のすべてを標的にする のは必要でなく、必ずしも望ましくないことさえあって、化合物の一つの荷電基 のみが標的化ｇ　ｐ　１２０基に対応すべきであるという必要もないが、しかし これは好ましい。

概して、結合するために、ｇ　ｐ　１２０の特性を示す残基のみを認識するか又 はｇ　ｐ　１２０の少なくとも一つの特性残基を認識しなければならない化合物 を提供するのが好ましい。

ＭＢＣの二つ又はそれ以上の残基が化合物に認識される場合には、ＨＩＶよりむ しろＭＨＣが標的にされ、おそらく免疫系に有害な作用を及ぼし、化合物の効力 を弱める可能性がある。このような可能性は、立体障害又は好適な遮断基を用い ることにより回避できるが、ＭＨＣの認識を一緒に除去するのが好ましい。

特に好ましい化合物がｇｌ）１２０のグルタミン５０４を認識するように強いら れるのは、この態様からである。ＭＢＣ工及びＭＨＣｎの対応する残基はグルタ ミン酸及びアスパラギン酸であり、したがって本発明の化合物中の酸性残基はＭ ＨＣと消極的に相互作用するが、ｇｐｉ２０とは積極的に相互作用する。

さらに、ワクチンの場合と同様に、まさに一つの化合物を用いて患者を治療し得 るが、耐性株の発現の危険性を最小限にするために、ｇ　＋）　１２０の異なる 特性残基を認識するために採用される化合物の組み合わせを用いるのが好ましい 。

耐性株か発現しないようにするためには、ｇ　ｐ１２０の残基Ｒ５００及びＲ５ ０８を標的にするのが有利である。これらの位置のアスパラギン残基がＭＨＣの Ｔ細胞受容体認識には重要であって、その証拠は、これらの残基がＴ細胞受容体 認志には不可欠であることを示唆する。したがって、化合物が残基のいずれか又 は両方と相互作用しないようにｇｐ　１２０が防御的に突然変異を起こす場合に は、ｇ　Ｉ）　１２０分子はもはやＭＢＣを模倣しないので、もはやエイズを誘 発できない。

ｇ　ｐ　１２０に関して提案された５倍へソックス構造において、Ｒ５０８の側 鎖はＲ４９７，５０１及び５０５と一直線に並び、一方Ｒ５００は他の２・つの 塩基性残基に４９９及び５０７と同じ配向を有するので、したがって好ましい化 合物はこれらの組の基を標的にする。

本発明にしたがって使用可能な化合物の種類は、ｇｐ１２０と相互作用するため の正しい立体配置を採用し得る荷電部分を好適に提供し得るものである。

化合物は一般に、ｇ　ｐ１２０上の荷電基と相互作用するために適応される少な くとも２個の荷電基を支持する実質的に中性の主鎖を包含する。本発明のある化 合物は、溶液中で多数の立体配置を採用し得る、モしてｇ　Ｉ）　１２０と結合 するための荷電側鎖に対する特異的配座を可能にする非常に柔軟な主鎖を有する よう設計される。このような主鎖は、天然では一般にユニット間の単一結合で重 合し、立体障害はほとんどない。

他の主鎖は、有効に固定するように設計され、したがってその上の荷電基の正確 な配向が算定され、要件にしたがって配置される。

荷電基は限定されないが、ｇ　ｐ１２０の荷電基と積極的に相互作用するか又は それを引きつけるのに役立つものである。一般的に負のいかなる荷電基もほとん どの基に対して十分であるが、正の荷電基がグルタミン５０４との相互作用に必 要であると思われる。

好ましい側鎖は、例えば強力に荷電した硫酸及びリン酸基であるが、それらが置 換される分子は非毒性ポリマー、例えばポリビニル、又はポリビニルアルコール ポリマー、あるいはオリゴ−又は多糖類であるのが好ましい。このようなポリマ ーが構築されるサブユニットは非常に広範に変化し、したがって事実上いかなる 関連の電荷立体配置とも相互作用するよう構築される。

事実上どんな適合をも提供することをめられる単糖類の大きな多様性のために、 そして化学的合成による硫酸塩置換様式を変える能力のために、正確な分子寸法 を得るためにはこの群の化合物が特に好ましい。

硫酸化様式及び単糖類組成の変化により、Ｒ４９７，５０１，５０５間の距離を 増すためにわずかに低度に強制されたらせん配座異性体と反応する配位子を設計 することも可能である。

さらに、ｇ　ｐ　１２０のαヘリックスはｇ　ｐ　１２０のＣＤ４結合ループと 空間的に近接しているので、長いオリゴマー又はポリマーがＣＤ４結合部位を遮 断するために伸びて、本発明のこの態様の好ましい特徴を提供する。

したがって、本発明は、荷電側鎖を伴う短及び長鎖ポリマーを共に意図する。裏 型化合物に関しては、ｇ　Ｉ）　１２０認識の領域は分子内に唯一であるか、又 は規則的に又は不規則に、相互作用領域を任意にあちこち非相互作用領域ではさ んで反復される。さらに、−化合物においても、ｇｐＬ２０相互作用領域の種類 が一つ以上ある。

その他の化合物 さらに、アロ反応性子細胞受容体を結合し且つ遮断する同様の化合物を調製し得 ると考えられる。このような化合物は必ずしもｇ　ｐ１２０を結合するものを結 合し得るわけではないが、しかし、少なくとも部分的に、ｇ　ｐ　１２０の特性 残基のものと同様の電荷配置を有する。この性質を有する化合物は、後述の“ペ プチド°の項でさらに詳細に記載する。

本項に記載の少なくともいくつかの化合物は、上記のようにワクチン、免疫療法 、又は診断技術に使用し得ると理解される。好適なものは、当業者には容易に確 認できるし、且つこのような適用は本発明の範囲に含まれる。

（Ｂ）ペプチド 本発明はさらに、Ｔ細胞受容体又はアロ反応性子細胞と相互作用するペプチド及 び関連する化合物を提供する。これらの化合物を用いて、膜結合ｇｐ１６０　（ ｇｐ１２０　／ｆＺＴ）４１）に対するＴ細胞のアロ反応性反応を阻害又は遮断 し得る。このような化合物は一般にペプチドであるが、しかし本発明はペプチド を含有する化合物に、そしてペプチドではないがしかし後述するようなペプチド の特性の少なくともいくつかを示す化合物にも及ぶ。特に、ペプチドの代わりに 用いたときに上記の物質がペプチドと実質的に同一の又は同様の作用を有する場 合には、本明細書においては、適切なペプチドの等価物であると定義する。

本明細書中で用いる場合、“ペプチド”という用語は、少なくとも一つのペプチ ド結合を含有するいかなる化合物をも示し、その例としてはオリゴペプチド及び ポリペプチドが挙げられる。

定義 したがって、ヘリックス上の位置の少なくとも２個の荷電残基で突出する少なく とも−続きのαヘリックス二次構造を示し、残基及びそれらの位置が下記の：　 ＡＡ４９Ｂ　−５０８の領域におけるｇｐ１２０　；　ＡＡ１５２−１６５の領 域におけるＭＨＣｒ；及びＡＡ６ｇ−ｆｌｌの領域におけるＭＨＣｒｌから選択 される一つ又はそれ以上のペプチド配列における残基及び位置に対応するペプチ ドを包む分子が提供されるが、但し少なくとも一つの荷電残基が下記のようにｇ 　ｐ　１２０の残基に対応し、このような残基が既述のＭＨＣＩ又はＭＨＣｎの 残基に対応しない。

“対応する°という用語は、特定の配列中の残基と同−又は等価である残基及び ／又はその位置を示すのに用いる。

ペプチドを、残基又は位置が同一であったかのように同じ最終結果を達成させる よう意図するためには十分に似ているとすれば、等価の残基又は位置は特定の配 列における一対の片方と正確に同一である必要はない。その例としては、異なる 酸性残基を用いてアスパラギン酸塩を刺激する場合がある。

αヘリックス構造は、他の要件が存在しなくてもこのような構造に強く貢献する ものが好ましい。αヘリックスを弱く形成するだけの構造を用いてもよいが、し かしαヘリックス構造の形成が促進又は助長する環境でそれらを用いるのが有益 である。

αヘリックスの一次配列は、上記のように好適なものであるが、好ましい配列は 、既述のように、ＭＨＣ主αヘワックス又は対応するｇ　ｐ　１２０αヘリツク スを有するものである。いずれにしても、特定の配列のものに対応する荷電残基 を用いることのみが好ましく、他は好ましくない。残基及びそれらの位置は、上 記のように配列中でそれらが対応するものと同一であるのが好ましい。

重要なペプチド配列 ｇ　Ｉ）　１２０の重要な配列及び残基は、“ポリイオン性抗ＨＩＶ化合物″の 項に記載されている。このような重要な残基を考慮に入れると、最も多く用いら れる多数の配列が明らかになる。

本質的に、ＭＨＣＩ又はＭＨＣｎのαへワックス主鎖を用いるのが好ましい。そ の場合、荷電残基はＭＨＣＩ又はＭＨＣＩＩのものに対応する。荷電残基の混合 物は２つのクラスから用い得るが、存在しない存在物に対する非論理的な抗体が 生じる恐れがあるので、これは一般的に好ましくない。次に、ペプチドはさらに 、ｇ　ｐ　１２０の特性を示す１個の荷電残基を組み入れる。これは、６つの好 ましい配列−ＭＭＣ？及びＭＨ（：＃に関して各３つが、ｇ　Ｉ）　１２０の４ ９７．５０Ｌ及び５０５残基を各々１個組み入れる−を生じると理解される。

αヘリックス主鎖は、例えば一つ又はそれ以上のＭＭＣ荷電残基の代わりにアラ ニンで置換され、さらに８つの塩基性へワックス主鎖の可能性を生じる。これら を、非置換゛主鎖と同様に、次にｇ　ｐ１２０の特性を示す一つ又はそれ以上の 残基で置換する。ＭＭＣの特性を示す０又は１個の残基が存在する場合は、２又 は３個のｇ　ｐ１２０残基を組み入れるのが好ましい。

Ｇ　ｐ　１２０のＡｒｇ５００は、ＨＩＶのアロエピトープ作用にとって特に重 要であると思われるので、したがってこの残基を有するペプチドが特に好ましい 。この残基は、ＭＨＣｎのＡｒｇ７３及びＭＨＣＩのＡ　ｒ　ｇ　１５７に対応 する。

さらに、ｇ　ｐ　１２０のＡｒｇ５０１１が重要であると思われるが、これはＭ ＨＣｎのＡｒｇ８１及びＭＨＣＩのＶａｌ１８５に対応する。これらの残基をと もに組み入れるペプチドが特に好ましい。ＭＭＣ分子のアスパラギン酸又はグル タミン酸残基の代わりにｇ　ｐ　１２０のグルタミン５０４に対応する残基を有 するペプチドが特に有用である。

本発明のペプチドは、適当ならば、本発明の別の態様において、例えばワクチン の製造、抗体産生、Ｔ細胞受容体の遮断、及び当業者には明らかなその他の用途 に使用し得る。

薬剤検定 本発明はまた、有力な抗ＨＩＶ誘発性エイズ療法の試験方法を提供する。

特に、ｇｐ１２０、又はｇ　９１６０がアロエピトープとして作用するというこ とを孝知の上で、我々は、ｇ　ｐ１８０を発現する細胞で提示される場合にのみ 増殖するＣＤ４＋Ｔ細胞株を生じる可能性があることを発見した。このような細 胞は、制限されたｇ　ｐ　１２０であると本明細書では定義される。

検定 したかって、本発明は、いかなる指定物質の抗ＨＩＶ作用を検定する際に使用す るためのｇ　ｐ　１８０発現細胞株及びｇ　ｐ　１６０制限細胞株を包含する系 を提供する。本発明はまた、抗ＨＩＶ検定におけるこのような系の使用、並びに 好適な細胞株の調製を任意に含むこのような系の調製を提供する。

好適な細胞株の調製方法は、特定の実施例（実施例６）を含めて、本明細書中に 記載される。

ｇ　ｐ１２０とｇ　ｐ　１６０の関係は、本明細書の別の箇所に記載しているよ うに同一の性質を有するものであり、本質的に交換可能であると理解される。

用途 本発明の検定系は、ＨＩＶ誘発性エイズ発病の阻止における新規の薬剤の有用性 を確定するのに特に有用であり、容易で簡単な技術を提供する。有力な薬剤を系 に添加する場合には、ｇ　ｐ　１６０アロ反応性Ｔ細胞は依然として増殖して、 薬剤は、少なくとも試験した形態では、エイズの予防には有用な活性を示さない と思われる。

他方で、増殖が遮断又は低減される場合には、これは、ｇｐ１２０／ｇｐ４１に 対するＴ細胞アロ反応性の阻害又は遮断によるＨＩＶ誘発性エイズの予防におけ る一次活性を強く示す。

以下の実施例は、本発明を説明するためのものに過ぎず、いかなる点においても 本発明を限定するものではない。

大腸菌における選択のためにはアンピシリン遺伝子を、哺乳類細胞における選択 のためにはｇｐｔ遺伝子を、そしてＨＩＶ株ＨＸ２Ｂの全長感染クローン（ｐＨ ＸＢ２ｇｐｔ）又は２つのウィルスＬＴＲ間のｇａｇ、ｐｏｌ、及びｓｏｒ遺伝 子のみを含有するクローン（ｐＨＸＢ２５°　ｇｐｔ）を含有するシャトル発現 ベクターでコンピテント大腸制限酵素Ｋｐｎｌを用いて、５２８ヌクレオチド断 片をｐＨＸ　Ｂ　２５°　ｇｐｔにおけるｐｏｌ遺伝子の逆転写酵素配列から取 り出した（全長プロウィルスＤＮＡは別のＫｐｎ１部位を含有する）。連結後、 大腸菌を形質転換する場合のいくつかの試みは、コロニーが含有される前には、 ＨＩＶＤＮＡ配列の欠失又は転位を有していないことが必要であった。形質転換 用に用いる大腸菌は、例えばＤＨ−１及びＪＭ１０９のような組換え酵素マイナ スで、したがって理論的にクローン化ＤＮＡを欠失又は転位し得ない株であった 。

ｐＨＸＢ２５°　ｇｐｔ（欠失した３２８　ｂｐ　Ｋｐ　ｎ　１断片を伴う）を 用いて大腸菌を再形質転換する場合、試験した２４クローンのうち、１つだけが 欠失又は転位を含有しなかった。したがって、作られた構築物は使用した大腸菌 に不適合の異常な二次及び三次構造を有すると思われた。Ｌｅ　ｅｔ　ａｌ、、 （１０８８Ｎ、Ａ、Ｒ，１６：５１５３）によれば、３２８　ｂｐ断片が取り出 されていたＨＩＶの領域は、事実、二次構造を有することが予測される領域であ る。

次に、上記の構築物及びｐＨＸＢ２ｇｐｔを制限酵素Ｂａ１ｌ及びそのアイソシ ゾマーＭ　ｓ　ｃ　１で消化した。これは、ｐＨＸＢ２５’　ｇｐｔ−Ｋｐｎｌ からの１．６　（ｖイナス３２８　ｂｐ）　ｋｂｐ断片によって置換されるｐＨ ＸＢ２ｇｐｔからの］、、９　ｋｂｌ）断片を放出するためであった。電気泳動 ゲル上での連結プラスミド及び挿入物の検査から、十分に作動した連結が示され た。しかしながら、多数の再消化及び連結にもかかわらず、大腸菌のいくつかの 異なる株（ＤＨＩ、ＪＭ１０９　、ＮＭ５２２　、ＤＨ５、及び５ＳＣＩ）への 形質転換の際にコロニーは得られなかったが、消化及び再連結化コントロールプ ラスミドを用いた形質転換が首尾よ〈実施された。

Ｂａ１ｌ及びＭ　ｓ　ｃ　ｌはプラント末端カッターであるため、そしてプラン ト末端の連結は付着端の場合より効力が低いため、ｐＨＸＢ２ｇｐｔからの正確 な断片を放出し、ｐＨＸＢ２５’　ｇｐｔ−Ｋｐｎｌからの３２８　ｂｐ欠失断 片で置換させる新規の制限消化レジメンが捜しめられた。しかしながら、ゲルが 連結が有効であることを示す場合でさえ、大腸菌の同一範囲の形質転換はクロー ンをまったく生じなかった。同様の非妥協性がｐＨＸＢ２５’　ｇｐｔ−Ｋｐｎ ｌの初期クローニングを用いて生じたために、ｅｎｖ遺伝子で報告された二次構 造と結合される、逆転写酵素遺伝子の欠失により生じた構造は、大腸菌に関して 余りにも多くて処理できなかった。構築物は、明らかにＤＮＡの非クローン性片 であった。

ＤＮＡの二次及び三次構造を認識及び編集する遺伝子の除去により非クローン性 ＤＮＡをクローン化するために操作した大腸菌のある株は、次に利用可能になり 、形質転換を反復すると、いかなる問題も伴わずに、ｐＲＴＭ　ＤＮＡを含有す るクローンが生じた（　ｐ　ＲＴ　Ｍ　Ｌと同定され、大腸菌５ＵＲＥ株に保有 されるＨＩＶの欠失突然変異体をコードするプロウィルスＤＮＡを含有するプラ スミド［ＴＭＳｔｒａｔａｇｅｎｅ、１１０９９　Ｎｏｒｔｈ　Ｔｏｒｒｅｙ　 Ｐｉｎｅｓ　Ｒｄ、Ｌａ　Ｊｏｌｌａ、ＣＡＵＳ＾］は、ブダペスト条約の条件 下で、１９９０年１０月１２日に、ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ｅｃｔ ｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ、８１　Ｃｏ１１ｎｄａｌｅ　Ａｖ ｅｎｕｅ、Ｌｏｎｄｏｎ　ＮＷ９５ＨＴ、ＩＪＫ、に寄託番号Ｎ　ＣＴ　Ｃ１２ ４２４として寄託された）。

ｐＲＴＭに導入された欠失はまた、フレームシフトを引き起こし、そこでトラン スフェクトによって産生されるピリオンは截形逆転写酵素を含有するが、インテ グラーゼは含有しない。ｐＲＴＭ　ＤＮＡにより産生されるとりオンは、下記に よって特性を明らかにされる：ＲＩＰＡ（放射線免疫沈降検定法）：ウエスター ンブロッティング：３２８ｂｐ欠失を横断するＰ、　Ｒ，Ｒ，、Ｅ、　Ｍ、及び シンシチウＨＩＶｇｌ）１２０制限Ｔ細胞株の生成単一ドナーからの末梢血リン パ球を逆転写酵素欠失突然変異体ＨＩＶ　（実施例１で調製）でトランスフェク トする。

これらのＨＩ　Ｖ　ｇ　Ｉ）　１２０発現細胞を、下記のように、Ｔリンパ球培 養の同質遺伝子フィーダー細胞として用いる＝（りピリオン、及びｇ　ｐ１２Ｇ の適切な発現に関して細胞を検査する； （ｂ）細胞に放射線照射する； （Ｃ）次に、細胞を、２４穴クラスタープレート中の同質遺伝子末梢血Ｔリンパ 球の培養（ＲＰＭＩ又は１０％同原血清又は血漿を補足したｌ５ｃＯＶＥｓ培地 に溶解したｌＸ１０６ＰＢＬに対して３　Ｘ　１０’フイーダー）に添加する； （ｄ）４日間培養後、増殖中の細胞を分離し、１：４に希釈して、新鮮なトラン スフェクト化照射同質遺伝子フィーダー細胞を添加する； （Ｃ）さらに７日間培養後、組換え体ＩＬ−２（３０μ／ｓｌ　）を添加し、さ らに７日間培養を継続する；（１）得られたＴ細胞株が相対的に均質になるまで 、このプロトコールをさらに３〜４周期継続する：そして（ｇ）　０．５細胞／ 穴に希釈し、３　Ｘ　１０’照射トランスフエクト化フイーダー細胞／穴を含有 する９６穴ミクロ滴定プレートに植えつけることにより、これらの大量のＴ細胞 株からＴ細胞クローンが得られる。

（２）　抗原特異的１ｐ１２０制限Ｔ細胞株の生成（１）で生成したＴ細胞株は 必ずしもｇ　ｐ　１２０特異性でなく、ｇ　ｐ　１２０制限性でもない。これら のパラメータはともに、適当にアロ特異性ｇ　Ｉ）　１２０制限Ｔ細胞クローン が得られる前に満たされる必要がある。したかって、第二工程は、異なる刺激体 ；即ちＨＩ　Ｖ　ｇ　ｐ　１６０てトランスフェクトしたネズミＰ８Ｌ５細胞株 又はＣＨＯ細胞株を含む。この人工構築物を用いて、ｇ　ｐ　１２０７０感応性 （アロ反応性）クローンを限定し、抗原特異性ｇ　ｐ　１２０制限クローンを生 成する。

（２ｚ、り　（１）からのクローン化Ｔ細胞、又は大量のＴ細胞株を、照射Ｐ８ １５又はＣＨＯ細胞と共培養する（内生的に切断されたｇ　ｐ　１６０からｇ　 ｐ　１２（ｌ及びｇｐ４１をともに発現する川 （２ｇ、２）　＜１）に記載の方法により増殖中のＴ細胞が得られ、これをクロ ーン化する。これらのＴ細胞は、ｇ　ｐ１２０アロエビトープ特異的Ｔ細胞株細 胞成する。

あるいは： ［２ｂ、ｌ）　（１）からのクローン化Ｔ細胞、又は大量のＴ細胞株を、予め、 破傷風毒素、精製タンパク質誘導体（Ｐ　Ｐ　Ｄ）、又はカンジダでパルスした ３Ｘ１０’照射ｇｐ１６０　トランスフェクト化Ｐ８１５又はＣＨＯ細胞と共培 養する：（２ｂ、２）　４〜５日間抗原に暴露後、培養を組換え体ＩＬ−２（３ ０μ）−１）でさらに７日間刺激する；（２ｂ、　３）　培養を１：４に分離し 、新鮮な照射抗原パルス処理ｇｐ１６０トランスフェクト化Ｐ８１５又はＣＨＯ 細胞を添加する； （２ｂ、　４）　このプロトコールをさらに３〜４周期継続する。

その後、１１ｇに記載のように希釈して、クローンを生成する。

得られた株が、制限された抗原特異性ｇ　ｐ１２０である。

（３）プロトコール１　（ａ−ｇ）　、２ａ　（１−２）　、２ｂ（１−４）で 生成された細胞株の反応の均質性検定各細胞株を、その増殖反応に関して、下記 の検定で調べる。

（３１）同質遺伝子ＡＰＣ（１及び２ａ）又は抗原パルス処理同質遺伝子ＡＰＣ （２ｂ）に対する反応（１）プロトコール１及び２ａから誘導された２０Ｘ１０ ３Ｉ　Ｌ−２刺激Ｔ細胞に、５０Ｘ１０３照射同質遺伝子ＰＢＬを添加する。こ れらを、Ｉ　Ｌ−２を用いずに、２４時時間項養する； （Ｈ）Ｈ’チミジンを添加しく増殖生細胞のＤＮＡに組み入れる）、培養を２４ 時間継続する（Ｌ、８５Ｘ　１０’　Ｂｑ　Ｈ３Ｔ）　；（ｉｉｉ）　細胞を採 取して、計数する。

抗原パルス処理同質遺伝子ＡＰＣに関しては、測定される反応の欠如は、ＴＴＳ ＰＰＤ又はカンジダと会合した場合の、ｇ　ｐ　１２０に対するＴ細胞制限の程 度を示す。Ｔ細胞株（プロトコール２ｂにより調製）は、抗原でパルスされない 同質遺伝子ＡＰＣに暴露した場合には増殖しない。

同質遺伝子ＡＰＣを抗原でパルスすると、プロトフール２ｂにより生成されるあ る割合（全部ではない）のクローンが抗原に反応する。これらの°二官能性”ク ローンは抗原特異性であるが、ＭＭＣ制限性でもｇ　ｐ　１２０制限性でもない 。

（３ｂ）　ＨＩＶ　ＲＴ−トランスフェクト化同質遺伝子抗原提示細胞に対する 反応 本実験プロトコールでは、ｇ　ｐ　１２０アロ反応性であるプロトコール（１） により誘導されるクローンと、ＨＩＶの他の成分のいくつかと反応するクローン との間に区別が認められる。

（り同質遺伝子ＡＰＣをＨＩＶ　ＲＴ突然変異体ウィルスでトランスフェクトす る； （ｂ）実験プロトコール１．２　ａ　ｓ及び２ｂからの２０Ｘ１０３Ｔ細胞をＩ 　Ｌ−２の非存在下で２４時間培養する；（ｅ）　２０ｘｌＯ’　Ｔ細胞に、９ Ｂ穴ミクロ滴定プレート中の０゜２１に溶解した５０×ｌＯ３トランスフエクト 化照射（３０ＧＹ　）ＡＰＣを添加する； （ｄ）細胞をＨ３チミジン（１，８５Ｘ１０’　ＢＱ：ＳＩ）、Ａ、Ｌ、８５Ｘ １０”　Ｂ（１１モル）でパルスし、２４時間後に採取する。

本検定を用いて、プロトコール１及び２ａにしたがって調製されたＴ細胞は増殖 するが、プロトコール２ｂにしたがって調製されたＴ細胞は増殖しない。

（３ｃ）　プロトコール２ｃにより調製される細胞の増殖プロトコール３ｂに記 載されているようにして検定を実施するが、同質遺伝子ＨＩＶ　ＲＴ−トランス フェクト化ＡＰＣは、ＴＴ、又はＰＰＤでパルスされる抗原である。

プロトコール２ｂによって調製されるＴ細胞は本検定において増殖し、ＨＩＶｇ ｌ）１２０に対する特異性、及びｇｐ１２０への制限を示す。

（１）　ｇ　ｐ　１２０アロ反応性クローン（２１）（２）ｇｐ１２０制限クロ ーン（２ｂ）及び（３）“二官能性″抗原特異性非制限クローン。

Ｔ細胞クローンのこれら３群の特性を示すＴＣＲを分離し、増幅して、シーケン シングする。利用可能な限定数のＶβ特異性モノクローナル体を用いた実験によ り、及び公知の配列のＶ領域プローブを用いたハイブリダイゼーションによって 、予備的データが得られる。

これを達成するための技術は、標準分子生物学的手法である。

（５）　潜在性ワクチンの調製 本手法の出発点は、′アロ反応性”であると、あるいは抗原特異性及びｇ　ｐ　 １２０制限性”であると定義されるＴ細胞クローンである。両クローン型は、共 通のＴＣＲ構造及び”イチオタイブを共をす゛る。

特性化クローンに由来する大量のＴ細胞で免疫化されるマウスを用いて、慣用的 方法によるモノクローナル抗体ノ）イブリドーマ産生のための牌細胞を提供する 。このようなモノクローナル抗体は、Ａｂ、試薬を構成する。

所望のＡｂ、試薬の適切な特異性を下記に示す：（ａ）　アロエビトープ又は制 限要素としてｇ　ｐ　１２０に対する共通の受容体を有するすべてのＴ細胞クロ ーンと反応する； （ｂ）検定３１．３ｂ及び／又は３ｃにおいて、これらのＴ細胞クローンにより 増殖反応を防止する：そして（Ｃ）　この抗体と反応性のＴ細胞は、ＨＩＶ血清 陽性被験者のＴ細胞プールの一部を構成する。

有効ワクチンの検定 好適であると考えられるいかなる薬剤の活性を検定するためには、薬剤はｇ　ｐ 　１２０制限Ｔ細胞の増殖を防止することができねばならない。好適な検定は、 上記のプロトコール２ａ及び２ｂにより生成された細胞の使用を包含し、これら の細胞がｇｐ１２０　トランスフェクト化ＣＨＯ又はＰ８１５細胞で示される場 合に、増殖を防止するワクチン候補の能力を検定する。薬剤は、すべての抗原特 異性ｇ　ｐ　１２０制限Ｔ細胞の増殖を防止できねばならないが、ＭＨＣｎ制限 Ｔ細胞の増殖は防止できなくてよい。

関連クローンのコロニーは、パルス処理されたｇｐ１２Ｇトランスフェクト化Ｃ ＨＯ又はＰ８１５細胞に時折暴露することによって保持し得るが、この場合関連 の抗原を有する必要がある（この場合、クローンは抗原特異性である）。

３つの抗原（ＰＰＤ、ＴＴ、及びカンジダ）に対して特異的なりローンの使用に より、ｇ　ｐ１２０へのいかなる制限も特異的であって、抗原交叉反応性に依ら ないことが保証される。

クローンを保持するために鰯歯類細胞を用いることの利点は、敏感なヒトＴ細胞 はトランスフェクト化細胞膜上に提示される鰯歯類ＭＨＣによっては有効に刺激 されないという事実にある。２つ又は３つ組み合わせたトランスフェクト化細胞 、即ち同質遺伝子ＨＩＶ　ＲＴ）ランスフエクト化ＡＰＣＳｇｐ１６０でトラン スフェクトされたＣＨＯ細胞、及びｇ　ｐｌ［ｉｏでトランスフェクトされたＰ ８１５を組み合わせて用いると、鰯歯類ＭＭＣに対する反応性を伴う紛られしい ｇｐ１６０’アロ反応性゛の問題が軽減される。

ＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩに対して特定される１５種類のモノクローナル抗体が、 ｇ　ｐ１２０結合及びウイルスシンシチウム阻害に及ぼすそれらの作用に関して 研究されている。あるＭＨＣＩＩ特異的モノクローナル体は、ｇｐｌＢＯと直接 反応する。シンシチウム阻害研究において、ＭＨＣＩ特異性モノクローナル体は シンシチウム形成を防止する。ｇｐ１２０又はｇ　ｐ　ｉａｏと交叉反応する血 清中の抗ＭＨＣＩ及び抗ＭＨＣｎ抗体活性についての報告がある。このデータは 今日では不十分であるけれども、タンパク質の配座が抗体により認識され、その 配列はそうでないという事実は、ｇｐ１２０　／　ｇ　ｐ　１８０が部分的にＭ ＨＣＩ又はＭＨＣＩＩ分子の配座を有することを示唆する。

実施例４ Ｇ　ｐ　１６０発現ＣＨＯ細胞１：　ヨルＴ　ＣＲＶ領域選択ＣＨＯ細胞（ＣＨ ＯＫ−１）を、グルタミンシンセターゼ遺伝子に結合するＨＩＶ−ｇｐｌＢＯ遺 伝子でトランスフェクトした。Ｃ８遺伝子の高レベルの発現は、メチオニンスル ホキサミン（ＭＳＸ）を補足したメチオニンを含有するグルタミン欠損培地（Ｇ −ＭＥＭ−ＭＥＴ）中の培養により保証される。０．８　ｓｇ／　ｍｌのＭＳＸ 濃度が、イムノペルオキシダーゼＡＢＣ法により検出可能なｇ　ｐ　ｔｅａの膜 及び細胞質発現を促す。刺激剤として用いる前に、トランスフェクト化細胞を照 射した（３０　ｇｙ　）。

単一ドナーからの末梢血リンパ球（ＰＢＬ）（同質遺伝子系において抗原として 提示された場合はｇ　ｐ１２０に反応しなかった）を、ｌＸ１０’フイコ一ル分 ＭＰＢＬを含有する穴にＩＸＩＯ３ｇｐ１６０発現細胞を添加することにより刺 激した。培養を４日間続けた。増殖中のリンパ球を採取し、フィコール／トリオ シル勾配遠心分離によって死細胞から分離し、３０　Ｕ／ｍ１組換え体Ｉ　Ｌ− ２の存在下でｌＸｌ０’／穴でさらに７日間、再培養した。この周期（４日間刺 激後、７日間ＩＬ−２展開）を２回繰り返した。

ヒ）ＴＣＲＶβ及びＴＣＲＶα決定因子に特異的なＦＩＴＣ複合モノクロ−六ル 抗体を用いて、■領域遺伝子発現を調べた。有用なモノクローナル体は、Ｖβ、 ５　ａ　ｓ５ｂ、５ｃ、８８％　１２　ａ　ｓ　６　ａ決定因子、及びＶａ２ａ 決定因子を検出する。フィコエリトリン複合抗ＣＤ３を用いて、二色ＦＡＣＳ分 析により、これらの決定因子に関して、正常ＰＢＬドナーからの、及び被験者か らのリンパ球を試験した。

結果は、Ｖβ又はＶα決定因子に対しても陽性のＣＤ３陽性細胞のパーセントと して表した。ｇ　ｐ　１６０発現ＣＨＯ細胞を用いた刺激による選択の前及び後 の被験者におけるＶα及びＶβ発現の比較から、ｇ　ｐ　１６０を用いた選択に よって引き起こされるＴＣＲ発現の偏りが示された。被験者においては、ｇ　ｐ １６０遺伝子を用いずに照射Ｃｌ０−Ｋｌ細胞を用いて同様の方法で刺激される 対照培養は、増殖中のＴ細胞株の誘導を引き起こさなかった。刺激の第−周期後 に、成育し得るリンパ球が回収された。

結果 ３名の正常対照（Ｇ、ＰＳＭ）　、及び被験者ＪにおけるＶβ及びＶα遺伝子生 成物質の発現を、ｇ　９１８０発現ＣＨＯ細胞を用いた刺激によるＰＢＬ由来の 細胞株における同−Ｖ遺伝子生成物質の発現との比較に関して示す（表１）。

明らかなように、Ｖα２ａの発現の顕著な増加（１７％から１２．Ｈに）がＶβ １２ａの小さな増加（３，０％から７．８％に）を伴って生じ、Ｖβ６ａの発現 は減少した（１０．３％から５゜６％に）。正常対照との比較は、このような変 化が試験した４名の変動の範囲外にあり、したがってｇ　ｐ　１６０による好ま しいＶα及び■βの組み合わせの直接的選択によるものであると思われることを 十分明白に説明するものである。

これは、単一■α決定因子■α２ａに関して最も顕著に当てはまる。

したかって、ある固体からの敏感なＴ細胞をｇｐ１８０Ｈｒｖ−１エンベロープ 遺伝子を発現する照射Ｃｆ（ＯＫｌ細胞に２周期刺激を行う間、暴露すると、４ 名の対照ドナーからの刺激前正常ＰＢＬと比較して７倍以上もＴＣＲ決定因子Ｖ α２ａの発現が増大していた大量のＴ細胞株が誘導される。したがって、結果は 、ｇｐ１６０がアロエビトープとして作用し、おそらくＶα鎖決定因因子α２ａ と直接相互作用すると思われることを示唆する。Ｖβ発現の変化も同様に、決定 因子Ｖβ１２ａ（増加）及びＶβ６ａ（減少）に限定される。本研究は、アロエ ビトープについて予期される方法で、ｇ　ｐ　１８０がＴＣＲと直接相互作用す ることを確証する。

一以下余白 表１ 正常対照と正常ドナーＪ由来のｇ　ｐ　１６０反応性Ｔ細胞株におけるＶβ及び Ｖα発現の比較被験者　Ｖβ決定因子（％ＣＤ３＋細胞として）Ｖα決定因子５ ａ　５ｂ　５ｃ　ｇａ　１２ａ　８ａ　ａ２ａＧ　９．３１Ｌ５　４．５　５． ６　１．８　９．５　１．１Ｐ　７．６　ｆｔ、６　５．１１０．３　３．７　 ８．５　２．１Ｍ　６．１　８．８　３．７　ｇ、４　３．５　Ｂ、８　１．４ Ｊ　６．９　７．１　３．２　、！１．２　３．０　１０．３　１．７細胞株 Ｊ　８．４　５．０　５．０　９．４　７，１１　５．６１　１２４１キイワー ド；　Ｖβ又は　■α発現における　↑有意の　増加↓有意の減少 ｇ　ｐ１２０の多数の単離物をシーケンシングして、比較のための大型データベ ースを提供した。我々が同定した１２配列の調査とＮｏｄ　ｒｏｗ等［１９８７ ］の調査から、システィン残基に導く及びそれを含む注目すべき相同の他に、全 単離物間に保存される顕著な領域を以下に示す： ２４７　ＱＣＴＨＧＩ本Ｐ　＋ＶＳＴＱＬＬＬＮＧＳＬＡＥ　＊Ｒ又はに、ｆＶ 又はＩ４３２　ＹＡＰＰＩ ４４４　５ＮＩＴ（４ネＬＴＲＤＧＧ　＊Ｌ又は　１４６８　０ＧＧ＊Ｍ’？Ｄ ＮＶ　＊Ｄ又はＮ、ｆｌ？又はに４７９　ＥＬＹＫＹＫＶ本　本■又は　１４８ ８　１ＥＰＬＧ＊ＡＰＴ”！”　ＡＫｌ？ｌ？ＶＶ↑ＲＥＫＲ＊Ｖ又はＩ、　ｆ Ｒ又はに、↑Ｑ　又はＥ これらの配列は、β鎖（Ａ　Ａ　４４７〜４８０　）　、いわゆるＹＡＰＰＩ、 ５ＮＩＴ及び保存Ｗループにおける領域、並びにｇ　ｐ１２０のＣ末端のαヘリ ックスを構成する高い確率を有する上記の保存領域を含む。これらの領域は、エ イズ病状に重要な構造的モチーフを明らかにするための我々のｇｐ１２０モデリ ングに含まれた。

ＨＬＡ−Ａ２α３の領域も、残基１４４上流からのＭＨＣ■の領域を伴うＣ末端 の有意の配列相同、及び残基２５５〜２６４周囲のｇｐ１２０単離物の高度の保 存配列のために包含された。

ＨＬＡ−Ａ２　２４８　ＶＶＰＳＧＱＥＱＲＹ　２５７ＤＲβｌ　１４４　ＶＶ ＳＴＧＬＴＱＮＧ　１５３ｇｐ１２０　ＥＬＬ　２５５　ＶＶＳＴＱＬＬＬＮＧ 　２６４クラスＩとクラス■間の相同は、この領域でＨＬＡ−Ａ２α３のＣ末端 まで続く。例えば、 ＨＬＡ−Ａ２　２５９　ＣＨＶＱＨＥＧＬＰＫＰＬ　２７０ＤＩ？β１　１７５ 　ＣＱＶＥ）ＩＰＳＶＴＳＰＬ　１８ＢＨＬＡ−Ａ２のα３領域に関する相同の 程度は、これがＣＤ８　（ＨＬＡ−Ａ２）及びＣＤ４　（ＤＲβ１）に対する結 合部位の一部であってもよいことを示唆する。

Ｂ）エンベロープ糖タンパク質はＭＨＣ様構造を有するａ）ｇｐｉ２ｏ　／ｇｐ １６０の分子モデリングから、ＭＨＣＩ及びＭＨＣクラス■との構造的相同を示 す特徴が明示された。先ず、ＨＬＡ　ＤＲの配列に対する相同配列におけるＡ　 Ｓ　Ｎ　４４５にｇ　Ｉ）　１２０の保存グリコジル化部位がある。ＤＲ及びｇ 　ｐ　１２０はともに、Ｔ　ＲＰ　４７Ｂを含有する相同ループを有する。β鎖 は、ＭＨＣのペプチド結合溝様構造の。

βプリーツシート”フロアと等価のＡＡ４４Ｂ−４５２及び４８４−４８８を占 める。αヘリックス構造は、４９Ｂ−５１２間に予測される。直接的構造相同は 、特に、ＨＬ　Ａ　−Ａ　２　（９５−１０１）及びＨＬＡ　ＤＲ２β（１５− ８０）と、ドメインＡ　Ａ　４４２−５０８に亘るｇｐ１２０との間に存在する 。安定化は、ジスルフィド結合によってもたらされる（　ＣＹ　３３７Ｂ−ＣＹ 　Ｓ　４４２及びＣＹＳ３８５−ＣＹＳ４１Ｂ　）　、さらなる特徴は、ａ　） 　４１２−４１５間のβ鎖、ｂ）ＭＨＣ様部位の下にあるおそらくはＣＤ４結合 ドメイン、ｃ）　Ｐ　ｒ　ｏ４５７での■型保存βベンド、Ａ　ｒ　ｇ４７２　 、Ａ　Ｓ　Ｎ４４５，３８４，３９０，４０５．４０９での１型、ｄ）４８４− ４８１１及び４４７−４５７間のβ鎖。これらは、−緒になってβプリーツシー ト構造を安定化させるよう意図される。全体的立体配置は、ＭＨＣＩα鎖のαヘ リックス及びβプリーツシート構造、並びに残りの分子（我々はＡ　Ａ　３７４ −５０８からのみモデリングした）からのβシート形成のさらなる機会を有する （モデリングされていない）ＭＭＣＩＩβ鎖に従う。これらのデータは、ｇｐ１ ２０／ｇｐ１８０のＣ主鎖の一般的ＭＨＣＩ又はＭＨＣＩ［配向を強く支持する 。

ＭＨｃＩ、ＭＨＣＩＩ及びｇ　ｐ　１２０のαヘリックスのコンピューター作製 モデルをそれぞれ図２．３及び４に示すが、これは考察したアミノ酸残基を明示 する。他の残基は、明確にするためにＡｌａに置き換えた。図１はｇｐ１２０ｃ 末端及びＨＬＡ−Ａ２、同一物の最重要領域の一般構造を示す。

ｇ　ｐ１２０に関するＸ線結晶学データが存在しない場合に、我々が採用したス トラテジーは、下記レベルの構造的比較に頼るコンピューターグラフィック分子 モデリングを基礎にした： ａ）　ＣＤ４結合及び免疫活性に不可欠な保存領域が推定されるｇ　ｐ　１２０ の公知の単離物のアミノ酸配列の比較；ｂ）　モデリング鋳型として使用するた めの公知の３−〇構造のタンパク質を有する配列相同のこれらの保存領域内での 発見： Ｃ）　高確率のαヘリックス、β鎖、又はβターンを育する領域を示唆するため の非相同タンパク質のＸ線結晶学データに基づく経験的タンパク質構造予測算法 の使用；及び ｄ）　表面折りたたみのために分子の領域を配向するための親水性指数、抗原性 、及び共働Ｎ−グリコジル化部位を基礎にした高表面確率の予測領域の使用。

コンピューターグラフィック分子モデルは、カルボキシ末端を有して構築された 。そのモデルは、ＭＨＣ抗原との顕著な類似性を示し、おそらくはＣＤ４と会合 して、Ｔ細胞受容体に認識されるＭＨＣｎ分子上の模倣領域に対して正しい立体 化学的配向での特定の構造モチーフを示す。

推定上の相同に関してモデリングされる構造モチーフは、経験的データに基づい た算法により予測されるもの（上記Ｃ）及び表面確率により示唆されるもの（上 記ｄ）以上にいかなる束縛をも強いられずに、標準グラフィックエネルギー最小 化ルーチン及び分子力学による配向を採用可能にした。したがって、そのモデル は、溶液中の分子がとると考えられるエネルギー的に好ましい配座に近似する。

実験手順 コンピューターグラフィック分子モデリングは、Ｂｉｏｓｙｓソフトウェア　パ ッケージｌＮ５ＩＧＨＴ及びＤＩＳＣＯＶＥＲ（Ｂｉｏｓｙｓ　Ｔｅｃｈｎｏｌ ｏｇｉｅｓ　Ｌｔｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）によるパーソナルＩｒ１ ｓ　２５ＧＴを用いて実施した。タンパク質二次構造算法は、’　Ｖｌｓｃｏｎ ｓｉｎ　Ｐａｃｋａｇｅ　’　（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｒ　Ｖｉｓｃｏｎｓ ｉｎ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｒｅ）からであった。さらに、α ヘリックス、β鎖、又はβターンに見出されるアミノ酸の相対確率は、Ｃｈｏｕ 　ａｎｄ　Ｆａｓｗａｎ（１９７４）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１３．２ １１−２４５及びＷｉＩｍｏｔ　ａｎｄ　Ｔｈｏｒｎｔｏｎ（１９８１１）、　 Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、２１）３．２２１−２３２から予測した。下記のＨＩＶ −１工ンベロープタンパク質前駆体分子のアミノ酸配列は、Ｌｏｓ　Ａｌａａ＋ ｏｓデータベース；ＢＨｌｏ、ＢＩ３、ＰＶ２２、ＢＲＵ、ＭＮ、ＳＣ，ＳＦ２ 、ＣＤＣ４５１、ＷＭＪ　２、ＲＦＳＭＡＬ、ＥＬ　Ｉ、Ｚ６、ｌ３２１、ＪＹ Ｉから得た。

ＨＩＶ単離物の一つであるＥＬＬに関するアミノ酸配列は、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ パッケージ及び下記のデータ文書により分析した：親水性指数（Ｈｏｐｐ　ａｎ ｄ　Ｗｏｏｄｓ、１９８１．Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａ−Ｏ−Ｒ；Ｇａｒｎｉｅ ｒ　ｅｔ　ａｌ、、１９７８．Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、１２０．９７−１２０） 算法により予測されたβターン、αヘリックス、β鎖、　Ｃ−Ｆ及びＧ−〇−Ｒ により予測された高確率αヘリックス又はβ鎖のみを、モデリングに用いた。い くっがのｇ　ｐ１２０単離物中に保存された予測βターン（Ｍｏｄｒｏｖ　ｅｔ 　ａｌ、、１９８７）、及びＷｉｌｗｏｔ　ａｎｄ　Ｔｈｏｒｎｔｏｎ　（１９ ８ｇ）、　Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、２０３，２２１−２３２　により示されたよ うな１、ｉ＋ｌ、ｉ＋２、及び１＋３で高確率のアミノ酸を有するもののみが含 まれた。βターン周囲の立体化学（Ｗｉｌｗｏｔ　ａｎｄ　Ｔｈｏｒｎｔｏｎ　 、１９９０．Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｊｎｅｅｒｉｎｇ　３，４７９−４９３　 ）は最適化されなかった；　Ｂｉｏｓｙｍ　Ｅｄｉｔｏｒ（ＭＯＬＥＤＴ）を用 いるのが適当なβ■型を構築した。

モデリングの各段階で、全ペプチド結合のトランス配置、及びプロリン残基の環 幾何学が検査され、モデルはエネルギー最小化を施された。

アミノ酸残基：１Ｉ７５−５０８からのｇ　ｐ　１２０のカルボキシ末端部分を 、下記のようにモデリングした。アミノ酸３７５−３８４をＮＣ（Ｇ）、ＣＮと して導入した。次に、拘束化エネルギー最小化によりシスティンを強いて鋳型ジ スルフィド結合させ、グリシン３７９−３［１２をＥ−Ｆ−Ｆ−Ｙで置換し、ル ープエネルギーを最小化した。

アミノ酸３８５−４１４を、ｉ　−ＮＨ４，３９０，４０５，４０９テ１型βベ ンドを用いてＭＯＬＥＤＴでモデリングした。その結果生じたループは、アミノ 酸４０２−４１０　、及び多共働グリコジル化部位ＣＮ３８４．３９０．４００ ．４０５．４０８．４１１　）からの高表面確率を有する。これらの領域の易接 近性の保証の他には、さらに第三の構造は加わえられなかった。

Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎファイル（Ｅｐｐ　ｅｔ　ａｌ、、１９７４．Ｅｕｒ、） 、Ｂｌｏｃｈｅｍ、４５．５１３−５２４）から入手したイムノグロブリンＲＥ 　Ｉ　（Ｋｉｅｂｅｒ−Ｅ＋ｇｍｏｎｓ　ｅｔ　ａｌ、、１９８９．Ｂｉｏｃｈ ｉｗ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、　９８９．２８１−３００）の可変部との相 同により、アミノ酸４１５−４４３をモデリングした。ｇ　ｐ１２０配列は、Ｃ ４１Ｂ、Ｆ４２０．１４２２．Ａ４３３゜Ｐ　４３４．　Ｐ　４３５．　Ｃ４４ ２以外は、グリシンとして加えた。ループは、ＲＥＩのＣ２３に対してＣ４１６ を、Ｃ２７に対してＦ４２０を、１２９に対してＩ４２２を、Ａ４３に対してＡ ４３３を、及びＦ４４に対してＦ４３４を鋳型にしてモデリングした。次に、拘 束化エネルギー最小化によりシスティンを強いて鋳型ジスルフィド結合させた。

ＤＩＳＣＯＶＥＩ？プログラムを用いて、アミノ酸４４４−４８４の直線配列に 分子力学を施した。これにより、領域４４６−４５３における半β鎖配座を有す る領域、及び領域４７１−４７５における半へソックス配座を存する領域が生じ たが、これはＣ−Ｆ及びＧ−０−Ｒ算法によるこのような構造の予測に従った。

次に、これらがｇｐ１２０ＨＩＶ−１単離物（Ｍｏｄｒｏｗ　ｅｔａｌ、。

１９８７、Ｊ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　６１，５７０−５７８）の間で即ち■型はｉ ＋１−Ｆ４６７及びＩ型はｉ　−Ｎ４４５．Ｎ４５ｇ、Ｒ４７３で保存された場 合、予測βターンが加えられた。アミノ酸残基４５３−４８３からの配列は、高 表面確率を有することが予測され、Ｎ４５８゜４５９及び４６２に共働グリコジ ル化部位を含有した。

アミノ酸４１１５−５Ｈ（ｇ　ｐ　１２０　／　ｇ　ｐ　４１切断の予測部位） は、β鎖４８４−４８８及びαへソックス４９Ｂ−５０８の二次構造を用いてモ デリングした（図４）。後者の領域は、高表面確率と一致した。

結果 ｇ　Ｆ１２０のアミノ酸配列とＨＬＡ−Ａ２及びＤＲｏとの比較 Ｔ細胞受容体が、クラス１分子のＣ１及びＣ２−ヘリックス直線上で複数のアミ ノ酸残基と同時に相互作用するということを示唆する証拠がある（Ｂｊｏｒｋｍ ａｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８７．Ｎａｔｕｒｅ　３２９．５１２−５１８；Ａｊ ｉｔｋｕ＋ｇａｒ　ｅｔ　ａｌ、、１９８１１．Ｃｅ１ｌ　５４．４７−５６） 。Ｘ線結晶学データか利用できるＨＬＡ−Ａ２に関しては（Ｂｊｏｒｋｍａｎ　 ｅｔ　ａｌ、、１９８７．Ｎａｔｕｒｅ　３２９．５０Ｂ−５１２）　、ａ２ド メインにおいて重要なアミノ酸が、小及び大αヘリックス領域を包含する１３０ −１１１１０間に見出される。大αヘリックス領域は、Ｃ１０１からＣ１６４ま でジスルフィド結合により拘束される。クラスＩＩＭＨＣの等価の予測Ｔ細胞認 激部位（Ｂｒｏｗｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８ｇ、Ｎａｔｕｒｅ　３３２．ｌ１４ ５−４５０；　ｔ？ｅｉｎｓｍｏｅｎａｎｄ　Ｂａｃｈ、１９９０．）Ｉｕｌｌ 、Ｉ＋ｕｕｎｏ１．２７．５１−７２；丁ｅｒｍｉｊｔｅｌｅｎ、１９９０゜β 鎖配列である。ＨＬＡ−Ａ２のＣ１０１−１６４のものと等価のアミノ酸１５− １１０の周囲の保存システィンからジスルフィド結合の可能性がある。

ＨＬＡ−Ａ２のシスティン残基Ｃ１０１及びＣ１６４間の配列（Ｂｊｏｒｋｌｌ ａｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８７．Ｎａｔｕｒｅ　３２９．５（１８−５１２；　 Ｏｒｒ　ｅｔａｌ　、　、　１９７９　、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　ｌ　、Ａｃａｄ 、Ｓｃ！　、ＵＳＡ７８．４３９５−４３９９）を表１に示し、ＤＲβ１　（Ｆ ａｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８９．　）ｌｕｍａｎ　Ｉｍｇ＋ｕｎｏ１．．２６． １０７−１２１）　、及びｇ　ｐ１２０単離物ＥＬＬにおける提案された相同配 列と比較する。ｇｐ１２０ＨＩＶ−１単離物に関して選択される番号は、ＨＬＡ −ＤＲβのＮ１９と相同である場合を示す。ＤＱβ１に関してＢｒ１ｎｋｖｏｒ ｔｈが示唆した（Ｌ１ｒｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　４５，２０１ｉ１−ｉｘ）　、 及びｇ　ｐ　１２０単離物ＷＭＪＬ１を比較した場合はそれほど明らかではない が、配列は、ｇ　ｐ　１２０遺伝子が組み込まれてこの領域のＨＬＡ−クラス■ をコードすることを示唆するのに十分似ている。

さらに興味があるのは、それぞれｇ　ｐ１２０の領域ＡＡ４４２−４６２及び４ ６８−４７７のクラス■及びクラスエとのアミノ酸配列類似性（表１）の関係に おけるｇ　ｐ　１２０の残基４９６からのαヘリックスの位置である。

Ｇ　ｐ　１６０単離物ＥＬＩの全領域と、高確率の構成αヘリックス、即ちアミ ノ酸６１、ｉｌｌ、　９９．２６Ｂ　、４９Ｂ　、５５Ｂ及び６５１から開始す る領域との比較は、構造及びＴ細胞反応性これらの分子中のアロエビトープ決定 因子の位置の一部であると予測されるクラスＩ及びクラス■のαヘリックスとの 最高の相同を共有することを示す。さらに、ｇ　ｐ１２０におけるこの配列は、 アルギニン残基Ｒ４９７，５０１，５０５及び５０８の側鎖が一面から突出する αへソックスを構成する。

Ｒ５００、Ｎ４９９及びに５０７の残りの塩基性側鎖は、最初の組からおよそ９ ０−１８０”の角度で集まり、ヘリックスのこの側面の高表面易接近性を示唆す る。ＨＬＡ−Ａ２の小αヘリックスに位置する保存トリプトファン残基（Ｂｊｏ ｒｋ＋ｇａｎｅｔ　ａｌ、、１９８７．Ｎａｔｕｒｅ　３２９，５０６−５１８ 　）　、並びに次第にＨＬＡ−Ａ２の小αヘリックスに成っていく、それぞれＨ ＬＡ−Ａ２及びｇ　ｐ　１２Ｇにおける一部保存配列ＡＡＤＭ及びＧＧＤＭとの このヘリックスの密接な近似（表１）は、分子のこの領域の重要性にさらに重み を加える。

モデリング 表１から分かるように、ＨＬＡ−Ａ２のＣ１０１及びＤＲβのＣ１５と相同の配 列の一部であると提案されるｇ　ｐ　１２０単離物ＥＬＩのＣ４４２は、ＭＨＣ Ｉ分子に関する場合と同様の、そしてクラスＨに関して提案されている（Ｂｒｏ ｗｎ　ｅｔとジスルフィド結合を形成しない。ｇ　Ｉ）　１２０に関するペプ３ −１０３８２　）は、Ｃ４４２がＣ４１Ｂ又はＣ３７６とジスルフィド結合を形 成することを示唆している。

この矛盾を説明するジスルフィド結合移動の可能性（Ｌｅｏｎａｒｄ　ｅｔ　ａ ｌ、、１９９０．Ｊ、Ｂｉｏｌ、ｃｈｅｓ、　２８５．１０３７３−１０３８２ ）は、これらのシスティン残基が本分子に非常に近似することを示唆する。ｇ　 ｐ　１２０の最初のモデルのために選択されたジスルフィド結合は、Ｌａ５ｋｙ 　ｅｔ　ａｌ、、１９８７，５ｃｉｅｎｃｅ　２３３゜２０９−２１２が示唆し ているようにＣ４４２からＣ４１６までであったか、Ｌｅｏｎａｒｄ　ｅｔ　ａ ｌ、、１９９０．Ｊ、Ｂｉｏｌ、ＣｈｅＩｌ、　２６５．１０３７３−１０３８ ２の予測と相違して、ＲＥＩ構造上に密接にモデリングされるループを形成する （Ｋｉｅｂｅｒ−Ｅａ＋ａｏｎｓ　ｅｔ　ａｌ、、１９８９゜Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、　９８９．２１１１−３００）　ｏこのループはｇ ｐ１２０単離物のなかでも高度に保存される領域内に、ＣＤ４結合において重要 であると示唆されているいくつかの相同アミノ酸を有する（下記）。

ＲＥＩ及びｇ　＋）　１２０単離物ＥＬＩ間で相同のアミノ酸を、ｏｎｓ　ｅｔ 　ａｌ、、１９８９．Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、　９８９， ２８１−３００が示唆しているように、そしてＤＲβとの配列相同の比較（表１ ）によって、鎖が逆形態と逆平行であるように抗ジスルフィド結合を形成した。

３７Ｂ及び３８３のカルボキシ末端における残りのシスティン残基を、−緒にジ スルフィド結合させ、大型ループに極めて近似するモデル内に位置させた。次に 、ジスルフィド結合がＬｅｏｎａｒｄ　ｅｔ　ａｌ、、１９９０．Ｊ、Ｂｉｏｌ 、ｃｈｅｇ、　２６５．１０３７３−１０３８２が示唆したモデルに変えられる 二次モデルを構築し、広範なエネルギー最小化後に、モデルＩの場合とまった（ 同じ方法でこれを処理した。

グリコジル化部位を含有するループのモデリング上記のモデリングストラテジー は、第三構造がほとんど記載されない、アミノ酸３８３−４１６　（モデル■） 又は３７Ｂ−４４２（モデル■）からのループを提供する。しかしながら、Ｎ３ ９０．３９４．４００及び４０５でいくつかのＨＩＶ−１ｇｐ１２０単離物間に 保存される複数のグリコジル化部位の存在（Ｍｏｄｒｏｖ　ｅｔ　ａｌ、、１９ ８７．Ｊ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　６１，５７０−５７８）は、分子のこの領域に関 する表面位置を示唆する。

アミノ酸４５４−４７０からの領域も、分子の表面上に接近しやすいグリコジル 化ループを形成することが予測される。

さらにＮ４４５でのある保存グリコジル化部位も、抗原結合部位のフロアにおけ るβシート形成により安定化するために、表面を接近しやすくし、ＭＨＣｎで提 案されたものと相同の小ループの一部としてモデリングされた（Ｂｒｏｗｎ　ｅ ｔ近似した相補的予測β鎖、即ちＡＡ４１２−４２８．４４６−４５２も認めら れる。

構造モチーフの相対的配向 上記の異なる構造モチーフ及びＲＭＳに対する模倣＜０゜２を含有するアミノ酸 配列と一緒に結合する場合のＣ末端に関する最終モデルを生成した。このモデル を、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎファイルから得たＨＬＡ−Ａ２α２鎖に関して比較し た。

これらのモデルの診断的代表例を図１に示すが、これはループ（ＨＬＡ−Ａ２の 小αヘリックス領域内）を含有し、２つのループが主αヘワックス下に突出する トリプトファンの関係におけるαヘリックス領域及びβ鎖間の視覚的比較を図示 する。配列Ａ　Ａ　２５６−２６８は、ＭＨＣＩのＣ末端の配列と、モして残基 １４４上流からのＭＨＣｎの領域と相同の有意の配列（Ｙｏｕｎｇ、１９８ｇ、 Ｎａｔｕｒｅ　３３３，２１５　）　、即ち：）ＩＬＡ　２４８　ＶＶＰＳＧＱ ＥＱＲＹ　２５７ＤＲβ１　１４４　ＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧ　１５３ｇｐＬ２０ 　ＥＬＬ　２５５　ＶＶＳＴＱＬＬＬＮＧ　２Ｂ４を示す。

クラスＩとクラス■間の相同は、この領域でＨＬＡ−Ａ２α３のＣ末端まで続＜ 　（Ｙｏｕｎｇ、１９８ｇ、Ｎａｔｕｒｅ　３３３，２１５参照）。

ＨＬＡ−Ａ２　２５９　ＣＨＶＱＨＥＣＬＰＫＰＬ　２７０ＤＲβｌ　１７５　 ＣＱＶＥ）ＩＰＳＶＴＳＰＬ　１ｇＧ考察 関連する分子の機能的活性を分析するためのあらゆるストラテジーが、保存配列 相同の同定に依っている。ｇｐ１２０に関しては、多数の単離物が目下シーケン シングされており、比較のための大型データベースを提供した。本発明の１２配 列の調査とＭｏｄｒｏｖ　ａｔ　ａｌ、、（１９１１７）、　ＪＪｉｒｏｌｏｇ ｙ　６１゜５７０−５７８の調査から、システィン残基に導く及びそれを含む注 目すべき相同の他に、全単離物間に保存されることが示されるが、その顕著な領 域のみを以下に示すＩ２４７　ＱＣＴ）ＩＧＩ本Ｐ　＋ＶＳＴＱＬＬＬＮＧＳＬ ＡＥ　＊Ｒ又はに、＋Ｖ又はＩ４３２　ＹＡＰＰＩ ４４４　８ＮＩＴＧ＊礼ＴＲＤＧＧ　札又はＩ４８８　０Ｇ（４Ｍ＋ＤＮＷ　＊ Ｄ又はＮ、＋Ｒ又はに４７９　ＥＬＹＫＹＫＶ＊　本Ｖ又は１４８ｇ　１ＥＰＬ Ｇ＊ＡＰＴ＋ＡＫＲＲＶＶ　＋ＲＥＫＲＡ　＊Ｖ又はＩ、＋Ｉ？又はに、±Ｑ又 はＥ これらの配列は、β鎖（ＡＡ　４４７及び４８０から）、いわゆるＹＡＰＰＩ、 ５ＮＩＴ及び保存Ｗループにおける領域、並びにｇｌ）１２０のカルボキシ末端 のαヘソックスを構成する高い確率を有する上記の保存領域を含む。これらの領 域は、エイズ病状に重要な構造的モチーフを明らかにするための我々のｇ　ｐ　 １２０モデリングに含まれた。

エイズは）ＩＩＶ−１感染の種特異的作用であるため、関連性も、この病気が感 染の結果として生じる又は生じない関連する種におけるウィルスと宿主との同一 分子の配列の差異に結びついていなければならない。免疫不全ウィルスＨＩＶ− ２及びｓｒｖの単離物からノｇｐ１２０ｊ、ｔ、ＡＡ２８０．４５０　、及び５ ７０周辺で配列ｖｖｓｓ、ｙｘｐｐ、及びＶＶＫＲを育する上記の保存配列との 限定相同を示す。他方、感染性ではあるが感染の免疫学的配列を示さないチンパ ンジーのＭＨＣｎ配列（Ｆａｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８９．Ｈｕｍａｎ　ｌｓｍ ｕｎ。

１．２６．１０７−１２１）間の比較は個々のヒトクラス■分子間に存在する差 異とほぼ同様に可変的である。

２つのクラスエ分子の配列の比較（Ｏｒｒ　ｅｔ　ａｌ、、１９７９．Ｐｒする と考えられる領域が保存されることを保証するために実施した。これは、Ｃ１６ ４周辺のシスティン残基、ＴＡＡＤＭ配列、及びこれらの２領域間の保存トリプ トファンに導くことになるαヘソックス形成に対する高いポテンシャルを有する 領域を含有する。

モデルに関して考え得るその他の配列比較は、ＣＤ４結合に重要であることが示 唆されるアミノ酸残基である。ＣＤ４に対するｇ　ｐ　１２０結合部位は、重要 な残基の一つと同定される４３０のアラニンによるＥＬＩ　（ＹＡＰＰＩループ ）に対して本明細書中で採用した番号を用いて、およその領域Ａ　Ａ　４２Ｂ− ４４３における配列に対して予めマツピングされている（Ｌａｓｋｙ　ｅｔ　ａ ｌ、、１９８７，５ｃｉｅｎｃｅ　２３３．２０９−２１２　）　、　ＣＤ４結 合を廃するために、ＥＬＩにおけるバリン４２５と等価のトリプトファンの突然 変異が見出された（Ｃｏｒｄｏｎｎｉｅｒｅｔ　ａｌ、、１９８９．Ｎａｔｕｒ ｅ、３４０，５７１−５７４　）　ｏ　しかしながら、アミノ末端の最初の１５ ０アミノ酸における点突然変異もＣＤ４結合、及びｇ　ｐ　１２０の配座安定性 に影響を及ぼす（Ｈｅｓｓｉｎｇ　ｅｔ　ａｌ、、１９８９．Ａｒｃｈ、Ｖｉｒ ｏｌ、１０９，２６９−２７６）　ｏこのシスティン残基も、ｙｘｐｐのカルボ キシ末端に対するＨＩＶ−２及びＳＩＶの７残基中に保存される保存残基である 。

Ｎｙｇｒｅｎ　ｅｔ　ａｌ、、（１９８８）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８５．６５４３−６５４６及びＫｏｖａｌｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ 、、（１９８７）、５ｃｉｅｎｃｅ　２３７．１３５１−１３５５も、ＣＤ４結 合に重要である我々のモデルにおけるＡＡ３５０から４７７までのものと等価の 残基を提案している。

推定上のＣＤ４結合部位を含有するこれらの領域は、αへワックス下にあるルー プとしてモデリングされる２つの領域を含む。４３０及びＹＡＰＰＩ配列に保存 アラニン残基を含有するこれらの第一のものに関しては、高β鎖確率ＡＡ４１７ −４２２の領域からのβシート形成により、ループの安定化が提案される。高β 鎖確率Ａ　Ａ　４４Ｂ−４５２の第二の領域は、後者の分子で提案された（Ｂｒ ｏｗｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８７ａ）　ＨＬ　Ａ　−ＤＲβ１における同様の領 域と相同である（表１）。ｇｐ１２０のβ鎖領域を、強いて見出されたおおよそ の列に入れるための拘束は用いなかった。

Ｌｅｏｎａｒｄ　ｅｔ　ａｌ、、１９９０．Ｊ、Ｂｌｏｌ、Ｃｈｅｓ、２６５． １０３７３−１０．３８２が最近示唆したようなＣ３７６及びＣ４４２及びＣ３ ８３からＣ４１゜６への別のジスルフィド結合転位は、Ａ　Ａ　３８４−４１５ ループが今日までにモデリングされたように（例えばグリコジル化を用いずに） 高度の柔軟性を有すために、モデルを乱さず、Ｃ３７Ｂ　、３８３．４１Ｂ　、 及び４４２をつなぐ極めて近似したジスルフィド結合がジスルフィド結合パター ンの相反する証拠によって示唆され（Ｌａｓｋｙ　ａｔ　ａｌ、、　１９８７． ５ｃｉｅｎｃｅ２３３．２０９−２１２　；　Ｌｅｏｎａｒｄ　ｅｔ　ａｌ、、 １９９０ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２８５．１０３７３−１０３８２）　、及び ジスルフィド結合移動の可能性（Ｌｅ。

ｎａｒｄ　ｅｔ　ａｌ、、Ｌ９９０．Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、２８５．１０３ ７３−１０３１１２）によつて示唆される。

したがって、本モデルの重要な特徴は、保存トリプトファン含有領域に対する正 確な配向のαヘリックスにより境されるβシート領域の配向であると考えられる 。ｇ　ｐ　１２０のこのモデルの関連性に対する支持物は、αヘリックス（Ｒ４ ９７，５００，５０１，５０５及び５０８）及び二次ループ（Ｎ４５８゜４５９ ．４６２及びに４８２，４８４　）からの分子の“底“に沿って突出する親水性 アミノ酸側鎖及びポテンシャル炭水化物鎖の領域である。

図１は、分子モデリング（実施例６）によって決定されたような、折りたたまれ たｇ　ｐ　１２０のカルボキシ末端のα炭素主鎖、及びＸ線相関データから得ら れたＨＬＡ−Ａ２（ＭＨＣＩ）のα２鎖を示す。

ＭＨＣｎの副αヘリックスと呼ばれる領域におけるαヘリックス、β鎖及び相同 配列の配向に示される類似性は、ＨＬＡ−Ａ２分子がいかなる時にもｇ　Ｉ）　 １２０の折畳みを強いるための鋳型として用いられることはないので、特に顕著 である。最も重要なことは、ｇｌ）１２０のαヘリックスが、ＴＣＲに認識され るアロエビトープ（下線）を作成するＭＨＣＩ及びクラス■の主αヘリックスの 非多形態アミノ酸と相同の配列を有することである。

クラスＩ　：　１５２　ＶａｌＡＩａＧＩｕＧＩｎＬｅｕＡｒｇＡＩａＴｙｒＬ ｅｕＧｌｕＧＩｙＴｈｒモＩＬｄ１６５ ＭＨＣＩ及び■配列中の下線部残基の配向を、図２及び３に示す（ＭＨＣの印刷 された図に合わせるために、カルボキシ末端を左に示し、一方アミノ酸配列はＮ 末端からＣ末端まで書いて、他のアミノ酸はアラニンとして示す）。

図４及び５はｇ　ｐ　１２０へリツクスの２つの異なる面を示し、後者５図は、 ｇ　ｐ　１２０のＴ細胞認識、ＣＤ４結合、及びｇｐ１２０／ｇｐ４Ｌ切断の阻 害剤として適した本発明の陰イオン配位子との相互作用を示す。図４は、クラス ■配列（図３）を模倣するアミノ酸側鎖の配向を示す。図５は、ｇ　１）　１２ ０の更なるアミノ酸側鎖を示す。

クラスＩＩ：　８８　ＬｅｕＬｅｕＧＩｕＧｌｎＡｒｇＡｒｇＡＩａＡｌａＶａ ｌＡｓｐＴｈｒＴｙｒＣｙｓＡｒｇ　８１ ｇ１）１２０　：　４９６　ＴｈｒＬｙｓＡｌａＬｙｓＡＩＡｒｇＶａｌＶａｌ ＧＩｎＡｒｇＧＩｕＬｙｓＡｒｇ　５０８ （大半の単離物） 主鎖の下線は、上及び下鏡の相同を示し、一方、下鏡の下線は２本の鎖の面の相 対的位置を示す。

２組の側鎖の相対的配向を図６に示すが、この図はカルボキシ末端からαヘリッ クスに沿って見ている。これらの側鎖間の距離を用いて、硫酸化糖ポリマーを基 礎にした図５において、特定の残基と相互作用し得るよう配位子を設計する。こ のαヘリックスの表面の高確率及びＴＣＲ易接近性は、理論的薬剤療法だけでな く免疫療法及び診断のためにもそれを標的にする。

Ｔ細胞認識に重要なＭＨＣの主αヘリックスを模倣するｇ　ｐ１２０のαヘリッ クスに関する最も一般的な配列は、以下の通りである（３文字暗号としてのｇｐ ｌ、２０に関しては上記した）： ＴＫＡＫＩ？Ｉ？ＶＶＱＲＥＫＲ それに代わるもの（単離物ＥＬＩ内のものを含む）を以Ｋ　Ｑ　５０ｇ 残基５０４（下線）にＥを有するはれが最も好ましいクラスＩ／クラス■（ここ ではそれぞれＥ及びＤ）である。クラスＩ及びクラス■はともにＲ５００の等価 物（下線）を有し、クラス■はへリックスの同一画面にＲ５０８の等価物をｇ　 ｐ１２０残基４９Ｂ−５０８に対応する種々の配列を、異なる末端のために用い 得る。

ａ）ｇｐ１２０が（１）この領域のαヘリックスを形成し、そして （ｉｔ）　ＭＨＣを模倣することを立証するために、下記の配列を合成する： ＴＫＡＫＩ？ｌ？ＶＶＥｌ？ＥＫｌ？ ｂ）ポテンシャルワクチンのためのパイロットとしてマウスにおける抗体を産生 ずる免疫原として用いるためには、ＭＭＣＩ又は■と最も交叉反応しない（Ｒ５ ００及び５０８がＡに置き換えられる）下記が好適であるが、溶液中にαヘリッ クスを生成する強い可能性を有し、免疫アジュバントの結合のための尾部（Ａ５ ０９　ｇｐ４１の最初のアミノ酸）を有する。即ち： ＴＫＡＫＡＲＶＶＱｌ？ＥＫＡＡ しかしながら、エイズにおいて重要なＴ細胞受容体Ｖβサブセットと反応する抗 イチオタイブ抗体を産生ずるために、ＭＨＣ模倣物は原免疫原として用いられね ばならない。

即ち： ＴＫＡ）［ＲＩ？ＶＶＥＲＥＫＩ？Ａ Ｃ）ポリ陰イオン性配位子の研究のために、下記の２つの配列をモデリングスト ラテジーにおいて最初に用いる：ＴＫＡＫＲ１？ＶＶＥＩ？ＥＫＲＡ ４９７　５０１　５０５　５０ｇ 下線を施した残基は、αヘリックスの一面に生じるが、しかし正常なＭＨＣ−Ｔ 細胞機能には重要でない保存塩基性アミノ酸である。

正常機能を損傷する危険はあるが、突然変異体がエイズを引き起こせない配位子 を有する場合は、さらに別のＭＨＣ型塩基性残基Ｒ５００及びＲ５０８をポリ陰 イオンの設計に包含し得る（Ｑ／Ｅ　５０４と一緒に、残基Ｒ５００及びＲ５０ ８は、Ｔ細胞受容体と直接反応するために提供されるヘリックスの第二面を構成 する。Ｒ４９７−Ｒ５０１−Ｒ５０５面に対するこれらの残基の側鎖の近似性は 、我々の仮説にさらなる証拠を与える）。

図７及び９は、５倍へリックスとしての上記の最終配列を示す。図５及び１０は 、側鎖間の距離を説明する。

これらの距離は、単糖類〜三糖類のヒドロキシル基を種々に取り囲んで一定の間 隔を置く硫酸基とほとんど同じ大きさを持つ（図８）。正確な配位子を、Ｒ４９ ７〜Ｒ５０１−Ｒ５０５単独と、又は上記のＣ）のような６個のアミノ酸のすべ てと特異的に相互作用するよう設計し得る。

実施例８ オリゴ糖配列を基礎にした特異的ｇ　Ｉ）　１２０配位子好適な出発物質は、一 般に広範に利用可能な、天然の単一、ニー、三−１又は四糖類である。標準グリ コシド結合形成反応により（例えば下記の計画の反応１により）、別の単糖類を 加えてもよい。

好適な出発物質は、官能基の正確な立体化学を提供するように選択する。

硫酸化形態である必要はない特異的ヒドロキシル基の遮断は、選択的４．６−ジ ー０−ベンジル化（例えば反応２）に記載されているような）　、６−０−ベン ゾイル化（反応３）に記載されているような）、又は６−０−　トリチル化及び ０−アセチル化（合成及び除去の条件によって必要な場合は、反応４）に記載さ れているような）により達成される。硫酸化は、上記の反応５のように実施する 。

特定の例として臭化ペルー〇−アセチル化Ｎ−アセチルラクトサミン、及び４， ６−ジーＯ−ベンジリデンメチルマンノピラノシドのような２つの好適な保護化 単糖類又はオリゴ糖類（１〜２ｇｍ５）を、−１５℃で、ジクロロメタン（２０ ｍｌ）中の銀トリフルオロメタンスルホネート（２，２ｇｍ５．８．８３ｍ１Ｉ ｏｌ　）及び２，４．６−コリデン（１，０５ｇｍ５　）と反応させる。混合物 を室温で１６時間攪拌し、次いで重炭酸ナトリウムで洗浄して、蒸発、乾燥する 。

反応２：４，６−ジー０−ベンジル化 ジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）の溶液に溶解したすりゴ糖類（２ｇ厖Ｓ）に 、水酸化バリウム（５，６Ｂｓ　）　、水酸化バリウム八水和物（５，９ｇｍｓ 　）　、及び臭化ヘンシル（５，３ｇ１ｌｌｓ）を添加する。混合物を室温で１ ６時間攪拌し、酢酸エチル（５０ｍｌ）で希釈して、水で洗浄し、蒸発、乾燥し た。

必要な場合は、希釈酸中て静かに加熱して基を除去し得る。

反応３：選択的６−０−ベンゾイル化 ジクロロメタン（２ｈｌ）中の試料（１ｇｍ）にｎ−ベンゾイルイミダゾール（ ２，２ｇｍｓ　）を添加する。混合物を室温で１６時間攪拌し、生成物質を水中 に抽出して、蒸発、乾燥する。この基を弱塩基中に取り出し、一方６−０−トリ チル基を弱酸中に取り出す。

反応４：Ｏ−アセチル化 ０℃でピリジン（２０ｍｌ）に溶解した試料（１ｇｍ）に無水酢酸（５ｍｌ）を 添加する。混合物を０℃で１６時間攪拌し、次いで蒸発、乾燥して、トルエン上 で再蒸発させる。この基を、室温で２時間攪拌しながら、メタノール中の触媒量 のナトリウムメトキシドで処理して取り出す（弱塩基）。

反応５；硫酸化 ドライピリジン（５１）に溶解した保護化オリゴ糖（１ｇｍ）の攪拌溶液に、イ オウ−トリオキシド−ピリジン錯体のアリコート（Ｉｇｍ）を添加する。混合物 を室温で一夜放置し、モル濃度のＫＯＨでｐＨを９に調整し、混合物を２時間攪 拌後、生成物質を温メタノールで抽出する。

脱保護化硫酸化オリゴ糖を、リン酸カリウムの１０−４００　ミリモル勾配を用 いて、その後バイオゲル（Ｂｉｏｇｅｔ）　Ｐ４カラム上で脱塩して水で溶離し て、陰イオン交換高速液体クロマトグラフィー（例えばＶａｒｉａｎ　ＡＸ−５ カラムｌＯ１０Ｘ２５０　）で精製する。

Ｇ　ｐ　１２０配位子の合成の例 （Ａ）２−アセトアミド−３，６−ジーＯ−アセチル−４−０−（２，３，４， ６−テトラ−０−アセチル−β−（ペルー〇−アセチル化Ｎ−アセチルラクトサ ミン）［反応　４］ （Ｂ）４．６−ジー０−ベンジリデン−１−０−メチル（４，６−ジー０−ベン ジリデンメチルマンノピラノシド）［反応　２コ （ｉ）グリコシド結合形成 ＨＤ脱保護化（ベンジリデン基を除去するための弱酸、及びアセチル基を除去す るための弱塩基）（Ｃ）０−β一旦一ガラクトピラノシル−（１−４）−〇−メ チルマンノピラノシド） 上記のように、下記の工程を実施した。

（ｉ）　選択的６−０−　トリチル化；（ｉｉ）　ベルアセチル化； （Ｉｌｉ）　トリチル基の除去； Ｈｖ）６−０−硫酸化；及び （ｖ）　０−アセチル基の除去。

２−デオキシ−６−〇−スルフエートーグルコピラノノルド−２−デオキシ−６ −〇−スルフェートーグルコピラノシル−（１−３）−０−α／β−Ｄ−１−０ −メチルマンノピラノンド） 本化合物は、添付の図５に示すものと同様である。

２、Ｇｐ１２０配位子の別の例 一般式４−０−　（２−アセトアミド、２−デオキシ−）−α−Ｄ−グリコピラ ノース）、のオリゴマー用にキチン［Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｌｃａｌ　Ｃｏ、Ｌｔ ｄ、コを使用する。

キチンを上記の方法でペルー〇−アセチル化し、次に、３５：１５：１　ｖ／ｖ 無水酢酸／氷酢酸／７１硫酸の混合液で処理して、ｎ−５又は６のオリゴマーを 生成する。次いでこれを精製し、処理して、アセチル基を除去し、［４−０（２ −デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコビラノース］、を生成する。

ＣＨ２０Ｈ基の選択的ベンゾイル化（６−Ｏ−ベンゾイル化） 硫酸化、その後室温で２時間、メタノールに溶解した触媒量のナトリウムメトキ シドを用いてベンゾイル基の除去（弱塩基） Ｇ　ｐ　１２０の指定のＣ末端αヘリックスと相同の配列を有するペプチドを、 下記のように合成する。

ＨＭＰ樹脂、及び２−　（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１， ３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフエートにより活性化され る好適に保護されたＮ−α−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）アミ ノ酸を用いて、製造業者、例えばＡｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓが明記 した条件下で、自動ペプチド合成機でペプチドを合成する。完成したペプチドを 樹脂から切り出し、８２．５％トリフルオロ酢酸１５％フェノール１５％チオア ニソール／２．５％１，２−エタンジオール１５％水で１．５時間脱保護化する 。エーテル沈降法及び遠心分離により粗ペプチドを単離し、次いて、２０分間、 ０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルの１２−２０％勾配を用いてＤｙｎ ａｓｅｘ　ｅ−８カラム（孔サイズ３００　Ａ　、１０　Ｘ２５ｈａ　）上で高 速液体クロマトグラフィーにより精製する。分画を含有するペプチドをプールし 、凍結乾燥する。当業者には公知のように、アミノ酸シーケンシング、質量分析 、及び核磁気共鳴分光法により、配列及び配座に関してこれらを分析する。

細胞培養系における異質遺伝子反応を誘導するために、配列：ＴＫＡＫＲＲＶＶ ＥＲＥＫＲ（７）ペプチドが見出され、ＨＩＶ＋患者の抗体及びＴ細胞により認 識された。

細胞培養における異質遺伝子反応 その系を以下に挙げる： 抗原対照 １、ある個体（自己）からの末梢血リンパ球は、インフルエンザペプチド抗原を 提示する同一個体（自己）からの抗原提示細胞の存在下で、刺激されて増殖し、 ２週間に亘ってＩ　Ｌ−２で展開される。

２．インフルエンザ抗原を発現する他の自己細胞をＥＢＶで不朽化し、標的細胞 として使用する。

３、別の抗原を発現する他の自己細胞をＥＢＶで不朽化し、標的細胞として使用 する。

陽性対照 ４、インフルエンザに特異的な細胞毒性７９２３球を目下含有する段階１からの 自己リンパ球は、段階２からの自己細胞に加えられ、インフルエンザ抗原を発現 する標的細胞を特異的に殺害する。

陰性対照 ５、インフルエンザに特異的な細胞毒性７９２３球を目下含有する段階１からの 自己リンパ球は、段階３からの自己細胞に加えられ、別の抗原を発現する標的細 胞に何の作用も及ぼさない。

異質遺伝子対照 ６、ある個体（自己）からの末梢血リンパ球は、インフルエンザペプチド抗原を 提示する別の個体（非自己）からの抗原提示細胞の存在下で、刺激されて増殖し 、２週間に亘ってＩ　Ｌ−２で展開される。

異質遺伝子陽性対照 ７、非特異的細胞毒性自己Ｔリンパ球を目下含有する段階６からのリンパ球は、 段階３からの自己細胞に加えられ、他の抗原を発現する標的細胞を非特異的に殺 害する。

実験 ８、ある個体（自己）からの末梢血リンパ球を、ペプチドＴ　Ｋ　Ａ　Ｋ　ＲＲ Ｖ　Ｖ　Ｅ　ＲＥ　Ｋ　Ｒｌ：ｌ：暴露される同一個体（自己）からの抗原提示 細胞の存在下で、刺激されて増殖し、２週間に亘ってＩ　Ｌ−２で展開される。

９、非特異的細胞毒性Ｔリンパ球を含有する段階８からのリンパ球は、段階３か らの細胞に加えられ、異質遺伝子対照と同様の方法で、他の抗原を発現する標的 細胞を非特異的に殺害する。

ペプチドＴＫＡＫＲＲＶＶＥＲＥＫＲ（ｇｐ１２０上の主αヘソックスに対応す る）は、自己リンパ球及び自己標的細胞間の異質遺伝子反応を誘導する。これは 、このペプチド単独がＨＩＶによって誘発されるエイズの機序を模倣し得ること を立証する。ペプチド（及び関連ペプチド）の反復投与は、このペプチドとＨＩ Ｖ上のアロエピトープとに対する患者の免疫系の反応を弱毒化し、したがってエ イズを予防すべきである（ペプチドの反復投与による免疫反応の弱毒化は公知で ある）。

６名の個体（ＨＩ　Ｖ陰性）のうち４名からのリンパ球は、この系におけるペプ チドに反応するが、これは、この系がＨＩＶに反応しエイズを発病する個体とエ イズに耐性の個体とを識別するための診断試験としても用い得ることを示す。

２０名のＨＩＶ＋患者のうち１８名は、ペプチドに対する明らかな抗体反応及び Ｔ細胞反応を示す。

上記の結果、並びに以下の表の結果から、ペプチドはワクチンとして用い得る、 そして抗原提示細胞の成員と会合した場合、異質遺伝子反応を引き出し得ること が示される。

表 全　Ｅ：Ｔ　稀釈物−６０：１；３０：ｌ；１５：ｌ；７：１ドナー　ＦＬＬＩ ／′ＦＬＩＩ　アロ／アロ　ＦＬｔｌ／自己　アロ／自己Ａ　１７：１２；８； １２　３４；２９＋２０＋１５　５；４；４；３　ｏ；ｏ；ｏ；。

Ｂ　１５．８：３．２　１８；８；０；０　０；０；０；Ｏａ；ｏ；ｏ；。

Ｃ９；０．０；０　４４；３３；１６；１８　０；０；０；ｌ　Ｏ；Ｏ；Ｏ；Ｏ Ｄ　９：５：４ニア　３４；２１１Ｊ１．（ｌ　Ｑ：Ｑ：０：ＯＬ４：Ｑ、０： ＯＥ　６０；２８；１７；８　４０；２７；１９；０　試験せず　４；０；Ｏ： ＯＦ　４：０；Ｏ；０　３８；１６；８；４　試験せず　１３；３；０；０ドナ ー　ＦＬＵ／ベブｆＦ　７０／ＰＥＰＩＸ　ｙｏ／ＰＥＰＩＯＸ　７Ｆ＋ＩＬ− ２／　ｙｏ＋ＩＬ−２ＰＥＰ　ＩＸ　ＰＥＰ　ｌ０Ｘ Ａ　２；１：Ｏ；２　１５；６；０；４　試験せず　試験せず　試験せずＢ　Ｏ ＋Ｉ；０；０　１４：３；０；６　１６；１５；０：２　１８；５；４＋２　１ ９；１４；６；８Ｆ　Ｏ；０：０；０　１４；Ｏ：０：０　１８：６；５；２　 ８：０：Ｏ；０　３２；１８；９：１９ＩＸ−２，５μＭ／ｍｌ：　ｌ０Ｘ−２ ５μＭ／ｍｌ実施例１１ 下記にしたがって、実施例１０のペプチドからワクチンを調製する： ペプチド　１−２００μｇ 食塩水　０．５１ ミヨウバン（アジュバント）　任意量 筋肉内又は皮下投与のために、必要に応じて上記の処方物を用いるか、又は適当 な場合には他の投与経路用に修正する。

投与は、例えば６か月間に８回まででよいが、しかし年齢及び患者の症状により 、もつと多い又はもつと少ない投与を要する。

図２ 図４ 図７ ム 図工０ 要　約　書（翻訳文） 本発明は、ＨＩＶ誘発性エイズに対する療法及び予防法、並びにＨＩＶ誘発性エ イズに対する個体の感受性を確認する方法を提供し、本発明は、エイズが免疫系 の抗原提示成分を模倣するＨＩＶのｇ　ｐ　１２０に起因し、それにより感受性 個体のあるＣＤ４＋Ｔ細胞を擬似活性化して、対宿主移植片病に似た症状を引き 起こすという発見を基礎にしており、この症状は、例えば原因となるＴ細胞を排 除することにより治療可能である。

国際調査報告　６．７．−０＋７１１１ｔ１：□−１１℃Ｙ／ｌシｖｈｏ　ｌ− ―−ｖ−−劇ｓ＋ｗｍ　ｌｔｌ＋　・−一１ｆ１Ｍ

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. １．以下の： ａ）ＨＩＶｇｐ１６０の、あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエビ トープを認識するか、又は；ｂ）ＨＩＶｇｐ１６０の、あるいは一つ又はそれ以 上のその生成物質のアロエビトープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識する 物質であって、 アロエビトープが、細胞膜上に提示されるか又はそれと会合する場合は、ｇｐ１ ６０、あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質と会合し、そしてＣＤ４＋Ｔ細 胞増殖検定において、少なくとも一つのＣＤ４＋Ｔ細胞クローンの増殖を刺激す る物質。
2. ２．該物質が抗体、模倣型、工学的処理タンパク質、ペプチド、小有機分子、及 びその組み合わせ物から成る群がら選択される請求の範囲１記載の物質。
3. ３．該物質が抗体又はその等価物である請求の範囲１ａ）又は１ｂ）記載の物質 。
4. ４．荷電基を有する化合物であって、膜発現ｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以 上のその生成物質に暴露された場合に荷電基がｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ 以上のその生成物質の化合物による認識を可能にするような配座を採用し、荷電 基がアミノ酸残基４９６−５０８の領域におけるｇｐ１２０の主αヘリックスの 特性荷電基と相補的である請求の範囲１記載の化合物。
5. ５．使用に際して実質的比率のヒトＭＨＣを結合しない請求の範囲４記載の化合 物。
6. ６．ｇｐ１２０と結合した場合にｇｐ１２０のＣＤ４結合領域を閉塞し得る十分 な大きさを有する請求の範囲４又は５記載の化合物。
7. ７．ｇｐ１２０の特性を示す荷電残基のみを認識する請求の範囲４〜６のいずれ か一に記載の化合物。
8. ８．荷電基が残基位置４９７、５０１、及び５０５に位置するｇｐ１２０の一つ 又はそれ以上の、あるいはすべての荷電基と相補的である請求の範囲４〜７のい ずれか一に記載の化合物。
9. ９．化合物の少なくとも一つの荷電基がｇｐ１２０の残基位置４９７のリシン、 残基位置４９７のアルギニン、残基位置５０４のグルタミン、及び／又は残基位 置５００及び５０８のいずれか又は両方のアスパラギンと相補的である請求の範 囲８記載の化合物。
10. １０．ｇｐ１２０の特注荷電基と相補的な少なくとも２個の荷電基を含有する請 求の範囲４〜９のいずれか一に記載の化合物。
11. １１．荷電基が硫酸基又はリン酸基から選択される請求の範囲４〜１０のいずれ か一に記載の化合物。
12. １２．荷電基がポリビニルポリマー、ポリビニルアルコールポリマー、オリゴ糖 類、又は多糖類のような高分子性分子に置換される請求の範囲４〜１１のいずれ か一に記載の化合物。
13. １３．荷電基が少なくとも１つのｇｐ１２０認識領域、好ましくは少なくとも２ つの認識領域を構成し、特に少なくとも１つの領域が異なる組成の荷電基を有す る請求の範囲４〜１２のいずれか一に記載の化合物。
14. １４．ペプチド又はその等価物を含有する物質であって、物質、好ましくはペプ チドがαヘリックス二次構造の少なくとも一部分を示し、少なくとも一つの荷電 部分がｇｐ１２０の基に対応し、そしてこのような部分がＭＨＣ１又はＭＨＣＩ Ｉの基に対応しないとすれば、 少なくとも２つの荷電部分を有するαヘリックス二次構造の部分が、その部分及 びその位置が荷電基に、そして：ＡＡ４９６−５０８の領域のｇｐ１２０；ＡＡ １５２−１６５の領域のＭＨＣＩ；又はＡＡ６８−８１の領域のＭＨＣＩＩから 選択される一つ又はそれ以上のペプチド配列におけるその位置に対応するような 位置でそこから突出し、 好ましくは以下の配列： ＴＲＡＫＲＲＶＶＥＲＥＫＲ及び ＴＫＡＫＲＲＶＶＥＲＥＫＲ に代表されるペプチドの一つから選択される物質。
15. １５．αヘリックスがＭＨＣＩ主αヘリックス又はＭＨＣＩＩ主αヘリックスに 対応する一次構造を有する請求の範囲１４記載の物質。
16. １６．荷電部分がペプチド配列のみに対応する請求の範囲１４又は１５記載の物 質。
17. １７．荷電部分がペプチド配列中でそれらが対応するものと同一である請求の範 囲１４〜１６のいずれか一に記載の物質。
18. １８．αヘリックスがＭＨＣＩ主αヘリックス及びＭＨＣＩＩ主αヘリックスか ら成る群から選択される一次構造を有し、すべてのしかし一つの荷電部分が一つ のヘリックス上の荷電基に対応し、その一つの部分がｇｐ１２０の荷電基がＭＨ Ｃ主αヘリックスのいずれかの上の対応する荷電基とは異なるｇｐ１２０の荷電 基に対応し、好ましくはｇｐ１２０の残基４９７．５０１，及び５０５の一つで の荷電基に対応する請求の範囲１４〜１７のいずれか一に記載の物質。
19. １９．αヘリックスが荷電部分を保有しない位置でアラニン残基から成る請求の 範囲１４〜１８のいずれか一に記載の物質。
20. ２０．αヘリックスがＭＨＣ荷電基に対応する位置で少なくとも一つのアラニン 残基を含有する請求の範囲１４〜１９のいずれか一に記載の物質。
21. ２１．少なくとも一つの荷電部分が、ｇｐ１２０のアラニン５００，ｇｐ１２０ のアルギニン５０８，及びｇｐ１２０のグルタミン５０４から選択される残基の 少なくとも一つの基に対応する請求の範囲１４〜２０のいずれか一に記載の物質 。
22. ２２．ＨＩＶ誘発性エイズに対する免疫反応を引き出すのに有効な量の物質、及 びそのための好適な担体を包含し、上記物質がＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又 はそれ以上のその生成物質のアロエビトープを認識し、上記反応がアロエビトー プを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体に対するものであり、 アロエビトープが請求の範囲１に記載されたものと同様であるＨＩＶ誘発性エイ ズに対するワクチン。
23. ２３．ＨＩＶ誘発性エイズに対する免疫反応を引き出すのに有効な量の物質、及 びそのための好適な担体を包含し、上記物質がＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又 はそれ以上の上記生成物質のアロエピトープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を 認識し、 上記反応がＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上の上記生成物質に対する ものであり、 アロエピトープが請求の範囲１に記載されたものと同様であるＨＩＶ誘発性エイ ズに対するワクチン。
24. ２４．ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープを認識する量の物質、及びそのための好適な担体を包含し、 上記物質が誘発試験における実質的に大多数のＨＩＶｇｐ１６０アロエピトープ を結合するのに十分な量で提供され、アロエビトープが請求の範囲１に記載され たものと同様であるＨＩＶ誘発性エイズに対する受動性ワクチン。
25. ２５．ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識する量の物質、及びそのための好適 な担体を包含し、 上記物質が受容者における実質的に大多数のＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を結合するの に十分な量で提供され、アロエビトープが請求の範囲１に記載されたものと同様 であるＨＩＶ誘発性エイズに対する受動性ワクチン。
26. ２６．物質が抗体又はその等価物である請求の範囲２２〜２５のいずれか一に記 載のワクチン。
27. ２７．抗体が請求の範囲４〜２１のいずれか一に記載の物質に対して産生された 請求の範囲２６記載のワクチン。
28. ２８．物質が毒素、補足的刺激剤、及び細胞毒剤から選択される物質に結合され るそれぞれ請求の範囲２５あるいは請求の範囲２６又は２７記載のワクチン。
29. ２９．抗体を産生するための請求の範囲４〜２１のいずれか一に記載の化合物又 は物質の使用。
30. ３０．抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲２９記載の使用。
31. ３１．（ａ）ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロ エビトープ； （ｂ）ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体； （ｃ）ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープを認識する物質；及び（ｄ）ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上の その生成物質のアロエピトープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識する物質 から選択される物質であって、アロエビトープが請求の範囲１に記載されたもの と同様である物質の検出のための診断技術であって、検定試料を： （ａ）ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープを認識し； （ｂ）ＨＩＶｇｐ１６０あるいは一つ又はそれ以上のその生成物質のアロエピト ープを認識するＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識し、最も好ましくはアロエピトープ を認識しないＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を認識しない検定物質と接触させ、検定基質 が検定するのが望ましい物質によって選択される技術であり、 その後、基質の結合を検定することから成り、好ましくは酵素結合免疫溶剤検定 肌ＥＬＩＳＡ、一工程ラジオイムノアッセイ、二工程ラジオイムノアッセイ、及 びサンドイッチラジオイムノアッセイから選択される技術。
32. ３２．基質が請求の範囲２〜２１記載のものと同様である請求の範囲３１記載の 技術。
33. ３３．基質が、好ましくは放射性同位元素、特に１２５Ｉ、１２１Ｉ、１４Ｃ、 ３５Ｓ、３Ｈ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ、フルオレセイン、ロダミン、ビオチン 、又はフィコエリトリン、あるいは検定可能な酵素、特にホースラディッシュペ ルオキシダーゼ又はアルカリ性ホスファターゼにより標識化される抗体であり、 余分の抗体が検定前に除去され、検定が好ましくはＦＡＣＳ分析又はフルオレセ イン顕微鏡検定により標識を検出するためのものである請求の範囲３１又は３２ 記載の技術。
34. ３４．請求の範囲３１〜３３のいずれか一に記載の技術のいずれかの必須成分を 包含するキット。
35. ３５．少なくとも請求の範囲３１〜３３のいずれか一に記載の基質を包含し、そ の基質がその支持物質と結合するキット。
36. ３６．検定される物質をｇｐ１６０発現細胞株の培養及びｇｐ１６０制限Ｔ細胞 株の培養と混合し、そして好ましくはｇｐ１６０発現細胞株がＭＨＣＩＩを発現 しない場合のｇｐ１６０制限細胞株の増殖に関して検定することから成る物質の 抗エイズ活性の検定方法。
37. ３７．Ｇｐ１６０発現細胞株が逆転写酵素欠損形態のＨＩＶに感染される請求の 範囲３６記載の方法。
38. ３８．請求の範囲３６又は３７記載のｇｐ１６０発現細胞株及びＣＤ４＋ｇｐ１ ６０制限Ｔ細胞株の各々の培養を包含するキット。
39. ３９．ＨＩＶ誘発性エイズに対する免疫反応を引き出すのに有効な量のＨＩＶ、 及びそのための好適な担体を包含し、 ＨＩＶが任意の宿主ＣＤ４＋Ｔ細胞受容体によりアロエビトープとして認識可能 な請求の範囲１記載の有効なアロエビトープを保有せず、 ＨＩＶが好ましくは殺害される、 ＨＩＶ誘発性エイズに対するワクチン。
40. ４０．Ｇｐ１６０アロエビトープに関する遺伝情報が欠失又は突然変異化される ようにＨＩＶの株を遺伝的に変化させて、ｇｐ１６０アロエビトープあるいは一 つ又はそれ以上のその生成物質をヒトＣＤ４＋Ｔ細胞受容体を刺激するために不 活性にさせることから成る請求の範囲３９記載のワクチンの製造方法。