JPH0230666B2 - Denshisupinkyomeioryoshitatanshokukinosokuteihooyobisorenimochiirushaku - Google Patents
DenshisupinkyomeioryoshitatanshokukinosokuteihooyobisorenimochiirushakuInfo
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- JPH0230666B2 JPH0230666B2 JP8224483A JP8224483A JPH0230666B2 JP H0230666 B2 JPH0230666 B2 JP H0230666B2 JP 8224483 A JP8224483 A JP 8224483A JP 8224483 A JP8224483 A JP 8224483A JP H0230666 B2 JPH0230666 B2 JP H0230666B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は貪食細胞の貪食機能を電子スピン共鳴
を利用して測定する方法及びそのための試薬に関
するものである。
を利用して測定する方法及びそのための試薬に関
するものである。
動物の血液中には侵入して来た病原菌、異物等
の外的因子を貪食する白血球等の貪食細胞が存在
し、免疫学的立場からも異物あるいは抗原の認識
とその処理という反応に参加する免疫細胞として
も注目されている。
の外的因子を貪食する白血球等の貪食細胞が存在
し、免疫学的立場からも異物あるいは抗原の認識
とその処理という反応に参加する免疫細胞として
も注目されている。
この貪食能は先天的異常が種々の難治性疾患に
より増減することが知られており、そのような先
天的異常を見つけたり、種々の疾患にかかつてい
るか否かを判断するために、貪食能を測定するこ
とが行われている。
より増減することが知られており、そのような先
天的異常を見つけたり、種々の疾患にかかつてい
るか否かを判断するために、貪食能を測定するこ
とが行われている。
測定法は、いくつか提案されているが、その代
表的なものの一つは、培養地に貪食細胞と染色さ
れ易い有機物質の粒子とを混在させ、数時間貧食
させたのち染色を行い、細胞内へ取込まれた有機
物質粒子の数を数えるものであり、測定に長時間
を要すること、又計数は人間が顕微鏡を使つて行
う関係上誤差が多くなることが避けられず、定量
的に扱うことは困難であつた。
表的なものの一つは、培養地に貪食細胞と染色さ
れ易い有機物質の粒子とを混在させ、数時間貧食
させたのち染色を行い、細胞内へ取込まれた有機
物質粒子の数を数えるものであり、測定に長時間
を要すること、又計数は人間が顕微鏡を使つて行
う関係上誤差が多くなることが避けられず、定量
的に扱うことは困難であつた。
本発明は上述した問題点を解決しようとするも
ので、表面を抗体蛋白でコートすると共に該抗体
蛋白をスピン標識体でラベリングした微小固体ビ
ーズを被検試料と混合したのち、電子スピン共鳴
装置を用いて電子スピン共鳴信号強度を測定する
ことを特徴としている。以下、図面を用いて本発
明を詳説する。
ので、表面を抗体蛋白でコートすると共に該抗体
蛋白をスピン標識体でラベリングした微小固体ビ
ーズを被検試料と混合したのち、電子スピン共鳴
装置を用いて電子スピン共鳴信号強度を測定する
ことを特徴としている。以下、図面を用いて本発
明を詳説する。
はじめに本発明で用いられる試薬を第１図に基
づき説明する。(1)固体ビーズ１（第１図ａ）が用
意される。該ビーズは例えばポリスチレンの微小
球で、細胞が貪食し易い大きさ（0.2〜0.7μｍ程
度）が与えられている。(2)該ビーズ１の表面を抗
体蛋白例えばγ−グロブリン２でコーテイングす
る。（第１図ｂ）(3)次にそのγ−グロブリン２に
スピン標識体Ａを結合（ラベリング）する。（第
１図ｃ）このスピン標識体Ａは電子スピン共鳴に
より検出され得るラジカル構造を持つと共に、γ
−グロブリンと強く結合する腕を持つ。
づき説明する。(1)固体ビーズ１（第１図ａ）が用
意される。該ビーズは例えばポリスチレンの微小
球で、細胞が貪食し易い大きさ（0.2〜0.7μｍ程
度）が与えられている。(2)該ビーズ１の表面を抗
体蛋白例えばγ−グロブリン２でコーテイングす
る。（第１図ｂ）(3)次にそのγ−グロブリン２に
スピン標識体Ａを結合（ラベリング）する。（第
１図ｃ）このスピン標識体Ａは電子スピン共鳴に
より検出され得るラジカル構造を持つと共に、γ
−グロブリンと強く結合する腕を持つ。
従つてこのようにして作成した試薬（第１図
ｃ）を電子スピン共鳴装置で測定すると、第２図
ａで示すようにスピン標識体Ａに基づく強度の大
きいシヤープは電子スピン共鳴スピクトル信号が
得られる。
ｃ）を電子スピン共鳴装置で測定すると、第２図
ａで示すようにスピン標識体Ａに基づく強度の大
きいシヤープは電子スピン共鳴スピクトル信号が
得られる。
そしてこの試薬を貪食細胞を含む溶液中に加え
ると、第１図ｄに示すように貪食細胞３は異物で
ある固体ビーズを内部に取込み（貪食）、スピン
標識体Ａを含めγ−グロブリン２を分解（消化）
し、他の物質に変えてしまう。その結果スピン標
識体Ａは消滅し、スピン標識体Ａによる電子スピ
ン共鳴は起こらなくなるため、例えば試薬と混合
後１時間乃至数時間経過した貪食細胞を含む溶液
を電子スピン共鳴で測定すると、ESRスペクト
ル信号は第２図ｂに示すように強度が極端に減少
したものとなる。
ると、第１図ｄに示すように貪食細胞３は異物で
ある固体ビーズを内部に取込み（貪食）、スピン
標識体Ａを含めγ−グロブリン２を分解（消化）
し、他の物質に変えてしまう。その結果スピン標
識体Ａは消滅し、スピン標識体Ａによる電子スピ
ン共鳴は起こらなくなるため、例えば試薬と混合
後１時間乃至数時間経過した貪食細胞を含む溶液
を電子スピン共鳴で測定すると、ESRスペクト
ル信号は第２図ｂに示すように強度が極端に減少
したものとなる。
第３図はヒトの血清中に含まれる貪食細胞の貪
食能を測定するために、第１図ｃで示される試薬
を該血清に混ぜ、それを電子スピン共鳴で１時間
毎に測定して得たESRスペクトルを重ねたもの
である。同図中スペクトルS0は経過時間０，S1，
S2，S3…，Ｓは夫々経過時間１時間、２時間、３
時間、…、10時間におけるスペクトルを夫々示
す。この図から貪食が進むのに対応してESRス
ペクトルの強度が徐々に減少して来ることがわか
る。
食能を測定するために、第１図ｃで示される試薬
を該血清に混ぜ、それを電子スピン共鳴で１時間
毎に測定して得たESRスペクトルを重ねたもの
である。同図中スペクトルS0は経過時間０，S1，
S2，S3…，Ｓは夫々経過時間１時間、２時間、３
時間、…、10時間におけるスペクトルを夫々示
す。この図から貪食が進むのに対応してESRス
ペクトルの強度が徐々に減少して来ることがわか
る。
従つてこのような観測を多くのヒトの血清につ
いて行えば、貪食細胞の数が多いものでは速くス
ペクトル強度が減少するので貪食細胞の数の固体
差を判断することができるし、貪食細胞の数は同
じでもその貪食能の違いによりスペクトル強度の
減小速度が異なつて来るので、貪食能の固体差を
知ることができる。
いて行えば、貪食細胞の数が多いものでは速くス
ペクトル強度が減少するので貪食細胞の数の固体
差を判断することができるし、貪食細胞の数は同
じでもその貪食能の違いによりスペクトル強度の
減小速度が異なつて来るので、貪食能の固体差を
知ることができる。
尚、第２図及び第３図のスペクトルの測定は、
スピン標識体ＡとしてSyva社製スピン標識試薬
３−（２−lodoacetamido）−２、２、５、５−
tetramethyl−１−pyrrolidinyloxylを使用して
行われたが、本発明は、貪食細胞によりスピン標
識体が消滅することに基づいているのであるか
ら、貪食細胞により消化されスピン標識体として
の機能を失う標識体であれば、いろいろなスピン
標識体を使用することができることは言うまでも
ない。
スピン標識体ＡとしてSyva社製スピン標識試薬
３−（２−lodoacetamido）−２、２、５、５−
tetramethyl−１−pyrrolidinyloxylを使用して
行われたが、本発明は、貪食細胞によりスピン標
識体が消滅することに基づいているのであるか
ら、貪食細胞により消化されスピン標識体として
の機能を失う標識体であれば、いろいろなスピン
標識体を使用することができることは言うまでも
ない。
具体的な測定法としては、第３図のように時間
の経過に応じて何回も測定しなくとも、例えば時
間を決めて１回だけ測定し、そのスペクトル強度
を比べるようにすれば良い。
の経過に応じて何回も測定しなくとも、例えば時
間を決めて１回だけ測定し、そのスペクトル強度
を比べるようにすれば良い。
尚、本発明は上述した例に限定されることなく
変形が可能である。例えばビーズの材質はポリス
チレンに限らないし、該ビーズにコーテイングす
る抗体蛋白もγ−グロブリンに限る必要はなく、
適宜選択すれば良い。
変形が可能である。例えばビーズの材質はポリス
チレンに限らないし、該ビーズにコーテイングす
る抗体蛋白もγ−グロブリンに限る必要はなく、
適宜選択すれば良い。
第１図ａ〜ｄは試薬の作り方を説明するための
図、第２図は試薬と試料を混合する前後のESR
スペクトル強度の違いを示す図、第３図はスペク
トル強度の減少を示す図である。 １：微小固体ビーズ、２：抗体蛋白、３：貪食
細胞、Ａ，Ｂ：スピン標識体。
図、第２図は試薬と試料を混合する前後のESR
スペクトル強度の違いを示す図、第３図はスペク
トル強度の減少を示す図である。 １：微小固体ビーズ、２：抗体蛋白、３：貪食
細胞、Ａ，Ｂ：スピン標識体。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 表面を抗体蛋白でコートすると共に該抗体蛋
白を貪食細胞により消化された時スピン標識体と
しての機能を果たさなくなるスピン標識体でラベ
リングした微小固体ビーズを、貪食細胞を含む血
清試料と混合したのち、電子スピン共鳴装置を用
いて前記混合物中の前記スピン標識体の電子スピ
ン共鳴信号強度を測定することを特徴とする貪食
機能測定法。 ２ 微小固体ビーズの表面を抗体蛋白でコート
し、更に該抗体蛋白をスピン標識体でラベリング
したことを特徴とする試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8224483A JPH0230666B2 (ja) | 1983-05-11 | 1983-05-11 | Denshisupinkyomeioryoshitatanshokukinosokuteihooyobisorenimochiirushaku |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8224483A JPH0230666B2 (ja) | 1983-05-11 | 1983-05-11 | Denshisupinkyomeioryoshitatanshokukinosokuteihooyobisorenimochiirushaku |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59206764A JPS59206764A (ja) | 1984-11-22 |
| JPH0230666B2 true JPH0230666B2 (ja) | 1990-07-09 |
Family
ID=13769004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8224483A Expired - Lifetime JPH0230666B2 (ja) | 1983-05-11 | 1983-05-11 | Denshisupinkyomeioryoshitatanshokukinosokuteihooyobisorenimochiirushaku |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0230666B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5252459A (en) * | 1988-09-23 | 1993-10-12 | Abbott Laboratories | Indicator reagents, diagnostic assays and test kits employing organic polymer latex particles |
-
1983
- 1983-05-11 JP JP8224483A patent/JPH0230666B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59206764A (ja) | 1984-11-22 |
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