JPH02295486A - 胎盤タンパク質９をコ−ドするｃＤＮＡ、その単離および使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 庄盃豆１ 本発明は、胎盤特異性タンパク質９　（ＰＰ９）をコー
ドするｃＤＮＡ、その単離、およびＰＰ９の遺伝子工学
的調製のためのその使用、に関する。

１ｌ肢歪 ＥＰ−Ｂｌ第０　０３７　９６３号明細書の記載によれ
ば、ＰＰ９は、次のような性質を有する。

ａ）炭水化物含有量：５．５７±１．３５％（ヘキソー
ス４．９±１．０％、ヘキソースアミン０．１±０．１
％、フコース０．０７±０．０５％、およびノイラミン
酸０．５±０．２％を含む） Ｃ）分子量（超遠心分離によって決定）：３５，１００
±３　，８　０　０ ｄ）分子量（ドデシル硫酸ナトリウム＜ＳＯＳ）を含む
ポリアクリルアミドゲルにおいて決定）：４　０　，０
　０　０±４，０００ ｅ）吸光係数（ｅｘｔｉｎｃｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃ
ｉｅｎｔ）　：Ｅ　已（２８０ｎｍ）＝：　１　４　．
６±１．０ｆ）電気泳動移動度：β１〜グロプリン領域
ｇ）等電点：ｐＨ５−０〜６．８の領域Ｕ　　　目　　
　、二Ｂ 上記の特許明＊Ｖに記載ざれているＰＰ９の従来の単離
は、非常に複雑である。したがって、本発明の目的は、
ＰＰ９の遺伝子工学的調製を可能にするために、ＰＰ９
をコードする遺伝子を単離することであった。

驚いたことに、ＰＰ９と頚似していることが知らていな
い異なる胎盤タンパク質Ｐ　Ｐ　５　（８ｏｈｎおよび
Ｗｉｎｋｌｅｒ：　Ａｒｃｌ＋．　Ｇｙｎａｅｋ．　２
２３、１７９−１８６、１９７７）に対する抗体を用い
て発現遺伝子バンクをスクリーニングしたときに、５個
の個々のクローンが得られた（ＰＰ９−１０、ＰＰ９−
３５３、ＰＰ９−３５７、ＰＰ９−３６１およびＰＰ９
−３６２）。これらのクローンは、全ｃＤＮＡまたはそ
の部分を含む．ＰＰ９−１０の配列決定において、ＰＰ
９をコードする配列（しかし、全く完全ではないが）の
中問に約ｅｏｏｂｐの大きさのイントロンが有りかつ３
′末端にポリ（Ａ）配列が存在しないことから、ｃＤＮ
Ａは不完全にプロセスざれた外主の（　ｈｅｔｅｒｏｇ
ｅｎｏｕｓ）核ＲＮＡ（ＨｎＲＮＡ）に由来するようで
あることが見出ざれた。他の四つのクローンは全てイン
トロンを欠いているが、それらはポリ（Ａ）配列を有し
ている。上記の工程によってＰＰ５のｃＤＮＡを単離す
ることは可能ではなかった。

配列決定データによって、ＰＰ９のプロセスされた完全
なｃＤＮＡは１３９４個の塩基対（ｈｐ）の長さであっ
て３１６個のアミノ酸のタンパク質をコードするという
結果が得られる（表１）。

３５８５３ｄの分子量およびアミノ酸組成は、上記に記
載の特許明！ＩＩＩＭ中に含まれるデータに大変よく一
致する（表２を参照されたい）。

六九 く０　く口 α　Ｃ ト べ山ＩＪＱ閤１１Ｌｌ（ｊ工Ｈ×一Σ 図は、入ｇｔｌ！−１０の位置を、入ｇｔ　１１３６２
との関係において図式的に示すものである．二つのクロ
ーンが塩基交換を示す。すなわち、ＰＰ９−３６１の位
直２５５（Ｇの代わりにＣ、アミノＭＥの代わりにＱ）
、および ＰＰ９−３６２の位置９２５（Ａの代わりにＧ１アミノ
陵Ｋの代わりにＲ）。

このようにしてＰＰ９のｃＤＮＡ配列を有することによ
って、他の既知の核酸配列との比較が可能になった。ラ
ットのアルドースレダクターゼのＤＮＡ配列（　Ｃａｒ
ｐｅｒら：　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　２２０、２０
９−２１３、１９８７）ならびにロークリスタリン（ｒ
ｈｏ−ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ）およびアルデヒドレダク
ターゼの遺伝子との相同性（　ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ）
があることが見出された。これらのタンパク質がアルデ
ヒドレダクターゼとして同一の上科（ｓｕｐｅｒｆａＩ
Ｗｉｌｙ）に属することが可能であり、ＰＰ９がヒ１・
アルドースレダクターゼと同一である可能性が非常に高
い。

本発明によれば、適当な発現系を利用して、コードｃＤ
ＮＡを用いてＰＰ９を発現させることが可能である。さ
らに、宿主の選択によって、ＰＰ９の修飾型に影響を及
ぼすことができろ。例えば、纏苗中ではグリコシル化（
ｇ１ｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）は起きないが、一方、酵
母細胞で起きるグリコシル化は高等真核纏胞におけるも
のとは異なる。

ＰＰ９は、発現ベクターｐＴｒｃ９９ＣまたはｐＴａｃ
Ｔ７Ｌを用いて大腸菌中でとくに有利に発現ざれる（諸
例を参照されたい）。

ＰＰ９のアミノ酸配列が解ると、ポリクローナルまたは
モノクローナル抗体の製造のための抗原として用いられ
るアミノ酸部分配列物 （　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）を従来法または遺伝子工学的
手法によって調製することができる。そのような抗体は
、診断的用途だけでなく、抗体力ラムの調製にも用いら
れ得る。そのようなカラムによって、ＰＰ９を他のタン
パク質とともに含む溶液からＰＰ９を分離することが可
能である。また、ＰＰ９をコードし、真核細胞中での発
現を促進し、さらには診断的情報をも得ることができる
ようなゲノムクローンを、ｃＤＮＡまたはその部分を用
いてゲノムバンクから簡単な方法で！ｉｉｍすることも
可能である。

アルドースレダクターゼ（．　Ｅ　Ｃ　ｌ．１．１．２
１）は、ＮＡＤＰＨ一依存性酵素で、糖アルコールへの
アノレドースの還元を触媒する。糖尿病およびガラクト
ース血症（　ｇａｌａｃｔｏｓｅｍｉａ）の病理的な状
態ξこおＩ，）で、多くの組織におけるアルドースレダ
クターゼ活性の上昇の結果、ソルビトールおよびガラク
チトール（ｇａｌａｃｔｉｔｏｌ）が高レベルになる。

これζこよって、例えば、水晶体の白内障および網膜の
網細膜（ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｍｅｍｂｒａｎｅ）の肥
厚化（　ｔｈ　ｉ　ｃｋｅｎ　ｉ　ｎ３）などが起きる
かも知れな０。さらに、アルドースレダクターゼレベル
の上昇心よ、神経または腎臓などの糖尿病合併症の原因
とみなされる。これらの理由で、最近アルドース阻害剤
の開発のための仕事がさかんである。これまで、この目
的のために、動物のＭｉ織や器官からアノレドースレダ
クターゼを苦心して単離することが必要であり、これに
よって、さらに収率が非常ζこ低くなる結果になってい
た。アルドースレダクターゼの大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）における発現の可能性は、今や細
菌抽出物を用いて分析システムを作ること、その結果、
動物の器官や組織への依存に取って代わること、を可能
にする。分析方法は、全体としてかなり単純化される。

本発明は、特許請求の範囲にさらに定義され、以下の諸
例に詳細にさらに説明される通りである。

上記で説明したものの他に、次の略語を用いる。

ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸ナトリウムＳＤＳ＝
ドデシル硫酸ナトリウム ＤＴＴ＝ジチオスレイトール ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン ＩＰＴＧ＝イソブロビルチオガラクトシド例≦２ ｌ．抗−ＰＰ５抗体を用いる、ヒト胎盤からの発現ｃＤ
ＮＡバンクのスクリーニング Ｇｅｎｏｆｉｔ　Ｇｎ＋ｂＨ　（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ
）からのファージλｇｔｌｌ中の発現ｃＤＮＡバンクを
、寒天プレート（直径１３．５ｃｍ）当り約３０，ＯＯ
ＯＰＦＵの濃度で塗布した。このために、大腸菌ｙｌ０
９０株（ＡＴＣＣ　３　７　１　９　７）　　（Ｒ．Ａ
．　ＹｏｕｎｇおよびＲ．Ｗ．　Ｄａｖｉｓ：　Ｓｃｉ
＝ｎｃｅ　Ｖｏｌ．　２２２、７７８−７８２、１９８
３）のコンビテントな細胞に３７℃で３０分間ファージ
を感染させて、次いでＬブロスプレート上の上層寒天に
塗布した。プレートを４２℃で４時間インキユベートし
て、次いで各々を乾燥したニトロセルロースフィルター
（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　ａｎｄ　Ｓｃｈｕｅｌｌ、Ｂ
Ａ　８５、Ｒｅｆ．　Ｎｏ．　４０１１２４）でカバー
した。フィルターは１０ｍＭＩＰＴＧ水溶液によって予
め飽和させておいた。フィルターでカバーしたプレート
を再び３７℃で４時間インキユベートした。次いで、フ
ィルターを再び除去する前に、フィルターおよびプレー
トをカーボンブラックに漬けた針でともに印付した。フ
ィルターをＴＢＳＴ（１０ｍＭ｝リスーＨＣＩ、ｐＨ８
．０、１　５０ｍＭ　ＮａＣ　ｌ，０．０５％ツィーン
２０および５％脱脂粉乳）中で４℃で一晩インキユベー
トした。次に、フィルターをＴＢＳＴ中で室温で１０分
間３回洗浄して、次いで、フィルター当り１５ｍｌのＴ
ＢＳＴに溶解した抗−ＰＰ５ウサギ抗体とともに室温で
１時問イシキュベートした。（抗体溶液は予め１：２０
０に希釈して、非組換え入ｇｔ　１　１溶解大腸菌細胞
とともにニトロセルロースフィルター上で１時間飽和さ
せておいた。）一次抗体とともにインキユベートした後
、フィルターをＴＢＳＴで４×１０分問洗浄した。次い
て、フィルターをアルカリフオスファターゼ（米国ブロ
メガ社製、ハイデルベルグのアトランタ社販売）と抱合
させて予めＴＢＳＴで１：５０００に希釈しておいた二
次の抗−ウサギ抗体とともに１時間賑盪しながらインキ
ユベートした。次いで、フィルターをＴＢＳＴで４×１
０分間再び洗浄した。

最後に、一次および二次抗体が結合しているＰＰ９−ｉ
性のクローンを可視化するために、アルカリフォスファ
ターゼと発色剤（プロトジエン社からのブロトプロット
（　ＰｒｏｔｏＢＩｏｔ）システム）との反応によって
発色反応を行わせた。各々の発色反応のために、９９μ
１のＮＢＴ　（ニトロブルーテトラゾリウム）基質（５
０ｍｇ／１、７０％ジメチルホルムアミド溶冫夜）およ
び４９．５μ１のＢＣｒＰ（５−ブロモー４−クロロ−
３−インドリルフォスフェート）基質（　５　０　Ｂ／
ｍｌ、７０％ジメチルホルムアミド溶液）を二口トセル
ロースフィルターのための１５ｍｌのＡＰ緩衝液（１０
０ｍＭ｝リスーＨＣＩ、１）Ｈ９．５、１　００ｍＭ　
ＮａＣ　１，５ｎ＋ＭＭｇＣｌ２）に加えた。陽性ブラ
ークが十分な青色を呈するまで、フィルターを発色溶液
中で暗所で約２０分閏から１時閏回すように揺り動かし
た。発色反応を、停止溶液（２０ｍＭ｝リスーＨＣＩ％
ｐＨ８．０、および５ｍＭＥＤＴＡ）中にフィルターを
浸漬して停止させた。

陽性シグナルを、対応する寒天プレート上のブラークと
照合した。ブラークをパスツールピペットで切り出して
、ｌｍｌのＳＭ！ｌ衝液（１０ｍＭ｝リスーＨＣＩ，ｐ
Ｈ７．５、１　０ｍＭ　ＭｇＣ　Ｉ　２　）に再懸濁さ
せて、単一の陽性ブラークを単離して取り出した。その
結果、陽性反応を呈するクローン、ＰＰ９−１０、ＰＰ
９−３５３、ＰＰ９−３５７、ＰＰ９−３６１およびＰ
　Ｐ　９　−３　６　２が得られた。

２．ＤＮＡの配列分析 上記のファージクローンを増やして、それぞれのＤＮＡ
を抽出した。特定のＥｃｏＲＩ断片を単離して、ブルー
スクリプトＭ１３ベクター（　Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、
サンジエゴ、ＣＡ，米国）のＥｃｏＲＩ部位に連結させ
た。配列分析をＳａｎｇｅｒらの酵素的ジデオキシ法（
Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．　ＵＳＡ
７４、５４６３−５４６７、１９７７）を用いて行った
。

配列は、転写解読枠を示し、最大３１６個のアミノ酸を
有するタンパク質をコードする。

３．ＰＰ１１ｉ！ｋ合タンパク質の発現ｐ　Ｔ　ｒ　ｃ
　９　９Ｃ　（Ｅ．　Ａ＋ｍａｎｎら：　Ｇｅｎｅ　６
９、３ｏ１〜３１５、１９８Ｂ）をＥｃｏＲＩによって
消化した．クローン入ｇｔｌｌ−３６１をＥｃｏＲＩで
消化して、１３８７ｂｐの大きさのＥｃｏＲＩ挿入物を
、上記のｐＴｒｃ９９ｃベクター断片に連結させた。結
果として得られたブラスミドｐＴｒｃ９９Ｃ−ＰＰ９は
、約３６ｋＤのタンパク質の大腸菌細胞中での合成を誘
導することができる。このタンパク質を、ヒト胎盤から
単離されたＰＰ９による免疫によって産生される単一特
異性（ｎ＋ｏｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃ）ウサギ抗一ＰＰ９
抗血清を用いて特異的に免疫沈降させることができる。

大腸菌細胞におけるＰＰ９の発現は、ざらに上記の血清
を用いるウエスタンプロット分析によって示された。こ
の実験において、ｐＴｒｃ９９Ｃ−ＰＰ９プラスミドを
含む［ＰＴＣ；一誘導細胞からの抽出物のみとの反応が
あり、約３６ｋＤのタンパク質バンドが再び特異的に可
視化された。

ブラスミドを有しない大腸菌対照抽出物、およびｐＴ　
ｒ　ｃ　９９Ｃ−ＰＰ９を含むがｒｐ’ｒｃで誘導ざれ
ていなかった抽出物は、と記の抗−ＰＰ９抗血清と反応
しなかった。前記のようにして産生されたプラスミド構
造物によって生産されたＰＰ９融合タンパク質は、以下
のヌクレオチド配列で定義される次のようなＮ一末端ア
ミノ酸配列を有した。

ベクター／リンカー／ ５′π領域 ＰＰ９ Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｓｉｒ妃．ａ　Ａｌａ　Ｍｅ
ｔ　Ａｌａ　Ｓｅｒ．．．　　　ＡＴＧＧＧＧＡＡＴ この構造によって定義されるＰＰ９融合タンパク質は、
ＰＰ９　　ｃＤＮＡによってコードされる完全なＰＰ９
アミノ酸配列に加えて、Ｎ一末端の前に６個のアミノ酸
を有している。４個のアミノ酸はベクターによってコー
ドざれるアミノ酸であり、２個はＰＰ９ｃ　　ＤＮＡに
ある５′非翻訳領域によって特定ざれるアミノ酸である
。確認のために、前記に示された構築を、発現ベクター
ｐＴｒｃ９９Ａおよびｐ　Ｔ　ｒ　ｃ　９　９　Ｂ　（
Ａｍａｎｎら：前出）を用いて同様に行った。これらの
ベクターは、２ｂｐ（ｐＴｒｃ９９Ａの場合）およびｌ
ｂｐ（ｐＴｒｃ９９Ｂの場合）のみがｐＴｒｃ９９Ｃと
異なっており、これによってＵ訳解読枠においてシフト
が起きる。予想されたように、ｐＴｒｃ９９Ａ−ＰＰ９
およびｐＴｒｃ９９Ｂ−ＰＰ９のいずれも、抗−ＰＰ９
抗血清と反応するＰＰ９タンパク質の合成を誘導するこ
とができなかった。

４．成熟非融合ＰＰ９タンパク質の発現ＰＰ９　　ｃＤ
ＮＡは、開始コードンにおけるＮｅｏ　Ｉ部位（　５　
’　ＣＣＡＴＧＧ３　’　）の他にも、構造遺伝子中に
別のＮｃｏＩ部位を有する。ＰＰ９タンパク質の成熟発
現を達成するために、先ず、１３８７ｂｐの大きさ（上
記を参照されたい）のＥｃｏＲＩ断片を、ベクターｐＭ
ａ５−８（　Ｓｔａｎｓｓｅｎｓら：　１９８９）に連
結させた。その中にＥｃｏＲＩ断片が所望の位置方向（
５′末端、左手にＰＰ９　　ＡＴＧ開始コードンが位置
している）に存在しているブラスミド（ｐＭａ５−８−
ＰＰ９）を得て、増殖させた。ブラスミドＤＮＡを、Ｈ
ｉｎｄｍによって完全に、Ｎｃｏｌによって部分的に、
消化した。１４１５ｂｐの大きさのＮｃｏＩ−Ｈｉｎｄ
ｌＩＩ断片を単離して、同じ制限酵素で切断しておいた
発現ベクターｐＴｒｃ９９Ａ中の対応する部位の閏に連
結させた。その結果得られるブラスミドｐＴ　ｒ　ｃ　
９９Ａ−ＰＰ９Ｍ　（　ｒＭＪは「成熟Ｊ　（＋ａａｔ
ｕｒｅ）を意味する）は、５５３５ｂｐからなり、ｉｐ
’ｒｃ誘導の後、成熟非融合ＰＰ９タンパク質を発現す
る。このＰＰ９タンパク質のＮ一末端アミノ敢配列は、
以下のヌクレオチド配列によって定債ざれる。

Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ．．．ＡＧＧ
ＡＡＡＣＡＧＡＣＣ　ＡＴＧ　ＧＣＡ　ＡＧＣ　ＣＧＴ
　ＣＴＣ　．．．このようにして発現されたタンパク質
は、ウエスタンプロットおよび免疫沈降において抗−Ｐ
Ｐ９抗血清と反応し、約３６ｋＯの大きさのタンパク質
を検出することが可能である。今や、この成熟ＰＰ９タ
ンパク質が大腸菌細胞のべリブラズム（　ｐｅｒｉｐｌ
ａｓｍ）中に軸送されることおよびそこでその酵素（ア
ルドースレダクターゼ）活性を示すことが見出されてい
る。

さらに、大腸菌におけるアルドースレダクターゼの発現
率を上げるために、改良された発現ベクター（ｐＴａｃ
Ｔ７Ｌ）を構築した。これには、Ｔ７ファージの遺伝子
１０のリポソーム結合部位が利用される。異種の（　ｈ
ｅｔｅｒｏ　ｌｏｇｏｕｓ）遺伝子の直前のこの配列は
、より効果的なリポソーム結合によってその発現率を上
げることができることが知られている（Ｏｌｉｎｓら：
　Ｇｅｎｅ　７３、２２７−２３５、１９８８）　．　
　ｐ　Ｔ　ａ　ｃ　Ｔ　？　Ｌは本質的には既知のべク
ターｐ　Ｋ　Ｋ　２　２　３　−３　（Ｂｒｏｓｉｕｓ
および｝ｌｏｌｙ：Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ
．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　８１、６９２９−６９３３、１
９８４）を基礎としたものであるが、後者と対照的に、
クローニングリンカーの直前に上記のＴ７配列を有して
いる。上記の１４１５ｂｐの長さのＰＰ９をコードする
ＮｃｏＩ−Ｈｉｎｄ［ＩＩ断片を、同じ制限酵素で切断
したｐＴａｃＴ７Ｌベクターに連結させた。その結果と
して得られるプラスミドｐＴａｃＴ７Ｌ−ＰＰ９は、同
様に、非融合ＰＰ９タンパク質の発現を仲介するが、Ｐ
Ｐ９の収率は、ｐＴｒ　ｃ　９９Ａ−ＰＰ９Ｍで得られ
るものの約２０倍である。

５．大腸菌における発現の後のタンパク質ＰＰ９のアル
ド　ース　レダクターゼ活性 ＰＰ９　　ｃＤＮＡ配列の相同性の比較によって、コン
ピューター分析において９４％の相同性（８５％の同一
性）がラットのアルドースレダクターゼ（　Ｃａｒｐｅ
ｒら：　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ．　２２０、２０９−２１
３、１９８７）との間に認められた。ざらに、カエルの
目のローグリスタリンおよびラット水晶体のアルデヒド
レダクターゼとの相同性が発見された。この知見によっ
て、ＰＰ９は、比較的大きなタンパク質群（ｆａｍｉｌ
！／）のあるものであって、ヒトアルドースレダクター
ゼである可能性がきわめて強い。

ベリブラズムの画分を、大腸菌Ｋ１２ Ｗ３１　１０　１ａｃ　ＩＱ　（ｐＴａｃＴ７Ｌ−ＰＰ
９）からＨｓｉｕｎｇら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ　４、９９１〜９９５、１９８６）の方法によって調
製した。これらの抽出物は、対応する対照抽出物には存
在しないアルドースレダクターゼ活性を有している。ア
ルドースレダクターゼ活性は、分析混合物中のＨＡＤＰ
Ｈの酸化による３　４　０　ｒ＋ｍにおける吸収の減少
に基づく既知の分析法（例えば、Ｋａｗａｓａｋ　ｉら
：　Ｂｉｏｃｈｉｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ　９
９６、３０−３６、１９８９）を用いて検出した。

【図面の簡単な説明】

図は、入ｇｔｌｌ−１０の位置を入ｇｔｌ１３６２との
閏係において示す、説明図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、表１に示されたアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配
   列物、その対立形質および変異体。 ２、表１に示されたコード鎖を含む、胎盤特異性タンパ
   ク質ＰＰ９をコードするＤＮＡ配列物。 ３、請求項１に記載のＤＮＡと緊縮条件 （ｓｔｒｉｎｇｅｎｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）下でハイ
   ブリダイズする、ＤＮＡまたはＲＮＡ。 ４、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＤＮＡまたは
   ＲＮＡを含む、遺伝子構造物。 ５、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＤＮＡまたは
   ＲＮＡを含む、ベクター。 ６、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＤＮＡまたは
   ＲＮＡを含む、形質転換細胞。 ７、請求項２に記載のＤＮＡ配列の大腸菌、酵母または
   動物細胞における発現によって遺伝子工学的に得られる
   、ＰＰ９。 ８、請求項１〜４のいずれか１項に記載のｃＤＮＡまた
   はＲＮＡを発現系へ導入してそこで発現させることから
   なる、ＰＰ９の製造法。 ９、遺伝子工学によって製造されるＰＰ９で免疫化を行
   うことによって得られる、ＰＰ９に特異的なポリクロー
   ナルまたはモノクローナル抗体、または抗原活性を有す
   るその部分。 １０、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＤＮＡまた
   はＲＮＡの全部または部分を含んでなる、診断補助物。 １１、請求項９に記載の抗体を含んでなる、診断補助物
   。 １２、体液、組織またはそれらから分離した核酸を請求
   項１０または１１に記載の診断補助物と接触させること
   を含む、診断法。 １３、医薬物としてのＰＰ９。 １４、ＰＰ９を含んでなる、医薬物。 １５、請求項７に記載のＰＰ９を用いることを含む、ア
   ルドースレダクターゼ阻害因子の検出またはスクリーニ
   ング法。 １６、アルドースレダクターゼ阻害因子のスクリーニン
   グまたは検出のための、請求項７に記載のＰＰ９の使用
   。