JPH02283269A - ニシン／リゾチーム配合物による微生物増殖の制御 - Google Patents
ニシン／リゾチーム配合物による微生物増殖の制御Info
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-
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-
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物増殖が抑制されるべき環境中にニシン
（ｎｉｓｉｎ）とリゾチームの相乗的に有効な組み合わ
せを加えることを含む、微生物の増殖を抑制する方法に
関する。
（ｎｉｓｉｎ）とリゾチームの相乗的に有効な組み合わ
せを加えることを含む、微生物の増殖を抑制する方法に
関する。
ニシンは、ラクトコックス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃ。
ｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ）（公式にはストレプトコック
ス・ラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔ
ｉｓ））の成る菌株により生産された抗バクテリア性ペ
プチドである。それは、これらのバクテリアの純粋培養
発酵と、その後の精製、乾燥により製造される。食品保
存剤としてのニシンの使用が最初に報告されたのは、１
９５１年であり、このときニシンはチーズ中でクロスト
リジウム・ブチリクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕ
ｔｙｒｉｃｕｍ）及びクロストリジウム・チロブチリク
ム（Ｃ，ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｊｃｕｍ）が増殖するのを
制御するのに使用された［ヒルシュ（Ｈ４ｒｓｃｈ）等
、ジャーナル・オブ・デイリー・リサーチ（Ｊ、 Ｄａ
ｉｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）、１８：２０５−２０６］
。
ス・ラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔ
ｉｓ））の成る菌株により生産された抗バクテリア性ペ
プチドである。それは、これらのバクテリアの純粋培養
発酵と、その後の精製、乾燥により製造される。食品保
存剤としてのニシンの使用が最初に報告されたのは、１
９５１年であり、このときニシンはチーズ中でクロスト
リジウム・ブチリクム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｕ
ｔｙｒｉｃｕｍ）及びクロストリジウム・チロブチリク
ム（Ｃ，ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｊｃｕｍ）が増殖するのを
制御するのに使用された［ヒルシュ（Ｈ４ｒｓｃｈ）等
、ジャーナル・オブ・デイリー・リサーチ（Ｊ、 Ｄａ
ｉｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）、１８：２０５−２０６］
。
ニシンは、普通は約７０００の分子量を持った二量体と
して存在する。それは、全部で３．４個のアミノ酸の中
にβ−メチルランチオニン、ｆヒドロアラニン及びラン
チオエンを包含する格別のアミノ酸を含む。このペプチ
ドには５つの格別のチオ−エーテル結合があり、これは
酸溶液中での安定性に寄与している。ニシンは、殆ど完
全に特徴付けがなされたバクテリオシンの１つであり、
そして他のバクテリオシン、例えば、サブチリン（Ｓｕ
ｂｔｉｌｉｎ）やエビデルミン（ｅｐｉｄｅｒｍｉｎ）
との構造及び作用の顕著な相同性を分は合っている［ブ
ラフマン（Ｂｕｃｈｍａｎ）等、１９８８、ジャーナル
・オブ・バイオロジカル−ケミストリー（Ｊ、Ｂｉｏｌ
、Ｃｈｅｍ）、２６３、（３１）：１６２６０−１６２
６６１゜それは、ランチオチックス（ｌａｎｔｉｏｔｉ
ｃｓ）と呼ばれてきたバクテリオシンのクラスの代表的
なものである［シュネール（Ｓｃｈｎｅｌｌ）等、１９
８８、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ）、３３３：２７６
−２７８１ 、ニシン、その物理的性質及び使用の最近
の論文としては、“°乳酸バクテリアのバクテリオシン
“（”Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ ｏｆ Ｌａｃｔｉｃ
Ａｃ１ｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ”）、ティー・アール拳
りＬ／ −７ハマ−（Ｔ、Ｒ，ＫＩａｅｎｈａｍｍｅｒ
）、１９８８、ビオシミー（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ）７０
： ３３７−３４９ ；“ニシン″（“Ｎ１５ｉｎ”
）、ニー（１バースト（Ａ、Ｈｕｒｓｔ）、１９８１、
フッド・アプル・マイクロパイオル（Ａｖｄ 。
して存在する。それは、全部で３．４個のアミノ酸の中
にβ−メチルランチオニン、ｆヒドロアラニン及びラン
チオエンを包含する格別のアミノ酸を含む。このペプチ
ドには５つの格別のチオ−エーテル結合があり、これは
酸溶液中での安定性に寄与している。ニシンは、殆ど完
全に特徴付けがなされたバクテリオシンの１つであり、
そして他のバクテリオシン、例えば、サブチリン（Ｓｕ
ｂｔｉｌｉｎ）やエビデルミン（ｅｐｉｄｅｒｍｉｎ）
との構造及び作用の顕著な相同性を分は合っている［ブ
ラフマン（Ｂｕｃｈｍａｎ）等、１９８８、ジャーナル
・オブ・バイオロジカル−ケミストリー（Ｊ、Ｂｉｏｌ
、Ｃｈｅｍ）、２６３、（３１）：１６２６０−１６２
６６１゜それは、ランチオチックス（ｌａｎｔｉｏｔｉ
ｃｓ）と呼ばれてきたバクテリオシンのクラスの代表的
なものである［シュネール（Ｓｃｈｎｅｌｌ）等、１９
８８、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ）、３３３：２７６
−２７８１ 、ニシン、その物理的性質及び使用の最近
の論文としては、“°乳酸バクテリアのバクテリオシン
“（”Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ ｏｆ Ｌａｃｔｉｃ
Ａｃ１ｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ”）、ティー・アール拳
りＬ／ −７ハマ−（Ｔ、Ｒ，ＫＩａｅｎｈａｍｍｅｒ
）、１９８８、ビオシミー（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ）７０
： ３３７−３４９ ；“ニシン″（“Ｎ１５ｉｎ”
）、ニー（１バースト（Ａ、Ｈｕｒｓｔ）、１９８１、
フッド・アプル・マイクロパイオル（Ａｖｄ 。
Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ）、Ｉユニ８５−１２１
及び米国特許第４．７４．５９３号が挙げられる。ニシ
ンは、同様なアミノ酸組成及び限定された範囲の抗生物
質活性を示すいくつかの密接に関連した物質を表す総称
である。この現象は、“農業における抗生物質及び抗生
″（“Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｂ
ｉｏｓｉｓ ｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ”（エム・
ウッドパイン（ｌＪ、Ｗｏｏｄｂｉｎｅ）ＩＩ）１０３
−１３０頁にイー・リビンス力（Ｅ、Ｌｉｐｉ（Ｉｓｋ
ａ）により検討されている。
及び米国特許第４．７４．５９３号が挙げられる。ニシ
ンは、同様なアミノ酸組成及び限定された範囲の抗生物
質活性を示すいくつかの密接に関連した物質を表す総称
である。この現象は、“農業における抗生物質及び抗生
″（“Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｂ
ｉｏｓｉｓ ｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ”（エム・
ウッドパイン（ｌＪ、Ｗｏｏｄｂｉｎｅ）ＩＩ）１０３
−１３０頁にイー・リビンス力（Ｅ、Ｌｉｐｉ（Ｉｓｋ
ａ）により検討されている。
リステリア・モノサイトゲネス（Ｌ、ｍｏｎｏｃｙｔｏ
ｇｅｎｅｓ）を撲滅するためのニシンの使用は、エム・
ドイル（Ｍ、Ｄｏｙｌｅ）、“リステリア・モノサイト
ゲネスに対する環境及び処理条件の効果’（”Ｅ４ｆｅ
ｃｔ ｏｆ ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎＬａｌ ａｎｄ Ｐ
ｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｌ
ｉ５ｔｅｒｉａ Ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ”）、フ
ッド・テクノロジー（Ｆｏｏｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
）、１９８８．±２（４）：１６９−１７１．により報
告されている。この参考文献は、この微生物の初期抑制
（約１２時間）を述べており、そしてリステリア・モノ
サイトゲネスは５゜０という低いｐＨレベルで増殖する
ことができそしてアルカリｐＨに耐性であってｐＨ９，
６で増殖できることを報告している。
ｇｅｎｅｓ）を撲滅するためのニシンの使用は、エム・
ドイル（Ｍ、Ｄｏｙｌｅ）、“リステリア・モノサイト
ゲネスに対する環境及び処理条件の効果’（”Ｅ４ｆｅ
ｃｔ ｏｆ ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎＬａｌ ａｎｄ Ｐ
ｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｌ
ｉ５ｔｅｒｉａ Ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ”）、フ
ッド・テクノロジー（Ｆｏｏｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
）、１９８８．±２（４）：１６９−１７１．により報
告されている。この参考文献は、この微生物の初期抑制
（約１２時間）を述べており、そしてリステリア・モノ
サイトゲネスは５゜０という低いｐＨレベルで増殖する
ことができそしてアルカリｐＨに耐性であってｐＨ９，
６で増殖できることを報告している。
種々のソースからのリゾチーム（１，４−β−Ｎ−アセ
チルへキソサミノダーゼ、Ｅ、Ｃ，３，２゜１．１７）
は良く特性が決定された酵素である。
チルへキソサミノダーゼ、Ｅ、Ｃ，３，２゜１．１７）
は良く特性が決定された酵素である。
最初１９２２年にダブリュ・フレミングにより発見され
た卵白リゾチームは、配列決定された最初のタンパク質
の中でも、三次元構造がＸ線結晶学により示唆された最
初のものでありそして詳細な作用機構が提唱された最初
のものであった。ダラム陽性菌に対するその抗微生物活
性は、例えば、ブイ・エン・グロクタ−（ｖＪＪ、ｐｒ
ｏｃｔｅｒ）等により、シーアールシー・クリティカル
・レビューズ・イン・フッドサイエンス・アンド・ヌト
リッション（ＣＲＣＣｒ１ｔ、Ｒｅｖｉｅｖｓ ｉｎ
Ｆｏｏｄ ５ｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏ
ｎ）、１９８８．２６（４）：３５９−３９５．に十分
に記載されている。
た卵白リゾチームは、配列決定された最初のタンパク質
の中でも、三次元構造がＸ線結晶学により示唆された最
初のものでありそして詳細な作用機構が提唱された最初
のものであった。ダラム陽性菌に対するその抗微生物活
性は、例えば、ブイ・エン・グロクタ−（ｖＪＪ、ｐｒ
ｏｃｔｅｒ）等により、シーアールシー・クリティカル
・レビューズ・イン・フッドサイエンス・アンド・ヌト
リッション（ＣＲＣＣｒ１ｔ、Ｒｅｖｉｅｖｓ ｉｎ
Ｆｏｏｄ ５ｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏ
ｎ）、１９８８．２６（４）：３５９−３９５．に十分
に記載されている。
卵白リゾチームの分子量は約１４．３００−１４゜６０
０であり、等電点はｐＨ１０，５−１０，７である。そ
れは、４つのジスルフィド橋により相互に連結されてい
る１２９個のアミノ酸から成る。
０であり、等電点はｐＨ１０，５−１０，７である。そ
れは、４つのジスルフィド橋により相互に連結されてい
る１２９個のアミノ酸から成る。
大腸菌バクテリオファージＴ４及びヒト涙などの種々の
生産者を包含する他のソースから同様な酵素が単離され
そして特徴付けがなされた。僅かな差（例えばヒトリゾ
チームは１３０個のアミノ酸を持っている）にもかかわ
らず、アセチルへキソサミンボリマーを加水分解する能
力は本質的に同じである。
生産者を包含する他のソースから同様な酵素が単離され
そして特徴付けがなされた。僅かな差（例えばヒトリゾ
チームは１３０個のアミノ酸を持っている）にもかかわ
らず、アセチルへキソサミンボリマーを加水分解する能
力は本質的に同じである。
リゾチームは、バクテリア及び菌類を殺傷するか又はそ
れらの増殖を抑制することが知られており、ヨーロッパ
ではチーズ中の腐敗生物クロストリジウム−チロブチル
クム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｕ
ｃｕｍ）の増殖を抑制するのに使用される。種々の他の
食品保存用途にも使用することが提唱され、リステリア
・モノサイトゲネスの増殖（及び成る場合には殺傷）を
抑制することが報告された［）＼ゲイ（Ｈｕｇｈｅｙ）
等、アプライド・アンド・エンピロンメンタル・マイク
ロバイオロジー（Ａｐｐｌ、Ｅｎｖｉｒ。
れらの増殖を抑制することが知られており、ヨーロッパ
ではチーズ中の腐敗生物クロストリジウム−チロブチル
クム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｕ
ｃｕｍ）の増殖を抑制するのに使用される。種々の他の
食品保存用途にも使用することが提唱され、リステリア
・モノサイトゲネスの増殖（及び成る場合には殺傷）を
抑制することが報告された［）＼ゲイ（Ｈｕｇｈｅｙ）
等、アプライド・アンド・エンピロンメンタル・マイク
ロバイオロジー（Ａｐｐｌ、Ｅｎｖｉｒ。
ｎ、１Ｊｉｃｒｏｂｉｏｌ） ５３ ：２１ ６５
２ １ ７０］ 。
２ １ ７０］ 。
ペプチド及びタンパク質の微妙な修飾を行って分子の成
る点を変えるとともに新しい宿主中での発現を可能とす
るのに、組換えＤＮＡ、タンパク質工学及び化学的修飾
法が使用できる。例えば、新しい宿主中でのニシンの発
現は米国特許第４゜７４０．５９３号に記載されており
、Ｔ４、ヒト及び卵白リゾチーム並びにニシン及び他の
“ランチオチックス″の遺伝子がクローン化された。ヒ
トリゾチームは、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌ
ｕ相同性分子にシン、エビデルミン、サブチリン等及び
Ｔ４、ヒト及び卵白リゾチーム）は本発明に関してはニ
シン及びリゾチームと同義であると考えるべきである。
る点を変えるとともに新しい宿主中での発現を可能とす
るのに、組換えＤＮＡ、タンパク質工学及び化学的修飾
法が使用できる。例えば、新しい宿主中でのニシンの発
現は米国特許第４゜７４０．５９３号に記載されており
、Ｔ４、ヒト及び卵白リゾチーム並びにニシン及び他の
“ランチオチックス″の遺伝子がクローン化された。ヒ
トリゾチームは、バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌ
ｕ相同性分子にシン、エビデルミン、サブチリン等及び
Ｔ４、ヒト及び卵白リゾチーム）は本発明に関してはニ
シン及びリゾチームと同義であると考えるべきである。
ニシン及びリゾチームは、成るバクテリア及び菌類の増
殖を個々に抑制することが示されているが、リゾチーム
又はニシン単独では、経済的に実施可能な濃度で使用す
る際にこれらの微生物の増殖を十分に抑制できるという
ことは明らかではない。
殖を個々に抑制することが示されているが、リゾチーム
又はニシン単独では、経済的に実施可能な濃度で使用す
る際にこれらの微生物の増殖を十分に抑制できるという
ことは明らかではない。
本発明は、望ましくない微生物の増殖を抑制するのに十
分な量のニシンとリゾチームの相乗的に有効な組み合わ
せを該微生物が増殖できる環境に加えることを特徴とす
る、該微生物が増殖できる環境下の該微生物の増殖を抑
制する方法である。
分な量のニシンとリゾチームの相乗的に有効な組み合わ
せを該微生物が増殖できる環境に加えることを特徴とす
る、該微生物が増殖できる環境下の該微生物の増殖を抑
制する方法である。
本発明は、ニシンとりゾチームを組み合わせて、各成分
単独の場合よりも有意に低い濃度で使用して、成る種の
微生物の同様な程度の制御を行うことができるという発
見に関する。ニシンとリゾチームは、種々の食品保存用
途に別々に使用されてきた。例えば、それらは、酪農製
品、加工肉、海産食物、新鮮野菜及び加工野菜、海産食
物製品、野菜及びフルーツジュース及び飲料（ソフトド
リンク及びアルコール性の両方）においてクロストリジ
ウム・ポツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕ
ｌｉｎｕｍ）のような病原性生物及びクロストリジウム
・チロブチリクム（Ｃ，ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）
のような腐敗生物を制御するのに個々に使用されてきた
。しかしながら、これらの物質の価格はこれらの用途が
商業的に受は入れられるのを妨害してさた。ニシン及び
リゾチームの抗微生物性は、ヒト及び動物の成る種の感
染症の制御、化学的供給原料及び工業製品中の微生物増
殖の制御及び微生物で汚染された表面の汚染を取り除く
などの清浄化の用途を含む非食品用途にも有用である。
単独の場合よりも有意に低い濃度で使用して、成る種の
微生物の同様な程度の制御を行うことができるという発
見に関する。ニシンとリゾチームは、種々の食品保存用
途に別々に使用されてきた。例えば、それらは、酪農製
品、加工肉、海産食物、新鮮野菜及び加工野菜、海産食
物製品、野菜及びフルーツジュース及び飲料（ソフトド
リンク及びアルコール性の両方）においてクロストリジ
ウム・ポツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕ
ｌｉｎｕｍ）のような病原性生物及びクロストリジウム
・チロブチリクム（Ｃ，ｔｙｒｏｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）
のような腐敗生物を制御するのに個々に使用されてきた
。しかしながら、これらの物質の価格はこれらの用途が
商業的に受は入れられるのを妨害してさた。ニシン及び
リゾチームの抗微生物性は、ヒト及び動物の成る種の感
染症の制御、化学的供給原料及び工業製品中の微生物増
殖の制御及び微生物で汚染された表面の汚染を取り除く
などの清浄化の用途を含む非食品用途にも有用である。
種々の微生物がニシン又はリゾチームにより影響を受け
ることが報告されている。ニシンで作用を受けるのは、
クロストリジウム属（Ｃ１ｏｓｔｒｉｄｉａ）、バチル
ス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）、ラクトコックス属（Ｌａｃｔ
ｏｃｏｃｃｉ）、スタフィロコックス属（Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｉ）、ベジオコックス属（Ｐｅｄｉｏｃｏ
ｃｃｉ）、ミクロコックス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｉ）
、ミクロバクテリウム属（Ｍｉ（：ｒｏｂａｃｔｅｒｉ
ａ）及びラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ
）の成る種（ｓｐｅｃｉｅｓ）である。リゾチームは、
単独又は他の剤と組み合わせて大抵のバクテリアに有効
であることが示された。リゾチームと組み合わせて使用
するための種々の物質が提唱された。これらには、ＥＤ
ＴＡなどのキレート化剤及びフィチン酸、ブチル−ｐ−
ヒドロキシベンゾエート、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エス
テル、アミノ酸、過酸化水素及び有ｉ酸が包含される。
ることが報告されている。ニシンで作用を受けるのは、
クロストリジウム属（Ｃ１ｏｓｔｒｉｄｉａ）、バチル
ス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）、ラクトコックス属（Ｌａｃｔ
ｏｃｏｃｃｉ）、スタフィロコックス属（Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃｉ）、ベジオコックス属（Ｐｅｄｉｏｃｏ
ｃｃｉ）、ミクロコックス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｉ）
、ミクロバクテリウム属（Ｍｉ（：ｒｏｂａｃｔｅｒｉ
ａ）及びラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ
）の成る種（ｓｐｅｃｉｅｓ）である。リゾチームは、
単独又は他の剤と組み合わせて大抵のバクテリアに有効
であることが示された。リゾチームと組み合わせて使用
するための種々の物質が提唱された。これらには、ＥＤ
ＴＡなどのキレート化剤及びフィチン酸、ブチル−ｐ−
ヒドロキシベンゾエート、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エス
テル、アミノ酸、過酸化水素及び有ｉ酸が包含される。
これらは、ブロクター等の前記文献に論じられている。
安息香酸又はソルビン酸とりゾチームの相乗的組み合わ
せは、１９８７年２月１０日に出願された西ドイツ特許
用＠ＤＥ ３７０４−００４に検討されており、没食
子酸、フィチン酸又はベタイン及びβポリリシンとの組
み合わせは、１９８６年ｌＯ月２８日に出願されｌ；日
本特許出願第Ｊ６３１０９７６２号に検討されている。
せは、１９８７年２月１０日に出願された西ドイツ特許
用＠ＤＥ ３７０４−００４に検討されており、没食
子酸、フィチン酸又はベタイン及びβポリリシンとの組
み合わせは、１９８６年ｌＯ月２８日に出願されｌ；日
本特許出願第Ｊ６３１０９７６２号に検討されている。
グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、チオシア
ネート及びリゾチームを含む殺バクテリア性組成物が、
１９８８年４月２１日に公表されたＰＣＴ出願ＷＯ３８
／ｌ。
ネート及びリゾチームを含む殺バクテリア性組成物が、
１９８８年４月２１日に公表されたＰＣＴ出願ＷＯ３８
／ｌ。
２６００に提唱されている。クノール等は、酵母の溶解
にリゾチームを使用することを報告している［ジャーナ
ル・オブ・７７ド・サイエンス（Ｊ、Ｆｏｏｄ、５ｃｉ
）、 、 ｌ ９７９．４４：１３６２゜ニシンの作用
の機構は解明されてはいないかる多くの研究者はこのペ
プチドの致死性を感受性生物の細胞膜での非可逆的変化
に結び付けた。ニシンに対する大抵の生物の耐性は、適
当な受容体分子の物理的排除又は欠如の故に、その作用
部位にペプチドが接近できないことによると考えられる
。
にリゾチームを使用することを報告している［ジャーナ
ル・オブ・７７ド・サイエンス（Ｊ、Ｆｏｏｄ、５ｃｉ
）、 、 ｌ ９７９．４４：１３６２゜ニシンの作用
の機構は解明されてはいないかる多くの研究者はこのペ
プチドの致死性を感受性生物の細胞膜での非可逆的変化
に結び付けた。ニシンに対する大抵の生物の耐性は、適
当な受容体分子の物理的排除又は欠如の故に、その作用
部位にペプチドが接近できないことによると考えられる
。
卵白リゾチームのようなｎ−アセチルへキソサミノダー
ゼによる細胞溶解の機構は、細胞壁の構成成分；バクテ
リアの場合には、ｎ−アセチルムラミン酸−ｎ−アセチ
ルグルコサミンポリマー菌類の場合には、キチン（ｎ−
アセチルグルコサミンポリマー）の加水分解による開裂
を含む。ニシンとリゾチームの相乗作用は、各成分が他
方の成分の基質（ｓｕｂｓｔｒａｔａ）をより接近しや
すくする結果かも知れない。微生物細胞壁の構造成分を
分解することにより、リゾチームは、もしそうしなけれ
ば細胞表面の下に埋もれている感受性細胞膜へのニシン
の接近可能性を増加させるのかも知れない。これらの抗
微生物剤の作用の機構とそれらの公知の標的微生物とに
基づいて、多くのダラム陽性菌及びダラム陰性菌並びに
成る種の菌類の増殖は、リステリア・モノサイトゲネス
（Ｌ． ｍｏｎｏｃｙｔ。
ゼによる細胞溶解の機構は、細胞壁の構成成分；バクテ
リアの場合には、ｎ−アセチルムラミン酸−ｎ−アセチ
ルグルコサミンポリマー菌類の場合には、キチン（ｎ−
アセチルグルコサミンポリマー）の加水分解による開裂
を含む。ニシンとリゾチームの相乗作用は、各成分が他
方の成分の基質（ｓｕｂｓｔｒａｔａ）をより接近しや
すくする結果かも知れない。微生物細胞壁の構造成分を
分解することにより、リゾチームは、もしそうしなけれ
ば細胞表面の下に埋もれている感受性細胞膜へのニシン
の接近可能性を増加させるのかも知れない。これらの抗
微生物剤の作用の機構とそれらの公知の標的微生物とに
基づいて、多くのダラム陽性菌及びダラム陰性菌並びに
成る種の菌類の増殖は、リステリア・モノサイトゲネス
（Ｌ． ｍｏｎｏｃｙｔ。
ｇｅｎｅｓ）で証明された方式と同様な方式においてニ
シンとリゾチームの組み合わせにさらすことにより抑制
されるであろうと結論することができる。
シンとリゾチームの組み合わせにさらすことにより抑制
されるであろうと結論することができる。
問題のダラム陽性菌の中でも、リステリア・モノサイト
ゲネスは、冷凍器の温度で増殖できることと、摂取され
るとひどい結果をもたらすことがあるそのｇＩｇ厚性の
故に特に有害な生物である。リステリア・モノサイトゲ
ネスは、近年において、特に、ミルク、コールスロー（
ｃｏｌｅ ｓｌａｙ）及びソフト熟成チーズ（ｓｏｆｔ
−ｒｉｐｅｎｅｄ ｃｈｅｅｓｅ）に関連したリステリ
ア症（ｌｉｓｔｅｒｏｓｉｓ）の突発の結果として起こ
る、いろいろの不慮の死に関係してきた。合衆国病気撲
滅センター（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｃｅｎｔｅ
ｒ ｆ。
ゲネスは、冷凍器の温度で増殖できることと、摂取され
るとひどい結果をもたらすことがあるそのｇＩｇ厚性の
故に特に有害な生物である。リステリア・モノサイトゲ
ネスは、近年において、特に、ミルク、コールスロー（
ｃｏｌｅ ｓｌａｙ）及びソフト熟成チーズ（ｓｏｆｔ
−ｒｉｐｅｎｅｄ ｃｈｅｅｓｅ）に関連したリステリ
ア症（ｌｉｓｔｅｒｏｓｉｓ）の突発の結果として起こ
る、いろいろの不慮の死に関係してきた。合衆国病気撲
滅センター（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｃｅｎｔｅ
ｒ ｆ。
ｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏυは、合衆国では年
間１６００ケースのリステリア症が起こり、その４００
ケ一ス以上が死亡するであろうと評価している。母親、
胎児、新生児及び免疫が弱体化している個体は特に危険
である。リステリア・モノサイトゲネス感染症は、骨髄
炎又は敗血症に至ることがあり、診断されたケースの約
３０％が死亡する。
間１６００ケースのリステリア症が起こり、その４００
ケ一ス以上が死亡するであろうと評価している。母親、
胎児、新生児及び免疫が弱体化している個体は特に危険
である。リステリア・モノサイトゲネス感染症は、骨髄
炎又は敗血症に至ることがあり、診断されたケースの約
３０％が死亡する。
本発明は、ニシンとリゾチームの組み合わせが、望まし
くない微生物の増殖を、それらのいずれかの物質それ自
体よりも高度に抑制するということと、これらの物質の
組み合わさった抑制効果がニシン又はリゾチームを個々
に使用する場合に観測される付加効果よりも大きいとい
う発見に基づいて予測される。抗微生物剤としてエンン
を使用する場合には、最大の効果を得るために、処理さ
れるべき物質１グラム当たり２００−３００国際単位（
ＩＵ）又はそれより多くの負荷レベル（ｌｏａｄｉｎｇ
ｌｅｖｅｌ）が通常推奨される。同様に、純粋なりゾチ
ームは、典型的には、処理されるべき物質１グラム当た
り２０−１００マイクログラム又はそれより多くの負荷
で使用される。これらの物質の各々それ自体は、これら
の高い負荷レベルで有効であるが、かかるレベルは多く
の用途に経済的に実行可能ではない。ニシンとリゾチー
ムが組み合わせで相乗作用的に反応して望ましくない微
生物の増殖を抑制するという発見は、いずれかの物質そ
れ自体よりも高い薬効及び経済性でバクテリアの増殖を
抑制するだめのこれらの物質の使用を容易にする。
くない微生物の増殖を、それらのいずれかの物質それ自
体よりも高度に抑制するということと、これらの物質の
組み合わさった抑制効果がニシン又はリゾチームを個々
に使用する場合に観測される付加効果よりも大きいとい
う発見に基づいて予測される。抗微生物剤としてエンン
を使用する場合には、最大の効果を得るために、処理さ
れるべき物質１グラム当たり２００−３００国際単位（
ＩＵ）又はそれより多くの負荷レベル（ｌｏａｄｉｎｇ
ｌｅｖｅｌ）が通常推奨される。同様に、純粋なりゾチ
ームは、典型的には、処理されるべき物質１グラム当た
り２０−１００マイクログラム又はそれより多くの負荷
で使用される。これらの物質の各々それ自体は、これら
の高い負荷レベルで有効であるが、かかるレベルは多く
の用途に経済的に実行可能ではない。ニシンとリゾチー
ムが組み合わせで相乗作用的に反応して望ましくない微
生物の増殖を抑制するという発見は、いずれかの物質そ
れ自体よりも高い薬効及び経済性でバクテリアの増殖を
抑制するだめのこれらの物質の使用を容易にする。
典型的な例では、望ましくない微生物の増殖に対して耐
性とされるべき基質は、好ましくはニシンとリゾチーム
の両方を含むべきである。ニシンの総量は、典型的には
、２５１Ｕ／ｍｌＪｌ！Ｌ理されるべき材料（又は固体
系ではＩＵ／ｇｍ）乃至２０００ＩＵ／ｍ１２の範囲に
あるであろう。大抵の用途では、ｌ ０ ０−５ ０
０ Ｉ Ｕ／ｍｌのニシン濃度で十分である。ニシン：
リゾチームの比（ＩＵ／ｍ（２：μｇ／ｍｌ＞は、９：
１乃至ｌ：２の範囲にあるが、２：１の比が好ましい。
性とされるべき基質は、好ましくはニシンとリゾチーム
の両方を含むべきである。ニシンの総量は、典型的には
、２５１Ｕ／ｍｌＪｌ！Ｌ理されるべき材料（又は固体
系ではＩＵ／ｇｍ）乃至２０００ＩＵ／ｍ１２の範囲に
あるであろう。大抵の用途では、ｌ ０ ０−５ ０
０ Ｉ Ｕ／ｍｌのニシン濃度で十分である。ニシン：
リゾチームの比（ＩＵ／ｍ（２：μｇ／ｍｌ＞は、９：
１乃至ｌ：２の範囲にあるが、２：１の比が好ましい。
固体基質中の濃度は、容量基準から重量基準に変わるこ
とを除いては同じであろう。表面処理は、処理されるべ
き基質をニシン／リゾチーム溶液に懸濁させそして貯蔵
することにより達成できる。別法として、基質を前記溶
液に浸漬するか又は溶液を基質の表面に噴霧することが
できる。ニシン／リゾチームの組み合わせは、基質の表
面に施されるフィルム又はゲルに導入することができ、
又はこの組み合わせは、チ−ズの製造に使用するミルク
に加えるなど、処理されるべき環境に直接導入すること
ができる。浸漬、フィルム、ゲル又はケーシングなどの
フィルム被覆用途では、ニシンとりゾチームの初期濃度
をそれらの溶解度の限界に近付けて、施布及び拡散の後
前記の範囲内にある残留レベルのニシン／リゾチームを
含む最終製品とすることができる。
とを除いては同じであろう。表面処理は、処理されるべ
き基質をニシン／リゾチーム溶液に懸濁させそして貯蔵
することにより達成できる。別法として、基質を前記溶
液に浸漬するか又は溶液を基質の表面に噴霧することが
できる。ニシン／リゾチームの組み合わせは、基質の表
面に施されるフィルム又はゲルに導入することができ、
又はこの組み合わせは、チ−ズの製造に使用するミルク
に加えるなど、処理されるべき環境に直接導入すること
ができる。浸漬、フィルム、ゲル又はケーシングなどの
フィルム被覆用途では、ニシンとりゾチームの初期濃度
をそれらの溶解度の限界に近付けて、施布及び拡散の後
前記の範囲内にある残留レベルのニシン／リゾチームを
含む最終製品とすることができる。
基質の表面を処理する場合に、ニシン／リゾチームの最
も有効な濃度を確かめるのにいくらかのルーチンな実験
が必要なことがある。
も有効な濃度を確かめるのにいくらかのルーチンな実験
が必要なことがある。
乳酸バクテリア、特にラクトコッカス・ラクチス（Ｌａ
ｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ）がチーズなどの発
酵食品製品の製造に使用される。ラクトコッカス・ラク
チスのある菌株はニシンを生産するので、これらの微生
物を意閃的に成る発酵物に加えて、ニシンを発酵食品製
品全体にわたり分布させることが示唆された。この方法
の主要な懸念は、得られるニシン濃度が変わったり有効
であるには余りにも低すぎることがあるということであ
る。しかしながら、本発明に従って発酵製品にリゾチー
ムを加えることにより、有効な制御に必要なニシンの量
を減少させて、低濃度のニシンですら抗微生物作用が実
現される。
ｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ）がチーズなどの発
酵食品製品の製造に使用される。ラクトコッカス・ラク
チスのある菌株はニシンを生産するので、これらの微生
物を意閃的に成る発酵物に加えて、ニシンを発酵食品製
品全体にわたり分布させることが示唆された。この方法
の主要な懸念は、得られるニシン濃度が変わったり有効
であるには余りにも低すぎることがあるということであ
る。しかしながら、本発明に従って発酵製品にリゾチー
ムを加えることにより、有効な制御に必要なニシンの量
を減少させて、低濃度のニシンですら抗微生物作用が実
現される。
本発明を下記の実施例により更に説明する。
実施例１
リステリア・モノサイトゲネスの増殖の抑制に対するリ
ゾチームとニシンの相乗効果 リステリア・モノサイトゲネス・スコツトＡ（Ｌｉｓｔ
ｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏ ｅｎｅｓ ５ｃｏｔｔ
Ａ）の培養物をプレイン・ハート・インヒュージ貨ン・
ブロス（ＢｒａｉｎＨｅａｒｔ ［ｎｒｕｓｉｏｎ ｂ
ｒｏｔｈ） ［Ｂ ＨＩ、デイ７コ壷ラボラトリーズ・
インコーホレーテッド（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、 Ｉｎｃ、）］中で一夜増殖させＩ；。前記
−夜培養物ｌＯμｇを含むＢＨＩ寒天４ｍ（２で覆った
ＢＨＩ寒天寒天２５奢Ｑ用して、覆いプレート（ｏｖｅ
ｒｌａｙ ｐｌａｔｅｓ）を調製した。無菌の抗生物質
感度ディスクに種々の濃度のニシン、リゾチーム又はニ
シン／リゾチームブレンドｌＯμＱを吸い取らせ（ｂｌ
ｏｔ）、覆いグレートの表面に置きそして３７℃で一夜
インギュベーションした。
ゾチームとニシンの相乗効果 リステリア・モノサイトゲネス・スコツトＡ（Ｌｉｓｔ
ｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏ ｅｎｅｓ ５ｃｏｔｔ
Ａ）の培養物をプレイン・ハート・インヒュージ貨ン・
ブロス（ＢｒａｉｎＨｅａｒｔ ［ｎｒｕｓｉｏｎ ｂ
ｒｏｔｈ） ［Ｂ ＨＩ、デイ７コ壷ラボラトリーズ・
インコーホレーテッド（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、 Ｉｎｃ、）］中で一夜増殖させＩ；。前記
−夜培養物ｌＯμｇを含むＢＨＩ寒天４ｍ（２で覆った
ＢＨＩ寒天寒天２５奢Ｑ用して、覆いプレート（ｏｖｅ
ｒｌａｙ ｐｌａｔｅｓ）を調製した。無菌の抗生物質
感度ディスクに種々の濃度のニシン、リゾチーム又はニ
シン／リゾチームブレンドｌＯμＱを吸い取らせ（ｂｌ
ｏｔ）、覆いグレートの表面に置きそして３７℃で一夜
インギュベーションした。
バクテリアの増殖の抑制は、５０１Ｕ／ｍ１２以下の濃
度のニシンでは観察されず、１２５μｇ／ｍｌ以下の濃
度のリゾチームでも観察されなかっｌ；。しかしながら
、５０１０７ｍ（２のニシンと５０μｇ ／ ｍ Ｑの
りゾチームを有する溶液を使用した場合には、透明且つ
明白な抑制ゾーンがディスクのまわりに観察されＩ；。
度のニシンでは観察されず、１２５μｇ／ｍｌ以下の濃
度のリゾチームでも観察されなかっｌ；。しかしながら
、５０１０７ｍ（２のニシンと５０μｇ ／ ｍ Ｑの
りゾチームを有する溶液を使用した場合には、透明且つ
明白な抑制ゾーンがディスクのまわりに観察されＩ；。
抑制ゾーンの外縁のニシンとリゾチームの濃度はディス
クに始めに施された濃度よりもはるかに低くなければな
らないので、少量のニシンとりゾチームが相乗的に作用
してリステリア・モノサイトゲネス・スコツトＡの増殖
を抑制すると結論することができる。
クに始めに施された濃度よりもはるかに低くなければな
らないので、少量のニシンとりゾチームが相乗的に作用
してリステリア・モノサイトゲネス・スコツトＡの増殖
を抑制すると結論することができる。
実施例２
リステリア・モノサイトゲネス・スコツトＡの培養物を
ＢＨＩブロスで一夜増殖させそして遠心分離で回収した
。回収した細胞を０．０６７Ｍリン酸カリウム緩衝液（
ｐＨ６，６）で洗浄しそして、バラシュ・アンド・ロー
ム・スペクトロニック２０ （Ｂａｕｓｃｈ ＆ Ｌｏ
ｔｎｂ ５ｐｅｃｔｒｏｎｉｃ ２０）で決定して５４
０ｎｍでの最終吸光度が約１．０となるように、種々の
ｐＨレベルで０．０６７Ｍリン酸カリウム緩衝液中に再
懸濁させｔ；。バクテリアの溶解は５４０ｎｍでの吸光
度の損失を伴う。ニシンとリゾチームをこれらの溶液に
加えてｌ ００１ Ｕ／ｍｌニシンとＩＯμｇ ／ ｍ
Ｑリゾチームの最終濃度とし、そして溶液を３７″の
水浴に入れ、然る後５４０ｎｍでの吸光度の変化を監視
した。
ＢＨＩブロスで一夜増殖させそして遠心分離で回収した
。回収した細胞を０．０６７Ｍリン酸カリウム緩衝液（
ｐＨ６，６）で洗浄しそして、バラシュ・アンド・ロー
ム・スペクトロニック２０ （Ｂａｕｓｃｈ ＆ Ｌｏ
ｔｎｂ ５ｐｅｃｔｒｏｎｉｃ ２０）で決定して５４
０ｎｍでの最終吸光度が約１．０となるように、種々の
ｐＨレベルで０．０６７Ｍリン酸カリウム緩衝液中に再
懸濁させｔ；。バクテリアの溶解は５４０ｎｍでの吸光
度の損失を伴う。ニシンとリゾチームをこれらの溶液に
加えてｌ ００１ Ｕ／ｍｌニシンとＩＯμｇ ／ ｍ
Ｑリゾチームの最終濃度とし、そして溶液を３７″の
水浴に入れ、然る後５４０ｎｍでの吸光度の変化を監視
した。
この実験の結果を第１図のグラフに示す。ニシン又はリ
ゾチームを含まない対照では５時間後で有意な変化は見
られない。ニシン単独によるリステリア・モノサイトゲ
ネスの溶解は、ｐＨ５，５以下又はｐＨ８，３以上で最
小であり、ｐＨ７乃至８の間で最大の溶解が起こった。
ゾチームを含まない対照では５時間後で有意な変化は見
られない。ニシン単独によるリステリア・モノサイトゲ
ネスの溶解は、ｐＨ５，５以下又はｐＨ８，３以上で最
小であり、ｐＨ７乃至８の間で最大の溶解が起こった。
リゾチーム単独での溶解はｐＨ６，０−６，５で最大値
を有していた。６．５以上のｐＨレベルでは、リゾチー
ムとニシンの明白な相乗効果がこれらの抗微生物剤の特
定の濃度で観察された。ニシンとりゾチームによる溶解
の算術的和を、比較の目的でグラフに示す。この比較は
ニシン／リゾチーム組み合わせにより生じた相乗効果を
説明する。
を有していた。６．５以上のｐＨレベルでは、リゾチー
ムとニシンの明白な相乗効果がこれらの抗微生物剤の特
定の濃度で観察された。ニシンとりゾチームによる溶解
の算術的和を、比較の目的でグラフに示す。この比較は
ニシン／リゾチーム組み合わせにより生じた相乗効果を
説明する。
これらの結果は、種々のｐＨレベルで、特に個々の成分
がそれら自身の力では抗微生物活性を持つとは思われな
いｐＨレベルで、ニシンとリゾチームの相乗性を示す。
がそれら自身の力では抗微生物活性を持つとは思われな
いｐＨレベルで、ニシンとリゾチームの相乗性を示す。
これは、チーズの場合のようにｐＨが普通は低いレベル
に保たれている系においてすら重要である。チーズのｐ
Ｈは普通は低いけれども、表面が熟成したチーズの外縁
は、チーズの中の熟成化微生物の作用により中性に近付
く。これが起こると、リステリア・モノサイトゲネスな
どの食品中の病原体がチーズ円板の表面で増殖すること
がある。ニシン／リゾチームを表面に施すか又はチーズ
ミルクに添加することにより、前述のｐＨでニシン／リ
ゾチームをチーズに導入すれば、このｆＮｒＪＫ体の増
殖が制御される。
に保たれている系においてすら重要である。チーズのｐ
Ｈは普通は低いけれども、表面が熟成したチーズの外縁
は、チーズの中の熟成化微生物の作用により中性に近付
く。これが起こると、リステリア・モノサイトゲネスな
どの食品中の病原体がチーズ円板の表面で増殖すること
がある。ニシン／リゾチームを表面に施すか又はチーズ
ミルクに添加することにより、前述のｐＨでニシン／リ
ゾチームをチーズに導入すれば、このｆＮｒＪＫ体の増
殖が制御される。
実施例３
リステリア・モノサイトゲネスの溶解に対するニシン／
リゾチームの種々の比の影響 リステリア・モノサイトゲネス・スコツトＡ菌株を前述
の如くして増殖させ、ｐＨ７，０のリン酸カリウム緩衝
液で洗浄しそしてこの緩衝液に再懸濁させた。種々の培
養調製物を３７℃で１時間インキユベーシツンした後の
吸光度の変化を第２図に示す。このグラフで表示された
データから、所定量の細胞溶解を達成するのにニシン及
びリゾチームのいずれか一方だけを使用する場合よりも
有意に少ない量でニシンとりゾチームの組み合わせを使
用できることが決定できる。
リゾチームの種々の比の影響 リステリア・モノサイトゲネス・スコツトＡ菌株を前述
の如くして増殖させ、ｐＨ７，０のリン酸カリウム緩衝
液で洗浄しそしてこの緩衝液に再懸濁させた。種々の培
養調製物を３７℃で１時間インキユベーシツンした後の
吸光度の変化を第２図に示す。このグラフで表示された
データから、所定量の細胞溶解を達成するのにニシン及
びリゾチームのいずれか一方だけを使用する場合よりも
有意に少ない量でニシンとりゾチームの組み合わせを使
用できることが決定できる。
ニシン単独でバクテリアの最適な溶解を達成するには、
約２００１Ｕ／ｍｌのニシン濃度が必要である。リゾチ
ームの場合には、５０μｇ ／ ｍ ０以上の濃度（通
常約１００μｇ ／ ｍ ｆｆ）が必要である。ニシン
２００１Ｕ／ｒｎ２により達成されるのと同じ割合の溶
解が約２５μｇ ／ ｍ （ｔのりゾチームと約１０１
Ｕ／ｍ？２のニシンとの組み合わせにより達成できるこ
とが第２図から決定できる。ＩＣ１ｒＵ／ｍｌ未満のニ
シン及び２５μｇ／ｍ４未満のりゾチームで達成される
溶解の程度は、個々に使用された２００ＩＵ／ｍＩ２の
ニシン又は５０μｇ ／ ｍ Ｑのリゾチームで達成さ
れる溶解の程度よりも大きいことが第２図から決定でき
る。これは相当なコストの節約の可能性を示す。何故な
らば従来ニシンはりゾチームの価格の約２倍で販売され
てきたからである。両製品は食品成分基準により比較的
高価であり、そのため２００１Ｕ／ｍ（１のニシン又は
１００μｇ ／ ｍ （ｌのリゾチームの使用は多くの
用途で手が出せない程高価である。本発明は、ニシンと
リゾチームの使用量を有意に減少させて、ニシン単独で
使用する場合に予想されるコストの１０％及び抗微生物
剤としてリゾチームだけが使用される場合のコストの４
５％未満の処理コストをもたらす手段を提供する。
約２００１Ｕ／ｍｌのニシン濃度が必要である。リゾチ
ームの場合には、５０μｇ ／ ｍ ０以上の濃度（通
常約１００μｇ ／ ｍ ｆｆ）が必要である。ニシン
２００１Ｕ／ｒｎ２により達成されるのと同じ割合の溶
解が約２５μｇ ／ ｍ （ｔのりゾチームと約１０１
Ｕ／ｍ？２のニシンとの組み合わせにより達成できるこ
とが第２図から決定できる。ＩＣ１ｒＵ／ｍｌ未満のニ
シン及び２５μｇ／ｍ４未満のりゾチームで達成される
溶解の程度は、個々に使用された２００ＩＵ／ｍＩ２の
ニシン又は５０μｇ ／ ｍ Ｑのリゾチームで達成さ
れる溶解の程度よりも大きいことが第２図から決定でき
る。これは相当なコストの節約の可能性を示す。何故な
らば従来ニシンはりゾチームの価格の約２倍で販売され
てきたからである。両製品は食品成分基準により比較的
高価であり、そのため２００１Ｕ／ｍ（１のニシン又は
１００μｇ ／ ｍ （ｌのリゾチームの使用は多くの
用途で手が出せない程高価である。本発明は、ニシンと
リゾチームの使用量を有意に減少させて、ニシン単独で
使用する場合に予想されるコストの１０％及び抗微生物
剤としてリゾチームだけが使用される場合のコストの４
５％未満の処理コストをもたらす手段を提供する。
実施例４
未加工ソーセージ中のリステリア・モノサイトゲネスの
増殖に対するニシン／リゾチームの効果リステリア・モ
ノサイトゲネスは５℃で増殖することができ、そのため
成る加工肉に脅威を与える。この制御には増殖速度の減
少、静菌作用、最も望ましくは殺バクテリア作用が挙げ
られる。ニシン／リゾチームの組み合わせの相乗作用は
、最悪の場合の条件で本発明の有用性を例示するために
高レベルの接種（１０’バクテリア／グラム以上）で複
合食品系（未加工豚肉ソーセージ）で証明され！二。
増殖に対するニシン／リゾチームの効果リステリア・モ
ノサイトゲネスは５℃で増殖することができ、そのため
成る加工肉に脅威を与える。この制御には増殖速度の減
少、静菌作用、最も望ましくは殺バクテリア作用が挙げ
られる。ニシン／リゾチームの組み合わせの相乗作用は
、最悪の場合の条件で本発明の有用性を例示するために
高レベルの接種（１０’バクテリア／グラム以上）で複
合食品系（未加工豚肉ソーセージ）で証明され！二。
未加工ソーセージにＢＨＩ−夜培養物からのリステリア
・モノサイトゲネスを接種した。このソーセージに様々
な量のニシン及び／又はリゾチームを導入した。処理さ
れたソーセージを３日間又は２１日間５°Ｃに保ち、然
る後生育可能なリステリア・モノサイトゲネスを数えた
。０−５００ＩＵ ／ ｍ Ｑのニシン及び０−５００
ｐｐｎ＋のリゾチームの範囲にわたり表面反応モデル
がｔＩＩＩ成された。３日のデータからの表面反応モデ
ルは第３図に示される。この図は、リゾチーム単独では
この食品系中のリステリア・モノサイトゲネスの制御に
効果がなく、ニシン単独ではいくらかの抑制効果がある
ことを示す。重要なことは、この結果が、ニシンの一部
をリゾチームで置き換えて同じレベルの制御を維持でき
ることと、成る場合には有意に良好な性能は組み合わせ
でのみ達成されたことを示すということである。例えば
、第３図は、ニシン又はリゾチーム単独ではどの量も、
３日間で未処理対照のレベルの５．６８−１１．６％に
リステリアのレベルを減少させることができないが、約
３００１Ｕ／ｍ（２のニシンと約７５ｐｐｍのりゾチー
ムの混合物はこのレベルの制御を達成することができる
ことを示す。同様な相乗作用は、ニシンとりゾチームの
他のレベルで見られる。かくして、所望レベルの制御の
ために、リゾチームと組み合わせた有意に低い濃度のニ
シンで高濃度のニシンを代替することができる。これら
の結果は、特にリゾチーム単独ではこの食品系に効果が
なかったため予想外であった。
・モノサイトゲネスを接種した。このソーセージに様々
な量のニシン及び／又はリゾチームを導入した。処理さ
れたソーセージを３日間又は２１日間５°Ｃに保ち、然
る後生育可能なリステリア・モノサイトゲネスを数えた
。０−５００ＩＵ ／ ｍ Ｑのニシン及び０−５００
ｐｐｎ＋のリゾチームの範囲にわたり表面反応モデル
がｔＩＩＩ成された。３日のデータからの表面反応モデ
ルは第３図に示される。この図は、リゾチーム単独では
この食品系中のリステリア・モノサイトゲネスの制御に
効果がなく、ニシン単独ではいくらかの抑制効果がある
ことを示す。重要なことは、この結果が、ニシンの一部
をリゾチームで置き換えて同じレベルの制御を維持でき
ることと、成る場合には有意に良好な性能は組み合わせ
でのみ達成されたことを示すということである。例えば
、第３図は、ニシン又はリゾチーム単独ではどの量も、
３日間で未処理対照のレベルの５．６８−１１．６％に
リステリアのレベルを減少させることができないが、約
３００１Ｕ／ｍ（２のニシンと約７５ｐｐｍのりゾチー
ムの混合物はこのレベルの制御を達成することができる
ことを示す。同様な相乗作用は、ニシンとりゾチームの
他のレベルで見られる。かくして、所望レベルの制御の
ために、リゾチームと組み合わせた有意に低い濃度のニ
シンで高濃度のニシンを代替することができる。これら
の結果は、特にリゾチーム単独ではこの食品系に効果が
なかったため予想外であった。
本発明の主なる特徴及び態様は以下のとおりである。
１、望ましくない微生物が増殖できる環境下の該微生物
の増殖を排除又は抑制する方法であって、該望ましくな
い微生物の増殖を排除又は抑制するのに十分な量のニシ
ンどリゾチームの相乗的に有効な組み合わせを、該環境
に加えることを特徴とする方法。
の増殖を排除又は抑制する方法であって、該望ましくな
い微生物の増殖を排除又は抑制するのに十分な量のニシ
ンどリゾチームの相乗的に有効な組み合わせを、該環境
に加えることを特徴とする方法。
２、リゾチームが鶏卵の白味由来のｎ−アセチルへキソ
サミニダーゼである上記ｌに記載の方法。
サミニダーゼである上記ｌに記載の方法。
３、リゾチームが、ヒト、ウシ、Ｔ４バクテリオファー
ジ又慣用のソース又は組換え体ソース由来のｎ−アセチ
ルへキソサミノダーゼである上記１に記載の方法。
ジ又慣用のソース又は組換え体ソース由来のｎ−アセチ
ルへキソサミノダーゼである上記１に記載の方法。
４、ニシンが慣用の微生物又は組換え微生物により生産
される上記１に記載の方法。
される上記１に記載の方法。
５、ニシンがラクトコックス・ラクチスのニシン生産株
の純粋培養発酵により生産される上記ｌに記載の方法。
の純粋培養発酵により生産される上記ｌに記載の方法。
６、微生物が、ダラム陽性菌、ダラム陰性菌及び菌類か
ら成る群より選ばれる上記ｌに記載の方法。
ら成る群より選ばれる上記ｌに記載の方法。
７、ニシン及び／又はリゾチームが、微生物増殖を制御
すべき環境中で増殖しているニシン及び／又はリゾチー
ム生産性生物により提供される上記５に記載の方法。
すべき環境中で増殖しているニシン及び／又はリゾチー
ム生産性生物により提供される上記５に記載の方法。
８、＠生物増殖が制御されるべき環境中のニシンの濃度
が、２５１Ｕ／ｍｆｆ乃至２０００ＩＵ／ｍｌであり、
ニシン：リゾチームの比が９：ｌ乃至１：２である上記
ｌに記載の方法。
が、２５１Ｕ／ｍｆｆ乃至２０００ＩＵ／ｍｌであり、
ニシン：リゾチームの比が９：ｌ乃至１：２である上記
ｌに記載の方法。
９、ニシンの濃度が１００−５００１ Ｕ／ｍ１２であ
る上記８に記載の方法。
る上記８に記載の方法。
１０、ニシン／リゾチームの組み合わせを食品製品に加
えて該食品製品中での微生物の増殖を制御する上記ｌに
記載の方法。
えて該食品製品中での微生物の増殖を制御する上記ｌに
記載の方法。
１１、望ましくない微生物がリステリア・モノサイトゲ
ネス種のバクテリアである上記ｌに記載の方法。
ネス種のバクテリアである上記ｌに記載の方法。
１２、 リステリア・モノサイトゲネスがスコツトＡ
株である上記ｌｌに記載の方法。
株である上記ｌｌに記載の方法。
１３、食糧品をニシン／リゾチームの組み合わせと一緒
にし、その際ニシンが１００ＩＵ／ｍ（２乃至５００１
Ｕ／ｍｌ（又はその光重量）の量で与エラレ、ニシン
：リゾチームの比を９１Ｕ／ｍ１２：ｌμｇ／ｍｌ乃至
１１Ｕ／ｍ１２：２／’ｇ／ｍｌとすることを特徴とす
る、食糧品中でのリステリア・モノサイトゲネスの増殖
を制御する方法。
にし、その際ニシンが１００ＩＵ／ｍ（２乃至５００１
Ｕ／ｍｌ（又はその光重量）の量で与エラレ、ニシン
：リゾチームの比を９１Ｕ／ｍ１２：ｌμｇ／ｍｌ乃至
１１Ｕ／ｍ１２：２／’ｇ／ｍｌとすることを特徴とす
る、食糧品中でのリステリア・モノサイトゲネスの増殖
を制御する方法。
１４、ニシン対リゾチームの比が２：ｌである上記１３
に記載の方法。
に記載の方法。
第１図は、実施例２におけるリステリア・モノサイトゲ
ネス・スコツトＡの溶解に対するｐＨの影響を示すグラ
フ図である。 第２図は、実施例３におけるリステリア・モノサイトゲ
ネス・スコツトＡの溶解に対するリゾチームとニシンの
影響を示すグラフ図である。 第３図は、実施例４において、５°Ｃで３日間にわたる
未加工ソーセージ中のリステリア・モノサイトゲネスに
対するニシンとりゾチームの効果を示す図である。
ネス・スコツトＡの溶解に対するｐＨの影響を示すグラ
フ図である。 第２図は、実施例３におけるリステリア・モノサイトゲ
ネス・スコツトＡの溶解に対するリゾチームとニシンの
影響を示すグラフ図である。 第３図は、実施例４において、５°Ｃで３日間にわたる
未加工ソーセージ中のリステリア・モノサイトゲネスに
対するニシンとりゾチームの効果を示す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、望ましくない微生物が増殖できる環境下の該微生物
の増殖を排除又は抑制する方法であって、該望ましくな
い微生物の増殖を排除又は抑制するのに十分な量のニシ
ンとリゾチームの相乗的に有効な組み合わせを、該環境
に加えることを特徴とする方法。 ２、食糧品をニシン／リゾチームの組み合わせと一緒に
し、その際ニシンが１００ＩＵ／ｍｌ乃至５００ＩＵ／
ｍｌ（又はその当重量）の量で与えられ、ニシン：リゾ
チームの比を９ＩＵ／ｍｌ：１μｇ／ｍｌ乃至１ＩＵ／
ｍｌ：２μｇ／ｍｌとすることを特徴とする、食糧品中
でのリステリア・モノサイトゲネスの増殖を制御する方
法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US28771988A | 1988-12-21 | 1988-12-21 | |
| US287719 | 1988-12-21 | ||
| US43467189A | 1989-11-16 | 1989-11-16 | |
| US434671 | 1989-11-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02283269A true JPH02283269A (ja) | 1990-11-20 |
Family
ID=26964619
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1327455A Pending JPH02283269A (ja) | 1988-12-21 | 1989-12-19 | ニシン／リゾチーム配合物による微生物増殖の制御 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0374823B1 (ja) |
| JP (1) | JPH02283269A (ja) |
| AR (1) | AR243743A1 (ja) |
| AU (1) | AU620481B2 (ja) |
| CA (1) | CA2005122A1 (ja) |
| DE (1) | DE68911279T2 (ja) |
| DK (1) | DK649689A (ja) |
| ES (1) | ES2047100T3 (ja) |
| MX (1) | MX170613B (ja) |
| NO (1) | NO174793B (ja) |
| NZ (1) | NZ231764A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0739355A (ja) * | 1993-07-30 | 1995-02-10 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JPH0739356A (ja) * | 1993-07-30 | 1995-02-10 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JPH07115950A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JPH07115948A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Tamon Shuzo Kk | 食品用保存剤 |
| JPH07115949A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JP2000506845A (ja) * | 1996-03-06 | 2000-06-06 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 微生物細胞を死滅又は抑制する方法 |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU631803B2 (en) * | 1988-06-22 | 1992-12-10 | Applied Microbiology, Inc | Nisin compositions for use as enhanced, broad range bactericides |
| GR1001135B (el) * | 1989-09-05 | 1993-04-28 | Dusar Heinz | Διαταξις δια την συγκρατηση μιας κουρτινας (παραπετασματος) ντους. |
| PH30997A (en) * | 1990-03-12 | 1997-12-23 | Ciba Geigy | Antipathologenically effective compositions comprising lytic peptides and hydrolytic enzymes. |
| NO911341L (no) * | 1990-04-20 | 1991-10-21 | Haarmann & Reimer Corp | Fremgangsmaate for aa drepe gram-negative bakterier. |
| EP0466244A1 (en) * | 1990-07-13 | 1992-01-15 | Unilever N.V. | Compositions having antibacterial properties and use of such compositions in suppressing growth of microorganisms, eg. Listeria bacteria |
| WO1993004588A1 (en) * | 1991-09-05 | 1993-03-18 | Haarmann & Reimer Corporation | Composition and method of attenuation of ionic strength inhibition of lantibiotics |
| ZA964329B (en) * | 1995-06-07 | 1996-08-26 | Applied Microbiology Inc | Method of using lantibiotics in a bactericidal role to effect destruction of listeria monocytogenes in processed crustacean species |
| CA2658440C (en) | 2008-04-04 | 2016-08-23 | Kraft Foods Global Brands Llc | Dairy composition with probiotics and anti-microbial system |
| EP3013150A4 (en) | 2013-06-27 | 2017-03-08 | Starbucks Corporation D/b/a Starbucks Coffee Company | Biopreservation methods for beverages and other foods |
| KR102297406B1 (ko) * | 2021-01-22 | 2021-09-07 | 주식회사 커스토젠 | 피부상재 미생물 조절용 조성물 |
| CN113598198A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-11-05 | 天津科技大学 | 一种农作物细菌性软腐病抗病蛋白糖联体的制备方法和产品及其应用 |
| CN115252460B (zh) * | 2022-08-18 | 2024-07-09 | 媞颂日化用品(广州)有限公司 | 一种含抗菌肽的祛痘组合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1197924B (it) * | 1986-10-28 | 1988-12-21 | Prodotti Antibiotici Spa | Procedimento per la preparazione di alimenti di origine animale |
| DE3701565A1 (de) * | 1987-01-21 | 1988-08-04 | Hoechst Ag | Verwendung von bakterienlysierendem enzymprodukt aus streptomyceten zur haltbarmachung von frischfleisch |
-
1989
- 1989-12-11 CA CA002005122A patent/CA2005122A1/en not_active Abandoned
- 1989-12-13 NZ NZ231764A patent/NZ231764A/en unknown
- 1989-12-19 EP EP89123445A patent/EP0374823B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-19 DE DE89123445T patent/DE68911279T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-12-19 ES ES89123445T patent/ES2047100T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-19 AU AU46860/89A patent/AU620481B2/en not_active Ceased
- 1989-12-19 JP JP1327455A patent/JPH02283269A/ja active Pending
- 1989-12-20 DK DK649689A patent/DK649689A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-12-20 MX MX018817A patent/MX170613B/es unknown
- 1989-12-20 AR AR89315756A patent/AR243743A1/es active
- 1989-12-21 NO NO895186A patent/NO174793B/no unknown
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0739355A (ja) * | 1993-07-30 | 1995-02-10 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JPH0739356A (ja) * | 1993-07-30 | 1995-02-10 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JPH07115950A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JPH07115948A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Tamon Shuzo Kk | 食品用保存剤 |
| JPH07115949A (ja) * | 1993-10-27 | 1995-05-09 | Asama Kasei Kk | 食品用保存剤 |
| JP2000506845A (ja) * | 1996-03-06 | 2000-06-06 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 微生物細胞を死滅又は抑制する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU620481B2 (en) | 1992-02-20 |
| DK649689D0 (da) | 1989-12-20 |
| EP0374823A2 (en) | 1990-06-27 |
| MX170613B (es) | 1993-09-01 |
| EP0374823B1 (en) | 1993-12-08 |
| NO895186D0 (no) | 1989-12-21 |
| DE68911279T2 (de) | 1994-03-31 |
| AR243743A1 (es) | 1993-09-30 |
| DK649689A (da) | 1990-06-22 |
| EP0374823A3 (en) | 1990-12-12 |
| NO895186L (no) | 1990-06-22 |
| NZ231764A (en) | 1992-06-25 |
| CA2005122A1 (en) | 1991-05-16 |
| ES2047100T3 (es) | 1994-02-16 |
| AU4686089A (en) | 1990-06-28 |
| NO174793C (ja) | 1994-07-13 |
| DE68911279D1 (de) | 1994-01-20 |
| NO174793B (no) | 1994-04-05 |
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