JPH02265495A

JPH02265495A - 発酵法によるメチルケトン及び／またはその対応アルコールの製造法、及び培養液の使用

Info

Publication number: JPH02265495A
Application number: JP1211946A
Authority: JP
Inventors: Sakuzo Fukui; 福井　作蔵; Takashi Yagi; 隆八木; Fumio Fukui; 福井　史生
Original assignee: Showa Sangyo Co Ltd
Current assignee: Showa Sangyo Co Ltd
Priority date: 1988-09-09
Filing date: 1989-08-17
Publication date: 1990-10-30
Anticipated expiration: 2013-11-18
Also published as: JP2826748B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は微生物の作用により対応する脂肪酸もしくはそ
のエステルもしくは塩またはそれらの混合物からメチル
ケトン及び／またはその対応二級アルコールを製造する
方法、及びこれらの物質を含有する培養液の使用に関す
る。メチルケトン及びその対応二級アルコールは乳製品
、石けん等のフレーバーとして、及び香料、染料等の溶
剤等として用いることができる。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕従来、
微生物を用いて油脂からメチルケトン及び／またはその
対応二級アルコールを製造する方法としてペニシリウム
・ロクエフォルチ叩組Ｒ旦且岨　匹基畦虹且）に属する
微生物を用いる方法（Ｒ，Ｃ０Ｌａｗｒｅｎｃｅ　　ら
、　Ｊ、　Ｇｅｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　　５４．２８９−３０２　（１
９６８）、及びＲ，Ｄ、Ｋｉｎｇら、　Ｊ、Ｓｃｉ、　
Ｆｏｏｄ　Ａｇｒｉｃ、　３ｉ、　１９７−２０２　（
１９７９））、ペニシリウム・パリタンス（Ｐ、■且凰
…）もしくはペニシリウム・グロウカム（Ｐ、紅虹姐Ｌ
）　ニ属する微生物を用いる方法（Ｗ、Ｎ、５ｔｏｋｏ
ｅ、Ｂｉｏｃｈｅｓ、Ｊ。

２２、８Ｏ−９３（１９２Ｂ）　）　、ペニシリウム・
カセイコラム（ｐ、ｃａｓｅｉｃｏｌｕｍｎ　）に属す
る微生物を用いる方法（Ｔ、Ｌａｍｂｅｒｅｔ　　ら、
　Ｒｅｖ、Ｌａ１ｔｉｅｒｅ　Ｐｒ、敗＋１３４（１９
８０）　）　、ペニシリウム・シトリナム（Ｐ、　ｃｉ
ｔｒｉｎｕｍ）　ＣＭＩ　２９８３０３及びＣＭＩ　２
９８３０９、またはユーロチウム（Ｅｕｒｏｔｉｕｓ）
属に属する微生物を用いる方法（Ｊ、Ｌ、　Ｋｉｎｄｅ
ｒｌｅｒｅｒら。

Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　Ｈ，２８４７−２８
４９（１９８４））　、アスペルギルス・ルーバー■肚
肛れ旦■　ｒｕｂｅｒ　）もしくはアスペルギルス・レ
ペンス（Ａ　、匹■旦）に属する微生物を用いる方法（
Ｊ、　Ｋ、　Ｋｉｄｅｒｌｅｒｅｒら、Ｐｈｙｔｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ　％、　１４１７−１４２０　（１９８
７））　、アスペルギルス・ニガー（Ａ、ＬｉＪｉＬ）
もしくはアスペルギルス・フミガタス（Ａ、ハ１■旦と
）に属する微生物を用いる方法（Ｍ、５ｔａｒｋｌｅ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｚ、＋１５１、３７１〜４６３（１９
２４）　）、トリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｏｈｄｅ
ｒ＋ｓａ　　ｖｉｒｉｄｅ）に属する微生物を用いる方
法（Ｊ、Ｆｅｒｓ＋ｅｎｔ、Ｔｅｃｈｎｏｌ、　ｇ　４
０３−４０７．１９８８）が知られている。

またリゾプス属もしくはムコール属に属する微生物を用
いて油脂からりんご様の香気を有する油性物質を製造す
る方法が知られている（特開昭５７−２０８９９１）。

なお、本願はいわゆる国内優先権主張出願であるが、本
願と優先権主張の基礎となる出願である特願昭６３−２
２４５９４の出願日の間にその基礎となる出願の内容の
一部が報告され（昭和６３年度日本醗酵工学会大会講演
要旨集（１０／１０発行）及び該大会１１７９〜１１）
、さらに本願と優先権主張の基礎となる出願である特願
昭６３−３２０６９４の出願日の間にその基礎となる出
願の内容の一部が報告されている（日本農芸化学会誌、
　ｕ　（３）、　３５０．１９８９）。

微生物代謝系における油脂からメチルケトン及びその対
応二級アルコールへの変換は加水分解→脂肪酸のβ−位
酸化→脱炭酸及びさらに一部還元によって進行するもの
と考えられている。

目的を達成するための技術の開発は常に求められており
、技術の豊富化を与えるものである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは種々の微生物中に油脂をはじめとする脂肪
酸エステル、脂肪酸もしくはその塩を前駆体としてメチ
ルケトン及びその対応二級アルコールを生産する微生物
が存在することを見い出し本発明を完成した。すなわち
本発明はフザリウム属、ヒポフレア属、クラドスポリウ
ム属、ネオサルトルヤ属、ヘミカルペンテレス属、カエ
トサルトルヤ属、ジベレラ属、マイコスファエレラ属、
ユウペニシリウム属、ネクトリア属、エメリセラ属、モ
ナスカス属、シンセファラストラム属、ポドストローマ
属、ハミゲラ属、トリココーマ属、フェネリア属、プレ
ウジア属、ミクロアスカス属、タラロマイセス属、スク
レロクレイスタ属、ベニシリオブシス属もしくはディコ
トマイセス属、またはペニシリウム・デカンベンス、ペ
ニシリウム・ピホルメ、ペニシリウム・シエウドカゼイ
、ペニシリウム・ウルテイカエ、ペニシリウム・クラス
トサム、ペニシリウム・カネスセンス、ペニシリウム・
ピリデカタム、ペニシリウム・カマンベルディ、ペニシ
リウム・ソミイ、トリコデルマ・ポリスボラム、トリコ
デルマ・ハマタム、アスペルギルス・ウェンテイー、ア
スペルギルス・テレウス、アスペルギルス・タマリ、ア
スペルギルス・オリザエもしくはアスペルギルス・ソジ
ャエに属し、一般式（１）％式％（）（式中、Ａは炭素−炭素二重結合を有していてもよい脂
肪族炭化水素基を表す）で表される脂肪酸またはそのエ
ステルもしくは塩を一般式（ＩＩ）Ａ−Ｃ−Ｃ１（、（ＩＩ）（式中、Ａは前記と同義である）で表されるメチルケト
ン及び／または一般式（ＩＩＩ）（式中、Ａは前記と同
義である）で表される二級アルコールに変換する能力を
有する微生物、またはペニシリウム・シトリナムＩＰＯ
６３５２、ペニシリウム・カセイコラムＩＦ０５８４９
、ペニシリウム・パリタンスＩＦ０８８０１．ペニシリ
ウム、パリタンスＩＦ０３０６８１　、アスペルギルス
・ニガーＩＦＯ４０６６もしくはトリコデルマ・エスピ
ー５Ｍ−３０を該脂肪酸またはそのエステルもしくは塩
、またはそれらの混合物を含有する培地に培養するか、
該微生物の培養物またはその処理物と該脂肪酸もしくは
そのエステルもしくは塩またはそれらの混合物とを水性
媒体中で接触させて、菌体外に該メチルケトン反び／ま
たは該二級アルコールを生成蓄積させ、ついで、これら
を採取することを特徴とする該メチルケトン及び／また
は該二級アルコールの製造法を提供する。

本発明はまた後述するごとく上記培養液の使用を提供す
る。

次に本発明をさらに詳しく説明する。

本発明で使用する微生物はまずフザリウム属、ヒポクレ
ア属、タラトスポリウム属、ネオサルトルヤ属、ヘミカ
ルペンテレス属、カエトサルトルヤ属、ジベレラ属、マ
イコスファエレラ属、ユウペニシリウム属、ネクトリア
属、エメリセラ属、モナスカス属、シンセファラストラ
ム属、ポドストローマ属、ハミケラ属、トリココーマ属
、フェネリア属、プレウジア属、ミクロアスカス属、タ
ラロマイセス属、スクレロクレイスタ属、ペニシリオブ
シス属もしくはデイコトマイセス属に属し、上記変換能
力を有する微生物であればいずれの微生物でもよい、具
体的菌株としてはフザリウム・シラ＝　（Ｆｕｓａｒｉ
ｕｍ　　５ｏｌａｎｉ）　ＨＬＩＴ　５０１３（ＩＦＯ
５２３２）、フザリウム・セミチクタム（Ｆ、　ｓｅｍ
ｉｔｅｃｔｕｍ　）　ＩＦＯ３０９２６、フザリウム・
アベナシューム（Ｆ、　ａｖｅｎａｃｅｕｍ　）　ＩＦ
ｏ　７１５８、フザリウム・オキシスポラム（７２０部
１ユ虹ｕｍ　）　ＨＵＴ　５０１２（ＩＰＯ５２６５）
、ヒポクレア・ニグリカンス＜鉦匹■並紅■旦並Ｌ）　ＩＦＯ３０６１１、タラトスポリウム・
りラドスボリオイデス（Ｃ１ａｄｏｓ　ｏｒｉｕｍ虹Ｍ
匹匹杜虹剋ｓ　）　ＩＦＯ６５３５、ネオサルトルヤ・
フィシエリ（Ｎｅｏｓａｒｔｏｒ　ａ　　ｆｉｓｈｅｒ
ｉ　）　ＨＵＴ　４１０６（ＩＦＯ３０５７１）　、ヘ
ミカルペンテレス・アカントスボラス（Ｈｅｍ１ｃａｒ
　ｅｎｔｅｌｅｓ　　ａｃａｎｔｈｏｓ　ｏｒｕｓ）　
ＩＦＯ９４９０、カエトサルトルヤ・ストロマトイデス
（Ｃｈａｅｔｏｓａｒｔｏｒ　ａ　ｓｔｒｏｍａｔｏｉ
ｄｅｓ）　ＩＦＯ９６５２、ジベレラ・ラテリティウム
（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａｌａｅｔｅｒｉｔｉｕｍ　）　
ＩＦＯ７７０５、マイコスファエレラ・メロニスＭ　ｃ
ｏｓ　ｈａｅｒｅｌｌａ　　ｍｅｌｏｎｉｓ　）　ＩＦ
Ｏ８７７６、ユウベニシリウム・ジャバニカム（Ｅｕ　
ｅｎｉｃｉｌｌｉｕｎ＋口旦吐匹Ｌ）ＩＰＯ７９９９、
ネクトリア・フラメア（Ｎｅｃｔｒｔａ　　ｆｌａｍｍ
ｅａ　）　ＩＦｏ　９６２８、エメリセラ・ニデユラン
ス（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ　　ｎ１ｄｕｌａｎｓ）　Ｉ
ＦＯ８６３０、モナスカス・アンカ（Ｍｏｎａｓｃｕｓ
　　ａｎｋａ）　ＨＵＴ　４０１１％シンセファラスト
ラム・ラセモサムＳ　ｎｃｅ　ｈａｌａｓｔｒｕｍ　　７　　ＨＬＩＴ　
１３００、ポドストローマ・コーデイセブス（Ｐｏｄｏ
ｓｔｒｏｍａ匹皿り並Ｌ）　ＩＦＯ９０１９、ハミゲラ
・ストリアタ（ハ料ｗｒａ　　５ｔｒｉａｔａ　）　Ｉ
ＦＯ６１０６、ハミゲラ・アベラネア（ｌ（、ａｖｅｌ
ｌａｎｅａ）　ＩＰｏ　３１８３９、トリコデルマ・バ
ラドクサ（Ｔｒｉｃｈｏｃｏｍａ　　Ｐ期回ｏｘａ）　
ＩＦＯ６７６５、フェネリア・フラビベス（Ｆｅｎｎｅ
ｌｌｉａ旦虹江且）　ＩＦＯ４０５２、プレウジア・イ
ソメラ（Ｐｒｅｕｓｓｉａ　　ｉｓｏｍｅｒａ　）　Ｈ
ｌｌＴ　４１４５、ミクロデスカス・デスモスポラス（
Ｍｉｃｒｏａｓｃｕｓ虹ｕ競匹匹ｓ　）　ＩＦＯ６７６
１、タラロマイセス・エマ−７、−−（Ｔａｒａｌｏｍ
　ｃｅｓ　　ｅｍｅｒｓｏｎｉｉ　）　ＩＦＯ３１１２
６、スクレロクレイスタ・オルナタ（５ｃｌｅｒｏｃｌ
ｅｉｓｔａ　　ｏｒｎａｔａ）　ＩＦＯ４０４２、ペニ
シリオプシス・タラバリエホルミス（Ｐｅｎｉｃｉｌｌ
ｉｏ　５ｔｓｃｌａｖａｒｔａｅｆｏｒａ＋ｉｓ　）　
ＩＦＯ６１６４、デイコトマイセス・セジェビ−（Ｄｉ
ｃｈｏｔｏｍ　ｃｅｓ　　匹江旦）　ＨＵＴ　４１１６
（ＩＰＯ８４２９）があげられる。

本発明で使用する微生物はまたペニシウム・デカンベン
ス（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　　ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ　
）　、ペニシリウム・シュウドカゼイＣＰ、罎じ膓諌シ
巨劇＝）ペニシリウム・ウルティカエ（Ｐ、ｕｒｔｉｃ
ａｅ　）　、ペニシリウム・クラストサム（Ｐ、ｃｒｕ
ｓｔｏｓｕａ＋）、ペニシリウム・カネスセンスＣＰ、
ｃａｎｅｓｃｅｎｓ　）　、ペニシリウム・ピリデカタ
ム（Ｐ、ｖｉｒｉｄｉｃａｔｕｍ　）　、ペニシリウム
・カマンベルティー（Ｐ、ｃａμ＋ｍｂｅｒ　ｔ　ｉσ
ペニシリウム・ソミイ（Ｐ、ｔｈｏｓ＋ｉｉ）　、ペニ
シリウム・ピホルメ（Ｐ、ｂｉｆｏｒｍｅ　）　、）リ
コデルマ・ポリスボラム　（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　
　匹ｈ■肛１）　、）リコデルマ・ハマタム（↑、ｈａ
ｍａｔｕｍ　）　、アスペルギルス・ウエンティー（ハ
Ｌ■旦１ｕｓ　　ｗｅｎｔｉｉ）、アスペルギルス・テ
レウス（Ａ、ｔｅｒｒｅｕｓ　）　、アスペルギルス・
タマリ（＾、ｔａｍａｒｉ）　、アスペルギルス・オリ
ザエ（Ａ、肛■赳）もしくはアスペルギルス・ソジャエ
（Ａ　、　拉ｈＬ）に属し、上記変換能力を有する微生
物であればいずれの微生物でもよい。

具体的菌株としてはペニシリウム・デカンベンスＩＦＯ
７０９１、ペニシリウム・シュウドカゼイ　ＩＦＯ６２
３５、ＩＦＯ７７４７、ペニシリウム・ウルテイカエＩ
ＦＯ７０１０，ペニシリウム・クラストサムＩＰＯ７７
８２、ペニシリウム・カネスセンスＩＦＯ７９６１、ペ
ニシリウム・ピリデカタムＩＦＯ７７０５、ペニシリウ
ム・カマンベルティ　ＩＰｏ　５８５５　、ペニシリウ
ム・ソミイＩＦＯ７９８５、ペニシリウム・ピホルメＩ
ＦＯ７７２２、トリコデルマ・ポリスボラムＩＦＯ９３
２２、トリコデルマ・ハマタムＩＦＯ３１２９１、アス
ペルギルス・ウエンティーＩＦＯ８８６４、アスペルギ
ルス・テレウスＨＵＴ　２０９９、アスペルギルス・タ
マリＩＦＯ７４６５、アスペギルス・オリザエＩＦＯ５
２３９、アスペルギルス・ソジャエＩＦＯ５２４１があ
げられる。これらの微生物は同属・別種で公知のメチル
ケトン及び／またはその対応二級アルコール生産菌に比
し一般にそれぞれ優れた目的物生産性を示す。

本発明で使用する微生物はさらにまたペニシリウム・シ
トリナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　　ｃｉｔｒｉｎｕ
ｍ）ＩＦＯ６３５２、ペニシリウム・カセイコラム（Ｐ
。

ｃａｓｅｉｃｏｌｕ＋＊）　ＩＰｏ　５８４９、ペニシ
リウム・パリタンス（Ｐ、■且ｍ且）　ＩＰｏ　８８０
１．ペニシリウム・パリタンスＩＦ０３０６８１、アス
ペルギルス・ニガー（Ａｓ　ｅｒ　１ｌｌｕｓ工ＬＬｇ
ｉＬ）　ＩＦＯ４０６６及ヒト！Ｊ　：１　テルマ・エ
スピー（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　　ｓｐ、）　５Ｍ−
３０（微工研菌寄第１０１９０号）を包含する。これら
の菌株はいずれも上記変換能力を有し、その目的物生産
性はそれぞれ同種もしくは同属の公知株に比べ優れてい
る。

本発明者らが広島県広島市の土壌より分離した新菌株ト
リコデルマ・エスピーＳト３０の分類学的性質は次のと
おりである。

１）各培地上の生育状態本菌株を下記に示す各寒天培地上に接種し、巨大集落を
形成させた場合の肉眼的観察は次のとおりである。

菌叢の状態　　裏面の色　胞子着生の状態培地麦芽エキス　菌糸は白色羊毛　　無色　　胞子は形成寒
天培地　　状で、生育良好　　　　　　しないバレイシ
ョ　菌糸は白色で寒　　無色　　緑色胞子が・ブドウ糖
　天表面上にきわ　　　　　　疎に着生寒天培地　　め
て疎に生育土壌セル口　菌糸は白色羊毛　　無色　　緑色胞子が一
ス寒天　　状で、生育良好　　　　　　疎に着生培地２）形態学的特徴（土壌セルロース寒天培地）■　分生
子柄　気生菌糸より生じる。

２〜４μ園　×５〜１０μ錫　。

■　フィアリッド　とっくり形２〜３μ隅×８〜１５μ
請、２〜３本が分岐。

■　分生子　フィアロ型分生子、楕円形、２．５〜４μ
ｍ、連鎖しない。

■　菌糸　分岐性で隔壁を有し、巾は２〜４μ謡である
。

３）生理学的性質（麦芽エキス培地） ■　生育の範囲ｐ１１３．０〜８，０、温度１５〜３２°Ｃ■最適生育
条件ｐＨ４，５〜７．５、温度２０〜２８°Ｃ以上の菌学的
諸性質をＤａｖｉｄ　ＭａｌｌｏｃｈのＭＯＵＬＤＳ−
Ｔｈｅｉｒ　ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ＋　Ｃｕ１ｔｉｖａｔ
ｉｏｎ　ａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ”に従っ
て検索するとトリコデルマ属に分類される。

本発明におけるメチルケトン及び／または二級アルコー
ルの生産は前駆体含有培地で上記微生物を培養すること
によって行ってもよく（以下、第１法という）、また微
生物を通常の培地で培養した後、引き続きもしくは集菌
し水性媒体中で前駆体と接触させることによって行って
もよい（以下第２法という）。

まず第１法について述べると、これらの微生物を炭素源
及び前駆体としての一般式（１）の酸もしくはそのエス
テルもしくは塩またはそれらの混合物、窒素源、無機物
、微量栄養素等を程よく含有する培地中において、好気
的条件下に温度、ｐＨなどを調節しつつ培養する。

炭素源としては他にグルコース、スクロース、グリセリ
ン、デキストリン、カルボキシメチルセルロース、ケロ
シン等糸状菌の培養に通常用いられる炭素源を併用して
もよい、窒素源としては硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、酒石酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、アスパ
ラギン、ペプトン、コーンステイープリカー等が、無機
物・微量栄養素としては硫酸マグネシウム、リン酸二水
素カリウム、リン酸水素二カリウム、塩化カルシウム、
塩化ナトリウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅、塩
化第二鉄、モリブテン酸アンモニウム、ヨウ化カリウム
、ホウ酸、種々のビタミン（パントテン酸カルシウム、
イノシトール、ピリドキシン等）等が用いられる。また
培養中バクテリアによるコンタミネーションをさけるた
め、クロラムフェニコール等の殺バクテリア性物質を培
地に含有させてもよい。

培地中における上記前駆体の濃度は１〜５００ｇ＃！が
適当である。なお、前駆体濃度５０〜５００ｇ／　ｌで
行う場合には後述するごとく簡易な精製手段で目的物を
回収できる利点がある。

第１法における目的物生産菌株の培養は好気的条件下で
液体培養法、例えば振盪培養法、通気攪拌培養法によっ
て行えばよい、培養は通常温度２０〜３２℃、ｐＨ６，
０〜９．０で行うことができる。培、養は定常期まで行
うのが好ましく、培養時間は通常３〜１４日である。こ
れにより一般式（ＩＩ）のメチルケトン及び／または一
般式（ＩＩＩ）の二級アルコールを主として菌体外に蓄
積させることができる。

次に第２法について述べると、まず本発明使用微生物を
炭素源、窒素源、微量栄養素等を程よく含有する培地中
において、好気的条件下に温度、ｐＨなどを調節しつつ
培養する。

炭素源としてはグルコース、スクロース、グリセリン、
デキストリン、カルボキシメチルセルロース、大豆油、
パーム核油、ケロシン等糸状菌の培養に通常用いられる
炭素源の他、一般式（１）の酸もしくはそのエステルも
しくは塩またはそれらの混合物が用いられる。窒素源、
無機物・微量栄養素としては第１法におけると同様のも
のが用いられる。また第１法におけると同様の殺バクテ
リア性物質も用い得る。

第２法における培養は通常温度２０〜３２°ｃ、ｐｔｉ
６．０〜９．０で液体培養法により行えばよい。培養は
対数増殖期の後半から定常期まで行うのが好ましく、培
養時間は通常３〜７日である。

かくして得られる微生物の培養物をそのまま、または該
培養物を種々処理して得られる処理物を前駆体としての
一般式（１）の脂肪酸もしくはそのエステルもしくは塩
またはそれらの混合物と接触させる。処理物としては、
培養物の濃縮物、培養物を遠心分離等に付して得られる
菌体、固定化菌体あるいは菌体からの抽出酵素標品など
があげられる。

接触反応は水性媒体中であればいずれでも行うことがで
きるが、好適には使用菌の培養液またその濃縮液、また
は集菌抜水または炭素源を除いた培地（炭素源を欠く以
外前段の培養におけると同様の培地でよい）に懸濁した
懸濁液などに、一般式（Ｉ）の脂肪酸もしくはそのエス
テルもしくは塩またはそれらの混合物を存在せしめ、ｐ
ｉ（を６．０〜９．０に調節しつつ、２０〜３２°Ｃで
１〜７日通常振盪もしくは通気攪拌下に反応させること
により一般式（ｎ）のメチルケトン及び／または一般式
（ＩＩＩ）の二級アルコールを主として菌体外に蓄積さ
せることができる０反応液中における上記前駆体の濃度
は１〜５００ｇ＃！が適当である。なお、精製面を考慮
すると第１法におけると同様の理由から５０〜５００ｇ
／　ｉ、が好ましい。

また、上記第２法は本発明使用菌を常法により固定化し
て得た固定化国体を用いるバイオリアクタ一方式によっ
て前駆体を目的物へ連続的に変換することによって行う
こともできる。

本発明で目的化合物の前駆体として用いられる化合物は
前述のごと（一般式（１）で表される脂肪酸もしくはそ
のエステルもしくは塩またはそれらの混合物である。一
般式（１）中、Ａは前述のごとく炭素−炭素二重結合を
有していてもよい脂肪族炭化水素基であり、通常直鎖状
または分枝状のアルキル、アルケニル、アルカジェニル
及びアルカジェニル等を包含し、炭素数は通常１〜１５
であり、変換効率を考慮すると好ましくは３〜１３、さ
らに好ましくは５〜１１．もっとも好ましくは７〜９で
ある。Ａの具体例としてはメチル基、エチル基、ｎ−プ
ロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル
基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−へブチル基
、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−ウンデシル基、
ｎ−トリデシル基、ｎ−ペンタデシル基、６−ペンタデ
セニル基、６．９−ペンタデカジェニル基、６．９．１
２−ペンタデカジェニル基等があげられる。一般式（１
）で表される脂肪酸は典型的には油脂を形成する脂肪酸
を包含し、その炭素数は通常４〜１８、好ましくは６〜
１６、さらに好ましくは８〜１４、もっとも好ましくは
１０−１２であり、直鎖状のみならず分枝状でもよい、
かかる脂肪酸の具体例としては酪酸、ペンタン酸、カプ
ロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリス
チン酸、バルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リ
ノール酸、リルン酸等があげられる。

一般式（Ｉ）の酸のエステルとしては本微生物が代謝系
において加水分解して一般式（１）の化合物を生成し得
るエステルであれば特に限定ないが最も通常には、グリ
セリンエステルが用いられ、これらはいわゆるトリグリ
セリドのみならず、ジグリセリド及びモノグリセリドで
あってもよい。

かかるグリセリンエステルの具体例としてはトリブチリ
ン（酪酸のトリグリセリド）、トリカプロン（カプロン
酸のトリグリセリド）、トリカプリリン（カプリル酸の
トリグリセリド）、トリカプリン（カプリン酸のトリグ
リセリド）、トリラウリン（ラウリン酸のトリグリセリ
ド）、トリミリスチン（ミリスチン酸のトリグリセリド
）、トリバルミチン（パルミチン酸のトリグリセリド）
、トリステアリン（ステアリン酸のトリグリセリド）、
モノもしくはシカプリン（カプリン酸のモノもしくはジ
グリセリド）、モノもしくはジラウリン（ラウリン酸の
モノもしくはジグリセリド）等があげられる。一般式（
１）の酸のエステルはまたアルキルエステル、特に炭素
数１〜６の直鎖状もしくは分枝状のアルキルエステル（
例えばメチルエステル、エチルエステル等）、ベンジル
エステル等であってもよい。かかるエステルの具体例と
してはメチルカプリン（カプリン酸メチル）、エチルカ
プリン（カプリン酸エチル）、メチルラウリン（ラウリ
ン酸メチル）、エチルラウリン（ラウリン酸エチル）等
があげられる。

一般式（１）の酸の塩としてはアルカリ金属との塩、例
えばナトリウム塩、カリウム塩、アルカリ土類金属との
塩、例えばカルシウム塩、アンモニウム塩、アミンとの
塩等が用いられる。

本発明で使用する前駆体は一般式（１）の酸、そのエス
テルもしくは塩の任意の２種以上の混合物であってもよ
い、すなわち酸同士、エステル同士、塩同士の組合わせ
でもよいし、酸とエステル、エステルと塩との組合わせ
等でもよいし、酸、エステル及び塩の組合わせであって
もよい、かかる混合物で本発明で用いられる鰻も一般的
なものは油脂であり、植物油脂、動物油脂のいずれであ
ってもよい、植物油脂としてはヤシ油、パーム油、パー
ム核油、りへア油、ツバキ油、オリーブ油、ヒマシ油、
ゴマ油、ナタネ油、綿実油、大豆油、トウモロコシ油、
落花生油、サフラワー油、オレイン油、グレープシード
油等が用いられ、動物油脂としては乳脂肪（バター脂）
、ラード、タロービーフケンネン油等が用いられる。

第１法、第２法いずれの場合にも変換反応終了液から目
的物質の単離精製は常法により行うことができる。すな
わち、変換反応終了液またはその菌体除去液等から目的
物をクロロホルム、ヘキサン、石油エーテル等の溶剤で
抽出し、抽出液を液体クロマトグラフィー、シリカゲル
カラムクロマトグラフィー等のカラム分離操作に服せし
め、ついで蒸留により目的物を得る（メチルケトン及び
二級アルコールを個々的に得る）ことができる。

また本目的化合物が揮発性であることを利用して精製の
初期段階に水蒸気蒸留を組み入れてもよい。

なお、前駆体の量を増やし油滴が培養液表面に層状をな
して存在する状態でもメチルケトンの生産は十分行われ
る。このような条件を採用すれば、培養後溶剤抽出では
なく、遠心分離等のより容易な手段で生産物を回収でき
、有利である。このような有利な前駆体置載としては前
記したごと＜５０〜５００ｇ／　ｉｔが適当である。

本発明はまた上記本発明におけるメチルケトン及び／ま
たは二級アルコールが生成蓄積した培養液そのものまた
はそこから菌体を除去した液の各種物質のフレーバー付
けへの使用に関する。すなわち、マヨネーズ、ドレッシ
ング等の食品、ワイン、ウィスキー、酒、みそ、パン等
の発酵食品、及びシャンプー、化粧品等を製造する際に
本発明使用菌体と一般式（１）の脂肪酸またはそのエス
テルもしくは塩またはそれらの混合物、例えばパーム核
油等を前駆体として添加しフレーバー付けを行うことも
可能で、またこれら食品等の原料の一部に本発明使用菌
株と前駆体を加えフレーバー付けしたものを種として用
いることもできる６例えば、リンゴ、ブドウ等の果汁に
ワイン酵母を作用させ、ある程度発酵させた時点で本発
明使用菌株と前駆体を加えさらに発酵を進めることによ
り、生成するメチルケトンのフレーバーを含ませた特徴
あるワインを製造できる。

〔発明の効果〕

一般式（１）の脂肪酸またはそのエステルもしくは塩ま
たはそれらの混合物を前駆体とする一般式（ｎ）のメチ
ルケトン及び／または一般式（ＩＩＩ）の二級アルコー
ルの生産が今までその生産性が知られていなかった上記
種々の特定糸状菌によって行われる。

〔実施例〕

次に本発明の実施例を示す。

裏隻■土表１に示す微生物を５００　ｍ容坂ロフラスコ中の１０
０　ｉｄの下記培地（ｐＨ７，２）に接種し、２８°Ｃ
で７日間往復振盪培養（１２０ｒｐｍ、７ｃｍ）　シた
。

使用培地組成ニトリカプリン　　　　　　　　　　　　１．ＯｄＨａｌ
ｏｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２ｇ（Ｎ
ｌｌｎ）ｘｓＯｓ　　　　　　　　　　　　　　０．２
ｇ！［！ＨＰＯ４０，７８にＨ＊ＰＯａ　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
ｇＭｇＳＯ４・７１ｂ０　　　　　　　　　　　　０．
０６ｇＣａＣ１ｍ　”　２１（ｔｏ　　　　　　　　　
　　　　０．０１ｇＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　
　　　　　Ｏ，０５ｇビタミン保存液　　　　　　　　
　　０．１ｄミネラル保存液　　　　　　　　　　０．
１１ｄ１％クロラムフェニコール　　　　　０．２ａｅ
脱イオン水で１００　ｄとするビタミン保存液の組成Ｃｍｇ／　ｌ　）ビオチン　　　
　　　　　　　　　　　　２パントテン酸カルシウム　
　　　　　４００葉酸　　　　　　　　　　　　　　　
　２イノシトール　　　　　　　　　　２０００ナイア
シン　　　　　　　　　　　４００ｐ−アミノ安息香酸
　　　　　　　　　２００ピリドキシン塩酸塩　　　　
　　　　４００リボフラビン　　　　　　　　　　　２
００チアミン塩酸塩　　　　　　　　　　４００ミネラ
ル保存液の組成（ｍｇ／　ｊ！　）ＭｎＳＯｎ　’　４
〜５ＨｚＯ６０ＺｎＳＯ４−７１１，０３００ＣｕＳＯａ　・５ＨｚＯ４０ＦｅＣ１ｓ　”　６Ｈｚ０　　　　　　　　　　　２５
０（ＮＨ４）６　Ｎｏ？　（ｈａ　　・４Ｈ１０２５Ｋ
　Ｉ　　　　　　　　　　　　　　　　１００培養終了
液を２０ｄのクロロホルムで抽出した液をガスクロマト
グラフィー（カラム：ユニボートＨＰＳ上の５％０Ｖ−
１７，２ｍガラスカラム　　カラム温度ニア０〜１７０
℃、５℃／ｓｉｎ昇温　　注入口検出器温度：２３０℃
　　検出器：　ＦＩＧ　　　キャリアーガス：Ｎ！）に
付して目的物であるメチルへブチルケトン及び２−ノナ
ノールの生産量を測定した。結果を表１に示す。

表１表２生産菌株としてトリコデルマ・エスピーＳト３０（微工
研菌寄第１０１９０号）及び炭素源・前駆体として表２
に示す種々の化合物各１．０−を用い、培養期間を８日
間とした以外、実施例１と同様に培養を行って表２に示
す結果を得た。

生産菌株としてトリコデルマ・エスピーＳト３０及び炭
素源・前駆体として下記組成のパーム核油ｉ、ｏ　ａｔ
を用いた以外、実施例１と同様に培養を行って下記に示
すメチルケトン生産結果を得た。

パーム核油組成（％）カプロン酸　０．３、　カプリル酸　４．１、カプリン
酸　３．７、　ラウリン酸４９．７、ミリスチン酸１６
．０　、バルミチル酸７．６、ステアリン酸　０．３、
オレイン酸　１５．２、リノール酸　　２．７メチルケトン生産結果（μｌ）メチルプロピルケトン　　０．３メチルアミルケトン　　　２．８メチルへブチルケトン　　１．５メチルノニルケトン　　　７．２メチルウンデシルケトン　０．２実五〇１（トリカプリン１．０　ｄに代え、グルコース２．０ｇを
含有する以外実施例１と同じ培地５０戚にトリコデルマ
・エスピー５Ｍ−３０を接種し、２８°Ｃで４日間振盪
培養し、これを種母とした。

実施例１と同じ培地３．５２を５２容培養槽に仕込み種
母を接種した。２８°Ｃの培養温度でｌｏ日日間ｐＨ７
，０に調整しつつ、通気量１ｖｖｍ攪拌４００ｒｐｍで
培養を行った。

培養後、５００１１１のｎ−ヘキサンで２回抽出し、抽
出液を合わせた。これをロータリエバポレータ（８０°
Ｃ）で乾固するまで留去し、ｎ−ヘキサンとメチルへブ
チルケトンを留出分として回収した。残油（トリカプリ
ン）に１００ｄのｎ−ヘキサンを加え、さらに三回留去
回収した。留分（ｎ−ヘキサン＋メチルへブチルケトン
）を合わせロークリエバポレータ（３０°Ｃ）で乾固し
ないように５０−弱になるまで濃縮し、濃縮液を５０Ｉ
Ｉ１１に定容した。

その結果、１２％メチルへブチルケトン溶液が得られた
。本漬は薄層クロマトグラフィーで分析したところ、ト
リカプリン及びその分解物は含まれておらず、純度が高
いことが確認できた。

実ｌ１ｌｉトリカプリン１．ＯＩｄに代え、グルコース２．０ｇを
含有する以外実施例１と同じ培地５１１１にトリコデル
マ・エスピーＳト３０を接種し２８℃で４日間振盪培養
し、これを種母とした。同組成の培地５００ｄを２２容
三角フラスコに仕込み、種母を接種した。

２８°Ｃで３日間、２００ｒｐｍロータリー振盪培養し
た。

菌体を遠心集菌し、滅菌水で洗浄後、５００ｄの実施例
１と同じトリカプリン培地に移し、さらに２８°Ｃで２
日間培養した。

以下、実施例４と同様に操作し、１０％メチルへブチル
ケトン溶液１０１ｄを得た。

実Ｗ生産菌株及び炭素源として表４に示す菌株及び炭素源・
前駆体各１．ＯＪｄを用いる以外、実施例１と同様に培
養を行って表４に示す結果を得た。

実ｍ灸表３に示す微生物を１８ｍ５＋φ試験管の５戚の実施例
１と同じ培地に接種し、２８°Ｃで５日間往復振盪培養
（１２０ｒｐｍ、７ｃｍ）　　した。

培養終了液を２１Ｒ１のクロロホルムで抽出した液をガ
スクロマトグラフィー（カラム：ユニボートＨＰＳ上の
５％０Ｖ−１７，２ａ＋ガラス力ラムカラム温度ニア０
〜１７０°Ｃ１５°Ｃ／ｗｉｎ昇温　　注入口検出器温
度：２３０°Ｃ検出器：ＦＩＤ　　　キャリアーガス：
Ｎ２）に付して目的物であるメチルケトンの生産量を測
定した。結果を表３に示す。なお、殆どの菌で各メチル
ケトンに対応するアルコールの生成が認められた。生成
量はいずれもメチルケトンの１〜１０％程度であった。

実ｆｌ亀表５に示す微生物を実施例６と同様にして培養、後処理
して表５に示す結果を得た。“なお、殆どの菌で各メチ
ルケトンに対応するアルコールの生成が認められた。生
成量はいずれもメチルケトンの１〜ｌＯ％程度であった
。

実ＪｆｌＬ亀トリカプリン１．０１ｄに代えてパーム核油１Ｏｒｎ１
を含有し、リン酸２水素カリウムに代えリン酸ｌ水素カ
リウム０．９ｇを含有する以外は実施例１と同じ培地（
ｐＨ８，４）にペニシリウム・シュウドカゼイＩＦ０６
２３５を接種し、２８°Ｃで８日間往復振盪う培養（１
２０ｒｐｍ　、７Ｃ１ｌ）　　Ｌ／た。

培養終了液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５分）し、
油層４．２ｇを回収した。これを蒸留して１５０〜２５
０°Ｃの留分２．Ｏｇを得た。本留分はメチルケトンを
主成分とするメチルケトンとその対応アルコール（１〜
２％程度）の混合物であり、そのメチルケトンの組成は
以下の通りであった。

メチルペンチルケトン　　１０．９％メチルへブチルケトン　　１２．１メチルノニルケトン　　　７５．８メチルウンデシルケトン　　１．２

Claims

【特許請求の範囲】１、フザリウム属、ヒポクレア属、クラドスポリウム属
、ネオサルトルヤ属、ヘミカルペンテレス属、カエトサ
ルトルヤ属、ジベレラ属、マイコスファエレラ属、ユウ
ペニシリウム属、ネクトリア属、エメリセラ属、モナス
カス属、シンセフアラストラム属、ポドストローマ属、
ハミゲラ属、トリココーマ属、フェネリア属、プレウジ
ア属、ミクロアスカス属、タラロマイセス属、スクレロ
クレイスタ属、ペニシリオプシス属もしくはディコトマ
イセス属、またはペニシリウム・デカンベンス、ペニシ
リウム・ピホルメ、ペニシリウム・シュウドカゼイ、ペ
ニシリウム・ウルティカエ、ペニシリウム・クラストサ
ム、ペニシリウム・カネスセンス、ペニシリウム・ピリ
デカタム、ペニシリウム・カマンベルディ、ペニシリウ
ム・ソミイ、トリコデルマ・ポリスポラム、トリコデル
マ・ハマタム、アスペルギルス・ウェンティー、アスペ
ルギルス・テレウス、アスペルギルス・タマリ、アスペ
ルギルス・オリザエもしくはアスペルギルス・ソジャエ
に属し、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａは炭素−炭素二重結合を有していてもよい脂
肪族炭化水素基を表す）で表される脂肪酸またはそのエ
ステルもしくは塩を一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａは前記と同義である）で表されるメチルケト
ン及び／または一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａは前記と同義である）で表される二級アルコ
ールに変換する能力を有する微生物、またはペニシリウ
ム・シトリナムＩＦＯ６３５２、ペニシリウム・カセイ
コラムＩＦＯ５８４９、ペニシリウム・パリタンスＩＦ
Ｏ８８０１、ペニシリウム・パリタンスＩＦＯ３０６８
１、アスペルギルス・ニガーＩＦＯ４０６６もしくはト
リコデルマ・エスビ−ＳＭ−３０を該脂肪酸またはそのエステルもしくは塩、またはそれら
の混合物を含有する培地に培養するか、該微生物の培養
物またはその処理物と該脂肪酸もしくはそのエステルも
しくは塩またはそれらの混合物とを水性媒体中で接触さ
せて、菌体外に該メチルケトン及び／または該二級アル
コールを生成蓄積させ、ついで、これらを採取すること
を特徴とする該メチルケトン及び／または該二級アルコ
ールの製造法。２、請求項１におけるメチルケトン及び／または二級ア
ルコールが生成蓄積した培養液そのものまたはそこから
菌体を除去した液の各種物質のフレーバー付けへの使用
。