JPH01304892A - 高度不飽和脂肪酸強化油脂の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は発酵法による高度不飽和脂肪酸強化油脂の製造
方法に関する。

〔従来の技術〕

今日、生理活性を有する油脂の開発をめざして低級酸油
脂、高オレイン酸・高度不飽和油脂あるいは長鎖アルキ
ル油脂等の今までにない脂肪酸組成を有する新規原料油
脂の探索が植物を対象として行われなり、また一方では
、酵素を利用して新しい構造を有する油脂を製造する等
の試みが行われているが、発酵法による新規油脂の製造
は知られていない。

〔発明が解決しようとする課題〕

高度不飽和脂肪酸が強化（富化）された油脂を得るには
、油脂に高度不飽和脂肪酸を添加する方法、主原料とし
ての油脂を高度不飽和脂肪酸の含有率が高い強化用油脂
と混合する方法が考えられるが、前記の場合高度不飽和
脂肪酸が高価であるため強化された油脂製品が高価なも
のとなり、又後者の場合には一最にかなり高比率で強化
用油脂を混合しなければならず、その結果強化された油
脂製品の脂肪酸組成等の性質が主原料としての油脂に比
べて大きく異なるものとなる等の問題点がある。

従って、本発明は、高度不飽和脂肪酸が強化されており
、この点を除けば主原料としての油脂の脂肪酸組成が概
ね維持されている高度不飽和脂肪酸強化油脂を安価に製
造することができる方法を提供しようとするものである
。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者等は、上記の課題を解決するため種々研究した
結果、高度不飽和脂肪酸を生産することができる微生物
を、油脂を主な炭素源として含有する培地中で培養した
場合該油脂が部分的に高度不飽和脂肪酸又は高度不飽和
脂肪酸を含有する脂質に転換され、これらを全体として
回収すれば、高度不飽和脂肪酸が強化されており、この
点を除けば原料油脂の脂肪酸組成が概ね維持されている
新たな油脂が得られることを見出した。

従って本発明は、アラキドン酸を生産することができ、
モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、コニデ
イオボラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属、フイチウ
ム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）属、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐ
ｈｔｈｏｒａ）属、エントモフトラ（Ｅｎｔｏｍｏｐｈ
ｔｈｏｒａ）属、ペニシリューム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ
ｕｍ）属、クラドスポリューム（Ｃｌａｃｌｏｓｐｏｒ
ｉｕｍ）属、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、フザリューム
（Ｆｕｓａｒｉｕｎ＋）属、アスペルギルス（＾５ｐｅ
ｒＨｉｌｌｕｓ）属、又はロードトルラ（Ｒｈｏｄｏｔ
ｏｒｕｌａ）属に属する微生物を、油脂を炭素源とする
培地で培養することにより高度不飽和脂肪酸が富化され
た油脂を生成せしめ、それを回収することを特徴とする
高度不飽和脂肪酸強化油脂の製造方法を提供するもので
ある。

〔具体的な説明〕

本発明においては、アラキドン酸生産能を有し油脂を炭
素源に高度不飽和脂肪酸を生産することのできる微生物
であれば、すべて使用することができる。このような微
生物として例えばモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌ
ｌａ）属、コニディオボラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕ
ｓ）属、フィチウム（ＰｙＬｈｉｕｍ）属、フィトフト
ラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）属、エントモフトラ（
Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ）属、ペニシリューム（Ｐ
ｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、クラドスポリューム（Ｃ１
ａｄｏｓｐｏｒｉｕｎ＋）属、ムコール（Ｎｕｃｏｒ）
属、フザリ″ニーム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、アスペル
ギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、ロードトルラ（
Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属を挙げることができる。

モルティエレラ属では例えば、モルティエレラ・エロン
カタ伊肛↓恒びＩｌａ　ｅｌｌｔ匪ｕｊ工ＩＦＯ８５７
０、モルテイエレラ・エキシグアＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌ
ａ　ｅｘｉ　ｕａＩＦＯ８５７１、モルティエレラ・ヒ
グロフィラＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ｈ　　ｒｏ　ｈｉ
ｌａ）ＩＦＯ５９４１、モルティエレラ・アルビナＭｏ
ｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ａｔ　ｉｎａ　ＩＦ（＞　８５６
８等を挙げることができる。これらの菌株はいずれも、
財団法人醗酵研究所からなんら制限なく入手することが
できる。

また、本発明者らが土壌から分離した菌株モルティエレ
ラ・エロンガタＳＡＭ　０２１９　（微工研菌寄第８７
０３号）（ｇ＆工研条寄第１２３９号）を使用すること
もできる。

さらに、他の属に属する微生物の具体例として、コニデ
ィオボラス・ヘテロスポラスＣｏｎ１ｄｉｏｂｏｌｕｓ
匝匡匡辻旺駐）　ＣＢＳ　１３８．５７、フィチウム・
イレグラレ化注１頭匡阻り１咀）　ＣＢＳ　４９４．８
６、フィトフトラ・インフェスタンス化肚旦姉月庶ｌ道
包旦鼾ｍ１ＩＦＯ４８７２、エントモフトラ・イブノビ
リス化畦惺舷駄回阻り並垣±ｉｓ）　ＣＢＳ　１８１．
６０、ベニシリューム・シアホウ４化組国辻■咀Ｕ鼾ｅ
ｕｍ）　ＩＦＯ５３３７、クラドスポリューム・ヘルプ
ラム（Ｃ１ａｄｏｓ−１亘ヨｈｅｒｂａｒｕｍ）　ＩＦ
Ｏ３０３１４、ムコール・アンビｆｊ　ス矧凱肛、凪山
。□）ＩＦＯ６７４２、フザリューム・オキツボラム（
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）ＩＦＯ５９４
２、アスペルギルス・カンディダスＡｓ　ｅｒ　１ｌｌ
ｕｓ　ｃａｎｄｉｄｕｓ）ＩＦＯ８８１６、ロードトル
ラ・グラチニス正眩並包匹りし畦植込）ＩＦｏ　０６９
５等を挙げることができる。

本発明に使用される菌株を培養する為には、その菌株の
胞子、菌糸、又は予め培養して得られた前培養液を、液
体培地又は固体培地に接種し培養する。炭素源となる油
脂としては、液体培地の場合、例えば椿油、ヒマシ油、
クロロフィル油、トウモロコシ油、綿実油、クロトン油
、亜麻仁油、オリブ油、落花生油、菜種油、胡麻油、大
豆油、桐油、鯨油、ヤシ油等を使用することができる。

これらの油脂は単独で用いてもかまわないし、いくつか
の油脂と組み合せてもよい。

前記油脂を炭素源として培養した場合、生産される高度
不飽和脂肪酸としては、ビスホモ−γ−リルン酸、アラ
キドン酸、エイコサペンタエン酸等が挙げられ、使用す
る油脂によってその生成比は異なる０例えば、胡麻油・
落花生油を用いた場合、あるいは別の油に胡麻油・落花
生油を加えたものを使用した場合にはアラキドン酸の他
にビスホモ−γ−リルン酸が強化される。又、α−リル
ン酸を含有する油脂、例えば亜麻仁油・菜種油等を使用
した場合、あるいは別の油にα−リルン酸を含有する油
脂を加えたものを使用した場合には、アラキドン酸の他
にエイコサペンタエン酸が強化される。さらに、油の他
にリグナン誘導体、例えばセサミン、エビセサミン、セ
サミノール、エピセサミノール、セサモリン等を添加し
た場合には、アラキドン酸の他にビスホモ−γ−リルン
酸が強化される。

実用上一般に、炭素源としての油脂は０．５〜１０重量
％、好ましくは１〜５重量％、培地にはさらに、菌の生
育を助ける目的で少量のグルコース、フラクトース、キ
シロース、サッカロース、マルトース、可溶性デンプン
、糖蜜、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用
されるものが、いずれも使用できる。これらの濃度は一
般に１重量％以下、好ましくは０．５重量％以下である
。

窒素源としてはペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、肉
エキス、カザミノ酸、コーンステイブリカー等の天然窒
素源、尿素等の有機窒素源、あるいは硝酸ナトリウム、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の有機窒素源を
単独で、又は組み合せて用いることができる。窒素源の
量はその種類により異なる、０．０１〜５重量％、好ま
しくは０．１〜２重量％の濃度とするのが良い。

ビスホモ−γ−リルン酸を強化する目的で加えるリグナ
ン誘導体、例えばセサミン、エビセサミン、セサミノー
ル、エピセサミノール、セサモリン等の場合、総添加量
は培地に対してｌＸｌ０−’〜ｌＸｌ０−’重量％であ
る。

この他必要に応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄
、硫酸鋼等の無機塩及びビタミン等も微量栄養源として
使用できる。これらの培地成分は微生物の生育を害しな
い濃度であれば特に制限はない。

培養温度は５〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃とする
。又特にエイコサペンタエン酸を強化したい場合は、培
養開始時より、又は最適生育温度で培養した後に最適生
育温度以下の温度で培養することもできる。あるいは、
最適生育温度以下の温度で培養した後、場合によっては
菌体を集め、さらに最適生育温度以下の温度に静置する
こともできる。この場合、培養温度を５〜４０℃、好ま
しくは１０〜２０℃とするか、又は２０〜３０℃にて培
養して菌体を増殖せしめた後、１０〜２０℃にて培養を
続ける。あるいは、１０〜２０℃にて培養を続け、菌体
を十分増殖せしめた後、場合によっては集菌し、さらに
１０〜２０℃にて湿菌体の状態で静置する。低温での培
養又は静置はアラキドン酸およびα−リルン酸からエイ
コサペンタエン酸への麦換を促進するため、先述したよ
うに炭素源としてα−リルン酸を含有する油脂を使用し
た場合には、エイコサペンタエン酸がさらに強化される
。培地のｐＨは、４〜１０、好ましくは６〜つとして通
気攪拌培養、振盪培養、又は静置培養を行う。培養は通
常２〜１０日間行う。

固体培地で培養する場合は、固形物重量に対して５０〜
１００重量％の水を加えたふすま、もみがら、米ぬか等
を用い、油脂を１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量
％加える。５〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃の温度
において、３〜１４日間培養を行う、又培養開始時より
、又は最適生育温度で培養した後に最適生育温度以下の
温度で培養してエイコサペンタエン酸を生産せしめても
良い。又必要に応じて培地中に窒素源、無機塩類、微量
栄養源を加えることができる。

培養終了後、培養液より遠心分離及び濾過等の常用の固
液分離手段により培養苗木を得る。菌体は十分水洗し、
好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって
行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気流下
で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒としてはエ
ーテル、ヘキサン、メタノール、クロロホルム、ジクロ
ロメタン、石油エーテル等を用いることができ、又メタ
ノールと石油エーテルの交互抽出やクロロホルム−メタ
ノール−水の一層系の溶媒を用いた抽出によっても良好
な結果を得ることができる。抽出物から減圧下で有機溶
媒を留去することにより、高度不飽和脂肪酸を強化した
油脂が得られる。

又、上記の方法に代えて湿菌体を用いて抽出を行うこと
ができる。メタノール、エタノール等の水に対して相溶
性の溶媒、又はこれらと水及び／又は他の溶媒とからな
る水に対して相溶性の混合溶媒を使用する。その他の手
順は上記と同様である。

次に、実施例により、この発明をさらに具体的に説明す
る。

来ｍ グルコース２％、グルコース１％と亜麻仁油１％、グル
コース０．５％と亜麻仁油１．５％、グルコース０．２
％と亜麻仁油１．８％、亜麻仁油２％、グルコース０．
５％と亜麻仁油１％、グルコース０．５％と亜麻仁油２
％、又はグルコース０．５％と亜麻仁油３％、の８種の
組成にさらに酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ６，０）
　１０　ｍｆｌを５０社のマイヤーフラスコに入れ１２
０℃で２０分間殺菌しな６モルティエレラ・アルビナＩ
ＦＯ８５６８の胞子液４００Ｊｉ１を。

それぞれの培地に加えレシプロシェーカー（１１０ｒｐ
ｎ＋）により２８℃で６日間振盪培養した。

培養後、濾過により菌体を回収し十分水洗した後、凍結
乾燥し、上記のそれぞれの組成に対して乾燥菌体１１７
．６　、１７８．０　、２１１．９　、２３９．１　、
２２２．８　。

１６４．４　、２７３．２　、３７６．６ｍｇを得た。

この菌体より、クロロホルム−メタノール−水の一層糸
の溶媒を用いるＢｌｉｇｈ　＆　Ｄｙｅｒの抽出法によ
って油脂を抽出した所、それぞれ３５．０　、８７．０
　、１１４．２　、１３６．０　。

１２５．９　、７７．８　、１７３．３　、２７２．０
ｍｇの油脂が得られた。

油脂の含有物を確認するためこの油質の一部をねじ口試
験官に入れ、油脂５０ｍｇに対して少なくとも無水メタ
ノール−塩酸（１０％）を２社加えキップした後、５０
℃で３時間処理することによってメチルエステル化し、
ｎ−ヘキサン４社、水１ｍｌを加え、２回抽出し溶媒を
遠心エバポレーター（４０℃、１時間）で留去した後、
得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィ
ーで分析した。その結果を第１表に示す。

以下金自 第１表から明らかな様に、亜麻仁油だけを炭素源とした
場合でも菌は生育しビスホモ−γ−リルン酸、アラキド
ン酸、エイフサペンクエン酸を亜麻仁油に強化した。そ
して、これら高度不飽和脂肪酸以外の脂肪酸組成は亜麻
仁油本来の脂肪酸組成と比較しても大きな違いは認めら
れず、このことから、融点のような物理的性質を変化さ
せずに、高度不飽和脂肪酸を強化した栄養価の高い油脂
を得ることができることがわかった。又、菌の生育を助
ける目的でグルコースを加える場合、油脂が２％以上の
場合、グルコースが０．５％以下なら脂肪酸組成に大き
な影響を及ぼさなかった。なお、得られたビスホモ−γ
−リルン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸につ
いてはすでに質量分析、ＮＭＲ分析等により同定されて
いる。

夫１鮭λ 椿油２％、ヒマシ油２％、トウモロコシ油２％、綿実油
２％、クロトン油２％、亜麻仁油２％、オリブ油２％、
落花生油２％、菜種油２％、胡麻油２％、大豆油２％又
は月見草油２％のいずれかとグルコース０．５％及び酵
母エキス１％を含む培地（ｐＨ６，０＞２ｎ＋ｊ！を１
Ｏｎ＋１のマイヤーフラスコに入れ、１２０°Ｃで２０
分間殺菌しな。モルティエレラ・アルビナＩＦ０８５６
８の胞子液１００μｌをそれぞれの培地に加え、レシプ
ロシェーカー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で６日間振
盪培養した。

培養後、実施例１と同様に濾過、水洗、乾燥、抽出を行
い、油脂３１．７　、２４．３　、３１．３　、３１．
８　、２５．２゜３０．２　、２８．８　、２８．６　
、２９．３　、２８．８　、２６．５　、２８．０ＩＩ
ｌ［？を得た０次に実施例１と同様に加水分解、メチル
エステル化、抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエステ
ルをガスクロマトグラフィーで分析した。この結果を第
２表に示す。

以下余白 第」憂色 脂肪酸を含有しない。

２、脂肪酸の表示において、２０：３はビスホモ−γ−
リルン酸、２０：４はアラ キドン酸、２０：５はエイコサペンタエン酸をそれぞれ
示す。

第２表から明らかな通り、いずれの油脂を培地に添加し
ても高度不飽和脂肪酸が油脂に′強化されることが認め
られた。又、α−リルン酸を含有するクロトン油、亜麻
仁油、オリブ油、菜種油、大豆油ではエイコサペンタエ
ン酸の油脂への強化が認められ、その量はα−リルン酸
の含有量に依存しな、そして、胡麻油・落花生油の場合
、ビスホモ−γ−リルン酸の油脂への強化が強く認めら
れた。

火膨匠ｌ グルコース０．５％、オリブ油２％及び酵母エキス１％
を含む培地（ｐＨ６，０）　２０　ｍｌを１００ｍ１の
マイヤーフラスコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した
。

モルティエレラ・アルビナｒＦｏ　８５６８の胞子液１
ｎ＋１を培地に加え、レシプロシェーカー（１１０ρｒ
ｍ）により１２℃で１０日間振盪培養した。

培養後、国体を集め、実８＆例１に記載したのと同様に
して水洗・乾燥及び抽出を行い、油脂０．２４ｇを得た
０次に、実施例１と同様にして、加水分解、メチルエス
テル化、及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエステ
ルをガスクロマトグラフィーで分析した。その結果、エ
イコサペンタエン酸が２％含まれており、低温培養によ
りエイコサペンタエン酸が油脂に強化されることが認め
られた。

火嵐匠生 グルコース０．５％、オリブ油２％、酵母エキス１％を
含む培地（ｐＨ６，０）　１００ｎ＋１を５００社マイ
ヤーフラスコに入れ１２０℃で２０分間殺菌した０モル
ティエレラ・アルビナＩＰ０８５６８及びコニディオボ
ラス・ヘテロスポラスＣＢＳ　Ｌ３８．５７の胞子液を
それぞれ別個に培地に１ｗ＋１加え、レシプロシェーカ
ー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で７日間振盪培養した
。培養後、濾過にて菌体を回収し、十分洗浄した後、凍
結乾燥した。これにより、モルティエレラ・アルビナ、
コニディオボラス・ヘテロスポラスの乾燥菌体をそれぞ
れ２．７ｇ　、３．２ｇ得た。この菌体より、クロロホ
ルム−メタノール−水の一層糸の溶媒を用いるＢｌｉｇ
ｈ　＆　Ｄｙｅｒの抽出法によって３８脂質を抽出した
所、それぞれ１．２ｇ　、１．５ｇの脂質が得られた。

この脂質を実施ρ１１と同様に加水分解、メチルエステ
ル化、抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエステルをガ
スクロマトグラフィーで分析した所、アラキドン酸がそ
れぞれ１４．１％、ｔｏ、３％含まれており、抽出した
油脂に高度不飽和脂肪酸が強１ヒされることが認められ
た。

火１鯉ｉ 亜麻仁油０．５％、亜麻仁油１％、菜種油０．５％又は
菜種油１％の４種の組成と、グルコース２％、ゴマ油２
％、酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ６，０）または亜
麻仁油エステル１％、セサミン０．０１％、グルコース
２％及び酵母エキス１冗ヲ含む培地２０分間殺菌した０
モルティエレラ・アルビナｒＦｏ　８５６８め胞子液を
それぞれ別個に培地に１００　ｍ　ｊ！加え、レシプロ
シェーカー（１１０ｒｐｍ＞により２８℃で７日間振盪
培養した。

培養後、実施例１と同様にろ過、水洗、乾燥、抽出を行
い、油脂５２．４Ｂ、５８．７Ｂ、５１．６ｍｇ、５５
．２ｍｇを得た０次に実施例１と同様に加水分解、メチ
ルエステル化、抽出を行い、得らノｔた脂肪酸メチルエ
ステルをガスクロマトグラフィーて′分析した。

この結果を第３表に示す。

１１表 注：脂肪酸の表示において、２０；３はビスホモ−Ｔ−
リルン酸、２０：４はアラキドン酸、２０：５はエイコ
サペンタン酸をそれぞれ示す。但し、０を付した数偵は
、２０：４．、であるアラキドン酸１３．８％と２０：
４．、−□である化合物４．１％との合計を示し、ここ
でｎ−３及びｎ−５はそれぞれメチル末端から数えて最
初の二重結合の位置を示す。

ＩＬ匠Ｌ グルコース０．５％、オリブ油２％及び酵母エキス１％
を含む培地（ｐｉｆ　６．０）　２　ｍｌを１０ｎ＋ｆ
のマイヤーフラスコに入れ、１２０″Ｃで２０分子′：
Ｉ殺菌した。

フイチウム・イレグラレ（Ｐｙｊｈｉｕｎ　１ｒｒｅＩ
？ｕｌａｒｅ）以下余白 ＣＢＳ　４９４．８６、フィトフトラ・インフェスタン
ス（Ｐｈｙｔｏ　ｈｔｈｏｒａ　１ｎｆｅｓｔａｎｓ）
　ＩＦＯ４８７２、エントモフトラ・イブノビリス」１
印匹旭摘ｒａ　ｉｌ薗匡■吐ＣＢＳ　１８１．６０、ベ
ニシリューム・シアネウへ化赳豆」遍、８（１）開耳α
ＩＦＯ５３３７、クラドスポリューム・ヘルプラム（Ｃ
ｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｈｅｒｂａｒｕｍ）　ＩＦＯ
３０３１４、ムコール・アンビガス□□□ｕｃｏｒ７）
ｒＦｏ　６７４２、フザリューム・オキツボラム（Ｆｕ
ｓａｒｉｕｍ幻９」■Ｒ二史０−ＩＦ０５９４２、アス
ペルギルス・カンディダス仏紐旺ｉ」巨ｃａｎｄｉｄｕ
ｓ）ＩＦＯ８８１６、ロードトルラ・グラチニス（Ｒｈ
ｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｄ躬ユｎ１ｓ）ＩＦＯ０６９５を
培地に１白金耳を接種し、レシプロシェーカー（１１０
ｒｐｍ）により２８°Ｃで７日間振盪培養した。培養後
、実施例１と同様に濾過、水洗、乾燥、抽出を行い、油
脂１１．６ｍｇ、７．８ｍｇ、］、４４．０ｍｇ１４．
７ｍｇ、１９．４ｍｇ、１４．７ｍｇ、１２．８ｍｇ、
１３．６ｍＨ１１３，７ｍｇを得た。

次に実施例１と同様に加水分解、メチルエステル化、抽
出を行い、得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマ
トグラフィーで分析した。この結果を第４表に示す。

実温Ｌ［ グルコース０．５％、オリブ油２％及び酵母エキス１％
を含む培地（ｐＨ６，０）、グルコース０．５％、オリ
ブ油２％、酵母エキス１％及びセサミン０．２ｍｇを含
む培地（ｐＨ６，０）２ＪをＩｏｎｌのマイヤーフラス
コに入れ、１２０°Ｃで２０分間殺菌した５モルティエ
レラ・アルビナ０４ｏｒｔｉｅｒｅ！ａ　畦紅旺）　Ｉ
ＦＯ８５６８の胞子液１００μ！をそれぞれの培地に加
え、レシプロシェーカー（１１０ｐｐｍ）により２８℃
で６日間振盪培養した。

培養後、実施例１と同様に濾過・水洗・乾燥・抽出を行
い、油脂３１．８ｍｇ、２８．２ｍｇを得た０次に実施
例１と同様に加水分解、メチルエステル化抽出を行い、
得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィ
ーで分析した。この結果、セサミンを添加することによ
りビスホモ−γ−リルン酸の割合が１．０％から４．９
％に上った。

第Ａｊ乳 グルコース２．０％、酵母エキス１．０％、及び０゜１
．０　、２．０又は３．０％の亜麻仁油メチルエステル
を含む培地（ｐＨｓ、ｏ）各６ｍｌを３０社マイヤーフ
ラスコに入れ、そして１２０℃で２０分間殺菌した０モ
ルティエレラ・アルビナＩＦ０８５６８の胞子液６００
μｌを培地に加え、レシプロシェーカー（ＩＬＯｒｐｍ
）により１２℃で９日間振盪培養した後菌体を集め、湿
菌体の状態で１２℃で７日間静置した。静置後、菌体を
集め、実施例１に記載したのと同様にして水洗、乾燥及
び抽出を行い、油脂をそれぞれ１２．５ｍｇ、３９．３
ｎ＋ｇ、７２．４Ｂ、及び１０３．０ｍｇ得た。

次に、実施例１と同様にして、加水分解、メチルエステ
ル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエステルを
ガスクロマトグラフィーで分析した。その結果、エイコ
サペンタエン酸が６．８％、１９．０％、１２゜１％、
１２．０％含まれており、α−リルン酸の添加および低
温培養−低温静置によりエイコサペンクエン酸が油脂に
強化されることが認められた。

及厳匠１ グルコース２．０％、酵母エキス１％、及びＯ又は０．
７％の亜麻仁油メチルエステルを含む培地（ｐＨ６，０
）各２ｒ＠１を１０ｍ１マイヤーフラスコに入れ、１２
０℃で２０分間殺菌した０モルティエレラ・ベルシャコ
バエ惟、岡旦■ユａｅ）　ＣＢ５６０１．６８の胞子液
２００ＬＬ１を培地に加え、レシプロシェーカー（１１
０ｒｐｍ）により、亜麻仁油メチルエステル無添加の場
合は１２℃で７日間、０．７％添加の場合は１２℃で１
０日間または２８℃で６日間振盪培養した後菌体を集め
、実施例１に記載したのと同様にして水洗、乾燥及び抽
出を行い油脂を４．９ｍｇ、７．３ｍｇ、２１．５ｍｇ
得た。

次に実施例１と同様にして加水分解、メチルエステル化
及び抽出を行い得られた脂肪酸メチルエステルをガスク
ロマトグラフィーで分析した。その結果アラキドン酸及
びエイコサペンタエン酸がそれぞれ２５．４％及び検出
不可能量、８．７％及び４．９％、４．８％及び０．７
％含まれており、アラキドン酸からエイコサペンタエン
酸への変換の経路を持たない菌を使用すればα−リルン
酸の添加および低温培養により、アラキドン酸とエイコ
サペンタエン酸が共に強化されることが認められた。

手続補正書（自発） １、事件の表示 昭和６３年特許願第２３７４９９号 ２、発明の名称 高度不飽和脂肪酸強化油脂の製造方法 ３、　補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 名称　（１９０）サントリー株式会社 ４、代理人 住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号静光
虎ノ門ビル　電話５０４−０７２１５、補正の対象 （１）明細書の「特許請求の範囲」の欄（２）明細書の
「発明の詳細な説明」の欄（２）明細書第２７頁第８〜
９行目「４．９■、７、３　ｍｇ、２１．５ｍｇ」をＩ
’１．Ｏｍｇ、　１．５ｍｇ、４．３ｍｇＪに補正する
。

７、添付書類の目録 特許請求の範囲　　　　　　　　　　１通２、特許請求
の範囲 １、　アラキドン酸を生産することができ、モルティエ
レラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、コニディオボラス
（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属、フィチウム（Ｐｙｔ
ｈｉｕｍ）属、フィトフトラ（Ｐｈｙ　ｔｏｐｈ　ｔｈ
ｏｒａ）属、エントモフトラ（Ｅｎ　ｔｏｍｏｐｈ　ｔ
ｈｏｒａ）属、ペニシリューム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ）属、クラドスポリューム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｔｕ
ｍ）属、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、フザリューム（Ｆ
ｕｓａｒｉｕｍ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ）属、又はロードトルラ（Ｒｈｏｄｏ　ｔｏｒ
ｕ　ｌａ）屈に属する微生物を、油脂を炭素源とする培
地で培養することにより高度不飽和脂肪酸が富化された
油脂を生成せしめ、それを回収することを特徴とする高
度不飽和脂肪酸強化油脂の製造方法。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、アラキドン酸を生産することができ、モルティエレ
   ラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、コニディオボラス（
   Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属、フィチウム（Ｐｙｔｙ
   ｉｕｍ）属、フィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ
   ）属、エントモフトラ（Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ）
   属、ペニシリューム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、ク
   ラドスポリューム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）属、ム
   コール（Ｍｕｃｏｒ）属、フザリューム（Ｆｕｓａｒｉ
   ｕｍ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）
   属、又はロードトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属に
   属する微生物を、油脂を炭素源とする培地で培養するこ
   とにより高度不飽和脂肪酸が富化された油脂を生成せし
   め、それを回収することを特徴とする高度不飽和脂肪酸
   強化油脂の製造方法。