JPH02238000A - がん胎児性抗原の精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 木主凱■宜五 ＣＥＡは等電点ｐ　Ｈ　４．　５、炭水化物含量約４０
ないし７５重量％，高いＮ−アセチルグルコサミン含量
（１０ないし３０重量％），微量のＮ−アセチルガラク
トサミン、および４ないし２０重量％のシャル酸を有す
る熱安定性糖タンパク質である．それは公知方法によっ
て腫瘍または組織培養から製造される．上昇した血清Ｃ
ＥＡ濃度はある種のがん、特に胃腸管のそれらに関連し
ているので、ＣＥＡは意義深い，ＣＥＡ｝レーサー（標
識したＣＥＡ類縁体），ＣＥＡ抗体および標識したＣＥ
Ａ抗体はすべて既知である（米国特許第３，９２７，１
９３号および第３，　６６３，　６８４号）．α１酸性
糖タンパク質またはオロソムコイド（以後ＡＧという）
は熱安定性で、そして炭水化物約４０ないし４５重量％
，シャル酸およびアスパラギン酸約１０重量％，そして
ＣＥＡと偵た濃度でグルタミン酸、メチオニン、Ｎ−ア
セチルグルコサミンおよびＮ−アセチルガラクトサミン
を含有する，ＡＧは等電点ｐ　Ｈ　２．　７　，　　β
−グロプリン易動度ではなくα−グロプリン電気泳動易
動度、ＣＥＡの約２００　，　０００ではなくて約４５
，０００の分子量を有することにおいてＣＥＡと実質的
に相違する。

不溶性ＡＧは先行技術に既知である。免疫学的にＣＥＡ
と交差反応する種々の正常組織中に存在する物質（非特
異性交差反応抗原またはＮＣＡ）は知られているが、こ
れら物質はＡＧ免疫決定因子を有するものとして同定さ
れていない。

本発明の一つの目的は既知ＣＥＡアッセイの感度を改良
し、そしてこの目的のための新規な試薬を提供すること
である。

これらおよび他の目的は本明細書を全体として考慮する
ことにより自明であろう。

本主班夏量！ 驚くべきことに、そして予期せざることに、ＣＥＡ分子
中にはＡＧに対し著しい免疫学的相似性を有する部分が
存在することが判明した。この発見は以下の新規な方法
および組成物へ導いた．１．本発明によって、ＡＧ抗体
と交差反応しない、ＣＥＡ｝レーサーおよび標準の一部
分を除くことによって、ＣＥＡアッセイの感度が改良さ
れる．除去は、交差反応するＣＥＡと、受容体としてＡ
Ｇ抗体とを結合し、そしてＣＥＡを回収することによっ
て達成される。このＣＥＡは、吸着されないＣＥＡ組成
物よりもＣＥＡ抗体に対して高い親和性を示す。

２．　　ＣＥＡアッセイは、ＰセグメントとＡＧ決定因
子の両方を示すＣＥＡだけを測定する新規な方法によっ
てさらに改良される。標識したＡＧは新規であり、そし
て以後に記載されるこの方法において使用される． この方法によって精製すべきＣＥＡ製剤は任意の慣用方
法によって得ることができる，ＣＥＡは普通組織培養ま
たは腫瘍、例えば胃腸がんの肝転移の抽出によって得ら
れる，ＣＥＡ含有出発物質の好通な一製造方法が米国特
許第３，６６３，６８４号に開示されている。しかしな
がらもっと複雑でない方法が満足であろう。例えば、細
胞または組織試料は水中でホモジネートし、過塩素酸の
ような塘タンパク賞溶媒で抽出し（または熱変性タンパ
ク質を沈澱するように７０゜Ｃで加熱する）、不溶物を
除去するため遠心し、残余の過塩素酸を透析または過塩
素酸カリウム沈澱法（米国特許第４．１８０，５５６号
）によって除去し、そしてＣＥＡを回収することができ
る。このＣＥＡは公知の方法でラジオアイソトープ、酵
素、安定なフリーラジカル、補酵素、螢光基、化学ルミ
ネセンス基、または酵素阻害剤もしくは賦活剤のような
適当な検出可能基をもって、後記の精製操作の以前また
は以後に標識することができる。

こ一での精製方法の目的は、ＡＧ抗体と交差反応性のＣ
ＥＡに富む、または実質的に該ＣＢＡよりなる天然もし
くは標！！ｅＥＡを調製することにある。市販の放射性
ヨード化ＣＥＡのかなりの部分はＡＧ抗体に結合しない
か、または非常に弱くしか結合しない．例えば、そのよ
うな放射性ヨード化ＣＥＡ製剤の放射能の約３分の１だ
けがＡＧ抗体と直ちに反応するに過ぎず、他方該放射能
の約５０％以下は一夜インキエベーション後にようやく
結合するであろう。ＣＥＡ製剤の非結合部分の本体は現
在未知である。それは夾雑タンパクを含有するであろう
． ＣＥＡ製剤の一部はＡＧ抗体を結合し得るが、ＣＥＡ抗
体はＡＧを結合し得ないことは興味ある事項である。こ
のパラドックスはＣＥＡ抗体がつくられる方法のためで
あると信じられる，ＣＥＡ抗体は慣例・的に動物をＣＥ
Ａ製剤で免疫化して調製され、そのためＣＥＡのＡＧ決
定因子と、該ＣＥＡ製剤中の他のＣＥＡ決定因子および
夾雑物との両方に特異性の抗体の発生へみちびく。次に
免疫するＣＥＡ製剤中の夾雑物に対して上昇された非Ｃ
ＥＡ抗体を除去する意図で、抗血清が正常な組織とイン
キユベートされる．しかしながらＣＥＡに対して上昇さ
れた抗体集団は正常組織成分であるＡＧに特異的な抗体
をも含む．このようにＡＧ抗体は正常組織とのインキエ
ベーションによって除去される．残りのＣＥＡ抗体は従
ってＡＧ抗体と交差反応性でない、すなわちＡＧのそれ
らに類偵の免疫部位を持たないＣＥＡの部分に向けられ
るだけである．以後この部分をＣＥＡ　　Ｐセグメント
と呼ぶ。このセグメントに特異性の抗体はＣＥＡ　　Ｐ
セグメント抗体である。ＰセグメントとＡＧ免疫部位の
両方を含有するＣＥＡを、以後便宜上無傷のＣＥＡと呼
ぶ． 無傷のＣＥＡを精製するための好ましい方法は、不純出
発組成物をＡＧ抗体をもって吸着し、出発組成物の未結
合残部を除去し、そしてＣＥＡをＡＧ抗体から分離する
ことを伴う。不純組成物中に存在するかも知れないＡＧ
からＣＥＡを最初に分屠する必要はない，ＡＧのＡＧ抗
体に対する親和性は無傷のＣＥＡのそれよりも著しく高
い。このため、ＡＧ抗体へ結合したＡＧを遊離するＡＧ
抗体結合ＣＥＡの溶離のための条件の注意深い選択およ
び制御は、二つの物質のＡＧ抗体に対する親和力の差に
基づいてＣＥＡをＡＧから分離することを可能にするで
あろう。

もっと精巧な操作は、不純ＣＥＡ含有組成物をＣＥＡ　
　Ｐセグメントだけを結合し得る抗体と接触させ、結合
物質を組成物残部から分離し、抗体により吸着されたＣ
ＥＡを分離して中間組成物を生成させ、中間組成物中の
無傷のＣＥＡをＡＧ抗体へ結合させ、結合した無傷のＣ
ＥＡを残部から分離し、そして無傷のＣＥＡをＡＧ抗体
から分離することを含む。

結合ＣＥＡを有する抗体を未結合物質の残部から分離す
ることを含む前述のステップは、抗体を溶液から分離す
るための任意の既知方法によって達成することができる
．そのような方法は、普通抗体を不溶化することを伴う
．これは抗体をＣＥＡヘ結合する前か、後のいずれでも
実施することができる。

好ましくは、該抗体はＣＥＡと接触させる前に水不溶性
化される。これは抗体を水不溶性担体へ共有結合するか
（　Ｂｉｏｕ　ｅ　ｔ　ａｌ，　”ＣＩｉｎ．　Ｂｉｏ
ｃｈｅｎ．［　Ｏｔｔａｉｙａ　）　１０　［　４　］
：　１４１−７　［１９７７］）．または抗体を非共存
結合的に適当な担体へ吸着する（Ｈａｎｇａｔ　ａｌ．
　”ＣＩｉｎ．　Ｃｈｅｗ．”　２５　［　４　］：　
５４６−９　［１９７９］）ことによって達成し得る。

代表的な担体には架橋デキストランのようなポリオール
、セルロース、ガラスまたはナイロンを含む。担体は繊
維状塊、ビーズまたは顆粒の形でよい。担体が抗体へ共
有結合によって結合されるとき、アミド、エーテルまた
はエステルのような有機結合基が抗体を担体へ共有結合
するために用いられる。抗体を不溶化するための適当な
手法は当業者によって容易に選択され、そして本発明に
とって重要でない。

ＡＧ抗体およびＣＥＡ　　Ｐセグメント抗体は市販され
ており、またはそれらは既知方法で調製することができ
る，ＡＧ抗体はアジュバント中のＡＧ溶液により免疫化
することにより、ウサギまたはヤギのような実験動物中
に容易につくられる．ＣＥＡ　　Ｐセグメント抗体は前
述のようにＣＥＡを調製し、実験動物を免疫化し、そし
てＣＥＡと同じ起源からの正常組織で抗血清を吸着する
ことによって製造される．この最後の工程は一般に慣用
であり、そしてそれはＡＧ抗体を除去するけれども、そ
の目的として動物を免疫化するために使用したＣＥＡ製
剤中に存在し得た正常な非ＣＥＡ夾雑物に対する抗体の
除去を含む。免疫化した動物からの抗血清はそのま一使
用してもよく、または既知の態様、例えばクロマトグラ
フィー、電気泳動、および所望の類似方法でさらに精製
することができる。

典型的には、無傷のＣＥＡは抗体を臭化シアン活性化架
橋デキストランへ結合することにより、標識した、また
は天然すなわち標識しないＣＥＡ製剤から回収される．
不溶性抗体はカラムに充填され、そして中性ｐＨ近くで
緩衝液で平衡化される．標識された、または天然ＣＥＡ
はカラム中の非特異性結合を減らすのを助けるため、正
常血清と混合される．次にＣＥＡ組成物が通常室温でカ
ラムへ加えられる．組成物が抗体と接触を保っている時
間は数分（通過時間）から約２４時間まで変化するであ
ろう。約ＩＯ時間が一般に好ましい。

インキュベーション時間が長ければ長い程、より多量の
ＣＥＡ回収を得るであろうが、時間は重要でない。

インキュベーションが終了した後、残りの未結合分画は
中性近くに保った緩衝液で溶離される。

次に結合した分画が遊離剤で溶離される。抗原一抗体複
合体を分離させる任意の物質または条件が遊離剤として
使用し得る。酸のほかの例は、尿素および塩類を含む。

溶離工程はＣＥＡ溶屠を最大にしながら、ＡＧ溶離を最
小にするように最適化される。このことを念頭に置き、
当業者は出発組成物の本質、不溶性抗体、所望の精製度
、ＣＥＡが標識化されているかどうか、もしそうなら標
識の本質に依存して溶離条件を調節し、適当な溶離液を
選択するであろう． 回収された無傷の、標識または天然ＣＥＡは、もし望む
ならば残りのＡＧを除去するためさらに精製し、そして
使用するまで凍結乾燥もしくは冷凍保存することができ
る．精製した無傷のＣＥＡはこれまでＣＥＡに適したど
んな用途にも、例えば既知ＣＥＡアッセイにおいてトレ
ーサー（標識した類縁体）として、またはＣＥＡ抗体製
造のための免疫源として供することができる。上記のよ
うに調製した精製ＣＥＡ｝レーサーの使用は、既知アッ
セイで実行されているような試料の過塩素酸もしくは熱
抽出が省略でき、そして血清のような未処理試料が直接
使用できるので、イムノアッセイの感度を増す． −土脇ノニこＬ±Δ一 上で調製された精製した標識したＣＥＡを典型的な競合
型イムノアッセイに使用することは本発明の範囲内であ
る。このことは、標識したＣＥＡとテスト試料とが限ら
れた数のＣＥＡ抗体結合部位に対して競合し、その後抗
体結合物質が標識について定量される。もし多量の試料
ＣＥＡが存在すれば、そのときは標識したＣＥＡの大部
分は競合的に抗体から置換され、もし試料中のＣＥＡが
低ければその反対である．ＡＧ抗体によって結合されな
いタンパク質を実質上含まない標識したＣＥＡ，すなわ
ち、そのように結合されないタンパク質を約４０％以下
しか含まない標識したＣＥＡにより、ホフマン、ラ、ロ
シュおよびＣｒＳから販売されている市販のラジオイム
ノアッセイにかなりの改善を得ることができる。精製し
た標識ＣＥＡは未精製トレーサーよりもＣＥＡ抗体に対
して著しく免疫反応性である．問題は、これまでＣＥＡ
は大部分均一であると考えられていたが、実際には無傷
のＣＥＡ中にＡＧおよびＰセグメント決定部分が存在し
、テスト試料ＣＥＡの未知割合だけがＰセグメント決定
部分であるということである。試料Ｐセグメントは従来
の競合型イムノアッセイにおいて標識および試料の無傷
のＣＥＡと競合し、それにより無傷のＣＥＡの定量を妨
害するものと推測される。この潜在的な妨害は、この点
を考慮に入れたアッセイプロトコールを選ぶことによっ
て排除される．従って、本発明の改良は無傷のＣＥＡの
み、すなわちＡＧおよびＰセグメントに共通な免疫学的
に表われる決定因子を含存する物質のみを測定すること
を含む。これは非ＡＧ抗体交差反応性物質をテスト試料
から予備精製によって除去し、次に試料を競合系によっ
て定量することによって達成することができる。しかし
ながら、好適な具体例は改良したサンドインチ法である
。

サンドイツチイムノアッセイ法はよく知られている。一
般的に、このアッセイに使用される試薬は被分析物質に
対する不溶性抗体と、被分析物質に対する標識した可溶
性抗体とである。予期される試料被分析物質集団よりも
少数の被分析物質結合部位を含有する量の不溶性抗体が
使用される。

このアッセイは一般に不溶性抗体をテスト試料、次に標
識した抗体と順番に接触させ、結合した標識をアッセイ
することによって実施される。被分析物質は不溶性抗体
と標識抗体との間にサンドイッチされる．これには勿論
被分析物質が少なくとも二つの免疫結合部位を持ってい
ることを要する．無傷のＣＥＡのアッセイ中のＣＥＡ　
　Ｐセグメントの存在の可能性はこのアッセイの一つの
変法を好ましいものとする。可溶性の標識した抗体と不
溶性抗体とは、共に同じ被分析物質と結合するけれども
同じ抗体ではなく、すなわち一方の抗体は無傷のＣＥＡ
のＰセグメント決定因子に向い、第二の抗体はＣＥＡ　
　ＡＧ　　決定因子を結合することができる。これはＡ
ＧまたはＰセグメントのどちらかが無傷のＣＥＡの模倣
をすることを防止する。

この改良したサンドインチ法は、 （ａ）　　テスト試料をＣＥＡのＰセグメントに対する
水不溶性抗体を含むテストマトリックスと接触させるこ
と、 Φ）テスト試料の残りを除去すること、（Ｃ）　　テス
トマトリックスをＡＧに対する標識した抗体と接触させ
ること、 （司　結合しない標識した抗体を除去すること、（ｅ）
　　結合または未結合標識の量を測定することを含む． 例示のため、この方法の最終生成物は以下のようになる
であろう． 上記において点線は免疫結合であり、＊はｔｌ！識であ
る． 結合したＣＥＡ　　Ｐセグメントは標識した抗体によっ
て結合されず、従ってＣＥＡとして定量されない．存在
することがあるＣＥＡ　　ＰセグメントはＡＧ抗体を結
合しない．２またはそれ以上の別々の免疫部位を結合す
ることができる各種の抗体を使用することができる．勿
論Ｐセグメント抗体はＡＧと交差反応性であってはなら
ず、またＡＧ抗体はＣＥＡ　　Ｐセグメントを結合して
はならない．それにもか＼わらず、抗体はそれぞれでき
るだけ均一であることが望ましく、すなわち既知手法で
ハイブリドーマ培養によって得ることができるような、
単一の免疫部位に向けられた単一の抗体を使用すべきで
ある。

Ｐセグメント抗体は、ＡＧ抗体が先に製造された方法と
同じ方法で不溶性化することができる。

好ましくは、抗体はそれをポリスチレンビーズまたはボ
リブロビレン試験管内底へ吸着させることによって不溶
性化される。

標識した抗ＡＧ抗体は新規であると思われる。

前述のＣＥＡに対する標識のどれもがＡＧ抗体にも使用
でき、他の標識した抗体と同じ方法で製造される．例え
ば、放射標識した抗ＣＥＡ抗体の製造法を記載する米国
特許第３．９２７，１９３号参照。好ましい標識は酵素
およびラジオアイソトープであり、最も好ましいのは放
射性ヨードである。放射性ヨード化のための好ましい方
法は、Ｄｅｒｍｏｄｙ　ｅｔａｌ．，加１ｉｎｉｃａｌ
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”２５　（　６　）；　９８９−
９９５（１９７９）またはＰａｒｓｏｎｓ　ｅｔ　ａｌ
。″ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　
”　豆５６８：　５７４　（１９７９）に記載されてい
るようにクロラミンーＴまたはラクトベルオキシダーゼ
、（１！５１）ヨードヒドロキシフエニルプロビオネー
トーＮ−ヒドロキシスクシニメートエステル（　Ｂｏｌ
ｔｏｎ　ｅｔ　ａｌ．．　”８ｉｏｃｈｅｓ．Ｊｏｕｒ
ｎａｌ”１ｉ５２９−５３３［１９７３］），　　（”
’　Ｉ　）ジョードフルオレセインイソチオシアネート
（Ｇａｂｅｌ　ｅｔ　ａｌ．＋’Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”８６　：３９６−４０６
［１９７３］），Ｌ−プトキシカルボニルーＬ−Ｃ！Ｓ
Ｉ）ヨードチロシンーＮ−ヒドロキシスクシニミドエス
テル（八ｓｓｏｉａｎ　　ｅｔ　　ａｌ。　“Ａｎａｌ
ｙｔｉｃａｌ　　Ｂｉｏｃｈｅｓ＋ｉｓｔｒｙ１０３：
７０−７６［１９８０］），またはＩ　Ｃ　１　（Ｍｏ
ｎｔｅｌａｒｏ　ｅｔａｌ．，“＾ｎａｌｙｔｉｃａｌ
　Ｂｉｏｃｈｅｓ＋ｉｓｔｒｙ″９９：９２−９６　［
１９７９］　）のような外部放射性ヨード化小分子を使
用する。

クロラミンＴ法が好ましい具体例である。

無傷のＣＥＡを測定するために選ばれた個々の方法は重
要でない。上記以外の方法は当業者に自明であろう． 本発明は以下の実施例にさらに詳しく記載される。

実施例１（参考例） ＡＧ抗体（ヘキストまたはマイルス）をこの意図した実
施例およびＧｒｅｅｎｗｏｏｄ　ｅｔ　ａｔ．，　”旧
ｏｃｈｅａ．Ｊ．ｍ尊：１１４−１２３（１９６３）の
方法によって１２５１で標識した。抗体の５０μｇ部分
標本をＧｒｅｅｎｗｏｏｄらの方法で処理し、セファデ
ックスＧ−５０のカラムを通過させることによって遊離
ヨードを分離した。標識した抗体分画は、５％子ウシ血
清および抗菌剤として０．　１％ＮａＮ．を含む希釈液
中に約３μＣｉ／ｌｄに希釈される。製品は４゜Ｃで貯
蔵する。

実施例２（参考例） この方法は無傷のＣＥＡを測定するための企図された改
良サンドイツチイムノアッセイを記載する。

ＣＥＡは結腸の一次アデノカルチノーマの肝転移から、
該組織をーａｒｒｉｎｇプレンダー中等量の蒸留水中に
ホモジナイズすることによって精製された。ホモジネー
トは８０００ｒｐｍにおいて３０分間５“Ｃで遠心する
ことにより清澄化された。上清をＩＭ過塩素酸と混合し
、沈澱を遠心によって除去した．上清を蒸留水で５日間
透析した。

タンパク質５ＩｌｇＺＩＩ１を含んでいる過塩素酸抽出
分画をｐ　Ｈ　７．　８の０．　０　５　Ｍ　ＩＪン酸
緩衝液で平衡化したセファデククスＧ−２００カラム（
１７０Ｘ１．　５　ｃｍ　）でゲル口遇することによっ
て精製した。

溶出液を４ＩＩｉづつの部分標本として集め、タンパク
質を２８０ｎｍにおいて、そしてＣＥＡをラジオイムノ
アッセイでモニターした。溶出液の最初のタンパク質ピ
ーク（空隙体積）を集めて濃縮し、次にゲル口過をくり
返した。

ＣＥＡ　　Ｐセグメント抗体は、上記ＣＥＡ製剤の５１
ｇを完全なフロインドアジュバント中に乳化し、エマル
ジョンをウサギに注射し、ＣＥＡタイターが上昇した後
に血清２０Ｊｄを採取し、そして抗血清を非がん肝臓組
織および正常ヒト血清へ吸着させることによって作られ
た。製剤は４゜Ｃで貯蔵した。

約ＩＩｄｌのＣＥＡ　　Ｐセグメント抗血清を米国特許
第３．６８６．３４６号によってポリプロピレン試薬管
の内表面の底に塗布した。腸のアデノカルチノーマを有
することが既知の患者の血清試料０．　１　７と、正常
コントロール０．ＩＩＩ１とを２系列塗布試験管中にピ
ペットし、１２時間インキユベートした。結合しない試
料を水で各試験管から洗浄し、実施例１において調製し
た標識したＡＧ抗体０．　３　ｄを各試験管へ加え、２
４時間インキユベートし、結合しない標識抗体を水で試
験管から洗浄し、そして試験管へ結合した放射能を測定
した。試料試験管へ結合した放射能はコントロール中の
それよりも著しく大であった。

実施例３ この実施例は放射性ヨード化ＣＥＡ製剤（ホフマン、ラ
、ロシｓ，　＞　１．０００，０００ｃ　ｐｍ）の精製
法を記載する。ＡＧに対する不溶性抗体はＡＧ抗体（ガ
ンマグロプリンーＤａｋｏ）　３　０　０■を臭化シア
ン活性化セファローズ４Ｂ（ファルマシア）３０ｄへ結
合することによって作られた。不溶性抗体は５Ｘ１．Ｏ
Ｃ１ｍのカラムに充填された。１１５１標識ＣＥＡの部
分標本を正常ウサギ血清と混合し、前記カラムへ注ぎ、
ｐ　Ｈ　７．　８の０．　０　５　Ｍリン酸緩衝液で溶
離し、２番目の部分標本を注加した直後５゜Ｃで一夜イ
ンキユベートし、正常ウサギ血清０．　１威をカラムに
注加し、そしてカラムをリン酸緩衝液で溶離した。これ
らの分画を未結合分画と呼ぶ。

結合分画は未結合分画を集めた後、両方の場合ともｐ　
Ｈ　２．　２の０．１Ｍグリシン緩衝液で溶離した．各
分画の放射能をカウントした。表１はその結果を記録す
る． 表　　　１ 直後 一夜後 トレーサーの少量がカラムに残るので、結合および未結
合放射能は全体で１００％に達しない．同様な結果は他
の２供給源（ヘキストおよびマイルスラボラトリーズ）
からのＡＧ抗体を使用した放射性ヨード化ＣＥＡのポリ
エチレングリコール促進沈澱法によって得られた．殆ど
すべての結合溶離放射能はＡＧ抗体（Ｄａｋｏ）でも、
ＣＥＡ抗体でも沈澱したが、しかし未結合分画中にはコ
ントロールに比較して有意な沈澱放射能は発見されなか
った。ＡＧ抗体を結合するＣＥＡは、（１）ＡＧはＡＧ
抗体からのＣＥＡ放射能を用量反応的に置換し、（２）
他の血清タンパク質に対する抗血清はＣＥＡを沈澱しな
いことから免疫特異性であることが示された。

結合した溶離分画は、市販ＣＥＡ測定キット（ＣＩＳお
よびホフマン、ラ、ロシュ）の未精製トレーサーに代え
て用いられた。

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）（ａ）不純ＣＥＡまたは標識したＣＥＡ含有組成
   物をＡＧに対する抗体へ接触させることと、 （ｂ）該組成物の吸着されない残部を除去することと、 （ｃ）ＣＥＡまたは標識したＣＥＡを前記抗体から分離
   することを特徴とするＣＥＡの精製方法。
2. （２）（ａ）不純ＣＥＡまたは標識したＣＥＡ含有組成
   物をＣＥＡに対する抗体に、ＣＥＡまたは標識したＣＥ
   Ａが吸着されるように接触させることと、（ｂ）ＣＥＡ
   抗体および結合したＣＥＡもしくは標識したＣＥＡを前
   記組成物残部から分離することと、 （ｃ）ＣＥＡまたは標識ＣＥＡを前記抗体から分離して
   中間組成物を取得することと、 （ｄ）分離したＣＥＡまたは標識したＣＥＡをＡＧに対
   する抗体に、前記中間組成物の一部分が吸着されるよう
   に接触させることと、 （ｅ）吸着したＣＥＡまたは標識したＣＥＡを前記中間
   組成物の残部から分離することと、 （ｆ）ＣＥＡまたは標識したＣＥＡをＡＧに対する抗体
   から分離することを含む特許請求の範囲第１項の方法。
3. （３）前記抗体は不溶化され、そしてＣＥＡまたは標識
   したＣＥＡは酸による溶離によってＡＧ抗体から分離さ
   れる特許請求の範囲第１項の方法。
4. （４）前記抗体は不溶化され、そして未吸着組成物残部
   は該抗体の洗浄によって除去される特許請求の範囲第１
   項の方法。
5. （５）前記抗体は水不溶性担体への共有結合によって不
   溶化される特許請求の範囲第１項の方法。
6. （６）前記共有結合は前記抗体と担体との間の有機結合
   基である特許請求の範囲第５項の方法。
7. （７）結合基はアミド、エステルまたはエーテルである
   特許請求の範囲第６項の方法。
8. （８）担体は水不溶性ポリオールである特許請求の範囲
   第５項の方法。
9. （９）前記抗体は水不溶性抗体への非共有結合吸着によ
   って不溶化される特許請求の範囲第１項の方法。
10. （１０）担体はポリオレフィンである特許請求の範囲第
    ９項の方法。
11. （１１）担体は顆粒状である特許請求の範囲第１０項の
    方法。
12. （１２）ＣＥＡは未標識であり、そして不純ＣＥＡ含有
    組成物は腫瘍抽出物である特許請求の範囲第１項または
    第２項の方法。